Tomato brown rugose fruit virus (ToBRFV): caso México
ESPACIO PARA IMAGEN
Créditos: CNRF-DGSV, 2018
8 de marzo de 2019
INTRODUCCIÓN
Tobamovirus • • • • •
Tobacco mild green mosaic virus (TMGMV) Tobacco mosaic virus (TMV) Tomato brown rugose fruit virus (ToBRFV) Tomato mosaic virus (ToMV) Tomato mottle mosaic virus (ToMMV)
Alishir et al., 2011. New Disease Reports (2011) 23, 30.
Scholthof, 2000. www.apsnet.org
Chin y Miller, 2019. http://u.osu.edu
DISTRIBUCIÓN • ToMV, TMV, TMGMV: ampliamente distribuidos • ToMMV: Brasil, China, Irán, México, USA Alishir et al., 2016. New Disease Reports (2016) 33, 1.
Síntomas en planta por Tobamovirus
TMV: Moteado Breman, 1989. Plant Pathology Circular No. 322
Moteado clorótico
Distorsión
Abultamiento
ToBRFV, maduración desigual
TMV Lesiones necróticas Tsyplenkov A.E, 2009. http://www.agroatlas.ru
Dispersión Mecánicamente •
Contacto entre plantas
•
Manejo del cultivo: manos de los trabajadores, ropa, herramientas, estructura de invernadero e hilos usados para el
tutoreo; máquinas de trabajo; por medio del agua circulante en el caso de cultivos bajo hidroponía.
Principalmente Se
transmite
a
largas
distancias mediante semilla.
SITUACIÓN ACTUAL DE ToBRFV en México
ALERTA FITOSANITARIA • En agosto de 2018, se recibe una noticia, que indica la presencia de un nuevo virus en México.
Pagina Web de España Sin sustento científico
Tomato brown rugose fruit virus • Identidad Reino: Virus Orden: No asignado Familia: Virgaviridae
Género: Tobamovirus Especie: Tomato brown rugose fruit virus (ToBRFV)
• Estructura Presenta partículas en forma de varilla de 300 nm de largo, que encapsula un genoma de ARN monocatenario de sentido positivo.
Estudios realizados por Luria et al. (2017) señalaron que todas las variedades de tomate que poseen el gen de resistencia Tm-22 son susceptibles al Tobamovirus ToBRFV.
ORIGEN:
Tomato brown rugose fruit virus (ToBRFV) Virus del fruto rugoso café del tomate
2014. Primera detección de ToBRFV en invernaderos de cultivo de tomate de la variedad Mose e Ikram al sur de Israel. De las plantas con síntomas, del 10 a 15 % del
Israel
Jordania
total de la fruta presentaba síntomas de manchas amarillas. Variedades resistentes a ToMV como Shiran, Diagrama-F1, 870, Whitney, Antolena, Magnolia, también presentaban síntomas (Luria et al., 2017).
2015. En Jordania se reportó por primera vez al virus ToBRFV en invernaderos de jitomate, Solanum lycopersicum cv. Candela, observándose incidencias de la enfermedad cercanas al 100% (Salem et al., 2015).
HOSPEDANTES ToBRFV infecta naturalmente al cultivo de tomate (Solanum lycopersicum). En otras solanáceas inoculadas de manera
experimental con el virus, se observaron los siguientes síntomas:
Hospedantes
Síntomas
Capsicum annum
RH, amarillamiento de hojas, caída de hojas
Solanum nigrum
Asintomática
Chenopodium murale
Reacción de hipersensibilidad
Petunia hybrida
Asintomática
Nicotiana benthamiana
Lesiones locales necróticas
N. glutinosa
Lesiones locales necróticas
N. sylvestris
Lesiones locales necróticas
Luria et al. 2017
DIAGRAMA DE VÍNCULOS COMERCIALES
ISRAEL 2014-2016 EXPORTÓ
jitomate y chile (fruto o semilla) A 30 PAÍSES
INCLUYENDO MÉXICO DESTACA EL INTERCAMBIO COMERCIAL
HOLANDA
EXPORTÓ A MÁS DE
20
ISRAEL
92
EXPORTAN SEMILLAS A MÉXICO
La omisión de un reporte inicial sobre la presencia de ToBRFV por parte de las autoridades fitosanitarias de Israel, posiblemente contribuyó a la diseminación del virus a otras regiones del mundo.
PAÍSES DE LOS CUALES
CNRF REALIZÓ 43 DIAGNÓSTICOS DE SEMILLA DE TOMATE Y CHILE DE DISTINTOS ORÍGENES Y PROCEDENCIAS
POSITIVOS A ToBRFV
Derivado de lo anterior, se genera material de referencia en torno al ToBRFV:
ACCIONES
• Reunión informativa y Programa emergente de muestreo • Ficha técnica (aspectos de biología y estrategias de manejo) • Guía de síntomas
SÍNTOMAS Principalmente presentan mosaico ligero a severo de las hojas, con una ocasional apariencia estrecha de las mismas. Los frutos presentan síntomas marcados de rugosidad y coloración marrón, dependiendo de la susceptibilidad de la variedad al virus; así como, manchas de color amarillo en los frutos. También, puede presentar síntomas de necrosis en el cáliz, peciolos y pedicelos.
Figura 1. Plantas de tomate (Solanum lycopersicum) infectadas con ToBRFV. A-D) Síntomas en frutos. B y C) Manchas amarillas en frutos. A, E-G) Patrón de síntomas de mosaico, estrechamiento, acompañado de un moteado en hojas. G) Necrosis en el pedicelo, cálices y pecíolo. Créditos: Dombrovsky y Smith, 2017.
Síntomas en hojas de tomate
Manchas necróticas
Puntos cloróticos
Positivos a ToBRFV; asociado con TMV
Moteado Moteado
SĂntomas en hojas de tomate Mosaico y moteados
Positivo a ToBRFV; y asociado con TMV
Mosaicos
Positivos a ToBRFV; asociado con TMV y PepMV
Positivo a ToBRFV
Mosaico
Mosaicos
SĂntomas en hojas de tomate Amarillamiento intervenal Positivo a ToBRFV; asociado con TMV y PepMV Amarillamieno intervenal
Positivo a ToBRFV; asociado con TMV
Amarillamiento intervenal
Amarillamiento
SĂntomas en hojas de tomate
Positivo a ToBRFV; asociado con TMV
Mosaico
Positivo a ToBRFV; asociado con TMV
Marchitez
Amarillamiento en brotes
Positivo a ToBRFV; asociado con TMV y PepMV
Amarillamiento y deformaciĂłn de nervaduras
Mosaicos y amarillamiento intervenal en hojas de tomate infectadas con ToBRFV
Mosaicos y amarillamiento intervenal en hojas de tomate infectadas con ToBRFV
Estriado color verde
Síntomas en fruto Positivo a ToBRFV; asociado con TMV
Manchas color verde oscuro
Positivo a ToBRFV; asociado con TMV y PepMV
Manchas color Maduración irregular
marrón
Positivo a ToBRFV; asociado con TMV y PepMV
Positivo a ToBRFV; asociado con TMV
SĂntomas de estriado color verde en frutos de tomate infectados con ToBRFV
SĂntomas de manchas color marrĂłn en frutos de tomate positivos a ToBRFV
Síntomas de rugosidad marrón y maduración irregular en frutos de tomate infectados con ToBRFV
Maduración irregular
Rugosidad marrón
SĂntomas de necrosis de cĂĄliz en plantas infectadas con ToBRFV
Síntomas en hojas de chile
Deformación de nervaduras y amarillamiento
Positivo a ToBRFV; asociado con TMV
Diminutos puntos cloróticos en hojas Positivo a ToBRFV; asociado con TMV
Síntomas de mosaicos y deformación de hojas de chile infectados con ToBRFV
Deformación de hojas
SĂntomas de manchas amarillas y rayado de frutos de chile infectados con ToBRFV
Síntomas de maduración irregular y manchas color marrón en frutos de chile infectados con ToBRFV
Síntomas de maduración irregular y manchas color marrón en frutos de chile infectados con ToBRFV
Manchas color marrón y maduración irregular
Manchas color marrón
Maduración irregular
Síntomas de coloración marrón en frutos de chile infectados con ToBRFV
Síntomas de coloración marrón en frutos de chile infectados con ToBRFV
Comparación de micrografías de las partículas virales
Micrografía de las partículas virales de ToBRFV por Luria et al. 2017
Micrografía de partículas virales de una de las muestras tomadas en Michoacán. Créditos: Muestras procesadas en el CNRF y fotografías tomadas en la Facultad de Ciencias Biológicas por la Dra. Rosario Espinoza y Dr. Daniel Ochoa Martinez (COLPOS).
DIAGNÓSTICO Análisis filogenético de las secuencias nucleotídicas con los oligos generales para Tobamovirus
ToBRFV IL ToBRFV Jo ToBRFV M6 ToBRFV M5 ToBRFV M1
ToBRFV
ToBRFV M2
100
ToBRFV M4 ToBRFV M7
88
ToBRFV M3 TMV variant 1
100
55
TMV
TMV Ohio V ToMMV NY-13 100 100
61
ToMMV 10-100
ToMMV
ToMMV MX5 ToMMV CA16-01
100 91
ToMV TMV-AH4 ToMV 1-2
ToMV
ToMV Queensland PMMoV Pepper mild mottle virus TMGMV Jap Tobacco mild green mosaic virus
En un inicio se realizaron con los reportados por Luria et al., 2017.
Diseño de los oligonucleótidos específicos para ToBRFV
Selección de la región
Oligonucleótidos específicos
RT-PCR
Análisis filogenético de las secuencias nucleotídicas con los oligonucleótidos específicos para ToBRFV 1.1e-TOBRVFV-F 1.1e-TOBRVFV-R 1.1A-TOBRVFV-F 1.1A-TOBRVFV-F 2.1e-TOBRVFV-F 2.1e-TOBRVFV-R 2.1E-TOBRVFV-F 2.1E-TOBRVFV-RM 3.1e-TOBRVFV-F 3.1e-TOBRVFV-R 3.5B-TOBRVFV-F 3.5B-TOBRVFV-R 4.1e-TOBRVFV-F 4.1e-TOBRVFV-R 4.4B-TOBRVFV-F 4.4B-TOBRVFV-R 5.2e-TOBRVFV-F 5.2e-TOBRVFV-R 100
ToBRVFV
5.4A-TOBRVFV-F 5.4A-TOBRVFV-R 6.2A-TOBRVFV-F 6.2A-TOBRVFV-R 6.2e-TOBRVFV-F 6.2e-TOBRVFV-R 7.4B-TOBRVFV-F 7.4B-TOBRVFV-R 7.4e-TOBRVFV-F 7.4e-TOBRVFV-R 8.2a-TOBRVFV-F 8.2a-TOBRVFV-R 8.2A-TOBRVFV-F 8.2A-TOBRVFV-RM CCC-TOBRVFV-F CCC-TOBRVFV-R KX619418.1 Tomato brown rugose fruit virus isolate TBRFV-IL KT383474.1 Tomato brown rugose fruit virus isolate Tom1-Jo X02144.1 Tomato mosaic virus strain OM
AF332868.1 Tomato mosaic virus isolate Queensland 74 MF002490.1 Tomato mosaic virus strain JX
KY967227.1 Tomato mosaic virus isolate YT 96
DQ873692.1 Tomato mosaic virus strain ToMV1-2
ToMV
AB355139.1 Tomato mosaic virus strain L11Y KY949480.1 Tomato mosaic virus isolate Neimenggu 78
AB083196.1 Tomato mosaic virus strain L11A-Fukushima
99
KP202857.1 Tomato mottle mosaic virus isolate 10-100 KR824951.1 Tomato mottle mosaic virus isolate TiLhaLJ 100
MH128145.1 Tomato mottle mosaic virus isolate CpB1 KX898034.1 Tomato mottle mosaic virus isolate CA16-01 KX898033.1 Tomato mottle mosaic virus isolate SC13-05
ToMMV
KT810183.1 Tomato mottle mosaic virus isolate NY-13 KR824950.1 Tomato mottle mosaic virus isolate YYMLJ KF477193.1 Tomato mottle mosaic virus isolate MX5 KY810785.1 Tobacco mosaic virus strain FERA 111011 92
JX993906.1 Tobacco mosaic virus isolate SXFQ AB369276.1 Tobacco mosaic virus strain IM HE818416.1 Tobacco mosaic virus isolate Fumeng
TMV
V01409.1 Tobacco mosaic virus (variant 2) V01408.1 Tobacco mosaic virus (variant 1) HE818443.1 Tobacco mosaic virus isolate Jimo KX063611.1 Pepper mild mottle virus isolate pMG AB078435.1 Tobacco mild green mosaic virus strain Japanese
DETECCIONES 14 agosto
17 agosto
TANHUATO Y YURÉCUARO, MICH 7 muestras
1 muestra
HOSPEDERO JITOMATE FASE FENOLÓGICA FRUCTIFICACIÓN
HOSPEDERO CHILE FASE FENOLÓGICA DESARROLLO
VEGETATIVO
TALA, JALISCO 1 muestra
HOSPEDERO JITOMATE FASE FENOLÓGICA
DESARROLLO VEGETATIVO
23 agosto AQUIXTLA, PUEBLA 1 muestra HOSPEDERO
JITOMATE FASE FENOLÓGICA
FLORACIÓN
18 septiembre
30 agosto
SAN MIGUEL DE ALLENDE Y ACÁMBARO, GTO 7 muestras
SAN MIGUEL DE ALLENDE, GTO 1 muestra
HOSPEDERO PIMIENTO y MALEZA FASE FENOLÓGICA FRUCTIFICACIÓN
HOSPEDERO PIMIENTO FASE FENOLÓGICA FRUCTIFICACIÓN
Se notifica a la NAPPO en septiembre de 2018
PROGRAMA EMERGENTE DE MUESTREO A PARTIR DEL
EXPLORACIÓN DE ÁREAS DE PRODUCCIÓN
25 DE SEPTIEMBRE
01-05 DE OCTUBRE
TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS
CHIH, COAH, NL, DUR, TAMPS, NAY, SLP y MICH
SIN, ZAC, BC, BCS y SON
08-12 DE OCTUBRE
15-19 DE OCTUBRE
TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS
TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS
TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS
JAL, EDOMEX, GTO, COL, AGS, QRO, HGO y MOR
22-26 DE OCTUBRE
PUE, CHIS, OAX y YUC OCTUBRE Y NOVIEMBRE
NOTIFICACIÓN DE RESULTADOS
PVEF
A PARTIR DE LA PRIMERA SEMANA DE NOVIEMBRE
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
SUBDIRECCIÓN DE DIAGNÓSTICO FITOSANITARIO
Mecánica para toma y envío de muestras
1
Identificación material vegetal sospechoso
2
5
Smart poner del SIRVEF
Registro en la aplicación móvil (SIRVEF) www.sirvef.gob.mx
3
Toma de la muestra (Técnico VEF- CESV)
4
Acondicionamiento de la muestra (Técnico VEF- CESV) Llenado de formato de solicitud en la pagina SIRVEF http://sinavef.senasica.gob.mx/sistemamuestras/ ENVIAR
6
Envío de muestras al laboratorio
CRONOLOGÍA DE DETECCIONES DE ToBRFV EN 2018
RESULTADOS DE DIAGNÓSTICO A ToBRFV EN 2018 ➢ Muestras nacionales de tomate (Solanum lycopersicum ), chile (Capsicum spp.) y berenjena (Solanum melongena).
•
Hasta el 12 de febrero de 2019, se han detectado 117 positivos en 20 estados.
RESULTADOS DE DIAGNÓSTICO A ToBRFV EN 2018 ➢ Muestras de semillas de importación de tomate (Solanum lycopersicum) y chile (Capsicum spp.) – Se analizaron 165 muestras de semillas de importación en 2018, de diversas combinaciones, origen : procedencia. – Del total de las muestras, 60 resultaron positivas. – Muestras (de origen) de 15 países distintos: España, Perú, Holanda, Francia, Vietnam, Israel, EE.UU., India, Kenya, Guatemala, Tailandia, China y Marruecos, resultaron positivas al ToBRFV. – Con relación a los países de procedencia: Francia, EE.UU., y Holanda, resultaron con positivos. Las muestras de Holanda presentaron la frecuencia más alta de positivos en las combinaciones de origen : procedencia.
Distribución geográfica mundial
• De acuerdo a EPPO: ToBRFV esta presente en Israel, Jordania, Alemania, Italia, Palestina y México. https://gd.eppo.int/taxon/TOBRFV/distribution
Reportes de ToBRFV
https://gd.eppo.int/taxon/TOBRFV/reporting
Reportes de ToBRFV
https://gd.eppo.int/taxon/TOBRFV/reporting
Acciones realizadas por el SENASICA
1
Desarrollo y estandarización del Protocolo de diagnóstico específico para ToBRFV.
2
Eventos de capacitación
3
Visita y monitoreo a unidades de producción
4
Programa emergente de vigilancia fitosanitaria a nivel nacional
5
Transferencia del protocolo de diagnóstico especifico para ToBRFV
6
Seminario de capacitación
7
Acciones Regulatorias
Acciones de divulgación y capacitación realizadas por el SENASICA
1
Desarrollo y estandarización del Protocolo de diagnóstico específico para ToBRFV.
2
Eventos de capacitación
3
Estado
Fecha
Michoacán
14 de agosto de 2018. 4 de octubre de 2018
Guanajuato
14 de septiembre de 2018 19 de octubre de 2018
Visita y monitoreo a unidades de producción Estado
Fecha
Michoacán
13-14 de agosto de 2018.
Guanajuato
15 de agosto de 2018 15 de septiembre de 2018
4
Programa emergente de vigilancia fitosanitaria a nivel nacional A PARTIR DEL
EXPLORACIÓN DE ÁREAS DE PRODUCCIÓN
25 DE SEPTIEMBRE
01-05 DE OCTUBRE
TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS
SIN, ZAC, BC, BCS y SON
08-12 DE OCTUBRE
15-19 DE OCTUBRE
TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS
TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS
JAL, EDOMEX, GTO, COL, AGS, QRO, HGO y MOR
22-26 DE OCTUBRE
PUE, CHIS, OAX y YUC OCTUBRE Y NOVIEMBRE
NOTIFICACIÓN DE RESULTADOS
PVEF
A PARTIR DE LA PRIMERA SEMANA DE NOVIEMBRE
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
SUBDIRECCIÓN DE DIAGNÓSTICO FITOSANITARIO
5
Transferencia del protocolo de diagnóstico especifico para ToBRFV • A laboratorios aprobados
Laboratorio
Dirección
CESAVEG Irapuato, Guanajuato Texcoco, Estado de México LADIFIT Monterrey, Nuevo León BIOCIENCIA Los Mochis, Sinaloa JLSVVF GISENA-Texcoco Texcoco, Estado de México Nuevo Laredo, Tamaulipas SIDIAGEN
Transferencia 27-28/09/2018
29-30/10/2018
• Asociación Mexicana de Semilleros A. C. (AMSAC), solicitó la transferencia, en la que participaron representantes de Vilmorin, BASF, Bayer, Syngenta, Gowan, Agroasemex, Harris Moran, Rijk Zwaan, Enza Zaden y Keithly Williams, impartida 27 y 28 de noviembre de 2018.
6
Seminario de capacitación Seminario de virus del género “Tobamovirus con énfasis en el Tomato brown rugose Ffuit virus (ToBRFV)”., realizado los días 5 y 6 de diciembre de 2018.
✓ 164 asistentes ✓ 32 Comités Estatales de Sanidad Vegetal. ✓ Instituciones de Investigación ❖ Centro de Investigación y de Estudios Avanzados del Instituto Politécnico Nacional Unidad Irapuato (CINVESTAV-Irapuato) ❖ Centro de Investigación Científica de Yucatán (CICY) ❖ Colegio de Postgraduados (CP) ❖ Universidad autónoma Chapingo (UACh) ❖ Universidad Autónoma de Sinaloa (UAS) ❖ Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A.C. (CIAD). ✓ Empresas semilleras parte de AMSAC: Vilmorin, BASF, Bayer, Syngenta, Gowan, Agrosemex, Tlaloc seguros, Harris Moran, Rijk Zwaan, Enza Zaden y Keithly Williams.
7
Acciones Regulatorias
MEDIDAS FITOSANITARIAS
Prevención Verificar mediante el diagnóstico fitosanitario que la semilla de tomate se encuentre libre de virus. Al realizar las podas utilizar guantes de nitrilo o látex, así como portar dos tijeras y alternarlas para permitir el tiempo de la desinfección adecuada. Evitar el contacto con las plantas y desinfestar herramienta de trabajo.
Es recomendable designar material o herramienta de trabajo, así como personal que labore exclusivamente a áreas con presencia del virus. Las áreas de producción de plántula, así como el invernadero de producción, tanto dentro y afuera, deberán mantenerse limpias; así también las líneas de goteo o estacas de goteo deberán ser desinfestadas.
Restringir el ingreso de personal no autorizado a áreas con detecciones positivas. Al detectar una planta enferma, arrancarla, así como las que se encuentran alrededor; depositar la planta completa en una bolsa de plástico gruesa y llevarla a un lugar destinado para la quema. Intensificar el muestreo y diagnóstico del Tomato brown rugose fruit virus para detectar oportunamente nuevos brotes de la plaga y aplicar las medidas fitosanitarias necesarias.
Buenas Prácticas Mantener una estación de lavado y desinfección de manos, donde el personal deberá lavarse las manos antes de ingresar al invernadero y al retirarse.
El uso de soluciones a base de fosfato trisódico (10 %), hipoclorito de sodio (1-3 %) e hipoclorito de calcio (1-5 %) en tapetes fitosanitarios de desinfección, colocados en la entrada de los invernaderos. Desechar los guantes usados en las actividades en un cesto provisto especialmente para este propósito; posteriormente serán incinerados. Utilizar overol, que deberán portarlo al entrar y dejarlo al salir del invernadero para posteriormente lavar y desinfestar. Eliminar los residuos de podas y las malezas dentro del invernadero y/o alrededor del cultivo para evitar los reservorios de inóculo.
Profilรกcticas Si se reutilizan charolas para la producciรณn de plรกntula, deben ser desinfectadas previo a la siembra.
Se recomienda el uso de desinfectantes.
Eliminar las charolas contenedoras de plรกntulas infectadas con el virus.
Productos generados del trabajo de investigaciรณn del ToBRFV
GRACIAS Direcciรณn General de Sanidad Vegetal Direcciรณn del Centro Nacional de Referencia Fitosanitaria