Créditos. Contenido
Editora. Melany Espinosa
Colaboradores. Marcela Muñoz. Fabián Carrión.
ESTIMULACIÓN
DE
ALGUNAS
ENZIMAS RELACIONADAS CON LA DEFENSA EN PLANTAS DE ARROZ
(Oryza
sativa,
DE
SEMILLAS
L.)OBTENIDAS
TRATADAS CON QUITOSANA CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS Y BIOQUÍMICAS DE FRUTOS DE CHINENE (Persea schiedeana Nees.) EMPLEO DE MARCADORES RAPD PARA
EL
ANÁLISIS
VARIABILIDAD GENOTIPOS
DE
LA
GENÉTICA
EN
DE
TOMATE
(Lycopersicon esculentum, Mill.)
EDITORIAL
La Bioquímica es una ciencia que estudia la composición química de los seres vivos, especialmente las proteínas, carbohidratos, lípidos y ácidos nucleicos, además de otras pequeñas moléculas presentes en las células y las reacciones químicas que sufren estos compuestos (metabolismo) que les permiten obtener energía (catabolismo) y generar biomoléculas propias (anabolismo). La bioquímica se basa en el concepto de que todo ser vivo contiene carbono y en general las moléculas biológicas están compuestas principalmente de carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno, fósforo y azufre.
ESTIMULACIÓN DE ALGUNAS ENZIMAS CON como la PAL, RELACIONADAS glucanasa, quitinasa y LA DEFENSA EN PLANTAS DE ARROZ (Oryza sativa, L.)OBTENIDAS DE quitosanasa en SEMILLAS TRATADAS CON QUITOSANA
RESUMEN. La aplicación de elicitores es
Plantas de arroz (varie- dad J-104). Se
uno de los métodos más
observó el mayor incremento de la
ecológicos y económicos para
actividad de estas enzimas en las
el
plantas tratadas con respecto al control.
control
de
plagas
y
enfermedades. La quitosana es un elicitor que tiene la capacidad
de
estimular
mecanismos defensivos en las plantas, las cuales van a conferir
resistencia
a
enfermedades. En el trabajo se presentan los primeros resultados logrados en Cuba en el empleo de elicitores quitinosos en el cultivo del arroz, en particular de la quitosana
obtenida
en
el
Departamento de Fisiología y Bioquímica Instituto
Vegetal
del
Nacional
de
Ciencias Agrícolas (INCA). Durante la investigación se determinó in vivo el efecto de este compuesto aplicado a la semilla, en la estimulación de algunas enzimas defensivas
ABSTRACT. The application of elicitors is one of the most ecological and economic methods for pest and disease control. The chitosan is an elicitor that stimulates defensive mechanisms in plants, which confer disease resistance. This work presents the first results obtained in Cuba by using chitinous elicitors in rice Crop, particularly the chitosan obtained in
the
Department
of
the
crop
Physiology and Biochemistry from the National
Institute
Sciences
of
(INCA).
investigation,
Agricultural During
the
effect
of
the this
compound applied to seed was in vivo determined, defensive
to
estimulate
enzymes,
such
as
some PAL,
glucanase, chitinase and chitosanase in rice plants (cv. J-104). The highest increment of enzymatic activity was recorded in treated plants-1
1
Key words: chitosan, seed, glucans,
Oryza sativa, defense mechanisms
INTRODUCCIÓN
defensivos en las plantas, lo cual brinda la
posibilidad
de
utilizar
estos
Los elicitores son moléculas de origen
principios activos en el control de
biótico,
estimular
enfermedades en cultivos de interés
mecanismos defensivos en las plantas,
económico. Este elicitor y sus derivados
que pueden ser aplicados de forma
han demostrado que con la aplicación
preventiva o directa a las plantas .
preventiva de estos a las plantas, se
capaces
de
Estas sustancias desencadenan en las plantas
una
defensivos,
serie
de
mecanismos
que
provocan
una
resistencia sistémica ante el ataque de los
patógenos.
disminución de los síntomas de la enfermedad. En este sentido, se ha demostrado que
mecanismos se incluyen el incremento
la quitosana aplicada a plántulas de
en la activación de enzimas tales como
tabaco y posteriormente infectadas con
la fenilalanina amonio liasa (PAL), la
Phytophthora parasítica se logra una
cual
de
inducción de la actividad de las
importantes,
enzimas PAL y glucanasa, además de
donde se destacan las fitoalexinas.
observarse protección . También en
También se inducen otras enzimas
hojas de maní se aplicó quitosana, se
defensivas entre las que se encuentran:-
infectó
1,3
observándose una estimulación en la
clave
metabolitos
en
la
defensivos
de
algunas de las enzimas defensivas, una
estos
es
Dentro
logra además de la estimulación en
síntesis
glucanasas,
quitinasas,
quitosanasas, entre otras.
de
galacturónico
y
glucano,
arachidis,
ácido
En cuanto al cultivo del arroz (Oryza sativa, L.) se puede plantear, que es el
cuanto a la quitosana se le ha prestado
alimento básico de más del 65 % de la
especial interés en los últimos años por
población mundial. En Cuba constituye
su doble efecto: inhibir el crecimiento
el 60 % de la dieta de los cubanos y la
micelial
hongos
demanda interna sólo se satisface
fitopatógenos y activar mecanismos
aproximadamente el 33 %. Una de las
algunos
(3).
disminución de las lesiones.
En
de
quitosana
Puccinia
actividad quitinasa y glucanasa y una
Entre los elicitores se encuentran los oligómeros
con
2
causas de los bajos rendimientos de este cultivo son los daños causados por enfermedades y en especial, las de origen fungoso, siendo en el estado de plántulas, entre los 25 y 35 días después de germinada la semilla, donde la planta
muestra
la
mayor
susceptibilidad. Las pérdidas oscilan entre un 10-30 %, pero su capacidad destructiva en condiciones favorables llega a ser hasta un 80 % (6, 7).
MATERIALES Y MÉTODOS
Resulta importante destacar, que una de las vías de transmisión de este patógeno es por semillas contaminadas, siendo el tratamiento a la semilla con fungicidas
químicos
uno
de
los
métodos más usado para el control de la piriculariosis, pero los mismos son muy costosos y tóxicos al ambiente.
Elicitor utilizado. La quitosana con grado de acetilación 36.5 % (Q-63), obtenida
en
el
Laboratorio
de
Oligosacarinas del Departamento de Fisiología y Bioquímica Vegetal del Instituto
Nacional
de
Ciencias
Agrícolas (INCA), por desacetilación alcalina de quitina de langosta, calidad
Toda esta situación conduce a la
farmacéutica (8). Estimulación de los
necesidad de utilizar nuevos métodos,
mecanismos
muchos más económicos y ecológicos,
quitosana.
que se unan a los tradicionales para el
variedad
control integrado de las enfermedades
desinfectadas con hipoclorito de sodio
fungosas. Teniendo en cuenta estos
al 3 % durante tres minutos y lavadas
antecedentes el objetivo del trabajo es
con
determinar la dinámica de algunos
tratadas con disoluciones de quitosana
indicadores de resistencia sistémica
a las concentraciones 100, 500 y 1000
inducida: fenilalanina amonio liasa, -1,3
mg.L-1 mediante imbibición durante 15
glucanasa,
minutos.
quitinasa
y
quitosanasa
agua
de Las
defensa semillas
J-104
por
la
de
arroz
después
de
destilada estéril,
Posteriormente,
fueron
fueron
estimulada por la quitosana en una
secadas a temperatura ambiente y más
variedad de arroz (J-104)
tarde sembradas en bandejas plásticas con suelo Gley Nodular Ferralítico
3
concrecionario
esterilizado
calidad bioquímica) se le adicionó 0,1
previamente durante una hora en auto-
mL de extracto enzimático, se incubó a
clave
días
40oC durante 30 minutos. La reacción
consecutivos. Se incubaron las bandejas
se detuvo con 0.25 mL de ácido
en
con
clorhídrico 5 N, se colocaron las
y
muestras en baño helado y se le
oscuridad (8 horas) a una temperatura
adicionó 5 mL de agua destilada. Los
de 22-24oC y a los 18, 25, 32 y 39 días de
valores de absorbancia se determinaron
germinadas
se
a 290 nm. Se definió como una unidad
determinaron las diferentes actividades
de actividad enzimática equi- valente a
enzimáticas: fenilalanina amonio liasa
la producción de 1 mmol de ácido
(PAL),
transcinámico producido por minuto
a
(9),
121oC,
cuarto
de
alternancia
de
tres
crecimiento luz
las
1,3
por
(16
horas)
semillas
glucanasa,
quitinasa,
quitosanasa, que se compararon con un
por mg de proteínas (10).
control (tratado con agua). Extracción de
enzimas.
El
material
vegetal
utilizado para la extracción fue hojas de arroz de las cuales se tomaron 2 g y maceraron en mortero con nitrógeno líquido. Se procedió a la extracción con una solución tampón de acetato de sodio 0.1 mol.L-1 a pH 5,2 para la determ
-
1,3 glucanasa, quitinasa y quitosanasa y para determinar la actividad PAL se utilizó
como
solución
tampón
tetraborato de sodio 0,1 mol.L-1 y ácido bórico 0.1 mol.L-1 a pH 8.8.
- 1,3 glucanasa. A 0.2 mL de sustrato laminarina 1 mg.mL-1 (Sigma para análisis) (11) se le adicionó 0,1 mL de tampón acetato de sodio 0.1 mol.L-1 a pH 5,2 y 0,1 mL de extracto enzimático, las muestras se incubaron a 40oC durante 30 minutos. Se determinó la actividad enzimática por medición del nivel
de
reductores
producción (12)
y
se
de
azúcares
expresó
en
términos de actividad específica como ìmol de glucosa producido minutos1.mg-1 de proteínas.
Para ambas extracciones se usó 1 g de tejido por cada 2 mL de solución tampón.
Determinación
de
las
actividades enzimáticas Determinación de la actividad PAL. Se tomó 0.9 mL de L-Fenilalanina
1
mg.mL-1
(Merck
4
Determinación
de
la
quitinasa.
este
ensa-
Para
actividad se
(13). Análisis estadístico. Se utilizó un
procedió adicionando 2 mL de tampón
diseño completamente aleatorizado y
de ácido cítrico 0,1 mol. L-1 e hidrógeno
con tres repeticiones por tratamientos.
fosfato de sodio 0,1 mol.L-1 pH 5,2 a 1
Las medias se compararon con el
mL de extracto enzimático y a un 1 mL
empleo
de quitina coloidal 0.5 % (Sigma con
Múltiples de Duncan para un 5 % de
fines
significación, así como se determinaron
analíticos).
Se
yo
de proteínas presente en los extractos
incubaron
las
de
la
de
los
con agitación continua. La reacción se
momento evaluativo. El experimento se
detuvo al calentarla a ebullición por 5
repitió
minutos. Se determinó el incremento de
coincidentes.
absorbancia a 420 nm. La actividad
dos
estándar
Rangos
muestras a 37oC durante 20 minutos
azúcares reductores (2) se leyó la
errores
prueba
veces
para
con
cada
resultados
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
enzimática se expresó como ìmoles de
La enzima PAL es una de las primeras
azúcares reductores por minuto por mg
que se activa en
de proteínas.
secundario y a partir de ella se
Determinación
de
la
actividad
el metabolismo
desencadena rápidamente una serie de
quitosanasa. A 0.5 mL de quitosana al
mecanismos
0.5 % en buffer de acetato de sodio 0,1
fenilpropanoides que da lugar a la
M a pH 5.2, se le añadió 0.5 mL de
síntesis de fitoalexinas, ligninas, ácido
muestra. La mezcla se incubó a 37oC
benzoico, ácido salicílico, siendo este
durante 24 horas, posteriormente para
último considerado una importante
detener la reacción se colocaron las
señal
muestras en baño María a 100oC
respuestas defensivas sistémicas (14,
durante cuatro minutos (2). Se leyó la
15). Los resultados de la actividad de la
absorbancia a 420 nm. La actividad
enzima PAL en plántulas de arroz
enzimática se expresó como moles de
provenientes de semillas tratadas con
azúcares reductores por minuto por mg
quitosana se muestran en la Figura 1.
en
la
como
la
vía
amplificación
de
de
los
las
de proteínas. En todos los casos se registraron las actividades específicas de las enzimas para ello se determinó la concentración
5
El
hecho
de
que
a
la
mayor
concentración de quitosana se encontró la
mayor
actividad
PAL
pudiera
explicarse teniendo en cuenta que a 1000 mg.L-1 la solución es más viscosa, por lo que debe adherirse mejor a la Como se puede observar, se apreciaron mayores niveles de actividad PAL en las plantas suplementadas con las diferentes dosis de elicitores que en el control, con diferencia significativa entre los tratamientos aplicados. Este comportamiento se mantuvo desde la primera evaluación realizada a los 18 días después de germinada la semilla
semilla y su liberación debe ser más lenta que el resto de las concentraciones cuya viscosidad es menor. Esto trae como consecuencia que las sustancias activas se mantengan más tiempo en contacto con las semillas y plántulas de arroz (16). En cuanto a los resultados de la actividad de la enzima-1,3 glucanasa se muestran en la Figura 2
de arroz y hasta los 39 días, tiempo en que se realiza la última evaluación. Se debe destacar que los mayores valores de actividad PAL se alcanzaron aproximadamente entre 0,12 y 0.14 µmoles
de
ácido
transcinámico
producido.mg-1 de proteínas.minuto-1 con la dosis de 1000 mg.L-1 para todas las evaluaciones, mientras que a las concentraciones de 100 y 500 mg.L-1 fueron
significativamente
inferiores,
aunque mejores que el tratamiento control. Los resultados sugieren que la tendencia al mayor incremento de la actividad PAL ocurre entre los 25 y 32 días, después de germinada la semilla.
La dosis 1000 mg.L-1 y en menor medida la de 500 mg.L-1 de quitosana fueron las que provocaron la mayor estimulación
enzimática,
con
diferencias significativas con el resto de los tratamientos. Se debe destacar que a los 25 días después de germinada la semilla
se
estimulación
alcanzó de
la
la
mayor
actividad−1,3
6
glucanasa para la concentración 1000
la enzima se produce con la dosis de
mg.L-1.
1000 mg.L-1 para todas las evaluaciones
Algunos
autores
(1),
en
trabajos
relacionados con la actividad de esta enzima ante la aplicación de quitosana, han observado un incremento de la actividad de la misma en el tiempo. Por ejemplo, en hojas de maní encontraron un
incremento
de
la
actividad
enzimática a partir del segundo día
y 500 mg.L-1 en la última evaluación, con diferencias significativas con el resto de los tratamientos. Se debe señalar que los mayores valores de actividad enzimática se encontraron a los 39 días después de germinada la semilla
de
arroz
para
todos
los
tratamientos.
después de la aplicación del elicitor y el máximo de inducción se mostró a los 10 días
después
embargo,
en
del
tratamiento.
otras
Sin
investigaciones
realizadas (4) se observó que a las 24 horas
después
del
tratamiento
a
plántulas de tabaco a través de la raíz, provocó un aumento de la actividad-1,3 glucanasa cuatro veces mayor respecto al control. En la Figura 3 se pueden apreciar los
CONCLUSIÓN
resultados de actividad quitinasa, otra
De forma general, se puede plantear
de las enzimas analizadas, en las
que las plantas obtenidas de semillas de
plántulas
de
arroz tratadas con quitosana a la dosis
semillas tratadas con quitosana. Como
de 1000 mg.L-1 lograron la mayor
se puede observar las plantas tratadas
estimulación en todas las actividades
con las diferentes dosis del elicitor
enzimáticas
mostraron
tividad
glucanasa, quitinasa y quitosanasa)
quitinasa que las correspondientes a las
desde los 18 hasta los 39 días después
plantas controles en la mayoría de las
de germinada la semilla. Por lo que se
evaluaciones realizadas. Cuando se
demostró la capacidad que presenta la
aplica la quitosana, se evidencia que la
quitosana de estimular la actividad de
mayor estimulación de la actividad de
algunas enzimas relacionadas con la
de
una
arroz
obtenidas
mayor
ac-
evaluadas
(PAL,-
1,3
7
defensa y que esta estimulación se
Shibuya, N. Oligosaccharide elicitors
diferencia en cuanto a la magnitud,
and their receptors for plant defense
rapidez en alcanzar los valores mayores
responses.
de actividad y la dosis utilizada. Lo
Glycotech, 2000, vol. 12, no. 64, p. 113-
cual sugiere, la posibilidad de que este
120
elicitor pueda ser empleado en la protección de plántulas de arroz contra algunos patógenos fúngicos.
Trends
in
Glycosc.
Ramírez, M. A.; Cabrera, G.; Gutiérrez, A. y Rodríguez, T. Metodología de obtención de quitosana a partir de quitina
de
langosta.
Cultivos
Tropicales, 2000, vol. 21, no. 1, p. 81-84. Cuba. MINAGRI. Instituto de Suelos. Nueva versión de clasificación genética de los suelos de Cuba, La Habana : AGROINFOR, 1999, 64 p. 10. Paz-Lago, D.
REFERENCIAS Sathiyabama, M. y Balasubramanian, R.
Chitosan
components
induces in
Arachis
resistance hypogaea
against leaf rust caused by Puccinia
Relevancia
fisiológica
de
la
enzimáticos. Cultivos Tropicales, 1999, vol. 15, no. 2, p.26-29. Paz-Lago, D.; Gutiérrez, A. y Luzardo, L.
Relevancia
biológica
de
la
arachidis Speg. Crop Protection, 1998, vol. 17, no. 4, p. 307-313.
activación de la resistencia sistémica del
Inui, H.; Yamaguchi, Y. y Hirano, S. Elicitor
actions
of
acetylchitooligosaccharides
Nand
tabaco inducida por la pared celular fúngica. Cultivos Tropicales, 1998, vol. 19, no. 3, p. 25-27
laminarioligosaccharides for chitinase and
L-phenylalanine
ammonialyase
induction in rice suspension culture. Biosci. Biotechnol. Biochem., 1997, vol. 61, no. 6, p. 975-978. Takeshi, Y.; Ito, Y. y
8
CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS Y BIOQUÍMICAS DE
FRUTOS DE CHINENE (Persea schiedeana Nees.)
RESUMEN. frutos fue caracterizado por una curva El chinene es un árbol frutal
simple sigmoide con un acumulado de
nativo de Mesoamérica y forma
1635.11 unidades calor arriba de 6 oC,
parte de la familia Lauraceae. Su
desde el amarre de fruto hasta la
consumo, como buena fuente
cosecha.
nutricional
es
reconocido
en
regiones tropicales de México y Centroamérica. poco
se
Sin
conoce
embargo, sobre
su
contenido nutrimental. Para ello, se llevaron a cabo análisis de ácidos
grasos
chinene
en
por
pulpa dos
consecutivos cromatografía
de años
utilizando de
gases.
Se
PALABRAS CLAVE ADICIONALES: Chinin,
ácido
oleico,
frutales
subutilizados, curvas de crecimiento del fruto, unidades calor, índice de cosecha.
ABSTRACT. Chinene
is
Mesoamerica
a
fruit
and
native
belongs
to
from the
obtuvieron concentraciones de
Lauraceae
ácido
palmitico
consumption is recognized as a good
parecidas a las encontradas en
nutritional source in tropical regions of
aguacate. Las concentraciones de
Mexico and Central America. However,
ácido oleico fueron comparables
little is known about its nutrient
con las del aguacate ‘Hass’. En
content. Lipid analyses of chinene fruit
otro
pulp were carried out during two
oleico,
estudio,
morfológicamente
y
se
midieron frutos
de
consecutive
family.
years
Chinene
using
pulp
gas
chinene provenientes de varias
chromatography. Oleic and palmitic
comunidades de la región central
acid concentrations were comparable to
de Veracruz, México. Resultó una
those found in ‘Hass’ avocado cultivar.
gran variación en tamaño, peso,
In other study, the chinene morphology
y contenido de pulpa. Asimismo,
from several locations of the central
el patrón de crecimiento de los
region
of
Veracruz,
Mexico,
was
measured. Large variation in size, weight and pulp content was found.
9
The pattern of fruit growth follow a
características
simple sigmoid curve with 1635.11
adecuadas para su comercialización en
accumulated heat hours above 6 oC
mercados
from set to harvest.
competencia comercial. En algunas
ADDITIONAL KEY WORDS: Chinin, oleic acid, neglected fruits, fruit growth curves, heat units, harvest index
la familia Lauraceae es un árbol frutal Mesoamérica
exigencia,
y
épocas del año el precio del chinene ha rebasado al del aguacate ‘Hass’ en mercados regionales de Veracruz y
El
El chinene (Persea schiedeana Nees.) de
de
mayor
Tabasco.
INTRODUCCIÓN
nativo
de
organolépticas
que
se
distribuye desde México hasta Panamá (Smith et al., 1992). Es poco conocido en las zonas urbanas, y su número se ha reducido debido al establecimiento de plantaciones de café y de otros cultivos en el estado de Veracruz.
árbol
del
chinene
tolera
inundaciones (Smith et al., 1992) por lo tanto ha sido estudiado para controlar enfermedades de la raíz del aguacatero (Zentmyer et al., 1988), sin embargo, los estudios
relacionados
con
las
características de los frutos de chinene son escasos. De manera que no se ha caracterizado el crecimiento del fruto y tampoco
se
ha
cuantificado
su
contenido nutrimental. Estudios de este
En México, también se le conoce como
tipo permitirían determinar indicadores
chinin, aguacate de manteca, escalar o
de madurez para eficientar la cosecha y
pagüa, y en Guatemala es chucte o
promover el consumo de esta fruta por
coyo. Asimismo, es nombrado como
sus cualidades culinarias.
supte y yas en Honduras y Costa Rica, respectivamente. Este árbol que se encuentra en algunas fincas cafetaleras, se aprovecha principalmente por la sombra que proporciona. A la fecha, no existen plantaciones comerciales de chinene (Herrera et al., 2005). Su fruto en México se consume untando la pulpa del fruto en tortillas de maíz. Se han observado frutos de chinene que presentan
pulpa
con
Los objetivos del presente estudio fueron:
1)
evaluar
parámetros
morfológicos en frutos de chinene comercializados en el mercado regional de
Coscomatepec,
Veracruz,
2)
determinar la curva de crecimiento del fruto y obtener las unidades calor como dos posibles parámetros de estimación de cosecha, 3) determinar el contenido
buenas
10 0
de ácidos grasos y fibra de la pulpa de
desde el 15 de abril de 2005 hasta la
los frutos.
cosecha. Debido a la caída de frutos ocasionada por el viento en las últimas
MATERIALES Y MÉTODOS
cuatro mediciones sólo se midieron 50 frutos en tres árboles. Para calcular la
Variabilidad de calidad del fruto
velocidad de crecimiento se utilizó la Frutos de chinene con madurez de
fórmula de Schechter et al. (1993): VCF
consumo
de
= ( TF2 – TF1 ) / ( T2 – T1 ) Donde: VCF
Coscomatepec, Veracruz, provenientes
= Velocidad de crecimiento de la
de los municipios de Calcahualco,
longitud
Comapa, Córdoba, Excola, Fortín de las
(mm.día-1); TF2 = Tamaño de fruto en
Flores, Ixhuatlán del Café, Tepatlaxco y
un tiempo 2 (diámetro o longitud en
Tomatlán
en
mm); TF1 = Tamaño de fruto en el
agosto del 2004. A cada uno se les
tiempo 1 (mm); T2 = Tiempo del último
determinó: peso fresco (g), diámetro
registro (lectura 2) en días; y T1 =
(mm)
Tiempo del registro anterior al último
en
fueron
proximal,
el
mercado
seleccionados
medio
y
distal,
longitud (cm), peso de la semilla (g),
y/o
diámetro
del
fruto
(lectura 1).
peso de la pulpa (g), peso de la cáscara (g), y diámetro y longitud de la semilla
Determinación de unidades calor
(cm). Con estos datos, se efectuó un
Las unidades calor (uc) con relación al
análisis canónico discriminante (Cruz-
ritmo de crecimiento del fruto también
Castillo et al., 1997) utilizando el
fueron determinadas para obtener un
programa de computo SAS-8e.
estimado de madurez y momento de
Dinámica de crecimiento del fruto e
corte. Éstas fueron consideradas como
índice de madurez
la cantidad de temperatura acumulada medida en grados centígrados que
A una semana del amarre, un total de
necesita el fruto para completar su
300 frutos promediando 10 mm de
cosecha.
longitud fueron seleccionados al azar
Las
temperaturas
fueron
obtenidas cada 30 min diariamente con
en la parte media de cinco árboles que
un sensor Dataloger™ que fue colgado
medían 14 m de altura con una edad
dentro de un árbol a unos 8 m de
aproximada de 20 años. Semanalmente
altura. El total de los datos fue
se registró la longitud y diámetro (mm)
promediado por día y la suma de todas
del fruto utilizando un vernier digital,
las temperaturas promedio superiores a
11 0
6 °C fue expresada como la cantidad de
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
uc requeridas para el crecimiento de frutos medidos, de acuerdo con el método residual de Ortiz (1987). Frutos tropicales almacenados abajo de 6 oC presentan daños por frío (Kasmire y Thompson, 1992), por esta razón se escogió esa temperatura para obtener las uc. Los valores promedio de lecturas tomadas
semanalmente
para
las
variables de longitud y diámetro de fruto fueron graficados en función del tiempo, calculando la media y el error estándar con ayuda del programa estadístico de cómputo Sigma Plot 10.0 (Systat software Inc., 2002). Análisis nutrimental Fueron seleccionados seis frutos de chinene con cáscara verde y seis con cáscara negra colectados en Huatusco, Veracruz, y otros seis con cáscara verde colectado en Teapa, Tabasco a los cuales se les extrajo la pulpa para
Variabilidad de calidad del fruto En el Cuadro 1 se muestran los promedios
de
todas
las
variables
medidas sobre los frutos. Se observaron frutos con longitudes de 11 hasta 16.2 cm. Los diámetros distales del fruto fueron desde 51.6 hasta 60.8 mm, y el peso de los frutos varió de 160.1 hasta 254.7 g. Los frutos del mercado regional de
Coscomatepec
municipios
provenientes
ubicados
en
la
de
región
central del estado de Veracruz fueron diversos.
determinar el contenido de ácidos
Las
primeras
cuatro
funciones
grasos y fibra.
canónicas fueron significativas (P≤0.05) y cubrieron el 88 % de la variabilidad de los datos. Éstas fueron interpretadas considerando los
valores
absolutos
mayores para cada variable medida y municipio dentro de la función (CruzCastillo et al., 1997). La
primera
función
canónica
comprendió 34 % de la variabilidad y
12 0
resaltaron frutos de mayor longitud de
distinguieron en este aspecto (Cuadros
semilla (Cuadro 2). Frutos de color café
1 y 3). Frutos pequeños con poca
y negro de comunidades en Tepatlaxco
longitud y peso destacaron en la
y Tomatlán, respectivamente, fueron
función cuatro que cubrió solamente el
los mejores descritos por esta función
10 % de la variabilidad (Cuadro 2), y los
(Cuadro 3). En contraste, los frutos
verdes de Comapa alcanzaron el mayor
verdes de Comapa presentaron semillas
valor medio absoluto (Cuadro 3) con un
con menor longitud (Cuadro 3). Esto
peso de 163.3 g y una longitud de 12.7
indica que los frutos estudiados no
cm (Cuadro 1). Estos resultados son
llegaron al mercado con parámetros de
útiles para futuros estudios donde se
valor comercial. Cuando se caracteriza
considere
la calidad del fruto y existe una previa
chinene para mejoramiento genético, ya
selección de árboles por tamaño y/o
que a la fecha no existen cultivares de
peso del fruto, las primeras funciones
chinene registrados.
resaltan estas variables (Cruz-Castillo et al., 1997; Alavéz-López et al., 2000). Los frutos de chinene estudiados fueron
seleccionar
árboles
de
Dinámica del crecimiento e índices de madurez del fruto
cosechados de árboles propagados por
El crecimiento del fruto de chinene fue
semilla creciendo en forma silvestre o
de tipo simple sigmoidal (Figura 1).
en traspatios y una variable de poca
Curvas de crecimiento de este tipo
importancia comercial como la longitud
también han sido determinadas en el
de la semilla ocupó gran parte de la
aguacate (Schroeder, 1953; Blumenfeld
variabilidad de los datos.
y Gazit, 1974; Coger, 1985). Esta curva
En la segunda función canónica se presentaron principalmente frutos de menor peso con un diámetro distal sobresaliente (Cuadro 2), y los frutos de Tepatlaxco alcanzaron los mayores valores medios estandarizados (Cuadro 3). En la tercera función, destacaron frutos de mayor peso asociados a un alto peso de su cáscara (Cuadro 2) y los frutos
negros
de
Calcahualco
se
se
caracterizó
por
un
crecimiento
acumulado que presentó una actividad inicial alta y cambios significativos constantes entre lecturas, marcando un aumento rápido y progresivo en la longitud y diámetro hasta los 91 días después del amarre de fruto (DDAF). Este crecimiento acelerado disminuyó alrededor del día 84 DDAF y 91 DDAF, para las variables longitud y diámetro respectivamente (Figura 1).
13 0
fases
de
crecimiento
y
a
la
susceptibilidad de éstas con el medio ambiente. La tasa de crecimiento del fruto de chinene coincidió con la del aguacate ‘Pinkerton’ (Sippel et al., 1993).
En la Figura 2 se muestra la velocidad o tasa de crecimiento diario de frutos de chinene.
La
tasa
aumentó
rápidamente
primeros
días
DDAF),
seguido
de
de
crecimiento durante
desarrollo por
una
los (0-21 leve
disminución (28 DDAF), para después continuar acelerando hasta alcanzar cierta estabilización en la velocidad de crecimiento en los días subsecuentes (42-97 DDAF). Este comportamiento puede atribuirse a que el aumento de la velocidad de crecimiento es ocasionado por la división y elongación celular en los
periodos
iniciales
de
fruto
(Schroeder, 1953; Schechter et al., 1993). Mientras que la ligera disminución señalada arriba puede ser efecto de competencia de carbohidratos con otros frutos (Köhne y Schutte, 1991) o por influencia del medio ambiente (Ryugo, 1993). Esta curva es útil cuando se pretende maximizar el entendimiento de
los
procesos
de
división
y
elongación celular con relación a las
CONCLUSIÓN La morfología de frutos de chinene en varias regiones de Veracruz es diversa en cuanto a longitudes de la semilla, peso y diámetro distal. El patrón de crecimiento de los frutos de chinene corresponde al tipo simple sigmoidal. El punto de madurez fisiológica de los frutos de chinene es entre 91 y 97 DDAF. Por otra parte, durante la fase comprendida entre el amarre de fruto y el momento de madurez (97 DDAF) el fruto requirió un acumulado de 1635.11 unidades
calor.
En
dos
años
consecutivos los análisis de ácidos grasos
del
chinene
revelaron
14 0
concentraciones de ácidos oleico y
BLUMENFELD, A.; GAZIT, S. 1974.
palmítico
Development of seeded and seedless
comparables
a
las
del
avocado fruits. J. Amer. Soc. Hort. Sci.
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AGRADECIMIENTO
BOWER, J. P. 1985. The calcium Al
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Nacional
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Fitogenéticos de la SAGARPA, México,
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por el financiamiento del presente
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Research Symposium. pp. 143-155.
Memorias (CD-ROM).
EMPLEO DE MARCADORES RAPD PARA EL ANÁLISIS DE LA VARIABILIDAD GENÉTICA EN GENOTIPOS DE TOMATE (Lycopersicon esculentum, Mill.) RESUMEN. Palabras
clave:
Lycopersicon
En el Centro Nacional de Sanidad
esculentum,
Agropecuaria
marcadores genéticos, RAPD
(CENSA),
sembraron
en
semicontroladas
se
condiciones seis
posibles
radiomutantes de tomate con sus respectivos donantes, con el objetivo de evaluar la variabilidad genética de estos mediante el empleo de marcadores
RAPD.
Los
14
cebadores utilizados generaron 80 bandas polimórficas, determinando un
total
de
90
bandas.
Estos
resultados sugieren la existencia de una gran diversidad genética dentro del
material
diferenciándose
analizado, molecularmente
cuatro genotipos de sus respectivas variedades donantes.
variación
genética,
ABSTRACT. In the National Center of Agricultural Health
(CENSA),
seeds
from
six
possible tomato radiomutants with their respective donating varieties were sown in glasshouses, with the objective of evaluating their genetic variability by means of RAPD markers. The 14 primers
used
generated
80
polymorphic bands, determining a total of 90 bands. These results suggest the existence of a great genetic diversity inside
the
analyzed
material,
molecularly differing four genotypes from their respective donating varieties. Key words: Lycopersicon esculentum, genetic
variation,
genetic
markers,
RAPD
INTRODUCCIÓN
variedades de esta hortaliza, a través de programas de mejoramiento genético,
Ha sido demostrada la importancia
para su adaptación a las condiciones
de los marcadores morfológicos y
climáticas. Sin embargo, los marcadores
bioquímicos (1, 2) en la evaluación
morfológicos y bioquímicos no son
de las diferencias entre genotipos de
capaces
tomate, para la discriminación de
polimorfismo
de
detectar entre
suficiente
variedades
o
especies próximas, debido a que son
16 10
resultados de la expresión genotípica,
I) en cajuelas con suelo Ferralítico Rojo
del ambiente y de la interacción entre el
esterilizado, mantenidas en casa de
genotipo y el ambiente (3), por lo que es
cristal en condiciones semicontroladas a
imprescindible
la
temperatura de 230C +/- 20C y a una
la
humedad relativa entre 80-85 %, con un
mayor
caracterizar
acuciosidad
con
posible
diversidad genética que presenta cada
fotoperíodo
natural
en
el
Centro
colección. Los avances de la tecnología
Nacional de Sanidad Agropecuaria
del ADN recombinante han permitido
(CENSA)..
el desarrollo de los marcadores basados en el ADN, consiguiendo estabilidad en la
identificación
de
especies
y
variedades (4). En este sentido, un método muy efectivo es la aplicación de marcadores moleculares como RAPD, RFLP, AFLP, etc., que suministran un buen diagnóstico sobre la estructura de las poblaciones silvestres o sobre la diversidad
de
colecciones
A los 30 días de germinadas las
establecidas (5). En el presente trabajo
semillas, se tomaron las hojas jóvenes y
se emplearon los marcadores RAPD
se realizó una extracción de ADN (6) a
con el objetivo de corroborar si los
todo el material vegetal mencionado
genotipos seleccionados, por su alto
anteriormente. La calidad del ADN se
potencial productivo en condiciones de
constató
bajos
se
extractos en geles de agarosa al 0.8 % y
de sus
solución amortiguadora de corrida TBE
suministros
diferencian
las
de
agua,
molecularmente
respectivas donantes
MATERIALES Y MÉTODOS
por
electroforesis
de
los
0.5X (45mM Tris-Borato, 1mM EDTA pH 7), teñidos con bromuro de etidio (5 mg.mL-1)
y
observados
en
un
Las semillas de los genotipos de tomate
transiluminador (Bioblock Scientific).
seleccionados en condiciones de bajos
La concentración se estimó por la
suministros de agua en el Instituto
medición de la densi- dad óptica a 260
Nacional de Ciencias Agrícolas (INCA),
nm en un espectrofotómetro Ultrasepec
se colocaron conjuntamente con sus
Plus
respectivas variedades donantes (Tabla
LKB.
Spectrophotometer
Pharmacia
17 0
La reacción de amplificación se realizó en un volu- men total de 25 uL que contenía: 10 mM Tris-HCl a pH 8,3;
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
50mM KCl, 2mM MgCl2, 0.001 % de
A partir del análisis molecular basado
gelatina, 100uM de cada dNTPs , 5
en los 14 cebadores empleados, se puso
pmoles de cebador (Kits OPA y OPF de
de manifiesto que estos generaron 90
la
Operon
bandas producto de la amplificación
ADN
(Tabla II), de las cuales 80 fueron
genómico y 2U de Taq ADN polimerasa
polimórficas para un promedio de 5.7
(Amplicen).
se
bandas por cebador. Es de destacar que
produjo en un termociclador marca
casi la totalidad de los cebadores
Techme de la firma Progene progra-
usados fueron muy informativos, con
mado para 45 ciclos de 1 min. a 94ºC, 1
excepción del OPA 13, que no detectó
min. a 36ºC y 2 min. a 72ºC, y un ciclo
polimorfismo entre el material genético
de 10 min. a 72ºC. Los productos de la
estudiado.
firma
comercial
Technologies),
100ng
La
de
amplificación
PCR se visualizaron por electroforesis en gel de agarosa al 1.5 % en solución amortiguadora TBE 0.5X y se tiñeron con bromuro de etidio, antes de ser observados en un transiluminador. Se informaron los productos de la PCR, tomando las bandas más intensas, como presentes [1] o como ausentes [0] en cada genotipo, creando así una matriz de valores binarios que se analizó a través de la aplicación del software computacional
CLATAX
determinar
grado
el
de
(7),
para
similitud
El cebador OPA 12 y todos los cebadores
OPF,
excepto
OPF
01,
utilizando el coeficiente de similitud de
alcanzaron
Nei y Li (8), entre el material genético
polimórficas, resultando útiles en la
analizado, para luego construir un
determinación de polimorfismo. Se
dendrograma mediante el algoritmo
destacó el cebador OPF 13 por el gran
UPGMA
número de bandas generadas, de las
por
STATISTICA (9).
medio
del
paquete
el
100
%
de
bandas
cuales el 100 % fueron polimórficas. De
18 0
acuerdo con la literatura consultada, los
el segundo subgrupo y el tercero estuvo
porcentajes de polimorfismo genético
compuesto por R16-300 y R4-300.
alcanzados en este trabajo son altos, en comparación con los que se han obtenido
normalmente
(Lycopersicon mediante
en
tomate
esculentum
Mill),
los
marcadores
morfoagronómicos y bioquímicos (2, 10), marcadores de RAPD (3, 11) y por medio de otros marcadores moleculares Las similitudes encontradas entre R17-
(12, 13, 14)..
500 y R19-500, y sus respectivas variedades donantes Amalia e INCA-91, pudieran deberse a que los cebadores empleados en este estudio conllevan a no esclarecer la situación, al no amplificar otras regiones que acentúan más
las
diferencias,
ya
que
los
marcadores RAPD son dominantes Con el procedimiento no-jerárquico (Kmeans) del Análisis de Conglomerados, basado en los índices de similitud, se identificaron al menos dos grupos de diferente diversidad genética (Figura 1): el primer grupo formado por el genotipo
R17-500
y
su
porque solo se amplifica un producto o variante alélica: aquel que cumple los requisitos de complementariedad entre el cebador y las cadenas de ADN a una distancia=2 kb (15).
CONCLUSIÓN
variedad
donante Amalia y el segundo por el
Los resultados alcanzados en este
resto de los genotipos analizados. Este
trabajo permiten reafirmar el poder de
último grupo se dividió a su vez en tres
la técnica de RAPD, para el estudio de
subgrupos, donde el genotipo R19-500
la diversidad en la secuencia de una
y
INCA-9-1
población y corroboran la efectividad
integraron el primer subgrupo, los
del uso de rayos gamma 60Co, para la
genotipos R15-500 y R20-300 formaron
inducción de variabilidad genética y la
su
variedad
donante
selección realizada para la obtención de
19 0
genotipos de tomate con alto potencial
Peteira, B.; Fernández, E.; González-
productivo en condiciones de bajos
Chávez,
suministros de agua.
Miranda, I. Aplicación de marcadores
T.
y
genética en variedades de tomate y
Solís, A.; Martínez, R.; Pupo, J.; Cabrera, F. y Parra R. Caracterización germoplasma
Shagarodsky,
RAPD al estudio de la diversidad
REFERENCIAS
de
M.;
de
tomate
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(Lycopersicon esculentum, Mill) con
Weising, K.; Ramser, J.; Kaemer, D. y
vistas a la implementación de un
Kahl,
programa
fitomejoramiento
fingerprinting on genetic relatedness in
participativo. Cultivos Tropicales, 2001,
plants. A case study with banana and
vol. 22, no. 2, p. 33-37.
tomato.
de
Florido, M.; Álvarez, M.; Lara, R. M.; Plana, D.; Valera, M.; Shagarodsky, T. y Moya,
C.
Evolution.
G.
Multilocus
Molecular
Ecology
Approaches
DNA
and and
applications. 1994.
Caracterización
Saavedra, G.; Spoor, W. y Harrier, L.
morfoagronómica y bioquímica de 20
Molecular markers and genetic base
accesiones de tomate (Lycopersicon
broadening in Lycopersicon spp. Acta
spp). Cultivos Tropicales, 2002, vol. 23,
Hort. (ISHS), 2001, vol. 546, p. 503-507
no. 4, p. 61-69.
20 0
ESTRUCTURA CELULAR – CÉLULAS VEGETAL Y ANIMAL
INTRODUCCIÓN
Está dominada y coordinada por polímeros
La célula es la unidad mínima de un organismo capaz de actuar de manera
autónoma.
Todos
los
organismos vivos están formados por células, y en general se acepta que ningún organismo es un ser vivo si no consta al menos de una célula.
Algunos
organismos
microscópicos, como bacterias y protozoos,
son
células
únicas,
mientras que los animales y plantas están
formados
por
muchos
millones de células organizadas en tejidos y órganos. Aunque los virus y los extractos acelulares realizan muchas de las funciones propias de la célula viva, carecen de vida independiente,
capacidad
de
crecimiento y reproducción propios de las células y, por tanto, no se consideran seres vivos. La química de los seres vivos, objeto de estudio de la bioquímica, está dominada por compuestos de carbono
y
se
caracteriza
por
reacciones acaecidas en solución acuosa y en un intervalo de temperaturas pequeño. La química de los organismos vivientes es muy compleja, más que la de cualquier otro sistema químico conocido.
de
moléculas
gran
tamaño,
formadas
encadenamiento
de
por
subunidades
químicas; las propiedades únicas de estos
compuestos
permiten
a
células y organismos crecer y reproducirse. Los tipos principales de
macromoléculas
son
las
proteínas, formadas por cadenas lineales de aminoácidos; los ácidos nucleicos, ADN y ARN, formados por bases nucleotídicas, y los polisacáridos,
formados
por
subunidades de azúcares. (GRAW H. 2002) Pueden presentar una pared celular diferente a la de las células vegetales. mucilaginosa
Una
cápsula
les
confiere
protección. Membrana plasmática típica: doble capa de fosfolípidos, aparece
replegada
formando
mesosomas en los que tiene lugar la fotosíntesis o la respiración celular. El
Citoplasma
constituye
el
contenido celular. Ribosomas para la síntesis de proteínas. En una zona central del citoplasma aparece el nucleoide formado por una molécula de ADN circular, aparecen pequeños fragmentos de ADN circular (plásmidos) que se
21
independientes del nuceloide, son
•
Porta y cubre objetos
importantes para las técnicas de
•
Agua destilada
ADN recombinante. Pili o fimbrias
•
Lugol
implicados en la transferencia de
•
Azul de metileno
ADN entre dos bacterias (pilus
•
Agua
sexual, suena mejor que pelo
preferencia incluir muestras que
sexual). Un Flagelo responsable del movimiento. Se reproducen por bipartición
(García
A.
2010)
empozada
contengan
algas
(de
verdes
filamentosas) •
1 bulbo de cebolla
•
1 caja de palillos de
dientes (por todo el curso) •
1 trozo pequeño de carne
de res (congelado) •
1 pera, 1 lanceta, 1 hoja
de col (por subgrupo de trabajo)
METODOLOGIA OBJETIVOS
EN EL AGUA EMPOZADA
General
Grafico N° 1. Diagrama de flujo de
Analizar las estructuras
observaciones en agua empozada
de los diferentes objetos observados en la práctica Específicos Detallar
las
observadas
Colocar
Gota de agua
portaobjetos
Añadir
Cubreobjetos
Muestras
células en
el
microscopio en gráficos Distinguir las estructuras que
presentan
muestras
Montar
las
expuestas
Observar
Con Lentes 4x, 10x, 40x
Identificar
Grupo de microorganismos
durante la práctica
1. MATERIALES •
Microscopio óptico
Placa
Microscopio
De menor a mayor resolución
Fuente: Lab. Biología Básica. FCIAL Elaborado por: Espinosa M. 2014
22
2. DATOS OBTENIDOS
EN LA CÉLULA ANIMAL
Tabla N°1 Organismo presentes
Grafico N° 2. Diagrama de flujo de observaciones en célula animal Raspar
Cara interna de Mejilla
Colocar
Material obtenido
Añadir
Gota de azul metileno
en Agua Empozada. Organismo
Palillos
Algas verde
Chlorella
unicelulares
Sobre porta objetos
Algas microscopias
Volvox 30 seg
Descripción
que forman
Secar
colonias Colocar
Observar
Cubre objetos Con Lentes 4x, 10x, 40x
De menor a mayor resolución
Paramecio Fuente:
Fuente: Lab. Biología Básica. FCIAL Elaborado por: Espinosa M. 2014 EN LA CÉLULA VEGETAL
observaciones en célula animal
Colocar
Extender
Añadir
Porción de epidermis
De cebolla
Células Animales y Vegetales Organismo Membrana plasmática
Sobre portaobjetos
Bien la muestra
Núcleo
Descripción Delimita la célula, presente de varias formas Estructura interna muy oscura Todo lo que se
Gota de lugol
percibe a la primera observación Por la presencia de
Cubreobjetos
Burbujas Observar
Básica.
Elaborado por: Espinosa M. 2014
Secar
Colocar
Biología
FCIAL
Citoplasma 30 seg
forma ovalada
Tabla N°2 Organismo presentes en
Grafico N° 3. Diagrama de flujo de
Desprender
Lab.
Protozoario de
aire en las muestras
Con los objetivos secos
Fuente: Lab. Biología Básica. FCIAL Fuente: Lab. Biología Básica. FCIAL
Elaborado por: Espinosa M. 2014
Elaborado por: Espinosa M. 2014
23
RESULTADOS Graficar cada una de las muestras
Muestra: Col
observadas con los diferentes lentes.
4X
Muestra: Manzana
4X Se observó una textura granulada de color café con pequeños espacios más claros
10X Al realizar una mayor magnificación se pudo identificar unas celdas transparentes de color verdoso café con unas uniones más oscuras
40X Las estructuras poseían espacios transparentes con diversos colores en la escala de verdes, muchos de ellos presentaban una pequeña mancha en su interior
Se observó unas líneas muy marcadas acompañadas de diminutas celdas de color naranja
10X Al realizar la observación con otra magnificación se pudo observar que las pequeñas celdas se acomodaban en líneas de color más oscuras
40X Las pequeñas celdas poseían colores con relleno, aparentaban como unos gránulos sobre una pared
24
Muestra: Sangre
Muestra: Agua Estancada
4X
4X
Se pudo observar unas manchas de color pajizo que mostraba pequeñas espacios blancos y rojos
Con esta magnificación se pudo observar pequeñas algas de color verdoso y pequeñas manchas de color café
10X
10X Las pequeñas espacios bancos y rojos se presentaban como burbujas sólidas y de forma irregular
Cuando se presentó con otro objetivo se pudo visualizar con más detalle las algas y se presencia una grande burbuja
40X 40X Se observó que la sangre poseía un conjunto de células que se mostraban en blanco y rojo, ambas poseían una textura rugosa
Se pudo observar con mayor definición los componentes del agua estancada, pudiéndose distinguir Chlorella y volvox (pequeñas algas verdes
25
los glóbulos rojos y células vegetales
6DISCUSIÓN
como la de las manzanas. En
esta práctica se pudo observar
En el informe se detalló qué se observó
gracias al microscopio muchas formas,
en el microscopio con los lentes de 4x,
colores, y estructuras de células o
10x, 40x, observando las pentosas de
partículas pertenecientes a materiales
azúcar
orgánicos,
microorganismos en el agua estancada
que
constituyen
los
diferentes objetos observados. Las
estructuras
la
manzana,
y fibras en la col.
presentaron
cristalizaciones de azúcar como en el caso de la manzana, microorganismos en el agua estancada, filamentos y formas como ladrillos en la col y nos permitió observar nuestros glóbulos rojos de una forma real así es como se pudo diferenciar las células animales y vegetales Al
en
En la práctica se pudo distinguir las estructuras que presentan las muestras expuestas ya que se uso el lente de 40x para poder realizar una distinción de células tanto animales como vegetales
REFERENCIAS Mc
GRAW
(BIOLOGÍA
HILL Y
3º
Y
4º
GEOLOGÍA)
2002
visualización microscópicamente
http://www.quimicaweb.net/
había una gran diferencia entre las
Webalumnos/GENETICA%20Y
células anteriormente mencionadas su
%20HERENCIA/Paginas/2.1.ht
diferencia es apreciada en la posición,
m.Disponible en: 11 de julio del
en las formas, su color , y su reacción
2014
antes la luz. Las células animales no
García A. 2010. Célula General
eran muy transparentes y las células
http://www.elcora.org/005_es
vegetales
obach/biologia/4eso/celulas_g
presentaban
una
transparencia muy notable además que
eneral.pdf Disponible en: 11 de
para su mayor identificación se usó el
julio del 2014
azul de metileno.
CONCLUSIONES Tras la práctica realizada se analizó las estructuras microscópicas de 4 objetos diferenciando células animales como en
La
célula:
función.
su
estructura
Obtenido
y en:
http://www.facmed.unam.mx/ publicaciones/libros/pdfs/hist ologica17-21.pdf 07/07/2014.
26