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INGENIERÍA AMBIENTAL

BIOQUÍMICA

PRACTICA N° 02 INFORME DE LABORATORIO: “HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL”

DOCENTE

:

Lic. Héctor H. Toledo Acosta.

INTEGRANTES

:

Dámazo Gálvez, Lizbeth N. Martínez Gil, Fiorella Ogura Esteban, Josselyn Medina Quiroz, Mishell Taipe Arone, Fortunato Bullón Guzmán, Danny Gonzales Chávez, Frank Lucas Román, Virna

E.A.P.

:

INGENIERÍA AMBIENTAL

GRUPO

:

II.

FECHA

:

13 de Mayo del 2014.

HUACHO - PERÚ 2014

HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL

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BIOQUÍMICA

1. RESUMEN En el presente informe se da conocer los resultados de la Segunda Sesión de laboratorio de Bioquímica, la cual trata acerca de la HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN

POR LA AMILASA SALIVAL. Para estudiar la hidrólisis del almidón (desdoblamiento), por acción de la amilasa, se aprovechara el hecho de que el lugol (específicamente el yodo que contiene el lugol), se incorpore a la fracción helicoidal del almidón dando un color azul y a medida que la hidrólisis progresa, el color azul va desapareciendo y cambia a rojizo o café claro. La baja temperatura inhibe el proceso hasta ser capaz de detenerlo.

Un pH muy ácido o muy alcalino, también puede inhibir el proceso.

Es importante que conozcamos la estructura y propiedades químicas de los compuestos que se van a utilizar, por lo que es recomendable acudir a notas de clase o a un libro de texto de bioquímica general para un mejor entendimiento y aprovechamiento de la práctica y para presentar y discutir los resultados obtenidos en el cuaderno de prácticas.

2. OBJETIVOS 2.1.

Objetivo General

 Demostrar la acción de la amilasa salival sobre el almidón.

2.2.

Objetivos Específicos

 Identificar de forma cualitativa las propiedades de la amilasa salival.  Identificar la acción de la amilasa de la saliva sobre el almidón.  Demostrar que el pH y la temperatura influyen en la acción de la amilasa.

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3. MARCO TEÓRICO

ENZIMAS 3.1. DEFINICIÓN GENERAL: Las enzimas son proteínas que efectúan una acción catalítica, es decir, favorecen el que se produzca una reacción determinada.

La presencia de las enzimas dentro del cuerpo de los animales, permite que muchas reacciones puedan llevarse a cabo bajo condiciones de temperatura constante, y un pH con poca variación.

Existiendo en el cuerpo una gran cantidad de enzimas y de acorde a la práctica detallaremos de la enzima amilasa a continuación: a.

LA AMILASA

Es una enzima que actúa en los procesos de digestión de carbohidratos, específicamente actúa sobre el almidón, es una enzima glucolítica. i. FUNCIÓN: Es hidrolizar los enlaces glucosídicos del tipo alfa 1,4 de la fracción amilosa de la molécula de almidón. La cual actúa desdoblando el almidón hasta alfa dextrinas, y luego estas hasta maltosa (aunque predominan las alfa dextrinas), en cierto punto de la hidrólisis, se producen eritrodextrinas (llamadas así porque se tiñen de rojo si se usa lugol). ii. PRODUCCIÓN

Principalmente en el páncreas, y en el caso del hombre y del cerdo, se produce en cantidad mucho menor en las glándulas salivales.

Fuera del cerdo, el resto de los animales domésticos, únicamente producen amilasa de origen pancreático. iii. MEDIOS ÓPTIMOS PARA LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA La acción de la amilasa se efectúa mejor a un pH cercano a neutro.

Además de la diferencia en concentración, esta es otra de las causas por las que la amilasa pancreática es más activa que la salival, ya que en el estómago el pH es muy ácido, pero a nivel del intestino delgado es alcalino ligero.

La temperatura que permitirá la acción de la amilasa es de 37° C.

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4. MATERIALES 4.1.

INSTRUMENTOS Y REACTIVOS DE LABORATORIO 4.1.1. Instrumentos:  1 Cocina eléctrica.

 2 Vasos de precipitado de 100 ml.

 1 Gradilla  4 Pipetas de 5 y 1 ml (2 de cada uno).

 1 Pizeta.

 4 Tubos de ensayo.

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INGENIERÍA AMBIENTAL 4.1.2. Reactivos:  10 gts. (1 ml) de H2SO4 (diluido al10%).

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 10 gts. (1 ml) de NaOH (diluido al 5 %).

H2SO4

 20 gts. de (solución).

LUGOL

 8 ml. de SOL. ALMIDÓN (diluido al 2 %).

4.2.

INSUMOS Y MATERIALES ADQUIRIDOS POR LOS ESTUDIANTES 4.2.1. Insumos:  15 cubitos de hielo.  10 ml de saliva.

 1 cojín destilada.

de

4.2.2. Materiales:  1 lápiz marcador.  1 cinta masketein.

agua  Gasa médica.

 Toallas de papel.  Cámara fotográfica.

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5. PROCEDIMIENTO 5.1. Preparar la solución de almidón:

2° PASO Añadir 40 ml de agua .

5.2.

4° PASO

1° PASO

3° PASO

En una vaso de precipitado de 10 ml añadiir 25 gr de maizena.

Homogenizar la muestra.

una vezz homeginazada esta lista para utilizar.

Obtención de muestra de saliva

PASO 1: Colocar la pieza de gasa sobre el vaso de precipitado.

PASO 2: Adicionar la muestra de saliva. La cual pasara a tráves de la gasa y será recepcionada en el vaso de precipitdo.

PASO 3: Complete los 10 ml de saliva. Siemprre teniendo en cuenta que no se forne espuma.

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5.3. Preparar un baño María a una temperatura de 40 °C.

1 PASO

2 PASO

3 PASO

4 PASO

Coger un vaso de precipitado de 50 ml.

Adicionar agua de grifo.

Poner a hervir.

Entibiar a temperatura de 40° C.

5.4. Rotule los cuatro tubos y proceda según el siguiente esquema:

ROTULE 4 TUBOS DE ENSAYO

PROCEDA SEGÚN EL ESQUEMA

TUBO

1

2

3

4

Sol. Almidón

2 ml.

2 ml.

2 ml.

2 ml.

Lugol

3 gts.

7 gts.

3 gts.

3 gts.

Sol. H2SO4

1 ml.

----

----

----

Sol. NaOH

----

3 gts.

----

----

Saliva

1ml

1ml

1ml

1ml

SOLUCIÓN

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INGENIERÍA AMBIENTAL 5.4.1.

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Tubo 1 PASO 1 Añadir 2 ml de sol. de almidón.

PASO 2 Adicionar 4 gts. de lugol.

PASO 3 Adicionar 1 ml de H2SO4.

PASO 4 Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva.

PASO 5 Llevar a baño María a 40 ° C.

OBSERVAR Y ANOTAR

OBSERVACIONES: Se tornó color azul con mayor intensidad, esto se debe a que el lugol en presencia del almidón cambia de color. Por lo tanto la amilasa fue desnaturalizada.

5.4.2.

Tubo 2

PASO 1 Añadir 3 ml de sol. de almidón.

PASO 2 Adicionar 8 gts. de lugol.

PASO 3 Adicionar 1 ml de NaOH.

PASO 4 Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva.

PASO 5 Llevar a baño María a 40 ° C.

OBSERVAR Y ANOTAR

OBSERVACIONES: A este tubo se adiciono: 4 gts. de lugol y 2 ml. de sol. NaOH (más de lo indicado). Si se decoloro a causa de que la sol. NaOH no estaba concentrada. Por lo tanto si hubo reacción enzimática.

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5.4.3.

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Tubo 3

PASO 1 Añadir 2 ml de sol. de almidón.

PASO 2 Adicionar 4 gts. de lugol.

PASO 3 Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva.

PASO 4 Llevar a baño María a 40 °C.

OBSERVAR Y ANOTAR

OBSERVACIONES: Se decoloro rápido y la intensidad del color fue media. Por lo tanto se realizó la actividad enzimática óptima y rápida.

5.4.4.

Tubo 4

PASO 4 Colocar en una vaso con precipitado de hielo picado.

PASO 2 Adicionar 3 gts. de lugol.

PASO 1 Añadir 2 ml de sol. de almidón.

PASO 3 Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva.

OBSERVAR Y ANOTAR

OBSERVACIONES: Si decoloro pero la intensidad fue ínfima, pero al añadir la saliva. Por lo tanto se realizó la actividad enzimática, pero lentamente por la baja temperatura.

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6. RESULTADOS

1

INTENSIDAD DEL COLOR AZUL Mayor

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA No

2

Ínfima

Si

Lenta

3

Pequeña

Si

Rápida

4

Ínfima

Si

Lenta

TUBO

HIDRÓLISIS Inicial.

7. CUESTIONARIO GENEROSO  ¿Cómo actúa la amilasa sobre el almidón?

RPTA: La enzima amilasa degrada el almidón  ¿Cómo está formado el almidón químicamente?

RPTA: El producto formado por la polimerización de miles de monómeros de glucosa es el almidón.  ¿Qué es la amilasa desde el punto de vista químico?

RPTA: Una enzima encargada de degradar el almidón.  ¿Cuál es el papel que desempeña el almidón en los animales?

RPTA: Los polisacáridos que ingerimos son de dos tipos principales: almidón amilosa y amilo pectina, de vegetales y granos, y glucógeno del tejido animal. Los polisacáridos de la dieta menos la celulosa se hidroliza en la boca mediante una reacción catalizada por la enzima amilasa salival. La velocidad de la hidrólisis catalizada por esta enzima, disminuye en el estómago por los iones H+1. La glucosa es el principal producto de la hidrólisis del almidón y glucógeno. Alrededor de un tercio de la glucosa de la dieta a va los músculos esquelético y cardiaco para la producción y almacenamiento de energía; cerca de otro tercio va al cerebro; el tercio restante va al hígado para almacenarse en forma de glucógeno. La glucosa de la dieta que se distribuye en los tejidos se utiliza en la biosíntesis de otros carbohidratos.  ¿Por qué es necesario para los animales que la amilasa actúe sobre el almidón?

RPTA: Porque si la amilasa no actuara sobre el almidón, el almidón no podría ser degradado en moléculas simples, la glucosa, y no podría ser absorbida por las células.

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8. RECOMENDACIÓN    

Sustituir el HCl por el H2SO4.

Ser muy cuidadosos al momento de utilizar el H2SO4.

Por no haber obtenido Al realizar el experimento con el TUBO 4, colocarlo en un vaso de precipitado con hielo picado, retirar del vaso a la hora de observar y dar las conclusiones.  Sería conveniente realizar otra prueba con el procedimiento del TUBO 2, para saber con certeza la coloración que toma la muestra, la actividad y velocidad enzimática.  Se debería realizar una prueba tomando en cuenta la velocidad de la reacción de las enzimas con el sustrato.

9. CONCLUSIÓN La amilasa degrada el almidón, según los factores y medios en donde se da la actividad enzimática. A continuación detallamos su acción en diferentes medios y factores que intervienen en la amilasa salival: 

TUBO N° 1 El color de la muestra se torna de color azul intenso, se debe a que el almidón en presencia del lugol se torna de color azul violeta. Entonces la pregunta es: ¿Por qué la amilasa salival no degrado al almidón?

RPTA: Porque la misma fue desnaturalizada por el H2SO4, por lo tanto no se produjo la degradación del almidón.

Concluimos que el pH óptimo para que la amilasa realice su actividad enzimática, está dentro del rango 5-7, siendo de 6,5 para el alfa-amilasa bacteriana y pancreática. La explicación es concreta: La amilasa fue desnaturalizada por el medio ácido donde se encontraba.



TUBO N° 2 El color de la muestra se decoloro en segundo como en el Tubo 3.

La pregunta es: ¿Porque no permaneció el color azul en la muestra, si el medio es básico (por la adición de la solución de NaOH)? RPTA: Porque, la solución del NaOH no se encontraba concentrada como del H2SO4, ya que el NaOH se encontraba bien diluido. Por lo tanto la amilasa sobrevivió al medio y degrado al almidón.

Concluimos que el NaOH bien diluido, no influye en un 100% en la actividad enzimática. La explicación es concreta: Se requiere de una mayor cantidad de NaOH concentrada, para poder desnaturalizar a la amilasa presente en las muestras.

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

TUBO N° 3 En pocos segundos la muestra se decoloro. La pregunta es: ¿Por qué se decoloro rápido la muestra?

RPTA: Porque la amilasa se encontraba en las condiciones adecuadas para degradar el almidón.

Concluimos que la amilasa en un medio con temperatura cálida (37°C) y con pH casi neutro (5 - 7 aprox.), realiza adecuadamente su actividad enzimática. La explicación es concreta: Las enzimas dependen de dos factores importantes para su actividad enzimática, siendo estas la temperatura y el pH del medio en que reaccionan.



TUBO N° 4 Cambio de color la muestra por la existencia del almidón y al adicionar la saliva el color azul de la muestra se tornó claro.

Las preguntas son: ¿Por qué hubo tal cambio de coloración? RPTA: Porque la amilasa que se está presente en la saliva, degrado al almidón existente en la muestra. Sin embargo la actividad enzimática que realizo la amilasa fue lenta. ¿Por qué la actividad enzimática de la amilasa fue lenta? RPTA: Simple y llanamente por la baja temperatura del medio donde se desarrolló la actividad enzimática.

Concluimos que la temperatura baja disminuye o influye en la actividad de la amilasa. La explicación es concreta: La amilasa requiere de una temperatura cálida (37 °C) para realizar una óptima actividad enzimática.

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