MANUAL
de Procesos de Introducción al Laboratorio Clínico UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE QUÍMICA BIOLÓGICAEXPERIENCIAS DOCENTES CON LA COMUNIDAD -EDC-
CONTENIDO HEMATOLOGÍA 01
Obtención de muestras: venopunción
03
Frote sanguíneo
04
Recuento diferencial
05
Hemograma Hematocrito Hemoglobina
06 10
Velocidad de eritrosedimentación Recuento celular Tiempo de sangría Ivy Duke COPROLOGÍA
11
Procesamiento de muestras
17
Técnica Kato-Katz
18
Inmunocromatografía: sangre oculta URIANÁLISIS
19
Toma de muestra
19
Exámen físico
20
Exámen bioquímico
21
Exámen microscópico
26
Referencias
Obtención de muestras VENOPUNCIÓN PROCEDIMIENTO
El CLSI recomienda los siguientes pasos: PASOS
1. Preparar la solicitud. 7. Colocar el torniquete (no más de 1 min),
2. Saludar al paciente e identificarlo solicitándole
procurando que sea fácil retirarlo.
verbalmente su nombre, número
8. Seleccionar el sitio de punción. Si es
de identificación o fecha de
necesario solicitar al paciente que coloque su
nacimiento.
mano en un puño.
3. Verificar cumplimiento de restricciones dietéticas en caso de existirlas. 4. Lavar manos y colocar guantes. 5. Preparar herramientas y tubos apropiados para los análisis solicitados.
VENAS PRINCIPALES PARA LA VENOPUNCION EN LA PARTE INTERIOR DEL ANTEBRAZO
6. Posicionar al paciente como sea necesario:
5. POSICIÓN ADECUADA/CÓMODA (SENTADO O EN DECÚBITO SUPINO) CON EL BRAZO ELEGIDO PARA LA PUNCIÓN EN HIPEREXTENSIÓN
UTILIZAR EL DEDO ÍNDICE PARA BUSCAR LA VENA, ESTA SE SENTIRÁ ELÁSTICA.
1
EL LLENADO DE LA CÁMARA INDICA UNA VENOPUNCIÓN EXITOSA
9. Colocar guantes. 10. Limpiar el sitio de punción con
13. Remover torniquete tan pronto
alcohol isopropílico 70%, realizando
como el flujo de sangre se establezca
movimientos concéntricos, trabajando
y/o después de pasado 1 minuto,
de adentro hacia afuera.
14. Asegurar que la mano del
Permitir que se seque con el aire.
paciente se encuentre abierta.
11. Inspeccionar calidad del equipo.
15. Colocar la gaza ligeramente sobre
12. Realizar la punción anclando la
el sitio de punción sin presionarlo.
vena con el pulgar 1 o 2 pulgadas
16. Después de retirado el último
debajo del sitio e insertando la aguja
tubo, retirar sistema y colocar tapón
con el bisel hacia arriba en un ángulo
de seguridad sin sostenerlo.
menor a 30 grados entre la aguja y la
17. Aplicar presión directamente al
pie.
sitio de punción usando una gaza limpia. 18. Colocar apósito tras verificar que el sangrado se ha detenido. 19. Si se ha utilizado jeringa, llenar los tubos utilizando un sistema de transferencia. 20. Desechar equipo.
Recolectar los tubos usando el orden
21. Etiquetar tubos.
correcto de llenado, e invertir inmediatamente los que contengan aditivo.
ORDEN SEGÚN LA CLSI
ORDEN EN EDC
2
3. EN UN ÁNGULO DE 30-45 GRADOS ARRASTRAR LA FROTADORA HACIA LA GOTA PERMITIENDO QUE SE DISPERSE
FROTE SANGUÍNEO TÉCNICA WEDGE
EQUIPO NECESARIO Lámina portaobjetos Frotadora (También puede realizarse con dos portaobjetos)
4. RÁPIDA Y SUAVEMENTE SE DEZLIZA LA FROTADORA HACIA A LA PUNTA DE LA LÁMINA.
PROCEDIMIENTO 1. Una gota de sangre de aproximadamente 2-3 mm de diámetro o de 5 microlitros se coloca al final de una lámina.
FORMA CORRECTA
2. Sujetar con la mano dominante la frotadora.
3
RECUENTO DIFERENCIAL 1. Teñir el frote con Wright puro o una NEUTRÓFILO
mezcla de Wright-Giemsa. También puede usarse hemacolor. 2. Enfocar al microscopio.
Tamaño de 10-15 µm, citoplasma rosado con numerosos gránulos uniformemente distribuidos; núcleo con lóbulos conectados entre sí por finas fibras.
BASÓFILO
Valor de referencia: 50–70%
OBSERVAR ENTRE EL CUERPO Y LA COLA
3. Observar en seco débil para evaluar
Valor de referencia: 0-2%
BASÓFILO
la distribución de los eritrocitos.
Muy
Muy
separados
juntos
Ideal
Tamaño entre 14 y 15 µm, citoplasma con grandes gránulos azul oscuro que ocupan la mayoría de la célula. El núcleo usualmente no es visible.
Tamaño entre 12 -17 µm, usualmente bilobulado. Posee gránulos grandes y esféricos de color anaranjado.
Valor de referencia: 1-3%
MONOCITO
4. Agregar aceite de inmersión sin pasar por el objetivo de 40x y se coloca el objetivo de 100x para realizar el conteo de células blancas. 5. Contar (al menos) 100 células,
Tamaño entre 15 a 30 µm, con núcleo central voluminoso, de formas variadas y cromatina densa. Con citoplasma amplio, azul plomizo.
Valor de referencia: 2-11%
clasificándolas y siguiendo este
LINFOCITO
desplazamiento:
Tamaño entre 8-16 µm. El citoplasma forma un anillo alrededor del núcleo que es redondo u oval. El citoplasma azul posee gránulos.
Valor de referencia: 18-42%
4
Hemograma
HEMATOCRITO, VSE, HEMOGLOBINA
HEMATOCRITO
HEMOGLOBINA
1. Llenar dos capilares
Para la determinación de hemoglobina se utilizan
aproximadamente 3/4 con sangre
diferentes métodos colorimétricos, pero también se
anticoagulada con EDTA o heparina.
puede determinar dividiendo el valor obtenido en el
2. Sellar la punta del capilar con
hematocrito dentro de 3.
arcilla no absorbente (critosil),
Hto/3= Hb
colocándolo sobre esta en un ángulo de 90 grados y rotándolo suavemente antes de removerlo.
42/3= 14
Aunque esta proporción matemática solo se cumple en los individuos "normales", con valores "normales" de Hb y Hto, y eritrocitos "normocíticos normocrómicos".
El tapón debe medir al menos 4mm 4. Balancear los tubos en la centrifuga para microhematocrito, con la arcilla orientada hacia el exterior. 5. Centrifugar 10,000-12,000 rpm, durante 5 min. 6. Determinar el hematocrito utilizando una escala.
VELOCIDAD DE ERITROSEDIMENTACIÓN 1- Diluir cuatro partes de sangre recolectada con EDTA con una parte de 3.8% de citrato de sodio (o 0.85% cloruro de sodio). 2- Colocar la muestra diluida en un tubo de Westergren, colocar esta en la base permitiendo que se mantenga recta por 60 minutos a temperatura ambiente. 3- Anotar el número de milímetros que los eritrocitos han caído en una hora.
VALORES DE REFERENCIA Hematocrito: 40-54% en hombres, 35-49% en mujeres. Hemoglobina: 13.5-18.0 g/dL hombres, 12.0-15.0 g/dL en mujeres. VSE: 0-15 mm/1h hombres, 0-20 mm/1h mujeres.
5
RECUENTO CELULAR Con cámara de Neubauer
Pasos Limpiar el hemacitómetro con alcohol y secar. Colocar el cubre objetos. Realizar dilución de la muestra en tubo de ensayo pequeño. Eritrocitos: 1:200. Dacie, formaldehído 40% o solución salina Plaquetas: 1:200. Oxalato de amonio 1% Eosinófilos: 1:20. Hinkelman Leucocitos: 1:20,
Turk, HCl 0,1 N, ácido acético glacial 3%
Cubrir el tubo y mezclar por inversión, dejar reposar Eritrocitos: 2-3 minutos. Plaquetas: 15 minutos. Eosinófilos: 5 minutos. Leucocitos: por 10 minutos.
También puede utilizarse una pipeta de Thoma. Eritrocitos: 0.5 sangre - 101 diluyente. Plaquetas: 0.5 sangre - 101 diluyente. Eosinófilos: 0.5 sangre - 11 diluyente. Leucocitos: 0.5 sangre - 11 diluyente.
6
Mezclar nuevamente y llenar un capilar Cargar ambos lados de la cámara sujetando el capilar a 45 grados y tocando el borde entre el cubreobjetos y la cámara.
Si se utiliza pipeta de Thoma, descartar primeras gotas, y luego cargar cámara con esta.
Si son plaquetas, colocar en una cámara húmeda por 15 minutos. Colocando un pedazo de papel humedecido dentro de una caja de Petri e introduciendo cuidadosamente la cámara.
7
Observar a seco débil en el microscopio, y contar las células en los cuadros apropiados. Eritrocitos y plaquetas: 5 cuadros pequeños de la región central. (R) Leucocitos y eosinófilos: contar 4 cuadros grandes. (W).
Recordar contar solo las células que toquen una L imaginaria y seguir un patrón al desplazarse por la cuadrícula.
8
Calcular el volumen correspondiente a los cuadros contados. Por ejemplo, en los leucocitos se cuentan 4 cuadros de 1mm * 1mm, por lo que el área es 4mm cuadrados. Considerando que la cámara tiene una profundidad de 0,1 mm. El volumen total contado sería 0,4 mm cúbicos.
Calcular la cantidad de células/mm3 Células contadas *FD volumen contando
FD: factor de dilución utilizado
Valores de referencia:
1 mm3=1 microlitro
Eritrocitos: 4.20-6.00 x10E6/microlitro hombres 3.80-5.20x10E6/microlitro mujeres Plaquetas: 150-450x10E3/microlitro Eosinófilos: 0-0.3x10E3/microlitro Leucocitos: 3.6-10.6 x10E3/microlitro
9
Tiempo DE SANGRÍA
IVY
DUKE
1. Desinfectar con alcohol 70% 2. Se realiza una incisión de profundidad estandarizada (1 mm de profundidad), en la cara interna del antebrazo del paciente. 3. Previamente con un esfingomanómetro se produce una presión constante de 40 mmHg. 4. Se pone en marcha el cronómetro. Durante ese tiempo, se absorbe la sangre cada 30 segundos, con un papel absorbente sin tocar el lugar de la incisión. 5. Se toma el tiempo que transcurre entre el momento en que se realiza la incisión y el que termina de sangrar.
1. Se desinfecta con alcohol 70% 2. Se realiza una incisión de 3-4 mm de profundidad con una aguja especial o lanceta, preferentemente en el lóbulo auricular o la yema de los dedos. 3. Se pone en marcha el cronómetro. Durante ese tiempo, se absorbe la sangre cada 30 segundos, con un papel absorbente sin tocar el lugar de la incisión. 4. Se toma el tiempo que transcurre entre el momento en que se realiza la incisión y el que termina de sangrar.
TIEMPO DE REFERENCIA: Ivy: <7.5 min Duke: <5 min 10
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS COPROLOGÍA
1. Reportar color y consistencia. Así como sangre, moco, restos alimenticios o parásitos que puedan observarse. 2. Colocar 5mL de solución salina 0.85% en un recipiente. 3. Agregar 1g de materia fecal y homogenizar. 4. Colar la solución y observar cantidad de restos alimenticios. 5. Medir pH de la muestra y anotarlo. 6. Transferir solución colada a tubo de centrífuga. 7. Centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos. 8. Decantar el sobrenadante y homogenizar la muestra. 9. Colocar dos gotas de la muestra sobre el portaobjetos, a una agregar una gota de solución salina y a otra una gota de lugol.
10. Mezclar cada gota con la punta de un cubreobjetos, luego, cubrirla con el mismo. 11
11. Inspeccionar la lámina en seco débil y corrobar estructuras sospechosas en seco fuerte. 12. Reportar por cruces estructuras encontradas.
Grasa
Jabones
Gotas perfectamente redondeadas, de tamaño variable, muy refringentes y color anaranjado en preparaciones con lugol.
ácidos grasos con minerales que se aprecia como cristalina pequeña, redondeada, incolora o amarilla. Con poca refringencia.
Célula vegetal
Almidón
Parénquima de célula vegetal no digerida.
Estructura color azul o negro en preparaciones con lugol.
12
Fibra muscular
E. coli
Levaduras
Presentan forma rectangular y ángulos marcados, con estriaciones longitudinales y transversales.
Generalmente esféricos, 8 núcleos. El cariosoma puede ser compacto o difuso, de localización central o excéntrica.
Células oviodes que pueden encontrarse en forma de levaduras o hifas
E. nana Son pequeños y su forma varía de esférica a elíptica. Los maduros contienen 4 núcleos. En preparaciones teñidas, el núcleo tiene un cariosoma definido más grande que las especies Entamoeba.
I. butschlii Forma variable de esférica a elíptica. Los quistes maduros tiene un solo núcleo no visible en preparaciones con yodo. La característica más destacada es le presencia de una masa de glucógeno
13
Balantidium coli Son de forma esférica a oval. El macronúcleo y el micronúcleo están presentes y puede tener un aspecto granular.
Giardia lamblia Ovales o elípticos. Los maduros tienen 4 núcleos. Con tinción de yodo son visibles los núcleos y las fibrillas intracitoplasmáticas.
E. hystolitica/dispar Quistes esféricos con cuatro núcleos, estos son similares a los de los trofozoítos, excepto pero de tamaño menor. Cuerpos cromatoides alargados y con extremos redondeados
A. lumbricoides Huevo fecundado, típicamente de color pardo amarillento, con cubierta gruesa mamelonada
T. hominis El axostilo se extiende desde el extremo anterior hasta proyectarse en el posterior. El núcleo de localización anterior contiene un pequeño cariosoma
14
C. mesnili Quiste uninucleado con forma de limón. Núcleo grande con cariosoma voluminoso, la fibrillas le dan un aspecto de un imperdible abierto.
B. hominis Quiste de pared gruesa, esférico a subesférico. Es característico que estos organismos tengan un gran cuerpo central con un margen estrecho de citoplasma que contiene núcleos y cuerpos de inclusión.
T. trichiura Tienen forma de barril, una cubierta gruesa de color pardo amarillento y tapones mucosos claros en los extremos.
Taenia spp
Esféricos, de color pardo amarillento. La cubierta es gruesa y estriada en forma radial, dándole un aspecto prismático.
E. vermicularis
Uncinaria
Huevo alargado, aplanado de un lado, con una cubierta gruesa incolora.
Huevos de cubierta delgada, incoloros con blastómeros
H. nana
H. diminuta
La oncosfera con seis ganchos está rodeada por una membrana que presenta dos engrosamientos polares, a partir de los cuales surgen cuatro a ocho filamentos que se extienden hacia el espacio el embrión y la cubierta externa 15
La oncosfera de seis ganchos está rodeada por una membrana considerablemente separada de la cubierta externa. No hay filamentos polares.
CONDICIONES NORMALES Consistencia pastosa, color marrรณn, pH 6.9-7.2, sin parรกsitos, sangre o moco. Si presenta almidรณn, restos alimenticios o grasas es en bajas cantidades.
16
Técnica
Kato-Katz 1
Filtrar con malla de nilón 2 a 3 g de muestra.
2
Colocar plantilla sobre una lámina y llenar el orificio con el material filtrado.
Retirar 5
la plantilla con precaución de que el cilíndro de muestra permanezca en el portaobjetos.
¿Cómo se observa? 4
Cubrir y comprimir
No aclarada
cilíndro con papel celofán previamente sumergido en la solución de Kato.
Aclarada 5
Dejar reposar a temperatura ambiente por 30 a 45 minutos.
Calcular intensidad 7 6
multiplicando la cantidad de huevos observados por el FM Por ejemplo: 12 huevos vistos * 24 = 288 huevos/g
¿QUÉ FACTOR DE MULTIPLICACIÓN (FM) DEBO USAR? Depende de las dimensiones del orificio de la plantilla.
6 x 1 .5
Observar
mm =
en 10x 9x1m
17
m=2
0
24
Inmunocromatografia
Sangre oculta Utilizar un tubo para diluciรณn.
Tomar una muestra de las heces e introducir el palito en el diluyente. Agitar.
Romper la punta del vial y depositar gotas en celdas A y B. Esperar 10 min.
Interpretar
+
-
Invรกlido 18
URIANÁLISIS Tomar muestra
Aproximadamente 20 mL
1- UTILIZAR RECIPIENTES ADECUADOS: - LIMPIOS, - DE BOCA ANCHA, - HERMÉTICOS. 2- PROCESAR LA MUESTRA A NO MÁS DE 2 HORAS DE RECOLECCIÓN. Se pueden utilizar envases especiales para componentes epecíficos y bolsas recolectores estériles para pacientes pediátricos.
LA ORINA DE
24h
1ra
SE UTILIZA PARA LA CUANTIFICACIÓN DE COMPONENTES
orina de la mañana se prefiere por estar más concentrada.
CREATININA, NITRÓGENO DE UREA, CALCIO, FÓSFORO, MAGNESIO, ACIDO ÚRICO, PROTEÍNAS, ETC.
EXAMEN FÍSICO 1- DETERMINAR COLOR 2- HOMOGENIZAR LA MUESTRA INVIRTIENDOLA .
SUAVEMENTE.
3- COLOCAR UNA HOJA CON TEXTO DETRÁS DE .
LA MUESTRA.
Esta muestra es límpida
3- DETERMINAR ASPECTO LÍMPIDO (SE PUEDE VISUALIZAR EL TEXTO A TRAVÉS DE LA MUESTRA), LIGERAMENTE TURBIO (SE VISUALIZA PERO NO SE LEE) O TURBIO (NO SE VISUALIZA), 4- REPORTAR. 19
Esta muestra es ligeramente turbia
EXAMEN BIOQUÍMICO 1. Verter muestra a un tubo cónico, dejando aproximadamente 1 cm vacío. 2. Sumergir por completo el área reactiva de la tira en el recipiente conteniendo la muestra e inmediatamente sacarla para evitar que los reactivos se disuelvan. 3. Correr el filo de de la tira contra contra el borde del recipiente de la orina para desechar el exceso. 4. Sostener la tira en una posición horizontal y contactar el filo de la tira con un material absorbente Esto evita que los químicos se mezclen con reactivos de áreas adyacentes .
Cada prueba tiene un tiempo específico. Este se indica en la tabla de colores.
VALORES DE REFERENCIA Aspecto: ámbar límpido pH: 5,5 a 6,5 Gravedad específica: 1.016 a 1.022 Proteínas. Glucosa, cetonuria, bilirrubina,
5. Compare las áreas reactivas con la correspondiente tabla de colores que se encuentra en el rótulado del tubo en el tiempo epecificado. 20
urobilinógeno, sangre, leucocitos, nitritos: negativos
EXAMEN MICROSCÓPICO 6. Centrifugar durante 5 minutos a 1500 rpm. 7. Decantar el sobrenadante y homogenizar el sedimento con una micropipeta. 8. Colocar una gota de sedimento en el portaobjetos y cubrir con cubreobjetos. 9. Observar al microscopio inicialmente en seco débil y en seco fuerte para corroborar elementos sospechosos. 10. Se reporta en cruces, a excepción de los RBC y WBC
Células epiteliales.
Células planas de forma irregular con pequeños núcleos centrales y abundante citoplasma.
Células de transición
Epitelio renal
Redondas o de forma de pera, pueden contener dos núcleos. 2 a 4 veces más grandes que los leucocitos.
Ligeramente más grandes que las WBC, contienen núcleos grandes y redondos.
Leucocitos Se identifican por sus lobulaciones y gránulos característicos. Se debe visualizar y reportar con un aumento 400x. Promediando al menos 10 campos visuales 21
Eritrocitos En orina pueden adquirir varias formas, cuando la mx es normal y fresca presenta la forma biconcava normal. Se cuentan igual que los WBC.
Cilíndro leucocitario
Puede haber pocas células o puede haber muchas células, Si todavía están intactos, los núcleos pueden ser claramente visibles.
Cilíndros céreos
Cilíndro granuloso
Tienen un índice de refracción muy alto, son de color amarillo, gris o incoloro, y tienen un aspecto suave y homogéneo.
Los modelos finamente granulares contienen fina gránulos que pueden aparecer de color gris o amarillo pálido
22
Cilíndro hialino
Son incoloros, homogéneos y transparentes, y suelen tener extremos redondeados.
Ácido úrico Puede tener diferentes formas pero la más comun es de diamante o rombo prismático, generalmente amarillos
Cristales de cistina
Cristales hexagonales incoloras, refráctiles con lados iguales o desiguales.
Cristales de colesterol
Son placas grandes, planas y transparentes con esquinas con muescas.
Triple fosfato
Urato-fosfato amorfo
Son prismas incoloros de tres a seis lados que frecuentemente tienen extremos oblicuos
Tener un aspecto granular amarillo-rojo
23
Biurato de amonio
Son cuerpos esféricos de color amarillomarrón con largos, espículas irregulares.
Levaduras Son células lisas, incoloras, generalmente ovoides con paredes doblemente refráctiles. Pueden variar de tamaño y a menudo mostrar en ciernes.
Trofozoíto de T. Vaginalis
Aspecto piriforme, semilunar, esferoidal, con una actividad locomotriz muy intensa.
Espermatozoides Espermatozoide tienen cuerpos ovalados y colas largas, delgadas y delicadas
Moco Son hilos largos, delgados y ondulados como cintas estructuras que pueden mostrar tenues estrías longitudinales
VALORES DE REFERENCIA Hallazgo normal o no indica patología. No indica patología si se encuentra en
Tirosina Son agujas muy finas y altamente retráctiles ocurriendo en haces o racimos.
poca cantidad. No se encuentra normalmente en la orina.
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REFERENCIAS Arias, J. (2000). Enfermería medico quirúrgica. Tomo 1. Editorial Tebar. Ash, L. (2010). Atlas de parasitología humana. (5a ed). Argentina: Médica Panamericana. Botero, D. (2012). Parasitosis humanas. Barcelona: corporación para investigaciones biológicas CIB. Campuzano, M. (2007). El Uroanálisis: Un gran aliado del médico. Revista Urología Colombiana, XVI(1),67-92.[fecha de Consulta 23 de Enero de 2021]. ISSN:
0120-789X.
Disponible
en:
https://www.redalyc.org/articulo.oa?
id=1491/149120468005 Campuzano, M. (2017). Utilidad del extendido de sangre periférica: los leucocitos. Medicina & laboratorio: programa de educación médica contínua certificada. Universidad de Antioquia. 14(5) Mundt, L. (2015). Graff`s textbook of Urinalysis and body Fluids. Philadelphia: Wolters Kluwer. Pita-Rodríguez, G. (2010). ¿Se cumple siempre la relación hemoglobinahematócrito?. Revista Cubana de Hematología, Inmunología y Hemoterapia, 26(4), 359-361.
UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE QUÍMICA BIOLÓGICAEXPERIENCIAS DOCENTES CON LA COMUNIDAD -EDCANA SOFÍA PAMAL DE LEÓN