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２ＯＯ７ Ｖｏ１ ． ７ Ｎｏ １２
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药用植物刺 山柑愈伤组织诱导及细胞生长代谢特征研 究 术 王艳婷
甘
露
刘
薇
余龙 江
栗 茂腾
（ 华 中科技大学生命科学与技术学 院 武汉 ４ ３０ ０７ ４） 摘要 ： 本文研 究 了不同外植 体及 激素对刺山柑愈 伤组织诱导 的影响 ， 不 同激 素配比对愈 伤组织增殖培养 以及 悬浮细胞的生 长与 代谢特征 。结果表明 ： 以刺 山柑 叶片作为诱 导愈 伤组织的材料 ， 效果较佳 ； 愈伤组 织诱 导和 继代 的适 宜培养条件是 分别是 ＭＳ＋ ０ ． ５ ｍｇ ／ Ｌ２， ４． Ｄ＋Ｉ ． ０ ｍｇ／ Ｌ６ － ＢＡ和 ＭＳ ＋Ｉ ． ０ ｍｇ ／ Ｌ２， ４． Ｄ＋Ｉ ． ５ ｍｇ ／ Ｌ６． ＢＡ。刺山柑 悬浮培养细胞的生长周期为 ３０天左右 ， 细胞 生长曲线 呈“ｓ” 形， 生物量增 长 ２． ８倍左右 ； 细胞 生长周期 内， 碳源消耗规律表现为蔗糖和可溶性总糖的浓度持续降低 ， 而还原糖 则表 现为 先 升 高 后 降低 ； 过 氧化 物 酶 活 测 定 显 示 酶 活 水平 与蔗 糖 浓 度 的 高低 呈一 定程 度 的 正 相 关 。
关键词 ： 刺 山柑 ； 愈伤组织 ； 悬浮细胞 ； 生长代谢 特征 中图分 类号 ： ２８ ２． ７ｌ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６７ ３． ６ ２７ ３（ ２ ００７） １ ２ ． １ ７ ７９ ． ０５
Ｒｅｓｅａｒ ｃｈ Ｏｎ ｔ ｈｅＣａｌ ｌ ｕｓＩ ｎｄｕｃｉ ｎｇａｎｄ ｔ ｈｅＣｅｌ ｌＧｒ ｏｗｔ ｈ ａｎｄＭ ｅｔ ａｂｏｌ ｉ ｓｍ Ｃｈａｒａｃｔ ｅｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃｓＯｆＣａｐｐａｒ ｉ ｓｓ ｐｉ ｎｏｓ ａＬ． 术 ＷＡＮＧ Ｙａｈ· ｔ ｉ ｎｇ，ＧＡＮＬ￣ Ｌ１ Ｕ Ｗｅｉ ，ＹＵＬｏｎｇ－ ｊｉ ａｎｇ，ＬＩＭａｏ－ ｔ ｅｎｇ
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Ｃｈｉ ｎｅ ｓ ｅＬｉ ｂｒ ａ ｒ ｙＣｌ ａ ｓ ｓ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ（ ＣＬＣ） ： ２８ ２ ． ７１ Ｄｏ ｃ ｕｍｅ ｎｔｃ ｏ ｄｅ ： Ａ Ａｒ ｔ ｉ ｃ ｌ ｅＩ Ｄ：１ ６ ７３ ． ６２ ７ ３（ ２０ ０７）１ ２ ． １ ７ ７９ ． ０５ 刺 山柑 （ Ｃａ ｐ ｐａ ｒ ｉ ｓｓ ｐｉ ｎ ｏｓ ａＬ） 为 白花菜科 山柑属植物 ， 主要
毒方式 、 不同激 素配 ｔ ｔ－ 个方 面对愈伤组织 的诱导及其增殖培
分 布于西班 牙 、 地 中海海湾地区 ， 在我国新疆 、 甘肃 、 西藏 等地
养方 面进行 了研究 ， 并对其细 胞生 长曲线 、 糖代谢及过 氧化物
也广有分布［ Ｉ ］ 。刺 山柑具有发达 的根系和木质部 ， 能够高效 利用
酶 活性 的变 化 特 征 进行 了分 析 。
地下水资源 ， 被认为是典型的荒漠植物之一 】 。分析表 明刺 山 柑 中含有挥发油 、 生物碱类 、 类黄酮类 、 萜类 以及芥子油甙等物 质， 在抗菌 、 抗炎 、 抗 氧化 、 抗 高血压 、 降血糖血酯 、 利尿 、 治疗痛
ｌ材料 与 方法 １． １实 验 材 料
风和风湿等方 面均有一定的功效［ ３ － ８ ］ 。野外 调查 发现 ， 由刺 山柑
愈伤组织 诱导材料 ： 刺山柑种子 、 萌发幼 苗以及种植 在华
为建群种所形成的荒漠植物群 落多呈小 面积零 星分 布 ， 群落的
中科技大学实验田的刺 山柑 （ Ｃａ ｐ ｐａ ｒ ｉ ｓｓ ｐｉ ｎｏ ｓ ａＬ） 植 株。细胞 生
层次结构极其简化 ， 群落的种类组成也十分贫乏［ Ｉ ］ 。 植物细胞悬
长曲线测定 以及代谢 过程研究材料 ：固体基质上 继代两次 以
浮培养是植物细胞生长 的微生 物化 ， 其 分散性好 、 细胞形 状及
上、 生长旺盛 、 结构疏松 的愈伤组织无 性系转入液 体培养基 中
细胞团大小大致相 同， 而且生长迅速 、 重复性好 、 易 于控 制 ， 悬
得 到 的 生 长稳 定 的细 胞 系 。
浮细 胞 培 养 已成 为植 物 生 物 技 术 中最 有 用 的手 段 之 一 。因此 ，
１ ． ２ 实验 方 法
诱导刺 山柑愈伤组织 、 构建刺 山柑的悬浮细胞 体系并对其 生长
１ ． ２． １愈伤组织的诱导 与建 立 外植体的选 择与消毒处理 ： 首先
与代谢特征分析进行研究分析 ， 为通过 细胞大 规模 培养生产相
对刺山柑 种子 、幼 嫩茎段 以及幼叶用洗衣粉溶 液浸泡 ３ ０ｍｉ ｎ，
关药用物质打下基础 。 目前 ， 对刺山柑愈伤组 织诱 导与细胞系
并用刷子刷洗外植 体表面 ， 用 流水 冲洗材料 ５ － ６ ｈ； 然后 在超净
的建立还未见报道 。本实验对刺 山柑不 同外植体 、 不同表 面消
操作 台上先用 ７０ ％酒精 浸泡 ｌ ５－ ２０ ｓ，无 菌蒸馏 水冲洗 ３次 ， 再
基金项 目： 国家 自然科学基金中国西部环境 和生态科学重大研究计划（ Ｎｏ． ９０２０２０１ ６）
作者简介 ： 王艳婷 ， （１ ９８３．）， 女， 硕士， 主要从事植物生物技术方面的研究。 通讯作者 ： 栗茂腾 ， Ｅ－ ｍａ ｉ ｌ ：ｌ ｉ ｍａ ｏｔ ｅｎｇ ４２６＠１ ６３． ｔｏｍ （ 收稿 日期 ： ２０ ０７— ０８— １ ０接受 日期 ： ２００７－ ０８ － ３１）
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现代生物医学进展
ｉ ｎＭ ｏｄｅｒｎＢｉ ｏｍｅｍ ｃｉ ｎｅ ２Ｏ０７ Ｖｏ１ ． ７ Ｎｏ． １２
用 ０． １ ％升汞表面灭菌后用无菌水冲洗 ３ － ４次。 愈伤组织诱 导培养 ： 接种前叶片被切成 ０ ． ５ ｃ ｍ× ０． ５ ｃ ｍ 的小
３ ０ｇ 门 Ｌ， ＰＨ ５ ． ８， 接种量为 １ ０％， 光照强度 ２１ ００Ｌｕｘ， １ ４ ｈ ／ ｄ， 温度 ２５℃± １ ℃， 摇床转速 １ ０ ０－ １ ２０ ｒ ｐｍ。
．
块， 茎切成 １ ． ０ｃ ｍ长的小段 ， 种子对切 。将 三种外植体接种于附
生物量 的测定 ：在 液体培养基 中按照每瓶 ３ ． ０ ｇ的接种量
加有 １ ． ５ ｍｇ ／ Ｌ２， ４ － Ｄ、 ３． ０ｍｇ ／ Ｌ６－ ＢＡ 以及 ３％蔗糖 的 ＭＳ培养基
接入 愈伤组织 细胞 ， 连续 培养 ３ ２ｄ， 每 ４ｄ取悬浮 培养 的细胞 ，
上（ ＰＨ＝６． ０） ， 暗培养一 周后 ， 转 入光照培养 ， 比较不 同外植体
抽滤至干后 ， 于千分之一精 度电子天平上称其鲜重 。
在诱 导培养基上产生刺 山柑愈伤组织 的情况 。为 了摸索不同激
悬浮 细胞 培养 过程 中培养液 中糖含量 和过 氧化物酶活性
素水平 、种类以及 不同激素组合对外植体诱 导愈伤的影响 ， 以
测定 ： 蔗醣含量 、 可溶性还原糖含量 、 可溶性 总糖含量测定 以及
叶片为例进行 了研究 ， 采用单 因子实验 ， 结合 ４因素 ３水平 正
过氧化物酶活性测定方法参照文献（ ｏ ／ 。
交实验 ， 采用浓度水平随机化设计 ， 每处理接种 ３ ０个外 植体 ， 培养 ３ ０ｄ后 ， 统计愈伤组织的诱导率 。 愈伤组织增殖培养 ：在诱导实验获得最优组合的基础上 ，
２结果与分析 ２． １升 汞 不 同处 理 时 间对 不 同 外 植体 消毒 效 果 的 影 响
设计不同的 ２ ，４ － Ｄ和 ６ － ＢＡ浓度配 比， 找到适合愈伤组织增殖
不同外植体由于生理状态之 间存在一定差异 ，因此对其消
的培养基配方 。每处理接种 ４瓶 ， 重复继代 两次 ， 统计增殖倍
毒时间的要求也不完全一致。 研究表明（ 表 １） ： 随着 ０． １ ％升汞溶
数。
液消毒时间的延长 ， 各种外植体都呈现 出污染率降低 、 褐变率增 实验结果统计 ： 材料接种培养后 ， 在 ３ ０ ｄ对材料的污染率 ，
褐变 率 ， 启动率等进行统计 ， 具体统计指标如下 ： 污染率％＝（ 污
加 的趋势。其 中， 叶片以 ８ ｍｉ ｎ的消毒时间为佳 ， 成活率可达到为 ７５ ． １ ％； 而 以茎段作为外植体时 ， 其在 ８ － １ ５ ｍｉ ｎ内消毒效果均不
延长消毒时间， 污染 情况虽 能得 到控 制， 但 褐变程度 大大提 染外植体数 ／总接种数 ） ×１ ００ ％；褐变率 ％＝ （ 褐变外植体数 ／ 佳 ， 总接种数 ） ×１ ０ ０％；成活率％＝ （ 成活外植体数 ／总接种数 ） ×
高；以种子作为外植体不存在褐变现象 ，只要保证材料消毒彻
１ ００ ％； 诱 导率％＝（ 愈伤组织发生数 ／总接 种数 ） ×１ ０ ０％； 增殖
底 ，即能实现较高的存活率。但种子有效防止污染的消毒时间
系数 ＝（ ３ ０ ｄ后收获 的愈伤组织 鲜重 ／接种前 愈伤组织 鲜重 ） ×
（ 升汞消毒 １ ５— ２ ５ ａｉ ｒ ｎ） 较 叶片延长一倍多， 消毒剂的毒害可能相
１ ００％
对较大 ， 而且消毒程序繁琐。综合考虑 ， 以叶片作为刺山柑愈伤
１ ． ２ ． ２刺 山柑悬 浮细胞 生长与代谢特征 分析 培 养条件 ：采用
组织诱导的外植体较合适 ， 其最适升汞消毒时间为 ８ｍｉ ｎ。
ＭＳ液体培 养基 ， 其 中添加 ２， ４－ Ｄ１ ． ０ ｍｅ ｄＬ， ６ 。 ＢＡ １ ． ５ ｍｇ／ Ｌ， 蔗糖
２． ２不 同外植体 对于刺 山柑愈伤组织诱导 的影响
表 １升汞不 同处理时间对 刺山柑茎 、 叶和种子消毒效果的影响 Ｔａｂｌ ｅ １ Ｔｈｅｉ ｎｆ ｌｕｅｎｃｅｏｆＨｇＣ１ ２ｔ ｒｅａｔ ｍｅｎｔｆ ｏｒｄｉ ｆｅｒｅｎｔｔｉ ｍｅｏｎ ｓ ｔｅｍ ｓ，ｌｅａｖｅｓａｎｄ ｓｅｅｄｓｏｆＣａｐｐａｒｉ ｓｓｐｉ ｎｏｓａＬ．
表 ２不 同外植体对刺山柑愈伤 组织诱导率的影响 Ｔａｂｌ ｅ２ Ｔ ｈ ｅｉ ｎｆ ｌｕｅ ｎ ｃｅｏｆｄｉ ｆｅｒ ｎ ｔｅｘｐｌ ｅ ａｎｔ ｓｏｆＣａｐｐａｒ ｉ ｓｓｐｉ ｎｏｓａ Ｌ ｏｎ ｃａｌｌ ｕｓｉ ｎｄｕｃｔｉ ｏｎ ｒａｔｅ
表 ２显示的是 附加有 ２，４ － Ｄ１ ． ５ ｍｇ ／ Ｌ、 ６ 一 ＢＡ ３． ０ ｍｇ ／ Ｌ以及
为了研究不 同激素组合对刺山柑愈伤组织诱导 的影响 ， 以
３％蔗糖的 ＭＳ为基本培养基上 ３种不 同外植体的愈伤组织诱
叶片为例 ， 对６ － ＢＡ、 ２， ４－ Ｄ 和 ＮＡＡ三种激素采用 Ｌ９（ ３ ４） 正交
导情况 。可看出 ， 以叶 、 茎和种子作为外植体均能诱导 出愈伤组
设计的方法来处理外植体 ， 每处理接种外植体 ３０个 ， 以研究不
织， 但 以叶片作为外植体诱导 出的愈伤组织状态 最好 、 诱 导率
同激素种类 和配 比对刺山柑愈伤组织诱导的效果 （ 表 ３ｏ
最高 ；以茎作 为外植体诱 导出的愈伤组织状态 和叶片类似 ， 但
经过 对 ２，４ － Ｄ、 ６－ ＢＡ 以及 ＮＡＡ不 同浓 度组合 的处 理 发
由种子诱 导出的愈伤组织质 地较稀软 ，不适合后续继代培养 。
现， 不 同组合对刺山柑 愈伤组织 的诱导影响很大。 由表 ３可以
不同外植体在产生愈伤组织 的时间上差异较小 ， 在外植体接人
看到 ，三种激 素对刺 山柑 愈伤组织 的诱导 影响作 用依次 为 ：
培养基 ４－ ５ ｄ后 ， 切 口处 开始膨大 ， 继续 培养 ４— ５ｄ后 ， 切 口处产
６－ ＢＡ ＞２，４－ Ｄ ＞ＮＡＡ。
生少量的愈伤组织 ， 但不 同外植体所 产生的愈伤组织 色泽和状
方差 分析结果表 明 ， ６－ ＢＡ对刺 山柑愈伤组织 的诱导最为
态稍有差别 。
显著 ， 其他因素的作用不显著（ 表 ４） 。由分析结果知 ， 刺山柑愈
２ ． ３不 同激素组合对刺 山柑愈伤组织诱导的影响
伤组织诱导的最佳激 素组合为 ： Ａ２Ｂ２Ｃ１， 即 ＭＳ ＋Ｉ ． ０ ｍｇ ／ Ｌ６ － ＢＡ
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＋０ ． ５ｍｇ ／ Ｌ２ ， ４－ Ｄ最适 合刺 山柑 愈伤组织 的诱 导。进一 步实 验
壁
！！
！ ！
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：１２墨！：
在一定 的差异 （ 图 １） 。
表明， 由该方案诱导 出的愈伤呈现三种不 同形 态 ， 并 且颜色存 表 ３ 正 交 实验 结 果 Ｔａｂｌ ｅ ３ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌ ｔ ｓｏｆｏｒ ｔ ｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒ ｉｍｅｎｔ
注： ＋ 表 示极 显 著 水 平 ０． ０１． Ｎｏｔ ｅ ： ．ｖｅ ｒ ｙｓ ｉ ｇｎｉ ｉｃａ ｆ ｎｔ ｌ ｙ（ Ｐ＜０． ０１）
表 ５ ６－ ＢＡ与 ２。 ４一 Ｄ不同浓度配比对刺 山柑愈伤组织增殖效应的影响
圈
Ｔａｂｌ ｅ５ Ｔ ｈ ｅｉ ｎｆ ｌｕｅｎｃｅ ｏｆｖａｒ ｉｏｕｓ６－ＢＡ ａ ｎ ｄ ２．４－ Ｄｌ ｅｖｅｌ ｓｏｎ ｃａｌ ｌ ｕｓ ｍｕｌ ｔｉ ｐｌ ｉ ｃａｔｉ ｏｎ
图 １愈 伤 组 织 不 同 状 态
ａ启 色 、 稀泥状愈伤 组织； ｂ． 黄色 、 块状愈伤组织； ｃ． 黄绿色、 疏松 颗粒状 愈伤组织 Ｆｉ ｇ．１Ｃａｌｌ ｉｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｓｔａｔ ｅｓ
ａ．Ｗ ｈｉ ｔ ｅａｎｄｐｕｌ ｐｙｃａｌ ｌｉ ；ｂ．Ｙｅｌ ｌ ｏｗ ａｎｄｎｕｂｂｙｃａｌ ｌ ｉ；Ｃ．Ｋｅｌ ｌ ｙａｎ ｄ ｌ ｏｏｓｅｎ ｇｒａｎｕｌ ｅｃａｌｌ ｉ
２． ４ 愈伤 组织 增 殖 培 养 本 实 验 采 用 了 ６种 不 同 的 激 素 配 比对 生 长 状 态 一致 的愈
伤组织进行 了继代增殖实验。结果表明 ， ２， ４－ Ｄ 与 ６－ ＢＡ的各种 组合对外植体 的愈伤组织增殖倍数都在 ２． ３倍之间 ，但 Ｔ４和
总体上 讲 ， 刺 山柑 悬浮 培养细胞 的生 长 曲线 呈“ｓ ”型（图
Ｔ２处理组 中愈 伤组 织增殖速度最快 ； 除 Ｔ５外 ， 其他几 种激素
２） ， 其 生长过程大致可分为 ３个阶段 ： 即延迟生长期 、 对数 生长
组合的培养基 中愈伤组织 的生长情况 大致相 近 ， 结合愈伤组织
期和缓慢生长期 。从开始接种到第 ４天是细胞延迟生长期 ， 这
的状 态 ，我们认 为适宜 刺山柑愈 伤组织 继代 的培养 基为 １． ５
个 阶段的细胞增殖量较少 ， 可能是 由于刚接种的细胞还没有完
ｍｇ ｍ６ － ＢＡ和 １ ． ０ｍｇ ／ Ｌ２， ４－ Ｄ配合 的 ＭＳ培养基 。同时还发现 ，
全适应 新的生长环境 ， 不 能很好 的吸收营养物质 所致 ； 从第 ４
在 １ ． ０ ． ２． ０ ｍｇ ／ Ｌ的浓度范围内 ， 随着 ２， ４－ Ｄ浓度增 大 ， 愈伤组织
天到第 ２ ４天为对数生长期 ， 在这个时期 ， 细胞增殖速度相对较
的发生率相应提高。
快， 从第 ２ ４天以后 ， 细胞增 殖速度逐渐减缓 ， 培养基 开始变混
２． ５ 刺 山柑 悬 浮 培 养 细胞 的生 长 曲线
浊， 细胞也 由原先的黄色转变为棕褐色。此时 ， 如果再不更换培
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养基 ， 细胞易褐化死亡 。因此 ， 培 养细胞在第 ２４天左右继代 较 ４
３
２
２０００
；
ｌ
合适 ，这样可 以较好 的兼顾 佳二者 的统 ５ ４ 高生 ５ ３长量与生长状态 ５ ２ Ｓ ｌ 一
。
从培 养初期至缓慢生长期过程 中 ， 刺山柑悬浮培养细胞 的
鲜重增 长了 ２． ８倍左 右。
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辞
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星 Ｏ． ５ ０
０
４
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３９ ．
培养 时 间 Ｑｌ Ｉｔ ｌ ｍｔ ｉｎｅ（ ｄ）
图 ２ 刺山柑悬浮培养细胞 的生长 曲线 Ｆｉ ｇ． ２ Ｔｈｅｇｒｏｗｔ ｈ ｃａｌ ｖｅ ｏｆｃｅｌ ｌｓｕｓｐｅｎｓｉ ｏｎ ｃｕｌ ｔ ｕｒｅｏｆＣａｐｐａｒ ｉｓｓｐｉ ｎｏｓａＬ
２ ． ６刺 山柑悬浮细胞的糖代谢情况 碳源是培养基 中最重要的营养物质之一 。在植物细胞培 养 中， 最常用 的碳源是 蔗糖…ｌ 。由图 ３可知 ， 最初蔗糖有 少量 降 解， 初始浓度为 ２８ ． ７１ｇ ／ Ｌ； 从 细胞延迟生长期开始 ， 培养基 中的
蔗糖 在蔗糖转化酶 的作用下水解为葡萄糖与果糖 ，培养 ２８天 左右 ， 培养液 中仅有极 少量蔗糖剩余 。整个 培养过程 ， 蔗糖平均 每天 的消耗速度为 ０ ． ８９ ｇ ／ Ｌ。延迟期蔗糖消耗较快 ， 平均 每天 的 消耗速率为 ２ ． ７ ３ Ｌ。 约 ６０ ％的蔗糖在对数 生长期消耗 ， 到缓慢
生长期 ， 仅有极少量的蔗糖 剩余 。由三个 时期 的蔗糖消耗情况 来看 ， 延迟期 的消耗速率最 高 ， 同时 ， 这一 阶段 的还原糖生成速 率也最高 ， 平均每天增 长的还原糖浓度为 １ ． ５７ ｇ ／ Ｌ。从第 １ ６天
开始 ， 还原糖 的量开始下 降 ， 到第 ３ ２天后 ， 仅有少量剩余 。整个 细胞周期 ， 培养基 中总糖 的量一直呈下降趋势 。培养初期 ， 总糖
的消耗量小 ， 前 ４天糖浓度 只下 降了 ５． ５０ ｇ ／ Ｌ。在对数生长期 ， 总糖 的消 耗 速 度加 快 ， 在２ ４天 内 总糖 消 耗 了 ５ ６ ％。 在 ３ ２天 的
培养过程 中， 消耗总糖 浓度 的总量 ２ ４． ０ ３ ｇ／ Ｌ。 由总糖的消耗 曲 线 与细胞生长 曲线 （图 ３） 对 比可见 ， 二者动态 变化密 切相关 。 延迟 生长期 ， 总糖消耗少 ， 相应 的， 细胞 的生长量也 比较缓慢 。 在对数 生长期 ， 总糖被大量 消耗 ， 细胞 生长量也最大 。 由此可 见， 碳源确实是细胞生物量积累 的主要 能源 。
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图 ３刺 山柑悬浮细胞的糖代谢动态 曲线 Ｆｉ ｇ． ３ Ｋｉ ｎｅｔ ｉ ｃｓｏｆｓｕｇａｒｃｏｎｓｕｍ ｐｔ ｉｏｎ ｂｙ Ｃａｐｐａｒｉ ｓｓｐｉ ｎｏｓａＬ ｓｕｓｐｅｎｄｉ ｎｇ ｃｅｌｌ ｓ
２ ． ７ 悬 浮 培 养 过 程 中过 氧 化 物 酶 活性 的变 化
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现代 生 物 医 学 进 展
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２ＯＯ７ Ｖｌ ０１ ． ７ Ｎｏ． １２
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呈现 “ ｓ” 形生长 曲线 ， 周期 为 ３ ０天左右 ， 与一般 液体悬浮 细胞
ｔｉ ｏｎ ｏｆｃａ ｒ ｂｏｎ ｔｅｔ ｒａｃｈｌ ｏｒｉ ｄｅ－ ｉ ｎｄｕｃｅｄ ｈｅｐａｔ ｏｔｏｘｉ ｃｉ ｔ ｙ ｂｙ ｔ ｈ ｅｅｔ ｈａ ｎ ｏｌｅｘ－
相比
ｔ ｒ ａｃ ｔｏｆＣａ ｐｐａ ｒ ｉ ｓｍｏｏｎｉ ｉｆ ｒ ｕｉ ｔ ｓｉ ｎｒ ａ ｔ ｓ［ Ｊ ］ ＿ Ｐｈａ ｒ ｍａｃ ｅ ｕｔ ｉ ｃ ａｌＢｉ ｏｌ ，２００４，
， 生长周期稍长 ， 原 因 可 能 有 以下 两 个 方 面 ： 一是 由于
细胞生长周期 的长短受到植物种类 、 起始 细胞 密度 以及 营养成
分种类 、 配 比等 因素 的影 响 ， 二是 目前 液体悬浮继 代次数 尚有 限， 细胞对于液体环境可 能还处在适应调整 阶段 ， 通过延长 继 代次数 ， 可 以逐渐缩短悬浮 细胞 的生 长周期 。在植 物细胞培养 中， 糖作为细胞代谢过程 中碳水 化合物的最好来 源 ， 对细胞 的 生长有较大的影响 。本研究表明 ， 在细胞对数生长后期 ， 蔗糖完 全转化为还原性糖 （ 葡萄糖 、 果糖 ） 而被细胞利用 。过氧化物酶
４２： ２８６－ ２８８
［ ８］ＥＤＤＯＵＫＳＭ，ＬＥＭＨＡＤＲＩ
ＭＩ ＣＨＥＬＪ Ｂ．Ｈｙｐｏｌ ｉ ｐｉ ｄｅｍｉ ｃａｃ ｔ ｉ ｖｉ ｔ ｙ
ｏｆ ａｑｕｅ ｏｕｓｅ ｘｔ ｒ ａｃ ｔｏｆＣａｐｐａ ｒ ｉ ｓｓ ｐｉ ｎｏｓ ａＬｉ ｎｎｏｒ ｍａ ｌａ ｎｄｄｉ ａ ｂｅ ｔ ｉ ｃｒ ａ ｔ ｓ ［ Ｊ ］ ． ＪＥｔ ｈｎｏｐｈａｒ ｍ ａｃｏｌ，２００５， ９８： ３４５－３５０
［ ９］ＬＩＴＩ ＮＧＴＩ ＮＧ，ＳＩ Ｍ Ｊ ／ ＳＥＮ，ＣＨＥＮ Ｊ Ｉ ＮＨＵＩ ．Ｄｅｖ ｅｌ ｏｐｍｅ ｎｔ ａ ｌｓ ｙｎｃ ｈｒ ｏ－ ｎｉ ｚａ ｔ ｉ ｏｎｏｆ ｓ ｏｍａ ｔ ｉ ｃｅ ｍｂｒ ｙｏｇｅ ｎｅｓ ｉ ｓ ｕｎｄｅ ｒｓ ｕｓ ｐｅ ｎｓ ｉ ｏｎｃ ｕｌ ｔ ｕｒ ｅｃｏ ｎｄｉ ｔ ｉ ｏｎ［ Ｊ ］ ． Ｍｏｌ ｅｃ ｕｌ ｒ Ｐｌ ａ ｎｔＢｒ ａ ｅ ｅ ｄｉ ｎｇ， ２００７， ５（ ３） ： ４３６－ ４４２（Ｉ ｎＣｈｉ ｎｅｓ ｅ）
［ １ ０］李合 生植 物 生理生化 实验原理和技 术［ Ｍ］ ． 北京：高等教 育出版社，
普遍存在 于高 等植 物中 ， 它不 仅参 与植 物 的呼吸 ， 还参与植 物
２００ｌ
木质素与乙烯 的合成 ， 是一类与生长 、 分化密切相关的酶 。不
ＬＩＨＥＳＨＥＮＧ．Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒ ｉｍｅｎｔ ａｌｐｒ ｉｎｃｉ ｐａｌａ ｎ ｄｔ ｅｃｈｎｏｌ ｏｇｙ ｏｆｐｌａｎｔ
同蔗糖浓度处理实验表 明，一定浓度的蔗糖可 以使 ＰＯＤ 的活
ｐｈｙｓ ｉ ｏｌ ｏｇ ｙ ａ ｎｄｂｉ ｏｃ ｈｅｍｉ ｓ ｔ ｙ 【 ｒ Ｍ］ ．Ｂｅ ｉ ｊｉ ｎｇ：Ｈｉ ｇｈ Ｅｄｕｃ ａｔ ｉ ｏｎ Ｐｒ ｅｓ ｓ，
性增加 。本研究为刺山柑的细胞大规模培养提供了一定 的理论 基础 。
２００ｌ
［ １１ ］ＣＯＵＲＮＡＣＬ，ＤＩ ＭＯＮ Ｂ，ＣＡＲＲＩ ＥＲＤ， ｅｔａ１ ．Ｇｒ ｏｗｔ ｈａ ｎ ｄｐ ｈｏｔ ｏｓ ｙｎ－
参 考 文 献（ Ｒｅ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ）
ｈ ｅｔｉ ｔ ｃｃｈａ ｒ ａｃｔ ｅｒ ｉｓｔｉ ｃｓｏｆＳｏｌ ｎ ｕｍ ｔ ａ ｕｂｅｒｏｓｕｍ ｐｌ ａｎｔ ｌ ｅｔｓｃｕｌ ｔｉ ｖａｔ ｅｄ ｉ ｎ ｖｉ ｔ －
［ １ ］ ＺＨＡＮＧ ＬＩ ＹＵＮ，ＹＡＮＧ ＣＨＵＮ．Ａｎａ ｅｏｌ ｉ ａｎｐｒ ｏｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏｎｐｌ ａ ｎｔ ｓＣａ ｐ－
ｒｏ ｉ ｎ ｄｉ ｆ ｅｒ ｅ ｎｔｃｏｎｄｉ ｔｉ ｏｎｓｏｆａｅｒａｔ ｉ ｏｎ，ｓｕｃｒｏｓｅ ｓ ｕｐｐｌｙ ａ ｎ ｄ Ｃ０２ｅｎｒｉ ｃｈ－
ｐａ ｒ ｉ ｓｓ ｐｉ ｎ ｏｓ ａＬ【 Ｊ］ ． Ｐｌ ａｎｔ ｓ ，２００４， ３１（１） ： ３－ ４（ Ｉ ｎＣｈｉ ｎｅｓ ｅ）
ｍｅ ｎｔ ［ Ｊ］ ．Ｐｌ ｎ ｔＰｈｙｓ ａ ｉ ｏｌ ，ｌ ９９ｌ ， ｌ１ ２： ｌｌｌ －ｌｌ ７
［ ２１ ＬＥＶＩ ＺＯＮ Ｅ，ＤＲＩ ＬＬＡＳ Ｐ，ＫＹＰＡＲＩ ＳＳＩ ＳＡ．Ｅｘｃ ｅ ｐｔ ｉ ｏｎａｌｐｈｏｔ ｏｓ ｙｎ－
［ １ ２］ＬＩ ＡＮＧ ＹＡＮＲＯＮＧ，ＨＵＸＩ ＡＯＨＯＮＧ，ＺＨＡＮＧ ＹＩ ＮＬＩ ．Ｐｒ ｏｇ ｒ ｅｓ ｓｏｎ
ｔ ｈｅｔ ｉ ｃ ｐｅｒｆ ｏｒｍａｎｃｅ ｏｆＣａｐｐａｒｉ ｓｓ ｐｉ ｎｏｓａＬ ｕｎｄｅｒａｄｖｅｒｓｅｃｏｎｄｉ ｔｉ ｏｎｓｏｆ
ｐｈｙｓ ｉ ｏｌ ｏｇ ｉ ｃ ａｌｆ ｕｎｃ ｔ ｉ ｏ ｎｒ ｅ ｓ ｅ ｒｃｈｏｆｐｌ ａ ｎｔｐｅｒ ａ ｏｘｉ ｄａｓ ｅ［ Ｊ］ ＿Ｊ ｏｕｒ ｎａ ｌｏｆＩ ｎ·
Ｍｅｄｉ ｔ ｅ ｒ ｒ ｎｅａ ａ ｎｓ ｕ ｍｍｅｒ ［ Ｊ ］ ． Ｐｈｏ ｔ ｏｓ ｙｎ ｔ ｈｅ ｔ ｉ ｃ ａ， ２００ ４， ４２（ ２）： ２２９— ２３５
ｎｅｒＭｏｎｇｏｌ ｉ ａＡｇｒ ｉ ｃ ｕｌ ｔ ｕｒ ａ ｌＵｎｉ ｖｅｒ ｓｉ ｙ， ｔ ２００３ ， ２４（ ２） ： １１ ０－ｌ１ ３（ ｎＣｈｉ ｉ ｎｅｓ ｅ）
［ ３］ ＫＨＡＮＡＦＡＲ ＭＡ，ＳＡＢＲＩＳＳ，ＺＡＲＧＡ ＭＨ．Ｔｈｅｃ ｈｅｍｉ ｃａ ｌｃ ｏｎｓ ｔ ｉ ｔ －
［ １ ３］崔凯荣， 戴若兰． 植物体 细胞 胚发生的分子生物学［ Ｍ］ ． 北京： 科 学出
ｕｅ ｎｔ ｓｏｆＣａ ｐｐａ ｒ ｉ ｓｓ ｐｉ ｎｏｓ ａｏｆＪ ｏｒ ｄ ａｎｉ ａｎｏｒ ｉｇｉ ｎ［ Ｊ ］ ． ＮａｔＰｒ ｏｄＲｅ ｓ ，２００３，
版 社 ．２０００： ４９－５３
１ ７（１） ： ９－ １ ４
ＣＵＩＫＡＩ ＲＯＮＧ，ＤＡ Ｉ ＲＵＯＬＡＮ．Ｔ ｈ ｅｍｏｌｅｃｕｌａ ｒ ｏｆｐｌ ｎ ｔｓｏｍａｔｉ ａ ｃｅｍ－
［ ４］ＡＬ－ ＳＡＩ Ｄ ＭＳ，ＡＢＤＥＬＳＡＴＴＡＲ ＥＡ，ＫＨＡＬＩ ＦＡ ＳＩ ，ｅ ｔａ１ ．Ｉ ｓ ｏｌ ａｔ ｉ ｏｎ ｎｄ ｉ ａ ｄｅｎｔｉ ｉｃａｔｉ ｆ ｏｎ ｏｆ ａ ｎ ａｎｔ ｉ－ ｉ ｎｆ ｌａｍｍ ａｔｏｒｙ ｐｒ ｉｎｃｉ ｐｌ ｅｆ ｒｏｍ Ｃａｐｐａｒｉ ｓ
ｓ ｐｌ ｎｏｓ ａ［ Ｊ ］ ． Ｐｈａ ｒ ｍａ ｚｉ ｅ，１９８ ８， ４３： ６ ４０－ ６４１ ［ ５］ＢＥＲＴＲＡＮＤ Ｍ，ＭＵＳＡ Ｏ．Ｇｌ ｕｃｏｓ ｉ ｎｏｌ ａｔ ｅ Ｃｏｍｐｏｓｉ ｔ ｉ ｏｎ ｏｆｙｏｕ ｎｇ ｓ ｈｏｏ ｔ ｓａ ｎｄｆ ｌｏｗｅｒｂｕｄｓｏｆｃ ａ ｐｅ ｓ （ ｒ Ｃａ ｐｐａ ｒ ｉ ｓｓ ｐｅｃ ｉ ｅｓ）ｇｒ ｏｗｉ ｎｇｗ ｉｌ ｄｉ ｎ Ｔｕｒ ｋｅ ｙ［ Ｊ ］ ． ＪＡｇｉ ｌｅＦｏｏｄＣｈｅ ｍ，２００２， ５０： ７３２３— ７３２５ ［ ６ ］Ｊ ＯＵＡＤ Ｈ，ＨＡＬＯＵＩＭ，ＲＨＩ ＯＵＡＮＩＨ，ｅ ｔａ１ ．Ｅｔ ｈｎｏｐｈａ ｒ ｍａｃ ｏｌ ｏｇ ｉ ｃ ａｌ ｓｕｒｖｅｙ ｏｆｍ ｅｄｉ ｃｉ ｎａｌｐｌａ ｎｔ ｓ ｕｓｅｄ ｏｒｔ ｈｅ ｔ ｒｅａｔ ｍｅｎｔ ｏｆｄｉ ａｂｅｔｅｓ， ｃａｒｄｉ ａｃ
ｎ ｄｒ ａ ｅ ｎａｌｄｉ ｓ ｅａ ｓ ｅ ｓｉ ｎｔ ｈｅｎｏｒ ｔｈｃ ｅｎｔ ｒ ｅｒ ｅｇｉ ｏｎｏｆＭｏｒ ｏｃｃ ｏ（ Ｆｅ ｚ· · Ｂｏｕｌ ｅ · ·
ｍａｎｅ）［ Ｊ ］ ． ＪＥｔ ｈｎｏ ｐｈａｒ ｍａ ｃ ｏｌ ，２０ ０１， ７ ７： １ ７５ －１ ８２ ［ ７］ＡＵ Ｍ，ＲＡＭＡＣＨＡＮＤＲＡＭ Ｒ，ＲＡＦ１ ＵＬＬＡＨ ＭＲＭ，ｅ ｔａ１．Ｐｒ ｅｖｅ ｎ－
ｂｒ ｙｏｇｅ ｎｅｓ ｉ ｓ ［ Ｍ］ ．Ｂｅｉ ｊ ｉ ｎｇ：Ｓｃｉ ｅｎ ｔ ｉ ｉｃＰｒ ｆ ｅｓ ｓ ， ２０００： ４９ － ５３ ［ １ ４］ＨＯＵ ＸＵＥＷＥＮ，ＧＵＯＹＯＮＧ． ｈ ｅｅｆｅ Ｔ ｃ ｔ ｓｏｆｃａ ｒｂｏｎｓ ｏｕｒ ｃｅ ｓｏ ｎｔ ｈｅ ｇｒ ｏｗｔ ｈａ ｎ ｄｒ ｅ ｓ ｐｉ ｒ ａ ｔ ｉ ｏｎｏｆｓ ｕｓ ｐｅｎｓ ｉ ｏｎＲｏｓ ｅｌ ｌ ｅｃ ｅｌ ｌ［ Ｊ ］ ＿Ｇｕｉ ｈａｉ ａ，１９９９， １ ９（２） ： １ ５０－ ｌ５３（Ｉ ｎＣｈｉ ｎｅｓ ｅ） ［ １ ５］ ＧＵＯ ＺＩ ＭＧＡＮＧ，ＤＵ Ｊ ＵＮ，ＬＩ Ｕ ＲＵＩ ＺＨＩ ．Ｋｉ ｎｅｔ ｉ ｃｉ ｎｖｅｓ ｔ ｉ ｇａ ｔ ｉ ｏｎｏｆ
Ｔａ ｘｕｓｃｅ ｌ ｌｇ ｒｏｗｔ ｈａ ｎｄｎｕｔ ｒ ｉ ｅ ｎｔｃｏｎｓ ｕ ｍｐ ｔ ｉ ｏｎ ［ Ｊ ］ ． Ｊ ｏｕｒ ｎａ ｌｏｆＴｓ ｉ ｎｇｈｕａ Ｕｎｉ ｖｅ ｒ ｓ ｉ ｙ （Ｓｃｉ ｔ ｅｎｃ ｅａ ｎ ｄＴｅｃ ｈｎｏｌ ｏｇ ｙ） ，２００２， ４２（ ５） ： ５９９－ ６０ ２（ ｎ Ｃｈｉ Ｉ － ｎｅ ｓ ｅ）
［１ ６］ＱＵＩ ＲＯＧＡ Ｍ ，ＧＵＥＲＲＥＲＯ Ｃ，ＢＯＴＥＬＬＡ ＭＡ， ｅｔａ１ ．Ａ ｔ ｏｍａ ｔ ｏｐｅ ｒ －
ｏｘｉ ｄａｓ ｅｉ ｎｖｏｌ ｖｅ ｄｉ ｎｔ ｈｅｓ ｙｎｔ ｈｅｓ ｉ ｓｏｆｌ ｉ ｇｎｉ ｎａ ｎｄ ｓ ｕｂｅ ｉｎ ［ ｆ Ｊ ］ ．Ｐｌ ｎｔ ａ Ｐｈｙｓｉ ｏｌ，２０００， ｌ１２：ｌｌｌ９－ｌ１２７