INTRODUCCION AL ESTUDIO DE LA BIOLOGIA CELULAR EL MICROSCOPIO: Es un instrumento que permite observar elementos que son demasiado pequeños a simple vista del ojo ocular, el microscopio más utilizado es el de tipo óptico, con el cual podemos observar desde una estructura de una célula hasta pequeños microorganismos, uno de los pioneros en observaciones de estructuras celulares es Roberth Hooke (1635 – 1703) científico inglés que fue reconocido y muy recordado por que observo finísimos cortes de corcho. De su observación se dedujo que las celdillas observadas eran células.
¿Quién y en qué año lo descubrió? Zacharias Jansen (1608) con dos lentes convergentes. Partes del microscopio. El sistema mecánico lo conforman CABEZAL. BRAZO.- Es la parte de donde se debe sujetar, las pinzas el carro el tubo del microscopio y el revólver. Además sirve para trasladar el microscopio de un lugar a otro. BASE O PIE.- Es una pieza que proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del microscopio. PLATINA.- Es una pieza metálica, cuadrada, que tiene en su centro una abertura circular por la que pasará la luz del sistema de iluminación. Aquí se coloca el portaobjetos con la muestra a observar PINZAS DE SUJECION.- Parte mecánica que sirve para sujetar la preparación. La mayoría de los microscopios modernos tienen las pinzas adosadas a un carro con dos tornillos, que permiten un avance longitudinal y transversal de la preparación. TORNILLO MACROMETRICO.- Permite hacer un movimiento rápido hacia arriba o hacia abajo del tubo o la platina, y se utiliza para localizar la imagen a observar. TORNILLO MICROMETRICO O DE ENFOQUE SUAVEREVOLVER.- Parte mecánica de movimiento giratorio que nos permite colocar en posición cualquiera de los objetivos que se encuentran en él. TUBO.- Parte mecánica que proporciona sostén a los oculares y objetivos.
CREMALLERA.- Permite que el movimiento de los tornillos macro y micrométrico sea de mayor o de menor amplitud.
El sistema óptico OCULAR.- Se localiza en la parte superior del tubo ocular y son las lentes que Capta y amplía la imagen formada en los objetivos. Los primeros microscopios eran monoculares, es decir, poseían una sola lente. Los microscopios actuales poseen dos oculares, uno para cada ojo y se les llama binoculares. OBJETIVOS.- Se encuentran incrustados en el revolver Son unos pequeños cilindros colocados en el revolver que proporciona el poder de resolución del microscopio y determinan la cantidad total de aumento. El sistema iluminación La fuente luminosa consiste en un espejo o una fuente de luz eléctrica que dirige un haz de luz hacia el condensador. CONDENSADOR.- Es una lente de gran abertura que permite dirigir o condensar la mayor parte de los rayos luminosos en la preparación. En nuestro microscopio está integrado en la platina y tiene un diafragma unido en la parte inferior. DIAFRAGMA.- Existe un diafragma en el condensador, que elimina el exceso de luminosidad para tener una buena iluminación del objeto a observar FUENTE DE LUZ.- Para observar la muestra microscópica es necesario que ésta se ilumine con algún tipo de luz y nuestros microscopios cuentan con un foco que da energía eléctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador.
MICROSCOPIO. ¿QUE ES? ES UN INSTRUMENTO QUE PERMITE OBSERVAR ELEMENTOS QUE SON DEMASIADOS PEQUEÑOS Y QUE A SIMPLE VISTA NO SON CAPTADOS POR EL OJO OCULAR, EL MICROSCOPIO MAS UTLIZADO ES EL DE TIPO OPTICO, CON EL CUAL PODEMOS OBSERVAR LA ESTRUCTURA DE UNA CELULA HASTA PEQUEÑOS MICROORGANISMOS, UNO DE LOS PRIMEROS EN OBSERVAR LA ESTRUCTURA CELULAR ES ROBERT HOOKE (1635-1703) CIENTIFICO INGLES QUE FUE RECONOCIDO Y BIEN RECOMENDADO PORQUE OBSERVO FINISIMOS CORTES DE CORCHO. DE SU OBSERVACION EL DIJO QUE LAS CELULAS ERA COMO PEQUEÑOS CORCHOS.
MICROSCOPIO. El estudio detallado de los componentes de células y tejidos animales o vegetales, por el tamaño que poseen, requiere el uso de instrumentos que permitan ampliar muchas veces más la imagen de las estructuras que los constituyen. El instrumento que fue empleado por los primeros biólogos para estudiar la célula y los tejidos, es el microscopio. El nombre deriva etimológicamente de dos raíces griegas: mikrós, que significa pequeño y skopéoo, que significa observar. Es decir el microscopio es un instrumento que sirve para observar objetos o estructuras pequeñas. Existen dos tipos de microscopios que emplean la luz como fuente de energía para formar imágenes aumentadas y detalladas de objetos que a simple vista no es posible observar: a) Microscopio fotónico simple o lupa. b) Microscopio fotónico compuesto. El microscopio simple o lupa es un instrumento de amplificación de imágenes que consiste en la utilización de una o más lentes convergentes en un solo sistema óptico. Dependiendo de la curvatura de la superficie de la(s) lente(s) las lupas pueden ampliar las imágenes de los objetos desde 5, 8,10, 12, 20 y hasta 50 veces. Forman una imagen de mayor tamaño, derecha y virtual. Los microscopios fotónicos compuestos que se emplean actualmente tienen sus antecesores en los instrumentos ópticos desarrollados, en el periodo comprendido entre 1590 y 1610, por Hans (padre) y Zacarías (hijo) Janssen; quienes mediante el tallado cuidadoso de lentes biconvexas construyeron los primeros microscopios compuestos (fig. microsc. 1). lente ocular tubo extensible lente objetivo diafragma Figura microsc. 1. Diagrama que muestra los componentes del microscopio compuesto fabricado por los Jansen. A partir de esa época, el microscopio es el instrumento más utilizado en el estudio de células y tejidos. Se fue perfeccionando, tanto en su parte óptica como en su parte mecánica, gracias a los adelantos tecnológicos
aplicados a los componentes antes mencionados. Se denominan compuestos porque la imagen se forma mediante la utilización de tres sistemas de lentes, cada uno de ellos constituidos por lentes convergentes y divergentes. Los sistemas de lentes son el condensador, los objetivos y los oculares. En la actualidad, el microscopio fotónico es un instrumento de uso cotidiano en los laboratorios de investigación y de diagnóstico así como en las aulas de enseñanza de Biología, Embriología, Histología, Microbiología y Patología. COMPONENTES DEL MICROSCOPIO FOTÓNICO. El microscopio fotónico compuesto esta integrado por tres tipos de componentes: a) COMPONENTES MECÁNICOS: Son aquellos que sirven de sostén, movimiento y sujeción de los sistemas ópticos y de iluminación así como de los objetos que se van a observar. Éstos se muestran en la imagen del microscopio de la Base o pié. Es un soporte metálico, amplio y sólido en donde se apoyan y sostienen los otros componentes del microscopio. Brazo, estativo o columna. Permite la sujeción y traslado del microscopio. Soporta al tubo óptico, a la platina y el revolver. Platina. Superficie plana de posición horizontal que posee una perforación circular central. En ella se apoya la preparación (lámina portaobjetos que contiene a la muestra que se va a examinar) que se sujeta a la platina mediante pinzas o con un carrito o charriot que, mediante mandos especiales facilitan el movimiento de la preparación de derecha a izquierda y de adelante hacia atrás. Tubo óptico. Consiste en un cilindro metálico que suele medir 160mm o 170 mm de longitud (dependiendo del fabricante del microscopio) el cual en un extremo, está conectado al revolver o portaobjetivos y en el otro se relaciona con el (los) ocular(es). Revolver o portaobjetivos. Es un componente que gira alrededor de un eje con la finalidad que los objetivos que sostiene coincidan de manera perpendicular con la perforación central de la platina. En su superficie inferior posee varios agujeros donde se atornillan los objetivos. Tornillos macrométrico y micrométrico. Generalmente están situados en la parte inferior del brazo o columna. Pueden estar separados (en los microscopios antiguos) o el tornillo micrométrico está incorporado en la circunferencia del tornillo macrométrico (microscopios actuales). Ambos tornillos permiten el desplazamiento de la platina hacia
arriba y hacia abajo con la finalidad de acercar o alejar la preparación hacia los objetivos y así conseguir un enfoque óptimo de la imagen. Principales componentes de un microscopio fotónico compuesto El macrométrico produce desplazamientos evidentes y rápidos de la platina, en cambio el tornillo micrométrico produce movimientos imperceptibles de la platina y sirve para efectuar el enfoque fino y definitivo de la imagen. En la actualidad los microscopios tienen incorporados a los mecanismos de desplazamiento de los tornillos macro y micrométricos, topes de seguridad que impiden que éstos continúen descendiendo indefinidamente y así se evita roturas y daños a la laminilla y a las lentes de los objetivos. Engranajes y cremallera. Constituyen mecanismos de desplazamientos de las diferentes partes del microscopio. Cabezal. Es un componente situado en relación con el tubo del microscopio que alberga principalmente prismas o espejos que sirven para acondicionar en él dos o más oculares, o sistemas mecánicos que soportan cámaras fotográficas, de vídeo o sistemas de proyección de la imagen. b) COMPONENTES ÓPTICOS: Son los objetivos, los oculares, el condensador y los prismas. Los tres primeros están constituidos por sistemas de lentes positivos y negativos. Condensador: Es el componente óptico que tiene como función principal concentrar y regular los rayos luminosos que provienen de la fuente luminosa (fig. micros. 3). Figura microsc. 3. Diagrama de los principales componentes de un condensador y recorrido de los rayos luminosos. Está formado por una o dos lentes convergentes que reúnen los rayos luminosos y los orientan hacia la abertura central de la platina. Mediante un mecanismo de cremallera se acerca o aleja de la platina. También tiene incorporado un diafragma iris que regula la entrada de luz Todo ello con la finalidad de concentrar la mayor cantidad de rayos luminosos en el plano donde está situado el objeto a observar. La mayoría de los condensadores de los microscopios actuales también poseen una apertura numérica que indica la cantidad de luz que puede captar y luego enviar hacia la preparación. Objetivos. Los objetivos están considerados los elementos más importantes en la formación de la imagen microscópica, ya que estos sistemas de lentes establecen la calidad de la imagen en cuanto a su nitidez y la capacidad que tiene para captar los detalles de la misma (poder de resolución). Están constituidos también
por un juego de lentes, en este caso, convergente y divergente, para eliminar, en la medida de lo posible, una serie de aberraciones que afectarían la calidad de las imágenes formadas. Las lentes se disponen dentro de un soporte o camiseta de metal, en cuyo exterior están inscritas una serie de anotaciones numéricas que indican, como se observa en la figura microsc.4: el aumento propio del objetivo, la apertura numérica, el tipo de material con que están tallados las lentes (de fluorita o semiapocromáticos) o la calidad que tendrán las imágenes, al anularse en la construcción de los objetivos, algunas aberraciones de las lentes (acromáticos, apocromáticos, aplanáticos etc.) o si se debe usar alguna sustancia de inmersión. 3 Figura micros. 4. Principales características externas de los objetivos. Los objetivos se fabrican para ampliar las imágenes de los objetos observados en diversos aumentos; así se tienen objetivos con aumentos propios de 3.5 x, 4x, 10x, 25x, 40x, 65x y 100x. Algunos objetivos tienen alrededor de ellos una línea coloreada que indica a simple vista el aumento propio. Los objetivos también se clasifican de acuerdo al medio que existe entre el objeto examinado y la lente frontal del objetivo. De acuerdo a esta característica son secos o de inmersión. Son objetivos secos aquellos que entre el objeto observado y el objetivo solamente existe el aire; en cambio se denominan objetivos de inmersión aquellos que requieren que entre la preparación y la lente frontal del objetivo se coloque una sustancia líquida, ésta puede ser agua, glicerina o un “aceite de inmersión”, natural como el “aceite de cedro” o aceites artificiales. Otra clasificación de los objetivos se refiere al tipo de corrección al que deben someterse las lentes con la finalidad de disminuir o anular algunas aberraciones que se producen en las lentes, como las aberraciones cromática, de curvatura de campo, astigmatismo y de esfericidad. Dependiendo de las aberraciones corregidas los objetivos pueden ser: Acromáticos. Estos objetivos corrigen los rayos luminosos azules y rojos haciéndolos coincidir en un solo plano focal. En tanto que los otros rayos coloreados se forman en otro plano focal generando una imagen cuyos bordes se observan levemente difusos (espectro luminoso secundario). Los objetivos de los microscopios “de estudiante” son acromáticos. Semiapocromáticos. Se les conoce también como objetivos de “fluorita”, corrigen el espectro secundario dando como resultado imágenes de bordes más nítidos. Por la alta capacidad que tienen para transmitir las radiaciones luminosas de onda corta, se les considera como los objetivos ideales para microscopía de fluorescencia.
Apocromáticos. En estos objetivos se hacen coincidir en un solo plano los rayos luminosos azules, rojos y verdes, obteniendo así una imagen de bordes sumamente nítidos, pero la corrección de esta aberración trae consigo la acentuación de otra, que es la de curvatura de campo, pues la superficie focal de la imagen es ligeramente curva, dando como resultado que, al observar la imagen y tratar de enfocarla en la zona central del campo microscópico se desenfoca la zona periférica y viceversa. Planapocromáticos. Son los objetivos en los cuales se han corregido la mayor cantidad de aberraciones como la cromática, curvatura de campo, de esfericidad y de astigmatismo; por lo tanto se obtienen imágenes sumamente nítidas y el campo microscópico aparece totalmente plano, enfocado en toda su extensión. Son los objetivos que generan imágenes con mejor resolución, es preferible usarlos cuando se desea obtener imágenes fotográficas ( fotomicrografía). La complejidad en la construcción de los objetivos y el número de lentes que se utilizan aumenta conforme se van corrigiendo más aberraciones. Por ejemplo un objetivo planapocromático suele incorporar en su construcción entre 10 a 12 lentes. Esto, en consecuencia, encarece el costo de ellos. La imagen que forman los objetivos es aumentada de tamaño, invertida y real. Se mencionó al inicio del acápite que los objetivos están considerados como los integrantes más importantes del microscopio, pues de la calidad de sus componentes depende que, en la imagen generada a través de ellos, se puedan observar una mayor cantidad de detalles. En otros términos, los objetivos son los responsables de ofrecer imágenes mejor resueltas. La capacidad que tienen los objetivos de formar imágenes en donde se distingan más detalles del objeto examinado depende de una serie de factores como los que se mencionan a continuación: Índice de refracción: Se denomina así a la relación existente entre la velocidad de la luz en el aire y su velocidad en el medio transparente utilizado. De la misma manera, se pueden obtener los índices de refracción de una serie de sustancias que se utilizan en la construcción y tallado de las lentes de los objetivos. La velocidad de la luz es de 300,000 Km/sg en el aire. Al atravesar un medio transparente como el vidrio del cual están fabricados las lentes de los microscopios, su velocidad se reduce a 200, 000 km./sg. Por lo tanto el vidrio tendrá un índice de refracción de 1.5; pues el índice de refracción de un objeto o una sustancia transparente se expresa mediante
la
fórmula:
A continuación se muestran los índices de refracción de una serie de sustancias transparentes que se emplean en microscopía para construir lentes o como sustancias de inmersión: Agua = 1.3300 Aceite de inmersión = 1.5150 Fluorita = 1.4340 Vidrio (crown) = 1.5200 Flint = 1.6600 Angulo de apertura: Es la capacidad de un objetivo de captar los rayos luminosos refractados cuando éstos atraviesan un medio transparente. Cuanto mayor sea este ángulo, la lente frontal del objetivo aceptará una mayor cantidad de ellos Objetivo (a) (b) Figura microsc. 5. Rayos luminosos que forman el ángulo de apertura. En el esquema anterior, el ángulo de apertura de la lente frontal del objetivo capta varios rayos luminosos teniendo como límite los rayos laterales del cono luminoso (líneas continuas), en cambio los rayos periféricos (líneas punteadas) no son aceptados. Esta capacidad de captación está dada fundamentalmente por la distancia que existe entre el objeto y el objetivo. Así, se puede constatar que en la figura 5a el ángulo de apertura es de aproximadamente 50º, en cambio en la figura 5b el ángulo es mucho mayor (95º) donde se observa que la lente logra captar más rayos periféricos. Dependiendo del índice de refracción del material transparente que forma la lente del condensador, o la interfase (aire o sustancia de inmersión) que exista entre el objeto y la lente frontal del objetivo, el ángulo de apertura será mayor o menor. Captación de rayos luminosos a través de objetivos secos y objetivos de inmersión. HISTORIA DEL MICROSCOPIO.
muestran la diferencia en la captación de rayos luminosos de un objetivo (a) donde la interfase es aire y, en el objetivo (b) se ha colocado como interfase una sustancia de inmersión que posee un índice de refracción similar al del vidrio. Los rayos luminosos que atraviesan el aire se refractan más y por lo tanto su desviación es mayor porque el índice de refracción del aire es igual a 1.0.
rayo reflejado . Trayectoria de los haces luminosos en un objetivo seco. En la figura 6 los rayos que emergen del objeto, al llegar a esta interfase constituida por aire se refractan o su ángulo de inclinación es tal que sobrepasan el ángulo critico de refracción, por lo que al llegar a la lente frontal del objetivo se reflejan en la superficie y no son captados por la lente. En la figura (b) el índice de refracción del aceite de inmersión (1.52) es similar al del vidrio (portaobjetos, cubreobjetos y la lente frontal del objetivo) por lo tanto los rayos luminosos periféricos que emergen del objeto no se desvían y pueden ser aceptados por el objetivo, incrementándose de esa manera la cantidad de rayos luminosos que penetran al microscopio. (b) Figura microsc. 6. Trayectoria de los haces luminosos en un objetivo de inmersión. el ángulo de apertura de un objetivo es de 50º, su valor alfa será de 25º. Este valor es importante pues permitirá calcular un factor que tiene que ver directamente con la capacidad del objetivo para formar imágenes que muestren más detalles, es decir mejor resueltas. HISTORIA DE LA MICROSCOPIA por Mariana Lanfranconi Ya los antiguos sabían que los espejos curvos y las esferas de cristal llenas de agua aumentaban el tamaño de las imágenes. En las primeras décadas del siglo XVII se iniciaron experiencias con lentes (así llamadas por tener forma de lentejas) a fin de lograr el mayor aumento posible. Para ello se basaron en otro instrumento con lentes que obtuvo gran éxito, el telescopio, usado por primera vez con fines astronómicos por Galileo, en 1609. Antes de esta fecha, los seres vivientes más pequeños conocidos eran insectos diminutos. Naturalmente, se daba por sentado que no existía organismo alguno más pequeño. Los instrumentos para aumentar la visión de los objetos, o microscopios (la
palabra griega significa “para ver lo pequeño”) comenzaron a usarse progresivamente. Por primera vez la biología se ampliaba y extendía gracias a un mecanismo que llevaba el sentido de la vista humana más allá de sus límites naturales. Así, los naturalistas podían describir en detalle los pequeños organismos, cosa de otro modo imposible, y los anatomistas podían descubrir estructuras hasta entonces invisibles. Existían dos tipos de microscopios: el sencillo y el compuesto; el sencillo no era más que una lente montada, el compuesto estaba formado por una combinación de lentes y fue inventado por Zacharias Jansen en Holanda. Los detalles sobre el primer microscopio no son claros, pero la Fig. 1 muestra el microscopio hallado en Middleburg, Holanda correspondiente a Jansen que contenía dos lentes. Fig. 1. Primer microscopio atribuido a Jansen Introducción a la Biología Facultad de Cs.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata 50 Luego de la invención de Jansen, en pocos años hubo un gran número de diseñadores de microscopios en Europa. El primer avance técnico del microscopio luego de Jansen fue el paso de un sistema de 2 lentes a uno de 3, este sistema es la
configuración estándar que se mantiene en los microscopios de hoy. Lo siguiente intenta resumir los acontecimientos más sobresalientes en la historia de la microscopía: • El naturalista holandés Jan Swammerdam observó insectos con el microscopio haciendo incapié en su conformación, descubrió también que la sangre no es un líquido uniforme rojo sino que existen corpúsculos que le dan ese color. • El botánico inglés Nehemiah Grew estudió los órganos de reproducción de las plantas y descubrió los granos de polen. • El anatomista holandés Reigner de Graaf realizó estudios similares en animales describiendo ciertos elementos del ovario que desde entonces se conocen con el nombre de folículos de Graaf. • Marcello Malpighi fue uno de los microscopistas más grandes de la historia de acuerdo a su espectacular descubrimiento. Sus primeros estudios los realizó con pulmones de rana, pudiendo observar en ellos una compleja red de vasos sanguíneos, demasiado pequeños para ser vistos por separado y muy anastomosados. Cuando siguió el recorrido de los vasos hasta que se unían con otros mayores, comprobó que estos últimos eran venas en una dirección y arterias en dirección opuesta. Por consiguiente, las arterias y las venas se hallaban unidos mediante una red de vasos llamados capilares. Los microscopios que se observan en la Fig 2 son del tipo que se diseñaba en Italia en los tiempos de los trabajos de Malpighi. • Otro descubrimiento importante en la época fue el del científico inglés Robert
Hooke. El microscopio lo fascinaba y realizó uno de los mejores trabajos en esta Introducción a la Biología Facultad de Cs.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata 51 rama, nueva para ese entonces. En 1665 publicó un libro llamado Micrographia en el cual pueden encontrarse algunos de los mejores dibujos que se hallan hecho de observaciones microscópicas. Tapa del libro Micrographia de Robert Hooke publicado en 1665 La observación simple más importante fue la de un delgado trozo de corcho sobre el cual no se sabía porque flotaba en agua y era tan liviano y firme. Hooke observó que estaba constituido por una fina trama de pequeñas celdillas rectangulares en las cuales se encontraba aire, que él llamó “células”, un término habitual para designar pequeñas habitaciones en los monasterios. El microscopio utilizado por Hooke se ilustra en la siguiente figura y no había sido construido por él. Los primeros en usar el microscopio, incluso Malpighi, usaron sistemas de lentes que producían aumentos mucho mayores que los obtenidos con una sola lente. Sin embargo, empleaban lentes imperfectos, de superficies irregulares y con fallas internas. Si se intentaba lograr un aumento apreciable, la visión de los detalles se hacía confusa. • Un comerciante holandés, Anton van Leeuwenhoek usaba lentes simples, que por su
reducido tamaño podían obtenerse de pequeños trozos de cristal perfecto. Puliendo cuidadosamente dichos fragmentos, logró aumentar un objeto hasta 270 veces sin perjuicio de la nitidez. Tenía 419 lentes alguna de las cuales eran de cristal de roca y hasta de diamante, en algunos casos no eran mayores que el tamaño de un alfiler, por lo que sus microscopios tenían un tamaño diminuto comparados con otros de la misma época. Fig. 5 Microscopio diseñado por Leeuwenhoek Fig. 6 Como se utiliza un microscopio de Leeuwenhoek Con esas lentes observaba todo lo que podía y logró describir los glóbulos rojos de la sangre y los capilares con mayor detalle que los verdaderos descubridores: Swammerdam y Malpighi. Pero lo más sensacional de todo ello fue su descubrimiento de pequeños organismos invisibles a simple vista, al estudiar aguas estancadas con su Introducción a la Biología Facultad de Cs.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata 53 microscopio, con todos los atributos de la vida. Las descripciones de van Leeuwenhoek eran, desde luego, imprecisas, pero no cabe duda que fue el primero en ver lo que más tarde se llamarían bacterias y “animalículos”, como los denominó entonces, conocidos hoy como protozoarios que en griego significa pequeños animales.
• El microscopista danés Otto Muller consiguió en 1773 distinguir lo suficientemente bien a aquellos pequeños seres para clasificarlos en dos tipos: bacilos (que significa “pequeños vástagos”) y espirilos (por su forma espiral). El microscopio fue perfeccionándose con gran lentitud, uno de los defectos de los microscopios primitivos era que sus lentes descomponían la luz blanca en los colores que la constituyen. Los objetos pequeños se veían rodeados de anillos de color (aberración cromática) que impedían observar con claridad los detalles. Pero alrededor de 1820 se perfeccionaron cuando Joseph Jackson Lister, un óptico inglés, diseñó un microscopio acromático capaz de eliminar los anillos de color que limitaban la claridad de la imagen. Lister descubrió que los glóbulos rojos eran en realidad, discos bicóncavos. El microscopio acromático constituyó un gran avance, iniciando una serie de perfeccionamientos que dieron como resultado el moderno microscópio óptico. Fig. 7 Microscopio acromático diseñado y utilizado por Lister Introducción a la Biología Facultad de Cs.Exactas y Naturales Universidad Nacional de Mar del Plata 54 Desde 1660 hasta la actualidad el microscopio óptico ha sido el pilar fundamental en el conocimiento de lo invisible. Aunque su poder de resolución aumentó a través del tiempo (con la mejora en la calidad de las lentes) al igual que el poder de
magnificación, su factor limitante fue la longitud de onda de la luz. En 1930 el mundo submicroscópico se amplió con la aparición del microscopio electrónico cuya ventaja principal con respecto al microscopio óptico es un aumento de 1000 veces en la magnificación del material observado acompañado de una mayor capacidad de resolución generando una mejor definición y una ampliación del mundo microscópico. ADN, virus y pequeñas organelas fueron observadas por primera vez con este microscopio. La mayoría de los pioneros en la microscopía electrónica en biología siguen vivos y los más importantes son: Albert Claude, Don Fawcett, Earnest Fullam, Charles Leblond, John Luft, George Palade, Daniel Pease y Keith Porter. Claude y Palade recibieron el Premio Nobel de Medicina en 1974 por sus logros en biología celular utilizando el microscopio electrónico. Existen dos tipos básicos de microscopios electrónicos los cuales fueron inventados al mismo tiempo pero tienen diferentes usos. El microscopio electrónico de transmisión (MET) proyecta electrones a través de una fina capa de tejido o material a observar produciendo una imagen en dos dimensiones sobre una pantalla fosforescente. El brillo en un área particular de la imagen es proporcional al número de electrones que son transmitidos a través del material. El microscopio electrónico de barrido (MEB) produce una imagen que da la impresión de ser en tres dimensiones. Este microscopio utiliza dos o tres puntos de la muestra donde llegan los electrones que escanean la
superficie del especimen a observar y salen del especimen como electrones secundarios siendo detectados por un sensor. La imagen se produce como el especimen entero, a diferencia del MET donde la imagen corresponde sólo a los electrones transmitidos. La siguiente figura muestra los distintos tipos de células y componentes que pueden ser vistas sólo con el microscopio electrónico y no con el microscopio óptico (como las moléculas pequeñas y los virus), como así también otras estructuras que pueden ser vistas con los dos tipos de microscopios (célula animal, célula vegetal y bacterias).