2014
Artículos científicos de Ingeniería en Bioquímica
Natalia Ronquillo Universidad Técnica de Ambato 02/07/2014
CONTENIDOS
CRÉDITOS Editora Natalia Maricela Ronquillo Nuela
COLABORADORES Paola Elizabeth Vargas Ipaz
CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA DE LAS PROTEÍNAS DE OLLUCO (Ullucus tuberosus) ESTIMULACIÓN DE ALGUNAS ENZIMAS RELACIONADAS CON LA DEFENSA EN PLANTAS DE ARROZ (Oryza sativa, L.) OBTENIDAS DE SEMILLAS TRATADAS CON QUITOSANA LAS PROTEÍNAS LLEVAN A CABO UNA DETERMINADA FUNCIÓN DEBIDO A SU PARTICULAR ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL. ESTA ES EL RESULTADO DE LA DISPOSICIÓN SECUENCIAL DE SUS AMINOÁCIDOS, LA CUAL SE HA IDO MODIFICANDO POR LA EVOLUCIÓN A LO LARGO DE UN PROCESO, APARENTEMENTE, DE OPTIMIZACIÓN.
CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA DE LAS PROTEÍNAS DE OLLUCO (Ullucus tuberosus) BIOCHEMISTRY CHARACTERIZATION OF THE PROTEINS OF OLLUCO tuberosus)
(Ullucus
*NARCIZO GÓMEZ VILLANES* RESUMEN
El trabajo de investigación se realizó en los laboratorios de biotecnología del Instituto de Desarrollo e Investigación en Biotecnología (IDIB) de la Universidad Nacional del Centro del Perú y de Química Bioorgánica del Centro de Investigación de Bioquímica y Nutrición (CIBN) de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, con el objetivo de evaluar el contenido proteico de 50 variedades promisorias de olluco así como la variabilidad proteica y complejidad bioquímica. El contenido proteico de olluco liofilizado fue determinado en forma indirecta por el método de semimicro Kjeldahl, encontrándose un contenido alto de proteínas que están en un rango de 10,07 a 11,55 g /100g, de contenido medio de proteínas siendo el rango 7,00 a 9,98 g /100 g y de bajo contenido de proteínas siendo el rango de 5,60 a 6,65 g /100 g. También se ha caracterizado las proteínas de las variedades promisorias de olluco mediante la técnica de electroforesis no denaturante en gel de poliacrilamida (ND - PAGE) y de electroforesis con SDS en gel de poliacrilamida (SDS - PAGE), encontrándose variabilidad proteica por presentar dos grupos de bandas proteicas uno de 14 - 24 kD y el otro de 24 – 60 kD.
Palabras clave gel de poliacrilamida, variabilidad proteica ABSTRACT
The present research was carried out in the laboratories of Biotechnology of the Institute of Development and Investigation in Biotechnology (IDIB) of the National University of the Center of the Peru and of Bioorganic chemistry of the Investigation Center of Biochemistry and Nutrition (CIBN) of the National University of San Marcos, with the objective to evaluate the protein content of 50 promissory varieties of olluco as well as the protein variability and biochemical complexity. The protein content of liofilized olluco was determined in indirect form by the semimicro Kjeldahl method, by finding a high content of proteins in a range from 10,07 to 11,55 g /100g, a half content of proteins in a range from 7,00 to 9,98 g /100 g and a low content of proteins in a range from 5,60 to 6,65 g /100 g. It has also been characterized the proteins of the promissory varieties of olluco by means of the technique of electrophoresis non denaturant in polyacrylamide gel (ND PAGE) and of electrophoresis with SDS in polyacrylamide gel (SDS - PAGE), finding protein variability because it is presented two groups of bands proteins one of 14 - 24 kD and the other of 24-60 kD.
Key words polyacrylamide gel, protein variability ____________________________________________________________________ *Profesor Asociado a T.C. – Departamento de Cultivos y Fitomejoramiento, Facultad de Agronomía – Universidad Nacional del Centro del Perú.
INTRODUCCIÓN El olluco (Ullucus tuberosus Caldas) en el Perú es el segundo tubérculo en importancia luego de la papa. Es parte de la alimentación de la población peruana de todas las clases sociales. Determinación de nitrógeno total mediante el método de semi micro Kjeldahl
Para la digestión se pesó 0,5 g de muestra liofilizada de cada variedad de olluco, se colocaron en balones y se agrego 2 g de mezcla de sales y 4 mL de ácido sulfúrico concentrado, se calentó a 460 °C durante 2 horas. Las muestras digeridas fueron diluidas con 15 mL de agua destilada y luego se procedió a la destilación en un equipo de destilación semi micro Kjeldahl, Existen estudios realizados por diferentes el sulfato de amonio presente en la muestra investigadores que enfocan los aspectos digerida, es atacada con 15 mL de nutricionales. Estos estudios muestran que hidróxido de sodio al 50%, liberando el el olluco tiene un aporte nutricional de amoniaco que es recepcionado en 10 mL energía 62 kcal/ 100 y un contenido de de ácido bórico al 2% con indicador rojo de ácido ascórbico de 15, 40 mg/100g y que metilo enmascarado. La titulación se realizó además representa una buena variante en una bureta de vidrio de 100 mL nutricional por su contenido de proteínas utilizando como titulante ácido clorhídrico reportándose como valor máximo un total valorado al 0,1 normal. Para la de 15,7% sobre la base de peso seco determinación del contenido de proteína de (Pietila y Tapia 1991). olluco se usó el factor 6,25, para convertir Se han realizado estudios sobre la caracterización el nitrógeno total en proteína cruda. morfológica de las accesiones pertenecientes al Banco Electroforesis en geles de poliacrilamida de Germoplasma de olluco del Instituto Nacional de denaturante (SDS - PAGE) Investigación Agraria (INIA), Programa Nacional de Investigación de Recursos Genéticos y Biotecnología (PRONIRGEB), Estación Experimental Santa Ana – Para obtener las proteínas totales de olluco, los Huancayo. Utilizando los descriptores morfológicos tubérculos se congelaron a – 20 °C propuestos por Arbizu (1994), modificados por durante 24 horas, se pesaron y descongelaron. INIA – PRONIRGEB (1985), logrando identificar 343 Para la obtención de extractos se utilizó una morfotipos, encontrándose además que el 14% de las extractora de jugos, así mismo para evitar la entradas serian posibles duplicados. oxidación se adicionó una solución antioxidante compuesta de sulfito de sodio al 20% y bisulfito Diferentes métodos de análisis de sodio al 15% de concentración final. El electroforético han sido ensayados como extracto se centrifugó a 3 000 rpm durante 10 electroforesis en gradiente de porosidad minutos con la finalidad de remover el almidón y (poroPAGE) usando una gradiente de demás restos y el sobrenadante se guardó en poliacrilamida entre 12 a 25% y refrigeración a una temperatura de –20 °C hasta encontraron en el olluco dos grupos el momento de ser usado principales de bandas entre 6,5 – 12 kD y entre 25 – 58 kD. En electroforesis discontinua con SDS (SDS – disc – PAGE) y electroforesis en gradiente de porosidad con SDS (SDS – poro PAGE) revelaron para el olluco 21 bandas para muestras no reducidas y 25 bandas para muestras reducidas (Akbar y col., 1993). MATERIALES Y MÉTODOS
.
acetona fría, luego se centrifugó a 3 000 rpm por 5 minutos se descartó el sobrenadante y el sedimento fue resuspendido por buffer de muestra/agua (1:1), según el sistema discontinuo descritos por Laemili (1960) que contiene Tris – HCl pH 6,8, 0,5M, SDS 10%, glicerol 20% y 2 – mercaptoetanol 10%, y se llevó homogenizó bien y luego se centrifugó a 12 000 rpm, durante 5 minutos, luego se calentó la muestra en baño maría por 3 minutos. Se enfrió con agua, luego se s muestras fueron aplicadas en un gel de poliacrilamida al 12% (SDS – PAGE). La electrofóresis se realizó en una cámara electroforética de tipo vertical durante 6 horas, para lo cual se usó una corriente constante de 10 a 40 miliamperios. Una vez terminada la corrida electroforética los geles fueron teñidos durante toda la noche con una solución colorante de coommassie blue R – 250 al 1 % en 40 mL de ácido acético, 12 mL de ácido tricloroacético 10%, 40 mL de metanol y 160 mL de agua destilada. Posteriormente fueron decoloradas con una solución de 10 mL de ácido acético y 60 mL de metanol y 140 mL de agua destilada. Se usaron estándares de proteína (SIGMA) de pesos moleculares (PM) que van de 14 200 a 66 000 daltons. Electroforesis en geles de poliacrilamida no denaturante (ND– PAGE)
Las proteínas totales de olluco fueron tratadas con una solución de sucrosa al 60% para dar densidad y amidoblack al 0,003 % como indicador de corrida. Se utilizó el sistema discontinuo, con geles de separación de concentración 12 % a pH 8,8 y el gel de stacking o concentrador a una concentración de 5% a pH 6,8. La electrofóresis, la coloración y decoloración de los geles se siguió el mismo procedimiento descrito para los geles denaturantes.
RESULTADOS DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO PROTEICO
Cuadro 1. Contenido proteico de 50 variedades promisorias de olluco
Varie dade s
g/100g Peso seco
Variedad es
g/100g Peso seco
HNC 11,55 HNCO8,40 O-062 11,32 076 8,40 SA11,20 HNCO8,40 323 10,85 080 8,05 HNC 10,85 AYA-060 8,05 O-072 10,68 HNCO7,70 HNC 10,68 011 7,70 O-98 10,33 HNCO7,70 HNC 10,33 016 7,70 O-010 10,07 SA-051 7,70 AYA9,98 HNCO-28 7,35 26-A 9,80 SA-12-A 7,05 SA9,80 SA-262 7,00 343 9,80 SA-138 7,00 AYA9,45 SA-207 7,00 24 9,45 SA-342 7,00 HNC 9,45 HNCO-55 6,65 O-059 9,45 HNCO.01 6,65 SA9,10 8 6,65 339 8,75 HNCO6,30 HNC 8,75 045 6,30 O-083 8,75 SA-353 6,30 HNC 8,75 HNCO5,95 O-058 8,40 067 5,95 SA8,40 HNCO5,60 264 017 el En el cuadro 1 se observa que, HNC HNCOcontenido de proteína en las019 50 variedades O-040 AYAHNCOpromisorias de olluco liofilizado varía entre 04 061 11,55 g/ 100g como valor máximo y 5,60 g HNC SA-110 /100g como valor mínimo. EnHNCO-88 la figura 1 se O-085 AYASA-350 observa que del total de variedades, el 01 SA-060 20% tienen alto contenido de proteínas, el SASA-042 110-B 62% tienen un contenido medio de HNC proteínas y el 18% tienen un bajo O-038 contenido de proteínas SA177 1. Rangos de contenido de Fig. SAproteínas de olluco (Ullucus tuberosus) 179 HNC O-09 HNC O-087 SA136 AYA17
ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO Fig.2. Gel de poliacrilamida denaturante con sodio dodecil sulfato (SDS – PAGE) al 12%, de proteína total extraída de 9 variedades promisorias de olluco
Fig. 4. Gel de poliacrilamida no denaturante (ND-PAGE) al 12%, de proteína nativa total extraída de 10 variedades promisorias de olluco
DISCUSIÓN
En la figura 2, el análisis electroforético de las proteínas de olluco, muestran un grupo de proteínas con pesos moleculares de 24 a 60 kD aproximadamente. Y otro grupo de proteínas, cuyo peso molecular está en el rango de 14 a 24 kD. Las proteínas menos abundantes son las de peso molecular que probablemente estaría en el rango de 5 kD a 10 kD. Se observa una gran variedad de pesos moleculares entre proteínas. Fig.3. Gel de poliacrilamida no denaturante (ND-PAGE) al 12%, de proteína nativa total extraída de 10 variedades promisorias de olluco
Los tubérculos andinos como la oca, olluco y la mashua representan una buena variante nutricional por su contenido en proteínas. Collazos y col., (1975) reportan que, el contenido proteínico en base húmeda es muy similar en estas especies de 1.0 a 1,5%; pero hay una considerable variación nutricional especialmente en el contenido de proteínas cuando la muestra es deshidratada; así el porcentaje de proteína en las 50 variedades promisorias analizadas fluctúa entre 11,55 % como valor máximo y 5,60 % como valor mínimo (cuadro 1), en estudios realizados por Pietila y Tapia (1991) reportan que, el porcentaje de proteína sobre la base de peso seco está entre 15,7 % como valor máximo y 5,1 % como valor mínimo. Así mismo Samanez (1974) reporta que, los porcentajes de proteína de 20 clones de olluco están en rangos de 5,1 a 8,35 %. Estos resultados al ser comparados con los obtenidos en el presente trabajo se observan que existen diferencias en el porcentaje de proteínas sobre la base de peso seco, las causas de estas diferencias, probablemente se debe a factores externos como fotoperiodo, riego, los niveles de nitrógeno disponibles para la planta, que podría haber afectado
Marcadamente en la concentración relativa de las proteínas de los tubérculos, pero se puede sugerir que en esta especie existe una apreciable variación genética con respecto al contenido proteico del tubérculo, debido probablemente al carácter genético que gobierna a cada variedad. Se podría también atribuir que posiblemente se produjo alteraciones de las regiones regulatorias de genes de proteínas de reserva que provocaron sus niveles de expresión. Así mismo, mediante electroforesis no denaturante (ND – PAGE) (Figuras 3 y 4), se observa dos grupos de posibles duplicados formados por las variedades HNCO-040, SA177 y un segundo grupo formado por las variedades HNCO-55, HNCO-061 y HNCO-088 por presentar bandas similares, es decir las proteínas tienen la misma movilidad electroforética, esto podría deberse a que no hay variaciones en la secuencia de los aminoácidos de la proteína, lo que implicaría que no hay variaciones alélicas en el gen que la codifican. Las 15 variedades restantes presentan bandas diferentes, esto me hace suponer que las variantes alélicas en un locus dado codifican para proteínas similares en estructura, pero que difieren en alguna parte de la secuencia de sus aminoácidos, lo cual probablemente se traduce en cambios en la movilidad electroforética de las proteínas. Lo que me hace pensar que existe variabilidad genética entre estas accesiones. La caracterización bioquímica de las proteínas totales de olluco mediante electrofóresis denaturante (SDS – PAGE) Figura 2, demuestran que las proteínas están divididos en dos grupos principales de bandas proteicas uno de 14 - 24 kD y el otro de 24 – 60 kD aproximadamente, esta alta variabilidad proteica hace pensar que las proteínas presentes en el olluco son bioquímicamente complejas. Similares resultados fueron reportados por Espinoza (1998) para proteínas de mashua a pesar de ser una especie genéticamente diferente, presentan también dos grupos de bandas uno formado por proteínas con pesos moleculares de 24 a 70 kD y el otro por proteínas medianamente abundantes, con pesos moleculares en el rango de 14 a 23 kD. Por otro lado resultados semejantes fueron reportados por Akbar y col., (1993) en Poro PAGE, detectándose que las proteínas del olluco están divididos en dos grupos principales uno entre 8 – 12 kD y el otro entre 25 - 58 kD, lo que confirma la complejidad de las proteínas del olluco.
Referencias 1. ARBIZU, C. 1994. Descriptores Morfológicos de Olluco. Separata de 10 pag. Lima – Perú. 2. AKBAR, A., STEGEMANN, H. & GALVEZ, M. 1993. Mashua, Oca and Ulluco: Protein Characters and Optimizing Discrimination of varieties by Electrophoretic Techniques.Institut fur Biochemie und Pflanzenvirologie, Biologische Bundesanstalt, D-3300 Braunschweig, Germany.
3. COLLAZOS, C. y col., 1975. La Composición de los Alimentos Peruanos. 5ta. Edición. Ministerio de Salud. Lima – Perú. 4. ESPINOZA,S. 1998. Caracterización Bioquímica de las Proteínas de Tropaeolum tuberosum Procedentes de Junín. Tesis de Magíster UNMSM. Lima – Perú.
ESTIMULACIÓN DE ALGUNAS ENZIMAS RELACIONADAS CON LA DEFENSA EN PLANTAS DE ARROZ (Oryza sativa, L.) OBTENIDAS DE SEMILLAS TRATADAS CON QUITOSANA _____
Aida T. Rodríguez , M. A. Rodríguez, A. Falcón, F. Guridi y Elizabeth Cristo
ABSTRACT. The application of elicitors is one of the most ecological and economic methods for pest and disease control. The chitosan is an elicitor that stimulates defensive mechanisms in plants, which confer disease resistance. This work presents the first results obtained in Cuba by using chitinous elicitors in rice Crop, particularly the chitosan obtained in the Department of the crop Physiology and Biochemistry from the National Institute of Agricultural Sciences (INCA). During the investigation, the effect of this compound applied to seed was in vivo determined, to estimulate some defensive enzymes, such as PAL, glucanase, chitinase and chitosanase in rice plants (cv. J-104). The highest increment of enzymatic activity was recorded in treated plants compared to the control. The best dose used -1
was 1000 mg.L . Key words: chitosan, seed, glucans, Oryza sativa, defense mechanisms
INTRODUCCIÓN Los elicitores son moléculas de origen biótico, capaces de estimular mecanismos defensivos en las plantas, que pueden ser aplicados de forma preventiva o di-recta a las plantas (1). Estas sustancias desencadenan en las plantas una serie de mecanismos defensivos, que provocan una resistencia sistémica ante el ataque de los patógenos. Dentro de estos mecanismos se incluyen el incremento en la activación de enzimas tales como la fenilalanina amonio liasa (PAL), la cual es clave en la síntesis de metabolitos defensivos importantes, donde se destacan las fitoalexinas. También se inducen otras enzimas defensivas entre las que se encuentran: β-1,3 glucanasas, quitinasas, quitosanasas, entre otras (2). _ atania@inca.edu.cu
Este elicitor y sus derivados han demostrado que con la aplicación preventiva de estos a las plantas, se logra además de la estimulación en algunas de las enzimas defensivas, una disminución de los síntomas de la enfermedad (4, 5). Entre los elicitores se encuentran los oligómeros de glucano, ácido galacturónico y quitosana (3). En cuanto a la quitosana se le ha prestado especial interés en los últimos años por su doble efecto: inhibir el crecimiento micelial de algunos hongos fitopatógenos y activar mecanismos defensivos en las plantas, lo cual brinda la posibilidad de utilizar estos principios activos en el control de enfermedades en cultivos de interés económico (1). de la dieta de los cubanos y la demanda interna sólo se satisface aproximadamente el 33 %. Una de las causas de los bajos rendimientos de este cultivo son los daños causados por enfermedades y en especial, las de origen fungoso (6), siendo en el estado de plántulas, entre los 25 y 35 días después de germinada la semilla, donde la planta muestra la mayor susceptibilidad. Las pérdidas oscilan entre un 10-30 %, pero su capacidad destructiva en condiciones favorables llega a ser hasta un 80 % (6, 7).
En este sentido, se ha demostrado que la quitosana aplicada a plántulas de tabaco y posteriormente infectadas con Phytophthora parasítica se logra una inducción de la actividad de las enzimas PAL y glucanasa, además de observarse protección (4). También en hojas de maní se aplicó quitosana, se infectó con Puccinia arachidis, observándose una estimulación en la actividad quitinasa y glucanasa y una disminución de las lesiones (1).
ción de las actividades: β-1,3 glucanasa, quitinasa y quitosanasa y para determinar la actividad PAL se utilizó como solución tampón tetraborato de sodio 0,1 -1
-1
mol.L y ácido bórico 0.1 mol.L a pH 8.8. Resulta importante destacar, que una de las vías de transmisión de este patógeno es por semillas contaminadas, siendo el tratamiento a la semilla con fungicidas químicos uno de los métodos más usado para el control de la piriculariosis, pero los mismos son muy costosos y tóxicos al ambiente. Toda esta situación conduce a la necesidad de utilizar nuevos métodos, muchos más económicos y ecológicos, que se unan a los tradicionales para el control integrado de las enfermedades fungosas. Teniendo en cuenta estos antecedentes el objetivo del trabajo es determinar la dinámica de algunos indicadores de resistencia sistémica inducida: fenilalanina amonio liasa, β-1,3 glucanasa, quitinasa y quitosanasa estimulada por la quitosana en una variedad de arroz (J-104) .
MATERIALES Y METODOS Elicitor utilizado. La quitosana con grado de acetilación 36.5 % (Q-63), obtenida en el Laboratorio de Oligosacarinas del Departamento de Fisiología y Bioquímica Vegetal del Instituto Nacional de Ciencias Agrícolas (INCA), por desacetilación alcalina de quitina de langosta, calidad farmacéutica (8).
Para ambas extracciones se usó 1 g de tejido por cada 2 mL de solución tampón. Determinación de las actividades enzimáticas Determinación de la actividad PAL. Se tomó 0.9 mL de L-Fenilalanina 1 -1
mg.mL (Merck calidad bioquímica) se le adicionó 0,1 o
mL de extracto enzimático, se incubó a 40 C durante 30 minutos. La reacción se detuvo con 0.25 mL de ácido clorhídrico 5 N, se colocaron las muestras en baño helado y se le adicionó 5 mL de agua destilada. Los valores de absorbancia se determinaron a 290 nm. Se definió como una unidad de actividad enzimática equivalente a la producción de 1 mmol de ácido transcinámico producido por minuto por mg de proteínas (10). Determinación de la actividad β- 1,3 -1
glucanasa. A 0.2 mL de sustrato laminarina 1 mg.mL (Sigma para análisis) (11) se le adicionó 0,1 mL de -1
tampón acetato de sodio 0.1 mol.L a pH 5,2 y 0,1 mL de extracto enzimático, las muestras se incubaron a o
40 C durante 30 minutos. Se determinó la actividad enzimática por medición del nivel de producción de azúcares reductores (12) y se expresó en términos de actividad específica como ìmol de glucosa producido -1
-1
minutos .mg de proteínas. Determinación de la actividad quitinasa. Para este ensayo se procedió adicionando 2 mL de tampón de ácido cítrico 0,1 mol. -1
-1
L e hidrógeno fosfato de sodio 0,1 mol.L pH 5,2 a 1 mL de extracto enzimático y a un 1 mL de quitina coloidal 0.5 % (Sigma con fines analíticos). Se
Aida T. Rodríguez, M. A. Rodríguez, A. Falcón, F. Guridi y Elizabeth Cristo
Estimulación de los mecanismos de defensa por la quitosana. Las semillas de arroz variedad J-104 después de desinfectadas con hipoclorito de sodio al 3 % durante tres minutos y lavadas con agua destilada estéril, fueron tratadas con disoluciones de quitosana a las concentraciones 100, 500 y 1000 mg.L C y a los 18, 25, 32 y 39 días de germinadas las semillas se determinaron las diferentes actividades enzimáticas: fenilalanina amonio liasa (PAL), β 1,3 glucanasa, quitinasa, quitosanasa, que se compararon con un control (tratado con agua). Extracción de enzimas. El material vegetal utilizado para la extracción fue hojas de arroz de las cuales se tomaron 2 g y maceraron en mortero con nitrógeno líquido. Se procedió a la extracción con una solución tampón de acetato de sodio 0.1 mol.L -
o
incubaron las muestras a 37 C durante 20 minutos con agitación continua. La reacción se detuvo al calentarla a ebullición por 5 minutos. Se determinó el incremento de azúcares reductores (2) se leyó la absorbancia a 420 nm. La actividad enzimática se expresó como ìmoles de azúcares reductores por minuto por mg de proteínas. Determinación de la actividad quitosanasa. A 0.5 mL de quitosana al 0.5 % en buffer de acetato de sodio 0,1 M a pH 5.2, se le añadió 0.5 mL de muestra. La mezcla o
se incubó a 37 C durante 24 horas, posteriormente para detener la reacción se colocaron las muestras en o
baño María a 100 C durante cuatro minutos (2). Se leyó la absorbancia a 420 nm. La actividad enzimática se expresó como µmoles de azúcares reductores por minuto por mg de proteínas.
4
amplificación de las respuestas defensivas sistémicas 2 1
con quitosana se muestran en la Figura 1.
0 18 25 32 39 Días después de germinada
0.15
Como se puede observar, se apreciaron mayores niveles de actividad PAL en las plantas suplementadas con las diferentes dosis de elicitores que en el control, con diferencia significativa entre los tratamientos aplicados. Este comportamiento se mantuvo desde la primera evaluación realizada a los 18 días después de germinada la semilla de arroz y hasta los 39 días, tiempo en que se realiza la última evaluación.
Figura 2. Actividad de 1,3la enzima glucanas plántulas de arroz a provenientes de semi en llas tratadas con diferentes concentracio nes de quitosana La dosis 1000 mg.L
-1
y en menor medida la de 500
-1
mg.L de quitosana fueron las que provocaron la mayor estimulación enzimática, con diferencias significativas con el resto de los tratamientos. Se debe destacar que a los 25 días después de germinada la Se debe destacar que los mayores valores de activi- semilla se alcanzó la mayor estimulación de la dad PAL se alcanzaron aproximadamente entre 0,12 y actividad β−1,3 glucanasa para la concentración 1000 0.14 µmoles de ácido transcinámico producido.mg de mg.L . proteínas.minuto con la dosis de 1000 mg.L para to- Algunos autores (1), en trabajos relacionados con la das las evaluaciones, mientras que a las concentracio- actividad de esta enzima ante la aplicación de nes de 100 y 500 mg.L fueron significativamente quitosana, han observado un incremento de la inferiores, aunque mejores que el tratamiento control. actividad de la misma en el tiempo. Por ejemplo, en Los resultados sugieren que la tendencia al mayor hojas de maní encontraron un incremento de la incremento de la actividad PAL ocurre entre los 25 y actividad enzimática a partir del segundo día después de la aplicación del elicitor y el máximo de inducción se 32 días, después de germinada la semilla. mostró a los 10 días después del tratamiento. Sin El hecho de que a la mayor concentración de quitosana embargo, en otras investigaciones realizadas (4) se se encontró la mayor actividad PAL pudiera explicarse observó que a las 24 horas después del tratamiento a teniendo en cuenta que a 1000 mg.L la solución es plántulas de tabaco a través de la raíz, provocó un más viscosa, por lo que debe adherirse mejor a la aumento de la actividad β-1,3 glucanasa cuatro veces semilla y su liberación debe ser más lenta que el resto mayor respecto al control. de las concentraciones cuya viscosidad es menor. Esto trae como consecuencia que las sustancias activas se En la Figura 3 se pueden apreciar los resultados de mantengan más tiempo en contacto con las semillas y actividad quitinasa, otra de las enzimas analizadas, en plántulas de arroz (16). las plántulas de arroz obtenidas de semillas tratadas En cuanto a los resultados de la actividad de la enzicon quitosana. ma β-1,3 glucanasa se muestran en la Figura 2. -1
-1
-1
-1
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Estimulación de algunas enzimas relacionadas con la defensa en plantas de arroz obtenidas de semillas tratadas con quitosana
Cuando se aplica la quitosana, se evidencia que la mayor estimulación de la actividad de la enzima se produce con la dosis de 1000 mg.L para todas las evaluaciones y 500 mg.L en la última evaluación, con diferencias significativas con el resto de los tratamientos. Se debe señalar que los mayores valores de actividad enzimática se encontraron a los 39 días después de germinada la semilla de arroz para todos los tratamientos. -1
-1
Como se puede observar las plantas tratadas con las diferentes dosis del elicitor mostraron una mayor actividad quitinasa que las correspondientes a las plantas controles en la mayoría de las evaluaciones realizadas.
-1
das las evaluaciones. La concentración de 500 mg.L -1 tuvo un comportamiento más regular que 100 mg.L . a los patógenos (17, 18).
Figura 3. Actividad quitinasa en plántulas de arroz obtenidas de semillas tratadas con quitosana
De forma general, se puede plantear que las plantas obtenidas de semillas de arroz tratadas con quitosana a -1
la dosis de 1000 mg.L lograron la mayor estimulación Estos resultados concuerdan con lo planteado por en todas las actividades enzimáticas evaluadas (PAL, β- 1,3 glucanasa, quitinasa y quitosanasa) desde los concentración utilizada. Estos resultados son similares 18 hasta los 39 días después de germinada la semilla. Por lo que se demostró la capacidad que presenta la quitosana de estimular la actividad de algunas enzimas relacionadas y que a medida que aumentaba la concentración se con la defensa y que esta estimulación se diferencia en -1 Incrementaba la actividad, siendo 1000 mg.L la mejor cuanto a la magnitud, rapidez en alcanzar los valores mayores de actividad y la dosis utilizada. Lo cual a los obtenidos en este trabajo, con el mismo elicitor y sugie la misma concentración, por lo que nos sugiere la re, la posibilidad de que este elicitor pueda ser capacidad que presenta la quitosana obtenida en el empleado en la protección de plántulas de arroz contra Laboratorio de Oligosacarinas de estimular los algunos patógenos fúngicos. mecanismos defensivos en cultivos como la soya y el En otros trabajos (16) donde se trataron semillas de arroz. arroz con quitosana y uno de sus oligómeros durante pocos segundos y se observó también que había REFERENCIAS inducción de la actividad quitinasa a los 8 días después germinada la semilla, lo cual reafirma los 1 Sathiyabama, M. y Balasubramanian, R. Chitosan resultados obtenidos. Los resultados de actividad induces resistance components in Arachis hypogaea against quitosanasa se muestran en la Figura 4.
leaf rust caused by Puccinia arachidis Speg. Crop Protection, 1998, vol. 17, no. 4, p. 307-313. 2 Inui, H.; Yamaguchi, Y. y Hirano, S. Elicitor actions of Nacetylchitooligosaccharides and laminarioligosaccharides for chitinase and L-phenylalanine ammonia-
3.Prado, G. A. /et al./. Hipótesis de exclusión de linajes. Una alternativa para el desarrollo de cultivares de arroz con resistencia durable a Pyricularia grisea (Sacc.) en Colombia. Libro Resumen. En: Encuentro Internacional del Arroz (1:1998, junio 9-10, La Habana), 1998.
4. Ramírez, M. A.; Cabrera, G.; Gutiérrez, A. y Rodríguez, T. Metodología de obtención de quitosana a partir de quitina de langosta. Cultivos Tropicales, 2000, vol. 21, no. 1,
5. Cuba. MINAGRI. Instituto de Suelos. Nueva versión de clasificación genética de los suelos de Cuba, La Habana : AGROINFOR, 1999, 64 p.
LAS PROTEÍNAS LLEVAN A CABO UNA DETERMINADA FUNCIÓN DEBIDO A SU PARTICULAR ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL. ESTA ES EL RESULTADO DE LA DISPOSICIÓN SECUENCIAL DE SUS AMINOÁCIDOS, la cual se ha ido modificando por la evolución a lo largo de un proceso, aparentemente, de optimización.
Una de las técnicas más antiguas que se conocen para la decoración y construcción de estructuras de madera es la marquetería o taracea. En ella, pequeñas astillas se encajan de modo preciso de manera que resultan bellas estructuras. Surgió en el Egipto primitivo para aprovechar los fragmentos resultantes de los trabajos con la escasa madera de la zona. La estructura tridimensional de una proteína es un ejercicio termodinámico de marquetería con aminoácidos, dirigido a conseguir el desarrollo de una función celular. Cuando se concluye un trabajo de marquetería, cada parte sólo se puede sustituir por otra idéntica. Pero en una proteína parece que sí se puede sustituir un aminoácido por otro sin que se modifique su función, al menos eso parece indicar la evolución. Sin embargo, ese cambio no puede efectuarse en cualquier parte de la proteína y tampoco por cualquier otro aminoácido. Esto podría indicar que hay partes de las proteínas que son más importantes y otras que lo son menos. A menudo, se llega a la conclusión de que "unos pocos" aminoácidos son esenciales para la función, pareciendo que el resto son meros acompañantes que posibilitan el que aquellos pocos puedan lucir toda su magnificencia. Pero, ¿realmente es así?¿cuántos son "unos pocos"? Las ribotoxinas son un grupo de proteínas fúngicas, que se descubrieron hace unos cuarenta años durante un programa de búsqueda aleatoria de antibióticos y antitumorales. Pronto se vio que degradaban de manera muy selectiva el RNA de los ribosomas, mostrando una cierta especificidad antitumoral. Aunque todas ellas muestran gran similitud, la mayor parte de los estudios se empezaron a llevar a cabo con la α-sarcina (de anti-sarcoma), quizás por haber sido la primera que se purificó.
Al tratarse, en definitiva, de ribonucleasas, se pudieron identificar los aminoácidos responsables de su actividad catalítica, tres de entre un total de 150. Al ahondar en el conocimiento del centro activo, se encontró que otros tres aminoácidos también eran necesarios para el correcto acomodo del RNA -su sustrato-, aunque no participaban de modo directo en el proceso catalítico. Al ir conociendo más acerca de estas proteínas se fue descubriendo que su estructura además les confiere otras habilidades. Son capaces de interaccionar con algunas membranas biológicas, en concreto con las que tienen un cierto exceso de fosfolípidos ácidos -de ahí su carácter antitumoral-, y en esto ya participan unos ochenta aminoácidos, sin que se observe un protagonismo individualizado. Una vez que las ribotoxinas han interaccionado con una membrana, se dejan atrapar hasta penetrar al interior de las células, y son capaces de resistir los embates de su maquinaria proteolítica.
Es el momento estelar de otros cuatro aminoácidos más, que, merced a la formación de puentes disulfuro, blindan la estructura y protegen a los demás protagonistas de la degradación. Una vez en el interior de la célula, estas proteínas también son capaces de asociarse a una región muy concreta de los ribosomas. Es el turno de otros treinta aminoácidos, que reconocen a un par de proteínas ribosomales, permitiendo el anclaje de la intrusa a la maquinaria del ribosoma. Este es el momento en el que actúan los protagonistas catalíticos, que producen un único corte en el RNA ribosómico suficiente para detener la biosíntesis de proteínas y causar la muerte celular. Pero no se debe a ellos la esencia funcional de estas proteínas, ya que están presentes en otras muchas muy distintas. En total, alrededor de las dos terceras partes de los aminoácidos constituyentes de estas proteínas tendrían un papel reconocido en su actuación. Las ribotoxinas son parientes cercanos de otras ribonucleasas fúngicas -siendo la RNasa T1 la más sobresaliente-, proteínas que tienen alrededor de cien aminoácidos, pero que no muestran tantas habilidades como aquellas, aunque comparten los residuos catalíticos. Parecería que el artesano hubiera incrementado el número de astillas de la estructura para lograr esas cualidades. Recientemente se descubrió un nuevo miembro de este grupo de proteínas, la hirsutelina A, que tiene veinte aminoácidos menos pero exhibe las mismas habilidades. Podría pensarse en una optimización del trabajo de marquetería. En esta proteína se siguen encontrando los mismos aminoácidos protagonistas, pero el número de secundarios agrupados se ha reducido. ¿Cómo ha conseguido la Naturaleza reducir el número de piezas de manera que las cualidades del conjunto sigan siendo iguales? Sería maravilloso conocer lo necesario para controlar la marquetería de las proteínas.
Figura. Estructuras de ribotoxinas.
REFERENCIAS 1.- Martínez del Pozo, A. (2009) El nacimiento de la química de Proteínas (Ciencia Abierta, Nivola) pp 1-188, Madrid 2.- Lacadena, J., Álvarez-García, E., Carreras-Sangrá, N., Herrero-Galán, E., AlegreCebollada, J., García-Ortega, L., Oñaderra, M., Gavilanes, J.G. y Martínez del Pozo, A. (2007) Fungal ribotoxins: molecular dissection of a family of natural killers. FEMS Microb. Rev. 31, 212-237. 3.- Herrero-Galán, E., Lacadena,J., Martínez del Pozo, A., Boucias, D.G., Olmo, N., Oñaderra, M. y Gavilanes, J.G. (2008) The insecticidial protein hirsutelin A from the mite fungal pathogen Hirsutella thompsonii is a ribotoxin. Proteins 72, 217-228. 4.- http://bbm1.ucm.es/public_html/res/prot/index.htm
“CORROSIÓN DE METALES”
FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS (FCIAL). UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO (UTA).
Natalia Ronquillo Primero “A” Bioquímica Ing. Ignacio Echeverría, Egda. Jéssica Chamorro Ciudadela Huachi, Casilla 18-01-0334. E – mail: fcial@uta.edu.ec AMBATO – ECUADOR
RESUMEN La corrosión se define como el deterioro de un material a consecuencia de un ataque electroquímico por su entorno. De manera más general, puede entenderse como la tendencia general que tienen los materiales a buscar su forma más estable o de menor energía interna. Siempre que la corrosión esté originada por una reacción electroquímica (oxidación), la velocidad a la que tiene lugar dependerá en alguna medida de la temperatura, de la salinidad del fluido en contacto con el metal y de las propiedades de los metales en cuestión. Otros materiales no metálicos también sufren corrosión mediante otros mecanismos. La corrosión de metales, o proceso de deterioro de éstos por agentes presentes en el medio ambiente, constituyen un problema generalizado en todos los países. Si el hierro en contacto con un metal menos activo como el cobre o el plomo se forman pares metálicos que aceleran la corrosión. La capa de herrumbre que se forma al corroerse el hierro está constituido fundamentalmente por oxido de hierro hidratado. agente oxidante, y la mayoría de los metales
I.-INTRODUCCIÓN
tienen potenciales de reducción menores que éste, La corrosión es la disolución o deterioro de un metal en un medio determinado. Los átomos del metal se disuelven en forma de iones. Un modelo simple es la corrosión acuosa. La corrosión es
por lo tanto son fácilmente oxidables. Se sabe que la oxidación de los metales tiene lugar más fácilmente en puntos donde la tensión es mayor (donde los metales son más “activos”).
definida como el deterioro de un material a consecuencia de un ataque electroquímico por su
Los metales pueden ser lentamente atacados por
entorno, la velocidad a la que tiene lugar
el oxígeno de la atmósfera, oxidando sus primeras
dependerá en alguna medida de la temperatura, la
capas superficiales hasta avanzar hacia el interior
salinidad del medio y las propiedades de los
de sus estructuras. Sin embargo, el proceso de
materiales
puede
corrosión puede acelerarse cuando los metales
mencionarse los procesos de desgaste por fricción,
están expuestos a una atmósfera con altas
por erosión o por diversos otros factores
concentraciones de sales o compuestos químicos
mecánicos.
productos de la contaminación. La corrosión es
en
cuestión,
entre
ellos
una reacción química (oxido reducción) en la que Una característica importante de los procesos de corrosión
es
que
los
eventos
ocurren
espontáneamente en la naturaleza, en términos
intervienen tres factores: la pieza manufacturada, el ambiente y el agua, o por medio de una reacción electroquímica.
termodinámicos, esto equivale a decir que la variación de energía libre (∆G0) de la reacción
Los factores más conocidos son las alteraciones
global es menor que cero. La corrosión ordinaria,
químicas de los metales a causa del aire, como
es un proceso redox por el cual los metales se
la herrumbre del hierro y el acero o la formación
oxidan por medio del oxígeno O2, en presencia de
de pátina verde en el cobre y sus aleaciones
humedad. El oxígeno en estado gaseoso es un
(bronce, latón) Sin embargo, la corrosión es un
fenómeno mucho más amplio que afecta a todos los materiales (metales, cerámicas, etc.)
y
todos
los
ambientes
polímeros,
Identificar lo que pasa en las latas al poner las sustancias.
(medios
acuosos, atmósfera, alta temperatura, etc.). La corrosión es un proceso electroquímico en el
III.- MATERIALES Materiales
cual un metal reacciona con su medio ambiente
4 latas grandes
para formar óxido o algún otro compuesto. La
Destornillador plano
celda que causa este proceso está compuesta esencialmente por tres componentes: un ánodo, un
REACTIVOS
cátodo y un electrolito (la solución conductora de
Aglomerado de Zn
electricidad). El ánodo es el lugar donde el metal
Solución acuosa de NaCl al 3.5%
es corroído: el electrolito es el medio corrosivo; y el cátodo, que puede ser parte de la misma
IV.-PROCEDIMIENTO
superficie metálica o de otra superficie metálica que esté en contacto, forma el otro electrodo en la celda y no es consumido por el proceso de corrosión. En el ánodo el metal corroído pasa a través del electrolito como iones cargados positivamente, liberando electrones que participan en la reacción catódica. Es por ello que la corriente de corrosión entre el ánodo y el cátodo consiste en electrones fluyendo dentro del metal y de iones fluyendo dentro del electrolito.
II.-OBJETIVOS Objetivo General
Analizar los procesos que ocurre con la corrosión de los metes en las latas
Objetivos Específicos
Determinar lo que ocurre en cada una de las latas en el trascurso de una semana. Elaborado por: Natalia Ronquillo
Fuente: Laboratorio de QuĂmica BĂĄsica
Lata 2:
V.-CALCULOS Y RESULTADOS
2Fe0 + 3đ??ť21+ đ?‘‚2− == đ??šđ?‘’23+ đ?‘‚32− 3đ??ť20 ReacciĂłn
Tabla N°1.-Obtencion de las distintas reacciones. DIAS
Fe0 == Fe 3+ (Reduce) 3eđ??ť21+ == đ??ť20 (Oxida) 1e-
LUNES
MIERCOLES
VIERNES
Lata N#
Solo
Presencia
Presencia
1
agua
burbujas en la
de burbujas
3(đ??ť21+ + 1e-== đ??ť20 )
lata
sin ninguna
Fe0 == Fe 3+ + 3e-
LATAS
(Fe0 == Fe 3+ + 3e-) de
reacciĂłn Lata
Raspado
Se oxida en la
Aumento
N#2
con
parte
de
agua
con
raspada presencia
3đ??ť21+ + 3e-== 3đ??ť20 Fe0 + 3đ??ť21+ == Fe 3+ 3đ??ť20
oxidaciĂłn
de oxigeno y
con borden
bordees negros
negros
en
el raspado
Lata 3: đ??šđ?‘’ 0 + 2đ?‘ đ?‘Ž + đ??śđ?‘™ − → đ??šđ?‘’ 2+ đ??śđ?‘™2− + 2đ?‘ đ?‘Ž0
Lata
Raspado
Menor
Presencia
N#3
con
oxidaciĂłn y el
de
NaCl
agua es mĂĄs
oxidaciĂłn
Fe 0 == Fe2+ (Oxida) 2e-
clara
en
2(đ?‘ đ?‘Ž1+ → đ?‘ đ?‘Ž0 + 1đ?‘’−)
Na 1+ == Na 0 (Reduce) 1e-
de
fondo de la lata Lata
Raspado
Grumitos
de
Aumenta
N#4
con
oxidaciĂłn
de
en
el
NaCl y
color amarrillo
rapado
la
Zn
y al Zn no le
oxidaciĂłn
pasa nada
y el Zn a reducido
1 (đ??šđ?‘’ 0 + 2đ?‘’− → đ??šđ?‘’ 2+ )
2đ?‘ đ?‘Ž1+ → 2đ?‘ đ?‘Ž0 + 2e − đ??šđ?‘’ 0 + 2đ?‘’− → đ??šđ?‘’ 2+
2đ?‘ đ?‘Ž1+ đ??šđ?‘’ 0 → 2đ?‘ đ?‘Ž0 + đ??šđ?‘’ 2+
de tamaĂąo Elaborado por: Natalia Ronquillo Fuente: Laboratorio de QuĂmica BĂĄsica CĂĄlculos de las formulas Lata 1: no existe reacciĂłn debido a que el agua no produce una corrosiĂłn porque la lata tiene protecciĂłn galvĂĄnica.
Lata 4: đ?‘?đ?‘›0 + 2đ?‘ đ?‘Ž + đ??śđ?‘™ − → đ?‘?đ?‘›2+ đ??śđ?‘™2− + 2đ?‘ đ?‘Ž0 đ?‘?đ?‘›0 → đ?‘?đ?‘›2+ + 2đ?‘’ − (Oxida) đ?‘ đ?‘Ž+ + 1đ?‘’ − → đ?‘ đ?‘Ž0 (Reduce) 1(đ?‘?đ?‘›0 → đ?‘?đ?‘›2+ + 2đ?‘’ − )
2(đ?‘ đ?‘Ž+ + 1đ?‘’ − → đ?‘ đ?‘Ž0 )
2đ?‘ đ?‘Ž + + 2đ?‘’ − → 2đ?‘ đ?‘Ž0 đ?‘?đ?‘›0 + 2đ?‘ đ?‘Ž + → đ?‘?đ?‘›2+ + 2đ?‘ đ?‘Ž0
0
đ?‘?đ?‘› → đ?‘?đ?‘›
2+
+ 2đ?‘’
−
2.-Explique en que consiste la protecciĂłn catĂłdica. VI.-DISCURSO ProtecciĂłn catĂłdica tiene la caracterĂstica de que En el trascurso de una semana las latas sufrieron diferentes reacciones ya que en cada una sucedieron diferentes reacciones en la primera lata al poner solo el agua sucediĂł que en su interior se formaron unas pequeĂąas burbujas al trascurrir el tiempo lo Ăşnico que sucediĂł fue que en el agua no hubo reacciĂłn y solo tenĂa presencia de burbujas en la segunda lata en donde se realizo el raspado ocurriĂł la oxidaciĂłn y tenia bordes de color negro al pasar los dĂas fue aumentando la oxidaciĂłn en la tercera lata al raspar y poner cloruro de sodio tuve menor oxidaciĂłn en la parte del raspado pero al trascurrir el
tiempo fue aumentando la
oxidaciĂłn y el agua se tormo de color rojizo en la Ăşltima lata al mezclar las sustancias obtuvimos grumitos de oxidaciĂłn pero al zinc no le ocurrĂa nada y al pasar los dĂas en el raspado aumentĂł la oxidaciĂłn y con esto se redujo el zinc esto nos quiere decir que al mezclar diferentes sustancias podemos observar reacciones distintas y sobre todo saber cĂłmo actĂşa cada uno en el trascurso del tiempo. VII.-CUESTIONARIO
utiliza como ĂĄnodo dispersor de la corriente (electrodo auxiliar) materiales metĂĄlicos que en mayor o menor grado se consumen con el paso de la
corriente.
Sin
embargo,
el
intercambio
necesario de corriente con el electrolito tiene lugar a travĂŠs de reacciones electroquĂmicas, las cuales dependen tanto del material anĂłdico, como del ambiente que rodea al mismo e incluso de la densidad de corriente que ĂŠste suministra. ProtecciĂłn catĂłdica comporta la reducciĂłn de las diferencias potenciales sobre el acero a 0, obteniendo un flujo de corriente cero. Un mĂŠtodo muy efectivo para reducir la corrosiĂłn en elementos o estructuras metĂĄlicas en contacto con el suelo u otros electrolitos, es la protecciĂłn catĂłdica. Existen dos sistemas para suministrar protecciĂłn catĂłdica a una estructura, ya sea mediante
corriente
inducida
o
ĂĄnodos
de
sacrificio. Ambos sistemas requieren un anĂĄlisis previo y una posterior instalaciĂłn especializada, ya que un mal funcionamiento puede repercutir en daĂąos al medio ambiente e incluso accidentes fatales ademĂĄs de no realizar la funciĂłn para que fuera diseĂąada. Este mecanismo que es analizado
1.-Explique el papel de las soluciones salinas en
desde
el proceso de corrosiĂłn.
electroquĂmico, indica que el metal tiende a
Soluciones salinas son los electrolitos mĂĄs comunes los cuales permiten el contacto elĂŠctrico entre las dos soluciones con el paso lento de los iones, evitando que se mezclen las soluciones donde mantiene la neutralidad elĂŠctrica
un
punto
de
vista
termodinĂĄmico
retornar al estado primitivo o de mĂnima energĂa, siendo la corrosiĂłn por lo tanto la causante de grandes perjuicios econĂłmicos en instalaciones enterradas. Por esta razĂłn, es necesaria la
oportuna utilización de la técnica de protección
Corrosión Por Hidrógeno
catódica.
Corrosión por Desaleación
3.-Enuncie tres métodos empleados para evitar la corrosión.
Obtuvimos que en las latas al pasar el
Utilice acero inoxidable en lugar de acero
tiempo tiene diferentes reaccione al
normal
colocar sustancias diferentes en cada una
Recubra el acero normal con plásticos
de ellas.
especiales.
VIII.-CONCLUSIONES
En el trascurso de una semana en el
Proteja el acero con ánodos de zinc
interior de las latas nos dimos cuenta que
(protección catódica).
existe oxidación pero a la misma vez existieron latas en las cuales su oxidación
4.-Dibuje las partes internas como externas de
fue mayor y en otra fue menor la
una lata.
oxidación.
Al colocar las sustancias en las latas nos dimos cuenta que al poner el agua no ocurre ninguna reacción pero al poner agua en la lata raspado obtiene oxidación y en las demás latas obtuvimos oxidación y en una lata reducción del zinc.
1 Bibliografía García. R. 2014. Corrosión de los metales. Disponible en: 5.-Enuncie los tipos de corrosión.
Corrosión Uniforme
Corrosión del Acero en Ácido
Corrosión del Acero en Agua
Corrosión Galvánica
Corrosión Por Cavidad o Hendidura
Corrosión Por Picadura
Corrosión Intergranular
Corrosión Por Erosión, Cavitación y Fricción
Corrosión por Turbulencia
http://prepa8.unam.mx/academia/colegios/quimica /infocab/unidad124.html Duery. L. 1988. Corrosión de los metales. Disponible en: http://www.creces.cl/new/index.asp?imat=++%3E ++13&tc=3&nc=5&art=270 FARIAS. M. Disponible en:
1989.
Protección
catódica.
http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx/sites/ciencia/vo lumen2/ciencia3/079/htm/sec_8.htm
ANEXOS