ATLAS DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA II
Sarah Guajan Orellana Annelise Sandoval Pineda
UNIVERSIDAD SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA MICROBIOLOGÍA II DRA. JACQUELINE ESCOBAR DRA. ANDREA PÉREZ DRA. ANDREA MUÑOZ AUX. KIMBERLY PÉREZ
SEGUNDA ENTREGA DE ATLAS DE MICROBIOLOGÍA
Sarah Guajan Orellana – carné 201322103 Annelise Sandoval Pineda – carné 201400383 31°octubre°2016
Indice Pág. Practica 10 Diagnóstico microbiológico de Lysteria monocitogenes…………………………1-3 Practica 11 Diagnóstico microbiológico de Salmonella………………………………………..4-6 Practica 12 Diagnóstico microbiológico de Escherichia coli O157:H7……………………… 7-9 Practica 13 Diagnóstico microbiológico de Campylobacter sp………..…………………….10-11 Práctica 14 Diagnóstico microbiológico de Staphylococcus aureus.……………………….12-13 Bibliografía…………………………….……………………………………………. 14
1
PRACTICA 10
Diagnóstico microbiológico de Lysteria monocitogenes Descripción del microorganismo ➢ Gram + ➢ Agrupado en cadenas cortas ➢ No capsula ni esporas ➢ Anerobio facultativo ➢ Móvil por flagelos peritricos únicamente a 250C ➢ Tolera NaCl, PH 4-9.6, nitritos ➢ Fermenta carbohidratos
Especies importantes Listeria monocitogenes (patógena para animales y hobre) Listeria monocitogenes ivanovvi (patógena para animales)
Enfermedades
Muestras para diagnóstico
Características
Enfermedad ocupacional.
Líquido cefalorraquídeo.
L. monocitogenes beta hemolisis.
Enfermedad de transmisión alimentaria Listeriosis
Sangre.
Intracelular facultativa.
Septicemia. Abortos.
Placenta. Fetos abortados. Alimento.
Factores de virulencia: Listeriolisina O Fosfatidil inositol y colina Proteína A Internalinas A,B,C,J
Marcha bacteriológica Medio de cultivos utilizados Muestra: 25 gramos de salami Medio FRASER Para el enriquecimiento selectivo y enumeración de Listeria monocytogenes. Peptona y extracto de carne de vaca proporciona nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. Extracto de levadura es la fuente de vitaminas. Fosfatos de potasio actúan como un sistema tampón. La suma de citrato de amonio férrico mejora el crecimiento de Listeria monocytogenes. Interpretación: Listeria hidroliza la esculina, que reacciona con iones férricos produciendo un ennegrecimiento del medio.
2
Medio ALOA este medio utiliza el cromógeno X-glucósidico para la identificación de Listeria spp. El cromógeno es desdoblado a B-glucosidasa la cual es común en Listeria.suplementos que contiene el medio: cloruro de litio, polimixina B, ácido Nalidixidico y anfotericina B inhibe hongos y levaduras. Incorpora fosfatidilinositol para que el PIPLC producido por la bacteria pueda ser detectado. (PIPLC factores de virulencia). Interpretación: colonias azul- verdoso con formación de halo opaco alrededor.
Agar sangre diseñado para facilitar el crecimiento de microorganismos exigentes, bacterias Grampositivas. Contiene una mezcla de peptonas particularmente adaptada al cultivo de microorganismos exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite la determinación de la hemólisis, criterio básico en la orientación hacia la identificación bacteriana. Interpretación: colonias pequeñas, bacilos cocoides, lisas, brillantes, B hemolisis.
Colorantes Tinción de Gram Permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), según se comporten ante esta tinción. La diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram - tienen una capa de peptidoglicano más fina y una capa lipopolisacarídica externa. Tras la tinción con el primer colorante (Cristal violeta) se efectúa un lavado con etanol que arrastrará al colorante sólo en las Gram (-), mientras que en las Gram (+) el colorante queda retenido y las células permanecerán azules. Las células Gram (-) se teñirán después con un colorante de contraste (safranina) para que puedan observarse. Interpretación: agrupados en cadenas. Gram +.
3
Pruebas bioquímicas Caldo base rojo fenol La
fermentación es un proceso metabólico de óxidoreducción que ocurre en un medio ambiente anaerobio y en lugar de oxígeno, un sustrato orgánico sirve como el aceptor final de hidrogeno. En los sistemas de prueba bacteriológicos, este proceso se detecta observando cambios de color en indicadores pH a medida que se forman productos ácidos. La fermentación de los carbohidratos se manifiesta por cambio de color del indicador rojo de fenol que vira de rojo a amarillo.
CBRF+ Ramnosa Se utiliza para identificación bioquímica basándose en la capacidad de fermentar la ramnosa.
Interpretación: positivo. el medio se observa de color amarillo lo que indica que hubo fermentación del carbohidrato.
CBRF+ Xilosa
Se utiliza con el propósito de determinar si la bacteria puede fermentar la xilosa en específico.
Interpretación: negativo, el medio se observa de
color rojo lo que indica que no hubo fermentación de xilosa.
4
PRACTICA 11
Diagnóstico microbiológico de Salmonella Descripción del microorganismo ➢ ➢ ➢ ➢ ➢ ➢
Bastones Gram Móviles por flagelos distribuidos en forma peritrica Anaerobios facultativos No formas esporas. Son saprofitas del tracto intestinal del humano como el animal.
Especies importantes S. typhimurium S. typhi CON AFINIDAD S. taratyphi A POR HOMBRE S. taratyphi C S.atbortusovis CON AFINIDAD S. abortusequi POR ANIMAL S. gallinarum
Enfermedades Diarreas, dolores abdominales, vómitos y náuseas.
Muestras para diagnóstico Sangre durante pico febril.
Orina y heces. Fiebre entérica septicemia y finalmente gastroenteritis. En algunas ocasiones alimentos de distintos orígenes y agua. Septicemia, enteritis aguda, subaguda y crónica, también produce abortos. S. gallinarum causante de Tifus aviar
S. bongori
Diarreas, dolores abdominales, vómitos y náuseas.
S. enteritidis
Fiebre entérica.
5
Marcha bacteriológica Medio de cultivos utilizados Muestra: 25 gramos de carne
Caldo MKTTn
(base de caldo de
tetrationato BD). Después de ser suplementado con solución de yodo, es un medio de enriquecimiento selectivo para las especies de Salmonella a partir de muestras fecales humanas y diversos alimentos. El medio completado también se conoce como caldo tetrationato (caldo TT). La peptona de proteosa proporciona nitrógeno, carbono, vitaminas y aminoácidos. Se logra selectividad mediante la combinación de tiosulfato sódico y tetrationato, que suprime los organismos intestinales comensales. (El tetrationato se forma en el medio al añadirse yodo y yoduro potásico incluidos en la solución de yodo) Los organismos con la enzima tetrationato reductasa proliferan en el medio. Las sales biliares, como agente selectivo, suprimen las bacterias coliformes e inhiben los organismos gram positivos. El carbonato de calcio neutraliza y absorbe los metabolitos tóxicos, además de suministrar un valor de pH estable.
Interpretación: se observa turbio el medio indicando crecimiento de la bacteria.
Medios diferenciales Agar XLT4
El agar Xylosa Lactosa Tergitol 4 (XLT-4) y está especialmente preparado par aislar e identificar la Salmonella. La Salmonella queda perfectamente identificada, ya que debido a cambios bioquímicos y de pH en el medio, quedan diferenciados otros organismos como Escherichia coli y Shigella.
Interpretación: borde liso, convexas, color amarillo
con punto central negro, tamaño pequeño. Colonias de Salmonella rosas o rojas (no fermentan la lactosa, pero descarboxila la lisina, suben el pH) con punto central negro (por producción de H2S).
Agar Rambach
Es un medio selectivo (el desoxicolato: inhibe a las Gram positivas) y
6
diferencial para identificar a Salmonella. Aunque permite el crecimiento de enterobacteriaceas. El medio detecta actividad β-galactosidasa (de enterobacterias), por lo que las colonias toman un color dependiendo de la presencia de la βgalactosidasa.
Interpretación: Evidencia a las salmonelas por su capacidad de metabolizar el propilenglicol, por este medio sus colonias aparecen de color rojo brillante, tamaño mediado, borde rugoso.
Pruebas bioquímicas TSI (tres azucares –hierro)
Prueba usada para la fermentación de la glucosa, lactosa y sacarosa y la producción de H2S por parte de la bacteria sumándole producción de gas. Interpretación: El cambio de color rojo anaranjado (Color inicial del medio) a amarillo indica fermentación. Si se fermenta únicamente la glucosa el cambio de color del medio ocurre solamente en el fondo debido a que se encuentra 10 veces menos concentrada que la sacarosa y la lactosa, además los radicales libres no son suficientes para hacer virar el medio. Si se fermentan los 3 azucares hay cambio de color tanto en la superficie como en el fondo. La presencia de burbujas que rompen el medio y a veces tienden a expulsarlo indica presencia de gas como producto final de la fermentación. La producción de H2S se manifiesta por la aparición de un precipitado color negro debido a la reducción de la sal de hierro presente en el medio.
Interpretación: No es capaz de fermentar la lactosa por lo que no hay producción de ácido y no se produce el viraje de coloración. Sacarosa y glucosa si se fermentan. Producción de H2S positiva se observa coloración negra.
7
Practica 12
Diagnóstico microbiológico de Escherichia coli O157:H7 Descripción del microorganismo ➢ ➢ ➢ ➢ ➢ ➢
Bacilos rectos Gram Agrupación aislada o en pares Cápsula Con pilis o flagelos Son saprofitas del tracto intestinal del humano como el animal.
Tipos
Enfermedades
Muestras para diagnóstico
Enteropatogénica (EDEC)
Diarreas líquida blanco amarillenta
Hisopado rectal
Enteroinvasiva (EIEC)
Dolores abdominales
Heces
Enteroagregativas (EAEC)
Vómitos
Abscesos
Verotoxigénicas (VTEC) - Subtipo: Enterohemorragica (EHEC)
Adelgazamiento
Riñones
Pérdida de peso
Hígado Bazo
Marcha bacteriológica Medios de cultivos utilizados Muestra: 25 gramos de carne molida
Caldo m-TSB Caldo soja tripticaseína modificado con novobiocina. Este caldo contiene peptonas de caseína y soja que proveerán de minerales, vitaminas, aminoácidos esenciales y nitrógeno que favorecen al crecimiento de Escherichia coli O157:H7
8
Agar CT-SMAC Está compuesto por una recopilación de gelatina pancreática, sorbitol, cloruro de sodio, proteasa peptona, mezcla de sales biliares, rojo neutro, telurito de potasio, cristal violeta, cefixima (antibiótico perteneciente a las cefalosporinas) y agar. En este agar el sorbitol, la cefixima y el telurito son capaces de inhibir a la mayoría de cepas de E. coli no verotoxigenicas y la mayoría de especies que no pueden fermentar sorbitol.
Interpretación: colonias pequeñas, incoloras, borde enteros y opacas.
Agar Fluorocult La detección de las enzimas bacterianas ofrecen la posibilidad de una rápida identificación de las bacterias. E. coli es la única especie perteneciente a las Enterobactericeae que contiene la enzima β-Dglucorinidasa. La bilis y verde brillante inhiben completamente el crecimiento de flora microbiana no deseada, como bacterias gram positivas.
Interpretación: presenta fluorescencia positiva bajo luz UV.
9
Pruebas bioquímicas
CBRF + SORBITOL Se utiliza para identificación bioquímica basándose en la capacidad de fermentar el sorbitol.
Interpretación: negativo. El medio se observa de color rojo que indica que no hubo fermentación del carbohidrato.
10
Practica 13
Diagnóstico microbiológico de Campylobacter sp Descripción del microorganismo ➢ ➢ ➢ ➢ ➢ ➢
Bacilos curvos o espiralados Gram Móviles por flagelos Microaerófila Sensible al ácido halidíxico Habitan en tubo digestivo, principalmente de aves.
Especies importantes
Enfermedades
Factores de riesgo Consumo de carne de pollo
Campylopacter fetus
Contaminación cruzada Gastroenteritis bacteriana en alimentos
Campylobacter jejuni
Alimentos cocidos inadecuadamente Se encuentran también en leche y vegetales
Marcha bacteriológica Medios de cultivos utilizados Muestra: 10 gramos de carne de pollo
Agua Peptonada
Utilizada como enriquecimiento y diluyente para bacterias a partir de alimentos y otros materiales de interés sanitario. Es utilizado como medio base para la fermentación de hidratos de carbono. Recomendado para ser utilizado para recuperar células de enterobacterias dañadas por procesos fisicoquímicos a los que el alimento ha sido sometido.
11
Agar Sangre
Diseñado para facilitar el crecimiento de microorganismos exigentes, bacterias Gram-positivas. Contiene una mezcla de peptonas particularmente adaptada al cultivo de microorganismos exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite la determinación de la hemólisis, criterio básico en la orientación hacia la identificación bacteriana.
Interpretación: colonias pequeñas, redondas, blanquecinas o grisáceas y prominentes, crecimiento mucoide.
Colorantes Coloración gram con fucsina carbólica Se realiza utilizando fucsina carbólica como colorante de contraste. Permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), según se comporten ante esta tinción. La diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram - tienen una capa de peptidoglicano más fina y una capa lipopolisacarídica externa. Tras la tinción con el primer colorante (Cristal violeta) se efectúa un lavado con etanol que arrastrará al colorante sólo en las Gram (-), mientras que en las Gram (+) el colorante queda retenido y las células permanecerán azules. Las células Gram (-) se teñirán después con un colorante de contraste (fuscina carbólica) para que puedan observarse.
Interpretación: Con la coloración de Gram se observan bacilos curveados, Gram negativo con forma de coma, w, S, o de gaviota.
12
Práctica 14
Diagnóstico microbiológico de Staphylococcus aureus Descripción del microorganismo ➢ ➢ ➢ ➢ ➢ ➢
Cocos Gram + Agrupación en racimos Anaerobio facultativo Puede producir hemólisis alfa Inmóvil
Especies importantes
Enfermedades
Alimentos de riesgo Productos lácteos
Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis
Ensaladas con huevo Intoxicación digestiva
Pollo Pastas Rellenos con crema
Marcha bacteriológica Medios de cultivos utilizados Muestra: 10 gramos de queso fresco
Agua Peptonada Utilizada como enriquecimiento y diluyente para bacterias a partir de alimentos y otros materiales de interés sanitario. Es utilizado como medio base para la fermentación de hidratos de carbono. Recomendado para ser utilizado para recuperar células de enterobacterias dañadas por procesos fisicoquímicos a los que el alimento ha sido sometido.
13
Agar Baird Parker Sirve para aislar Staphylococcus de los alimentos. Contiene las fuentes de carbono y nitrógeno necesarias para el crecimiento. La glicna, el cloruro de litio y el telurito potásico actúan como agentes selectivos. La yema de huevo constituye el sustrato para determinar la presencia del halo claro. Reducen el telurito de potasio a teluro que produce colonias negras.
Interpretación: colonias negras, brillantes, bordes incoloros y convexas rodeadas de un halo claro.
Pruebas bioquímicas
Plasma citratado Tiene una enzima que estimula la conversión del fibrinógenos en fibrina, comprueba la facultad de un MO de coagular el plasma por acción de esta enzima.
Interpretación: postivo. La bacteria si posee coagulasa de unicón que se une al fibrinógeno activando la fibrina.
Catalasa Enzima catalasa, desdobla el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno, esto se demuestra por medio del desprendimiento de burbujas o efervescencia.
Interpretación: Positivo.
14
Bibliografías Blowey, R., & Weaver, D. (2000). Atlas a color de enfermedades y trastornos del ganado vacuno (2da ed.). España: ELSEIVER. Causas de Listeriosis. (15 de julio de 2015). (Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades) Recuperado el 22 de octubre de 2016, de http://www.cdc.gov/spanish/listeria/causes.html Enfermedades causadas por E. coli. (10 de diciembre de 2006). (Centro Nacional de Enfermedades Zoonóticas, Entéricas y Transmitidas por Vectores) Recuperado el 22 de octubre de 2016, de http://www.cdc.gov/ecoli/es/ qa_ecoli_sickness.htm Estrada, D. (08 de Julio de 2016). Biomerieux. Recuperado el 22 de octubre de 2016, de http://www.biomerieux.es/servlet/srt/bio/spain/dynPage? open=SPN_CLN_PRD&doc=SPN_CLN_PRD_G_PRD_CLN_93&pubparam s.sform=5&lang=es Figueroa, M., Vargas, L., & Moya, F. (1995). Enfermedades infecciosas de animales domesticos en CentroAmerica. Costa Rica: Univerisdad estatal a distancia. Guillen, P. (2005). Microbiologia clinica. Buenos Aires: Medica Panamericana. Lira, L., & Gonzales , R. (2003). Atlas de pruebas bioquimicas para identificar bacterias. Mexico: Universidad auntonoma de Mexico. Obtenido de https:// microbitos.files.wordpress.com/2010/06/atlasmicrobiologia1.pdf Merck manual. (2016). Recuperado el 22 de octubre de 2016, de http:// www.merckvetmanual.com/mvm/index.html
Quevedo, D., & Arango, J. (20 de enero de 2015). Galeon. Recuperado el 22 de octubre de 2016, de http://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm Prieto, J., Gómez, M., & García Rodríguez, J. (1996). Género Staphylococcus. Microbiología Médica. (Doyma, Ed.) Salazar, J. (2007). Pruebas Bioquímicas para Identificación de Staphylococcus. Recuperado el 22 de octubre de 2016, de https://docs.google.com/ presentation/d/1ciARFfqDLKqtyOSEtsUhX5T1uSqs3wx6iaw53wxeXXE/ edit#slide=id.i7