Portafolio de Evidencias "Micología" Lucia y Maily by lucia luzardo

GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formación Versión: 004 Código: UC-BAC-MCL-GL001 Guía de Laboratorio: Tema: • •

MICOLOGIA Fecha: Enero 2020

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01 NORMAS DE BIOSEGURIDAD Y MANEJO DE RESIDUOS Objetivo

Conocer y aplicar las normas generales básicas de bioseguridad y el cuidado en el laboratorio de micología Conocer los principios básicos del sistema de gestión integral del manejo de residuos y similares. Fundamento

BIOSEGURIDAD: es una disciplina encargada de prevenir accidentes biológicos, para ello se vale de un conjunto de medidas y controles destinados a disminuir el riesgo de exposición a agentes infecciosos o patógenos en clínicas, hospitales, industrias, etc. “Conjunto de medidas preventivas destinadas a mantener el control de factores de riesgo laborales procedentes de agentes biológicos, físicos o químicos, logrando la prevención de impactos nocivos, asegurando que el desarrollo o producto final de dichos procedimientos no atente contra la salud y seguridad de trabajadores de la salud, pacientes, visitantes y el medio ambiente.” Conductas básicas de Bioseguridad. Ministerio de salud. SISTEMA DE GESTION INTEGRAL DE MANEJO DE RESUDUOS HOSPITALARIOS Y SIMILARES: Consiste en la planeación e implementación articulada de todas las actividades realizadas en el interior de la entidad generadora de residuos hospitalarios y similares. NORMAS GENERALES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO: 1. Ingrese siempre al laboratorio con bata manga larga abotonada y limpia, colóquese tapabocas, cofia y guantes. 2. Utilice siempre zapato cerrado, se prohíbe la entrada al laboratorio en falda o pantalones cortos. 3. Se usara gafas protectoras y mascaras faciales si existe riesgo de salpicaduras y/o aerosoles 4. Cada estudiante debe contar con su equipo básico de trabajo, el cual incluirá: laminas, laminillas, jabón de manos, toallas absorbentes, lápiz marcador, toalla para limpieza de mesón. 5. Mantenga el cabello recogido bajo la cofia. 6. No consuma alimentos, no fume, no se aplique maquillaje en el laboratorio. 7. Evite que su piel o mucosas entren en contacto con muestras o utensilios contaminados de material potencialmente infeccioso. 8. No toque nada que haya sido descartado en los recipientes con desinfectante. 9. No toque la manija de la puerta, teléfonos, libros, etc. con los guantes sucios, debe desecharlos antes de salir del laboratorio 10. Está prohibido pipetear con la boca, para ello emplee los dispositivos indicados. 11. Para el transporte de muestras dentro y entre laboratorios utilice cajas herméticas o neveras transportables, así en caso de caída no se produzcan salpicaduras. 12. Si le ocurre algún accidente, avise inmediatamente a su profesor. 13. Lave sus manos con agua y jabón al terminar la práctica y quítese la bata antes de salir del laboratorio. DESCARTE DE MATERIAL DE TRABAJO: 1. Para descartar las preparaciones en fresco, se deben tener un recipiente con solución desinfectante de hipoclorito de sodio para descarte de láminas y laminillas, las pipetas Pasteur en Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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caso de que estas se hayan utilizado con muestras de material fecal se descartan en la bolsa roja previa desinfección. 2. Las muestras de materia fecal deben ser descartadas, tapadas y en bolsa para material biológico contaminado (ROJA). 3. Los palillos se descartan en los correspondientes guardines destinados para este fin. 4. Encima del mesón de trabajo no deben quedar ningún tipo de material de de desecho estos deben ser ubicados en su correspondiente recipiente, de acuerdo a la norma. Cuidado del Laboratorio: • Al terminar la práctica deje limpio el microscopio, cierre el diafragma, baje el condensador, enfoque con el objetivo de menor aumento y cubra el microscopio. • Recuerde que usted debe responder por el microscopio que le asignen. USO DEL MICROSCOPIO Verifique que su microscopio está limpio y en buenas condiciones. Coloque su preparación y enfoque con el objetivo de menor aumento, con el diafragma cerrado y el condensador abajo, visualice y vaya pasando a objetivos de mayor aumento a medida que va abriendo el diafragma y va subiendo el condensador. Comience a observar objetos traslúcidos. Para observar preparaciones en fresco, de un vistazo general a toda la preparación con objetivo de 10X, empezando en un extremo de la laminilla y avanzando en zig-zag. Luego pase a objetivo de 40X y observe la morfología de las estructuras. El objetivo de inmersión (100X) sólo se usa para preparaciones coloreadas y secas, agregando aceite. Tenga cuidado de no mojar la plataforma del microscopio, si llega a ocurrir, seque inmediatamente con papel absorbente. Limpie los objetivos en el papel especial para ello. Al terminar la práctica deje limpio el microscopio, cierre el diafragma, baje el condensador, enfoque con el objetivo de menor aumento y cubra el microscopio. Recuerde llenar la hoja de vida del microscopio con el cual trabajo. Consulta 1. En que consiste y los puntos que trata el decreto 351 del 19 de febrero del 2014, por el cual se reglamenta la gestión integral de residuos generados en la atención en salud y otras actividades. 2. Mencione 7 enfermedades fúngicas que se puedan adquirir en el laboratorio y su vía de entrada. Bibliografía Arenas R. Micología médica ilustrada. Editorial Mc Graw Hill. Cuarta edición. Ciudad de México D.F., México. 2011. 417 pg. Bonifaz Alexandro. Micología médica básica. Editorial Mc Graw Hill. Tercera edición. Ciudad de México D.F.2010 Koneman et al. Diagnóstico microbiológico Texto y atlas en color. 6° edición. Editorial Panamericana. Buenos Aires Ministerio de salud y protección social de Colombia.Decreto 351 del 19 de febrero del 2014.

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1. En que consiste y los puntos que trata el decreto 351 del 19 de febrero del 2014, por el cual se reglamenta la gestión integral de residuos generados en la atención en salud y otras actividades

Tiene por objeto el reglamento ambiental y sanitario de la gestión integral de los residuos generados, se aplica en los servicios de atención en salud, banco de sangre, tejidos y semen, centros de docencia e investigación con organismos vivos o cadáveres, bioterios y laboratorios de biotecnología servicios de tanatopraxia o de lavado de ropa hospitalaria, platas de beneficio animal, servicios de veterinaria, se encarga de clasificar a los residuos en no peligrosos, residuos o desechos peligrosos con riesgo biológico o infeccioso, que a su vez se subclasifican en biosanitarios, anatomopatológicos, cortopunzantes, animales, también describe los desechos radioactivos, y aquellos que puedan presentar la característica de corrosividad, explosividad, reactividad o toxicidad, que obliga a los generadores y transportadores de los residuos a implementar una gestión, vigilancia y control de estos desechos, capacitar al personal encargado, dar cumplimiento a la normativa de seguridad y salud en el trabajo, contar con un plan de contingencia, tomar medidas preventivas y disponer de la eliminación de estos residuos según la ley vigente, tomando en cuenta nunca quemar a campo libre los desechos, transportarlos en transporte público, ya que en dado de incumplimiento con este decreto se establecerán sanciones.1 2. Siete enfermedades fúngicas que se pueden contraer en el laboratorio por mal manejo y toma de las muestras.

Cuadro 1: Enfermedades fúngicas que se pueden contraer en el laboratorio.2 Riesgo de contraerla en el

Enfermedad Fúngica

Agente causal

Mucormicosis: Es una infección

Rhizopus, Rhizomucor , Mucor

Laboratorio Las mucormicosis son de rápida

micótica (hongos) de los senos

evolución

paranasales, el cerebro o los

agresivo y pueden contraerse en el

pulmones

laboratorio por mala manipulación.

Zigomicosis: fúngicas

son

graves

infecciones e

Hongos Zigomicetos

Las

inusuales,

con

un curso clínico

zigomicosis

infecciones

causadas por hongos ubicuos

puede

pertenecientes a la clase

inhalación.

graves

surgir

ser contagio

través

Zigomicetos. Candidiasis:

Infección

fúngica

Candida

Al realizar el raspado de la zona

ocasionada por el hongo Cándida

afectada para tomar la muestra se

que se presenta generalmente en

pueden traer escamas del hongo y

la piel o las membranas mucosas.

utilizar

las

normas

bioseguridad correctamente corre riesgo de contagiarse. Criptococosis: es una micosis

Cryptococcus

sistémica,

Cryptococcus gattii.

generalmente

neoformans,

Al respirar el hongo entra por la vía

respiratoria

llega

los

pulmones, donde puede generar la

oportunista.

infección o diseminarse, siempre y cuando el sistema inmune no esté en condiciones adecuadas. Blastomicosis: Es una infección

Blastomyces dermatitidis

Esta

enfermedad

contraer

hongo Blastomyces dermatitidis.

momento de una mala manipulación

El hongo se encuentra en la

de la muestra (inhalación), las

madera en descomposición y el

blastomicosis mas comunes son las

suelo.

orales.

enfermedad

una

producida

Infección

provocada

hongo Coccidioides.

por

puede

causada por la inhalación del

Coccidioidomicosis:

laboratorio

Las personas pueden contraer la coccidioidomicosis mediante la

personas y animales por hongos

inhalación (aerosol) de esporas en

dimórficos

polvo o suelo contaminado.

del

género

Coccidioides. Aspergilosis: es una reacción

Aspergillus

Puede entrar a los pulmones a

alérgica al hongo. Esta infección

través de la inhalación por mala

generalmente se desarrolla en

manipulación de la muestra.

personas

que

tuvieron

problemas pulmonares, como asma o fibrosis quística.

REFERENCIAS

Función pública. Gestor administrativo. Diario official. (internet). (citado el 20

de agosto de 2020).publicado en: https://www.funcionpublica.gov.co/eva/gestornormativo/norma.php?i=56755 2.

Bonifaz Trujillo A. Micologia ́ mé dica bá sica (5a. ed.). Distrito Federal:

McGraw-Hill Interamericana; 2015

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02 CONTROL DE CALIDAD Objetivo Conocer las características de los programas de control de calidad aplicadas al área de la micología. Fundamento

1. Recogida y transporte de muestras: La selección de la muestra clínica apropiada de acuerdo a la sospecha diagnosticas es un punto muy importante a la hora de evaluar la calidad del diagnóstico en micología. Criterios de rechazo de muestras en el laboratorio de micología: • • •

Muestras sin identificar. Transporte demorado Muestras repetidas.

2. Control de equipos de laboratorio: A los equipos de laboratorio se les debe realizar en control de calidad y el mantenimiento de cuerdo a cada uno de estos y en la frecuencia necesaria, con sus respectivos registros de evidencien dicho control. Los equipos de laboratorio más usados en el área de micología son: Refrigeradores. Congeladores, Estufas, Baño serológico, autoclaves, pHmetros, Centrifugas, Capana de seguridad. 3. Control de calidad de los medios : • Control de esterilidad • Etiqueta • Color • Grado de sequedad • Utilización de cepas control.

4. Tinciones y reactivos: • Etiqueta: Nombre, número de lote, fecha de caducidad, condiciones de almacenamiento Momento de apertura para su uso.

5. Pruebas bioquímicas: En los insertos de procedimientos de las pruebas bioquímicas, se describen los controles Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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que se deben utilizar y los resultados esperados. 6. Técnicas serológicas: Realizar los respectivos controles positivo y negativo. 7. Prueba s de sensibilidad antifungica: Se realiza su control de calidad mediante la utilización de cepas control. 8. Elaboración de registros: Se deben llevar registros tanto del control de calidad como de los resultados emitidos. 9. Control de Calidad externo: Es importante contar con un programa de control de calidad externo en el cual se cuente con un laboratorio de referencia que permita realizar una evaluación externa del funcionamiento del laboratorio en las diferentes etapas de procesamiento de la muestra Consulta 1. De acuerdo a los equipos d de uso común en micología (Refrigeradores. Congeladores, Estufas, Baño serológico, autoclaves, pHmetros, Centrifugas, Campana de seguridad) realice una tabla donde describa: el equipo, procedimiento de control de calidad y Periodicidad. Bibliografía Arenas R. Micología médica ilustrada. Editorial Mc Graw Hill. Cuarta edición. Ciudad de México D.F., México. 2011. 417 pg. Bonifaz Alexandro. Micología médica básica. Editorial Mc Graw Hill. Quinta edición. Ciudad de México D.F.2015 Koneman et al. Diagnóstico microbiológico Texto y atlas en color. 6° edición. Editorial Panamericana. Buenos Aires V. Ausina Ruiz, S. Moreno Guillén. Tratado SEIMC de enfermedades infecciosas y Microbiología clínica. Editorial médica Panamericana. Madrid, España. 2006. Arevalo Morales Maria del Pilar. Asoiación Española de Micología. Revista Iberoamericana de Micología. 2001. Control de Calidad.

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CONTROL DE CALIDAD

padlet.com/asbleka/hak81m605yre84mh

CONTROL DE CALIDAD EQUIPOS Hecho con un cálido abrazo ASBLEIDE KARINA 24 DE AGOSTO DE 2020 00:29

REFRIGERADOR 4°C GRUPO 1-Mariangel Barrientos Jose Alexander Lastra REFRIGERADORES DE CONSERVACIÓN : funcionan en el rango de 0 °C a 8°C. Permiten conservar en buenas condiciones diversos uidos y sustancias químicas por lo general en muy bajas temperaturas. Mientras más baja sea la temperatura, menor actividad química y biológica. PROCEDIMIENTO: Registro de temperatura PERIODO: Diario LIMITES DE TOLERANCIA: +/- 1°C PRECAUCIONES: 1-Limpieza mensual 2-Limpieza del condensador (Frecuencia: cada 6 meses) 3-Veri car el empaque de la puerta

Periodo: Diario Limites de tolerancia: +/1°C Precauciones: Limpieza mensual. Una Incubadora de laboratorio es un dispositivo utilizado para cultivar y mantener cultivos microbiológicos o cultivos celulares. La incubadora mantiene una temperatura y humedad optima garantizando también otras condiciones tales como el dióxido de carbono (CO2) y contenido de oxigeno presente en la incubadora.

pHmetro Grupo 4- Lucia Luzardo, Maily Paola Useche Acevedo

congelador -70°C Grupo 2: Danna Villamizar-Laura caceres Procedimiento: Registro de temperatura Periodo: Diario Límites de tolerancia: +/- 1°C Precauciones: Limpiar y descongelar cada 6 meses Los congeladores de laboratorio están previstos para almacenar de forma segura productos de laboratorio, muestras, materiales de prueba, productos químicos o reactivos químicos a temperaturas bajas

Incubadoras 35, 42 y 56°C Grupo # 3

pH metro Procedimiento: La calibración se realiza con al menos dos soluciones tampón estándar que abarcan el rango de valores de pH a medir. Para nes generales, son apropiados tampones a pH 4,00 y pH 10,00. El medidor de pH tiene un control de calibración para establecer la lectura del medidor igual al valor del primer amortiguador estándar y un segundo control que se usa para ajustar la lectura del medidor al valor del segundo amortiguador. Un tercer control permite ajustar la temperatura. Mediciones más precisas a veces requieren calibración a tres valores de pH diferentes. Período de calibración: para que las mediciones sean muy precisas se requiere que el medidor de pH se calibre antes de cada medición. Más típicamente, la calibración se realiza una vez al día de operación. Límites de Tolerancia: +/-0.1

Jeny Paola Laguado - Jeimy Estefanny Sayago Precauciones: Procedimiento: Registro de temperatura.

-Antes de cada medida se debe veri car que la membrana de

vidrio este limpia ya que si esta con grasa o agua se puede la medida de la solución. -Para evitar daños en el electrodo debe mantenerse húmedo, por lo tanto entre cada muestra debe ser enjuagado con agua destilada y si tiene exceso de agua debe colocarse en un papel ya que si se usa un trapo la persona puede recibir una descarga.

Micología Grupo #7 Isis Rozo - Brayan Peñaranda Procedimiento: Comprobar RPM (Revolución por minuto) Para realizar esta calibración se debe emplear un dispositivo capaz de medir la velocidad de giro de un eje, es decir, un tacómetro óptico. Periodo: Cada seis meses Limites de Tolerancia: No aplica

microscopio

Precauciones: Revisión general cada 12 meses 1. La carga debe ser equilibrada tratando de colocar los tubos de muestra repartidos de la forma más simétrica posible. 2. La tapa debe permanecer cerrada durante el funcionamiento de

Grupo #6 Angie Parada - Julian Ramirez Procedimiento: Limpieza. Periodo: Cada vez que se use.

la centrífuga. Nunca abra la tapa ni la mueva de lugar con el rotor en marcha.

Limite de tolerancia: No aplica. Precauciones: Revisión general cada 6 meses.

autoclave Grupo No. 5 : Nicolle Villa / Viviana Sanabria / Yerson Mota Se usa para esterilización. Procedimiento: Controles biológicos. Período: Diario Límites de tolerancia: No-crecimiento. Precauciones: Limpiar cada vez que se use.

centrifuga

cabina de seguridad biologica Grupo #8 Sara Pava- Daniela Parra EQUIPO: centrífuga PROCEDIMIENTO: comprobación de revoluciones por minuto PERIODO: cada seis meses LÍMITE DE TOLERANCIA: variable PRECAUCIONES: revisar técnica de mantenimiento cada 12 meses

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03 METODOS DIAGNOSTICO EN MICOLOGIA:

•

Objetivo Conocer cuáles son las técnicas, métodos, tinciones y fórmulas implementadas como apoyo diagnóstico de micosis.

•

Realizar la práctica de preparación de medio de cultivo de uso en micología (agar girasol)

Fundamento MÉTODOS DIAGNÓSTICOS EN MICOLOGÍA 1. Exámenes directos: En fresco y por coloración 2. Cultivos 3. Otras pruebas: Inmunológicas, Biología Molecular como la amplificación e hibridización de ácidos nucleicos, proteómica. 1. Examen microscópico de la muestras: •

KOH: Disuelve rápidamente las células permitiendo digerir material proteico, observando con mayor nitidez los elementos fúngicos, su efecto de clarificar puede incrementarse al calentar a la llama ligeramente la preparación. Adicionalmente, se puede emplear colorantes para pigmentar la pared de los hongos y mejorar la visualización. La observación de hifas, permite sugerir la presencia de invasión micótica.

•

Tintas chinaEs un método de contraste. Permite visualizar la cápsula de polisacárido de Cryptococcus neoformans, mediante la presencia de un halo claro y nítido alrededor de la levadura. Existen artefactos (hematíes, burbujas de aire, leucocitos, gotas de grasa y partículas de talco) que pueden interferir y confundir al analista.

•

Coloración Giemsa Es de utilidad para el diagnóstico de histoplasmosis y otras micosis. Permite visualizar blastoconidias intracelulares al polimorfonuclear, como la fase tisular del H. capsulatum.

•

Coloración Gram Es útil para observar blastoconidias y pseudomicelios de las especies del género Candida, Malassezia y Cryptococcus, las cuales son Gram positivas con variaciones en la intensidad de la coloración.

2. Cultivos: Permite contribuir a la identificación de las especies. Los medios de cultivos se pueden clasificar de diferentes formas. Aislamiento, Desarrollo, Estudios Morfológicos y de Identificación de Especies. Las características más importantes de los medios de cultivos en micología son: El pH debe ser ligeramente ácido, Contener glucosa y peptona que le aportan el carbono orgánico y el nitrógeno respectivamente así como también, la ENERGIA que requiere el Hongo para su metabolismo. Fosfatos (KH2PO4) mantienen el grado de acidez, el cual debe ser ligeramente ácido. Los Sulfatos (Mg SO4) aportan el Mg y el S04 Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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elementos esenciales para la formación del Citoplasma. Clasificación de los medios de cultivo: Atendiendo a su composición, los medios de cultivo pueden ser generales, enriquecidos, selectivos, diferenciales y especializados: Generales: El más característico y clásico es el agar glucosado de Sabouraud (AGS). Se utiliza como medio de cultivo general y fundamentalmente para la realizar la descripción de las características morfológicas de la mayoría de los hongos. Enriquecidos: Se utilizan especialmente en micosis sistémicas endémicas (histoplasmosis, blastomicosis), para la recuperación de la fase levaduriforme. Un ejemplo de estos medios es el agar cerebro-corazón con sangre (BHI). En el caso de micología agroindistrial se utilizan diferentes medios que permiten la producción de a semilla de hongos que en realidad es micelio puro aislado y crecido en un vehículo que en la mayoría de los casos de trigo, mijo, sorgo y otras varias. Selectivos: Son medios que favorecen el crecimiento de los microorganismos deseados impidiendo el de otros. Los componentes más utilizados como agentes selectivos son antibacterianos (cloranfenicol, gentamicina, penicilina, estreptomicina) y también inhibidores de hongos como la cicloheximida que es especialmente útil en las muestras cutáneas y respiratorias para el diagnóstico de micosis sistémicas endémicas. Diferenciales: Se utilizan para ayudar a la identificación del hongo basada en la apariencia de éste en dicho medio, merced a la adición de determinados componentes como por ejemplo sustancias cromógenas, ejemplo:cromoagar candida. DTM medio para dermatofitos Las características de composición de los medios de cultivo a seleccionar dependen del tipo de muestra y la sospecha clínica. 3. Otras pruebas: Inmunológicas, Biología Molecular como la amplificación e hibridización de ácidos nucleicos, La espectrometría de masas (EM) matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight(MALDI-TOF) se ha impuesto rápidamente en numerosos Servicios de Micología Clínica como un nuevo recurso tecnológico. Los datos disponibles muestran excelentes resultados respecto a la identificación de levaduras, mientras los resultados con hongos filamentosos son más irregulares.

Item 01

Tipo MAT

02 03 04 05

MAT MAT MAT MAT Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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Materiales Descripción • Uniforme completo: Bata, Gorro, Guantes, Tapabocas Probeta de 100 Erlenmeyer Estufa Licuadora Cajas de Petri Revisado por:

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MAT Fosforos MAT Asas MAT Probeta MAT Mechero MAT Guantes REA Agar- Agar REA Semillas de Girasol REA Creatinina REA Fosfato de Potasio Monobásico ( KH2PO4) REA Agua Destilada REA Bifenil REA Amicacina REA Cloranfenicol REA Etanol Procedimiento preparación de agar girasol

Licuar 50g de semillas de girasol en 500 ml de agua destilada, Cuando salen del autoclave se deja enfriar hasta que esté al calor de leche. en una probeta de 1000 ml con la ayuda de una gaza y completar a 1000 ml de agua destilada, hervir y filtrar con gasa. Esto se deposita en un matraz de 1000ml. Se le agrega los siguientes compuestos: KH2PO4 1 g, Creatina 1 g, Agar 15 g Se revuelve con un agitador y se pone a calentar hasta que hierva; mientras hierve se debe estar revolviendo constantemente para que no se pegue. Luego de haber hervido se lleva a autoclavar por 2 horas. Antes de servir en la caja de Petri se prepara lo siguiente: Preparación del Bifenil: por cada 1 litro de agar se agrega 25 ml de bifenil que se prepara de la siguiente manera: Bifenil 1 g y Etanol 25ml. Preparación del Cloranfenicol: por cada 1 litro de agar se agrega 2 ml de cloranfenicol que se prepara de la siguiente manera: [ ] De cloranfenicol= 40 g/litro En este caso se hace una regla de tres: 40 g-------------------------1000 ml x-------------------------------- 2 ml Preparación del Amikacina: por cada 1 litro de agar se agrega 1 ml, en este caso la amikacina viene en ampolla.

08 09

Luego de preparar todo estos compuestos se le agregan al agar y se revuelve y ahí si se procede a servir en las cajas de Petri plásticas, las cajas deben quedar rebosadas de agar, es decir casi llenas. Realizar control de calidad sembrando cepas ATCC de Candida (control negativo) y Cryptococcus (control positivo) Consulta Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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1. Investigue el fundamento del agar girasol,. 2. Utilidad de los siguientes agares en el área de micología: agar es Czapek–Dox, , agar PDA, agar cerebro corazón, agar zanahoria, agar tierra, agar agua, agar harina de maíz. 3. Cuáles son las ventajas del MALDI-TOF Y Que limitaciones tiene utilizando directamente las muestras clínicas. Bibliografía Arenas R. Micología médica ilustrada. Editorial Mc Graw Hill. Cuarta edición. Ciudad de México D.F., México. 2011. 417 pg. Bonifaz Alexandro. Micología médica básica. Editorial Mc Graw Hill.Quinta edición. Ciudad de México D.F.2015 Koneman et al. Diagnóstico microbiológico Texto y atlas en color. 6° edición. Editorial Panamericana. Buenos Aires V. Ausina Ruiz, S. Moreno Guillén. Tratado SEIMC de enfermedades infecciosas y Microbiología clínica. Editorial médica Panamericana. Madrid, España. 2006. Vélez H., et al. Fundamentos de Medicina Enfermedades infecciosas. Corporación para Investigaciones biológicas. 6a edición. Medellín, Colombia. 2003. 830 pg. Muñoz Bellido José Luis, et al. Enfermedades infecciosas y micología Clínica. Aplicación de la proteómica en el laboratorio de Microbiología Clínica.Vol 30 N°7 Agosto. 2012.

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Investigue el fundamento del agar girasol.

El agar microbiología es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo, los cuales deben estar exentos de todo microorganismo contaminante para facilitar la identificación, crecimiento y desarrollo de otros microorganismos que crecen en sustancias alimenticias artificiales preparadas en laboratorios, denominados cultivo.1 Para el crecimiento del cultivo, se requieren nutrientes muy complejos, por eso la mayoría de medios de cultivo, tienen como base infusión de extractos de carne o peptona y se le agregan demás ingredientes. Por ejemplo, el agar MacConkey tiene como principales elementos: pluripeptona, peptona, lactosa, mezcla de sales biliares, cloruro de sodio, agar rojo neutro, cristal violeta.1

Utilidad de los siguientes agares en el área de micología: agar es

Czapek– Dox,, agar PDA, agar cerebro corazón, agar zanahoria, agar tierra, agar agua, agar harina de maíz.

Agar Czapek–Dox: Se utiliza principalmente para el cultivo de bacterias y hongos del suelo. La única fuente de Carbono es la Sacarosa y la de Nitrógeno es el nitrato sódico.2

Agar PDA : es un medio de cultivo nutritivo sólido, no selectivo. En él pueden crecer especies bacterianas y fúngicas, pero su uso está indicado especialmente para el aislamiento de hongos filamentosos y levaduras. 3

Agar cerebro corazón: es un medio de uso general adecuado para el cultivo de una amplia variedad de tipos de organismos, incluidos las bacterias, levaduras y hongos filamentosos, a partir de muestras clínicas. 2

Agar zanahoria: En este medio de cultivo natural, es un medio rico en carbohidratos ideales para el metabolismo de esta levadura, ya que contiene porcentajes altos de sacarosa, fructosa y glucosa, y solo un escaso porcentaje de celulosa y almidón. Es un medio de cultivo enriquecido. 2

Agar tierra: Es considerado un medio de enriquecimiento ya que contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, entre ellos algunos de los más exigentes. Se utilizan comúnmente para la cosecha de diferentes tipos de microbios que están presentes en la muestra. En general el uso de los medios de enriquecimiento en este caso el agar de tierra se utiliza para determinar ausencias de un microorganismo determinado, o detectar si hay alguno pero está en muy baja proporción, por ejemplo se utiliza en los zigomicetos.2

Agar agua: Es un medio pobre en el cual el micelio crece en forma muy rala. Es especialmente usado para hacer aislamientos de punta de hifa. De acuerdo con la consistencia que se quiera dar al medio, se puede hacer con mayor o menor cantidad de agar. 3

Agar harina de maíz: es un medio de uso general utilizado para el cultivo de hongos. Candida albicans es el agente etiológico en la Candidiasis, que varía desde infecciones leves a graves de la piel, las uñas y las membranas mucosas. 3

Cuáles son las ventajas del MALDI-TOF y que limitaciones tiene

utilizando directamente las muestras clínicas

Una de las ventajas principales de emplear la tecnología de MALDI-TOF para determinar bacterias es la disponibilidad rápida de los resultados, que están típicamente listos en menos que una hora. Por otra parte, la espectrometría de masa de MALDI-TOF habilita la identificación exacta de una diversidad grande de las Bacterias que tienen rasgos fenotípicos escasos y que necesitaron el gen del rRNA 16S que ordenaba antes de la era de MALDI-TOF.3 Tienen limitaciones de muestras clínicas porque se ve relacionada con su dependencia de los procesos metabólicos de los microorganismos, que requieren de un cultivo con crecimiento adecuado y tiempos de incubación mínimos para alcanzar un resultado.4

REFERENCIAS

1.- Mdmcientifica. ¿Para qué sirve en agar microbiología? [En línea]. Disponible en: https://mdmcientifica.com/agarmicrobiologia/#:~:text=El%20agar%20microbiolog%C3%ADa%20es%20un,en%20 sustancias%20alimenticias%20artificiales%20preparadas [Consultado el 28 de agosto de 2020] 2.

Redalyc.

Agares

micología.

[En

línea].

Disponible

en:

https://www.redalyc.org/pdf/2130/213019226001.pdf [Consultado el 31 de agosto de 2020]. 3.

Cipotato.

Agares.

[En

línea].

Disponible

en:

http://cipotato.org/wp-

content/uploads/2014/09/AN65216.pdf [Consultado el 31 de agosto de 2020]. 4.- News medical life sciences. MALDI-TOF en microbiología. [En línea]. Disponible en:

https://www.news-medical.net/life-sciences/MALDI-in-Microbiology-

(Spanish).aspx [Consultado el 28 de agosto de 2020]. 5.- Natalia maldonado, carlos robledo, jaime robledo. La espectrometría de masas MALDI-TOF en el laboratorio de microbiología clínica. [En línea]. Disponible en: http://www.scielo.org.co/pdf/inf/v22n1/0123-9392-inf-22-01-00035.pdf [Consultado el 28 de agosto de 2020].

PADLET

padlet.com/asbleka/z3coikiyz2meoqwg

Guia 3 Grupo A Micologia I Hecho con una pizca de ingenio ASBLEIDE KARINA 19 DE AGOSTO DE 2020 11:20

GRUPO 1

Jose Alexander Lastra 19171016 Mariangel Barrientos Ureña 19171041 1-Investigue el fundamento del Agar girasol: AGAR SELECTIVO-ENRIQUECIDO AGAR DIFERENCIAL-AGAR NATURAL

Agar semilla de girasol (agar de staib o agar niger seed) El medio de cultivo Agar girasol contiene ácido cafeico contenido en el extracto de la semilla de girasol (Guizzotia abbisinica) que permite detectar la enzima fenol oxidasa desarrollada por Cryptococcus neoformans. La reacción enzimática produce melanina, la cual es absorbida por la pared celular del hongo produciendo un color marrón.1

GRUPO 2 Danna Villamizar 19171030 Laura Caceres 19171029 Agar PDA: el agar de patata y dextrosa es el medio más utilizado para el crecimiento de hongos y levaduras que atacan a las plantas

BIBLIOGRAFIA 1-Rosenow, E.C. 1919. Studies on elective localization. Focal infection with special reference to oral sepsis. The Journal of Dental Research, Vol. 1, No. 3: 205 – 267. Atlas, R.M. 1997

vivas o materia vegetal muerta en descomposición. El agar de patata y dextrosa puede ser suplementado con antibióticos o ácidos para inhibir el crecimiento bacteriano. Este medio es recomendado para realizar el recuento colonial. También puede ser utilizado para promover el crecimiento de hongos y levaduras de importancia clínica. La base del medio es altamente nutritiva y permite la esporulación y la producción de pigmentos en algunos dermato tos. Agar es Czapek–Dox: Se utiliza en el cultivo de hongos sapro tos, especialmente Aspergillus spp. y Penicillium spp. Es el medio de referencia para la identi cación de Aspergillus spp. un medio de cultivo sólido selectivo especialmente diseñado para el cultivo de bacterias y hongos sapró tos, el pH del agar Czapek es de 7.3 el medio Czapek se considera selectivo, debido a que solo podrán desarrollarse microorganismos capaces de utilizar compuestos inorgánicos como única fuente de nitrógeno. Bibliogra a: https://www.lifeder.com/agarczapek/#:~:text=El%20agar%20Czapek%20(CZA)%20es,de%20ba cterias%20y%20hongos%20sapr%C3%B3 tos.&text=El%20medio %20Czapek%20est%C3%A1%20compuesto,sacarosa%2C%20agar

%20y%20agua%20destiladahttps://www.lifeder.com/agarczapek/#:~:text=El%20agar%20Czapek%20(CZA)%20es,de%20ba cterias%20y%20hongos%20sapr%C3%B3 tos.&text=El%20medio %20Czapek%20est%C3%A1%20compuesto,sacarosa%2C%20agar %20y%20agua%20destilada

Lucia Luzardo Pardo 19171049/ Maily Paola Useche Acevedo Fundamento del Agar tierra y el Agar agua. Agar tierra o agar extracto de suelo: Es considerado un medio de

GRUPO 3 Jeny Paola Laguado 19171027 Jeimy Estefanny Sayago 19171020

enriquecimiento ya que contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, entre ellos algunos de los más exigentes. Se utilizan comúnmente para la cosecha de diferentes tipos de microbios que están presentes en la muestra. En general el uso de los medios de enriquecimiento en este caso el agar de tierra se utiliza para determinar ausencias de un microorganismo determinado, o detectar si hay alguno pero está en muy baja proporción, por ejemplo se utiliza en los zigomicetos. (1)

Agar cerebro corazón

Agar agua: Es un medio pobre en el cual el micelio crece en forma muy rala, poco espeso o poco poblado. Es especialmente usado

Medio de cultivo de enriquecimiento El substrato nutriente compuesto de extracto de cerebro-corazón y peptonas proporciona un amplio espectro de compuestos orgánicos de nitrógeno, fuentes de C, azufre, vitaminas y oligoelementos. La glucosa sirve como fuente adicional de C y de energía.

para hacer aislamientos de punta de hifa. De acuerdo con la consistencia que se quiera dar al medio, se puede hacer con mayor o menor cantidad de agar, se utiliza mucho en hongos entomopatógenos. (2)

El agar cerebro-corazón es además adecuado en el sector bacteriológico para aislar hongos patógenos a partir de material clínico como muestras de infecciones oculares, líquido cefalorraquídeo, sangre, médula ósea, orina, secreciones del sector vaginal y del tracto respiratorio y muestras de las vías respiratorias superiores como orejas, nariz y boca. Algunos hongos patógenos son inhibidos por la cicloheximida debería tenerse siempre una muestra paralela en un medio sin cicloheximida. Agar cerebrocorazón Igualmente debería inocularse paralelamente para detección de hongos especialmente exigentes un agar cerebrocorazón que contenga sangre (5 – 10%) de sangre de cordero. Agar zanahoria En este medio de cultivo natural, es un medio rico en carbohidratos ideales para el metabolismo de esta levadura, ya que contiene porcentajes altos de sacarosa, fructosa y glucosa, y solo un escaso porcentaje de celulosa y almidón.Es un medio de cultivo enriquecido. BIBLIOGRAFÍA 1. Laboratorios Neogen. Potato Dextrose agar. Disponible en: foodsafety.neogen.comhttps://n9.cl/ybel 2. Polo Nieto, L. D., Ramírez Salcedo, J. A., & Álvarez Aldana, A. (2017). Medios de cultivo a partir de residuos agroindustriales sólidos para el crecimiento de la levadura saccharomyces cerevisiae.https://repository.unilibre.edu.co/handle/10901/17597

Grupo4

Referencias 1. Redalyc. Agares en micologia. [En línea]. Disponible en: https://www.redalyc.org/pdf/2130/213019226001.pdf [Consultado el 31 de agosto de 2020]. 2. Cipotato. Agares. [En línea]. Disponible en: http://cipotato.org/wp-content/uploads/2014/09/AN65216.pdf [Consultado el 31 de agosto de 2020].

GRUPO 5 Nicolle Villa (19171015) Viviana Sanabria (19171004) Yerson Mota (19171042) AGAR HARINA DE MAÍZ Es un medio de uso general utilizado para el cultivo de hongos. El Agar Harina de Maíz permite que Candida albicans produzca clamidosporas, que es uno de los mejores criterios para su identi cación. Está compuesto por harina de maíz, agua destilada, tween y agar. Limitaciones: En el fondo de la placa se forma un precipitado amarillo que no debe ser confundido con colonias. En este agar pueden desarrollarse tanto especies sapro tas como patógenas, pero cada una forma estructuras miceliales características. Por ejemplo, especies del género Torulopsis no producen micelio y se reproducen solo por blastoconidios. Así

mismo, las especies Trichosporon y Geotrichum producen artroconidias en agar harina de maíz y algunas veces es difícil distinguir entre una y otra. Bibliografía: 1.https://www.condalab.com/int/es/medios-de-cultivodeshidratados/887-5308-agar-harina-de-maiz.html 2.https://www.lifeder.com/agar-harina-de-maiz/ 3.https://www.ins.gob.pe/insvirtual/images/otrpubs/pdf/Manua l%20Hongos.pdf

GRUPO 6 ¿Qué es el MALDI-TOF? Angie Sirley Parada Eslava 19171009 Julian Andres Ramirez Conrado 19171048 1

La ionización MALDI (desorción/ionización mediante láser asistida por Matriz), acoplada a un analizador TOF (tiempo de vuelo), es una técnica de ionización suave utilizada en espectrometría de masas que permite el análisis de biomoléculas (biopolímeros como proteínas, péptidos y azúcares) y moléculas orgánicas grandes (como polímeros, dendrímeros y otras macromoléculas) que tienden a hacerse frágiles y fragmentarse cuando son ionizadas por métodos más convencionales.

GRUPO 7 VENTAJAS DE LA MALDI TOF Daniela parra 17172015 Sara so a pava 19171025

Determinación del peso molecular de la proteína intacta. Obtención del mapa peptídico (PMF) e identi cación de proteínas de muestras biológicas (clínicas, alimentos, cultivos microbianos, plantas, etc.) utilizando MASCOT, como algoritmo de búsqueda. Identi cación de polipéptidos.

tiene 96 pocillos y permite estudiar 96 muestras distintas en un solo análisis es un método able y producible, de fácil manejo, que no requiere personal experimentado. ademas es un sistema abierto que permite al investigador crear sus propias bases de datos de per les. permite identi car distintos microorganismos, incluidos

Análisis de macromoléculas, polímeros, drogas y metabolitos.

bacterias, hongos, virus y parásitos. hay que destacar su bajo coste en reactivos en comparación con otras técnicas disponibles en el laboratorio de microbiologia

1. ESPECTROMETRÍA DE MASAS (MALDI-TOF). Servicios Técnicos de Investigación [Internet]. Sstti.ua.es. 2020 [cited 31 August 2020]. Available from: https://sstti.ua.es/es/instrumentacioncienti ca/unidad-de-genomica-y-proteomica/espectrometriade-masas-maldi-tof.html

http://www.seqc.es/download/tema/3/2773/7982539/2019279/ cms/tema-8-aplicaciones-del-maldi-tof-en-el-laboratorio-demicrobiologia.pdf/

GRUPO 8 Limitaciones del MALDI-TOF El Mejor Grupo Brayan Peñaranda 19171035 Isis Rozo 19171018 La principal desventaja o limitación es el alto costo del equipo, la imposibilidad de identi car microorganismos muy relacionados entre sí, o microorganismos que no estén presentes en la base de datos.

Bibliogra a Ejemplo: 1. En el caso de los hongos lamentosos los resultados no son tan

https://seimc.org/contenidos/documentoscienti cos/procedimiento

favorables 2. Asientan casi siempre más en la completitud de las bases de datos de referencia que en la capacidad del método para obtener per les ables de casi cualquier microorganismo bacteriano. 3. Puede ser un método diagnóstico muy especí co y no se de niría como un método especialmente sensible, ya que requiere una cantidad de proteína considerable para obtener per les ables. 4. La relación costo/e ciencia es un obstáculo para demostrar la conveniencia de su implantación en nuevos procesos diagnósticos.

smicrobiologia/seimc-procedimientomicrobiologia65.pdf Espectrometría de masas MALDI-TOF en microbiología clínica. Situación actual y perspectivas futuras MALDI-TOF mass spectrometry in clinical microbiology. Current situation and future perspectives.Juan Luis Muñoz Bellido, José Manuel González Buitrago. editorial ELSEVIER

※※※※※※

GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formación 004 Versión: Código: UC-BAC-MCL-GL001

MICOLOGIA Enero 2020 Fecha:

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Guía de 4 Laboratorio: Tema: MORFOLOGIA DE LOS HONGOS Objetivo

 

Conocer la morfología microscópica de las estructuras somáticas y reproductoras de las levaduras y de los hongos filamentosos Identificar las características macroscópicas de colonias de hongos filamentosos y levaduroformes. Fundamento

El cuerpo vegetativo es indiferenciado (talo), en algunos está formado de una sola célula (levaduras) mientras que en la mayoría es multicelular (filamentosos). El talo filamentoso está constituido por un conjunto de hifas, que forman una masa entretejida llamada micelio. Las hifas pueden ser aseptadas(cenocíticas) o septadas (con divisiones transversales, llamadas septos). Los hongos en los que las estructuras somáticas y reproductoras son microscópicas, reciben el nombre de micromicetes; por el contrario, los hongos enlos que las estructuras somáticas y reproductoras son macroscópicas, reciben elnombre de macromicetes. CLASIFICACION DE LAS HIFAS O MICELIOS: 

Por su origen: Hifas verdadera o seudohifas



Por su función: Micelio vegetativo o de nutrición o micelio reproductor o aéreo.



Por su diámetro: macrosifonadas (mayor a 1 micrómetro de diámetro) o microsifonadas (menor a 1 micrómetro de diámetro)



Por la ausencia o presencia de pigmento: micelio hialino o pigmentado (sobre todo de tipo melánilico).



Por la presencia o ausencia de divisiones o septos.

MODALIDADES DE LAS HIFAS: Candelarios favicos, cuerpos nodulares, espirales, estolón, pectinadas, raqueta, rizoides, Zarcillos. Materiales y Equipos Item 01 02

Tipo

Descripción Cultivos de hongos. Cinta y marcador sharpie. Procedimiento Descripción Observar los colores que presentan los diferentes hongos suministrados por el docente tanto en el reverso como en el adverso Describir el aspecto algodonoso, filamentoso, granuloso, pulverulento, cremoso. MAT MAT

Paso 1 3

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Con el asa tomar una pequeña porción del cultivo seleccionado y colocarla sobre una gota del colorante Azul de lactofenol, que previamente se ha puesto sobre una lámina portaobjetos. Disgregarla y cubrirla con una laminilla cubreobjeto (22 x 22) Realizar otro montaje colocando un trozo de cinta aislante sobre la colonia del hongo realizar una leve presión hasta que la cinta se impregne del moho, posteriormente colocar una gota de azul de lactofenol en una lámina y adherir el trozo de cinta. Enfocar con objetivo 10X hasta ubicar la muestra en el campo microscópico, cambiar a 40X para la correcta observación. Tomar fotos y Hacer dibujos de las principales estructuras observadas. Registrar las lecturas macroscópicas y microscopias en formato anexo. Registro de lectura macroscópico y microscópico de hongos ambientales.

NOTA: Realizar cada uno de los registros en el formato anexo. Consulta 1. Es mycocel un medio de cultivo adecuado para realizar la ejecución de cultivos ambientales. Sustente la respuesta. 2. Del anexo tipos de esporas buscar el significado de cada una de las mencionadas y dar un ejemplo de hongo en la cual se presenten 3. En los micelios septados existen unas estructuras llamadas poros, mencione los tipos de poros y descríbalos. Bibliografía Arenas R. Micología médica ilustrada. Editorial Mc Graw Hill. Cuarta edición. Ciudad de México D.F., México. 2011. 417 pg. Bonifaz Alexandro. Micología médica básica. Editorial Mc Graw Hill. Quinta edición. Ciudad de México D.F. 2015 Koneman et al. Diagnóstico microbiológico Texto y atlas en color. 6° edición. Editorial Panamericana. Buenos Aires V. Ausina Ruiz, S. Moreno Guillén. Tratado SEIMC de enfermedades infecciosas y Microbiología clínica. Editorial médica Panamericana. Madrid, España. 2006. Vélez H., et al. Fundamentos de Medicina Enfermedades infecciosas. Corporación para Investigaciones biológicas. 6a edición. Medellín, Colombia. 2003. 830 pg.

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Descripciรณn de las colonias observadas Color de adverso Aspecto de la y reverso colonia

HIFAS

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ESPORAS

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Tomado de CC commons(universidad de Almería) Hay dos grandes tipos de conidiogénesis: tálica (fig. 4 A,B), por fragmentación del micelio, y blástica (fig. 4 C,D), por gemación. En ambos casos se añade el prefijo holo- (fig. 4 A,C) si todas las capas de la pared de la célula conidiógena intervienen en la formación del conidio, o entero- (fig. 4 B,D), si sólo interviene la parte interna de la pared (las células conidiógenas enteroblásticas se llaman fiálides). La célula conidiógena puede complicar aún más las cosas: a veces produce los conidios en cadena; en otras ocasiones los conidios se forman simultáneamente en varios lugares a la vez (fig. 4 E; un buen ejemplo es Botrytis). En ciertos géneros, la célula conidiógena prolifera (es decir, crece tras formar un conidio, como en la fig. 4 F-G). En el caso de la fig. 4F, las proliferaciones siguen el mismo eje del crecimiento, y la célula conidiógena se denomina anélide.

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CC commons (M.piepenbring)

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CONSULTA SEMANA 4

Es mycocel un medio de cultivo adecuado para realizar la ejecución de

cultivos ambientales. Sustente la respuesta.

Medio destinado para cultivo de hongos (mohos y levaduras) patogénicos, especialmente dermatofitos. 1 Las propiedades nutritivas de MYCOSEL Agar las suministra la peptona preparada a partir de harina de soja. La dextrosa es una fuente de energía para el metabolismo de los hongos. La cicloheximida inhibe la mayoría de los hongos saprofíticos. El cloranfenicol es un antibiótico de amplio espectro que inhibe una amplia variedad de bacterias Gram positivas y Gram negativas.1 Es por ello que este tipo de cultivos no puede ser empleado ara la realización de cultivos ambientales ya que no va a permitir el crecimiento de cualquier organismo debido a las condiciones específicas que tiene en su composición.

Del anexo tipos de esporas buscar el significado de cada una de las

mencionadas y dar un ejemplo de hongo en la cual se presenten

Acosporas: Esporas que resultan de la meiosis y se forman a partir de una bolsa o asca que produce un número determinado y característico de ellas. Algunos ejemplos de hongos ascosporados son: Saccharomyces, Hansenula y Pichia; se presentan también en una diversidad de hongos patógenos primarios y oportunistas, como algunos dermatofitos (Arthroderma), Ajellomyces capsulatus, Ajellomyces dermatitidis y Pseudallescheria boydii.2

Basidioesporas: Propias de las setas u hongos macroscópicos, son estructuras unicelulares y haploides; se forman de una bolsa o basidio, de la que nacen esterigmas que producen las basidiosporas. Muchos de los hongos que las producen son homotálicos, es decir, con hifas propias diferenciadas minor y major;

por tanto, la reproducción se hace por autofecundación, sin quimioatracción ni feromonas. Dos ejemplares excepcionales de hongos microscópicos de interés médico son: Filobasidiella neoformans y Rhodosporidium sp.2

Zigosporas: Se forman por la unión de dos hifas sexualmente diferenciadas, donadoras (+ o major) y receptoras (− o minor), aunque son iguales en su morfología; una vez que se lleva a cabo la unión, se inicia el fenómeno de plasmogamia, seguido de la cariogamia, de donde se forma un huevo o zigospora, del que posterior a la meiosis nace el nuevo hongo. Este tipo de reproducción es propio de los mucorales (Mucor, Rhizopus, Absidia, etcétera.)2

En los micelios septados existen unas estructuras llamadas poros,

mencione los tipos de poros y descríbalos.

Tipos de poros. ●

Poro simple. Un solo espacio que permite alta permeabilidad.

●

Microporos. Varios pequeños espacios a través del septo.

●

Doliporo. Poro formado por la estructura septal (parentesomas), flexible.

●

Poro rodante. Formado por una estructura membranosa, que permite el paso

selectivo de sustancias, similar a “una puerta giratoria”. ●

Micelio cenocítico. No posee divisiones o es pauciseptado; es característico

de los Mucorales (Mucor, Rhizopus, Absidia, etc.). Las células no se encuentran diferenciadas, por lo que los núcleos y otros tipos de organelos se encuentran dispersos a través de todo el citoplasma de las hifas.

REFERENCIAS

Bd sabouraud agar with chloramphenicol and cycloheximide. BD Mycosel

AgarBD Sabouraud Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide [En línea]. Disponible

en: https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=25729 [Consultado el 5

de septiembre de 2020]. 2.

J alexandro bonifaz trujillo. MICOLOGÍA MÉDICA BÁSICA. (4nd ed.). :

McGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES, SA de CV; 2012.

PADLET

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macromorfologia y micromorfologia Hecho con una pizca de ingenio ASBLEIDE KARINA 19 DE AGOSTO DE 2020 11:33

Yerson mota Basidiospora: Una basidiospora es una espora reproductiva producida por los hongos de la división de los basidiomicetes. Las basidiosporas contienen típicamente un núcleo haploide que nace de la meiosis, producida por un tipo especializado de células de los hongos llamadas basidios. Características generales Micelio bien desarrollado de hifas septadas, pueden aparecer formas levuriformes. Fase dicariótica de larga duración. Producen meiósporas: basidiósporas en basidios, unicelulares, haploides o a veces binucleados. Basidiósporas originadas como resultado de plasmogamia, cariogamia y meiosis: 4 basidiósporas, homólogas a ascósporas. Pueden desarrollarse cuerpos fructíferos o basidiocarpos de tamaño importante. Su origen se piensa que es a partir de ascomicetos. Reproducción asexual Fragmentación: fragmentos miceliares, uni o binucleados. Conidios: común en los carbones, por gemación de las basidiósporas o el micelio. Oidios y artrósporas: producidos por ramas cortas especializadas, oidóforos, que desprenden oidios sucesivamente a partir del ápice del oidióforo, pueden germinar o dar micelio o actuar como espermacios (microconidios). Eciósporas en las royas con heterecia Uredósporas: esporas estivales producidas por las royas. Reproducción sexual Espermatización: a través de oidios (espermacios) que se fusionan con el micelio, pueden estar recubiertos de una gota de mucus, son recogidos por hifas receptoras, sólo aparecen en las royas. Somatogamia: proceso más frecuente, según la compatibilidad pueden ser: Homotálicos. Homotálicos secundarios. Heterotálicos: unifactoriales o bipolares y bifactoriales o tetrapolares.

Paola Laguado

Geotrichum sp. Hongo levaduriformes

▶ Características macroscópicas de la colonia:

Anverso: tamaño ilimitado, cubre todo el medio, color: blanco-amarillento; forma y aspecto: plana, vellosa-húmeda; reverso: no presenta pigmentos.

▶ Micromorfología: Tipo de micelio: macrosifonado (1-3 μm), septado y hialino. Reproducción anamór ca: por artroconidios que se fragmentan de las hifas; miden entre 2-4 μm de largo por 1-2 μm de ancho (algunas especies forman también blastoconidios). Fase teleomór ca: su reproducción es por medio de ascosporas y se denomina Endomyces geotrichum.

▶ Taxonomía: Ascomycota, Hemiascomycetes, Saccaromycetales,

Geotrichum.

MARIANGEL BARRIENTOS

▶

Rhizopus sp. Características macroscópicas de la colonia: Anverso: tamaño ilimitado, tiende a llenar los tubos y cajas de Petri; color: en un inicio (2 a 3 días) es blanco, tiempo después toma un color gris oscuro; forma y aspecto: vellosaalgodonosa y seca; reverso: no presenta pigmentos. Micromorfología: Tipo de

▶

micelio: macrosifonado, de entre 5-10 μm de diámetro, cenocítico (sin septos) y hialino; modalidad de micelio: presenta rizoides (raíces) y estolones. Reproducción anamór ca: es a base de esporangiosporas o endosporas redondas que miden de 6-8 μm de diámetro; estructuras especializadas: esporangióforos largos, que nunca se rami can y tiene una columnela pequeña de forma ovoide; el esporangio llega a medir 100 a 200 μm de diámetro; fase teleomór ca: zigosporas. Taxonomía: Glomeromycota (antes Zygomycota), Mucorales, Mucoraceae, Rhizopus.

▶

NICOLLE VILLA 19171015 TRICHOPHYTON RUBRUM - SABOURAU - CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS: Crecimiento moderado, de color blanco con difusión de pigmento, la colonia es vellosa, algodonosa o granulosa y plana, en el reverso se observa un color rojo sangre. CARACTERISTICAS MICROSCOPICAS: R. asexuada (ascosporas) Presenta un micelio septado, hialino, microsifonado, rami cado; presenta numerosos microaleurioconidios, en forma de gota o piriformes, alternados en los dos lados de las hifas; en el extremo de las hifas presenta artroconidios, que son la formación de los macroconidios (son escasos o ausentes regularmente), tienen forma de “puro”, es decir son alargados (hasta 60µm) con un extremo redondeado, de 4 a 10 divisiones de paredes delgadas y lisas, hialinos.

Viviana Sanabria MICROMORFOLOGÍA: Tipo de espora: Amerospora Botrytis (Figura 1). Las esporas (conidios) son unicelulares, de 5‐10 x 7‐18 μm , de forma ovoide, núcleo deprimido elipsoidal con cicatriz basal. Pueden ser hialinos coloreados (gris, negro) y super cie lisa. • Teleomorfo Botryotina. Patógeno vegetal moho gris. MACROMORFOLOGÍA: Crecimiento radial de Beauveria bassiana (Figura 2). La textura es algodonosa de color blanco a beige, cambiando a amarillas pulverulentas durante el crecimiento micelial.

Danna Villamizar Micromorfologìa Aspergillus Niger Diámetro: 60 mm en una semana. - Topografía: Liso, a menudo con pliegues radiales. - Textura: Arenosa. - Color: Micelio desde el blanco al amarillo, cubriéndose paulatinamente de cabezas esporuladas de color negro o negropúrpura. - Reverso: Color crema. Características predominantes: Cabezas negras, largas y esporuladas, conidias negras - Conidióforo: Incoloro, liso y de pared gruesa; vesículas largas y redondeadas con métula y álides que cubren toda la super cie. - Características de las conidias: De redondas a ovales, 2,5-10 μm de diámetro; super cie rugosa. Aspergillus niger se reproduce por vía asexual a través de la producción de conidios. Sus conidias pueden encontrarse en el suelo y en un gran número de sustratos naturales. Las mismas se esparcen gracias al viento, para posarse sobre distintas super cies.

rami cados y conidias. Los conidióforos son curvados en los puntos donde se origina la conidia

IMAGEN:Aspecto (superior) de cultivos de Curvularia lunata en agar patata dextrosa (A) y reverso de placa de Petri ° C. (Abajo) apariencia microscópica típica de conidios de células múltiples

Angie Parada MICROMORFOLOGIA Y MACROMORFOLOGIA B Ascosporas de dermato tos (Arthroderma). Ascosporas Esporas que resultan de la meiosis y se forman a partir de una bolsa o asca que produce un número determinado y característico de ellas.

Isis Rozo 19171018 CURVULARIA LUNATA CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS DE LA COLONIA: Anverso: tamano ilimitado, tiende a cubrir todo el medio de cultivo; color: negro, con tonalidades cafe oscuro; forma y aspecto: plana, aterciopelada; reverso: presenta pigmento cafe oscuro que difunde al medio. MICROMORFOLOGIA hifas septadas, de color pardo, con conidioforos simples o

Jeimy Estefanny Sayago Saccharomyces sp. Hongos Levaduriformes

▶ Características macroscópicas de la colonia:

Anverso: tamaño limitado, de 1-2 cm (en 3 a 5 días); color: blancoamarillento; forma y aspecto: cremosa, convexa, lisa y opaca; reverso: no presenta pigmentos. Micromorfología:

▶

Reproducción anamór ca: por blastoconidios que miden de 2-4 μm de tamaño, con gemas de la mitad de su tamaño; no presenta seudomicelio; fase teleomór ca: por ascosporas pares (2, 4 y 6). Taxonomía: Ascomycota, Hemiascomycetes, Saccharomycetales, Saccharomyes.

▶

Sara Pava Morfología de la colonia: Las colonias en agar SDA más cloranfenicol al 0,01% a los 10 días, a 25 ºC son planas polvorosas y de textura aterciopelada. El color es inicialmente blanco y luego se pueden tornar amarillas, amarillas café, violeta, violeta café, rosada o violeta dependiendo de las especies. El reverso de la colonia puede ser blanco sucio o café. Colonia característica de Paecilomyces en Agar SDA más cloramphenicol al 0.01% a los 10 días de incubación Micelio: Hialino a amarillento, septado de pared lisa. Conidióforos: Hialino o rugoso según la especie, rami cados con ramas dispuestas en verticilos, portadores de 2 a 7 álides y hasta 500 µm de longitud. Conidiogenésis basipétala. Las álides se pueden formar directamente a partir de las hifas, solitarias, en pares o múltiples divergentes, alargadas con cuello bien de nido y terminan con extremo angosto entre 9-15x3.5 a 4 µm. Estructura de reproducción típicas de Paecilomyces sp.

ilimitado, tiende a llenar los tubos y cajas de Petri; color: en un inicio (2 a 3 días) es blanco, tiempo después toma un color gris oscuro; forma y aspecto: vellosa algodonosa y seca; reverso: no presenta pigmentos. Micromorfología: Tipo de micelio: macrosifonado, de entre 5-10 μm de diámetro, cenocítico (sin septos) y hialino; modalidad de micelio: presenta rizoides (raíces) y estolones. Reproducción anamór ca: es a base de esporangiosporas o endosporas redondas que miden de 6-8 μm de diámetro; estructuras especializadas: esporangióforos largos, que nunca se rami can

Lucía Luzardo

Brayan Peñaranda

Laura caceres Rhizopus sp. Características macroscópicas de la colonia: Anverso: tamaño

ASPERGILLUS TERREUS - Hongos lamentosos hialinos Características macroscópicas de la colonia: Anverso: tamaño ilimitado, tiende a llenar el medio; color: en un inicio es blanca, para luego tomar un color beige o beige-café; Forma y aspecto: plana, granulosa o polvosa; Reverso: no presenta pigmentos.

Micromorfología: Tipo de micelio: macrosifonado (2-4 μm), tabicado y hialino. Reproducción anamór ca: a base de microconidios redondos de 2-3 μm; Estructuras especializadas: la cabeza aspergilar mide 40-60 μm (Micrometros); está compuesta por conidióforos largos (80-100 μm), vesículas redondas o subesféricas (20 μm), de donde nacen en ángulo de 180° dos series de álides o esterigmas (biseriado) Fase teleomór ca: no se ha reportado. A. Cultivo de Aspergillus terreus. B. Aspergillus terreus (azul de algodón, 40X). C. Aspergillus terreus

aterciopelada o algodonosa dependiendo de la especie; además puede presentar gotas de exudado. Microscópicamente presenta hifas hialinas septadas. Los conidióforos tienen ramas secundarias, denominadas métulas. Estas son de forma cilíndrica, con paredes lisas y portan de 3 a 6 álides en forma de matraz; de las cuales surgen largas cadenas sin rami car de esporas o conidios formando el penacho o pincel característico del género.

Geotrichum candidum Julian Andres Ramirez Conrado 19171048

Penicillium sp JOSE ALEXANDER LASTRA HIDALGO 19171016 Penicillium sp. Colonias aterciopeladas, con diferentes tonos de Colonias aterciopeladas, con diferentes tonos de verde. verde. Micelio septado, conidióforos libres septados, simples o Micelio septado, conidióforos libres septados, simples o rami cados, uniseriados con célula conidiógena o álide; o biseriados rami cados, uniseriados con célula conidiógena o álide; o biseriados con métula y álide, conidiosporas unicelulares (amerosporas) en con métula y álide, conidiosporas unicelulares (amerosporas) en cadena (catenulada). AMEROSPORAS: espora no lamentosa sin tabiques y sin proyecciones más largas que el cuerpo de la espora (no incluye esporas muy curvadas o muy largas) Penicillium es un hongo lamentoso hialino, sapró to perteneciente al lo Ascomycota. Macroscópicamente las colonias son normalmente de crecimiento rápido; al principio de color blanco y con el tiempo adquieren color azul, azul verdoso, verde, gris oliva o tonos rosados, con reverso amarillo cremoso. La textura puede ser plana, lamentosa,

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5 TECNICAS DE AISLAMIENTO DE HONGOS Objetivo



Capacitar al estudiante en la realización de cultivos de ambientales cerrados y abiertos con el fin de conocer la flora micótica presente. Desarrollar habilidades para el futuro ejercicio profesional en el estudio de la flora micótica existente en ambientes hospitalarios y del laboratorio.



Realizar la técnica de microcultivo y reconocer la utilidad de esta en la identificación de los hongos. Fundamento GENERALIDADES

En la atmósfera se encuentran normalmente una cierta cantidad de esporos de hongos. Estos esporos por ser muy livianos son transportados por las corrientes de aire, de un sitio a otro, con mucha facilidad. Este hecho tiene mucha importancia, ya que explica la diversidad de substratos en los cuales crecen los hongos y también la frecuencia con que se contaminan los cultivos en el laboratorio. Los llamados hongos contaminantes por lo general no son patógenos. Sin embargo, algunos de estos hongos por intermedio de sus esporos pueden causar alergias por inhalación y otros, en determinadas circunstancias, penetrar al cuerpo humano y causar infecciones, las llamadas enfermedades oportunistas. El hecho de que un hongo sea patógeno o no, depende de varios factores: 

Resistencia del organismo al hongo



La virulencia del hongo



La magnitud de la invasión.

FUNDAMENTO: Las esporas de los hongos se encuentran en todas partes. Muchos de ellos en el aire, siendo transportador por las corrientes de aire. Reviste un particular interés reconocer los hongos contaminantes sobre todo porque representan los microorganismos que con más frecuencia afectan reactivos, medios de cultivo, sueros, etcétera, provocando grandes problemas y pérdidas, no sólo en la industria, sino en los laboratorios. A nivel de diagnóstico, en estudios de laboratorio, los hongos contaminantes también representan un serio problema debido a que saprofitan con facilidad las diversas muestras (pus, sangre, expectoración, entre otros), lo que genera confusiones en el análisis rutinario. Si bien es cierto que la mayoría de estos hongos son inocuos hay que tomar en cuenta que algunos de ellos, cuando soportan temperaturas de 37°C o más, tienen la capacidad de realizar cambios metabólicos y se pueden convertir en agentes oportunistas, siempre que estén en contacto con un huésped propenso; por desgracia este fenómeno ocurre con asiduidad porque hoy en día se desarrollan más antibióticos de amplio espectro, inmunodepresores y citotóxicos; además se ha observado un incremento de enfermos inmunocomprometidos, como pacientes con cáncer Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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hematológico (leucémicos, linfomatosos), trasplantados, con VIH-SIDA, etc. Por lo tanto, es significativo reconocer este tipo de hongos ya que, en un momento dado, se pueden comportar como “patógenos”, propiamente hablando. Otro enfoque de los hongos contaminantes radica en que al estar distribuidos ampliamente y ya que por lo general se transportan (por esporas o conidios) a través del aire, actúan de una manera similar a los pólenes, es decir, como alérgenos, por lo tanto suelen provocar cuadros de hipersensibilidad (alergias); de ahí que resulte de vital importancia conocer la flora fúngica alergológica de todos los lugares y ciudades, mima que varía dependiendo de condiciones tales como la temperatura, humedad, nutientes, etc. Por lo anterior es necesario hacer muestreos que determinen la presencia de este tipo de hongos en las diversas estaciones del año. Todas las características se presentan en los medios habituales de Sabouraud (medio de cultivo), extracto de levadura o papa dextrosa agar. La mayoría de éstos crecen en promedio de 48 horas, mientras su morfología completa se presenta entre 3 y 5 días. El microcultivo tiene por objeto hacer que el hongo crezca sobre la lámina portaobjetos (1x3”) y desarrolle allí todas sus estructuras, en forma tal que estas puedan ser observadas al microscopio sin ningún deterioro al trasladarla del cultivo a la lámina, facilitando así la identificación.

Materiales y Equipos Item

Tipo

Descripción MAT Cajas de Petri con agar Sabouraud. MAT Cinta y marcador sharpie. Procedimiento Descripción Escoger un sitio cualquiera dentro de la Universidad y colocar en el la caja destapada. Mantener allí la caja durante 5 minutos, para exponerla al aire. Taparla, marcarla con el nombre de la persona y entregarla en el laboratorio para su incubación

01 02 Paso 1 2 3 4

Para realizar Cortar pequeños trozos del medio de cultivo con las siguientes dimensiones: 10 x 10 mm colocarlos sobre el mismo agar, sembrar por picadura en la porción media de cada uno de los 4 lados del cuadrado, cubrirlo con una laminilla cubreobjetos.

Al cabo de unos días podrá observarse el desarrollo del micelio en los 4 costados del cuadrado con el medio y adherido a la superficie de la laminilla. Con cuidado se desprende la laminilla del agar y se la coloca sobre una gota de colorante azul de lactofenol puesta sobre otra lámina portaobjetos, y se observa al microscopio.

NOTA: Al mantener la caja destapada, colocar la tapa cerca pero en la misma posición, como si estuviera tapando la caja, así evita que caigan esporos sobre la tapa. Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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Anotar bien el sitio de recolección (donde colocó la caja) para responder en la siguiente práctica el cuestionario que se le entregará). Consulta 1. Utilidad de microcultivo en el diagnóstico de enfermedades fúngicas 2. Investigue una técnica de microcultivo para hongos diferente a la que se presenta en la guía de trabajo Bibliografía Arenas R. Micología médica ilustrada. Editorial Mc Graw Hill. Cuarta edición. Ciudad de México D.F., México. 2011. 417 pg. Bonifaz Alexandro. Micología médica básica. Editorial Mc Graw Hill. Quinta edición. Ciudad de México D.F. 2015 Koneman et al. Diagnóstico microbiológico Texto y atlas en color. 6° edición. Editorial Panamericana. Buenos Aires V. Ausina Ruiz, S. Moreno Guillén. Tratado SEIMC de enfermedades infecciosas y Microbiología clínica. Editorial médica Panamericana. Madrid, España. 2006. Vélez H., et al. Fundamentos de Medicina Enfermedades infecciosas. Corporación para Investigaciones biológicas. 6a edición. Medellín, Colombia. 2003. 830 pg.

Descripción de las colonias observadas Color de adverso y reverso

Aspecto de la colonia

Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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HIFAS

ESPORAS

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CONSULTA SEMANA 5

TÃ&#x2030;CNICA DE AISLAMIENTO DE HONGOS

LUCIA LUZARDO MAILY USECHE MICOLOGÍA I BA GRUPO 4

OICINI

TÉCNICA DE MICROCULTIVO EN LÁMINA

CORTAR PEQUEÑOS TROZOS DEL MEDIO DE CULTIVO (10 X 10 MM)

FIN

SEMBRAR POR PICADURA, CUBRIRLO CON UN CUBREOBJETOS.

TIENE POR OBJETO HACER QUE EL HONGO CREZCA SOBRE LA LÁMINA PORTAOBJETOS Y DESARROLLE ALLÍ TODAS SUS ESTRUCTURAS, EN FORMA TAL QUE ESTAS PUEDAN SER OBSERVADAS AL MICROSCOPIO SIN NINGÚN DETERIORO AL TRASLADARLA DEL CULTIVO A LA LÁMINA, FACILITANDO SU IDENTIFICACIÓN Y EL DE LAS MICOSIS ASOSIADAS (1) OTRAS TÉCNICAS: TÉCNICA DE LOS TAQUITOS DE AGAR *CON EL SACABOCADO PREVIAMENTE FLAMEADO Y FRIO EXTRAER UN TROCITO DE AGAR PDA Y COLOCARLO SOBRE UNA LÁMINA PORTA OBJETO LIMPIA Y ESTÉRIL * CON LA ASA DE SIEMBRA DIVIDIR EN DOS EL TROCITO DE AGAR Y SEPARARLOS LIGERAMENTE * CON EL ASA DE SIEMBRA TOMAR EL INOCULO DE LA COLONIA Y SEMBRAR EN LOS BORDES DE LOS TROCITOS DE AGAR *CUBRIR LOS TROCITOS CON UNA LAMINILLA CUBRE OBJETO PREVIAMENTE FLAMEADA *COLOCAR EN CÁMARA HÚMEDA Y LLEVAR A LA ESTUFA A 25-28OC O A TEMPERATURA AMBIENTE POR EL TIEMPO NECESARIO *OBSERVAR AL MICROSCOPIO CON LENTES DE 10 Y 40 AUMENTOS (2)

OBSERVAR AL MICROSCOPIO

OBSERVAR EL MICELIO

SE COLOCA UNA GOTA DE AZUL DE LACTOFENOL 1. MORALES RESTREPO NATHALIE, CARDONA-CASTRO NORA. MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO EN MICOLOGÍA. CES MED. [INTERNET]. 2018 ABR [CITADO 2020 SEP 21] ; 32( 1 ): 41-52. DISPONIBLE EN: HTTP://WWW.SCIELO.ORG.CO/SCIELO.PHP?SCRIPT=SCI_ARTTEXT&PID=S0120-87052018000100041&LNG=ES. HTTP://DX.DOI.ORG/10.21615/CESMEDICINA.32.1.5.

2. PIERSON M. & SMOOT L. (2001)(2001)INDICATOR MICROORGANISMS AND MICROBIOLOGICALINDICATOR MICROORGANISMS AND MICROBIOLOG. (INTERNET). CITADO EL 21 DE SEP DE 2020. PUBLICADO EN: HTTPS://ES.SCRIBD.COM/DOCUMENT/374206536/8-TECNICAS-DEE-MICROCULTIVO-PARA-HONGOS

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Microcultivo Hecho con un cรกlido abrazo ASBLEIDE KARINA 24 DE AGOSTO DE 2020 00:29

Angie Parada ; Julian Ramirez

microcultivo (4) Documento PDF PADLET DRIVE

Danna villamizar-Laura caceres

Microcultivo LUCIA Y MAILY BA Documento PDF PADLET DRIVE

Jose Alexander lastra -Mariangel Barrientos

sara Soﬁa pava Daniela parra

Maily Useche y Lucia Luzardo

ﬂujograma Documento PDF PADLET DRIVE

Jeimy Estefanny Sayago Jeny Paola Laguado

Turquesa y Marﬁl Enmarcado Proceso Infografía (2) Documento PDF PADLET DRIVE

Nicolle Villa - Viviana Sanabria - Yerson Mota

Brayan Peñaranda- Isis Rozo

Micologia Infograﬁa Documento PDF PADLET DRIVE

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6 MICOSIS SUPERFICIALES IDENTIFICACION DE DERMATOFITOS Y Phaeoannellomyces werneckii Objetivo

Identificación de género y especie de hongos productor de micosis superficiales Fundamento Llamadas tiñas de manera común, las dermatofitosis son un conjunto de micosis superficiales que afectan la piel y sus anexos (uñas y pelos), causadas por un grupo de hongos parásitos de la queratina denominados dermatofitos y que, de manera excepcional, invaden tejidos profundos. La tiña negra Es una infección crónica y asintomática del estrato córneo causada por la levadura dematiácea Phaeoannellomyces werneckii (antes Exophiala werneckii), dimórfica y de hábitat saprofito. La lesión consiste en una mácula solitaria de límites definidos que se disemina por expansión en palmas. Puede tener color marrón en la periferia y, en algunos casos, semejar un melanoma. En ocasiones puede afectar a los dedos de la mano y a la cara, siempre en zonas sin pelo Cultivo: Despues de realizado el examen directo de las muestras clínicas debe procederse al cultivo de las escamas en agar dextrosa Sabouraud con cicloheximida, agar papa dextrosa, lactrimel y agar extracto de malta. En cualquiera de esos medios, el cultivo debe mantenerse a temperatura ambiente. Su desarrollo es considerado como de crecimiento lento (10 días en promedio). Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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Características morfológicas: —Macroscópica. Colonias inicialmente pálidas, húmedas, brillantes y planas (levaduriformes) y que con el tiempo, van transformandose a una apariencia de tipo aterciopelado, de color verde olivo a marrón obscuro por el anverso y en el reverso el color de la colonia es negro. —Microscópica. Hifas septadas, conidios bicelulares y clamidoconidios. Los conidios bicelulares (2-5 x 5-10 µm) son estructuras presentadas en la fase temprana del desarrollo colonial; tienen un extremo redondeado y el extremo opuesto ahusado, es un cuello anelídico (anélides) productor de nuevos aneloconidios. Los conidios son inicialmente hialinos y con el tiempo se tornan verde olivo. En la colonia madura, las estructuras predominantes son hifas septadas (> 6 µm de ancho), de pared gruesa y color marrón.

Item 01 02 03 04 Ítem 01

Azul de lactofenol

Paso 01

Descripción

Materiales y Equipos Tipo Descripción MAT Uniforme completo: Bata, Gorro, Guantes, Tapabocas MAT Láminas fijas de dermatofitos, cepas de dermatofitos. MAT láminas cubreobjetos y portaobjetos MAT Azul de lactofenol. Reactivos Descripción Procedimiento

Se toma un cultivo puro del hongo al cual se le quieren observar sus estructuras. – Se trabaja preferiblemente en una campana de flujo laminar, o bajo el mechero, utilizando tapaboca y guantes, ya que es necesario cumplir con normas de bioseguridad, porque la mayoría de los mohos son fáciles para diseminarse en el ambiente y por tanto representan un peligro para el operador. – En un portaobjeto se coloca una gota de azul de lactofenol. – Se toma una parte del hongo acerca el asa de platino a la parte más superficial de la colonia fúngica y con mucho cuidado se toca el cultivo – Luego se lleva al portaobjeto y se coloca justo sobre la gota de azul de lactofenol

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–. Se debe dejar actuar el colorante por 3 a 4 minutos aproximadamente. – Luego de este tiempo, ya la preparación está lista para ser observada al microscopio en aumento de 10X o 40X. – Las estructuras del hongo, por lo general, se observan teñidas de color azul, a excepción de los hongos dematiáceos que conservarán su coloración café característica de este tipo de hongos. Consulta 1. Realizar un cuadro comparativo con las características de los dermatofitos: T, mentagorphytes, T. rubrum, M. canis, M.gypseum. Bibliografía Arenas R. Micología médica ilustrada. Editorial Mc Graw Hill. Cuarta edición. Ciudad de México D.F., México. 2011. 417 pg. Bonifaz Alexandro. Micología médica básica. Editorial Mc Graw Hill. Quinta edición. Ciudad de México D.F. 2015 Koneman et al. Diagnóstico microbiológico Texto y atlas en color. 6° edición. Editorial Panamericana. Buenos Aires V. Ausina Ruiz, S. Moreno Guillén. Tratado SEIMC de enfermedades infecciosas y Microbiología clínica. Editorial médica Panamericana. Madrid, España. 2006. Vélez H., et al. Fundamentos de Medicina Enfermedades infecciosas. Corporación para Investigaciones biológicas. 6 a edición. Medellín, Colombia. 2003. 830 pg.

Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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CONSULTA SEMANA 6

1. Cuadro

comparativo

con

las

características

los

dermatofitos: T.metagorphytes, T.rubrum, M. gypseum Cuadro Comparativo T.mentagorphytes T.rubrum El complejo Es un hongo antropofílico Trichophyton que infecta principalmente a los mentagrophytes es un humanos dando lugar a grupo de hongos diferentes infecciones filamentosos hialinos superficiales. septados y queratinolíticos, perteneciente a la familia Arthrodermataceae. Las cepas típicas de T. El complejo T. rubrum son blancas y mentagrophytes cultivado en agar algodonosas en la superficie. Sabouraud glucosa La parte inferior de la colonia entre 6-7 días a 25suele ser de color rojo, aunque 30ºC, presenta colonias algunos aislados parecen más generalmente planas, amarillentos y otros más de color blanco o parduscos. crema, con textura pulverulenta, granulosa o aterciopelada y al reverso se observa con pigmento amarillento o café rosado a rojo café.

M. gypseum Es un dermatofito asociado al suelo que ocasionalmente se sabe que coloniza e infecta las capas superiores muertas de la piel de los mamíferos.

Sus colonias se describen como algodonosas o polvorientas, crecen rápidamente con una gama de colores de blanco a beige, con una reserva que puede variar de rosa, a rojo, a amarillo (canela); ocasionalmente pueden tener matices de violeta.

Microscópicamente se observan hifas hialinas, septadas y ramificadas, abundantes microconidios esféricos o semiesféricos, los cuales se producen solitariamente a lo largo de la hifa o en acúmulos que semejan racimos de uvas; esta disposición, así como la ramificación de los conidióforos en ángulo recto, es característica. También pueden observarse clamidoconidios esféricos, hifas en espiral, en raqueta y cuerpos nodulares. Los macroconidios presentan una pared delgada, en clava y son multiseptados.

Trichophyton rubrum crece lentamente en cultivo con escasa producción de microconidios en forma de lágrima o clavija lateralmente en hifas fértiles . Los macroconidios, cuando están presentes, tienen paredes lisas y tienen forma de maza angosta, aunque la mayoría de los aislamientos carecen de macroconidios

Macroconidios en un rango sustancial que puede presentarse como pedicelos cortos, terminales, solitarios, fusiformes, grandes, de paredes gruesas, lisos o rugosos.

El complejo T. mentagrophytes es el segundo agente etiológico aislado en dermatofitosis de piel y uña en humanos y animales.

Es la causa común de la mayor parte del pie de atleta, infecciones por hongos de las uñas, tiña inguinal y la tiña en todo el mundo.

La especie en sí infecta comúnmente a los humanos que están estrechamente vinculados a estas áreas debido al trabajo agrícola.

REFERENCIAS

Rivas, L; Mühlhauser, M. Complejo Trichophyton mentagrophytes. [En línea].

Disponible en: https://scielo.conicyt.cl/pdf/rci/v32n3/art09.pdf [Consultado el 27 de septiembre de 2020]. 2.

qWiki.

Trichophyton

rubrum.

[En

línea].

Disponible

en:

https://es.qwe.wiki/wiki/Trichophyton_rubrum [Consultado el 27 de septiembre de 2020]. 3.

Wikipedia.

Microsporum

gypseum.

[En

https://en.wikipedia.org/wiki/Microsporum_gypseum septiembre de 2020].

línea].

Disponible

[Consultado

en: de

CUADRO DE MICOSIS SUPERFICIALES

Micosis Piedra negra

Agente Causal Piedraia hortae

Tipo de Muestra Pelo

KOH

Micromorfología

Macromorfología

Hifas tabicadas, artroconidios, Colonias: blastoconidios. Negro verdosas, limitadas, acuminadas, lisas y aterciopeladas. Nódulos pigmentados de color café-ocre; las concreciones están formadas por tejido seudoparenquimatoso, constituido por hifas septadas de paredes gruesas que simulan artroconidios; es posible ver ascas fusiformes con dos o más ascosporas.

Piedra blanca

Trichosporon spp T. cutaneum T. inkin T. ovoides

Pelo

Pitiriasis versicolor

Malassezia Globosa Malassezia sympodialis y Malassezia furfur.

Escamas (tórax y brazos)

Tiña negra

Hortaea werneckii

Región palmar y pies (escamas)

Hifas septadas, ascas fusiformes con ascosporas

Colonias: levaduriformes, limitadas y cerebriforme.

húmedas, aspecto

Concreciones formadas por masas de filamentos tabicados y densas zonas de artroconidios, aunque en ocasiones también blastoconidios. Cúmulos de blastoconidios y i lamentos cortos, a lo que desde una perspectiva nemotécnica se ha llamado “albóndigas con espaguetis.

Blastoconidios, por lo general Colonias cremosas, blanco redondos o “globosos” y en amarillentas. ocasiones elongados (dependiendo de la especie)

Hifas tabicadas, abigarradas y ramificadas, en ocasiones con cúmulos de blastoconidios; escasamente se observan clamidoconidios.

Hifas dematiáceas tabicadas con ramificaciones frecuentes y de una anchura entre 1,5 y 3 micrómetros. También podemos ver la presencia de

Colonias: Al inicio son cremosas (levaduriformes) y luego se tornan filamentosas.

artroconidias alargadas en gemación.

Candidiasis Micosis causada por diversas especies de levaduras oportunistas del género Candid..

Es variable, ya que la candidosis puede presentarse en todas las partes del cuerpo

El material obtenido se coloca entre portaobjetos y cubreobjetos con un aclarante, de preferencia hidróxido de potasio (KOH) de 10 a 20%. Se pueden realizar también tinciones como Gram, Wright, Giemsa, PAS e incluso Papanicolaou. Al microscopio se observan grandes cúmulos de blastoconidios de aproximadamente 2 a 4 μm de diámetro y seudohifas cortaso largas e hifas, que determinan el estado patógeno y virulento de la levadura y confirman el diagnóstico .

y células proceso de

es un hongo diploide asexual (forma de levadura) y saprofito, de la familia de los sacaromicetos. Aspecto filamentoso.

Las diversas especies de Candida crecen en la mayor parte de medios de cultivo habituales, como son: Sabouraud agar, gelosa sangre, infusión de cerebro, corazón y extracto de levadura.

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Diagnostico de micosis superﬁciales grupo A Hecho con una pizca de ingenio ASBLEIDE KARINA 19 DE AGOSTO DE 2020 11:33

MARIANGEL BARRIENTOS UREÑA19171016 - JOSE ALEXANDER LASTRA HIDALGO 19171016 BIBLIOGRAFIA

1-TOMADO DEL LIBO DE MICOLOGIA CLINICA///C:/Users/josel/Downloads/Micologia%20Medica%20Basic a%20Alexandro%20Bonifaz.pdf

micosis superﬁciales Documento PDF PADLET DRIVE

CASOS CLINICOS - NICOLLE ANDREA VILLA DIAZ 19171015 - VIVIANA ALEXANDRA SANABRIA ARENAS 19171004 - YERSON ABEL MOTA BONILLA 19171042

CUADRO MICOSIS Documento PDF PADLET DRIVE

CASOS CLÍNICOS -Yeimi Sayago 19171020 -Paola Laguado 19171027

PDF- CASOS CLINICOS-MICO 28 SEPT Documento PDF PADLET DRIVE

Casos Clínicos Lucia Luzardo 19171049 Maily Useche 19171005

Cuadro Micologia Completo Documento PDF PADLET DRIVE

Cuadro Micosis Lucia y Maily Documento PDF PADLET DRIVE

Casos clínicos

Cuadro Clínico Estudiantes: Danna Villamizar C. Laura Cáceres C.

Angie Sirley Parada Julián Andrés Ramírez

cuadro micologia Documento PDF PADLET DRIVE

Cuadro mico Documento PDF PADLET DRIVE

Casos Clínicos INTEGRANTES: Isis Marieth Rozo Brayan Camilo Peñaranda

DANIELA PARRA Y SARA PAVA

cuadro semana 7 Documento de Word PADLET DRIVE

※※※※※※

CONSULTA SEMANA 7

Estudiar micetomas. Cuándo es un eumicetoma y cuándo un

actinomicetoma. Realizar un cuadro comparativo. Cuadro Comparativo Micetomas Es

una

Eumicetoma

enfermedad Es

infecciosa

una

Actinomicetoma. infección Es una enfermedad causada por una

local, crónica de la piel y de bacteria

anaerobia,

llamada

crónica y progresiva de los tejidos subyacentes Actinomyces israelii, la cual es un la piel, de los tejidos con tendencia a afectar organismo común, que normalmente subcutáneos

del los huesos.

hueso.

no causa enfermedad (no patógeno) y que se encuentra en la nariz y en la garganta

Los gránulos de la es causado por hongos La demostración de ramificaciones E.mycetomi, Madurella filamentosos

de hifas grampositivas de 0,5-1,0

grisea.

micrón de diámetro en un “gránulo”.

jeanselmi (macrosifonados),

tienen un color que tabicados, varía del marrón al pigmentados negro, mientras que los o negros y hialinos o de la A. boydii, A. blancos. madurae

brazilensis son de un color que varía del blanco al amarillo. M.

mycetomi

susceptibles

concentraciones de

son Los agentes causales Es

causado

las son de origen exógeno filamentosos y pueden ser hongos

aerobios,

por

actinomicetos

(microsifonados),

anfotericina B y que filamentosos

grampositivos; la mayoría de los

podrían obtenerse en (eumicetoma)

casos están comprendidos

Actinomadura y Streptomyces. En

suero.

griseofulvina ligeramente

menos

tres

medio

géneros:

mexicano

Nocardia,

los

dos

activa in vitro y ha sido

principales agentes etiológicos son

útil en los pocos casos

Nocardia

en que se ha utilizado.

Actinomadura madurae (8-10%).

brasiliensis

(85%)

Describa las Características de las células fumagoides y escleróticas y

de que patologías son diagnóstico.

Celulas Fumagoides La cromomicosis es una infección crónica de la piel y de tejido subcutáneo, predominante en miembros inferiores causada, sobre todo en el pie. En la mayoría de los casos es causada por hongos dermaticeos (de pigmentación oscura) y parasitarios de los géneros Fonsecaea pedrosoi, Phialophora verruscosa y Cladosporium carrionii. Se clasifican en: ●

Nodular o tumoral, la más prevalente.

●

Dermatitis verrucosa, vegetante o papilomatosa.

●

Cromomicosis elefantiásica por estasis linfática.2

●

Psoriasiforme o en placa.

●

Cicatrizal.

Las lesiones se caracterizan por mostrar nódulos, verrugosidades y atrofia, de evolución crónica. Una vez inoculado el hongo en su estado saprofito, tarda varias semanas a meses en aparecer en la piel una lesión en forma de placa eritematosa y asintomática que luego se vuelve verrucosa. En los tejidos, el hongo parasitario desarrolla una forma característica, diagnóstica y patognomónica llamados

corpúsculos fumagoides, células muriformes o cuerpos escleróticos de color pardo, las cuales son formas de adaptación para preservar una viabilidad muy prolongada.

La lesión progresa en absceso con tejido granulomatoso, de superficie irregular con hemorragias diminutas (visible como puntos negros), ulcerativo y no contagioso, muy similar en algunos casos a las heridas de micetomas, la leishmaniasis y la esporotricosis. Conforme pasan los años, las lesiones tienen tendencia a la cicatrización dejando áreas atrofiadas, hipopigmentadas de la piel y pueden causar deformaciones irreversibles e invalidéz parcial y localizada. Infecciones secundarias por bacterias pueden acompañar comúnmente a la micosis. El prurito y la intensa sensibilidad a la presión son los síntomas característicos de la cromomicosis.

Escleróticas Hongo dematiaceo: El término dematiáceo se aplica a hongos que producen un pigmento característico intrínseco. Las enfermedades causadas por hongos dematiáceos se dividen en dos grupos: cromomicosis (cromoblastomicosis) y feohifomicosis.

La cromomicosis se manifiesta al inicio como una pápula tipo verruga que crece con lentitud hacia una placa verrugiforme. Las lesiones pueden progresar hasta la ulceración con exudado o sin él. Con el tiempo, las lesiones se tornan secas y costrosas con un borde elevado, que puede ser serpiginoso. Con frecuencia las grandes placas presentan cicatrización central. En ocasiones, las lesiones se tornan pedunculadas y adquieren un aspecto en coliflor. Es característicamente rara la diseminación sistémica a sitios distales, aunque puede haber diseminación por autoinoculación o a través del drenaje linfático. Rara vez se ha observado una afección ampliamente diseminada a páncreas, hígado, intestino, ganglios linfáticos, meninges y cerebro.

La feohifomicosis puede ocurrir con un espectro amplio de afecciones clínicas. La feohifomicosis superficial es la más benigna y se encuentra en el estrato córneo o alrededor de la diáfisis del pelo. Como ejemplos de estos trastornos se encuentra la tiña negra y la piedra negra. Las enfermedades de la piel más invasoras que afectan capas no vivas de epitelio queratinizado incluyen las dermatomicosis y las onicomicosis. La queratitis micótica puede original daño corneal extenso y ceguera subsecuente. La afección subcutánea suele deberse a la inoculación directa de hongos a través de piel intacta. Son características las lesiones quísticas con paredes bien definidas y formación central de absceso, que en ocasiones rodea un cuerpo extraño, como una astilla.

La feohifomicosis invasora es una enfermedad que puede poner en peligro la vida y que ocurre de preferencia en huéspedes con alteraciones inmunológicas. La afección invasora localizada puede ocurrir en senos paranasales, vías respiratorias inferiores y hueso. La afección por especies Cladosporium, Curvularia, Bipolaris, Xylohypha, y Exserohilum son en especial propensas a invadir sistema nervioso central.

Describa el agente causal, muestra y técnica útil para diagnóstico de

Esporotricosis,

Cromoblastomicosis,

Eumicetoma, actinomicetomas.

rinosporidiosis,

loboicosis,

Micosis Esporotricosis

Agente Causal

Muestra

Sporothrix schenckii, incluye

Exudado el a

cual las seis

especies:

de El examen directo y las

lesiones,

tinciones convencionales

escamas,

no ayudan a observar las

S. fragmentos de

estructuras micoticas, sin

albicans, S. brasi-

Cromoblastomicosis

Técnica Diagnóstica

tejido,

o embargo el diagnóstico

liensis, S. globosa, esputo

por cultivo se considera el

S. mexicana, S. lurei

estándar de oro en esta

y S. schenckii.

micosis.

Fonsecaea pedrosoi

Escamas

Examen directo de KOH,

y Cladophialophora

Cultivo, biopsia, pruebas

carrionii

inmunológicas, radiografías y tomografías.

Rinosporidiosis

Rhinosporidium

Tejido

seeber

recolectado en directo con el tejido la biopsia

Se hace un examen macerado en KOH, Biopsia para obtener la muestra a estudiar y en el caso de esta micosis los cultivos no tienen importancia para su diagnóstico .

Loboicosis

Lacazia loboi

Fragmentos

Se realiza un examen

de tejido

directo de KOH para

obtenidos de

observar las levaduras y

la biopsia

una biopsia para poder extraer la muerta y analizarla.

Eumicetoma

Hongos negros

Fístula o

Toma de muestra de la

como Madurella,

biopsia

fístula del paciente,

Pyrenochaeta,

examen directo de KOH y

Exophiala,

si no se observan los

Leptosphaeria y

gránulos específicos de la

Curvularia; los más

micosis, se recurre a una

frecuentes son

biopsia.

Madurella mycetomatis y Madurella grisea; y hongosblancos como Pseudallescheria, Acremonium y Fusarium Actinomicetoma

Es causado

Fístula o

Toma de muestra de la

por actinomicetos i

biopsia

fístula del paciente,

lamentosos

examen directo de KOH y

(microsifonados),

si no se observan los

aerobios,

gránulos específicos de la

grampositivos; la

micosis, se recurre a una

mayoría de los

biopsia.

casos están comprendidos en tres géneros: Nocardia, Actinomadura y Streptomyces.

REFERENCIAS

Manualmsd. Micetoma.

[En

línea]. Disponible

en:

https://www.msdmanuals.com/es-ve/professional/enfermedades infecciosas/hongos/micetoma [Consultado el 3 de octubre de 2020]. 2.

Slideshare. Eumicetoma. [En

línea]. Disponible

en:

https://es.slideshare.net/jesus2450/eumicetoma62779868#:~:text=Se%20caracteri za%20por%20un%20aumento,del%20Orden %20Actinomicetales%20(actinomicetoma). [Consultado el 3 de octubre de 2020]. 3.

Pielorg. Actinomicetoma. [En línea]. Disponible en: https://piel-l.org/blog/wp-

content/uploads//2009/01/actinomicetoma-por-nocardia-sp1.pdf [Consultado el 3 de octubre de 2020]. 4.

Zuño

burstein

Cromomicosis:

epidemiológica en Latinoamérica *.

[En

Clínica

tratamiento;

línea]. Disponible

situación

en:

http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S172646342004000300008 [Consultado el 3 de octubre de 2020]. 5.

Ecured.

Hongodematiaceo. [En

línea]. Disponible

en:

https://www.ecured.cu/Hongo_dematiaceo [Consultado el 3 de octubre de 2020].

CUADRO DE MICOSIS SUBCUTÁNEAS

Micosis Esporotricosis

Agente Causal Sporothrix schenckii Micromorfología

Microconidios simpoduloconidios que nacen de conidióforo, con forma de “flor de margarita” (eritrosina 40X). Macromorfología

Aspecto membranoso, radiadas y de color blanquecino o beige desarrolla micelio aéreo y la colonia se hace acuminada.

Muestra Se realiza una punción en los nódulos cerrados con zona central reblandecida y de artritis purulenta del paciente. Exudado de las lesiones, escamas, fragmento de tejidos extraídos en la biopsia o esputo.

Dx Las tinciones y el examen directo no son útiles debido a que no se observan las levaduras y porque las tinciones convencionales hacen visibles a las estructuras micóticas; en cambio, las levaduras se resaltan con técnicas de inmunofluorescencia. Cultivo: Sabouraud agar y Sabouraud agar con antibióticos incubados a 28°C; las colonias aparecen en un tiempo promedio de cinco a ocho días. Biopsia:

Frotis de cuerpo asteroide

Frotis sanguíneo con múltiples levaduras Pruebas Inmunológicas: para identificar la presencia la formación de inmunocomplejo, de Ag/Ac, pruebas como fijación del complemento, aglutininas, precipitación, suelen emplearse.

Cromoblastomicosis

Fonsecaea pedrosoi y Cladophialophora Micromorfología

Escamas, la toma de muestra se hace recolectando las escamas por raspado con dos portaobjetos o con un bisturí y caja de Petri, o se realiza una biopsia.

Examen directo: Al microscopio se observa la forma parasitaria; las células muriformes o fumagoides (llamadas durante mucho tiempo erróneamente esclerotes de Medlar)

Fonsecaea pedrosoi, Hifas tabicadas con conidios elípticos 400 aumentos.

Cladophialophora: Hifas tabicadas con conidios conidios elípticos 400 aumentos. Macromorfología

A. Fonsecaea pedrosoi B. Cladophialophora Colonias de crecimiento lento, limitadas, vellosas, aterciopeladas, radiadas, con tonalidades verde oscuras o negras; en ocasiones pueden tener un ligero vello micelial

Cultivo: Se realizan sembrando las escamas en los medios de cultivo habituales como Sabouraud solo o más antibióticos agar, incubándose a 25-28°C. Biopsia:

A. Cumulo de células muriformes B. Células muriformes dentro de una célula gigante.

Lacaziosis (Lobomicosis)

Lacazia loboi

Se realiza con fragmentos de tejido obtenidos por cirugía o biopsia. El material colectado se macera con una pequeña cantidad de solución salina.

Examen directo: se observan levaduras de doble contorno y refringentes que miden de 5 a 6 por 12 a 14 μm de diámetro; pueden estar solas o formando cadenas de blastoconidio.

Biopsia: Se observan también células monogemantes, o que forman las típicas cadenas de blastoconidiosel PAS y el Grocott resaltan más las estructuras fúngicas.

Grocott

PAS Inmunología: tiene una baja relevancia en este tipo de micosis

Rinosporidiosis

Rhinosporidium seeberi

Fragmento de tejido extraído por biopsia ara visualización

Examen directo: se observa la forma parasitaria o esférula, que no es más que un esporangio de gran tamaño (300-350 μm de diámetro), con muchas endosporas (esporangiosporas) que miden de 7 a 10 μm de diámetro. Biopsia: En los cortes histológicos con tinciones rutinarias (hematoxilina y eosina) son muy visibles los esporangios, que miden desde 100 hasta 350 μm de diámetro, tienen doble membrana y gran cantidad de endosporas.

Esférula

Eumicetoma

Micromorfología: Causado por hongos filamentosos (macrosifonados), tabicados, pigmentados o negros y hialinos o blancos. Los agentes etiológicos quedan comprendidos en varios géneros, dentro de los que destacan: hongos negros como Madurella, Pyrenochaeta, Exophiala, Leptosphaeria y Curvularia; los más frecuentes son Madurella mycetomatis y Madurella grisea; y hongos blancos como Pseudallescheria, Acremonium y Fusarium, donde la especie que más se aísla es Pseudallescheria boydii. Macromorfología

Cultivo de M. grisea y M. mycetomatis. Colonia de micelio macrosifonado blanco amarillento

Se realiza mediante la selección de una de las fístulas activas; esto por lo regular es señalado por el paciente debido al prurito que le ocasiona; si la fístula está cerrada se debe abrir con la ayuda de una aguja de disección; es también de gran utilidad tomar las muestras mediante aspirado con aguja fina.

Examen directo:

Múltiples granos negros eumicéticos: a simple vista, examen directo y consistencia filamentosa (KOH) Cultivo: Sabouraud dextrosa agar o extracto de levadura agar; para los eumicetos Sabouraud agar más cloranfenicol Biopsia: biopsia por aspiración con aguja fina, la cual ofrece buenos resultados, por lo general en micetomas sin fístulas activas.

Grano eumicético negro (C. bantiana)

Eumicetoma blanco, con acercamiento de conformación filamentosa

Actinomicetoma

Micromorfología Causado por actinomicetos filamentosos (microsifonados), aerobios, grampositivos; la mayoría de los casos están comprendidos en tres géneros: Nocardia, Actinomadura y Streptomyces. Macromorfología

Examen directo:

Grano blanco amarillento de forma irregular Actinomadura madurae

Nocardia spp grano blanco o amarillento Actinomicetos: A N. brasiliensis; B N. asteroides; C A. madurae; D A. pelletieri. Grano rojo de A. pelletieri (KOH, 40X) Cultivo: Sabouraud dextrosa agar o extracto de levadura agar; para los actinomicetos se puede utilizar Sabouraud más actidione (cicloheximida) Biopsia: biopsia por aspiración con aguja fina, la cual ofrece buenos resultados, por lo general en micetomas sin fístulas activas.

Nocardia spp

Actinomadura madurae

A. pelletieri

Referencias Bonifaz Trujillo A. Micología médica básica (5a. ed.). Distrito Federal: McGraw-Hill Interamericana; 2015 Medigraphic. Actinomicetoma por Actinomadura pelletieri.[En línea]. Disponible en: https://www.medigraphic.com/pdfs/derrevmex/rmd2011/rmd114j.pdf [Consultado el 5 de octubre de 2020]. Johanna luna-hernández, janeth villanueva reyes, luis fernando balcázar. Lobomicosis: reporte de un caso. [En línea]. Disponible en: http://www.dermatologiaperuana.pe/assets/uploads/revista_qE84_a04v22n2.pdf [Consultado el 5 de octubre de 2020]. Ventura-Flores Roberto, Failoc-Rojas Virgilio, Silva-Díaz Heber. Cromoblastomicosis: características clínicas y microbiológicas de una enfermedad desatendida. Rev. chil. infectol. [Internet]. 2017 Ago [citado 2020 Oct 05] ; 34( 4 ): 404-407. Disponible en: https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0716-10182017000400404&lng=es. http://dx.doi.org/10.4067/s071610182017000400404.

PADLET

padlet.com/asbleka/d3isvrl9its71vey

Diagnostico micosis subcutaneas ASBLEIDE KARINA 24 DE AGOSTO DE 2020 00:26

Micosis Subcutáneas Isis Marieth Rozo 19171018 Brayan Peñaranda 19171035

Cuadro Micosis Subcutaneas Maily y Lucia Documento PDF PADLET DRIVE

Cuadro Micosis x2 Documento PDF PADLET DRIVE

Micosis subcutáneas

MICOSIS SUBCUTÁNEAS Danna Villamizar 19171030 Laura Caceres 19171029 Tomado de: Micología médica básica

Lucia Luzardo 19171048 Maily Useche 19171005

Cuadro micosis subcutaneas Documento PDF PADLET DRIVE

MICOSIS SUBCUTÁNEAS -Jhonny Mise 19171037

Angie Parada 19171009 Julian Ramirez 19171048

-Gisselle Galvis 19171028

CONSULTA NUMERO 7 Documento PDF PADLET DRIVE

Cuadro de micosis Documento de Word

Marlin Dávila (19171032) Jazmín Garcia (19171034)

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MICOSIS SUBCUTÁNEAS -Yeimi Sayago 19171020 -Paola Laguado 19171027

Micosis. Documento PDF PADLET DRIVE

Nicolle Villa / Viviana Sanabria / Yerson Mota MICOSIS SUBCUTANEAS Documento PDF PADLET DRIVE

Micosis subcutaneas Documento de Word PADLET DRIVE

Maynel Dariana Higuera-Maria Fernanda Rangel MICOSIS SUBCUTÁNEA referencias: 1. Eumicetoma. (2016). Slideshare. https://es.slideshare.net/jesus2450/eumicetoma-62779868 2. CAPÍTULO 101: Cromoblastomicosis. (s. f.). Acessmedicina. https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx? bookid=1538§ionid=102307231 3. Hongo dematiaceo. (s. f.). EcuRed. https://www.ecured.cu/Hongo_dematiaceo#:~:text=Las%20c%C 3%A9lulas%20escler%C3%B3ticas%20representan%20una,denom inan%20hongos%20%C2%A8negros%C2%A8. 4. scielo. (2004). Cromomicosis: Clínica y tratamiento; situación epidemiológica en Latinoamérica. http://www.scielo.org.pe/scielo.php? script=sci_arttext&pid=S1726-46342004000300008

DANIELA PARRA - SARA PAVA

consulta 7 micologia2 (1)

MICOSIS SUBCUTANEAS 05-10

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Yosimar Tapiero- Dariana Carrillo

Andres Ramirez Kelly Sandoval Micosis subcutáneas

MICOSIS SUBCUTANEA cuadro Documento PDF PADLET DRIVE

PHOTO-2020-10-05-08-50-24 2020-10-05 at 9.17.49 AM Documento PDF

Nicolle Contreras-Maryuri Jaimes

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Karen Gamboa- Daniela Rojas

Luis Jaimes 19171045 Cristian Orozco 191710 o

MICOSIS SUBCUTANEA.. Documento de Word PADLET DRIVE

MARIANGEL BARRIENTOS -JOSE ALEXANDER LASTRA

CONSULTA 7-CUADRO Documento PDF PADLET DRIVE

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GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formación 004 Versión: Código: UC-BAC-MCL-GL001

MICOLOGIA Enero 2020 Fecha:

Manual de calidad Pág. 13 de 36

son diagnóstico. 3. Describa el agente causal, muestra y técnica útil para diagnóstico de Esporotricosis, Cromoblastomicosis , rinosporidiosis, loboicosis, Eumicetoma, actinomicetomas. Bibliografía Arenas R. Micología médica ilustrada. Editorial Mc Graw Hill. Cuarta edición. Ciudad de México D.F., México. 2011. 417 pg. Bonifaz Alexandro. Micología médica básica. Editorial Mc Graw Hill. Quinta edición. Ciudad de México D.F. 2015 Koneman et al. Diagnóstico microbiológico Texto y atlas en color. 6° edición. Editorial Panamericana. Buenos Aires V. Ausina Ruiz, S. Moreno Guillén. Tratado SEIMC de enfermedades infecciosas y Microbiología clínica. Editorial médica Panamericana. Madrid, España. 2006. Vélez H., et al. Fundamentos de Medicina Enfermedades infecciosas. Corporación para Investigaciones biológicas. 6a edición. Medellín, Colombia. 2003. 830 pg.

Guía de Laboratorio: Tema:

7 MICOSIS SISTEMICAS PRIMARIAS Objetivo Identificar las estructuras características o especializadas de género y especie de hongo productor de micosis sistémicas primarias como la paracoccidioidomicosis, histoplasmosis, coccidiomicosis, blastomicosis ya sea en examen directo o en cultivo micológico. Fundamento En las micosis sistémicas, las esporas del hongo penetran por inhalación (coccidioidomicosis, histoplasmosis, paracoccidioidomicosis, blastomicosis), después ocurre colonización y, en la mayoría de personas de áreas endémicas, hay una infección pulmonar asintomática; en un porcentaje pequeño se produce micosis pulmonar primaria (neumonía aguda) que se acompaña de síntomas generales. Las micosis sistémicas tienen una distribución geográfica de predominio en áreas endémicas más o menos bien definidas. En la mayoría de los casos, los hongos patógenos penetran al organismo por vía aérea (inhalación), teniendo al pulmón como órgano blanco primario, también pueden afectar la piel o las mucosas, y las superficiales, extenderse hacia órganos profundos. En general las micosis son de evolución subaguda o crónica, pueden durar años o ser letales; como los hongos liberan pocas toxinas, no suele haber fiebre ni modificaciones sanguíneas. Se denomina fungemia a la demostración del hongo en el torrente sanguíneo. Sepsis fúngica se refiere a la persistencia o proliferación de un estado del hongo o sus productos en la sangre; dado que ocurre en ausencia de cultivo positivo, es difícil de demostrar en la práctica; describe una situación clínica Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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CLAUDIA MONTEJO

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GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formación 004 Versión: Código: UC-BAC-MCL-GL001

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encontrada con frecuencia pero no rigurosamente probada. Materiales y Equipos Item Tipo Descripción 01 MAT Uniforme completo: Bata, Gorro, Guantes, Tapabocas 02 MAT Láminas fijas. Consulta 1. Consultar Agente causal, las fuentes de infección, muestra y examen de diagnóstico de utilidad y hábitat de: coccidioidomicosis, histoplasmosis, paracoccidioidomicosis, blastomicosis. 2. Que es dimorfismo y en cuales de los hongos que ocasionan micosis profundas presentar este fenómeno. Bibliografía Bonifaz Alexandro. Micología médica básica. Editorial Mc Graw Hill. Quinta edición. Ciudad de México D.F. 2015 Koneman et al. Diagnóstico microbiológico Texto y atlas en color. 6° edición. Editorial Panamericana. Buenos Aires V. Ausina Ruiz, S. Moreno Guillén. Tratado SEIMC de enfermedades infecciosas y Microbiología clínica. Editorial médica Panamericana. Madrid, España. 2006. Vélez H., et al. Fundamentos de Medicina Enfermedades infecciosas. Corporación para Investigaciones biológicas. 6a edición. Medellín, Colombia. 2003. 830 pg.

Guía de Laboratorio: Tema:

8 Identificación de levaduras: Candidiasis, Cryptococosis, Rhodotorula

Objetivo Identificar las estructuras características o especializadas de género y especie de levaduras productor de micosis oportunistas por técnicas directas y cultivo. Fundamento La candidosis es una micosis causada por diversas especies de levaduras oportunistas del género Candida, en especial Candida albicans, presenta una variedad de cuadros clínicos, afecta en particular mucosas (boca, vagina, etc.), piel, uñas y de manera excepcional otros órganos como pulmones e intestino. Diversas especies de Candida son componentes de la flora habitual del cuerpo, se presentan desde los primeros días del nacimiento y tienen una gran predilección por las mucosas. Se encuentran en el tracto gastrointestinal, habitando boca, laringe y faringe; su número en estos sitios se puede incrementar por múltiples factores, por ejemplo la simple falta de aseo bucal; el estómago en general no es saprofitado porque presenta un pH demasiado ácido (entre uno y tres), en cambio coloniza intestina delgado y grueso, de aquí que en la materia fecal y en la región perianal es común encontrarla. La criptococosis en un micosis cosmopolita de curso subagudo o crónico, actualmente genera gran interés su estudio por su asociación con problemas del SNC en pacientes inmunosuprimidos. Los dos principales agentes etiológicos son Cryptococcus gatti y Cryptococcus neoformans que tiene dos variedades: grubii y neoformans . Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formación 004 Versión: Código: UC-BAC-MCL-GL001

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El hábitat de C.neoformans principalmente son: heces de paloma, frutos como durazno, arboles, atrios de iglesia, edificios entre otros. La toma de muestra para asilamiento del hongo dependerá del tipo de crptococosis, por lo general se maneja dentro de las muestras más frecuentes el LCR, esputo, exudados y biopsias. La Rhodotorula spp. es una levadura que coloniza humanos, puede hacer parte de microbiota normal de piel y mucosas y producir infecciones a partir de catéteres centrales. Rara vez produce cuadros pulmonares, infección de vías urinarias, meningintis y fungemias en inmunocomprometidos. Es común encontrarla a partir de aislamientos de lesiones de piel, sin embargo en la mayoría de los casos es considerada como contaminante. PRUEBAS PARA IDENTIFICACION DE Candida: RAPID YEAST PLUS: Es un sistema compuesto por un panel de 18 pocillos; cada uno contiene un sustrato convencional o cromogénico que detecta la asimilación de carbohidratos,ácidos orgánicos o aminoácidos, así como la hidrólisis de la urea y de ácidos grasos. Este es un sistema basado en la degradación de sustratos específicos que se evidencian mediante un sistema indicador. . FORMACION DE TUBO GERMINAL Esta pruba se basa en características morfológicas de la candida, el tubo germninal se forma producto de una prolongación de la celula madre y su longitud es tres o cuatro veces mayor que esta, Candida albicans se caracteriza por la formación de tubo germinales, sin embargo, otras especies como C. tropicalis pueden producir pseudohifas precoces de aspecto similar a los tubos germinales pero con una zona de constricción característica adyacente a la célula madre, por lo que esta prueba es útil para diferenciar C. albicans del resto de las especies de Candida, aunque no está exenta de falsos negativos. CROMOAGAR CANDIDA: El fundamento se basa en la detección de determinadas actividades enzimáticas por parte de las levaduras mediante la hidrólisis específica de un sustrato cromogénico en presencia de un indicador de la enzima. Una de las principales ventajas de estos medios es permitir diferenciar fácilmente los cultivos mixtos. Estos medios pueden ser utilizados como medios de aislamientos primarios o con fines de identificación, después del aislamiento de los organismos levaduriformes en los medios convencionales. TINTA CHINA El examen directo con tinta china es la forma más sencilla de hacer el diagnostico, En el caso de Cryptococcus, Los polisacáridos capsulares rechazan la tinta china y la cápsula aparece como un halo claro alrededor de los microorganismos. PRUEBA DE LATEX PARA Cryptococcus spp Incorpora el uso de partículas de latex sensibilizadas con anticuerpos monoclonales IgM murinos el antígeno CPS en el suelo o el LCR del paciente reacciona con las partículas de latex sensibilizadas y produce una reacción de aglutinación visible Materiales y Equipos Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formación 004 Versión: Código: UC-BAC-MCL-GL001 Item

Tipo MAT MAT MAT MAT MAT EQU

01 02 03 04 05 06 01 02 01 02 03 04

01 02 03 04 01 02 03 04 05 06 07 08 09

01 02 03 04 05 06

01 02

MICOLOGIA Enero 2020 Fecha:

Pág. 16 de 36 Descripción Uniforme completo: Bata, Gorro, Guantes, Tapabocas Láminas fijas Candida sp. Cultivos de Candida sp. Asas Tubos 12x75 Incubadora Reactivos

Cromoagar candida Suero humano Procedimientos 1: Tubo germinal Con asa recta, tomar una pequeña porción de la colonia, Introducirla en tubo estéril (12 x 75) que contenga 0.5 ml de suero humano fresco incubar a 37º durante 4 horas Tomar con asa redonda una pequeña cantidad de la suspensión y montarla para observación microscópica. Procedimientos 2: Cromoagar Con asa redonda , tomar una pequeña porción de muestras Sembrar por agotamiento incubar a 37º durante 24 a 48 horas Interpretar el color de crecimiento de acuerdo al inserto de la casa comercial Procedimientos 3: Prueba de látex En un baño serológico a 100°C caliente en LCR, durante 5 minutos Deje que la muestra se enfrié hasta llegar a temperatura ambiente Agite en un vortex la muestra Mezcle el látex. Dispense en contenido de una gota de látex en el círculo de la tarjeta de reacción. Adicione 50 landas de la muestra con la pipeta suministrada Mezcle con el extremo plano de la pipeta, deseche la pipeta después de este paso Coloque la tarjeta en el rotador y hágalo girar de 100-110 rpm durante 5 minutos Inmediatamente después de la rotación de 5 minutos incline el portaobjeto para obtener un patrón de flujo y examine minuciosamente el círculo en búsqueda de aglutinación, compare con el control Procedimientos 4: Tinta china En un porta objeto coloque una gota de LCR Adicione una gota de tinta china Mezcle Coloque el cubreobjeto Observe en microscopio en objetivo de 40X En muestras positivas, se evidencia la capsula del microorganismo así como el cuerpo de la levadura es importante buscar levaduras gemantes Procedimientos 5: Ureasa Marcar los tubos Tomar con un asa de la colonia correspondiente Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formación 004 Versión: Código: UC-BAC-MCL-GL001 03 04 05

MICOLOGIA Enero 2020 Fecha:

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Mezclar Incubar de 24 a 48 horas Leer e interpretar los resultados

Consulta 1. Que diferencias existe entre auxonograma y el zimograma y que importancia tienen estos en la identificación de Candida. 2. En que consiste la prueba de girasol y la prueba de CGB como se interpretan los resultados Bibliografia Arenas R. Micología médica ilustrada. Editorial Mc Graw Hill. Cuarta edición. Ciudad de México D.F., México. 2011. 417 pg. Bonifaz Alexandro. Micología médica básica. Editorial Mc Graw Hill. Tercera edición. Ciudad de México D.F. Koneman et al. Diagnóstico microbiológico Texto y atlas en color. 6° edición. Editorial Panamericana. Buenos Aires V. Ausina Ruiz, S. Moreno Guillén. Tratado SEIMC de enfermedades infecciosas y Microbiología clínica. Editorial médica Panamericana. Madrid, España. 2006. Vélez H., et al. Fundamentos de Medicina Enfermedades infecciosas. Corporación para Investigaciones biológicas. 6a edición. Medellín, Colombia. 2003. 830 pg.

Guía de Laboratorio: Tema:

8 Diagnóstico de Hongos filamentosos

Objetivo Identificar las estructuras características macroscópicas y microscópicas de los hongos filamentosos más comunes como productores de micosis humanas. Fundamento Es posible determinar determinar el género del hongo por las características macroscópicas de su crecimiento. La colonia filamentosa es evidente, sin embargo el examen microscópico es importante para la confirmación de este. Cada vez genera mayor importancia el estudio de los hongos filamentosos como causantes de micosis oportunistas especialmente en paciente inmunosuprimidos. Los exámenes directos, cultivos, biopsias, rayos X y topografías son entre otros lasa ayudas diagnosticas que pueden contribuir al diagnosticos de estas micosis, tanto el examen indicado como la muestra depende de la ubicación de la micosis. Algunos de los hongos filamentosos más frecuentes como productores de micosis son: Aspergillus fumigatus, A. flavus, A. niger, Fusarium spp., Alternaria spp, Curvularia spp Mucor spp. y Rhizopus spp. Materiales y Equipos Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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CLAUDIA MONTEJO

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Agente causal

Coccidioidomicosis Coccidioides immitis Coccidioides posadasii.

Histoplasmosis y Histoplasma capsulatum Capsulatum.

Abundantes hifas con gran cantidad de artroconidios, que se encuentran separados entre sí por una membrana delgada y clara llamada artículo Fuente de Vía de entrada (98%) es por Infección y conducto de la vía Habitad respiratoria, aunque existen casos cutáneos primarios que penetran a través de traumatismos. Habitad: zonas semidesérticas, tierras arcillosas y arenosas. Muestra

Examen diagnóstico

Paracoccidioidomicosis var. Paracoccidioides brasiliensis

Blastomicosis Blastomyces dermatitidis

Conidios digitiformes, en azul de algodón

Su vía de entrada es a través del aparato respiratorio, por la aspiración de las esporas o conidios; en contadas ocasiones penetran por vía cutánea (0.5% de veces, puede habitar en el suelo y detritus vegetal, pero en especial se ha aislado del guano proveniente de murciélagos, aves domésticas. Esputo, lavados bronquiales, Esputo, aspirado bronquial, exudados, escamas. exudados.

P. brasiliensis penetra por vía respiratoria, dando un cuadro asintomático o subclínico; más tarde se disemina a piel y otros órganos. El suelo ácido es particularmente importante para el desarrollo del hongo

KOH: Al microscopio se observan las estructuras parasitarias o esférulas, con las que se realiza el diagnóstico; tienen forma esférica con doble membrana; miden aproximadamente 20 a 70 μm de diámetro con endosporas promedio de 2-5 μm de diámetro.

Examen directo KOH al 10% o solución de Lugol, Blanco de calcoflúor y técnica de inmunofluorescencia: Al microscopio se observan levaduras multigemantes, compuestas por una célula madre de pared delgada (refringente), esféricas, ovales o elípticas, que miden entre 10-40 μm de diámetro y en ocasiones hasta 60 μm, con múltiples gemas de 2-6 μm dispuestas a su alrededor (desde 2

KOH: Es poco útil, debido a que las levaduras de H. capsulatum, var. capsulatum, son muy pequeñas e intracelulares y por lo general pasan inadvertidas. Biopsias: se observa en un inicio es la de una reacción inflamatoria con numerosos polimorfonucleares, macrófagos y células dendríticas, que contienen gran cantidad de levaduras intracelulares de H. capsulatum; más tarde se pueden

Exudado, esputo, lavado bronquial, líquido cefalorraquídeo y punción de médula ósea.

B. dermatitidis se ha aislado ocasionalmente del suelo y detritus vegetal; crece en zonas ribereñas de ríos y lagos; el hongo requiere alta humedad y un pH ácido (6.06.5), lo que le permite mantenerse latente durante los periodos invernales. Esputo, lavado bronquial, pus, exudado óseo, líquido sinovial, orina, líquido cefalorraquídeo, biopsias y aspirado de médula ósea. KOH o Lugol: Al microscopio se observan blastoconidios, monogemantes, de pared gruesa y refringente, que miden entre 8 y 15 μm de diámetro. La característica de estas estructuras radica en que la célula hija es casi del mismo tamaño que la madre y las divide un tabique de base gruesa y ancha; esta imagen se ha comparado a la de una “huella de zapato”.

presentar granulomas de células hasta más de 12) epitelioides y gigantes con zonas de necrosis. Azul de algodón: observándose las esférulas teñidas de azul, lo cual descarta algunos artefactos o falsos positivos (burbujas de Azul de algodón: aire)

Cultivo: agar Sabouraud y Sabouraud más antibióticos; deben sembrarse en tubos y nunca en cajas de Petri. Las colonias características son: blancas, vellosas, secas, ilimitadas.

Fase filamentosa

Fase levaduriforme Cultivo: Filamentoso: se pueden obtener dos tipos de colonias: A y B. La primera corresponde a una cepa blanca (A de albina) y la segunda es café-pardo (B del inglés brown); ambas tienen un aspecto velloso, limitado, surcado y seco. Azul de algodón: Levaduras multigemantes. Levaduriforme: al sembrar el material patológico en medios ricos como gelosa sangre, extracto de levadura o infusión cerebro-corazón (BHI), e incubarlos a 37°C, se generan colonias levaduriformes, pequeñas, blanco-amarillentas, Cultivo: limitadas. Fase filamentosa: Sabouraud y extracto de levadura agar incubados de 20a 26°C. Las colonias se desarrollan entre 20-30 días; son limitadas, de aspecto algodonoso, con cubierta de micelio corto, membranosas, rugosas y de color blanco amarillento; con el

Cultivo: Sabouraud dextrosa agar, papa-dextrosa agar y Sabouraud con antibióticos agar incubados a 28°C, se forman colonias filamentosas que se desarrollan con lentitud en un lapso de 1 a 2 semanas. Si se e incuba entre 35 y 37°C, lo que da colonias levaduriformes entre 15 y 30 días.

Biopsia: La imagen histológica demuestra una epidermis con acantosis moderada e irregular o que incluso forma Hiperplasia seudoepiteliomatosa; en dermis se ven granulomas compuestos por células gigantes multinucleadas, epitelioides y linfocitos; en el centro de esta imagen se

tiempo algunas cepas dan un encuentran las pigmento café difuso. monogemantes.

Fase Levaduriforme: Sabouraud y extracto de levadura agar, incubados a 37°C. Las colonias se desarrollan entre 10 y 15 días; son limitadas, de aspecto cremoso, rugosas o cerebriformes y de color blanco amarillento.

Biopsia: Es de gran utilidad para el diagnóstico, porque resalta las células multigemantes, en especial con tinciones de PAS y Grocott.

levaduras

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GUIA DE LABORATORIO Unidad de Formación 004 Versión: Código: UC-BAC-MCL-GL001 Guía de Laboratorio: Tema:

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9 Pruebas de sensibilidad antifúngica E test

Objetivo Definir la metodología para realizar pruebas de sensibilidad in vitro a los antifúngicos, mediante la técnicas comercial de E-test Fundamento

La técnica de E-test consiste en unas tiras de plástico inerte que incorporan un gradiente de concentración de antifúngico. Cuando se depositan sobre las placas de agar inoculadas con el microorganismo, el antifúngico difunde en el medio y tras una incubación a 35ºC, durante 24-48 horas para Candida spp. y 48-72 horas para C. neoformans y hongos filamentosos, se determina la CMI, que es el punto de intersección de la elipse de inhibición de crecimiento con la tira de E-test. El medio de cultivo recomendado es Mueller-Hinton con un 2% de glucosa. Materiales y Equipos Item

Tipo MAT MAT MAT MAT MAT MAT MAT EQU

01 02 03 04 05 06 07 08 01

Descripción Uniforme completo: Bata, Gorro, Guantes, Tapabocas Cepas de levaduras con subcultivos de no más de 48 horas

Agar Mueller-Hinton con un 2% de glucosa. Tiras de E-test con antifúngicos Escala de McFarland Tubos con solución salina esteril Isopos esteriles Incubadora Reactivos

Azul de lactofenol Procedimiento

02 03 04

05 06

Para Candida spp. preparar una suspensión al 0,5 McFarland en solución salina (0,85 % de NaCl) a partir de un cultivo de 24 horas en SDA. Para C. neoformans, preparar una suspensión al 1 McFarland en solución salina y a partir de un cultivo de 48-72 horas en SDA A partir de estas suspensiones, inocular las placas de agar con Un isopo con algodón sembrando en tres direcciones. Dejar secar 10-15 min para que se absorba el exceso del inóculo. Aplicar las tiras de E-test sobre la superficie del agar, bien manualmente o con el aplicador suministrado por la casa comercial, colocando 5 tiras si la placa es de 14 cm de diámetro y 2 si es de 9 cm, situando el extremo de mayor concentración del antifúngico hacia la parte exterior de la placa.

Se debe realizar incubación a 37ºC en aerobiosis durante 24-48 horas para Candida spp. y 48-72 horas para C. neoformans y hongos filamentosos. Lectura: En los azoles, la CMI es la concentración deantifúngico en el punto de intersección de la elipse de inhibición de crecimiento con la tira. En el caso de observarse colonias de menor tamaño en el interior de la elipse de inhibición de los azoles, no hay que tenerlas en cuenta para la determinación de la CMI. A veces, con algunos azoles, se observa doble halo de inhibición pero con colonias del mismo tamaño (grandes) en su interior, en este caso debe considerarse resistente. En el caso de observarse Elaborado por: ASBLEIDE KARINA ANGARITA SANCHEZ

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triple halo de inhibición, la CMI es la concentración donde las colonias cambian de tamaño. En el caso de la anfotericina B, toda colonia en el interior de la elipse de inhibición, independientemente de su tamaño, debe valorarse para la lectura de la CMI. Consulta 1. Como se realiza control de calidad a las pruebas Etest. Bibliografía

Procedimiento en Microbiología Clínica de la SEIMC nº 10 de “Seguridad en el laboratorio de microbiología clínica”, 2000. Arenas R. Micología médica ilustrada. Editorial Mc Graw Hill. Cuarta edición. Ciudad de México D.F., México. 2011. 417 pg

UNE-EN-ISO 15189-03. Medical Laboratories. Particular requirements for quality and competence. CLSI M44-A 2004. Method for Antifungal Disk Diffusion Susceptibility Testing of Yeasts. Approved standard.

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Como se realiza control de calidad a las pruebas Etest.

El E-test se considera como un método alternativo para el estudio cuantitativo de la sensibilidad antimicrobiana del que cabe destacar su sencillez y buena correlación con la técnica estándar de dilución en agar para el estudio de la CMI. El protocolo para preparar el inóculo es el mismo que para la difusión en disco. Siguiendo el método de difusión, una vez inoculado la placa de agar con el microorganismo, se coloca la tira de Etest sobre su superficie, produciéndose de forma inmediata una difusión del antibiótico desde el soporte hasta el agar, creándose de este modo a lo largo de la tira un gradiente exponencial de las concentraciones del antimicrobiano. Tras la incubación de las placas, se puede observar una zona de inhibición elipsoidal y simétrica. Después de la incubación la CMI será el valor obtenido en el punto en el que el extremo de inhibición intersecciona con la tira.

Preparación del inóculo: El inóculo estandarizado, se puede preparar suspendiendo colonias en solución salina estéril hasta alcanzar la turbidez de 0,5 de McFarland. Esta suspensión contiene 1-2x108 UFC/ml. Lectura de placas e interpretación: Después de 16 a 18 horas de incubación examinar cada placa y medir los diámetros de las zonas de inhibición. En medios suplementados con sangre, se deberá medir la zona de inhibición del crecimiento, no la zona de inhibición de la hemólisis.

Interpretación: Comparando los diámetros del halo de inhibición con las CMIs, y estableciendo las correspondientes rectas de regresión, se han fijado unos criterios para clasificar las cepas estudiadas. De esta forma se han fijado tres categorías: El

término sensible (S) indica que la infección ocasionada por la cepa para la que se ha determinado la CMI o su correspondiente halo de inhibición puede tratarse de forma adecuada empleando las dosis habituales de antimicrobiano, en función del tipo de infección y de la especie considerada. El término intermedio (I) indica que el halo de inhbición traducido en valores de CMI se aproxima a las concentraciones de antimicrobiano alcanzables en sangre o tejidos y que puede esperarse eficacia clínica en aquellas localizaciones en las que se alcanzan altas cocentraciones de antimicrobiano (p. ej. orina) o cuando se emplean dosis más elevadas de lo habitual. el término resistente se (R) refiere a aquellos microorganismos que no se inhiben por las concentraciones habitualmente alcanzadas en sangre/tejidos del correspondiente antimicrobiano, o a aquellos microorganismos en los que existen mecanismos de resistencias específicos para el agente estudiado en los que no ha habido una adecuada respuesta clínica cuando se ha usado como tratamiento el correspondiente antimicrobiano. Es necesario emplear cepas control para supervisar la exactitud y fiabilidad de la metodología, debido también al gran número de variables que pueden afectar los resultados y que se han descrito anteriormente. Las cepas que se utilizan para el control de calidad son las mencionadas en lasTablas Las cepas de control se mantienen en el congelador a –70ºC en alguno de los medios descritos para la conservación de cepas, con el fin de preservar su viabilidad y minimizar posibles modificaciones. Debe realizarse controles cada nuevo lote de medio de cultivo y cada nuevo lote de antibióticos. La cepa ATCC 29212 sirve para detectar que el Mueller- Hinton contiene los niveles correctos de inhibidores al ensayar el trimetoprim y/o sulfametoxazol. Los resultados normalmente quedan registrados en una libreta de Control de Calidad. El principio de este método es una expansión de la técnica de difusión en disco. En el método E-test determinar la concentración inhibitoria mínima (CMI). Consiste en una tira de plástico no poroso de 6 cm de largo por 5 mm de ancho que incorpora un gradiente predefinido de antimicrobiano equivalente a 15 diluciones. Tras la incubación de las placas, se puede observar una zona de inhibición elipsoidal y simétrica. Después de la incubación la CMI será el valor obtenido en el punto en el

que el extremo de inhibición intersecciona con la tira. Método Preparación del inóculo. El E-test se ha utilizado para determinar la CMI de diversos antibióticos en una amplia gamma de bacterias, incluyendo Helicobacter pylori, Corynebacterium spp., estreptococos nutricionalmente deficientes, enterococos con resistencia elevada a aminoglicósidos. Las cepas de control utilizadas serán las recomendadas por la NCCLS para la determinación de la CMI por métodos de dilución. Los valores de CMI esperados deberán estar comprendidos entre los rangos mencionados para cada antibiótico Resultados Interpretación. Como se ha observado una relación directamente proporcional entre los valores de E-test y los valores de referencia de la NCCLS obtenidos por dilución en agar, los puntos de corte de la CMIs serán apropiados para categorizar la bacteria estudiada como sensible, intermedia o resistente. Información. Si los resultados con la(s) cepa(s) utilizadas como control de calidad se encuentran dentro del rango aceptable, la información se realizará según los criterios aplicados a los valores de CMI obtenidos por los métodos de dilución.

Control de calidad de la prueba de sensibilidad: 

Se debe monitorear la precisión y exactitud del procedimiento de la prueba de susceptibilidad, el comportamiento de los reactivos utilizados en la prueba y el desempeño de las personas que llevan a cabo las pruebas y sus resultados.



Al hacer el control de calidad de discos, tiras de E-test o métodos de sensibilidad para sistemas automatizados o semi automatizados, se recomienda utilizar cepas ATCC. Cada nuevo lote de estos insumos debe evaluarse antes de su uso rutinario y luego una vez al mes, si no existe cambio de lote en ese periodo.

REFERENCIAS 1. Herrera Marco Luis, Campos Marlen. Control de la Calidad para un Laboratorio de Microbiología. Rev. méd. Hosp. Nac. Niños (Costa Rica) [Internet]. 2005 Jan [cited 2020 Nov 03] ; 40( 1 ): 09-15. Available from: http://www.scielo.sa.cr/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S101785462005000100002&lng=en 2. Seimcorg. Procedimientos en Microbiología Clínica. [En línea]. Disponible en: https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientos microbiologia/seimc-procedimientomicrobiologia11.pdf [Consultado el 3 de noviembre de 2020].