UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA DOCENTE: Bioq. Farm. Carlos García MSc. ESTUDIANTE: Ochoa Verzosa Stefanny Ximena CURSO: Quinto Año PARALELO: “A” GRUPO N°: 7 FECHA DE ELABORACIÓN DE LA PRÁCTICA: Lunes, 28/09/2015 FECHA DE PRESENTACIÓN DE LA PRÁCTICA: Lunes, 05/09/2015
CALIFICACIÓN:
PRÁCTICA N° 17 TÍTULO DE LA PRÁCTICA:
INTOXICACIÓN POR ÁCIDO NÍTRICO TÓXICO:
Administrar 5 mL (mililitros) de Ácido Nítrico
ANIMAL DE EXPERIMENTACIÓN: Rata wistar VÍA DE ADMINISTRACIÓN: Intraperitoneal T. DE MUERTE: 10 minutos SINTOMAS:
Lagrimeo, Irritación de mucosas oculares y respiratorias, Vómito con sangre.
TIEMPOS:
ÁCIDO NÍTRICO
Inicio de la práctica: 7:30 am Hora de muerte: 7:40 am Hora de disección: 7:50 am Hora del baño maría: 8:00 am Finalización del baño maría: 8:30 am Final de la práctica: 10:30 am
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA: 1. Observar las reacciones que presenta el animal de experimentación ante la Intoxicación por Ácido Nítrico. 2. Observar cuidadosamente las manifestaciones clínicas (síntomas) y controlar el tiempo en que actúa el toxico ácido nítrico e ir adquiriendo la destreza para realizar y reconocer la positividad de las reacciones de identificación. MATERIALES:
Bisturí, Gradilla, Panema, Fósforos, Piola larga, Mandil largo, Perlas de vidrio, Varilla de vidrio, Tubos de ensayo, Jeringa de 10 mL, Gorro desechable, Agitador de vidrio Espátula de metal, Tabla de disección, Mechero de Alcohol, Equipo de disección, Equipo de destilación, Guantes desechables, Tapa tubos de caucho, Mascarilla desechable, Zapatones desechables, Recipientes de aluminio, Tubos de ensayo de vidrio, Pipeta graduada de 10 mL, Pinza para tubos de ensayo, Papel para realizar pesadas, Vaso de precipitación 250 mL Vaso de precipitación 600 mL
SUSTANCIAS:
Agua destilada, Ácido Nítrico, Papel rojo congo, Solución Alcoholica violeta de metilo, Reactivo de Ginziburg, Brusina, Anilina, Sulfato ferroso, Fenol.
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
de
MUESTRAS:
Muestra de medios biológicos.
EQUIPOS:
Balanza analítica, Cocineta eléctrica,
PROCEDIMIENTO: 1. Inmediatamente al ingreso de los estudiantes al Laboratorio de Toxicología se debe equipar adecuadamente con mandil largo, limpio, sin manchas, gorro desechable, mascarilla desechable, guantes desechables y zapatones desechables. Todo esto se realiza siguiendo las normas del Laboratorio para evitar posibles contaminaciones y contribuir con el orden. 2. Desinfectar el área de trabajo para realizar la práctica de Toxicología, siempre se debe tener limpio el mesón de trabajo y tener listo a disposición los respectivos materiales que se utilizaran en la práctica correspondiente en el Laboratorio de Toxicología. 3. Se procede a la administración del tóxico en este caso es el Ácido Nítrico y la dosis es de 5 (cinco) mililitros al animal en experimentación que es la rata wistar; con la dosis de veinte mililitros ocasiona la muerte del animal en experimentación. 4. Se prepara la solución tóxica de Ácido Nítrico y con ayuda de una jeringa de diez mililitros se procede a la administración del tóxico por vía intraperitoneal y una vez transcurrido el tóxico al animal en experimentación, se observan los síntomas inmediatamente. 5. A dosis de cinco mililitros causa la muerte del animal, observando la sintomatología del animal, transcurrido este tiempo se coloca a la rata wistar en el panema se procede a afeitar el área a realizar la incisión. 6. Con la ayuda de un bisturí estéril se disecciona todo el dorso del animal evitando perforar las vísceras luego se recogen las vísceras en un vaso de precipitación. 7. Observamos los cambios que presentan sus órganos y con la ayuda de una jeringuilla se recoge el líquido que hay en su cavidad abdominal
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
8. Triturar las vísceras lo más fino posible, agregar las 50 perlas de vidrio más 2 gramos más solución Clorato de potasio e ir añadiendo con pipeta graduada los 25 mililitros de Ácido clorhídrico concentrado, llevamos a baño maría por 30 minutos con agitación regular. Este paso se lo realiza en la campana extractora de gases tóxicos. 9. Una vez finalizado el baño maría dejar enfriar, filtrar y con el filtrado realizar las reacciones de identificación. Al finalizar la práctica, se procede al levantamiento de todos los medios biológicos y materiales de Laboratorio, se desinfecta nuevamente el área de trabajo, se desechan los materiales y que queden en su lugar y en orden luego desinfectarse las manos. REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS: Destruida la materia orgánica se realizan las reacciones de reconocimiento, después de haber filtrado la mezcla. Estas reacciones son: REACCIONES PARA RECONOCER AL ACIDO NITRICO 1. Al hacer reaccionar un papel embebido con rojo congo, este se colorea de azul en caso positivo. 2. Se trata una porción del líquido con solución alcohólica de violeta de metilo 1:100, produciéndose una coloración azul-gris-verde ante la presencia de acidos minerales. 3. La reacción con el reactivo de gunzburg (1 g de vainillina, 1 g de fluoroglucina en 30 ml de alcohol), es posiblemente la reacción más específica para identificar a los acidos minerales para lo cual se evapora una pequeña cantidad de la muestra a baño maria y se agrega unas gotas del reactivo; en presencia de los acidos minerales un color rojo-amarillento o rojo. 4. Con la brusina disuelta en el acido sulfúrico, se produce un color rojo en caso positivo. 5. Con la anilina en acido sulfúrico toma un color azul en presencia de acido nítrico. 6. Con el sulfato ferroso, al adicionar a la muestra unas gotas del reactivo y luego acido sulfúrico puro, debe dar un color rosado. 7. Con el fenol al agregar en acido sulfúrico a la muestra acidificada en acido acético debe formarse un color amarillo en caso de encontrarse el acido nítrico, si al principio se los agregan gotas de amoniaco, el color amarillo original, se vuelve mas intenso.
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
GRÁFICOS:
1. Animal de experimentación rata wister
2. Inyectar 10 ml del tóxico
1
2
4. Colocar las sales de mercurio y agitar
4
7. Una vez finalizado el baño maria dejar enfriar y filtrar.
7
3. Obseravr los síntomas de la rata luego de haber administrado el tóxico
3
5. Extraer y triturar las víceras, colocar 50 perlas de vidrio
6. Llevar a baño maria por 30 minutos con agitación regular
5
6
8. Obtener el filtrado para realizar las reacciones correspondientes
8
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS CON LA SOLUCIÓN PROBLEMA: 1. REACCIÓN CON EL PAPEL ROJO CONGO REACCIÓN POSITIVA Al hacer reaccionar un papel embebido con rojo congo, este se colorea de azul en caso positivo. RESULTADO: POSITIVO CARCATERÍSTICO
REACCIÓN ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES RESULTADO: Positivo carcaterístico
2. REACCIÓN CON LA SOLUCIÓN ALCOHÓLICA DE VIOLETA DE METILO 1:100 REACCIÓN POSITIVA Se trata una porción del líquido con solución alcohólica de violeta de metilo 1:100, produciéndose una coloración azul-gris-verde ante la presencia de acidos minerales. RESULTADO: POSITIVO CARACTERÍSTICO
REACCIÓN ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES RESULTADO: Positivo Característico
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
3. REACCIÓN CON EL REACTIVO GUNZBURG: REACCIÓN POSITIVA La reacción con el reactivo de gunzburg (1 g de vainillina, 1 g de fluoroglucina en 30 ml de alcohol), es posiblemente la reacción más específica para identificar a los acidos minerales para lo cual se evapora una pequeña cantidad de la muestra a baño maria y se agrega unas gotas del reactivo; en presencia de los acidos minerales un color rojo-amarillento o rojo.
RESULTADO: POSITIVO CARACTERÍSTICO
REACCIÓN ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES RESULTADO: Positivo Característico
4. REACCIÓN CON LA BRUSINA DISUELTA EN ÁCIDO SULFÚRICO: REACCIÓN POSITIVA Con la brusina disuelta en el acido sulfúrico, se produce un color rojo en caso positivo. RESULTADO: POSITIVO CARACTERÍSTICO
REACCIÓN ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES RESULTADO: Positivo Característico
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
5. REACCIÓN CON LA ANILINA DISUELTA EN ÁCIDO SULFÚRICO: REACCIÓN POSITIVA Con la anilina en acido sulfúrico toma un color azul en presencia de acido nítrico.
RESULTADO: POSITIVO CARACTERÍSTICO
REACCIÓN ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES RESULTADO: Positivo Característico
6. REACCIÓN CON EL REACTIVO GUNZBURG: REACCIÓN POSITIVA Con el sulfato ferroso, al adicionar a la muestra unas gotas del reactivo y luego acido sulfúrico puro, debe dar un color rosado.
RESULTADO: POSITIVO CARACTERÍSTICO
REACCIÓN ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES RESULTADO: Positivo Característico
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
7. REACCIÓN CON FENOL: REACCIÓN POSITIVA Con el fenol al agregar en acido sulfúrico a la muestra acidificada en acido acético debe formarse un color amarillo en caso de encontrarse el acido nítrico, si al principio se los agregan gotas de amoniaco, el color amarillo original, se vuelve mas intenso.
RESULTADO: POSITIVO CARACTERÍSTICO
REACCIÓN ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES RESULTADO: Positivo Característico
OBSERVACIONES:
En la realización de ésta práctica al haber administrado los cinco mililitros de Solución tóxica de Ácido Nítrico por vía intraperitoneal en la rata wistar y se pudo observar el deceso del animal.
RECOMENDACIONES:
Conocer y aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio para evitar accidentes. Toda sustancia a manipular en la práctica se las debe de realizar bajo la campana extractora de gases.
CONCLUSIONES:
En esta práctica se pudo observar la intoxicación por Solución tóxica de Ácido Nítrico y con dosis de cinco mililitros de este tóxico ocasionó la muerte del animal con un tiempo de diez minutos, debido a la alta toxicidad que tiene este compuesto produciendo así diferentes manifestaciones o síntomas como lagrimeo, irritaión de mucosas oculares y respiratorias, vómito con sangre. Y así comprobamos que en las reacciones de identificación la presencia del tóxico como es la Solución tóxica de Ácido Nítrico
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
CUESTIONARIO: 1. CUAL ES LA DOSIS AGUDA Y CUAL ES LA DOSIS CRÓNICA DEL ÁCIDO NÍTRICO Es muy común en zonas rurales como la zona sur del estado de México, que involucra a pacientes jóvenes e incluso niños predominando el sexo femenino, previamente sanos, originarios de medios rurales, nivel socioeconómico generalmente bajo.
2. EN QUÉ SE UTILIZA EL ÁCIDO NÍTRICO EN LAS INDUSTRIAS EN LA INDUSTRIA AGRÍCOLA.- Se emplea como fertilizante de abono.
GLOSARIO DOSIS LETAL: La dosis letal, también conocida por sus siglas en inglés LD, es una forma de expresar el grado de toxicidad de una sustancia
ANEXOS:
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
BIBLIOGRAFÍA Toxicología Médica Dr. Phil, Dr. Med. H. Funher. Editorial CientíficoMédico. Madrid. España
AUTORIA Ochoa Verzosa Stefanny Ximena BQF. García González Carlos
FIRMA DE RESPONSABILIDAD:
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FECHA DE ENTREGA: Lunes 05 de Octubre del 2015
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“