Materiales y equipos de laboratorio
SENA, Centro Para la Formaci贸n Cafetera 06/09/2015
MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO
Presentado Por: Luisa Fernanda Osorno Diana Lorena Ochoa JosĂŠ Alejandro Tunubala Presentado a: Laura Patricia Bermeo
SENA, Regional Caldas Manizales, Caldas 06/09/2015
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Tabla de contenido 1. ¿Qué es bioseguridad? ........................................................................................ 3 2. ¿Cuáles son las normas básicas de bioseguridad en un laboratorio de microbiología? ............................................................................................................ 3 3. ¿Cuáles son los equipos utilizados en el laboratorio de microbiología?. ............. 7 4. Materiales de laboratorio e implementos. .......................................................... 11 5. Principales reactivos usados en el laboratorio usos y para qué sirven. ............. 18
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1. ¿Qué es bioseguridad? La bioseguridad son las prácticas que tienen por objeto eliminar o minimizar el factor de riesgo que puede llegar a afectar la salud o la vida de las personas o puede contaminar el ambiente. 2. ¿Cuáles son las normas básicas de bioseguridad en un laboratorio de microbiología? Acceso a) El símbolo y signo internacional de peligro biológico deberá colocarse en las puertas de los locales donde se manipulen microorganismos del grupo de riesgo 2 o superior.
b) Sólo podrá entrar en las zonas de trabajo del laboratorio el personal autorizado. c) Las puertas del laboratorio se mantendrán cerradas. d) No se autorizará ni permitirá la entrada de niños en las zonas de trabajo del laboratorio.
Protección personal El personal y los usuarios de los laboratorios deben procurar en el laboratorio. a) Usar en todo momento trajes, batas o uniformes especiales para el trabajo en el laboratorio. b) Se usarán guantes protectores apropiados para todos los procedimientos que puedan causar contacto directo o accidental con sangre, líquidos corporales y 3
c)
d)
e)
f)
otros materiales potencialmente infecciosos. Una vez utilizados, los guantes se retirarán de forma aséptica y a continuación se lavarán las manos. El personal deberá lavarse las manos después de manipular materiales infecciosos, así como antes de abandonar las zonas de trabajo del laboratorio. Se usarán gafas de seguridad, viseras u otros dispositivos de protección cuando sea necesario proteger los ojos y el rostro de salpicaduras, impactos y fuentes de radiación ultravioleta artificial. Estará prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio, por ejemplo en cantinas, cafeterías, oficinas, bibliotecas, salas para el personal y baños. No se usará calzado sin puntera. g) En las zonas de trabajo estará prohibido comer, beber, fumar, aplicar cosméticos o manipular lentes de contacto. h) Estará prohibido almacenar alimentos o bebidas para consumo humano en las zonas de trabajo del laboratorio. i) La ropa protectora de laboratorio no se guardará en los mismos armarios o taquillas que la ropa de calle.
Procedimientos Por seguridad en los laboratorios todo el personal y los usuarios deben atender las siguientes recomendaciones: a) Estará estrictamente prohibido pipetear con la boca. b) No se colocará ningún material en la boca ni se pasará la lengua por las etiquetas. c) Todos los procedimientos técnicos se practicarán de manera que se reduzca al mínimo la formación de aerosoles y gotículas. d) Se limitará el uso de jeringuillas y agujas hipodérmicas, que no se utilizarán en lugar de dispositivos de pipeteo ni con ningún fin distinto de las inyecciones por vía parenteral o la aspiración de líquidos de los animales de laboratorio. e) Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a materiales infecciosos se comunicarán al supervisor del laboratorio. 4
f) Se elaborará y seguirá un procedimiento escrito para la limpieza de todos los derrames. g) Los líquidos contaminados deberán descontaminarse (por medios químicos o físicos) antes de eliminarlos por el colector de saneamiento. Puede ser necesario un sistema de tratamiento de efluentes, según lo que indique la evaluación de riesgos del agente con el que se esté trabajando. h) Los documentos escritos que hayan de salir del laboratorio se protegerán de la contaminación mientras se encuentren en éste.
Zonas de trabajo del laboratorio Para evitar incidentes o contaminación del personal, las zonas de trabajo deberán: a) El laboratorio se mantendrá ordenado, limpio y libre de materiales no relacionados con el trabajo. b) Las superficies de trabajo se descontaminarán después de todo derrame de material potencialmente peligroso y al final de cada jornada de trabajo. c) Todos los materiales, muestras y cultivos contaminados deberán ser descontaminados antes de eliminarlos o de limpiarlos para volverlos a utilizar. d) El embalaje y el transporte de material deberán hacerse de forma cuidadosa y en recipiente, embalajes adecuados. e) Las ventanas que puedan abrirse estarán equipadas con rejillas que impidan el paso de artrópodos.
Gestión de la bioseguridad Debido a la particularidad que pueden presentar los laboratorios en cuanto los microorganismos de trabajo, pruebas, equipos, barreras de contención y demás, es necesario que: a) El responsable del laboratorio deberá garantizar la elaboración y adopción de un instructivo de seguridad, el cual debe estar disponible en el laboratorio. b) El responsable del laboratorio o una persona designada deberá velar por que se proporcione capacitación periódica en materia de seguridad en el laboratorio especialmente al personal o usuarios nuevos. c) Se informará al personal de los riesgos especiales y se le exigirá que lea el instructivo de seguridad o de trabajo y siga las prácticas y los procedimientos normalizados. El responsable debe asegurar que todo el personal los comprenda debidamente. d) Habrá un programa de lucha contra los artrópodos y los roedores.
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Material de laboratorio Contar con material seguro en el laboratorio favorece la reducción del riesgo, cuando se trabaje con agentes biológicos que entrañen peligro. Para elegir el material de laboratorio habrá que cerciorarse de que responda a los siguientes principios generales: a) Que su diseño permita limitar o evitar los contactos entre el trabajador y el material infeccioso. b) Que esté construido con materiales impermeables a los líquidos, resistentes a la corrosión y acordes con las normas de resistencia estructural. c) Que carezca de rebabas, bordes cortantes y partes móviles sin proteger. d) Que esté diseñado, construido e instalado con miras a simplificar su manejo y conservación, así como a facilitar la limpieza, la descontaminación y las pruebas de certificación; siempre que se pueda, se evitará el material de vidrio y otro material rompible. Material de bioseguridad indispensable Algunos equipos o materiales son indispensables microorganismo, dentro de estos materiales están:
para
el
manejo
de
a) Dispositivos de pipeteo para evitar que se pipetee con la boca. b) Cámara de Seguridad Biológica CSB se utilizarán en los siguientes casos: Siempre que se manipule material infeccioso; ese material puede ser centrifugado en: El laboratorio ordinario si se utilizan vasos de centrifugadora con tapas herméticas de seguridad y si éstos se cargan y descargan en una CSB. Cuando haya un alto riesgo de infección transmitida por vía aérea. Cuando se utilicen procedimientos con grandes posibilidades de producir aerosoles, como la centrifugación, trituración, homogeneización, agitaciones o mezcla vigorosa, desintegración ultrasónica, apertura de envases de materiales infecciosos cuya presión interna pueda diferir de la presión ambiental, inoculación intranasal a animales y recolección de tejidos infecciosos de animales y huevos. c) Asas de siembra de plástico desechables. También pueden utilizarse incineradores eléctricos de asas dentro de la CSB para reducir la formación de aerosoles. d) Frascos y tubos con tapón de rosca. e) Autoclaves u otros medios apropiados para esterilizar el material contaminado
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f) Pipetas de Pasteur de plástico desechables, cuando estén disponibles, en sustitución del vidrio. g) Los aparatos como las autoclaves y las CSB deben ser validados con métodos apropiados antes de usarlos. A intervalos periódicos deben ser nuevamente verificados, de acuerdo con las instrucciones del fabricante 3. ¿Cuáles son los equipos utilizados en el laboratorio de microbiología? hacer descripción y fotos.
Mechero de alcohol o ron Sirve para calentar sustancias con alcohol o ron.
Mechero Bunsen Todas las manipulaciones deben realizarse en un radio de 10-15cm de la llama del mechero (zona aséptica). En caso de utilizar mechero nunca se debe coger material por encima de la llama Antes de comenzar a trabajar se procurará disponer de todo el material necesario para el procesamiento de la muestra Tomar las medidas necesarias para evitar la contaminación de las muestras o/ y cultivo por microorganismos ambientales
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Estufa de incubación Es una cámara de temperatura controlada para
cultivo
de
microorganismos.
Se utiliza para facilitar el desarrollo de los microorganismos a su temperatura óptima de crecimiento (generalmente 35-37º).
Frigorífico o cámaras refrigeradas
Se utilizan para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como microorganismos. Generalmente están a una temperatura fija de 4ºC.
Congeladores Se utilizan para la conservación de reactivos
y
microorganismos
a
temperaturas inferiores a 0ºC, llegando a 80ºC (los más frecuentes son -20º, -40º y 80º).
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Microscopio óptico El microscopio se emplea para aumentar o ampliar las imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. Se trata de un instrumento óptico que contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refracción.
Centrífuga Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza centrífuga lo que permite la separación de los distintos componentes de la muestra mediante la precipitación en el fondo del tubo de las partículas en suspensión.
Cámaras de flujo con sistema de filtros. Las cabinas de flujo laminar son ampliamente utilizadas
en
laboratorios
y
se
utilizan
generalmente para trabajar con cultivos y otras muestras que requieran un entorno limpio y estéril, presenta filtros de esta forma el área de trabajo es barrida
constantemente,
evitando
que
se
depositen partículas.
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Balanzas La balanza es un instrumento que sirve para medir la masa de los objetos, muestras, colorantes, componentes de medios de cultivo etc.
Agitador/ mezclador Un agitador, a veces llamado mezclador, es un dispositivo que se utiliza en los laboratorios a para mezclar líquidos o preparar disoluciones y suspensiones.
PH-metros El pH-metro es un sensor utilizado en el método electroquímico para medir el pH de una disolución.
Autoclave Es el equipo más utilizado. Es
un
procedimiento
de
esterilización
mediante calor húmedo. Se realiza en al autoclave durante 15 ó 20 min, según el volumen, a 115°C ó 121°C, según la naturaleza
del
material
que
se
desee
esterilizar.
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Horno de Pasteur Emplea altas temperaturas (160-180º C) durante un tiempo prolongado (1.5 a 3 horas). Debido a su poca capacidad de penetración se usa para esterilizar vidrio y metales. Actúa principalmente desnaturalizando las proteínas y secundariamente oxidando los compuestos celulares.
Contador de colonias Es un aparato que mediante la iluminación de la placa y una lupa, nos permite observar con mayor nitidez las colonias y por tanto facilita su recuento.
4. Materiales de laboratorio e implementos.
Placas de Petri Recipientes para la preparación de medios de cultivo sólidos
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Matraz erlenmeyer Se utiliza para mezclar disoluciones que, durante a mezcla, hay que agitar para que reaccionen más rápidamente.
Beaker Son utensilios que permiten calentar sustancias hasta obtener precipitados.
Balon Se usa principalmente en los procesos de destilación para calentar uniformemente muestras.
Fiolas Es un recipiente de vidrio que se utiliza sobre todo para contener y medir líquidos, se emplean en operaciones de análisis químico cuantitativo, para preparar soluciones de concentraciones definidas.
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Buretas con llave de paso Es una tuvo largo de vidrio, abierto por su extremo superior y cuyo extremo inferior, terminado en punta, estĂĄ provisto de una llave. Al cerrar o abrir la llave se impide o se permite, incluso gota a gota, el paso del liquido. El tubo esta graduado, generalmente, en decimas de centĂmetro cubico.
Tubos de ensayo Los tubos de ensayo son muy indispensables en el laboratorio, ya que nos permite las preparaciones, como guardado de cultivos, y podemos encontrar en diversos modelos.
Pipetas Son instrumentos para graduar o medir la cantidad de reactivo para una determinada muestra, existen variedades de pipetas, y son exactas y confiables para medir.
Laminas porta objetos Estas lĂĄminas, nos permiten utilizarlas para poder apreciar cultivos, en el microscopio, existen de diversos
tipos,
planos,
de
arrastre,
extremo
esmerilado, ondulado para ver muestras o cultivos vivos.
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Laminas cubre objetos Estas láminas, cubren a las láminas porta objetos, para que los cultivos, no puedan ser llevados por animalitos y causar daño.
Estiletes Son usados para poner los cultivos a las láminas y ser observados en el microscopio.
Buretas Se utilizan para medir a grandes cantidades, y son muy exactas y confiables para medir líquidos.
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Pipetas automáticas (micropipetas) y puntas de pipeta Se
utilizan
pipetear
para
pequeñas
cantidades de líquidos. Se utilizan con puntas desechables de distinto tamaño y color según la micropipeta. Existen cuatro tamaños: de 0,5-2µm; de 2-20 µm; de 20-200 µm y de 200-1000 µm.
Asas acodadas o Asas de Digralsky: Se utilizan para la extensión de microorganismos sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri.
Asas de siembra Se utilizan para sembrar. Pueden ser metálicas o de plástico, curvas o rectas (para la siembra por picadura).
Cucharas y espátulas Se utilizan para pesar muestras o medios de cultivo.
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Pinzas para tubo de ensayo Permite sujetar tubos de ensayo y si estos se necesitan calentar, siempre se hace sujetándolos con estas pinzas, esto evita accidentes como quemaduras.
Gradillas Una gradilla es una herramienta que forma parte del material
de
laboratorio
(principalmente
en
laboratorios de biología molecular, genética y química) y es utilizada para sostener y almacenar gran cantidad de tubos de ensayo.
Tubos de centrifuga Es un pequeño contenedor cilíndrico de plástico, con un fondo cónico y típicamente una tapa unida al cuerpo del tubo para evitar su desprendimiento. Son empleados profusamente en biología molecular y bioquímica no solo para la centrifugación, si no que, dado su bajo costo, se emplean a menudo como simples viales contendores de sustancias químicas.
Frasco Gotero Permite contener sustancias, posee un gotero y por esa razón permite dosificar las sustancias en pequeñas cantidades.
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Soporte universal Es un utensilio de hierro que permite sostener varios recipientes
TrĂpode Se utilizan para sostener materiales que van a ser sometidos a calentamiento.
EspĂĄtula Es un utensilio que permite tomar sustancias quĂmicas evitando que los reactivos se contaminen.
Rejilla Se utiliza para sostener utensilios que van a someter a calentamiento ayudando a tener un calentamiento uniforme.
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Papel Kraft Es un tipo de papel basto y grueso de color marrón, se suele usar como envoltura.
5. Principales reactivos usados en el laboratorio usos y para qué sirven.
Alcohol acido: El alcohol ácido se emplea para decolorar la fucsina fenicada en las bacterias:
Gram negativa Gram positivas BAAR positivas BAAR negativas
Alcohol Etílico: obtenido de la destilación de jugo de la caña de azúcar. Se usa para preparación de colorantes y como desinfectante de áreas de laboratorio Alcohol Para Mechero: Liquido incoloro sin presencia de partículas suspendidas ni precipitadas. Muy volátil e inflamable. Se usa en Mecheros de alcohol utilizados en laboratorio Fucsina fenicada: Solución Fenicada de fucsina empleada como colorante primario en la coloración de Ziehl Neelsen. Liquido color fucsia translucido sin presencia de partículas suspendidas, ni precipitadas. Fucsina de Gram: Solución de Fucsina básica en metanol y agua con fenol, para la coloración de Gram. Violeta de Genciana: Solución de Cristal violeta en agua alcohol para la coloración de Gram. Nigrosina: (Tinción negativa). Se trata de un colorante aniónico, que no penetra en el interior celular. Proporciona una visión de la forma y el tamaño celulares al observarse los microorganismos brillantes sobre un fondo oscuro. Alcohol cetona: El alcohol cetona se emplea para decolorar el cristal violeta en las:
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Gram negativa Gram positivas BAAR positivas BAAR negativas
Rojo de metilo: es un indicador de pH. Actúa entre pH 4,2 y 6,3 variando desde rojo (pH 4,2) a amarillo (pH 6,3). Por lo tanto, permite determinar la formación de ácidos que se producen durante la fermentación de un carbohidrato. Para usos de laboratorio, análisis, investigación y química fina Lugol de Gram: Solución de yodo yoduro en agua para la coloración de Gram Azul de Lactofenol: Liquido acuoso de color azul claro traslucido, ligeramente viscoso. La tinción de Azul de lactofenol se emplea para observar hongos. Es una tinción simple (un sólo colorante) y como tal está basada en la afinidad del colorante por componentes de las células, en este caso por las estructuras fúngicas. El azul de lactofenol tiene tres características que lo hacen especial para observar dichas estructuras en los hongos del tipo moho obtenidos en los cultivos por aislamiento. Azul de metileno (Tinción positiva). Permite teñir el interior celular. Tiñe microorganismos procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos sólo se tiñen si están muertos. Algunas estructuras, como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más intensamente con este colorante que el resto de la célula. Hidróxido de potasio al 20%: Solución de Hidróxido de Potasio en agua, para el reconocimiento de hongos
Hidróxido de sodio al 10%: Solución de Hidróxido de Sodio en agua, para el reconocimiento de hongos. Buffer de Giordano: Solución amortiguadora del pH para la coloración de Wright. Liquido incoloro sin presencia de partículas suspendidas, ni precipitadas. Safranina de Gram: Solución acuosa de Safranina, empleada como colorante alternativo en la coloración de Gram. Liquido Color rojo sangre sin presencia de partículas suspendidas, ni precipitadas. Decolorante de Gram: Mezcla de alcohol acetona en proporción 3:1 para la coloración de Gram. Líquido inflamable y muy volátil, manéjese con precaución y utilizando los elementos de seguridad en el laboratorio Xilol: Mezcla comercial de tres isómeros orto, meta y para xilenos, Se utiliza ampliamente como disolvente. Agua Amortiguada o Sales Amortiguadoras: Agua tamponada usada en la coloración de FIELD. El pH de la solución puede variar dentro del rango de 6,7 a 6,9. 19
Aplicar dos o tres mililitros a la lámina previamente fijada con la coloración de Gota Gruesa. Agua desionizada: Agua desionizada libre de minerales para uso en equipos de laboratorio o disolvente de reactivos se usa De acuerdo a la técnica de aplicación propia de cada laboratorio Azul de Metileno Fosfatado: Solución de Azul de Metileno con pH regulado para la tinción e identificación de hemoparasitos en una muestra biológica. Deterlab Alcalino: Detergente líquido biodegradable alcalino para lavado de material de vidrio de laboratorio. Ph 10 ± 1,0. Deterlab Neutro: Detergente líquido biodegradable y neutro para lavado de material de laboratorio con un pH de 7± 0.5. Solución “A: Solución de Azul de Metileno-Azure B con pH regulado para la determinación de hemoparasitos. Líquido de color azul intenso. Solución “B”: Solución de Eosina amarilla hidrosoluble con pH regulado para la determinación de hemoparasitos. Líquido transparente de color naranja-rojizo. Bibliografía BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO, universidad del valle, (Julio 2014) disponible en: http://gicuv.univalle.edu.co/documentos/documentos_laboratorios/lab_SI_hacen_ens ayos/material_consulta/Bioseguridad_Laboratorios_Julio.pdf Normas de seguridad en el laboratorio de microbiología, acceso (6 de septiembre del 2015), disponible en: http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_normas _de_bioseguridad.pdf Microbiología General y Bucal, (6 de septiembre del 2015), disponible en: http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/labv/LabMicro/pra ctica1.html Conocimiento de equipos y materiales de uso frecuente en el laboratorio de microbiología, (6 de septiembre del 2015), disponible en: http://es.slideshare.net/ELVISCHAVARRICHOLAN/conocimiento-de-equipos-ymateriales-de-uso-frecuente-en-el-laboratorio-de-microbiologia Microbiología y parasitología, universidad católica sato Toribio de Mogrovejo, abril del 2009, disponible en: http://es.slideshare.net/jcustodio91/guia-ii Laboratorios SAR LTDA, LABSAR, (6 de septiembre del 2015), disponible en: http://www.labsar.com/index.php?option=com_content&view=article&id=62&Itemid=2 6 20