TOMA DE MUESTRA, TRATAMIENTO PREVIO Y CONSERVACIÓN. CONTROL DE CALIDAD
UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANALISIS CAMPUS: XALAPA JORGE EDUARDO NAZARIO BUSTOS COMPETENCIAS E INNOVACION TECNOLOGICAS PARA EL APRENDIZAJE
REQUISITOS DE LA TOMA DE MUESTRA Son muchos los factores que contribuyen a la variación de los valores reales en una prueba de laboratorio, las que no están en relación con el problema clínico por el cual fue solicitado. La presencia de estos factores analíticos y biológicos independientemente o en combinación son causas de estas variaciones en los resultados, mal llamados "errores de laboratorio". Se recomienda no cambiar de laboratorio cuando se solicita exámenes de repetición o de control, para evitar y disminuir, la variación en los resultados a causa del empleo de metodología, calibración y equipamiento distintos entre los Laboratorios. 1.-Sangre. La mayoría de las pruebas bioquímicas, hormonales, e inmunológicas requieren de suero para ser procesadas. Los pacientes deben tener: - Un ayuno mínimo de 3 horas para la mayoría de los exámenes. - Un ayuno de 12 horas para los exámenes de lípidos (Colesterol, Triglicéridos, Lipoproteínas, HDL-Colesterol y LDL-Colesterol). Los pacientes que deben realizarse perfiles lípidos se les recomiendan hacer su comida habitual. No deben ingerirse bebidas alcohólicas hasta 3 días antes, o abusar de comidas abundantes al día que anteceden a la toma de la muestra de sangre. La ingestión de diuréticos, antihipertensivos, corticoides e hipolipomiantes son las principales drogas que pueden interferir en los resultados. Un ayuno prolongado puede dar también resultados inesperados, como la disminución de la glucosa, las proteínas u otros parámetros químicos. La actividad muscular tiene efectos tanto transitorios como de larga duración sobre diversos parámetros de química sanguíneas. Las variaciones transitorias de las enzimas musculares observadas durante el ejercicio están relacionadas con la mayor actividad metabólica por motivos energéticos, y una vez interrumpido el ejercicio se recupera sus niveles normales. En igual forma, cuando se trata de determinar los niveles óptimos de acción farmacológica de una droga anti convulsionante, cardiotónica o del Litio, el tiempo para obtener la muestra y procesar la prueba está en relación con la ingestión de
la última dosis, pues los niveles sanguíneos son dependientes de la vida media de la droga en la sangre, metabolismo y absorción. Estos factores varían para cada droga. 2.-Orina. Se recomienda de preferencia obtener la primera muestra de la mañana para el análisis de la orina, porque no sólo tiene la concentración máxima de todos los constituyentes sino que también es la más estandarizada de todas las muestras del día. Adultos: En la víspera del examen deben de evitar usar medicamentos en los órganos genitales. Previa a la toma de muestras debe de higienizar los genitales externos con agua y un jabón neutro. En las mujeres el lavado es de adelante hacia atrás, y si es posible colocarse un tapón de algodón en la vagina, para evitar mezcla de la orina con la secreción vaginal. En los hombres el lavado se hace retraído el prepucio. La más apropiada es la muestra obtenida a la mitad de la micción. El paciente debe orinar en el inodoro la primera porción del chorro, y recoger unos 15ml. de orina de la porción intermedia del chorro en un recipiente plástico estéril descartable, de venta comercial para este propósito. Infante: El lavado se hace igual que en el adulto. Se coloca el colector y se espera que orine el infante. Las muestras de orina para cultivo deben ser enviadas al Laboratorio lo más pronto posible, o mantenerla en refrigeración a 4 grados centígrados no más de una hora. Las drogas de abuso pueden ser investigadas como metabolitos que se eliminan por la orina dentro de las 24 horas con respecto a la última vez que fue consumida por la persona. Muestra de Orina de 24 horas: Son a menudo necesarias para realizar alguna prueba de función renal, o para cuantificar calcio, creatinina. 1) El paciente debe de evacuar la vejiga y eliminar la orina. Anotar la hora y minuto de esta micción. 2) A partir de este momento recoger toda la orina emitida durante el día y guardarla en un frasco bien limpio, y mantenerla en refrigeración mientras dura la recolección. 3) Recoger la orina del día siguiente hasta la misma hora y minuto del día anterior. Juntarlo a la muestra de orina ya recogida.
4) Homogenizar la muestra, medir el volumen, y enviar al Laboratorio en un recipiente de tapa rosca. Junto a la identificación de las muestras de orina, se debe anotar el peso y la estatura del paciente. 5) Si se trata de una prueba de aclaramiento de creatinina, el paciente debe concurrir al Laboratorio para tomarle una muestra de sangre. 3.-Heces (COPROCULTIVO). Recolección de muestra para el análisis de rutina: Se recomienda al paciente no tomar laxantes para obtener la muestra, la presencia de estos fármacos pueden causar confusión al momento de realizar el análisis. Los pacientes deben de orinar previamente en el inodoro antes de evacuar. Deben de recoger las porciones más alteradas de las heces si las hubiere (sangre, moco, elementos sospechosos de larvas). El recipiente de transporte debe ser de vidrio o plástico de boca ancha bien limpio. La muestra no debe contaminarse con agua, polvo u orina; los dos primeros pueden tener parásitos de vida libre que pudieran confundirse con los protozoos que parasitan al hombre, y la orina puede destruir parásitos móviles o causar estallido de los huevos de los helmintos. 4.-Bacteriológicos. Los exámenes bacteriológicos son procesados en tres niveles de análisis: Microscopía directa en preparación húmeda y tinción (para diagnóstico presuntivo); cultivo para identificación y prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos. Recomendaciones generales: 1) La muestra debe ser tomada al inicio de la infección, en su fase aguda y antes de la administración del tratamiento con antibióticos o el uso de medicación tópica local. 2) De ser necesario podemos dar a los pacientes una información clara y detallada del éxito de la toma de una buena muestra para el aislamiento de la bacteria causante de la infección, y evitar los términos técnicos. 5.-Espermatograma
(Estudio
del
Semen).
Los pacientes deben de guardar una abstinencia sexual de 3 a 4 días previo al análisis como condición estándar para evaluar la capacidad testicular de producir espermatozoides. La obtención del esperma se lo hace en un recipiente de plástico perfectamente limpio, de boca ancha y buen cierre, por masturbación. No se recomienda el uso de los preservativos de látex, porque el mismo implica inmovilización de los espermatozoides casi de inmediato, o contienen sustancias que influirán en los resultados del examen. De preferencia el material debe de ser
obtenido en el domicilio, y entregado al Laboratorio en un tiempo no mayor de 60 minutos de obtenida la muestra.
TOMA DE MUESTRA SANGRE: A. Durante la punción sostener la unidad completa (porta tubos y aguja). B. Inserte la aguja en la vena e introduzca el tubo dentro del porta tubos. C. La sangre fluye dentro del tubo por sí sola, liberar Torniquete. D. Retirar el tubo E. Homogeneizar el tubo suavemente F. Insertar un segundo tubo si se utilizaran para múltiples muestras
TOMA DE MUESTRA ORINA: a) Varones: A. Realice aseo externo, retrayendo el prepucio, aseo del meato urinario y
área circundante con torundas humedecidas con jabón y agua, con movimientos dirigidos desde la zona distal a proximal. B. Enjuague con algodón humedecido con agua, seque con toalla de papel. C. Pedirle al paciente que orine en el riñón limpio unos 15-30 cc, luego que
retenga la orina y pasarle el frasco para recolectar directamente unos 100 cc de orina, el paciente debe terminar de orinar en la chata o W.C.
D. Tape el frasco inmediatamente y enviarlo al laboratorio.
b) Mujeres: A. Lávese las manos. B. Prepare al paciente explicando la técnica y objetivo. C. 6) Separe los labios mayores para exponer el meato urinario. D. 7) Limpie el área que rodea el meato con torundas humedecidas con agua y
jabón; considere que el periné debe ser limpiado desde adelante hacia atrás, pasando la torunda una sola vez y eliminarla. E. 8) Enjuague con torundas humedecidas con agua en el mismo sentido
anterior. Seque con toalla de papel. F. 9) Mantenga los labios separados y pedirle a paciente que elimine el primer
chorro de orina en la chata. G. 10) Recolecte el segundo chorro directamente en el frasco, impidiendo que
los genitales toquen sus paredes. H. 11) Tape el frasco y envíe al laboratorio.
TOMA DE MUESTRA HECES (COPROCULTIVO).
1) Infórmele al paciente 2) Lávese las manos. Lleve el material. 3) Colóquese los guantes. 4) Pídale al paciente que se coloque en posición decúbito lateral. 5) Separe los glúteos del paciente e introduzca suavemente y en forma rotatoria el hisopo con algodón, en el ano. 6) Al obtener la muestra, introduzca el hisopo suavemente, sin topar las paredes del tubo, hasta sumergirlo bajo el medio de transporte. 7) Tape el frasco sin contaminar.
TOMA DE MUESTRA BACTERIOLOGICOS MUESTRAS DE DESGARRO 1) Paciente en ayunas. 2) Se debe instar al paciente que tosa o provocar la tos con ejercicios respiratorios de inspiración y espiración profundos y percusión y vibración torácicas para permitir que las secreciones se suelten. 3) El paciente debe sonarse, aclarar la garganta y enjuagarse la boca. 4) Pedir al paciente que tosa y expectore en un frasco de boca ancha, limpio y seco; se debe echar desgarro y no saliva. El paciente debe enjuagarse la boca, registrar las características del desgarro, en hoja de enfermería. 5) Enviar el examen al laboratorio, en una orden especial. Con los datos del paciente y estipular si este está con tratamiento anti tuberculosis.
6) Se debe repetir el procedimiento en días consecutivos hasta completar tres muestras, enviándolas cada día al laboratorio.
TOMA DE MUESTRA BACTERIOLOGICOS MUESTRA DE SECRECIÓN FARINGEA 1) Lávese las manos y use guantes estériles 2) Se acomoda al paciente sentado. 3) Se le abre la boca ayudado por un baja-lenguas. 4) Se toma la muestra con un hisopo que se introduce en la faringe, tocando sus paredes con movimientos rotatorios suaves y rápidos, para evitar estimular el reflejo nauseoso. 5) Se coloca el hisopo con la precaución de no topar las paredes del frasco estéril.
BACTERIOLOGICOS MUESTRA DE SECRECION NASAL 1) Se acomoda al paciente sentado. 2) Se introduce en forma rotatoria el hisopo en la fosa nasal (presencia de moco)
3) Se realiza un extendido de la secreción en un porta-objeto y se deja secar al ambiente. 4) Se envía al laboratorio envuelto en papel rotulado.
TOMA DE MUESTRA ESPERMATOGRAMA A. El método de elección para la recogida es la masturbación, puesto que
permite que la muestra sea completa y sin contaminación. No deben aceptarse las muestras recogidas en preservativos ya que contienen sustancias espermicidas que alterarían el resultado. B. Es deseable que se recoja en una zona próxima al laboratorio, con el
recipiente precalentado a la temperatura corporal ya que el análisis debe realizarse en un plazo de 2 horas máxima después de eyacular. Si se recoge la muestra fuera del laboratorio esta debe llegar al mismo en un plazo máximo de una hora.
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Para que un material pueda ser utilizado en el laboratorio de análisis deberá ser preparado de manera apropiada, esto con el fin de que los resultados obtenidos sean representativos del total y puedan ser utilizados de manera confiable para la formulación del alimento o para la valoración del mismo, para lo cual se hacen las siguientes recomendaciones: a. La cantidad de material debe ser adecuada para realizar todos los análisis necesarios; debe ser una muestra homogénea y representativa. b. El manejo de la muestra debe ser cuidadoso para evitar cualquier cambio o contaminación. c. La muestra deberá molerse finamente, tamizarse y mezclarse homogéneamente. Esta operación debe hacerse rápidamente y con la mínima exposición al medio ambiente. Evite su sobrecalentamiento durante el molido, por lo cual materiales sensibles al calor deberán ser molidos a mano. Antes de usar el molino asegúrese de que está perfectamente limpio. d. Si la muestra contiene mucha humedad y la preparación del material no puede hacerse sin cambios significativos en ésta, determine la humedad antes y después de la preparación. e. Se recomienda un examen físico macro y microscópico para detectar la presencia de materiales contaminantes. f. Mezcle la muestra perfectamente y divídala en dos partes iguales. De ser necesario haga un molido preliminar para facilitar esta operación. Almacene una de las partes en un frasco hermético, limpio y seco; la otra parte será usada en los análisis y su tamaño deberá ser adecuado para la totalidad de las pruebas requeridas. g. Al menos que el método de análisis indique lo contrario, los materiales serán molidos de inmediato y pasados por una malla de 1 mm 2; mezcle perfectamente la muestra tamizada y almacénela en un recipiente
hermético. Antes de tomar material para cada análisis mézclese nuevamente. h. Al menos que se señale lo contrario, las muestras húmedas deberán secarse para su molido y tamizado, siguiendo las indicaciones del punto anterior. i. Las muestras líquidas y semilíquidas deberán conservarse en frascos tapados y mezclarse perfectamente antes de su análisis. j. Los materiales deberán conservarse en refrigeración o a temperaturas que eviten cambios en su composición. Muestras para análisis de vitaminas u otras substancias sensibles a la luz se colocarán en recipientes de vidrio color ámbar. ERRORES EN EL MUESTREO Por perdida de analitos Adsorción por las paredes del recipiente o superficie de las herramientas En procesos de secado, evaporación y mineralización Salpicaduras en el proceso de agitación y preparación de la muestra Variación en la composición química de la muestra
Pérdida o adsorción de agua Procesos de hidrólisis Procesos de oxidación Procesos de fermentación o microbiológicos Contaminación Debida al medio ambiente, a la operación de muestreo y a quien toma la muestra Tabla 1.-Niveles de elementos traza en el aire del laboratorio y en diversas sustancias AIRE COSMEAIRE HUMO SUDOR FILTRADO ION TICOS µg µg/g µg/g µg/g µg/g Al 3000 6.00 As 55 <0.01 2.85 Br 2 <0.02 71.50 0.4 Ca 2690 <0.04 60000 Cl 1.5 <0.005 630 1700 Fe 3250 <0.006 7.30 1100 1 K 7920 <0.004 250 300 Na 2950 134 2500 P 1150 1,50 1400 0.8 S 20000 <0.003 400 Pb 2150 <0.04 1400 0.8
Se 0.6 <0.02 0.22 Ti 258 3.00 6300 Zn 1640 <0.02 10 35000 1 Tabla 2.-Impurezas de elementos traza en el material del laboratorio POLIETIVIDRIO CUARZO TYGON TEFLON LENO ION µg/g ng/g µg/g ng/g ng/g Al 10000 80-3100 0.17 55 200Ca 1000 0.38 5 20000 Co 0.082 5 0.33 0.33-1.7 Cr 5 1.60 6 30 Cu 15-300 2.00 10 22 Fe 280 4 160 50 35 K 3000 600-2000 500 ND ND Mn 1000 2 Na 300000 10 ND 3000 Pb 200 200 Si 400000 2000 0.70 ND Zn 0.73 90 34 8 CONTROL DE CALIDAD Sangre Existen múltiples factores involucrados en el proceso de coagulación de la sangre. Los anticoagulantes son sustancias que previenen la formación de coágulos. Existen diferentes tipos de ellos sólidos y líquidos. Debe seleccionarse siempre el anticoagulante apropiado según el estudio a realizar. Los anticoagulantes más usados para toma de muestras son:
EDTA: Este tipo de anticoagulante es utilizado principalmente para estudios de células sanguíneas (Hemograma y Citometría de flujo) y estudios de Biología molecular (extracción de ADN y ARN y FISH).
CITRATO DE SODIO: En concentraciones al 3.8 % estudios de coagulación.
HEPARINA: Se utiliza tanto en algunos estudios de rutina como especializados. Su presentación puede incluir heparina con concentraciones de sodio o litio. En general, la heparina con litio es utilizada para estudios de química de urgencias y la heparina sódica se utiliza para estudios de linfocitos.
se utiliza en
OXALATOS: Son anticoagulantes menos comunes, ocasionalmente en las determinaciones de glucosa.
utilizados
FLUORURO DE SODIO: Anticoagulante que se utiliza para la determinación de Glucosa en sangre, cuando esta no puede ser procesada dentro del plazo prudente.
Los agentes de separación (gel) utilizados en tubos de suero mejoran el rendimiento del suero y permiten mantenerlos en los tubos primarios. Estos tubos deben mantenerse siempre verticales para favorecer el proceso de coagulación y deben mantenerse en esta posición aproximadamente 30 min antes de su centrifugación para favorecer la retracción del coágulo. •
Evitar el efecto de la luz, ésta afectará disminuyendo los valores de bilirrubina, vitamina C. porfirinas, creatincinasa (CK), y ácido fólico.
•
Reducir el contacto con el aire hasta donde sea posible. Si esto no se hace, los efectos de evaporación producirán un aumento en la concentración/actividad de todos los componentes no volátiles. Esto aplica particularmente para el caso cuando el volumen de la muestra es relativamente pequeño y el área de la superficie es relativamente grande, como en muestras pediátricas.
•
Evitar guardar sangre entera o total sin centrifugar
•
Evitar la glucólisis en muestras para determinar glucosa y lactato. La glucólisis puede ser evitada por la adición de un inhibidor específico (Fluoruro sódico) junto con un anticoagulante si la muestra no va ser procesada dentro de un plazo corto de tiempo.
•
El material infeccioso debe etiquetarse y manejarse con especial cuidado.
CONTROL DE CALIDAD ORINA • El contenedor debe tener unas exigencias mínimas de calidad, como pueden ser: que sea limpio, que evite derramamientos, y que el material sea desechable e inerte; libre de sustancias que puedan interferir con la muestra, como detergentes. Existen contenedores con dispositivos de transferencia a tubos mediante sistema de vacío que evitan riesgos de contaminación, derramamiento y exposición accidental del personal a contagios. Del mismo modo para muestras de Orina de 24 horas, los contenedores, aparte de reunir todas estas especificaciones previas, deben de reunir ciertas características especiales:
•
Material opaco para proteger de la luz a ciertos metabolitos que son fotosensibles, como las porfirinas.
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Poseer una graduación de volumen y capacidad para 3L, evitando el uso de dos contenedores.
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Dispositivo de transferencia mediante tubo de vacío para evitar que el personal sanitario entre en contacto con la muestra, transfiriéndola directamente al tubo de vacío.
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Una parte importante de la conservación de la muestra es el tiempo y las condiciones del transporte hasta el laboratorio. Este se debe realizar en el menor tiempo posible y aplicando la normativa vigente en Europa (normativa P650 de la ADR 2007).
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Se recomienda el transporte en sistemas herméticos y refrigerados con control de tiempo de transporte y por separado de las muestras de sangre.
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Para muestras no refrigeradas y sin conservante se recomienda su análisis antes de las 2 horas y para muestras refrigeras antes de 24 horas tras su recogida, ya que de lo contrario pueden generarse artefactos en la determinación de cristales y hematíes diamórficos.
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Para muestras de orina de 24 horas es necesaria la conservación refrigerada de la muestra durante el proceso de recogida y posterior transporte.
•
En general no se recomienda el uso de conservantes químicos para la determinación de parámetros bioquímicos en muestras de orina (sistemático, sedimento y orina de 24 horas).
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Para facilitar el transporte desde los puntos periféricos de extracción, en muestras de orina de 24 horas, se recomienda la transferencia de estas a un contenedor 2º, previa homogeneización de la muestra y siempre que se indique en este el volumen de diuresis (se recomienda código de colores para diferenciar estas muestras de las orinas de micción).
Las muestras se etiquetan con la siguiente información :
Numeración de la muestra
Descripción del material
Lugar de muestreo
Fecha y hora del muestreo
Muestreador y método de muestreo
Información adicional (pH, temperatura, etc.)
Esta información se registra en el laboratorio junto otra adicional:
Símbolo de la muestra
Naturaleza de la muestra
Análisis requeridos
Lugar y condiciones de conservación
Entidad que solicita los análisis
MUESTREO
Proceso de selección de una porción de material que represente o proporcione información sobre el sistema en estudio (población). Concepto amplio :
Recogida de la muestra.
Conservación.
Reducción del tamaño de partícula.
Homogeneización.
Submuestreo.
Uno de los aspectos más importantes para obtener resultados de calidad en un análisis es disponer de una muestra que represente el lote que se va a analizar.
Es fundamental conocer e identificar los errores que se pueden cometer en el proceso y durante la manipulación de la muestra hasta que llega al laboratorio.
La mayoría de las técnicas analíticas requieren disponer de la muestra en disolución, por lo que abordaremos los tratamientos químicos más importantes y los posibles errores que se puedan cometer para obtener una disolución que represente a la muestra. (tratamiento de la muestra).
ETAPAS DEL MUESTREO
TOMA DE MUESTRA : Proceso de obtención de muestras