PRESENCIA DE NUEVOS PATÓGENOS EN HORTÍCOLAS by economiasaavedra

PRESENCIA DE NUEVOS PATÓGENOS EN HORTÍCOLAS EVALUACIÓN DE LA PATOGENICIDAD DEL HONGO FUSARIUM SP. AISLADO DE PLANTAS DE LECHUGA

IES Saavedra Fajardo. Avda. San Juan de la Cruz nº8, 30011, Murcia. Realizado por Lucía Salmerón López, Nuria Cuenca Campoy y Fátima El Kadi. 28 de abril de 2020.

ÍNDICE RESUMEN/ABSTRACT..................................................................................................................................... 2 1. INTRODUCCIÓN .................................................................................................................................. 2 2. ANTECEDENTES.................................................................................................................................. 3 2.1 REINO FUNGI ................................................................................................................................. 5 2.2 CULTIVO DE LA LECHUGA.......................................................................................................... 6 2.3 POSTULADOS DE KOCH ............................................................................................................... 6 2.4 INÓCULO ........................................................................................................................................ 7 3. OBJETIVO E HIPÓTESIS ...................................................................................................................... 7 4. MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................................................ 7 5. PROCEDIMIENTO ................................................................................................................................ 8 6. RESULTADOS .................................................................................................................................... 10 7. CONCLUSIONES ................................................................................................................................ 12 8. AGRADECIMIENTOS......................................................................................................................... 12 9. BIBLIOGRAFÍA Y WEBGRAFÍA ....................................................................................................... 13

RESUMEN En el presente trabajo se ha realizado las pruebas de patogenicidad a aislados del hongo Fusarium oxysporumsp, procedentes de plantas de lechuga que en campo presentaban síntomas de marchitez, amarilleos y muerte. Se han utilizado distintas variedades de lechuga, así como, aislados de diferentes procedencias. Los ensayos se han realizado en una cámara en condiciones controladas y se ha medido según una escala de 0 a 5 la sintomatología a lo largo de 8 semanas. Los resultados muestran que los aislados ensayados fueron patógenos para la mayoría de variedades ensayadas por lo que nos lleva a pensar que el Fusarium sp. aislado se trata de F. oxysporum sp. lactucae (que hasta ahora no ha sido descrito en la Región de Murcia y puede ser productor de grandes pérdidas económicas para la Región). ABSTRACT In this project the pathogenicity tests have been carried out on Fusarium Oxysporumsp. fungus isolates coming from lettuce plants that presented symptoms of wilt, yellowing and death in the field. Different varieties of commercial lettuce have been used as well as isolates from other sources. The tests have been carried out in a wall cavity under controlled conditions and the symptoms were measured on a scale of 0-5 over 8 weeks. The results show that the isolates tested were pathogenic for the majority of varieties tested, which leads us to believe that Fusarium sp. isolated is F. oxysporum sp.lactucae (which until now has not been described in the Region of Murcia and may be the producer of great economic losses for the Region). 1. INTRODUCCIÓN Desde que el ser humano dejó de ser nómada y se asentó ocupando un territorio de forma permanente, la agricultura y la ganadería pasaron a ser actividades de extremada importancia para el desarrollo de la civilización. Por tanto podemos afirmar que mejorar la eficiencia en el resultado de dichas actividades, es una aspiración constante. Desde las formas más rudimentarias basadas en experimentos de ensayo-error hasta los actuales cultivos inteligentes en los que las necesidades de las cosechas (agua, luz, aportación de nutrientes, húmeda…) están perfectamente parametrizadas y predeterminadas de forma muy precisa, el ser humano-agricultor ha buscado siempre optimizar sus cosechas. En el presente trabajo investigamos un aspecto puntual (la patogenicidad del hongo Fusarium oxysporum) dentro del desarrollo de un cultivo específico (variedades de lechugas iceberg). Los intereses económicos que acompañan a los cultivos exigen una seguridad de retorno de la inversión en los mismos, y es por ello que la investigación de la patología objeto del presente estudio es de vital importancia. La Región de Murcia es la principal productora de lechuga (Lactuca sativa) de España, con una superficie de 15.895 ha y una producción de 422.517 toneladas (Estadística Regional Agraria, 2018). El estudio de las patologías en hortalizas tiene gran importancia en la protección de las plantaciones. Es imprescindible conocer los peligros a los que se exponen los cultivos para poder eliminarlos o minimizarlos, para conseguir aumentar la producción y calidad. La patología vegetal es la ciencia que estudia las enfermedades de las plantas y los agentes parasitarios que las originan (Alfaro, 1973). El objetivo principal de la Patología es el conocimiento de esa disfunción que el individuo vegetal presenta, a la que llamamos “enfermedad”. De este modo, una planta enferma es una planta paciente sometida a una acción ajena a su naturaleza y perjudicial para el individuo. Para catalogar una planta como “enferma” ha de presentar unos síntomas durante un período de tiempo determinado, síntomas que se pueden agravar, o curar. “Una enfermedad, quedaría delimitada en su proceso, por tres factores activos: La planta (hospedante), el microorganismo (agente causal) y el ambiente.” Este trabajo pretende contribuir al estudio de las patologías que presentan distintas variedades de lechugas ocasionadas por un hongo, Fusarium oxysporum, con el fin de poder mejorar las condiciones de su cultivo.

2. ANTECEDENTES: 2.1 REINO FUNGI La clasificación de los seres vivos está basada en la existencia de cinco reinos; reino animalia, reino plantae, reino protoctista, reino monera y reino fungi. A este último grupo pertenecen organismos eucariotas unicelulares/pluricelulares que no forman tejidos. A diferencia de las plantas, carecen de pigmentos fotosintéticos, se trata de seres heterótrofos que segregan enzimas digestivas sobre el alimento para después absorber sus nutrientes. Según su tipo de alimentación se dividen en: - Saprófitos, que obtienen los nutrientes de la materia muerta. - Parásitos, si se alimentan de organismos vivos causándoles algún tipo de enfermedad. Este grupo incluye a los hongos necrotrofos, que se alimentan por medio de enzimas y toxinas que matan las células y a los hongos biotrofos, parásitos que se alimentan únicamente de células vivas. - Simbiontes, que viven en asociación con otro organismo estableciendo un vínculo del cual ambos salen beneficiados. Según su morfología se dividen en: - Basidiomicetos: hongos con basidiosporas (espora reproductora que forma las esporas sexuales del hongo) y cuerpo fructífero (estructura multicelular sobre la que se forman otras estructuras productoras de esporas) en forma de seta. - Ascomicetos: hongos que contienen ascosporas dentro de unas estructuras reproductoras denominadas ascas. - Glomeromicetos: la principal característica que define a este grupo de hongos es la formación de micorrizas, asociaciones simbióticas entre los hongos y las raíces de las plantas, contando además con glomerosporas. - Zigomicetos: es el grupo de los comúnmente conocidos como mohos, en el que se incluyen alrededor de 1000 especies. Sus esporas reciben el nombre de zigosporas. - Quitridiomicetos: este último grupo de la clasificación actual de los hongos incluye a todos aquellos organismos microscópicos del reino Fungi, con zoosporas o gametos flagelados como células reproductoras. (Ecología verde, 2019) Un hongo es un microorganismo eucariota con micelio, portador de esporas, aclorófilo, que por lo general, se reproduce asexualmente y cuyas estructuras somáticas se encuentran rodeadas por una pared celular de celulosa, quitina o ambas. Las células eucariotas de los hongos almacenan glucógeno como sustancia de reserva y tienen pared celular de quitina. Los hongos están formados por las siguientes partes: el sombrero; parte superior de la seta, que protege el himenio (zona fértil de la seta situado en su interior) para facilitar el desarrollo de las esporas(células reproductoras que o necesitan ser fecundadas) y el micelio, tejido orgánico formado por hifas, filamentos sencillos o ramificados; que pueden ser tabicadas (si sus células están separadas por tabiques) o cenocíticas (si no tienen septos). Los hongos también constan de anillo, volva, pie y láminas. Dentro de los organismos pluricelulares se pueden establecer tipos de organización según el grado de complejidad que alcanzan sus tejidos: - Talofítica: las células de su organismo no forman auténticos tejidos, aunque entre ellas puede existir cierta especialización celular y división del trabajo. - Cormofítica: las células de este organismo forman auténticos tejidos, que se asocian formando órganos especializados en funciones determinadas. - Protocormofítica: estos organismos no tienen ni raíz ni hojas verdaderas, aunque poseen estructuras parecidas. De este modo, su organización se considera intermedia entre proto y cormo, y es por ello que recibe el nombre de protocormofítica. La reproducción de los hongos por esporas puede ser tanto sexual como asexual. La reproducción sexual es muy frecuente gracias a la variabilidad genética, es decir la diversidad en las frecuencias de los genes. Sin embargo, al ser necesarios dos individuos para que esta se pueda llevar a cabo es más costosa. La reproducción sexual de los hongos es posible cuando es compatible la coexistencia entre las hifas de un mismo individuo, denominados homotálicos o con los rasgos genéticos suficientes para garantizar el reconocimiento de las hifas, en este caso, heterotálicos. En los individuos homotálicos, su objetivo es formar estructuras femeninas y masculinas a partir del micelio. Por lo contrario en los individuos 3

heterotálicos, se crean (estructuras) masculinas y femeninas o sino ambas en el mismo micelio. Así mismo, originando nuevas y únicas combinaciones genéticas, incrementando la variabilidad de las especies y facilitando la evolución. En cuanto a la reproducción asexual de los hongos, excepto por mutaciones, los nuevos individuos son genéticamente idénticos a sus progenitores, lo que dificulta la adaptación a otros ambientes y la evolución de las especies. Además de generar un crecimiento del micelio fúngico o colonizar un sitio o sustrato específico, para el cual ya se cuenta con los genes necesarios para sobrevivir. El mecanismo se mantiene haploide, que representa la formación de esporas por mitosis (mitosporas) y muchos hongos filamentosos pueden fragmentarse para que dichos fragmentos formen individuos completos.

Imagen 1: Identificación de Fusarium en microscopio óptico, elaboración propia. Inicialmente, la clasificación general de los hongos partía de dos grandes grupos: 1) Myxomycota, en el que se encontraban los mohos mucilaginosos sin pared celular, y 2) Eumycota, que comprendía los hongos verdaderos con pared. En los Myxomycota se agrupaban los filos Acrasiomycota, Hidromyxomycota, Myxomycota, Plasmodiophoromycota. Mientras, en los Eumycota se agruparon los filos Mastigomycota (ahora Chytridiomycota), Zygomycota, Ascomycota y Basidiomycota (Montes Restrepo y McEwen, 2003). Actualmente se conocen más de 10000 especies de este reino, la mayoría terrestres, y unas pocas acuáticas. Según un artículo publicado por NationalGeographic el 5 de octubre de 2012, solo se han hallado el 7% del número estimado de hongos. Se estima que existen 1,5 millones de especies de hongos (Instituto Nacional de Salud Colombia, 2003). “Sin duda se descubrirán nuevos hongos con capacidades asombrosas que podrán sernos de gran utilidad”. Como dice el prestigioso micólogo P. Stamets, los necesitamos tanto para crear nuevos antibióticos como para descontaminar suelos y aguas, eliminar plagas, neutralizar neurotoxinas e incluso generar etanol a partir de la celulosa de los micelios (NationalGeographic, 2019). La primera vez que se identificó F. oxysporumf. sp. lactucae como agente causal de daños en lechuga (Lactuca sativa) fue en Tokyo, Japan en 1955. Desde entonces ha ido apareciendo en EEUU, Taiwán, Irán, Italia y Brasil (Garibaldi, 2002). El patógeno Fusarium oxysporumse ha llegado a extender por más de 32 países, afectando a más de 80 cultivos de importancia comercial. Fusarium oxysporum se encuentra clasificado dentro de la División: Deuteromycota, Género: Fusarium, Especie: Fusarium oxysporum. Es un hongo que provoca marchitez, oscurecimiento del sistema vascular a la altura de la base del tallo así como en la raíz, amarillamiento de hojas exteriores y necrosis de hojas y raíces, provocando finalmente la muerte de las plantas.

2.2 CULTIVO DE LA LECHUGA Las lechugas son plantas herbáceas de la familia Asteraceae (compuestas). Poseen un tallo ramoso de 40 a 60 cm de altura, hojas grandes, radicales, blandas, nerviosas, trasovadas, enteras o serradas, flores de pétalos amarillentos, y fruto seco, gris, comprimido, con una sola semilla. Es originaria de la India pero actualmente su hábitat natural es en zonas semitempladas (15º). Ocupa espacios de Asia, América y Europa. Se cultiva en las huertas y hay de ella muchas variedades. Las hojas son comestibles, y del tallo se puede extraer abundante látex de sabor agradable. Existen diferentes tipos de lechugas, dentro de la especie Lactuca sativa L. se diferencian cinco variedades botánicas: -

Lactuca sativa L. var. longifolia. Se aprovechan por sus hojas y no forman verdaderos cogollos. Lactuca sativa L. var. capitata. Son variedades que forman un cogollo apretado, sus hojas suelen ser anchas, lisas, relativamente delgadas y de textura suave. Lactuca sativa L. var. crispa. Este tipo corresponde a las lechugas que forman cabeza, como las Great Lakes o Batavias. En este grupo se distinguen dos subtipos: las llamadas Iceberg, que forman una cabeza compacta, y las Batavia, que forman una cabeza menos densa, son más pequeñas y de formas irregulares. Lactuca sativa L. var. acephalaDill. Esta se caracteriza por tener las hojas sueltas y dispersas. Son las lechugas de corte o de hojas sueltas y como su nombre lo indica, este tipo no forma cogollo, sino que sus hojas son sueltas, no envolventes. Lactuca sativa L. varaugustanaAll. Son las lechugas espárrago o de tallo cultivadas solamente en China. En este tipo se utiliza principalmente el tallo carnoso y también las hojas, que pueden presentar color verde o rojizo.

Respecto a la semilla de la lechuga, es botánicamente un aquenio, definido como un fruto seco e indehiscente de una sola semilla. Esta semilla al adquirir agua activa una serie de mecanismos fisiológicos con los que se inicia la germinación. El proceso de germinación se divide en varias etapas; la primera fase es la imbibición con agua, que penetra e hidrata las membranas celulares. Una vez activadas, comienza el crecimiento de la radícula hasta que rompe la testa y comienza la elongación; sigue después la aparición de los cotiledones. Todo depende de las reservas alimenticias que tenga la semilla y la humedad que esta tenga. Este proceso es de crecimiento y elongación de tejidos. La planta se convierte en autótrofa cuando la plántula se emerge y recibe luz. Las raíces están en ese momento completamente habilitadas para absorber agua y nutrientes y pueden realizar fotosíntesis hasta que emerja el primer par de hojas verdaderas. El crecimiento de la lechuga se divide en cuatro fases: plántula, roseta, encabezamiento y reproductivo. El estado de plántula comienza una vez que ha ocurrido la ruptura de la cubierta seminal por la radícula y se pueden distinguir tres etapas: -

Primera: en la semilla germinando, la radícula emerge y se transforma en la raíz pivotante. Segunda: los cotiledones emergen y se expanden. Tercera: el primer par de hojas verdaderas es formado, esto toma, desde la emergencia, unas 2 semanas.

La plántula genera cada vez más hojas verdaderas, siendo cada hoja nueva más ancha que la anterior. Son producidas en un tallo corto y forman una roseta plana. La planta continúa formando hojas de esta forma, pero su estructura varía según el tipo de lechuga. En el caso de las españolas y escarolas, forman una roseta enroscada de la cual se desarrolla una cabeza esférica, alargada o ligeramente aplastada. La formación de hojas se incrementa con aumentos de la intensidad de luz recibida a una temperatura constante y también cuando la luz es constante y la temperatura aumenta. El tamaño de las hojas tanto a lo largo como a lo ancho se ve influenciado por la longitud del día y de la intensidad lumínica. En un día largo y con alta intensidad lumínica, como ocurre en primavera, incrementan el ancho de las hojas, mientras que en días cortos y de baja intensidad lumínica, como en invierno, estimulan el alargamiento de las hojas.

La lechuga tipo española incrementa su peso seco con temperaturas moderadas en las primeras fases de crecimiento, pero su tasa declina a medida que la planta va envejeciendo. La temperatura óptima para una tasa de crecimiento normal bajó de 23°C a 10°C en el periodo de trasplante a cosecha. Los órganos reproductivos de la lechuga se forman en el inicio de su desarrollo, aunque su crecimiento se genera después. El alargamiento del tallo floral varía, normalmente, según la longitud del día y las altas temperaturas. El tallo floral se alarga, saliendo del centro de la roseta, produciendo una flor terminal, la cual limita la altura definitiva de la planta. El tallo floral genera ramificaciones, formando las floraciones secundaria y terciaria. Las flores compuestas son altamente autógamas y se abren alrededor de 10 días después de su aparición. Cada flor abre solamente una vez y permanece así solo parte del día, dependiendo de la temperatura e intensidad de luz, desde una a varias horas. La fertilización ocurre durante el periodo en que la flor está abierta. Los aquenios maduran alrededor de 2 semanas después de la apertura floral, pero altas temperaturas aumentan la tasa de desarrollo y maduración. (Saavedra Del Real et al, 2017). La lechuga es uno de los cultivos más característicos de la Región de Murcia que constituye el 34% de la comercialización nacional, y entre sus variedades, la iceberg es la más común, siendo cultivada en Cartagena, el Valle del Guadalentín y Águilas (Región de Murcia digital, 2020). En el siguiente gráfico podemos observar el aumento de cultivos de lechuga en la Región de Murcia durante los últimos seis años.

Gráfico 1: Distribución de lechugas en la Región de Murcia durante los años 2012-2018. (Estadística Regional Agraria, 2017-2018) En la Región de Murcia el cultivo de lechuga se localiza en tres comarcas principalmente: Campo de Cartagena, Vega del Guadalentín, y Comarca del Noroeste. Una parte importante de la producción se dedica a la exportación 505.000 toneladas, lo que representa un 71,1% con relación al total nacional (Estadística Regional Agraria, 2017-2018). Las variedades cultivadas son de diferentes tipos.: iceberg, trocadero, batavia, litlegem, lollo etc.

2.3 POSTULADOS DE KOCH Robert Koch realizó investigaciones sobre el carbunco bacteridiano, una enfermedad que se transmitía de forma frecuente al hombre desde el ganado lanar y vacuno. Fue entonces cuando, a partir de este trabajo, formuló sus postulados.

En sus investigaciones sobre el carbunco bacteridiano, Koch descubrió que el patógeno se encontraba siempre en la sangre de los animales enfermos, por lo que, en una primera fase de investigación, tomó pequeñas muestras de sangre de estos animales y se las inoculó a animales sanos. El resultado fue la transmisión de la enfermedad y, por tanto, el establecimiento de la etiología de la enfermedad. En una segunda fase de investigación, Koch descubrió que el patógeno podía ser aislado de los individuos enfermos y cultivado en el laboratorio sin perder su capacidad patogénica, ya que cuando se les inoculaba a nuevos individuos se reproducía la enfermedad. A partir de estas investigaciones propuso los siguientes postulados: No hay duda de que la publicación de estos postulados, junto con otros descubrimientos de sus contemporáneos, supuso una auténtica revolución para la comunidad científica y sobre todo para la nueva ciencia microbiológica. Todas las entidades animadas causales en un proceso de enfermedad cumplen con los postulados de Koch, que son: A. Se debe poder localizar, identificar y aislar el presunto responsable de una forma continuada de las plantas enfermas, lo cual supone una asociación constante de aquel con la enfermedad. Escuetamente, la enfermedad no se manifiesta en ausencia del agente causal. B. El microorganismo debe aislarse y mantenerse en cultivo puro (caso de que el organismo patógeno sea un parásito facultativo); o, de aquel pueden estudiarse sus características (caso concreto de parásitos obligados) C. La infección experimental, o inoculación, del microorganismo en estado puro, debe reproducir la enfermedad en el hospedante susceptible. D. El microorganismo reaislado de la planta infectada experimentalmente, debe mantener las características del aislamiento inicial.

2.4 INÓCULO Es un material que contiene microorganismos/partículas virales, destinados a ser introducidos o transferidos en un hospedante o en un medio (Federation Of British PlantPathologists, 1973). El potencial del inóculo para provocar una enfermedad lo determinan factores ajenos al inóculo: temperatura, sensibilidad del hospedante… Para expresar la cantidad del inóculo disponible en la infección del suelo hay que tener en cuenta principalmente dos elementos; la cantidad y la calidad del inóculo. (Horsfall, 1932). Más tarde, Horsfall y Dimond introducen el efecto del ambiente. Tras numerosas hipótesis se llega a la siguiente conclusión: “inoculumpotential” representa la cantidad de inóculo y su virulencia, la cantidad de tejido del hospedante disponible y su sensibilidad, más la acción del ambiente sobre el conjunto” (Dimond et al, 1965).

3. HIPÓTESIS DEL TRABAJO Y OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN El objetivo de este trabajo es comprobar la patogenicidad de aislados de Fusariumsp. procedentes de plantas de lechuga sobre distintas variedades. . Partimos de aislados procedentes de plantas con síntomas similares a los encontrados en la bibliografía de Fusarium oxysporumsp, que se inocularan en condiciones controladas sobre distintas variedades de lechuga. Así pues, nuestra hipótesis de trabajo es: el posible responsable del marchitamiento y muerte de las lechugas que presentan síntomas en campo podría ser debido a el hongo Fusarium oxysporum.

4. MATERIAL Y MÉTODOS: Aislados utilizados. Los aislados que se emplearon en el ensayo procedían de plantas de lechuga, de distintas zonas, que presentaban síntomas de fusariosis. Las plantas que presentaban síntomas se llevaban a laboratorio para su análisis. La forma de realizar el análisis fue: Se realizaba el lavado y secado de raíces y cuello de las plantas. Después de secarse se procedía a su siembra en medio PDA, (Potato Dextrosa Agar). 7

Material vegetal. Se utilizarán variedades de lechuga usadas habitualmente en las zonas de cultivo de lechuga en Murcia. Las semillas se pregerminarán en cámara a 25 grados y después se sembraran en macetas de 500 cc con un sustrato mezcla de turba y perlita 3:1, desinfectado en autoclave a 120 ºC. Las variedades a inocular fueron 3 entre las que se encuentra V1 usada como testigo pues no presenta resistencia a Fusarium sp. Se utilizaron 10 plantas por variedad. El semillero se puso el día 18/10/2019. El trasplante 13/11/2019. Las inoculaciones se realizaron el 20/11/2019.

Material vegetal

Material fúngico

V3 Tabla 1: Material vegetal y fúngico ensayado

5. PROCEDIMIENTO: Para preparar el inóculo se tomaron los aislados crecidos en PDA y se preparó una suspensión de conidias de 1·106conidias/ml. Se tomaron las lechugas y se realizó la inoculación mediante dos métodos: riego e inmersión. Para el método de inmersión se extrajeron las plantas del sustrato y se mantuvieron lotes de 5 plantas sumergidas durante 10 minutos en una solución fúngica ajustada a la cantidad de inóculo. En el caso de riego se aplicó a cada plántula en maceta la misma cantidad de conidias aportando a cada maceta 10 ml.

Imagen 2: Lechugas (V1) sumergidas en la disolución que contiene el hongo, se está llevando a cabo una inoculación por inmersión, elaboración propia.

A continuación las plantas inoculadas se mantuvieron en una cámara a 25 ºC. Los riegos se realizaron tres veces a la semana. 8

Se realizaron controles de sintomatología dos veces a la semana, en los que con una escala de observación anotamos si existen o no indicios de enfermedad. La escala utilizada establece valores entre 0 y 5 para el índice de síntomas. La primera indicación de esta enfermedad fue un color amarillento y caída de las hojas inferiores. Este síntoma a menudo ocurre en un lado de la planta o en un brote. Las hojas sucesivas se vuelven amarillas, se marchitan y mueren, a menudo antes de que la planta alcance la madurez. A medida que la enfermedad progresa, el crecimiento generalmente se atrofia y se desarrolla poca o ninguna fruta. Si se corta el tallo principal, se pueden ver rayas marrones oscuras que corren longitudinalmente a través del tallo. Esta decoloración a menudo se extiende hasta el tallo. Al final del ensayo se calculó el porcentaje de plantas muertas en cada tratamiento.

Imagen 3: Lechugas (V1) durante la cuarta semana desde su trasplante, elaboración propia.

Escala de Observación 0

Sin síntomas

Reducción del crecimiento

Marchitez y amarillamiento leve

Marchitez y amarillamiento acentuado

Amarillamiento severo

Muerte

Tabla 2: Índice de progresión de los síntomas en las lechugas.

Las plantas muertas en cada control se extrajeron del sustrato para su análisis en medio Komada específico para aislamiento de Fusarium, con el fin de reaislar el hongo productor de la muerte de la planta. Pasadas 8 semanas en cámara, las plantas que no habían muerto se analizaron. 9

El medio Komada es un medio de cultivo creado por Komada (1975) que presenta selectividad en el crecimiento de Fusarium sp.

Imagen 4: Lechugas con síntomas de marchitez severa, elaboración propia.

6. RESULTADOS

Variedad vegetal

Aislado

Tratamiento

Tipo de inoculación

Porcentaje de plantas muertas

% medio del índice de síntomas (0-5)

Inmersión

100±0e

5,0f

Inmersión

100±0e

5,0f

Inmersión

22,30±13bc

4,0def

Inmersión

80,55±10,2de

4,7f

Inmersión

0±0a

1,7b

Inmersión

17,34±10,2ab

3,5de

Riego

41,46±12,97bc

4,4ef

Riego

75,33±25,48de

4,9f

Riego

61,08±5,64cd

4,6f

T10

Riego

80,55±10,27de

4,8f

T11

Riego

0±0a

2,3c

T12

Riego

8,31±8,48a

3,1d

T13

Sin inocular

0±0a

0,0a

Variedad vegetal

Aislado

Tratamiento

Tipo de inoculación

Porcentaje de plantas muertas

% medio del índice de síntomas (0-5)

T14

Sin inocular

0±0a

0,0a

T15

Sin inocular

0±0a

0,0a

Tabla 3: Porcentaje de plantas muertas al final del ensayo en cada variedad y cada aislado y porcentaje medio del índice de síntomas. Las diferencias entre tratamientos se determinaron mediante análisis de la varianza. Las diferencias medias significativas mediante test LSD P< 0,05. análisis de varianza test mínima diferencia significativa. Valores en la columna seguidas de diferente letra indica diferencias significativas (p< 0,05). n=10. Porcentaje es valor medio de 10 repeticiones ± desviación estándar. Los porcentajes están transformados usando arcsenraíz√x/n): x=número de plantas muertas; n=total de plantas % medio del índice de plantas muertas escala síntomas 0-5; siendo 0 = sin síntomas, 1= reducción del crecimiento, 2= marchitez y amarillamiento leve, 3= marchitez y amarillamiento acentuado, 4= marchitez y amarillamiento severo, 5= muertas.

Gráfico 2: Evolución del porcentaje de plantas muertas para cada variedad y cada aislado a lo largo del ensayo.

T1: Variedad 1, Aislado 1, método de inoculación inmersión. T2: Variedad 1, Aislado 2, método de inoculación inmersión. T3: Variedad 2, Aislado 1, método de inoculación inmersión. T4: Variedad 2, Aislado 2, método de inoculación inmersión. T5: Variedad 3, Aislado 1, método de inoculación inmersión. T6: Variedad 3, Aislado 2, método de inoculación inmersión. T7: Variedad 1, Aislado 1, método de inoculación riego. 11

T8: Variedad 1, Aislado 2, método de inoculación riego. T9: Variedad 2, Aislado 1, método de inoculación riego. T10: Variedad 2, Aislado 2, método de inoculación riego. T11: Variedad 3, Aislado 1, método de inoculación riego. T12: Variedad 3, Aislado 2, método de inoculación riego. T13: Variedad 1, sin inocular. T14: Variedad 2, sin inocular. T15: Variedad 3, sin inocular.

No todas las variedades respondieron igual a las inoculaciones. En la variedad 1 que no presenta resistencia varietal a Fusarium oxysporum sp. se obtuvo el mayor porcentaje de plantas muertas comportándose de forma similar a la variedad 2 con el aislado 2. En todos los tratamientos la variedad 3 se comportó con mayor resistencia a los dos aislados del hongo presentando menor índice medio de síntomas tanto cuando se inocula por inmersión como por riego. Los datos obtenidos en el ensayo indican que los aislados de Fusarium sp. utilizados en las inoculaciones resultan patógenos al inocularlos en plantas de lechuga. El porcentaje de plantas muertas no fue igual en todas las variedades. En la variedad sin resistencia se obtuvo 100% de mortalidad.

7. CONCLUSIONES Teniendo en cuenta los resultados obtenidos podemos concluir que los aislados obtenidos resultan patógenos en lechuga, presentando cierta especificidad a esta especie, por lo que se confirma la hipótesis planteada. Además, observamos que la variedad de lechuga influye en la mortalidad que tiene por parte del hongo y existe diferencia varietal en la sensibilidad a Fusarium oxysporum en las condiciones ensayadas. La Comunidad de Murcia tiene la superficie de cultivo más grande de toda Europa, es por ello que su agricultura aporta una gran cantidad de conocimientos sobre enfermedades en plantaciones. Sus campos son lugares de estudio que tienen la finalidad de mejorar la calidad de los alimentos. Este estudio influye directamente en la producción de las lechugas. Tras conocer estos datos podemos determinar la manera en la que estas se ven afectadas por el hongo. En definitiva, con los resultados obtenidos observamos que todas las variedades presentaron síntomas al inocularlas. Relacionando estos datos con los objetivos planteados concluimos que se confirma la patogenicidad de Fusarium sp. en lechuga, pero no de igual intensidad en todas las variedades.

8. AGRADECIMIENTOS En primer lugar, hemos de agradecer al proyecto IDIES (Investigación y Desarrollo en Institutos de Educación Secundaria) por habernos ofrecido la oportunidad de iniciarnos en esta investigación. Del mismo modo, agradecimiento al Instituto Murciano de Investigación y Desarrollo Agrario y Alimentario, y en especial a la investigadora Dña. María del Mar Guerrero Díaz, nuestra tutora en IMIDA, por su ayuda y apoyo incondicional en el trabajo. Los ensayos realizados en este trabajo se han encuadrado dentro del Proyecto FEDER1420-31. Nos gustaría también reconocer la colaboración de Dña. María Dolores Gálvez Sánchez, profesora de física y química del IES Saavedra Fajardo, por habernos acompañado en todas nuestras visitas, por su absoluta dedicación y entrega; y por último a Dña. Virginia Verdú Tortosa, profesora de economía y de investigación del 12

IES Saavedra Fajardo por haber coordinado los aspectos técnicos del trabajo y habernos animado en todo momento, y sin las cuales no habría sido posible concluir este proyecto. Gracias.

9. BIBLIOGRAFÍA Y WEBGRAFÍA -

Alfaro G. (1973) “Algunas generalidades para precisar” en Enfermedades criptogámicas en hortalizas. Madrid: Servicio de publicaciones agrarias.

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