Revista de pruebas bioquímicas - Microbiología by DennisseMOT

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANÁLISIS MICROBIOLOGÍA GENERAL

AUTOR: DENNISSE MITCHELLE OJEDA TEJEDA

INDICE PRUEBAS BIOQUIMICAS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 ENTEROBACTERIAS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 AGAR CITRATO DE SIMMONS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 LIA (LISINA HIERRO AGAR) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 MIO (MOVILIDAD, INDOL, ORNITINA) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 TSI (TRIPLE AZÃ&#x161;CAR HIERRO) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 UREA AGAR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 STAPHYLOCOCCUS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 PRUEBA DE LA CATALASA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 PRUEBA DE LA COAGULASA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 PRESENCIA DE DESOXIRRIBONUCLEASA (DNAsa) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 SUSCEPTIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 STREPTOCOCCUS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 HIDROLISIS DEL PYR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 PRUEBA DE CAMP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .11 ESTREPTOCOCOS ALFA Y GAMMA HEMOLITICOS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 PRUEBA DE TOLERANCIA A LA SAL . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 PSEUDOMONAS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .13 CATALASA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 OXIDASA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14 PRUEBA O-F (OXIDO FERMENTATIVA) O DE HUGH-LEIFSON . . . . . . . . . . .15

Determinan la actividad metabólica de una cepa pura. Son empleadas principalmente la identificación y clasificación de bacterias y hongos.

El estudio bioquímico es posible gracias a las reacciones fisiológicas y químicas que cumplen los microorganismos. Se emplean medios de cultivo enriquecidos con productos útiles para el metabolismo celular, además, suelen contener cierto indicador el cual cambia el color del medio al efectuar las funciones de los microorganismos. Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas de las bacterias de objeto de identificación. Algunas son rápidas, ya que evalúan la presencia de una enzima preformada y su lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas horas. Otras pruebas requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo con una incubación previa de 18 a 48 horas. Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.

De acuerdo a los productos de la actividad química, las bacterias pueden clasificarse en: Zimógenas: fermentan carbohidratos, desdoblándolos en alcohol, ácido láctico o acético. Aerógenas: producen gas, como H2 y CO2. Anaerógenas: no producen cantidades visibles de gas durante su actividad metabólica. Cromógenas: producen solubles/insolubles.

pigmentos

Fotógenas: causan putrefacción y producen una débil fosforescencia, como bacterias marinas.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Este grupo incluye una gama completa de microorganismos, incluidas todas las bacterias Coliformes. Sus miembros abarcan desde bacterias como la Salmonella y la E. coli, bien conocidas por causar enfermedades transmitidas por los alimentos, hasta agentes de deterioro de los alimentos y diversos microorganismos que normalmente se encuentran en el tracto intestinal humano como parte de la flora intestinal. Se caracterizan por ser: Anaerobios facultativos Con forma de varilla Negativos a la oxidasa Fermentan la glucosa en ácido y / o dióxido de carbono Generalmente móviles Longitud de 1-5 µm.

Gran familia de bacterias gramnegativas reconocidas como un grupo importante en la industria alimentaria para monitorear la higiene y el saneamiento

Enterobacterias en orden de importancia Género

Especies

Escherichia

coli, alberti, alvei pneumoniae, oxytoca, granulomatis choleraesuis aerogenes, cloacae, aglomerans marcencens alves freundii, amalonaticus, diversus pestis, enterocolitica, pseudotuberculosis mirabilis, vulgaris rettgeri, stuartii morganii dysenterii, flexneri, sonnei, boydei shigelloides tarda americana

Klebsiella Salmonella Enterobacter Serratia Hafnia Citrobacter Yersinia Proteus Providencia Morganella Shigella Plesiomonas Edwarsiella Ewingella

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

AGAR CITRATO DE SIMMONS

En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino y el agar es el agente solidificante. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del Medio utilizado para la diferenciación ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del de Enterobacterias con base a la citrato genera progresivamente, oxalacetato y piruvato. capacidad de usar citrato como única Este último, en presencia de un medio de cultivo fuente de carbono y energía alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira a azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa.

LIA (LISINA HIERRO AGAR)

En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio y el tiosulfato de sodio son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. El púrpura de bromocresol, es el indicador de pH (su color es amarillo a pH igual o menor a 5.2 y violeta a pH igual o mayor a 6.8) y el agar es el agente solidificante. El ambiente ácido favorece la actividad enzimática decarboxilasa y metaboliza la lisina a cadaverina elevando pH del medio de cultivo y tornándolo al color púrpura/violeta. Microorganismos fermentados de glucosa que no tienen actividad lisina decarboxilasa, producen viraje de la totalidad del cultivo a amarillo. A las 24 hrs de incubación se observa el fondo del tubo color amarillo y la superficie de color violeta debido al consumo de las peptonas que producen alcalinidad.

Medio utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la descarboxilación y desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico

La generación de sulfato de hidrógeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro. Cepas de los géneros Proteus, Providencia y algunas de Morganella, desaminan la lisina. Esto produce un ácido alfa-ceto-carbónico, el cual con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

MIO (MOVILIDAD, INDOL, ORNITINA)

Medio de cultivo altamente nutritivo por la presencia de extracto de levadura, peptona y tripteína. La tripteína aporta gran cantidad de triptófano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la detección de la enzima Ornitina decarboxilasa, el púrpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color púrpura y en medio ácido es amarillo. El agar es el agente solidificante y a esta concentración le otorga al medio la propiedad de ser semisólido, condición necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde más allá de la línea de inoculación. Medio utilizado en la identificación de miembros de la familia Enterobacteriaceae con base a movilidad, producción de indol y actividad enzimática ornitina decarboxilasa

Microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio de cultivo y producen viraje del color púrpura al amarillo. Las condiciones de acidez son favorables para la actividad enzimática ornitina decarboxilasa, que actúa sobre la ornitina generando putrescina, con la consecuente alcalinización del medio de cultivo y viraje a color púrpura.

TSI (TRIPLE AZÚCAR HIERRO)

El extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfuro de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante. Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando sulfuro de hierro de color negro.

Medio empleado para la diferenciación de Enterobacterias, con base a la fermentación de hidratos de carbono, glucosa, lactosa y sacarosa y producción de ácido sulfhídrico

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

UREA AGAR

Tripteína y glucosa aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el rojo de fenol es el indicador de pH. El agar es el agente solidificante. Para diferenciar microorganismos con base a la actividad enzimática. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan ureas, tales como Proteus spp., etc.

Bacterias hidrolizan urea por medio de la enzima ureasa, liberando NH3 y CO2. Estos productos alcalinizan el medio de cultivo haciendo virar el indicador rojo de fenol del color amarillo al rojo.

Ejemplo de propiedades bioquímicas de las Enterobacterias. Recuperado de Internet

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Los cocos se asociaron por primera vez a enfermedades humanas cuando fueron observados en materiales purulentos provenientes de abscesos humanos. En 1880 el cirujano escocés Sir Alexander Ogston demostró que cocos agrupados en forma de racimo eran la causa de ciertos abscesos piógenos en humanos. Louis Pasteur arribó a una conclusión similar al mismo tiempo, pero en París. En el año 1882, Ogston llamo a estos cocos “Staphylococcus”, derivando el nombre de los términos griegos staphile (racimo de uvas) y kokkus (frutilla). Morfológicamente, Ogston propuso este término de manera de poder diferenciarlos de los estreptococos, formadores de cadenas.

Células esféricas grampositivas por lo general dispuestas en racimos irregulares parecidos a las uvas. Se desarrollan rápidamente en muchos tipos de medios y tienen actividad metabólica, fermentan carbohidratos y producen pigmentos que varían desde un color blanco hasta un amarillo intenso. Algunos son miembros de la microbiota normal de la piel y mucosas del ser humano; otros causan supuración, formación de abscesos, diversas infecciones piógenas e incluso septicemia letal. Los estafilococos patógenos Los estafilococos patógenossuelen producir hemólisis, coagular el plasma y producir diversas suelen producir hemólisis, enzimas y toxinas extracelulares. El tipo El de género Staphylococcus tiene por lo menos 40 coagular el plasma y intoxicación alimentaria más frecuente se debe a una especies producir diversas enzimas y enterotoxina estafilocócica termoestable. Los toxinas extracelulares estafilococos desarrollan con rapidez resistenciaEspecies a encontradas con muchos antimicrobianos y pueden plantear mayor frecuencia tipo de intoxicación problemasEl terapéuticos difíciles. Patógeno importante alimentaria más frecuente se Staphylococcus aureus en el ser humano debe a una enterotoxina estafilocócica termoestable Staphylococcus epidermidis Desarrollan con rapidez resistencia a muchos antimicrobianos y pueden plantear problemas terapéuticos difíciles

Staphylococcus lugdunensis Staphylococcus saprophyticus

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

PRUEBA DE LA CATALASA

Separar Separar Micrococacceae Micrococacceae (catalasa +) de los (catalasa Géneros+) de los Génerosy Streptococcus Streptococcus y Enterococcus Enterococcus (catalasa -) (catalasa -)

La enzima catalasa descompone el peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno bajo la fórmula 2H2O2----2 H2O + O2. De esta manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del metabolismo aerobio de los azúcares. Se coloca una gota de H2O2 al 3% sobre un portaobjetos y luego se transfiere una porción de colonia sobre el H2O2 realizándose una emulsión. En lo posible debe tomarse la colonia a partir de un medio sin sangre ya que los eritrocitos tienen actividad de catalasa y pueden falsear los resultados.

PRUEBA DE LA COAGULASA

S. aureus posee dos tipos de coagulasa: Separar Separar S. aureus, Micrococacceae que+)posee (catalasa de los coagulasa, Génerosde otras especies de Streptococcus y estafilococos Enterococcusque se denominan (catalasa -) coagulasa negativos

A. Una endocoagulasa o coagulasa ligada o "clumping factor" que está unida a la pared celular. B. Una exocoagulasa o coagulasa libre que actúa mediante la activación de un factor (CRF), formándose un complejo coagulasa-CRF, el cual reacciona con el fibrinógeno produciéndose un coágulo de fibrina (test en tubo). Test en lámina. Procedimiento: Se emulsionan una o más colonias en una gota de suero fisiológico hasta formar una suspensión lechosa sobre un portaobjetos. Luego se agrega una gota de plasma citratado de conejo y se mezclan. Test en tubo. Procedimiento: Se emulsionan varias colonias en un tubo con 0,5ml de plasma citratado de conejo. Se incuba a 35º y se chequea la formación del coágulo a las 4 horas. Si es negativo se reincuba toda la noche y se procede a su lectura a las 18 horas.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

PRESENCIA DE DESOXIRRIBONUCLEASA (DNAsa)

Separar Permite diferenciar Micrococacceae S. aureus es la (catalasa +) que de los única especie Géneros dentro del Género Streptococcus y Staphylococcus Enterococcus que posee DNAsa (catalasa -) de las otras especies

Se basa en la presencia de la enzima termoestable DNAsa que es capaz de clivar los enlaces fosfodiester internos de la molécula de DNA. Se utiliza un medio sólido que contiene verde de metilo el cual se combina con DNA altamente polimerizado. Cuan-do la combinación no ocurre, por acción de la enzima DNAsa, se produce una decoloración del medio. Se siembra una colonia de estafilococo en forma de moneda en una placa de medio sólido que contiene DNA y verde de metilo. Se incuba 18 horas a 35º.

SUSCEPTIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA

Separar Micrococacceae Separar S. (catalasa +) de los saprophyticus Géneros a la (resistente Streptococcus y los novobiocina) de Enterococcus demás estafilococos (catalasanegativos -) coagulasa

Varias especies del Género Staphylococcus son resistentes a la novobiocina (disco de 5 µg). Se siembra una placa de agar sangre con un hisopo embebido en una suspensión de la cepa a estudiar. Luego se aplica el disco de novobiocina y se incuba a 35º por 18 horas.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Streptococcus pertenece a la familia Streptococcaceae

Se trata de bacterias Gram positivas, anaerobias facultativas, inmóviles, con forma esférica o de coco, algunas especies tienen cápsula y normalmente se agrupan formando cadenas de dos (diplococus) o más bacterias. La identificación de los Streptococcus por métodos convencionales es difícil. Las cepas clínicas, en muchos casos, no se identifican por especie, sino que se hace por su determinación antigénica mediante la clasificación serológica de Lancefield o por su capacidad hemolítica o capacidad de formar halos de lisis en los medios de cultivo de agar sangre. Dentro de las pruebas bioquímicas para la identificación, la primera, luego de determinar que se trata de un coco Gram positivo, es la prueba de la catalasa. Luego de determinar que se trata de un coco Gram positivo catalasa negativo, debemos proceder a observar el efecto que tiene la cepa sobre el agar sangre (hemólisis). Así podemos clasificar este grupo de gérmenes en: Así podemos clasificar este grupo de gérmenes en:

ß hemolíticos

α hemolíticos

Gamma hemolíticos

Producen una hemólisis total de los glóbulos rojos, observándose como un halo transparente alrededor de las colonias.

Aquellos que producen hemólisis parcial, la cual se observa como un halo con tonalidad verdosa alrededor de las colonias.

Aquellos que no producen hemólisis sobre el agar sangre

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA

Separar el Streptococcus pyogenes de los demás estreptococos beta hemolíticos

Streptococcus pyogenes es sensible a bajas concentraciones de Bacitracina (discos conteniendo 0,04U). También existe un 5% de cepas de Str. agalactiae que son sensibles a la Bacitracina. Se realiza sembrando un gran inóculo, tomado con asa bacteriológica de un cultivo puro, que se estría sobre una placa de agar sangre en varias direcciones intentando obtener un cultivo confluente. Luego se coloca el disco de Bacitracina y se incuba 18-24 horas a 37º.

HIDROLISIS DEL PYR

Separar Streptococcus pyogenes y Enterococcus de los demás estreptococos

S. pyogenes y Enterococcus poseen la capacidad de hidrolizar el substrato PYR (pirridonil ß-naftilamida) debido a que poseen la enzima l-piroglutamil aminopeptidasa. Existen varias configuraciones comerciales de este test por eso no detallaremos ninguna en particular. En general siempre se revelan por un cambio de color.

PRUEBA DE CAMP

Separar Str. Agalactiae de los demás estreptococos ß-hemolíticos

Se basa en que los estreptococos del grupo B producen un factor llamado CAMP (factor de monofosfato de adenina cíclica) que aumenta la zona de hemólisis producida por un estafilococo productor de ß-lisina. Se realiza estriando un cultivo de estreptococo ßhemolítico en forma perpendicular a una estría de un estafilococo productor de ß-lisina en agar sangre. Se incuba 18-24 horas a 37ºC.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

ESTREPTOCOCOS ALFA Y GAMMA HEMOLITICOS

Separar los estreptococos del grupo D de los demás grupos de estreptococos

Se basa en la capacidad de los estreptococos del grupo D de crecer en un medio de cultivo que contiene un 40% de bilis y de hidrolizar la esculina a esculetina, la cual se combina con el citrato ferroso que posee el medio, dando un complejo de color negro. La concentración de bilis es fundamental, ya que existen estreptococos del grupo Viridans que son capaces de crecer a concentraciones menores de bilis. Se realiza sembrando en superficie tubos de agar bilis esculina inclinado

PRUEBA DE TOLERANCIA A LA SAL

Separar los enterococos, capaces de crecer en caldo salado, de los demás estreptococos del grupo D

Se basa en la capacidad de los enterococos de crecer en una concentración de 6,5% de NaCl. Se trata de un medio de cultivo líquido que contiene además de NaCl, glucosa y un indicador de pH: púrpura de bromocresol. Se inocula el caldo salado con la cepa de Str. grupo D a estudiar y se incuba 18-24 horas a 35º.

SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA

Diferenciar S. pneumoniae de otros estreptococos α-hemolíticos

Se basa en la sensibilidad de S. pneumoniae a una concentración menor o igual a 5µg/ml de hidroxicuprina (optoquina). Estriar un cuadrante de una placa de agar sangre en varias direcciones con una suspensión Mc Farland 0,5. Colocar luego un disco de optoquina en el centro del área estriada. Incubar 18-24 horas a 37ºC.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

El nombre Pseudomonas fue acuñado en 1894 por el botánico y micólogo polaco-alemán Walter Emil Friedrich August Migula, y etimológicamente significa «falsa unidad», derivado del griego pseudo (ψευδο 'falso') y monás (μονάς / μονάδα 'una sola unidad'). No forman esporas Poseen metabolismo aerobio o anaerobio con un metabolismo altamente adaptable No están encapsulados Poseen movilidad continua Son oxidasa positiva Ps. aeruginos a

Ps. fluorescen s

Ps. putida

Ps. stutzeri

Catalasa

Oxidasa

O/F Glucosa

O/F Lactosa

O/F Maltosa

O/F Xilosa

O/F Manitol

Piocianina

Pioverdina

Movilidad

Nitrato

ADH

Pseudomonas aeruginosa

Fluorescencia

Pseudomonas fluorescens

Denitrificación

Pseudomonas putida

Gelatina

Pseudomonas stutzeri

NaCl 6.5%

+/-

Almidón

Colonias rugosas

Nª flagelos

1 polar

>1 polar

1 polar

Desarrollo a 42ªC

Las especies mayormente aisladas son:

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

CATALASA

La catalasa es una enzima que cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. La prueba se utiliza para comprobar la presencia de la enzima catalasa que se encuentra en la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen el citocromo oxidasa. Método en portaobjetos: en un portaobjetos se depositan una o dos gotas de agua oxigenada al 30% y se pone en contacto con ella una colonia de los microorganismos a estudiar. La muestra se recoge con el asa de siembra y se toma preferentemente el centro de una colonia pura de 18-24 horas. Método en tubo de ensayo: agregar 1 ml de H2O2 al 3% directamente a un cultivo de agar densamente inoculado. Observar la formación inmediata de burbujas (resultado positivo).

OXIDASA

Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromo oxidasa. Los citocromos son enzimas que forman parte de la cadena de transporte de electrones en la respiración aeróbica, transfiriendo electrones al oxígeno, con la formación de agua.

Método en placa directa: agregar directamente 23 gotas de reactivo a algunas colonias. No inundar toda la placa y no invertirla. Observar los cambios de color. Con el reactivo de Kovacs la reacción se produce en unos 10-15 segundos, mientras que con el de Gordon y McLeod es dentro de los 10-30 minutos.

Asimismo, la presencia de oxidasa va ligada a la producción de catalasa, ya que ésta degrada el peróxido de hidrógeno que se produce como consecuencia de la reducción del oxígeno y cuya acumulación es tóxica.

Método indirecto sobre papel: colocar un trozo de papel de filtro de 3x3cm aproximadamente en una placa de Petri. Agregar 2-3 gotas del reactivo de Kovacs en el centro del papel. Extender con el asa de siembra una colonia sobre el papel impregnado. La reacción de color positiva se produce a los 5-10 segundos.

El reactivo de la oxidasa más recomendado es la solución acuosa al 1% de diclorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina (reactivo de Kovacs). Es menos tóxico y mucho más sensible que el correspondiente compuesto dimetilo (reactivo de Gordon y McLeod).

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

PRUEBA O-F (OXIDO FERMENTATIVA) O DE HUGH-LEIFSON

Indica del tipo de metabolismo energético: respiratorio (O) o fermentador (F). Se suele utilizar glucosa como sustrato. Se detecta la acumulación de ácidos con un indicador ácido-base (azul de bromotimol). La bacteria se inocula con el hilo recto (por picadura) y se incuba en condiciones de aerobiosis (sin parafina) y de anaerobiosis (con parafina, tubo cerrado), simultáneamente. Las bacterias que respiran aerobiamente crecen en la superficie del medio del tubo abierto. Transforman la glucosa en CO2, la superficie del medio se verá ligeramente amarilla (por la formación de ácido carbónico originado al reaccionar el CO2 con el agua del medio). En el tubo cerrado el cultivo se mantiene azul-verdoso. Las bacterias fermentadoras producen ácidos a partir de la glucosa. Viran el cultivo del tubo cerrado a amarillo; en el tubo abierto se inicia el viraje en el fondo, pero transcurridas 24 horas los ácidos pueden difundir por todo el medio virándolo a amarillo.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

DICIEMBRE 2020