UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA DOCENTE: Bioq. Farm. Carlos García MSc. ESTUDIANTE: Ochoa Verzosa Stefanny Ximena CURSO: Quinto Año PARALELO: “A” GRUPO N°: 7 FECHA DE ELABORACIÓN DE LA PRÁCTICA: Lunes, 17/Agosto/2015 FECHA DE PRESENTACIÓN DE LA PRÁCTICA: Lunes,24/Agosto/2015
CALIFICACIÓN:
PRÁCTICA N° 11 TÍTULO DE LA PRÁCTICA:
INTOXICACIÓN POR COBRE TÓXICO:
Administrar 10 mL (mililitros) de Cobre
ANIMAL DE EXPERIMENTACIÓN: Rata wistar VÍA DE ADMINISTRACIÓN: Intraperitoneal T. DE MUERTE: 10 minutos SINTOMAS:
Vómito, Diarrea, Cefalea, Nausea,
Somnolencia.
COBRE
TIEMPOS:
Inicio de la práctica: 7:30 am Hora de muerte: 8:00 am Hora de disección: 8:10 am Hora del baño maría: 9:00 am Finalización del baño maría: 9:30 am
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
Final de la práctica: 10:30 am
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA: 1. Observar la reacción que presenta el animal de experimentación ante la Intoxicación por Cobre. 2. Observar cuidadosamente las manifestaciones y controlar el tiempo en que actúa el toxico y adquirir la destreza para realizar y reconocer la positividad de las reacciones de identificación. MATERIALES:
Mandil Mascarilla desechable Guantes desechables Gorro desechales Pipeta 10 mL Tubos de ensayo Pinza para tubos de ensayo Fósforos Bisturí Varilla de vidrio Jeringa de 10 mL Agitador de vidrio Vaso de precipitación 250 mL Mechero de Alcohol Probeta de 50 Ml Gradillas Equipo de destilación Zapatones desechables Espátula Panema Tabla de disección Equipo de disección
SUSTANCIAS:
Agua destilada Clorato de potasio KClO3 Solución de Cobre Ferrocianuro de potasio Amoniaco Cupron Yoduro de potasio Cianuros alcalinos Hidróxido de amonio Hidróxido de sodio Sulfuro de Hidrógeno Yoduro de potasio
MUESTRAS:
Muestra de medios biológicos
EQUIPOS:
Equipo de destilación Balanza analítica
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
PROCEDIMIENTO: 1. Inmediatamente al ingreso de los estudiantes al Laboratorio de Toxicología se debe equipar adecuadamente con mandil largo para Laboratorio limpio y sin manchas, gorro desechable, mascarillas desechables, guantes desechables y zapatones. Todo esto se realiza siguiendo las normas del Laboratorio para evitar posibles contaminaciones y contribuir con el orden. 2. Desinfectar el área de trabajo para realizar la práctica de Toxicología, siempre se debe tener limpio el mesón de trabajo y tener listo a disposición los respectivos materiales que se utilizaran en la práctica correspondiente en el Laboratorio de Toxicología. 3. Se procede a la administración del tóxico que es el Cobre, la dosis es diez mililitros al animal en experimentación que es la rata wistar. Se prepara la solución tóxica de Cobre, con 10 mililitros de la solución Cobre (CuSO4) con una jeringuilla de 10cc y administrarle a la rata wistar por vía intraperitoneal. Anotar la hora de administración. 4. Colocar la rata wistar en el panema y observar su sintomatología tomando en cuenta el tiempo hasta su deceso. Muerto el animal colocarlo en la tabla de disección se lo amarra con la ayuda de una piola. 5. Realizar la disección con un bisturí, pero antes se debe afeitar el área. Colocar las vísceras y líquido visceral en un vaso de precipitación, triturarlas lo más finamente posible. 6. Agregar las 50 perlas de vidrio y añadir 2 gramos de KClO3 y 25 ml de Ácido Clorhídrico concentrado. Para disolver el ácido, disolver en 20 ml de agua. 7. Mezclar bien y llevar a baño maría por 30 minutos. con agitación regular. A los 5 minutos que se cumpla con el tiempo establecido añadir 2 gramos más de KClO3. 8. Una vez finalizado el baño María, dejar enfriar, filtrar y con el filtrado realizar las reacciones de reconocimiento. Al finalizar la práctica, se procede al levantamiento de todos los medios biológicos y materiales de Laboratorio. Se desinfecta nuevamente el área de trabajo, se desechan
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
los materiales y que queden en su lugar y en orden luego desinfectarse las manos. REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS: El líquido proveniente de la destrucción de la materia orgánica, es tratado con amoniaco para disminuir la acidez y luego se realizan las reacciones de identificación que a continuación se detallan. 1. Con el Ferrocianuro de Potasio: En un medio acidificado con ácido acético, el cobre reacciona dando un precipitado rojo oscuro de ferrocianuro cúprico, insoluble en ácidos diluidos, soluble en amoniaco dando color azul. K4Fe(CN)6 + 2Cu(NO3)
Cu2Fe(CN)6 + KNO3
2. Con el Amoniaco: La solución muestra tratada con amoniaco, forma primero un precipitado verde claro pulverulento que al agregarle un exceso de reactivo se disuelve fácilmente dando un hermoso colr azul por formación de un compuesto cupro-amónico. Cu(NO3)2 + 4NH3
Cu(NH3)4 . (NO3)2
3. Con el Cuprón: En solución alcoholica al 1 % al que se le adiciona gotas de amoniaco, las sales de cobre reaccionan produciendo un precipitado verde insoluble en agua, amoniaco diluido, alcohol, ácido acético, soluble en acidos diluidos y poco solubles en amoniaco concentrado. C6H5-C=NOH C6H5-CHOH
C6H5-C=N-O + Cu(NO3)2
C6H5-C-N-O
Cu + 2HNO3
4. Con el Yoduro de Potasio: Adicionando a la solución muestra gota a gota, primeramente se forma un precipitado blando que luego se transforma a pardo-verdoso o amarillo. Cu(NO3)2 + IK + I35. Con los cianuros alcalinos: A una pequeña cantidad de muestra se agregan unos pocos cristales de cianuro de sodio formando un precipitado verde de cianuro de cobre, a este precipitado le agregamos exceso de cianuro de sodio y observamos que se disuelve por formación de un complejo de color verde-café. (NO3)Cu + 2CNNa (NO3)Cu + 3CNNa
(CN)2Cu + NO3- + Na+ [Cu(CN)3]= + 3Na+
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
6. Con el Hidróxido de Amonio: A la solución muestra, agregarle algunas gotas de NH4OH, con lo cual en caso positivo se forma un precipitado color azul claro de solución NO3(OH)Cu. Este precipitado es soluble en exceso de reactivo, produciendo solución color azul intenso que corresponde al complejo [Cu(NH3)4]++. (NO3)2Cu + NH3 (NO3)2Cu +3 NH3
Cu(OH)NO3 2[Cu(NH3)4+++ NO3H + H2O
7. Con el Hidróxido de Sodio: A 1ml de solución muestra, agregamos algunas gotas de de NaOH, con lo cual en caso de ser positivo se debe formar un precipitado color azul pegajoso por formación de Cu(OH)2. Este precipitado es soluble en ácidos minerales y en álcalis concentrados. Cu++ + 2OH
Cu(OH)2
8. Con el SH2: A la solución muestra, hacerle pasar una buena corriente de SH2, con lo cual en caso de ser positivo se forma un precipitado color negro este precipitado es insoluble en exceso de reactivo, en KOH 6M, en ácidos minerales diluidos y fríos . (NO3)2Cu + SH2
SCu+ 2NO3H
9. Con el IK: A una pequeña porción de solución muestra agregarle gota a gota de solución de IK, con lo cual en caso de ser positivo se forma inicialmente un precipitado color blanco que luego se transforma en pardo verdoso o por formaciones de iones tri yoduros, el mismo que se puede volar con Tio sulfato de sodio. (NO3)Cu + Tri yoduros
GRÁFICOS:
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
1. Animal de experimentación rata wister
3. Obseravr los síntomas de la rata luego de haber administrado el tóxico
2. Inyectar 10 ml del tóxico
2
1
3
5. Extraer y triturar las víceras, colocar 50 perlas de vidrio
4. Colocar la rata en la tabla de disección
5
4
6
7. Una vez finalizado el baño maria dejar enfriar
7
6. Llevar a baño maria por 30 minutos con agitación regular
8. Obtener el filtrado para realizar las reacciones correspondientes
8
REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS CON LA SOLUCIÓN PROBLEMA: 1. REACCIÓN CON EL FERROCIANURO DE POTASIO: “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
REACCIÓN POSITIVA En un medio acidificado con ácido acético, el cobre reacciona dando un precipitado rojo oscuro de ferrocianuro cúprico, insoluble en ácidos diluidos, soluble en amoniaco dando color azul. REACCIÓN DE PRECIPITACIÓN: K4Fe(CN)6 + 2Cu(NO3) Cu2Fe(CN)6 + KNO3
RESULTADO: Positivo Característico
ANTES: Reacción de Coloración
DESPÚES RESULTADO: Positivo característico
2. REACCIÓN CON AMONIACO: REACCIÓN POSITIVA La solución muestra tratada con amoniaco, forma primero un precipitado verde claro pulverulento que al agregarle un exceso de reactivo se disuelve fácilmente dando un hermoso colr azul por formación de un compuesto cupro-amónico. REACCIÓN DE COLORACIÓN: Cu(NO3)2 + 4NH3 Cu(NH3)4 . (NO3)2
RESULTADO: Negativo
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES RESULTADO: Negativo
3. REACCIÓN CON CUPRÓN: REACCIÓN POSITIVA En solución alcoholica al 1 % al que se le adiciona gotas de amoniaco, las sales de cobre reaccionan produciendo un precipitado verde insoluble en agua, amoniaco diluido, alcohol, ácido acético, soluble en acidos diluidos y poco solubles en amoniaco concentrado. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
REACCIÓN DE COLORACIÓN:
C6H5-C=NOH
C6H5-C=N-O
C6H5-CHOH + Cu(NO3)2 C6H5-C-N-O RESULTADO: Negativo
ANTES Reacción de coloración:
Cu + 2HNO3
DESPÚES ESULTADO: Negativo
4. REACCIÓN CON YODURO DE POTASIO: REACCIÓN POSITIVA Adicionando a la solución muestra gota a gota, primeramente se forma un precipitado blando que luego se transforma a pardo-verdoso o amarillo. REACCIÓN DE COLORACIÓN:
Cu(NO3)2 + IK + I3RESULTADO: Positivo No Característico
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES RESULTADO: Positivo Característico
5. REACCIÓN CON CIANUROS ALCALINOS: REACCIÓN POSITIVA A una pequeña cantidad de muestra se agregan unos pocos cristales de cianuro de sodio formando un precipitado verde de cianuro de cobre, al este precipitado le agregamos exceso de cianuro de sodio y observamos que se disuelve por formación de un complejo de color verde-café. REACCIÓN DE COLORACIÓN: (NO3)Cu + 2CNNa (CN)2Cu + NO3- + Na+
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
(NO3)Cu + 3CNNa
[Cu(CN)3]= + 3Na+
RESULTADO: Positivo Característico (Precipitado verdoso)
DESPÚES RESULTADO: Positivo Característico (Precipitado verdoso)
ANTES Reacción de coloración:
6. REACCIÓN CON HIDRÓXIDO DE AMONIO: REACCIÓN POSITIVA A la solución muestra, agregarle algunas gotas de NH4OH, con lo cual en caso positivo se forma un precipitado color azul claro de solución NO3(OH)Cu. Este precipitado es soluble en exceso de reactivo, produciendo solución color azul intenso que corresponde al complejo [Cu(NH3)4]++. REACCIÓN DE COLORACIÓN:
(NO3)2Cu + NH3
Cu(OH)NO3
(NO3)2Cu +3 NH3
2[Cu(NH3)4+++ NO3H + H2O RESULTADO: Positivo Característico (Precipitado azul claro)
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES RESULTADO: Positivo Característico (Precipitado azul claro)
7. REACCIÓN CON HIDRÓXIDO DE SODIO: REACCIÓN POSITIVA A 1ml de solución muestra, agregamos algunas gotas de de NaOH, en caso de ser positivo se debe formar un precipitado color azul pegajoso por
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
formación de Cu(OH)2. Este precipitado es soluble en ácidos minerales y en álcalis concentrados. REACCIÓN DE COLORACIÓN:
Cu++ + 2OH
Cu(OH)2
RESULTADO: Positivo Característico
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES RESULTADO: Positivo Característico
8. REACCIÓN CON SULFURO DE HIDRÓGENO: REACCIÓN POSITIVA A la solución muestra, hacerle pasar una buena corriente de SH2 en caso de ser positivo se forma un precipitado color negro este precipitado es insoluble en exceso de reactivo, en KOH 6M, en ácidos minerales diluido s y fríos. REACCIÓN DE COLORACIÓN:
(NO3)2Cu + SH2 RESULTADO: Negativo
ANTES Reacción de coloración:
SCu+ 2NO3H
DESPÚES RESULTADO: Negativo
9. REACCIÓN CON YODURO DE POTASIO: REACCIÓN POSITIVA A una pequeña porción de solución muestra agregarle gota a gota de solución de IK, con lo cual en caso de ser positivo se forma inicialmente un precipitado color blanco que luego se transforma en pardo verdoso o “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
por formaciones de iones tri yoduros, el mismo que se puede volar con Tio sulfato de sodio. REACCIÓN DE COLORACIÓN:
(NO3)Cu + Tri yoduros RESULTADO: Positivo No Característico
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES RESULTADO: Positivo No Característico
OBSERVACIONES:
A la solución madre de medios biológicos se le adiciona dos gramos de KClO3 para identificar cobre. Al realizar la disección de la rata wistar, se pudo observar que el cobre provoco daños en órganos. La mayoría de las reacciones de reconocimiento dieron como resultado positivo, comprobando la presencia de este toxico en los órganos afectados.
RECOMENDACIONES:
Conocer y aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio para evitar accidentes. Toda sustancia a manipular en la práctica se las debe de realizar bajo la campana extractora de gases. Culminada la práctica se debe dejar el área de trabajo desinfectada, para evitar contaminación con las sustancias químicas utilizadas.
CONCLUSIONES:
En esta práctica se pudo observar la intoxicación con cobre a dosis de diez mililitros es letal en el cual ocasionó la muerte de la rata wistar, con un tiempo de muerte de diez minutos debido a su toxicidad que tiene este compuesto que es el cobre se producen así diferentes manifestaciones o síntomas como vómito, diarrea,
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
cefalea y mediante las pruebas de reconocimiento se pudo comprobar la presencia de cobre en los órganos afectados del animal.
CUESTIONARIO: 1. ¿CUÁLES SON LOS PRINCIPALES ENFERMEDADES POR LA INTOXICACIÓN POR COBRE? La anemia hemolítica, la enfermedad de Wilson se debe por la acumulación progresiva de cobre en hematíes, riñón, hígado y cerebro de carácter hereditario autosómico recesivo por lo que se produce en hermanos de ambos sexos pero no recibe directamente de los padres ni se cede a los hijos.
2. ¿DÓNDE PODEMOS ENCONTRAR EL COBRE COMO COMPUESTO TÓXICO PARA LA SALUD HUMANA? El cobre el agua potable causa trastornos en la salud humana, la aparición de los síntomas es cuestión de minutos a horas (diarrea: uno a dos días) después de la ingestión de agua de cobre 3. ¿NOMBRE CIETOS TRATAMIENTOS BIOLÓGICOS CONTRA LA INTOXICACIÓN POR COBRE EN SERES HUMANOS? Tratamiento Biológico: la prescripción mediante fitoterápicos debe ser inmediata como el B-4. BD-15 para restrablecer el hígado. Una dieta rica en vitaminas y un tratamiento único como la D-PENICILINA, fijadora del cobre al suero y por tanto eliminación de su circulación.
GLOSARIO Autosómico dominante: El término autosómico dominante describe a uno de los patrones de herencia clásicos o mendelianos y se caracteriza por presentar el fenómeno de dominancia genética para un determinado alelo de un gen cuyo locus se encuentra ubicado en alguno de los autosomas o cromosomas no determinantes del sexo. Caracteres hereditario: Característica morfológica, estructural fisiológica presente en un ser vivo y transmisible a la descendencia.
ANEXOS: “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
o
BIBLIOGRAFÍA Fundación Europea de Medicinas Alternativas. Enfermedad de Wilson por la toxicidad del cobre. En línea {www.femalt.com}
AUTORIA Ochoa Verzosa Stefanny Ximena BQF. García González Carlos
FIRMA DE RESPONSABILIDAD:
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FECHA DE ENTREGA: Lunes 24 de Agosto del 2015
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“