UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA DOCENTE: Bioq. Farm. Carlos García MSc. ESTUDIANTE: Stefanny Ximena Ochoa Verzosa CURSO: Quinto Año PARALELO: “A” GRUPO N°: 7 FECHA DE ELABORACIÓN DE LA PRÁCTICA: Lunes, 29/Junio/2015 FECHA DE PRESENTACIÓN DE LA PRÁCTICA: Lunes, 06/Julio/2015
CALIFICACIÓN:
PRÁCTICA N° 5 TÍTULO DE LA PRÁCTICA:
INTOXICACIÓN POR CETONA TÓXICO:
Administrar 10 mL (mililitros) de ACETONA
ANIMAL DE EXPERIMENTACIÓN: Rata wistar VÍA DE ADMINISTRACIÓN: Vía Intraperitoneal T. DE MUERTE: 10 minutos SINTOMAS:
Vómito Nauseas Vértigo Pérdida del conocimiento Hinchazón como edema pulmonar
TIEMPOS:
Inicio de la práctica: 8:05 am Hora de disección: 8:35 am Hora de destilación: 8:40 am Final de la práctica: 10:30 am
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA: 1. Observar la reacción que presenta el animal de experimentación ante la Intoxicación por acetona. 2. Observar cuidadosamente las manifestaciones físicas y controlar el tiempo en que actúa el toxico y adquirir la destreza para realizar y reconocer la positividad de las reacciones de identificación. MATERIALES:
Mandil Mascarilla desechable Guantes desechables Gorro desechales Pipeta 10 mL Tubos de ensayo Pinza para tubos de ensayo Fósforos Bisturí Varilla de vidrio Jeringa de 10 mL Agitador de vidrio Vaso de precipitación 250 mL Mechero de Alcohol Probeta de 50 Ml Gradillas Equipo de destilación Zapatones desechables Espátula Panema Tabla de disección Equipo de disección
SUSTANCIAS:
Agua destilada Acetona Yodo mercúrico Yodo yodurada Hidróxido de potasio Carbonato de sodio o hidróxido de sodio Ácido clorhídrico concentrado5% Ramnosa (lactosa)
MUESTRAS:
Muestra de medios biológicos
EQUIPOS:
Equipo de destilación Balanza analítica
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
PROCEDIMIENTO: 1. Inmediatamente al ingreso de los estudiantes al Laboratorio de Toxicología se debe equipar adecuadamente con mandil largo para Laboratorio limpio y sin manchas, gorro desechable, mascarillas desechables, guantes desechables y zapatones. Todo esto se realiza siguiendo las normas del Laboratorio para evitar posibles contaminaciones y contribuir con el orden. 2. Desinfectar el área de trabajo para realizar la práctica de control de calidad de un producto farmacéutico sólido, siempre se debe tener limpio el mesón de trabajo y tener listo a disposición los respectivos materiales que se utilizaran en la práctica correspondiente en el Laboratorio de Toxicología. 3. Se procede a la administración del tóxico en este caso es el Acetona, la dosis es diez mililitros al animal en experimentación que es la rata wistar. 4. Se prepara la solución tóxica de Acetona empleando una jeringa de diez mililitros, la vía de administración es intraperitoneal y una vez transcurrido el tóxico al animal en experimentación, se observan los síntomas inmediatamente como son convulsiones y una muerte rápida. 5. A dosis de diez mililitros a causado la muerte del animal, se procede a realizar una incisión con ayuda de un bisturí estéril. Con ayuda de una tijera o una hoja guillette se rasura el pelaje del abdomen del animal para facilitar el corte. 6. Con un bisturí se disecciona todo el dorso del animal evitando perforar las vísceras luego se recogen las vísceras en un vaso de precipitación. Observamos los cambios que presentan sus órganos y con la ayuda de una jeringuilla se recoge el líquido que hay en su cavidad abdominal. 7. Con ayuda de unas tijeras se trituran las vísceras y se colocan en el balón. Una vez ya instalado el equipo de destilación se da inicio al proceso de destilación por el lapso de 30 minutos. 8. Luego de terminada la destilación, se procede a realizar las reacciones de identificación. Al finalizar la práctica, se procede al levantamiento de todos los medios biológicos y materiales de Laboratorio. Se desinfecta nuevamente el área de trabajo, se desechan los materiales y que queden en su lugar y en orden luego desinfectarse las manos.
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS: Después de destilar el material de investigación, en el destilado se realizan las reacciones de reconocimiento. 1. Reacción de Nessler.- La acetona reacciona con el reactivo yodo-mercúrico en medio alcalino un precipitado blanco, formado por un producto de adición. 2. Reacción de Yodoformo.- Al calentar una pequeña cantidad de la muestra con una solución yodo-yodurada en medio alcalino con KOH se produce yodoformo reconocible por su olor particular y su color amarillo. I2 + 2KOH INA + IOK + H2O CH3 CI3 CO + 3IOK CO + 3KOH CH3 CH3 CI3 CO + KOH CHI3 + CH3-COOK CH3 3. Con nitroprusiato de Sodio.- Con este reactivo, al que se le añade solución de carbonato de sodio o NaOH, orina una coloración amarilla-rojiza que al agregarle ácido acético, dará un color violeta. 4. Reacción de Fritsh.- Se mezcla la solución problema con un volumen igual de ácido clorhídrico concentrado que contiene 5% de ramnosa, se calienta en baño de vapor. Aparece un color rojo, apreciable aún en concentración de 0.01 g de acetona por ml de solución. 5. Reacción de Frommer.- La muestra problema, al ser condensada con aldehído salicílico en medio alcalino, produce un color rojo que permite su determinación colorimétrica o fotométrica por su gran sensibilidad y especificidad. 6. Con la 2:4 Dinitrofenilhidracina: Disuelva una ó dos gotas del compuesto que se va investigar en 2 ml de etanol y añada a 3ml del reactivo de 2,4-dinitrofenilhidracina. Agite vigorosamente y si no se forma inmediatamente Un precipitado de color amarillo, anaranjado o rojo, deje reposar la solución durante 15 minutos. Reactivo. El reactivo se prepara disolviendo 3 g de 2,4dinitrofenilhidracina en 15 ml de ácido sulfúrico concentrado. Entonces se añade esta solución, a 20 ml de agua destilada y 70 ml de etanol al 95%. Se mezcla perfectamente la solución y se filtra. Comentarios: La mayoría de las cetonas producen dinitrofelhidrazonas que son sólidos insolubles. Al principio, el precipitado puede ser aceitoso y al reposar, volverse cristalino. Sin embargo, algunas cetonas dan dinitrofenilhidrazonas que son aceites.
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
GRÁFICOS: 1. Animal de experimentación rata wister
1
2. Inyectar 10 ml del tóxico
3. Obseravr los síntomas de la rata luego de haber administrado el tóxico
2
3
4. Colocar la rata en la tabla de disección
5. Extraer y triturar las víceras, colocar 50 perlas de vidrio
5
4
7. Una vez finalizado el baño maria dejar enfriar
7
6. Llevar a baño maria por 30 minutos con agitación regular
6
8. Obtener el filtrado para realizar las reacciones correspondientes
8
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS CON LA SOLUCIÓN PROBLEMA: 1. REACCIÓN DE NESSLER: REACCIÓN POSITIVA Forma un precipitado blanco, formado por un producto de adición. REACCIÓN DE PRECIPITACIÓN: Acetona + yodo-mercúrico = Precipitado blanco
RESULTADO: Positivo No Característico
REACCIÓN DESPÚES RESULTADO: Positivo no característico
REACCIÓN ANTES
2. REACCIÓN CON YODOFORMO: REACCIÓN POSITIVA Se forma yodoformo reconocible por su olor particular y presenta un color amarillo. REACCIÓN DE COLORACIÓN: Acetona + yodo-yodadura = Yodoformo (color amarillo + olor
característico) RESULTADO: Negativo
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES Resultado Negativo
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
3. REACCIÓN CON NITROPRUSIATO DE SODIO: REACCIÓN POSITIVA Se origina una coloración amarilla rojiza que al agregarle ácido acético dará un color violeta. REACCIÓN DE COLORACIÓN: Acetona + Carbonato de Sodio o NaOH = Coloración amarilla-rojiza a
Violeta
RESULTADO: Negativo
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES Resultado Negativo
4. REACCIÓN DE FRISH REACCIÓN POSITIVA Al agregarle Ácido clorhídrico concentrado que contiene 5% de Ramnosa se calienta a baño de maría dará una coloración rojiza REACCIÓN DE COLORACIÓN: Acetona + Ácido Clorhídrico de Ramnosa = Color rojo
RESULTADO: Negativo
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES Resultado Negativo
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
5. REACCIÓN DE FROMMER: REACCIÓN POSITIVA Se determina por colorimetría al condesar la acetona con el aldehído salicílico en medio alcalino produce un color rojo. REACCIÓN DE COLORACIÓN: Acetona + aldehído salicílico en medio alcalino = Color rojo
RESULTADO: Negativo
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES Resultado Negativo
6. REACCIÓN CON LA 2:4 DINITROFENILHIDRACINA REACCIÓN POSITIVA Se forma yodoformo reconocible por su olor particular y presenta un color amarillo. REACCIÓN DE COLORACIÓN: Acetona + etanol + 2:4 dinitrofenilhidracina = Yodoformo (color amarillo
+ olor característico) RESULTADO: Positivo Característico
ANTES Reacción de coloración:
DESPÚES Resultado Positivo Característico
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
OBSERVACIONES:
Al momento de armar el equipo de destilación hay que tener mucho cuidado para que no escape el tóxico ya que el olor característico es bastante fuerte.
RECOMENDACIONES:
Utilizar guantes, mascarilla y zapatones. Realizar las reacciones de reconocimiento rápidamente ya que la acetona es volátil. Conocer y aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio para evitar accidentes. Toda sustancia a manipular en la práctica se las debe de realizar bajo la campana extractora de gases. Tener precaución con este tóxico ya que si no utilizamos las normas de bioseguridad podría causarse una intoxicación grave entre estas una irritación en los ojos y la garganta. Culminada la práctica se debe dejar el área de trabajo desinfectada, para evitar contaminación con las sustancias químicas utilizadas.
CONCLUSIONES:
Una vez finalizada la práctica y según los datos obtenidos podemos concluir de que el cloroformoes un toxico débilmente peligroso razón por el cual era muy utilizado como agente anestésico pero con el tiempo fue retirado del áreamédica debido a alguna intoxicación por el mismo; basándonosasí en el conocimientode este tema por teoría y comprobando en el laboratorio en un animal de experimentación.
CUESTIONARIO: 1) ¿Cómo puede afectar a mi salud la acetona? Son conocidos los efectos sobre la salud de la exposición a largo plazo, en su mayoría de estudios con animales. Daño en los riñones, el hígado y los nervios, el aumento de defectos de nacimiento, y bajó la capacidad de reproducción (sólo hombres) se produjeron en los animales expuestos a largo plazo.
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
2) ¿Qué es la acetona y donde se produce? Se produce de forma natural en las plantas, los árboles, los gases volcánicos, incendios forestales y como producto de la descomposición de grasa corporal. Está presente en el escape de vehículos, en el humo del tabaco y en los vertederos. Los procesos industriales aportan más acetona al medio ambiente que los procesos naturales. 3) ¿Aplicaciones de la acetona? La acetona se utiliza principalmente como disolvente y como compuesto intermedio en la producción de sustancias químicas. Sus principales aplicaciones son la producción de Metil Metacrilato, Acido Metacrílico y Metacrilatos de mayor tamaño, Bisfenol A, Metil Isobutil Cetona, aplicaciones médicas y farmacéuticas (compuesto intermedio y solvente para drogas, vitaminas y cosméticos), como solvente para revestimientos,resinas, tintes, barnices, lacas, adhesivos y en acetato de celulosa. La Acetona también presenta usos en la industria alimenticia como disolvente de extracción para grasas y aceites, y como agente de precipitación en la purificación del azúcar y el almidón.
GLOSARIO Toxicocinetica: Como el conjunto de fenómenos que experimenta el tóxico desde su entrada a un organismo hasta su eliminación. Transaminasas: Las transaminasas son enzimas que cumplen una función metabólica en el interior de las células. Estas enzimas se encuentran presentes en el tejido de muchos órganos (hígado, corazón, riñones, músculos. Eritematosa: Es un término médico dermatológico para un enrojecimiento de la piel condicionado por una inflamación debida a un exceso de riego sanguíneo mediante vasodilatación. Neurotóxica: A toda sustancia capaz de alterar el funcionamiento del sistema nervioso, lo cual aleja al individuo de su estado homeostático y pone en riesgo su vida. Hipoxia: Es una familia de afecciones caracterizadas por una falta de oxígeno en los tejidos del cuerpo. La hipoxia puede abarcar el cuerpo general, o un área específica, tal como el cerebro.
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
ANEXOS:
AUTORIA BQF. Carlos García González
FIRMA DE RESPONSABILIDAD:
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FECHA DE ENTREGA: Lunes 06 de Julio del 2015
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“