UNIVERSIDAD DE COSTA RICA FACULTAD DE CIENCIAS AGROALIMENTARIAS ESCUELA DE AGRONOMIA AF-0109
PRACTICA 7 AISLAMIENTO E INOCULACION DE UN HONGO FITOPATOGENO HABITANTE DEL SUELO.
Introducción La mayoría de los cultivos provienen de semillas sexuales, a partir de los cuales se pretende obtener plantaciones uniformes, con una densidad adecuada, conformada por plantas sanas y vigorosas. Uno de los factores limitantes en el establecimiento de dichas plantaciones, es la enfermedad conocida como “mal de talluelo”.
Los síntomas dependerán del estado de
desarrollo de la planta en el momento en que se da el ataque. Se considera que existen dos fases: pre-emergencia, que es cuando las semillas o plántulas son atacadas y mueren antes de que la planta haya emergido del suelo; o en post – emergencia, que es cuando el ataque se da una vez que las plántulas emergen del suelo.
En este último caso, se observan lesiones
hundidas, de color rojizo en la base del tallo,
y con frecuencia, las plántulas se doblan y
mueren.
Si logran sobrevivir, las plantas adultas son débiles y presa fácil de otras
enfermedades. Existen varios hongos que pueden causar estos síntomas. Se considera que los más importantes son Pythium, Rhizoctonia y Fusarium. En un mismo suelo, puede presentarse uno o varios de ellos al mismo tiempo. La severidad de la enfermedad depende en gran medida, de las condiciones ambientales, especialmente temperatura y humedad, así como de la población del patógeno, la supresividad del suelo y el vigor y resistencia genética de la planta.
Para efectos de combate, es importante conocer el agente causal, ya que algunos de los fungicidas de semillas son selectivos a determinados géneros de hongos.
Por ejemplo, el
metalaxil es efectivo contra Pythium spp. y otros Oomycetes, pero no contra Rhizoctonia y Fusarium . Por otro lado, PCNB (pentacloronitrobenceno) combate algunos Basidiomycetes como Rhizoctonia , pero no Oomycetes como Pythium spp.
Objetivos 1) Demostrar la sintomatología típica de la enfermedad conocida como “mal de talluelo”. 2) Comprender el efecto de los tres factores formadores del complejo enfermedad en el desarrollo de una enfermedad radical. 3) Demostrar la capacidad de sobrevivencia y saprofitismo de un hongo habitante normal del suelo. Procedi miento Aislamiento Con anticipación a la práctica se prepararán varias hileras con suelo suelto, que será inoculado con el hongo Rhizoctonia solani.
Se sembrarán plantas de algodón o frijol como
hospedante sobre el terreno inoculado. Escoja entre al s plantas enfermas una que manifieste el síntoma típico de “mal de talluelo”, lávela para eliminar la tierra. Obsérvela cuidadosamente y haga una descripción del síntoma. Con ayuda de un bisturí esterilizado a la llama, proceda a cortar trocitos pequeños de la zona afectada , colóquelos en un plato de Petri con agua para lavarlos. Tome un poco de suelo de la zona donde sacó la planta enferma. Colóquelo en un beaker grande con agua y agite vigorosamente. Separe los trozos de materia orgánica que flotan en la superficie y con la ayuda de unas pinzas, colóquelos en otro beaker. Lávelos a presión con el agua del tubo.
Cada estudiante tendrá a disposición una bolsa con 4 platos de Petri, 2 con agar-agua (A.A.) y 2 con PDA más 4 gotas de ácido lá ctico. Poco antes de trasladar los trozos de tejido y la materia orgánica a los platos con medio de cultivo, colóquelos en un papel toalla para que se sequen. Tome 4 trocitos de la planta enferma y con una pinza desinfectada, transfiéralos a uno de los platos con A.A., en el otro plato coloque 6 trocitos de materia orgánica. Rotúlelos y guárdelos dentro de la bolsa. Rotule también la bolsa. Coloque los platos por incubar a una temperatura de 28ºC por 2-3- días. Pasado este tiempo revise los cultiv os. Con ayuda de su instructor, identifique cuál de los hongos que están creciendo corresponde a Rhizoctonia sp. Transfiera porciones de micelio a los platos de PDA acidificado que tenía preparados. Incúbelos nuevamente a 28ºC de 7 a 14 días. Inoculación Una vez que el hongo haya crecido en el PDA acidificado, tome una sección del micelio, obsérvelo al microscopio y dibújelo. Tome el plato y con ayuda de una espátula o similar, desmenuce el cultivo en trozos muy pequeños; luego mézclelo bien con suelo estéril. Deje una maceta testigo sin inocular. Una semana
después, siembre cuatro semillas de algodón o frijol
por maceta.
Asegúrese de
mantener una adecuada humedad en forma permanente, pero sin saturar el suelo. Luego de 2 a 3 semanas de sembradas las semillas, arranque las plantas, obsérvelas, dibuje y describa el síntoma presente. Arranque las plantas de la maceta testigo y compare. Discusión Describa el síntoma de donde se practicó el aislamiento. ¿Por qué utilizan pedazos de materia orgánica en la práctica? ¿Por qué se hace crecer el hongo primero en agar-agua y luego en PDA acidificado? Describa la forma de la colonia así como el micelio de Rhizoctonia .
¿Por qué se debe sembrar hasta 8 días después de inocular el suelo? ¿Qué efecto tiene la humedad en el procedimiento realizado? Razone si se cumplieron los postulados de Kock en el procedimiento realizado. Con base en los resultados obtenidos, indique si Rhizoctonia sp. es un parásito, un saprófito facultativo o su parásito facultativo. Derive las implicaciones agronómicas de los resultados obtenidos.