ELECTROFORESIS

BIOLOGÍA 2º DE BTO

Métodos de estudio de macromoléculas LA ELECTROFORESIS

CARMEN BONET 23/11/2012

Contenido Electroforesis de รกcidos nucleicos en gel ..................................................................................... 3 Simulador de electroforesis en acetato de celulosa ..................................................................... 4

Electroforesis de ácidos nucleicos en gel En el siguiente que aparece debajo puedes encontrar información para contestar a las siguientes preguntas:

1 representación de electroforesis de ADN

http://biomodel.uah.es/biomodel-misc/anim/elfo/electrof.html 1. ¿Qué permite la electroforesis?

2. ¿Qué tipos de geles se utilizan para la separación (fraccionamiento de una mezcla) de macromoléculas, como las de ADN, las de ARN o las proteínas?

3. ¿Cuáles son los pasos que se tienen que ejecutar para que poder realizar la electroforesis?

4.

¿Cuál es el papel de la corriente eléctrica?

5.

¿Para qué sirve la calle o el carril de patrones?

6.

En el caso de la electroforesis del ADN ¿cuáles son las moléculas que se utilizan cómo patrón y en qué se diferencian?

7. ¿Qué hay que hacer con las moléculas de ADN antes de someterlas a electroforesis?

8. ¿Cuáles son las características de la agarosa?

9. ¿Por qué el gel de agarosa dificulta el paso de macromoléculas a su través?

10. ¿Para qué se hacen los pocillos en el gel?

2 Pocillos en el gel 11. ¿Cuál es la fuerza impulsora, en el desplazamiento del ADN sobre el gel?

12. ¿Cuál es la causa de la separación de las moléculas de ADN en la electroforesis) 13. ¿Cómo se construyen las gráficas?

Simulador de electroforesis en acetato de celulosa En el siguiente que aparece debajo puedes encontrar información para contestar a las siguientes preguntas: http://biomodel.uah.es/lab/acetato/LDH.htm Ten en cuenta la siguiente nota antes de contestar a las preguntas: El Dodecilsulfato sódico es un compuesto con propiedades detergentes, empleado habitualmente en electroforesis (técnica SDS-PAGE) por su capacidad de desnaturalizar las proteínas y de unirse a ellas en una proporción masa/masa constante. Como resultado, las moléculas de proteína quedan completamente desplegadas y recubiertas de una carga negativa uniforme, y por ello su movilidad electroforética es inversamente proporcional a su número de aminoácidos. Otros nombres: SDS, laurilsulfato sódico.

1. Pincha en los perfiles normales y elige primero el corazón.

2. Observa el densitograma, para el volumen de muestra de 50 µl e indica cuáles de las isozimas de lactato deshidrogenasa es más abundante. Cambia el valor del

volumen de muestre y vuelve a observarlo. Anota los resultados y da una valoración de los mismos.

3.

Observa la tira de acetato de celulosa y compara la electroforesis de las isozimas para ese tejido. ¿Qué se observa?¿Se relaciona con el densitograma? ¿Coinciden las bandas con la gráfica?

4. ¿Cuál de las cinco isozimas tiene mayor masa molecular y por qué? Analiza la posición de la banda de cada isozima, en relación a los polos. Consulta la nota superior para contestar a la pregunta. Recuerda también que las moléculas más grandes se mueven peor por los geles.

5. Vuelve a repetir el proceso en el músculo y compara los resultados con los anteriores.