I Congresso Nacional “ A Ponte Entre a Escola e a Ciência Azul” 20 Maio 2014
Efeito da Privação de Oxigénio nos Parâmetros Sanguíneos de Corvina (Argyrosomus regius) Trabalho Realizado por: Artem Sukhenko Tânia Martinho Orientação: Doutora Laura Ribeiro Doutora Florbela Soares Colaboração: Professora Teresa Afonso
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∗A produção piscícola em aquacultura envolve um conjunto de preocupações de forma a garantir o bem estar animal, por forma a garantir boas taxas de crescimento e peixes saudáveis.
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∗ Bem estar animal pode definir-se como o conjunto de condições ambientais, nutricionais e sociais adequadas à espécie que se pretende cultivar.
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∗ Condições ambientais adversas e uma má manipulação, são factores de Stress para o peixe. ∗ Para recuperar o seu equilíbrio, o peixe é obrigado a gastar energia para além das suas funções vitais, o que pode comprometer o seu crescimento.
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∗ Factores de Stress podem ser, por exemplo, manipulação excessiva, aparecimento de doenças, défice de oxigénio, entre outros.
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∗ As respostas fisiológicas ao Stress podem ser:
Primárias [Ex: Produção Cortisol] Secundárias [Ex: Produção Glucose] (Diouf et al. 2000, Barton et al. 2002).
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∗ A falta de oxigénio provoca alta taxa de mortalidade ou morbilidade em aquacultura ∗ Causas frequentes: i. Elevada densidade no tanque de cultivo ii. Aumento da temperatura
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∗ Resposta específica à falta de oxigénio: o Hiperventilação; o Redução da ingestão de alimento; o Aumento da produção de glóbulos vermelhos; o Aumento da área de difusão gasosa.
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∗ A Corvina (Argyrosomus regius) é uma espécie utilizada em aquacultura há relativamente pouco tempo, havendo ainda muito a estudar sobre o modo como reage a condições adversas, tais como o défice de oxigénio.
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∗ O objetivo deste trabalho foi averiguar a forma como a corvina reage quando submetida a uma situação de Stress agudo provocada por défice de oxigénio.
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Hipótese A corvina irá reagir à redução brusca de oxigénio dissolvido na água através de:
Libertação de cortisol Produção de glucose Aumento da produção de hemácias
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Condições iniciais
15 Corvinas [5 exemplares / ponto amostragem]
Peso = 87.3 ± 22.3 g Volume do tanque – 50 L
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Parâmetros analisados ∗ ∗ ∗ ∗ ∗
Observação do comportamento Biometria (peso e comprimento total) Hematócrito Cortisol plasmático Glucose plasmático
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Material Ictiómetro Balança Capilares Seringas Agulhas microtubos
Soluções Fenoxietanol 500 ppm Heparina tanque de hipoxia (10 L)
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Pontos de Amostragem Corvinas colocadas no tanque de hipóxia
Normóxia (15 peixes) Basal/control
5 corvinas
Hipóxia 0
15’
5 corvinas
|Monitorizada a variação de oxigénio
30’
5 corvinas
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Procedimento (Súmula) Em cada ponto de amostragem:
∗ Anestesiámos 5 corvinas em fenoxietanol 500 ppm ∗ Recolhemos sangue, medimos e pesámos ∗ Devolvemos estes peixes ao tanque de recuperação
IC = (peso (g)/comp total³)x100
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Componente analítica A - Hematócrito
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A - Hematócrito
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B - Determinação do Cortisol Foi utilizado o teste VIDAS Cortisol S (Biomérieux), cujo equipamento (Mini-VIDAS) faz a leitura automática da quantidade de cortisol existente no plasma.
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C - Determinação da Glucose 1 – Preparámos as soluções para a curva padrão 2 – Retirámos as amostras de plasma do congelador e deixámo-las descongelar lentamente em gelo 3 - Preparámos a microplaca com o branco, as soluções padrão (triplicado) e as amostras (duplicado).
Volume amostra / padrão: 10 µl Volume reagente: 200 µl
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4 – Incubámos a microplaca a 37ºC durante 10’. 0,70
Curva padrão
0,60 0,50 0,40 0,30
y = 0,005x + 0,065 R² = 0,997
0,20 0,10 0,00 0
50
100
150
Absorvância em função da concentração (mg/dl)
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Resultados I - Variação dos Parâmetros da Água
Normóxia
Hipóxia 15’
Hipóxia 30’
Saturação de oxigénio
70,5%
19%
17%
Temperatura
20,3ºC
25,8ºC
25,2ºC
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II - Biometria biomassa (kg)
0,9
volume tanque (l)
15
densidade (kg.l-1)
0,06
WW (g)
CT (cm)
IC
média
87,3
20,3
1,0
sd
22,3
1,58
0,12
80
IC = (peso (g)/comp total³)x100
70
IC
60 15
50
13 40
oxig %
11
30
temp. ºC
9 7
20
5 3
10
1
0 1
2
3
0,000
0,500
1,000
1,500
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III - Hematócrito % Hct 40,000
Tratamento Cntl
% Hct 26,536 ± 3,3
35,000 30,000 25,000 20,000 15,000
Hx15
26,688 ± 2,8
10,000 5,000
Hx30
33,388 ± 4,3
0,000 Cntl
Hx15
Hct(%) = comp hemácias/comp total de sangue)x100
Hx30
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IV - Cortisol ng/ml 30,000
Tratamento
ng/ml
25,000 20,000
Cntl
6,0 ± 3,37
15,000 10,000
Hx15
3,716 ± 1,23
5,000 0,000
Hx30
28,082 ± 3,7
Cntl
Hx15
Hx30
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V - Glucose Conc (mg/dl ) 70,00 60,00
Tratamento Cntl
Conc (mg/dl) 43,25 ± 9,64
50,00 40,00 30,00
Hx15
66,32 ± 11,92
20,00 10,00
Hx30
54,18 ± 10,65
0,00 Cntl
Hx15
Hx30
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Discussão (Tópicos) ∗ ∗ ∗ ∗ ∗
Aumento do hematócrito ao fim de 30’ (de acordo com o esperado) Aumento significativo do cortisol ao fim de 30’ (de acordo com o esperado) Desvio Padrão elevado condiciona conclusões Variação da temperatura - mecanismos intrínsecos / extrínsecos (?) Resultados da glucose exigiriam ensaios complementares
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∗ Referências Diouf, Boucar; Rioux, Pierre; Blier, Pierre U; Rajotte, Denis. Use of Brook Char (Salvelinus fontinalis) Phisiological Responses to Stress as a Teaching Exercise, in Advances Physiology Education, volume 23, nº 1; junho 2000
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∗ Agradecimentos IPMA – Instituto Português do Mar e da Atmosfera Ciência Viva Doutora Laura Ribeiro Doutora Florbela Soares Escola Secundária Dr Jorge Correia - Tavira Professora Teresa Afonso