Manual de Procesos de Introducción al Laboratorio Clínico -EDC-

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MANUAL

de Procesos de Introducción al Laboratorio Clínico UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE QUÍMICA BIOLÓGICAEXPERIENCIAS DOCENTES CON LA COMUNIDAD -EDC-



CONTENIDO HEMATOLOGÍA 01

Obtención de muestras: venopunción

03

Frote sanguíneo

04

Recuento diferencial

05

Hemograma Hematocrito Hemoglobina

06 10

Velocidad de eritrosedimentación Recuento celular Tiempo de sangría Ivy Duke COPROLOGÍA

11

Procesamiento de muestras

17

Técnica Kato-Katz

18

Inmunocromatografía: sangre oculta URIANÁLISIS

19

Toma de muestra

19

Exámen físico

20

Exámen bioquímico

21

Exámen microscópico

26

Referencias


Obtención de muestras VENOPUNCIÓN PROCEDIMIENTO

El CLSI recomienda los siguientes pasos: PASOS

1. Preparar la solicitud. 7. Colocar el torniquete (no más de 1 min),

2. Saludar al paciente e identificarlo solicitándole

procurando que sea fácil retirarlo.

verbalmente su nombre, número

8. Seleccionar el sitio de punción. Si es

de identificación o fecha de

necesario solicitar al paciente que coloque su

nacimiento.

mano en un puño.

3. Verificar cumplimiento de restricciones dietéticas en caso de existirlas. 4. Lavar manos y colocar guantes. 5. Preparar herramientas y tubos apropiados para los análisis solicitados.

VENAS PRINCIPALES PARA LA VENOPUNCION EN LA PARTE INTERIOR DEL ANTEBRAZO

6. Posicionar al paciente como sea necesario:

5. POSICIÓN ADECUADA/CÓMODA (SENTADO O EN DECÚBITO SUPINO) CON EL BRAZO ELEGIDO PARA LA PUNCIÓN EN HIPEREXTENSIÓN

UTILIZAR EL DEDO ÍNDICE PARA BUSCAR LA VENA, ESTA SE SENTIRÁ ELÁSTICA.

1


EL LLENADO DE LA CÁMARA INDICA UNA VENOPUNCIÓN EXITOSA

9. Colocar guantes. 10. Limpiar el sitio de punción con

13. Remover torniquete tan pronto

alcohol isopropílico 70%, realizando

como el flujo de sangre se establezca

movimientos concéntricos, trabajando

y/o después de pasado 1 minuto,

de adentro hacia afuera.

14. Asegurar que la mano del

Permitir que se seque con el aire.

paciente se encuentre abierta.

11. Inspeccionar calidad del equipo.

15. Colocar la gaza ligeramente sobre

12. Realizar la punción anclando la

el sitio de punción sin presionarlo.

vena con el pulgar 1 o 2 pulgadas

16. Después de retirado el último

debajo del sitio e insertando la aguja

tubo, retirar sistema y colocar tapón

con el bisel hacia arriba en un ángulo

de seguridad sin sostenerlo.

menor a 30 grados entre la aguja y la

17. Aplicar presión directamente al

pie.

sitio de punción usando una gaza limpia. 18. Colocar apósito tras verificar que el sangrado se ha detenido. 19. Si se ha utilizado jeringa, llenar los tubos utilizando un sistema de transferencia. 20. Desechar equipo.

Recolectar los tubos usando el orden

21. Etiquetar tubos.

correcto de llenado, e invertir inmediatamente los que contengan aditivo.

ORDEN SEGÚN LA CLSI

ORDEN EN EDC

2


3. EN UN ÁNGULO DE 30-45 GRADOS ARRASTRAR LA FROTADORA HACIA LA GOTA PERMITIENDO QUE SE DISPERSE

FROTE SANGUÍNEO TÉCNICA WEDGE

EQUIPO NECESARIO Lámina portaobjetos Frotadora (También puede realizarse con dos portaobjetos)

4. RÁPIDA Y SUAVEMENTE SE DEZLIZA LA FROTADORA HACIA A LA PUNTA DE LA LÁMINA.

PROCEDIMIENTO 1. Una gota de sangre de aproximadamente 2-3 mm de diámetro o de 5 microlitros se coloca al final de una lámina.

FORMA CORRECTA

2. Sujetar con la mano dominante la frotadora.

3


RECUENTO DIFERENCIAL 1. Teñir el frote con Wright puro o una NEUTRÓFILO

mezcla de Wright-Giemsa. También puede usarse hemacolor. 2. Enfocar al microscopio.

Tamaño de 10-15 µm, citoplasma rosado con numerosos gránulos uniformemente distribuidos; núcleo con lóbulos conectados entre sí por finas fibras.

BASÓFILO

Valor de referencia: 50–70%

OBSERVAR ENTRE EL CUERPO Y LA COLA

3. Observar en seco débil para evaluar

Valor de referencia: 0-2%

BASÓFILO

la distribución de los eritrocitos.

Muy

Muy

separados

juntos

Ideal

Tamaño entre 14 y 15 µm, citoplasma con grandes gránulos azul oscuro que ocupan la mayoría de la célula. El núcleo usualmente no es visible.

Tamaño entre 12 -17 µm, usualmente bilobulado. Posee gránulos grandes y esféricos de color anaranjado.

Valor de referencia: 1-3%

MONOCITO

4. Agregar aceite de inmersión sin pasar por el objetivo de 40x y se coloca el objetivo de 100x para realizar el conteo de células blancas. 5. Contar (al menos) 100 células,

Tamaño entre 15 a 30 µm, con núcleo central voluminoso, de formas variadas y cromatina densa. Con citoplasma amplio, azul plomizo.

Valor de referencia: 2-11%

clasificándolas y siguiendo este

LINFOCITO

desplazamiento:

Tamaño entre 8-16 µm. El citoplasma forma un anillo alrededor del núcleo que es redondo u oval. El citoplasma azul posee gránulos.

Valor de referencia: 18-42%

4


Hemograma

HEMATOCRITO, VSE, HEMOGLOBINA

HEMATOCRITO

HEMOGLOBINA

1. Llenar dos capilares

Para la determinación de hemoglobina se utilizan

aproximadamente 3/4 con sangre

diferentes métodos colorimétricos, pero también se

anticoagulada con EDTA o heparina.

puede determinar dividiendo el valor obtenido en el

2. Sellar la punta del capilar con

hematocrito dentro de 3.

arcilla no absorbente (critosil),

Hto/3= Hb

colocándolo sobre esta en un ángulo de 90 grados y rotándolo suavemente antes de removerlo.

42/3= 14

Aunque esta proporción matemática solo se cumple en los individuos "normales", con valores "normales" de Hb y Hto, y eritrocitos "normocíticos normocrómicos".

El tapón debe medir al menos 4mm 4. Balancear los tubos en la centrifuga para microhematocrito, con la arcilla orientada hacia el exterior. 5. Centrifugar 10,000-12,000 rpm, durante 5 min. 6. Determinar el hematocrito utilizando una escala.

VELOCIDAD DE ERITROSEDIMENTACIÓN 1- Diluir cuatro partes de sangre recolectada con EDTA con una parte de 3.8% de citrato de sodio (o 0.85% cloruro de sodio). 2- Colocar la muestra diluida en un tubo de Westergren, colocar esta en la base permitiendo que se mantenga recta por 60 minutos a temperatura ambiente. 3- Anotar el número de milímetros que los eritrocitos han caído en una hora.

VALORES DE REFERENCIA Hematocrito: 40-54% en hombres, 35-49% en mujeres. Hemoglobina: 13.5-18.0 g/dL hombres, 12.0-15.0 g/dL en mujeres. VSE: 0-15 mm/1h hombres, 0-20 mm/1h mujeres.

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RECUENTO CELULAR Con cámara de Neubauer

Pasos Limpiar el hemacitómetro con alcohol y secar. Colocar el cubre objetos. Realizar dilución de la muestra en tubo de ensayo pequeño. Eritrocitos: 1:200. Dacie, formaldehído 40% o solución salina Plaquetas: 1:200. Oxalato de amonio 1% Eosinófilos: 1:20. Hinkelman Leucocitos: 1:20,

Turk, HCl 0,1 N, ácido acético glacial 3%

Cubrir el tubo y mezclar por inversión, dejar reposar Eritrocitos: 2-3 minutos. Plaquetas: 15 minutos. Eosinófilos: 5 minutos. Leucocitos: por 10 minutos.

También puede utilizarse una pipeta de Thoma. Eritrocitos: 0.5 sangre - 101 diluyente. Plaquetas: 0.5 sangre - 101 diluyente. Eosinófilos: 0.5 sangre - 11 diluyente. Leucocitos: 0.5 sangre - 11 diluyente.

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Mezclar nuevamente y llenar un capilar Cargar ambos lados de la cámara sujetando el capilar a 45 grados y tocando el borde entre el cubreobjetos y la cámara.

Si se utiliza pipeta de Thoma, descartar primeras gotas, y luego cargar cámara con esta.

Si son plaquetas, colocar en una cámara húmeda por 15 minutos. Colocando un pedazo de papel humedecido dentro de una caja de Petri e introduciendo cuidadosamente la cámara.

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Observar a seco débil en el microscopio, y contar las células en los cuadros apropiados. Eritrocitos y plaquetas: 5 cuadros pequeños de la región central. (R) Leucocitos y eosinófilos: contar 4 cuadros grandes. (W).

Recordar contar solo las células que toquen una L imaginaria y seguir un patrón al desplazarse por la cuadrícula.

8


Calcular el volumen correspondiente a los cuadros contados. Por ejemplo, en los leucocitos se cuentan 4 cuadros de 1mm * 1mm, por lo que el área es 4mm cuadrados. Considerando que la cámara tiene una profundidad de 0,1 mm. El volumen total contado sería 0,4 mm cúbicos.

Calcular la cantidad de células/mm3 Células contadas *FD volumen contando

FD: factor de dilución utilizado

Valores de referencia:

1 mm3=1 microlitro

Eritrocitos: 4.20-6.00 x10E6/microlitro hombres 3.80-5.20x10E6/microlitro mujeres Plaquetas: 150-450x10E3/microlitro Eosinófilos: 0-0.3x10E3/microlitro Leucocitos: 3.6-10.6 x10E3/microlitro

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Tiempo DE SANGRÍA

IVY

DUKE

1. Desinfectar con alcohol 70% 2. Se realiza una incisión de profundidad estandarizada (1 mm de profundidad), en la cara interna del antebrazo del paciente. 3. Previamente con un esfingomanómetro se produce una presión constante de 40 mmHg. 4. Se pone en marcha el cronómetro. Durante ese tiempo, se absorbe la sangre cada 30 segundos, con un papel absorbente sin tocar el lugar de la incisión. 5. Se toma el tiempo que transcurre entre el momento en que se realiza la incisión y el que termina de sangrar.

1. Se desinfecta con alcohol 70% 2. Se realiza una incisión de 3-4 mm de profundidad con una aguja especial o lanceta, preferentemente en el lóbulo auricular o la yema de los dedos. 3. Se pone en marcha el cronómetro. Durante ese tiempo, se absorbe la sangre cada 30 segundos, con un papel absorbente sin tocar el lugar de la incisión. 4. Se toma el tiempo que transcurre entre el momento en que se realiza la incisión y el que termina de sangrar.

TIEMPO DE REFERENCIA: Ivy: <7.5 min Duke: <5 min 10


PROCESAMIENTO DE MUESTRAS COPROLOGÍA

1. Reportar color y consistencia. Así como sangre, moco, restos alimenticios o parásitos que puedan observarse. 2. Colocar 5mL de solución salina 0.85% en un recipiente. 3. Agregar 1g de materia fecal y homogenizar. 4. Colar la solución y observar cantidad de restos alimenticios. 5. Medir pH de la muestra y anotarlo. 6. Transferir solución colada a tubo de centrífuga. 7. Centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos. 8. Decantar el sobrenadante y homogenizar la muestra. 9. Colocar dos gotas de la muestra sobre el portaobjetos, a una agregar una gota de solución salina y a otra una gota de lugol.

10. Mezclar cada gota con la punta de un cubreobjetos, luego, cubrirla con el mismo. 11


11. Inspeccionar la lámina en seco débil y corrobar estructuras sospechosas en seco fuerte. 12. Reportar por cruces estructuras encontradas.

Grasa

Jabones

Gotas perfectamente redondeadas, de tamaño variable, muy refringentes y color anaranjado en preparaciones con lugol.

ácidos grasos con minerales que se aprecia como cristalina pequeña, redondeada, incolora o amarilla. Con poca refringencia.

Célula vegetal

Almidón

Parénquima de célula vegetal no digerida.

Estructura color azul o negro en preparaciones con lugol.

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Fibra muscular

E. coli

Levaduras

Presentan forma rectangular y ángulos marcados, con estriaciones longitudinales y transversales.

Generalmente esféricos, 8 núcleos. El cariosoma puede ser compacto o difuso, de localización central o excéntrica.

Células oviodes que pueden encontrarse en forma de levaduras o hifas

E. nana Son pequeños y su forma varía de esférica a elíptica. Los maduros contienen 4 núcleos. En preparaciones teñidas, el núcleo tiene un cariosoma definido más grande que las especies Entamoeba.

I. butschlii Forma variable de esférica a elíptica. Los quistes maduros tiene un solo núcleo no visible en preparaciones con yodo. La característica más destacada es le presencia de una masa de glucógeno

13

Balantidium coli Son de forma esférica a oval. El macronúcleo y el micronúcleo están presentes y puede tener un aspecto granular.


Giardia lamblia Ovales o elípticos. Los maduros tienen 4 núcleos. Con tinción de yodo son visibles los núcleos y las fibrillas intracitoplasmáticas.

E. hystolitica/dispar Quistes esféricos con cuatro núcleos, estos son similares a los de los trofozoítos, excepto pero de tamaño menor. Cuerpos cromatoides alargados y con extremos redondeados

A. lumbricoides Huevo fecundado, típicamente de color pardo amarillento, con cubierta gruesa mamelonada

T. hominis El axostilo se extiende desde el extremo anterior hasta proyectarse en el posterior. El núcleo de localización anterior contiene un pequeño cariosoma

14

C. mesnili Quiste uninucleado con forma de limón. Núcleo grande con cariosoma voluminoso, la fibrillas le dan un aspecto de un imperdible abierto.

B. hominis Quiste de pared gruesa, esférico a subesférico. Es característico que estos organismos tengan un gran cuerpo central con un margen estrecho de citoplasma que contiene núcleos y cuerpos de inclusión.


T. trichiura Tienen forma de barril, una cubierta gruesa de color pardo amarillento y tapones mucosos claros en los extremos.

Taenia spp

Esféricos, de color pardo amarillento. La cubierta es gruesa y estriada en forma radial, dándole un aspecto prismático.

E. vermicularis

Uncinaria

Huevo alargado, aplanado de un lado, con una cubierta gruesa incolora.

Huevos de cubierta delgada, incoloros con blastómeros

H. nana

H. diminuta

La oncosfera con seis ganchos está rodeada por una membrana que presenta dos engrosamientos polares, a partir de los cuales surgen cuatro a ocho filamentos que se extienden hacia el espacio el embrión y la cubierta externa 15

La oncosfera de seis ganchos está rodeada por una membrana considerablemente separada de la cubierta externa. No hay filamentos polares.


CONDICIONES NORMALES Consistencia pastosa, color marrรณn, pH 6.9-7.2, sin parรกsitos, sangre o moco. Si presenta almidรณn, restos alimenticios o grasas es en bajas cantidades.

16


Técnica

Kato-Katz 1

Filtrar con malla de nilón 2 a 3 g de muestra.

2

Colocar plantilla sobre una lámina y llenar el orificio con el material filtrado.

Retirar 5

la plantilla con precaución de que el cilíndro de muestra permanezca en el portaobjetos.

¿Cómo se observa? 4

Cubrir y comprimir

No aclarada

cilíndro con papel celofán previamente sumergido en la solución de Kato.

Aclarada 5

Dejar reposar a temperatura ambiente por 30 a 45 minutos.

Calcular intensidad 7 6

multiplicando la cantidad de huevos observados por el FM Por ejemplo: 12 huevos vistos * 24 = 288 huevos/g

¿QUÉ FACTOR DE MULTIPLICACIÓN (FM) DEBO USAR? Depende de las dimensiones del orificio de la plantilla.

6 x 1 .5

Observar

mm =

en 10x 9x1m

17

m=2

0

24


Inmunocromatografia

Sangre oculta Utilizar un tubo para diluciรณn.

Tomar una muestra de las heces e introducir el palito en el diluyente. Agitar.

Romper la punta del vial y depositar gotas en celdas A y B. Esperar 10 min.

Interpretar

+

-

Invรกlido 18


URIANÁLISIS Tomar muestra

Aproximadamente 20 mL

1- UTILIZAR RECIPIENTES ADECUADOS: - LIMPIOS, - DE BOCA ANCHA, - HERMÉTICOS. 2- PROCESAR LA MUESTRA A NO MÁS DE 2 HORAS DE RECOLECCIÓN. Se pueden utilizar envases especiales para componentes epecíficos y bolsas recolectores estériles para pacientes pediátricos.

LA ORINA DE

24h

1ra

SE UTILIZA PARA LA CUANTIFICACIÓN DE COMPONENTES

orina de la mañana se prefiere por estar más concentrada.

CREATININA, NITRÓGENO DE UREA, CALCIO, FÓSFORO, MAGNESIO, ACIDO ÚRICO, PROTEÍNAS, ETC.

EXAMEN FÍSICO 1- DETERMINAR COLOR 2- HOMOGENIZAR LA MUESTRA INVIRTIENDOLA .

SUAVEMENTE.

3- COLOCAR UNA HOJA CON TEXTO DETRÁS DE .

LA MUESTRA.

Esta muestra es límpida

3- DETERMINAR ASPECTO LÍMPIDO (SE PUEDE VISUALIZAR EL TEXTO A TRAVÉS DE LA MUESTRA), LIGERAMENTE TURBIO (SE VISUALIZA PERO NO SE LEE) O TURBIO (NO SE VISUALIZA), 4- REPORTAR. 19

Esta muestra es ligeramente turbia


EXAMEN BIOQUÍMICO 1. Verter muestra a un tubo cónico, dejando aproximadamente 1 cm vacío. 2. Sumergir por completo el área reactiva de la tira en el recipiente conteniendo la muestra e inmediatamente sacarla para evitar que los reactivos se disuelvan. 3. Correr el filo de de la tira contra contra el borde del recipiente de la orina para desechar el exceso. 4. Sostener la tira en una posición horizontal y contactar el filo de la tira con un material absorbente Esto evita que los químicos se mezclen con reactivos de áreas adyacentes .

Cada prueba tiene un tiempo específico. Este se indica en la tabla de colores.

VALORES DE REFERENCIA Aspecto: ámbar límpido pH: 5,5 a 6,5 Gravedad específica: 1.016 a 1.022 Proteínas. Glucosa, cetonuria, bilirrubina,

5. Compare las áreas reactivas con la correspondiente tabla de colores que se encuentra en el rótulado del tubo en el tiempo epecificado. 20

urobilinógeno, sangre, leucocitos, nitritos: negativos


EXAMEN MICROSCÓPICO 6. Centrifugar durante 5 minutos a 1500 rpm. 7. Decantar el sobrenadante y homogenizar el sedimento con una micropipeta. 8. Colocar una gota de sedimento en el portaobjetos y cubrir con cubreobjetos. 9. Observar al microscopio inicialmente en seco débil y en seco fuerte para corroborar elementos sospechosos. 10. Se reporta en cruces, a excepción de los RBC y WBC

Células epiteliales.

Células planas de forma irregular con pequeños núcleos centrales y abundante citoplasma.

Células de transición

Epitelio renal

Redondas o de forma de pera, pueden contener dos núcleos. 2 a 4 veces más grandes que los leucocitos.

Ligeramente más grandes que las WBC, contienen núcleos grandes y redondos.

Leucocitos Se identifican por sus lobulaciones y gránulos característicos. Se debe visualizar y reportar con un aumento 400x. Promediando al menos 10 campos visuales 21


Eritrocitos En orina pueden adquirir varias formas, cuando la mx es normal y fresca presenta la forma biconcava normal. Se cuentan igual que los WBC.

Cilíndro leucocitario

Puede haber pocas células o puede haber muchas células, Si todavía están intactos, los núcleos pueden ser claramente visibles.

Cilíndros céreos

Cilíndro granuloso

Tienen un índice de refracción muy alto, son de color amarillo, gris o incoloro, y tienen un aspecto suave y homogéneo.

Los modelos finamente granulares contienen fina gránulos que pueden aparecer de color gris o amarillo pálido

22

Cilíndro hialino

Son incoloros, homogéneos y transparentes, y suelen tener extremos redondeados.

Ácido úrico Puede tener diferentes formas pero la más comun es de diamante o rombo prismático, generalmente amarillos


Cristales de cistina

Cristales hexagonales incoloras, refráctiles con lados iguales o desiguales.

Cristales de colesterol

Son placas grandes, planas y transparentes con esquinas con muescas.

Triple fosfato

Urato-fosfato amorfo

Son prismas incoloros de tres a seis lados que frecuentemente tienen extremos oblicuos

Tener un aspecto granular amarillo-rojo

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Biurato de amonio

Son cuerpos esféricos de color amarillomarrón con largos, espículas irregulares.

Levaduras Son células lisas, incoloras, generalmente ovoides con paredes doblemente refráctiles. Pueden variar de tamaño y a menudo mostrar en ciernes.


Trofozoíto de T. Vaginalis

Aspecto piriforme, semilunar, esferoidal, con una actividad locomotriz muy intensa.

Espermatozoides Espermatozoide tienen cuerpos ovalados y colas largas, delgadas y delicadas

Moco Son hilos largos, delgados y ondulados como cintas estructuras que pueden mostrar tenues estrías longitudinales

VALORES DE REFERENCIA Hallazgo normal o no indica patología. No indica patología si se encuentra en

Tirosina Son agujas muy finas y altamente retráctiles ocurriendo en haces o racimos.

poca cantidad. No se encuentra normalmente en la orina.

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REFERENCIAS Arias, J. (2000). Enfermería medico quirúrgica. Tomo 1. Editorial Tebar. Ash, L. (2010). Atlas de parasitología humana. (5a ed). Argentina: Médica Panamericana. Botero, D. (2012). Parasitosis humanas. Barcelona: corporación para investigaciones biológicas CIB. Campuzano, M. (2007). El Uroanálisis: Un gran aliado del médico. Revista Urología Colombiana, XVI(1),67-92.[fecha de Consulta 23 de Enero de 2021]. ISSN:

0120-789X.

Disponible

en:

https://www.redalyc.org/articulo.oa?

id=1491/149120468005 Campuzano, M. (2017). Utilidad del extendido de sangre periférica: los leucocitos. Medicina & laboratorio: programa de educación médica contínua certificada. Universidad de Antioquia. 14(5) Mundt, L. (2015). Graff`s textbook of Urinalysis and body Fluids. Philadelphia: Wolters Kluwer. Pita-Rodríguez, G. (2010). ¿Se cumple siempre la relación hemoglobinahematócrito?. Revista Cubana de Hematología, Inmunología y Hemoterapia, 26(4), 359-361.



UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE QUÍMICA BIOLÓGICAEXPERIENCIAS DOCENTES CON LA COMUNIDAD -EDCANA SOFÍA PAMAL DE LEÓN


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