Antecedentes e identificacion Tomato Brown Rugose Fruit Virus ToBRFV

Tomato brown rugose fruit virus (ToBRFV): caso México

ESPACIO PARA IMAGEN

Créditos: CNRF-DGSV, 2018

8 de marzo de 2019

INTRODUCCIÓN

Tobamovirus • • • • •

Tobacco mild green mosaic virus (TMGMV) Tobacco mosaic virus (TMV) Tomato brown rugose fruit virus (ToBRFV) Tomato mosaic virus (ToMV) Tomato mottle mosaic virus (ToMMV)

Alishir et al., 2011.

New Disease Reports (2011) 23, 30.

Scholthof, 2000. www.apsnet.org

Chin y Miller, 2019. http://u.osu.edu

DISTRIBUCIÓN • ToMV, TMV, TMGMV: ampliamente distribuidos • ToMMV: Brasil, China, Irán, México, USA Alishir et al., 2016.

New Disease Reports (2016) 33, 1.

Síntomas en planta por Tobamovirus

TMV: Moteado Breman, 1989. Plant Pathology Circular No. 322

Moteado clorótico

Distorsión

Abultamiento

ToBRFV, maduración desigual

TMV Lesiones necróticas Tsyplenkov A.E, 2009. http://www.agroatlas.ru

Dispersión Mecánicamente •

Contacto entre plantas

•

Manejo del cultivo: manos de los trabajadores, ropa, herramientas, estructura de invernadero e hilos usados para el

tutoreo; máquinas de trabajo; por medio del agua circulante en el caso de cultivos bajo hidroponía.

Principalmente Se

transmite

a

largas

distancias mediante semilla.

SITUACIÓN ACTUAL DE ToBRFV en México

ALERTA FITOSANITARIA • En agosto de 2018, se recibe una noticia, que indica la presencia de un nuevo virus en México.

Pagina Web de España Sin sustento científico

Tomato brown rugose fruit virus • Identidad Reino: Virus Orden: No asignado Familia: Virgaviridae

Género: Tobamovirus Especie: Tomato brown rugose fruit virus (ToBRFV)

• Estructura Presenta partículas en forma de varilla de 300 nm de largo, que encapsula un genoma de ARN monocatenario de sentido positivo.

Estudios realizados por Luria et al. (2017) señalaron que todas las variedades de tomate que poseen el gen de resistencia Tm-22 son susceptibles al Tobamovirus ToBRFV.

ORIGEN:

Tomato brown rugose fruit virus (ToBRFV) Virus del fruto rugoso café del tomate

2014. Primera detección de ToBRFV en invernaderos de cultivo de tomate de la variedad Mose e Ikram al sur de Israel. De las plantas con síntomas, del 10 a 15 % del

Israel

Jordania

total de la fruta presentaba síntomas de manchas amarillas. Variedades resistentes a ToMV como Shiran, Diagrama-F1, 870, Whitney, Antolena, Magnolia, también presentaban síntomas (Luria et al., 2017).

2015. En Jordania se reportó por primera vez al virus ToBRFV en invernaderos de jitomate, Solanum lycopersicum cv. Candela, observándose incidencias de la enfermedad cercanas al 100% (Salem et al., 2015).

HOSPEDANTES ToBRFV infecta naturalmente al cultivo de tomate (Solanum lycopersicum).

En otras solanáceas inoculadas de manera

experimental con el virus, se observaron los siguientes síntomas:

Hospedantes

Síntomas

Capsicum annum

RH, amarillamiento de hojas, caída de hojas

Solanum nigrum

Asintomática

Chenopodium murale

Reacción de hipersensibilidad

Petunia hybrida

Asintomática

Nicotiana benthamiana

Lesiones locales necróticas

N. glutinosa

Lesiones locales necróticas

N. sylvestris

Lesiones locales necróticas

Luria et al. 2017

DIAGRAMA DE VÍNCULOS COMERCIALES

ISRAEL 2014-2016 EXPORTÓ

jitomate y chile (fruto o semilla) A 30 PAÍSES

INCLUYENDO MÉXICO DESTACA EL INTERCAMBIO COMERCIAL

HOLANDA

EXPORTÓ A MÁS DE

20

ISRAEL

92

EXPORTAN SEMILLAS A MÉXICO

La omisión de un reporte inicial sobre la presencia de ToBRFV por parte de las autoridades fitosanitarias de Israel, posiblemente contribuyó a la diseminación del virus a otras regiones del mundo.

PAÍSES DE LOS CUALES

CNRF REALIZÓ 43 DIAGNÓSTICOS DE SEMILLA DE TOMATE Y CHILE DE DISTINTOS ORÍGENES Y PROCEDENCIAS

POSITIVOS A ToBRFV

Derivado de lo anterior, se genera material de referencia en torno al ToBRFV:

ACCIONES

• Reunión informativa y Programa emergente de muestreo • Ficha técnica (aspectos de biología y estrategias de manejo) • Guía de síntomas

SÍNTOMAS Principalmente presentan mosaico ligero a severo de las hojas, con una ocasional apariencia estrecha de las mismas. Los frutos presentan síntomas marcados de rugosidad y coloración marrón, dependiendo de la susceptibilidad de la variedad al virus; así como, manchas de color amarillo en los frutos. También, puede presentar síntomas de necrosis en el cáliz, peciolos y pedicelos.

Figura 1. Plantas de tomate (Solanum lycopersicum) infectadas con ToBRFV. A-D) Síntomas en frutos. B y C) Manchas amarillas en frutos. A, E-G) Patrón de síntomas de mosaico, estrechamiento, acompañado de un moteado en hojas. G) Necrosis en el pedicelo, cálices y pecíolo. Créditos: Dombrovsky y Smith, 2017.

Síntomas en hojas de tomate

Manchas necróticas

Puntos cloróticos

Positivos a ToBRFV; asociado con TMV

Moteado Moteado

SĂ­ntomas en hojas de tomate Mosaico y moteados

Positivo a ToBRFV; y asociado con TMV

Mosaicos

Positivos a ToBRFV; asociado con TMV y PepMV

Positivo a ToBRFV

Mosaico

Mosaicos

SĂ­ntomas en hojas de tomate Amarillamiento intervenal Positivo a ToBRFV; asociado con TMV y PepMV Amarillamieno intervenal

Positivo a ToBRFV; asociado con TMV

Amarillamiento intervenal

Amarillamiento

SĂ­ntomas en hojas de tomate

Positivo a ToBRFV; asociado con TMV

Mosaico

Positivo a ToBRFV; asociado con TMV

Marchitez

Amarillamiento en brotes

Positivo a ToBRFV; asociado con TMV y PepMV

Amarillamiento y deformaciĂłn de nervaduras

Mosaicos y amarillamiento intervenal en hojas de tomate infectadas con ToBRFV

Mosaicos y amarillamiento intervenal en hojas de tomate infectadas con ToBRFV

Estriado color verde

Síntomas en fruto Positivo a ToBRFV; asociado con TMV

Manchas color verde oscuro

Positivo a ToBRFV; asociado con TMV y PepMV

Manchas color Maduración irregular

marrón

Positivo a ToBRFV; asociado con TMV y PepMV

Positivo a ToBRFV; asociado con TMV

SĂ­ntomas de estriado color verde en frutos de tomate infectados con ToBRFV

SĂ­ntomas de manchas color marrĂłn en frutos de tomate positivos a ToBRFV

Síntomas de rugosidad marrón y maduración irregular en frutos de tomate infectados con ToBRFV

Maduración irregular

Rugosidad marrón

SĂ­ntomas de necrosis de cĂĄliz en plantas infectadas con ToBRFV

Síntomas en hojas de chile

Deformación de nervaduras y amarillamiento

Positivo a ToBRFV; asociado con TMV

Diminutos puntos cloróticos en hojas Positivo a ToBRFV; asociado con TMV

Síntomas de mosaicos y deformación de hojas de chile infectados con ToBRFV

Deformación de hojas

SĂ­ntomas de manchas amarillas y rayado de frutos de chile infectados con ToBRFV

Síntomas de maduración irregular y manchas color marrón en frutos de chile infectados con ToBRFV

Síntomas de maduración irregular y manchas color marrón en frutos de chile infectados con ToBRFV

Manchas color marrón y maduración irregular

Manchas color marrón

Maduración irregular

Síntomas de coloración marrón en frutos de chile infectados con ToBRFV

Síntomas de coloración marrón en frutos de chile infectados con ToBRFV

Comparación de micrografías de las partículas virales

Micrografía de las partículas virales de ToBRFV por Luria et al. 2017

Micrografía de partículas virales de una de las muestras tomadas en Michoacán. Créditos: Muestras procesadas en el CNRF y fotografías tomadas en la Facultad de Ciencias Biológicas por la Dra. Rosario Espinoza y Dr. Daniel Ochoa Martinez (COLPOS).

DIAGNÓSTICO Análisis filogenético de las secuencias nucleotídicas con los oligos generales para Tobamovirus

ToBRFV IL ToBRFV Jo ToBRFV M6 ToBRFV M5 ToBRFV M1

ToBRFV

ToBRFV M2

100

ToBRFV M4 ToBRFV M7

88

ToBRFV M3 TMV variant 1

100

55

TMV

TMV Ohio V ToMMV NY-13 100 100

61

ToMMV 10-100

ToMMV

ToMMV MX5 ToMMV CA16-01

100 91

ToMV TMV-AH4 ToMV 1-2

ToMV

ToMV Queensland PMMoV Pepper mild mottle virus TMGMV Jap Tobacco mild green mosaic virus

En un inicio se realizaron con los reportados por Luria et al., 2017.

Diseño de los oligonucleótidos específicos para ToBRFV

Selección de la región

Oligonucleótidos específicos

RT-PCR

Análisis filogenético de las secuencias nucleotídicas con los oligonucleótidos específicos para ToBRFV 1.1e-TOBRVFV-F 1.1e-TOBRVFV-R 1.1A-TOBRVFV-F 1.1A-TOBRVFV-F 2.1e-TOBRVFV-F 2.1e-TOBRVFV-R 2.1E-TOBRVFV-F 2.1E-TOBRVFV-RM 3.1e-TOBRVFV-F 3.1e-TOBRVFV-R 3.5B-TOBRVFV-F 3.5B-TOBRVFV-R 4.1e-TOBRVFV-F 4.1e-TOBRVFV-R 4.4B-TOBRVFV-F 4.4B-TOBRVFV-R 5.2e-TOBRVFV-F 5.2e-TOBRVFV-R 100

ToBRVFV

5.4A-TOBRVFV-F 5.4A-TOBRVFV-R 6.2A-TOBRVFV-F 6.2A-TOBRVFV-R 6.2e-TOBRVFV-F 6.2e-TOBRVFV-R 7.4B-TOBRVFV-F 7.4B-TOBRVFV-R 7.4e-TOBRVFV-F 7.4e-TOBRVFV-R 8.2a-TOBRVFV-F 8.2a-TOBRVFV-R 8.2A-TOBRVFV-F 8.2A-TOBRVFV-RM CCC-TOBRVFV-F CCC-TOBRVFV-R KX619418.1 Tomato brown rugose fruit virus isolate TBRFV-IL KT383474.1 Tomato brown rugose fruit virus isolate Tom1-Jo X02144.1 Tomato mosaic virus strain OM

AF332868.1 Tomato mosaic virus isolate Queensland 74 MF002490.1 Tomato mosaic virus strain JX

KY967227.1 Tomato mosaic virus isolate YT 96

DQ873692.1 Tomato mosaic virus strain ToMV1-2

ToMV

AB355139.1 Tomato mosaic virus strain L11Y KY949480.1 Tomato mosaic virus isolate Neimenggu 78

AB083196.1 Tomato mosaic virus strain L11A-Fukushima

99

KP202857.1 Tomato mottle mosaic virus isolate 10-100 KR824951.1 Tomato mottle mosaic virus isolate TiLhaLJ 100

MH128145.1 Tomato mottle mosaic virus isolate CpB1 KX898034.1 Tomato mottle mosaic virus isolate CA16-01 KX898033.1 Tomato mottle mosaic virus isolate SC13-05

ToMMV

KT810183.1 Tomato mottle mosaic virus isolate NY-13 KR824950.1 Tomato mottle mosaic virus isolate YYMLJ KF477193.1 Tomato mottle mosaic virus isolate MX5 KY810785.1 Tobacco mosaic virus strain FERA 111011 92

JX993906.1 Tobacco mosaic virus isolate SXFQ AB369276.1 Tobacco mosaic virus strain IM HE818416.1 Tobacco mosaic virus isolate Fumeng

TMV

V01409.1 Tobacco mosaic virus (variant 2) V01408.1 Tobacco mosaic virus (variant 1) HE818443.1 Tobacco mosaic virus isolate Jimo KX063611.1 Pepper mild mottle virus isolate pMG AB078435.1 Tobacco mild green mosaic virus strain Japanese

DETECCIONES 14 agosto

17 agosto

TANHUATO Y YURÉCUARO, MICH 7 muestras

1 muestra

HOSPEDERO JITOMATE FASE FENOLÓGICA FRUCTIFICACIÓN

HOSPEDERO CHILE FASE FENOLÓGICA DESARROLLO

VEGETATIVO

TALA, JALISCO 1 muestra

HOSPEDERO JITOMATE FASE FENOLÓGICA

DESARROLLO VEGETATIVO

23 agosto AQUIXTLA, PUEBLA 1 muestra HOSPEDERO

JITOMATE FASE FENOLÓGICA

FLORACIÓN

18 septiembre

30 agosto

SAN MIGUEL DE ALLENDE Y ACÁMBARO, GTO 7 muestras

SAN MIGUEL DE ALLENDE, GTO 1 muestra

HOSPEDERO PIMIENTO y MALEZA FASE FENOLÓGICA FRUCTIFICACIÓN

HOSPEDERO PIMIENTO FASE FENOLÓGICA FRUCTIFICACIÓN

Se notifica a la NAPPO en septiembre de 2018

PROGRAMA EMERGENTE DE MUESTREO A PARTIR DEL

EXPLORACIÓN DE ÁREAS DE PRODUCCIÓN

25 DE SEPTIEMBRE

01-05 DE OCTUBRE

TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS

CHIH, COAH, NL, DUR, TAMPS, NAY, SLP y MICH

SIN, ZAC, BC, BCS y SON

08-12 DE OCTUBRE

15-19 DE OCTUBRE

TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS

TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS

TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS

JAL, EDOMEX, GTO, COL, AGS, QRO, HGO y MOR

22-26 DE OCTUBRE

PUE, CHIS, OAX y YUC OCTUBRE Y NOVIEMBRE

NOTIFICACIÓN DE RESULTADOS

PVEF

A PARTIR DE LA PRIMERA SEMANA DE NOVIEMBRE

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

SUBDIRECCIÓN DE DIAGNÓSTICO FITOSANITARIO

Mecánica para toma y envío de muestras

1

Identificación material vegetal sospechoso

2

5

Smart poner del SIRVEF

Registro en la aplicación móvil (SIRVEF) www.sirvef.gob.mx

3

Toma de la muestra (Técnico VEF- CESV)

4

Acondicionamiento de la muestra (Técnico VEF- CESV) Llenado de formato de solicitud en la pagina SIRVEF http://sinavef.senasica.gob.mx/sistemamuestras/ ENVIAR

6

Envío de muestras al laboratorio

CRONOLOGÍA DE DETECCIONES DE ToBRFV EN 2018

RESULTADOS DE DIAGNÓSTICO A ToBRFV EN 2018 ➢ Muestras nacionales de tomate (Solanum lycopersicum ), chile (Capsicum spp.) y berenjena (Solanum melongena).

•

Hasta el 12 de febrero de 2019, se han detectado 117 positivos en 20 estados.

RESULTADOS DE DIAGNÓSTICO A ToBRFV EN 2018 ➢ Muestras de semillas de importación de tomate (Solanum lycopersicum) y chile (Capsicum spp.)

– Se analizaron 165 muestras de semillas de importación en 2018, de diversas combinaciones, origen : procedencia.

– Del total de las muestras, 60 resultaron positivas.

– Muestras (de origen) de 15 países distintos: España, Perú, Holanda, Francia, Vietnam, Israel, EE.UU., India, Kenya, Guatemala, Tailandia, China y Marruecos, resultaron positivas al ToBRFV. – Con relación a los países de procedencia: Francia, EE.UU., y Holanda, resultaron con positivos.

Las muestras de Holanda presentaron la frecuencia más alta de positivos en las combinaciones de origen : procedencia.

Distribución geográfica mundial

• De acuerdo a EPPO: ToBRFV esta presente en Israel, Jordania, Alemania, Italia, Palestina y México. https://gd.eppo.int/taxon/TOBRFV/distribution

Reportes de ToBRFV

https://gd.eppo.int/taxon/TOBRFV/reporting

Reportes de ToBRFV

https://gd.eppo.int/taxon/TOBRFV/reporting

Acciones realizadas por el SENASICA

1

Desarrollo y estandarización del Protocolo de diagnóstico específico para ToBRFV.

2

Eventos de capacitación

3

Visita y monitoreo a unidades de producción

4

Programa emergente de vigilancia fitosanitaria a nivel nacional

5

Transferencia del protocolo de diagnóstico especifico para ToBRFV

6

Seminario de capacitación

7

Acciones Regulatorias

Acciones de divulgación y capacitación realizadas por el SENASICA

1

Desarrollo y estandarización del Protocolo de diagnóstico específico para ToBRFV.

2

Eventos de capacitación

3

Estado

Fecha

Michoacán

14 de agosto de 2018.

4 de octubre de 2018

Guanajuato

14 de septiembre de 2018 19 de octubre de 2018

Visita y monitoreo a unidades de producción Estado

Fecha

Michoacán

13-14 de agosto de 2018.

Guanajuato

15 de agosto de 2018 15 de septiembre de 2018

4

Programa emergente de vigilancia fitosanitaria a nivel nacional A PARTIR DEL

EXPLORACIÓN DE ÁREAS DE PRODUCCIÓN

25 DE SEPTIEMBRE

01-05 DE OCTUBRE

TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS

SIN, ZAC, BC, BCS y SON

08-12 DE OCTUBRE

15-19 DE OCTUBRE

TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS

TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS

JAL, EDOMEX, GTO, COL, AGS, QRO, HGO y MOR

22-26 DE OCTUBRE

PUE, CHIS, OAX y YUC OCTUBRE Y NOVIEMBRE

NOTIFICACIÓN DE RESULTADOS

PVEF

A PARTIR DE LA PRIMERA SEMANA DE NOVIEMBRE

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

SUBDIRECCIÓN DE DIAGNÓSTICO FITOSANITARIO

5

Transferencia del protocolo de diagnóstico especifico para ToBRFV • A laboratorios aprobados

Laboratorio

Dirección

CESAVEG Irapuato, Guanajuato Texcoco, Estado de México LADIFIT Monterrey, Nuevo León BIOCIENCIA Los Mochis, Sinaloa JLSVVF GISENA-Texcoco Texcoco, Estado de México Nuevo Laredo, Tamaulipas SIDIAGEN

Transferencia 27-28/09/2018

29-30/10/2018

• Asociación Mexicana de Semilleros A. C. (AMSAC), solicitó la transferencia, en la que participaron representantes de Vilmorin, BASF, Bayer, Syngenta, Gowan, Agroasemex, Harris Moran, Rijk Zwaan, Enza Zaden y Keithly Williams, impartida 27 y 28 de noviembre de 2018.

6

Seminario de capacitación Seminario de virus del género “Tobamovirus con énfasis en el Tomato brown rugose Ffuit virus (ToBRFV)”., realizado los días 5 y 6 de diciembre de 2018.

✓ 164 asistentes ✓ 32 Comités Estatales de Sanidad Vegetal. ✓ Instituciones de Investigación ❖ Centro de Investigación y de Estudios Avanzados del Instituto Politécnico Nacional Unidad Irapuato (CINVESTAV-Irapuato) ❖ Centro de Investigación Científica de Yucatán (CICY) ❖ Colegio de Postgraduados (CP) ❖ Universidad autónoma Chapingo (UACh) ❖ Universidad Autónoma de Sinaloa (UAS) ❖ Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A.C. (CIAD). ✓ Empresas semilleras parte de AMSAC: Vilmorin, BASF, Bayer, Syngenta, Gowan, Agrosemex, Tlaloc seguros, Harris Moran, Rijk Zwaan, Enza Zaden y Keithly Williams.

7

Acciones Regulatorias

MEDIDAS FITOSANITARIAS

Prevención Verificar mediante el diagnóstico fitosanitario que la semilla de tomate se encuentre libre de virus.

Al realizar las podas utilizar guantes de nitrilo o látex, así como portar dos tijeras y alternarlas para permitir el tiempo de la desinfección adecuada.

Evitar el contacto con las plantas y desinfestar herramienta de trabajo.

Es recomendable designar material o herramienta de trabajo, así como personal que labore exclusivamente a áreas con presencia del virus.

Las áreas de producción de plántula, así como el invernadero de producción, tanto dentro y afuera, deberán mantenerse limpias; así también las líneas de goteo o estacas de goteo deberán ser desinfestadas.

Restringir el ingreso de personal no autorizado a áreas con detecciones positivas.

Al detectar una planta enferma, arrancarla, así como las que se encuentran alrededor; depositar la planta completa en una bolsa de plástico gruesa y llevarla a un lugar destinado para la quema.

Intensificar el muestreo y diagnóstico del Tomato brown rugose fruit virus para detectar oportunamente nuevos brotes de la plaga y aplicar las medidas fitosanitarias necesarias.

Buenas Prácticas Mantener una estación de lavado y desinfección de manos, donde el personal deberá lavarse las manos antes de ingresar al invernadero y al retirarse.

El uso de soluciones a base de fosfato trisódico (10 %), hipoclorito de sodio (1-3 %) e hipoclorito de calcio (1-5 %) en tapetes fitosanitarios de desinfección, colocados en la entrada de los invernaderos.

Desechar los guantes usados en las actividades en un cesto provisto especialmente para este propósito; posteriormente serán incinerados.

Utilizar overol, que deberán portarlo al entrar y dejarlo al salir del invernadero para posteriormente lavar y desinfestar.

Eliminar los residuos de podas y las malezas dentro del invernadero y/o alrededor del cultivo para evitar los reservorios de inóculo.

Profilรกcticas Si se reutilizan charolas para la producciรณn de plรกntula, deben ser desinfectadas previo a la siembra.

Se recomienda el uso de desinfectantes.

Eliminar las charolas contenedoras de plรกntulas infectadas con el virus.

Productos generados del trabajo de investigaciรณn del ToBRFV

GRACIAS Direcciรณn General de Sanidad Vegetal Direcciรณn del Centro Nacional de Referencia Fitosanitaria