UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA Profesor: Bioq. Farm. Carlos García MSc. Alumno: Asalia Estefanía Fernández Álvarez Curso: Quinto Paralelo: “B” Grupo N° 6
Fecha de Elaboración de la Práctica: Martes 23 de junio del 2015 Fecha de Presentación de la Práctica: Martes 30 de Junio del 2015 PRÁCTICA N° 5 Título de la Práctica: Intoxicación por cloroformo. Animal de Experimentación: Rata wistar. Vía de Administración: Intraperitonial Tiempos: o
Inicio de la práctica: 07:45am
o
Hora de administración del toxico: 08:34 am
o
Hora de disección: 07:50am – 08:00am
o
Inicio de la destilación: 08:00 am – 08:25am
o
Final de la práctica: 10:30 am
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
1. Observar la reacción que presenta el animal ante la Intoxicación por cloroformo. 2. Observar cuidadosamente las manifestaciones y controlar el tiempo en que actúa el
toxico. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
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1
3. Adquirir la destreza para realizar y reconocer la positividad de las reacciones de
identificación.
o
MATERIALES
Vasos de precipitación 200 y 500 ml.
o o o o o o o o o
Jeringa de 5 cc o
Erlenmeyer
o
Equipo de destilación.
o
Tubos de ensayo
o
Pipetas
o
Guantes de látex
o
Mascarilla
o
Mandil
o
Gorro
o
Zapatones en caso de usar
Varilla Espátula Probeta Campana Panema Bureta Soporte universal Cinta plástica
o
Lámpara de alcohol
o
Fosforo
o
Pinzas
o
Cocineta
o
Porta tubo
sandalias
SUSTANCIAS
Cloroformo. Acido tartárico.
o
Tabla de disección
o
Cronómetro
Ácido clorhídrico.
o
Equipo de disección
Potasa alcohólica.
o
Bisturí
Nitrato de plata.
Percloruro de hierro. Beta naftol. “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
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Timol.
Cristal de yodo.
Resorcinol. Clorhidrato de piperacina.
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“
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3
PROCEDIMIENTO
1. Limpiar y desinfectar la mesa de trabajo. 2. Colocamos la rata en el panema. 3. Tener todos los materiales a utilizar listos. 4. Administramos
al cobayo, 10 ml de cloroformo anotamos el tiempo.
por vía intraperitoneal y
5. Observamos los efectos que produce en el animal. 6. Procedimos a la apertura del animal con la ayuda del bisturí. 7. Observamos el estado de las vísceras. 8. En un vaso de precipitación recolectamos la sangre y colocando las vísceras
(picadas lo más finas posibles). 9. El contenido del vaso anterior lo pasamos al balón para proceder a la destilación. 10. Armamos correctamente el equipo de destilación (método de soxhleth),
asegurando que no existan fugas que conlleven a pérdidas del destilado. 11. Adicionamos a las vísceras acido tartárico (25 ml) y calentamos con la lámpara
de alcohol esto con movimiento circular durante 30 minutos (el destilado fue recibido en NaOH). 12. Con el destilado procedimos a realizar las reacciones de identificación del
cloroformo en medios biológicos. 13. Una vez terminada la práctica se limpia todo el material y el área utilizada.
REACCIONES DE RECONICIMIENTO
En el fondo de un tubo de ensayo se mezclan unas cuantas gotas de cloroformo con otras tantas de alcohol de 95ª que contiene un poco de nitrato de plata, se inflama la mezcla y se observa que esta arde con un llama bordeada de verde y que el ácido clorhídrico formado reacciona con el nitrato de plata disuelto originando un precipitado de cloruro de plata. 1.
REACCIÓN DE DUMAS.- al adicionar unas gotas de destilado que contiene cloroformo a unos mililitros de potasa alcohólica (proporción 1:10), se originan formiatos y cloruro de potasio. CHCl + 4 KOH ----ClK + HCO K + H O Se neutralizan la mezcla, y se separan en dos porciones a una porción se le agrega percloruro de hierro produciendo un color rojo en frío o un precipitado en caliente. A la otra porción se le agrega solución de nitrato de plata produciéndose un precipitado de cloruro de plata que se disuelve en amoníaco diluido. 2.
3
2
2
REACCIÓN DE LUSTGARTEN.- al calentar la muestra con unos miligramos de beta naftol y solución alcohólica concentrada de potasa (preferentemente un trozo de potasa y algunas gotas de alcohol), se obtiene un franco color azul. Si se sustituye el B-naftol por timol el color es Amarillo más o menos oscuro; con resorcinol la coloración e roja – violáceo y con la piridina rojo. 4. REACCIÓN DE FUJIWRA.- En un tubo de ensayo, se vierte 2mL de lejía de sosa 1:2 con una capa de 2mm de piridina y luego la muestra que contiene el cloroformo, se agitan, podemos por unos instantes a baño maría y se deja en reposo; se convierte en una materia coloreada que varía del rosa al rojo vivo, soluble en piridina. Esta reacción es sensible para unos pocos microgramo de cloroformo y es aplicable en la orina de algún sujeto que haya absorbido de 15 – 20g de agua clorofórmica. 3.
5.
REACCIÓN DE ROSEBOOM.- se disuelve un pequeño cristal de yodo en la solución muestra y se agregan unos pocos miligramos de clorhidrato de piperacina; si el cloroformo está presente en la muestra, la coloración violeta inicial cambia a amarilla rojiza al disolverse el alcaloide.
6.
REACCION DE BENEDICT.- si la solución muestra contiene cloroformo, reduce el reactivo benict, y de acuerdo a la concentración del toxico puede producirse una gama de colores que van desde el verde, amarillo, naranja o rojo ladrillo.
GRÁFICOS:
5
Extraer las vĂsceras del cobayo
8
REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS
•
REACCIÓN ALCOHOLICA: Reacción positivo característico
Antes
•
REACCIÓN DE DUMAS. Reacción positivo característico
Antes •
REACCIÓN DE LUSTGARTEN Reacción positivo no característico
color verde azulada
Después
color rojo
Después
se observó el color blanco
Antes
• REACCIÓN DE ROSEBOOM Reacción positivo no caracteristico
Antes •
Después
coloración amarilla
Después
REACCIÓN DE BENEDICT
Reacción
positivo no caracteristico
Antes
Después
coloración celeste
OBSERVACIONES
Hemos observado que al administrar el toxico (cloroformo) por vía intraperitoneal la rata wistar presentó respiración agitada, depresión del SNC, perdida de la actividad motora, lagrimeo, convulsiones y luego de unos minutos murió.
CONCLUSION
Al término de esta práctica podemos darnos cuenta que el cloroformo es muy tóxico, al observar la rápida acción de depresión del SNC, perdida de movilidad, además de las convulsiones y la hipoxia que llevaron a la muerte del animal con una dosis de 10 ml de toxico administrada y finalmente mediante las reacciones de identificación constatamos la presencia de cloroformo en el destilado de las vísceras.
RECOMENDACIONES
Realizar la asepsia del área a trabajar. Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, guantes,
mascarilla. Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio. Utilizar la cámara de gases para realizar las pruebas y evitamos así
intoxicaciones. Al someter calor en el tubo de ensayo para las reacciones, realizarlo de lado y
que no esté alguna persona en esa dirección, ya que puede haber salpicadura del toxico.
CUESTIONARIO
¿QUE ES EL CLOROFORMO? El cloroformo, triclorometano o tricloruro de metilo, es un compuesto químico de fórmula química CHCl3. Puede obtenerse por cloración como derivado del metano o del alcohol etílico o, más habitualmente en la industria farmacéutica, utilizando hierro y
ácido sobre tetracloruro de carbono. A temperatura ambiente, es un líquido volátil, no inflamable, incoloro, de olor penetrante, dulzón y cítrico. ¿CUAL ES EL EFECTO DEL CLOROFORMO EN LA SALUD? Inhalación: Actúa como anestésico relativamente potente. Irrita el tracto respiratorio y produce efectos en el sistema nervioso central, incluyendo dolor de cabeza, somnolencia, mareos. La exposición a altas concentraciones puede resultar en inconsciencia e inclusive muerte. Puede causar daño hepático y desórdenes sanguíneos. La exposición prolongada puede llevar a la muerte debido a una frecuencia cardíaca irregular y desórdenes renales y hepáticos. Ingestión: Causa quemaduras severas de boca y garganta, dolor pectoral y vómitos. Grandes cantidades pueden causar síntomas similares a los de la inhalación. Contacto con la Piel: Causa irritación cutánea causando enrojecimiento y dolor. Elimina los aceites naturales. Puede ser absorbido a través de la piel. Contacto con los Ojos: Los vapores causan dolor e irritación ocular. Las salpicaduras pueden causar severa irritación y posible daño ocular. Exposición Crónica: La exposición prolongada o repetida a los vapores puede causar daño al sistema nervioso central, corazón, hígado y riñones. El contacto con el líquido elimina las grasas y puede causar irritación crónica de la piel con grietas y resequedad y la correspondiente dermatitis. Se sospecha que el cloroformo es un carcinógeno en humanos. ¿CUALES SON LAS MEDIDAS DE PREACUSION ANTE EL CLOROFORMO? Tener un límite de Exposición Aérea Un Sistema de Ventilación adecuado: Se recomienda un sistema de escape local
y/o general para las exposiciones de empleados debajo de los Límites de Exposición Aérea. En general, se prefiere la ventilación de extractor local debido a que puede controlar las emisiones del contaminante en su fuente impidiendo dispersión del mismo al lugar general de trabajo. Protegerse la piel lo más que se pueda para evitar contacto con el toxico. Usen
vestimenta protectora impermeables, incluyendo botas, guantes, ropa de laboratorio, delantal o monos para evitar contacto con la piel. Protección para los Ojos: Utilice gafas protectoras contra productos químicos
y/o un protector de cara completo donde el contacto sea posible. Mantener en el de trabajo un área instalación destinada al lavado, remojo y enjuague rápido de los ojos. ¿CUÁL ES LA TOXICOLOGIA DEL CLOROFORMO?
Datos Toxicológicos: Cloroformo: LD50 oral en ratas: 908 mg/kg; LD50 piel de conejos: > 20 gm/kg; LC50 inhalación en ratas: 47702 mg/m3/4H; irritation data: piel de conejos 10 mg/24H abierta leve; Ojo de conejos: 20 mg/24H moderada; Ha sido investigado como tumorígeno, mutagénico y causante de efectos reproductivos. Toxicidad Reproductiva: Se han observado defectos al nacimiento en ratas y ratones expuestos a la inhalación de cloroformo a concentraciones en el aire mayores de 100 ppm. La ingestión de cloroformo por animales de laboratorio gestantes, ha causado fetotoxicidad pero no defectos al nacimiento y sólo a niveles que causan severos efectos en la madre. ¿HAY ALGÚN EXAMEN MÉDICO QUE DETERMINE SI HE ESTADO EXPUESTO AL CLOROFORMO? Pese a que se puede medir la cantidad de cloroformo en el aire que usted exhala, en la sangre, en la orina y en los tejidos del cuerpo, no contamos con pruebas fiables que determinen cuánta exposición de cloroformo ha habido, o si usted experimentará efectos nocivos en la salud. La medición del cloroformo en los líquidos y los tejidos del organismo puede ayudar a determinar si usted ha estado en contacto con grandes cantidades de cloroformo. Sin embargo, estas pruebas solo son de utilidad si se realizan poco después de que ha habido exposición, debido a que el cloroformo sale rápidamente del cuerpo. Las pruebas de sangre para medir la cantidad de enzimas del hígado pueden ayudar a saber si el hígado presenta daños, pero no se puede determinar si éstos fueron causados por el cloroformo. ¿EN DONDE SE PUEDE ENCONTRAR EL CLOROFORMO? Agua: En el medio acuático, el cloroformo se descompone con extrema lentitud. Debido a su gran volatilidad escapa en forma de gas de los cuerpos de agua superficiales. Aire: Debido a su alto grado de volatilidad, el cloroformo llega a la atmósfera, donde se acumula en pequeñas cantidades. Se descompone por fotólisis. Degradación, productos de la descomposición: En presencia de agentes oxidantes, el cloroformo se descompone formando fosgeno y ácido hidroclórico. Cadena alimentaria: El cloroformo se encuentra en todas partes y, por lo tanto, también ha sido hallado en los alimentos. El agua potable contiene, en ciertas ocasiones, grandes concentraciones de cloroformo resultante de la cloración del agua. USOS Hoy en día el cloroformo tiene un importante número de usos tales como: •
En química se utiliza en la separación orgánica.
•
En la fabricación de plásticos que se utiliza en el proceso de unión.
•
Se utiliza en síntesis orgánica.
•
Se utiliza como un precursor en la fabricación de teflón (antiadherente).
•
En la Primera Guerra Mundial el cloroformo fue usado como arma química.
•
Como anestésico.
BIBLIOGRAFÍA
•
Toxicología Médica Dr. Phil, Dr. Med. H. Funher. Editorial Científico-Médico. Madrid. España
WEBGRAFÍA
•
http://www.dorwil.com.ar/msds/Cloroformo.pdf
•
http://cloroformo.org/usos/
•
http://www.atsdr.cdc.gov/es/phs/es_phs6.html
FIRMAS DE LOS INTEGRANTES
ASALIA ESTEFANIA FERNANDEZ ALVAREZ
GLOSARIO CARCINÓGENO: Cualquier sustancia o agente capaz de desencadenar un cáncer en las células sanas; no necesariamente tiene que ser un agente que provoque mutación en el material genético de las células. FETOTOXICIDAD: Alteración del proceso de desarrollo fetal causado por la exposición materna a agentes como radiación, virus, gases, drogas o fármacos. Sus efectos incluyen malformaciones, defectos de crecimiento o muerte fetal. GESTANTE: Estado de embarazo o gestación. Estado fisiológico de la mujer que se inicia con la fecundación y termina con el parto. SOMNOLENCIA: Se refiere a sentirse anormalmente soñoliento durante el día. Las personas que son soñolientas pueden quedarse dormidas en situaciones o momentos inapropiados.
TUMORÍGENO: Este adjetivo se aplica a cualquier sustancia que cause formación de tumores.
ANEXOS: