UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA DOCENTE: Bioq. Farm. Carlos García MSc. ESTUDIANTE: Stefanny Ximena Ochoa Verzosa CURSO: Quinto Año PARALELO: “A” GRUPO N°: 7 FECHA DE ELABORACIÓN DE LA PRÁCTICA: Lunes, 08/06/2015 FECHA DE PRESENTACIÓN DE LA PRÁCTICA: Lunes, 15/06/2015
CALIFICACIÓN:
PRÁCTICA N° 4 TÍTULO DE LA PRÁCTICA:
INTOXICACIÓN POR CLOROFORMO TÓXICO:
Administrar 10 mL (mililitros) de CLOROFORMO
ANIMAL DE EXPERIMENTACIÓN: Rata wister VÍA DE ADMINISTRACIÓN: Intraperitoneal T. DE MUERTE: 30 minutos SINTOMAS:
Vómito Cefalea Vértigo Nauseas Somnolencia
TIEMPOS:
Inicio de la práctica: 8:05 am Hora de disección: 8:07 am hasta 8:20 am Hora de destilación: 8:25 am Final de la práctica: 10:30 am
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA: 1. Observar la reacción que presenta el cobayo ante la Intoxicación por cloroformo. 2. Observar cuidadosamente las manifestaciones y controlar el tiempo en que actúa el toxico. 3. Adquirir la destreza para realizar y reconocer la positividad de las reacciones de identificación. MATERIALES:
Mandil Mascarilla desechable Guantes desechables Gorro desechales Pipeta 10 mL Tubos de ensayo Pinza para tubos de ensayo Fósforos Bisturí Varilla de vidrio Jeringa de 10 mL Agitador de vidrio Vaso de precipitación 250 mL Mechero de Alcohol Probeta de 50 Ml Gradillas Equipo de destilación Zapatones desechables Espátula Panema Tabla de disección Equipo de disección
SUSTANCIAS:
Agua destilada Solución de Cloroformo Ácido tartárico al 20% Agua destilada Percloruro de Hierro Nitrato de Plata Beta naftol Timol Resorsinol Lejía de Sosa (proporcion1:2) Potasa alcohólica (proporción 1:10). Cristales de Yodo Clorhidrato de piperacina Reactivo de Benedict
MUESTRAS:
Muestra de medios biológicos
EQUIPOS:
Equipo de destilación Balanza analítica
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
PROCEDIMIENTO: 1. Inmediatamente al ingreso de los estudiantes al Laboratorio de Toxicología se debe equipar adecuadamente con mandil largo para Laboratorio limpio y sin manchas, gorro desechable, mascarillas desechables, guantes desechables y zapatones. Todo esto se realiza siguiendo las normas del Laboratorio para evitar posibles contaminaciones y contribuir con el orden. 2. Desinfectar el área de trabajo para realizar la práctica de control de calidad de un producto farmacéutico sólido, siempre se debe tener limpio el mesón de trabajo y tener listo a disposición los respectivos materiales que se utilizaran en la práctica correspondiente en el Laboratorio de Toxicología. 3. Se procede a la administración del tóxico en este caso es el Cloroformo también, la dosis es diez mililitros al animal en experimentación que es la rata wister. 4. Se prepara la solución tóxica de Clorofromo empleando una jeringa de diez mililitros, la vía de administración es intraperitoneal y una vez transcurrido el tóxico al animal en experimentación, se observan los síntomas inmediatamente como son convulsiones y una muerte rápida. 5. A dosis de diez mililitros a causado la muerte del animal, se procede a realizar una incisión con ayuda de un bisturí estéril. Observamos es estado de las víceras y en un vaso de precipitación recolectamos la sangre y colocando las vísceras (picadas lo más finas posibles). 6. El contenido del vaso anterior lo pasamos al balón para proceder a la destilación. Armamos correctamente el equipo de destilación (método de soxhleth), asegurando que no existan fugas que conlleven a pérdidas del destilado. 7. Adicionamos a las vísceras acido tartárico (25 ml) y calentamos con la lámpara de alcohol esto con movimiento circular durante 30 minutos (el destilado fue recibido en NaOH). Con el destilado procedimos a realizar las reacciones de identificación del cloroformo en medios biológicos. 8. Al finalizar la práctica, se procede al levantamiento de todos los medios biológicos y materiales de Laboratorio. Se desinfecta nuevamente el área de trabajo, se desechan los materiales y que queden en su lugar y en orden luego desinfectarse las manos.
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS: El material de la investigación se somete a destilación con arrastre de vapor en medio acido tartárico, y en el destilado se realiza las reacciones de identificación. REACCIÓN DE DUNAS.- al adicionar unas gotas de destilado que contiene cloroformo a unos mililitros de potasa alcohólica (proporción 1:10), se originan formiatos y cloruro de potasio. CHCl3 + 4 KOH
ClK + HCO2K + H 2 O
Se neutralizan la mezcla, y se separan en dos porciones a una porción se le agrega percloruro de hierro produciendo un color rojo en frio o un precipitado en caliente. A la otra porción se le agrega solución de nitrato de plata produciéndose un precipitado de cloruro de plata que se disuelve en amoniaco diluido. REACCIÓN DE LUSTGARTEN.- al calentar la muestra con unos miligramos de beta naftol y una solución alcohólica concentrada de potasa (preferentemente un trozo de potasa y algunas gotas de alcohol), se obtiene un franco color azul. Si se sustituye el B-naftol por timol el color es Amarillo as o menos oscuro; con resorsinol la coloración e roja – violáceo y con la piridina rojo. REACCIÓN DE FUJIWARA.-En un tubo de ensayo, se vierte 2ml de lejía de sosa 1:2 con una capa de 2mm de piridina y luego la muestra que contiene el cloroformo; se agitan, podemos por unos instantes en baño de María y se deja en reposo; se convierte en una materia coloreada que varía del rosa al rojo vivo, soluble en piridina .Esta reacción sensible para unos pocos microgramos de cloroformo y es aplicable en la orina de algún sujeto que haya absorbido de 15-20 g de agua clorofórmica. REACCIÓN DE ROSEBOOM.- se disuelve un pequeño cristal de yodo en la solución muestra y se agregan unos pocos miligramos de clorhidrato de piperacina ; si el cloroformo está presente en la muestra, la coloración violeta inicial cambia a amarilla rojiza al disolverse el alcaloide. REACCIÓN DE BENEDICT.- si la solución muestra contiene cloroformo, reduce el reactivo de Benedict, y de acuerdo a la concentración del toxico puede producirse una gama de colores que van desde el verde, amarillo, naranja o rojo ladrillo.
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
GRÁFICOS: 1. Animal de experimentación rata wister
1
2. Inyectar 10 ml del tóxico
3. Obseravr los síntomas de la rata luego de haber administrado el tóxico
2
3
4. Colocar la rata en la tabla de disección
5. Extraer y triturar las víceras, colocar 50 perlas de vidrio
5
4
7. Una vez finalizado el baño maria dejar enfriar
7
6. Llevar a baño maria por 30 minutos con agitación regular
6
8. Obtener el filtrado para realizar las reacciones correspondientes
8
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS CON LA SOLUCIÓN PROBLEMA: REACCIÓN DE DUNNAS Reacción de Coloración: Positivo característico: Cambio de coloración
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES Positivo característico
REACCIÓN DE LUSTGARTEN Reacción de Coloración: Positivo característico: Cambio de coloración
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES Positivo no característico
REACCIÓN DE FUJIWARA Reacción de Coloración: Positivo característico: Cambio de coloración
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES Positivo no característico
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
REACCIÓN DE ROSEBOOM Reacción de Coloración: Positivo característico: Cambio de coloración
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES Positivo no característico
REACCIÓN DE BENEDICT Reacción de Coloración: Positivo característico: Cambio de coloración
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES Positivo no característico
OBSERVACIONES:
Esta vez el tiempo de muerte se prolongo mas de los esperado debido a que el cloroformo no es un toxico altamente peligroso. Al momento de armar el equipo de destilación hay que tener mucho cuidado ya que son equipos de altos costos.
RECOMENDACIONES:
Conocer y aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio para evitar accidentes. Preparar correctamente las soluciones y realizarlas con rapidez ya que son sustancias volátiles. Toda sustancia a manipular en la práctica se las debe de realizar bajo la campana extractora de gases.
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
Culminada la práctica se debe dejar el área de trabajo desinfectada, para evitar contaminación con las sustancias químicas utilizadas.
CONCLUSIONES:
Una vez finalizada la práctica y según los datos obtenidos podemos concluir de que el cloroformoes un toxico débilmente peligroso razón por el cual era muy utilizado como agente anestésico pero con el tiempo fue retirado del áreamédica debido a alguna intoxicación por el mismo; basándonosasí en el conocimientode este tema por teoría y comprobando en el laboratorio en un animal de experimentación.
CUESTIONARIO: Es un gas incoloro de olor penetrante que se utiliza mucho en la fabricación de materiales para la construcción y en la elaboración de productos para el hogar, principalmente resinas adhesivas para tableros de madera aglomerada. ¿QUÉ PROPIEDADES PRESENTA EL CLOROFORMO?
Los productos de descomposición del cloroformo son: fosgeno, cloruro de hidrógeno, cloro y óxidos de carbono y cloro. Todos ellos corrosivos y muy tóxicos. El cloroformo reacciona violentamente con: Acetona en medios muy básicos. Fluor, tetróxido de dinitrógeno, metales como aluminio, magnesio, sodio, litio y potasio, sodio en metanol, metóxido de sodio, nitrometano, isopropilfosfina y derivados alquilados de aluminio. Es oxidado por reactivos como ácido crómico, formando fosgeno y cloro. Se descompone a temperatura ambiente por acción de la luz del sol en ausencia de aire y en la oscuridad en presencia de este último, siendo uno de los productos de esta descomposición
¿CUALES SON LOS EFECTOS TOXICOS DEL CLOROFORMO? Efectos tóxicos agudos.El cloroformo es un agente altamente irritante en estado líquido, produce efectos irritantes en nariz, garganta, ojos, piel.15No obstante, no se han descrito efectos irritantes en estado gaseoso.
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
En estudios de exposición a cloroformo por vía inhalatoria a corto plazo en animales de experimentación se han descrito depresión del SNC, dilatación de pupilas de los ojos (midriasis), reducción a la reacción a la luz, y reducción de la presión intraocular. Efectos tóxicos Crónicos.- El cloroformo presenta una toxicidad de leve a moderada. La exposición crónica (a largo plazo) tiene efectos sobre el hígado (incluyendo hepatitis e ictericia), sobre el sistema nervioso central (como la depresión y la irritabilidad), y sobre los riñones. GLOSARIO
Cloroformo.-es un compuesto químico de fórmula química CHCl3. Puede obtenerse por cloración como derivado del metano o del alcohol etílico o, más habitualmente en laindustria farmacéutica, utilizando hierro y ácido sobre tetracloruro de carbono.
Anticongelantes.Son compuestos que se añaden a los líquidos para reducir su punto de solidificación, logrando de esta forma que la mezcla resultante se congele a una temperatura más baja.
Toxicocinética.-Es el conjunto de fenómenos que experimenta el tóxico desde su entrada a un organismo hasta su eliminación.
Acidosis.- Es un término clínico que indica un trastorno hidroelectrolítico que puede conducir a academia, y que viene definido por un pH sanguíneo inferior a 7.35. La acidosis puede ser metabólica o respiratoria.
AUTORIA BQF. Carlos García González
FIRMA DE RESPONSABILIDAD:
-----------------------------------------------
FECHA DE ENTREGA: Lunes 29 de Junio del 2015
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“