NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP FLAVONOID TỪ KHỔ SÂM BẮC (2018) by Dạy Kèm Quy Nhơn Official

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

BỘ Y TẾ

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ ĐẠI HỌC

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

10 00

NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP MỘT FLAVONOID TỪ KHỔ SÂM BẮC (Sophora flavescens Ait.)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

NGUYỄN HỮU MINH QUÂN

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2018

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

BỘ Y TẾ

Giảng viên hƣớng dẫn: PGS.TS. Trần Anh Vũ DS. Phan Nguyễn Trƣờng Thắng

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ ĐẠI HỌC

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

-H

10 00

TR ẦN

NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP MỘT FLAVONOID TỪ KHỔ SÂM BẮC (Sophora flavescens Ait.)

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

NGUYỄN HỮU MINH QUÂN

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2018

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

XÁC NHẬN CỦA GIẢNG VIÊN HƢỚNG DẪN

Nội dung

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

TÓM TẮT Khóa luận tốt nghiệp dƣợc sĩ đại học – Năm học 2017-2018

H N

NGUYỄN HỮU MINH QUÂN Giảng viên hƣớng dẫn: PGS.TS. Trần Anh Vũ DS. Phan Nguyễn Trƣờng Thắng

NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP MỘT FLAVONOID TỪ KHỔ SÂM BẮC (Sophora flavescens Ait.)

IỄ N

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

ÀN

ÁN

-L

-H

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Đặt vấn đề Khổ sâm bắc có 2 thành phần chủ yếu là alkaloid và flavonoid và từ lâu đƣợc sử dụng trong y học Trung Hoa để chữa nhiều bệnh, đồng thời dƣợc điển Hồng Kông 2012 có chuyên luận khổ sâm bắc dựa trên thành phần alkaloid của cây này. Tuy nhiên, các nghiên cứu gần đây cho thấy thành phần flavonoid trong cây khổ sâm bắc có nhiều tác dụng sinh học đáng chú ý và đƣợc nhiều nhà nghiên cứu đề nghị cần đánh giá thành phần flavonoid trong kiểm nghiệm dƣợc liệu này. Do đó, đề tài tiến hành phân lập flavonoid từ rễ khổ sâm bắc để có nguồn chất đối chiếu cho việc đánh giá. Đối tƣợng và phƣơng pháp nghiên cứu Đối tượng: Rễ khổ sâm bắc của Công ty cổ phần sản xuất chế biến nông lâm sản Dƣợc liệu sạch Đăk Nông, thu hái tháng 7/2017, đã đƣợc định danh bằng kỹ thuật DNA bởi nhóm nghiên cứu 2017. Phương pháp nghiên cứu: (1) Chiết xuất, phân lập và tinh chế 1 flavonoid từ rễ khổ sâm bắc. (2) Kiểm tra tinh khiết và xác định cấu trúc chất thu đƣợc bằng các phƣơng pháp phổ nghiệm. (3) Xác định hàm lƣợng chất phân lập bằng phƣơng pháp quy về phần trăm diện tích peak trên HPLC với quy trình đƣợc thẩm định. Kết quả (1) Từ 4,05 kg rễ khổ sâm bắc chiết đƣợc 903 g cao ethanol toàn phần. Từ 302 g cao ethanol toàn phần thu đƣợc 3,30 g cao phân đoạn. Từ cao phân đoạn này tinh chế thu đƣợc 316 mg SF1 và 91 mg SF2. (2) Xác định cấu trúc SF1 và SF2 bằng các phƣơng pháp phổ nghiệm lần lƣợt là isoxanthohumol và sophoraflavanone G. (3) Hàm lƣợng theo phƣơng pháp quy về phần trăm diện tích peak trên HPLC cùa isoxanthohumol và sophoraflavanone G phân lập lần lƣợt là 98,76% và 95,70% với quy trình đã đƣợc thẩm định đạt tƣơng thích hệ thống, đƣờng tuyến tính, độ đặc hiệu, độ lặp lại và độ chính xác trung gian. Kết luận Phân lập thành công 2 flavonoid với độ tinh khiết cao, xác định đƣợc cấu trúc và thu đƣợc lƣợng đáng kể để tiếp tục thiết lập chất đối chiếu phục vụ kiểm nghiệm thành phần flavonoid trong rễ khổ sâm bắc.

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

IỄ N

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

ÀN

ÁN

-L

-H

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Final essay for the degree of BS. Pharm. – Academy year: 2017-2018 STUDY ON ISOLATION OF A FLAVONOID CONSTITUENT FROM KUSHEN (Sophora flavescens Ait.) NGUYEN HUU MINH QUAN Supervisor: Assoc. Prof. Dr. Tran Anh Vu Ph. Phan Nguyen Truong Thang Introduction Sophora flavescens Ait. has two main constituents are alkaloids and flavonoids and has been used in oriental medicines in China for thousands years to treat various of diseases, and Hong Kong pharmacopeia 2012 has a monograph for Sophora flavescens in evaluating alkaloids constituents. However, it has been recently recorded by lots of scientists that the remarkably biological effects of flavonoids constituents and they has also suggested the requirement for assessing the quality of Sophora flavescens in flavonoids contents. According to this issue, we conduct a study on isolation of a flavonoid constituent from root of Sophora flavescens. Materials and methods Materials: Roots of Sophora flavescens was collected in Dak Nong in July, 2017. Methods: (1) Extract, isolate and pure one flavonoid from roots of Sophora flavescens. (2) Test for purity and identify structure of isolated substances. (3) Determine the content of isolated compounds by calculating percentage of peak area on High performance liquid chromatography method, the using method is validated. Results (1) 903 g ethanol extract from 4,05 kg Roots of Sophora flavescens was chromatographed to acquire 3,3 g IV fraction. This fraction continued to chormatograph and pure on HPLC preparation to acquire 316 mg SF1 and 91 mg SF2. (2) Identify structures of isolated compounds by NMR spectrum was carried out to define SF1 is isoxanthohumol and SF2 is sophoraflavanone G. (3) The content of isolated isoxanthohumol and sophoraflavanone G by calculating percentage of peak area on HPLC method were determined respectively as 98,76% and 95,70%. The using method was completely validated. Conclusion Isolate successfully 2 flavonoids compounds from roots of Sophora flavescens with high purity, determined structures and significant amounts to establish references standards for evaluating quality of flavonoid contents in roots of Sophora flavescens

ABSTRACT

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

MỤC LỤC ............................................................................................................. i

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT................................................................................. iii

MỤC LỤC

DANH MỤC BẢNG ................................................................................................. iv

DANH MỤC HÌNH & SƠ ĐỒ ................................................................................. vi

2.1.2.

Tổng quan về thành phần hóa học ......................................................3

2.1.3.

Tác dụng dƣợc lý.................................................................................6

2.1.4.

Công dụng và liều dùng ......................................................................8

H Ư

TR ẦN

Các phƣơng pháp chiết xuất phân lập.......................................................8

2.2.

Các phƣơng pháp chiết xuất ................................................................8

2.2.2.

Các phƣơng pháp phân lập, tinh chế ...................................................9

2.2.3.

Các phƣơng pháp đánh giá hợp chất phân lập đƣợc ...........................9

10 00

2.2.1.

CHƢƠNG 3. ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ......................13 Đối tƣợng nghiên cứu .............................................................................13

-H

3.1.

Nguyên liệu .......................................................................................13

-L

ÁN

3.1.2.

3.1.1.

3.1.3. 3.2.

Dụng cụ, trang thiết bị.......................................................................13 Phƣơng pháp nghiên cứu ........................................................................14

3.2.1.

Chiết xuất, phân lập và tinh chế flavonoid........................................14

3.2.2.

Kiểm tra độ tinh khiết và xác định cấu trúc chất phân lập ................16

ÀN Đ IỄ N

Hóa chất, dung môi ...........................................................................13

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Đ ẠO

Tổng quan về thực vật học ..................................................................2

2.1.1.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Tổng quan về cây khổ sâm bắc .................................................................2

2.1.

http://daykemquynhon.ucoz.com

CHƢƠNG 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU ...................................................................2

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

CHƢƠNG 1. ĐẶT VẤN ĐỀ.....................................................................................1

3.2.3. Xây dựng quy trình xác định hàm lƣợng chất phân lập bằng phƣơng pháp HPLC quy về phần trăm diện tích peak ...........................................................17 3.2.4.

Sơ bộ xác định hàm lƣợng chất phân lập trong dƣợc liệu rễ khổ sâm .. ...........................................................................................................19 i

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

CHƢƠNG 4. KẾT QUẢ & BÀN LUẬN................................................................21 Khảo sát dung môi chiết xuất ............................................................21

4.1.2.

Chiết xuất cao rễ khổ sâm bắc ..........................................................22

4.1.3.

Phân lập các flavonoid ......................................................................22

4.1.1.

Kiểm tra độ tinh khiết và xác định cấu trúc hợp chất phân lập ..............29

4.2.2.

Đánh giá hợp chất SF2 đã phân lập ..................................................35

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

TR ẦN

4.3.2. Xây dựng quy trình xác định hàm lƣợng hợp chất sophoraflavanone G (SF2) phân lập đƣợc ..............................................................................................48

10 00

4.4. Sơ bộ xác định hàm lƣợng isoxanthohumol và sophoraflavanone G trong dƣợc liệu rễ khổ sâm .................................................................................................54 Khảo sát phƣơng pháp xử lý mẫu .....................................................54

4.4.1.

-H

4.4.2. Tiến hành định lƣợng sơ bộ isoxanthohumol và sophoraflavanone G trong dƣợc liệu ..........................................................................................................54

Kết luận ...................................................................................................58

-L

ÁN

5.2.

CHƢƠNG 5. KẾT LUẬN & ĐỀ NGHỊ .................................................................58 Đề nghị....................................................................................................58

IỄ N

ÀN

TÀI LIỆU THAM KHẢO .........................................................................................59

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Xác định hàm lƣợng hợp chất isoxanthohumol (SF1) phân lập đƣợc .. ...........................................................................................................41

4.3.1.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

4.3. Xây dựng quy trình xác định hàm lƣợng chất phân lập bằng phƣơng pháp HPLC quy về phần trăm diện tích peak ...........................................................41

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Đánh giá hợp chất SF1 đã phân lập ..................................................29

4.2.1.

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

4.2.

5.1.

Chiết xuất, phân lập và tinh chế flavonoid .............................................21

4.1.

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ nguyên

Cộng hƣởng từ hạt nhân proton

H - Nuclear Magnetic Resonance

Cộng hƣởng từ hạt nhân C13

H-NMR

C - Nuclear Magnetic Resonance

DCM

Dichloromathane

Diclorometan

DĐHK

Dƣợc điển Hồng Kông

DMSO

Dimethyl sulfoxide

Dimetyl sulfoxid

DSC

Differential scanning calorimetry

Phân tích nhiệt quét vi sai

EC50

Half maximal effective concentration

EtOAc

Ethyl acetate

HPLC

High performance chromatography

HSV

Herpes simplex virus

IC50

Half maximal inhibitory concentration

Nồng độ ức chế tối đa 50% đối tƣợng thử nghiệm

Infrared Spectroscopy

Phƣơng pháp phổ hồng ngoại

MeOH

Methanol

-H

Virus herpes đơn dạng

Methanol

n-Butanol

NMR

Nuclear Magnetic Resonance

Cộng hƣởng từ hạt nhân

Pure analyses

Tinh khiết phân tích

PDA

Photodiod Array

Dãy diod quang

Petrolium Ether

Ete dẩu hỏa

RP-18

Reverse phase - 18

Pha tỉnh đảo cho sắc ký

RSV

Respiratory Syncytial Virus

Virus hợp bào hô hấp

SKLM

Sắc ký lớp mỏng

ÀN

ÁN

-L

Khối phổ

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

liquid Sắc ký lỏng hiệu năng cao

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

H Ư TR ẦN

Ethyl acetat

Mass spectrum

n-Bu

Nồng độ có hoạt tính tối đa 50% đối tƣợng thử nghiệm

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Bình định mức

IỄ N D

Bình định mức

BĐM

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

C-NMR

ngh a tiếng Việt

Chữ tắt

iii

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DANH MỤC BẢNG

Bảng 2.2. Cấu trúc một số isoflavon nổi bật có tác dụng sinh học trong Sophora flavescens ....................................................................................................................5

Bảng 2.1. Một số cấu trúc flavonoid đáng chú ý trong Sophora flavescens ...............4

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Bảng 4.4. Khối lƣợng cắn thu đƣợc với các dung môi chiết khác nhau ...................21 Bảng 4.5. Các phân đoạn sắc ký cột từ cao ethanol toàn phần .................................22

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Bảng 4.8. Các thông số thăm dò điều kiện sắc ký HPLC điều chế phân đoạn C .....26 Bảng 4.9. Chƣơng trình pha động định tính SF1 ......................................................30

TR ẦN

Bảng 4.10. Bảng so sánh số khối lý thuyết và số khối chất SF1 ..............................32

Bảng 4.11. Bảng so sánh phổ 13C-NMR (125MHz, DMSO-d6, ppm và 1H-NMR (500MHz, DMSO-d6, ppm) của SF1 và isoxanthohumol .....................................34

10 00

Bảng 4.12. Chƣơng trình pha động định tính SF2 ....................................................36

Bảng 4.13 Bảng so sánh số khối lý thuyết và số khối chất SF2 ...............................38

-H

Bảng 4.14. Bảng so sánh phổ 13C-NMR (125MHz, DMSO-d6, ppm và 1H-NMR (500MHz, DMSO-d6, ppm) của SF2 với phổ 13C-NMR (125MHz, DMSO-d6, ppm và 1H-NMR (300MHz, DMSO-d6, ppm) của sophoraflavanone G [29].40

-L

Bảng 4.15. Chƣơng trình pha động định lƣợng SF1 .................................................41

ÁN

Bảng 4.16. Các thông số sắc ký tƣơng ứng với đỉnh SF1 sau sáu lần tiêm liên tiếp (n=6) ..........................................................................................................................42

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Bảng 4.7. Chƣơng trình pha động sắc ký phân đoạn C.............................................25

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Bảng 4.6. Các phân đoạn sắc ký cột từ cao phân đoạn IV ........................................24

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Bảng 2.3. Một số công trình nghiên cứu phân lập flavonoid từ rễ khổ sâm bắc Sophora flavescens Ait. .............................................................................................10

IỄ N

ÀN

Bảng 4.17. Chuẩn bị mẫu cho khảo sát khoảng tuyến tính .......................................44 Bảng 4.18. Kết quả tuyến tính của diện tích đỉnh theo nồng độ mẫu thử .................44

Bảng 4.19. Chuẩn bị mẫu cho thẩm định độ lặp lại ..................................................45 Bảng 4.20. Kết quả thẩm định độ lặp lại của quy trình xác định hàm lƣợng isoxanthohumol .........................................................................................................45 Bảng 4.21. Chuẩn bị mẫu cho thẩm định độ tái lập ..................................................46 iv

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Bảng 4.23. Kết quả độ chính xác trung gian ở 2 ngày và 2 hệ thống HPLC khác nhau ...........................................................................................................................47

Bảng 4.22. Kết quả thẩm định độ tái lập của quy trình xác định hàm lƣợng isoxanthohumol .........................................................................................................46

Bảng 4.24. Kết quả hàm lƣợng isoxanthohumol phân lập ........................................47

Bảng 4.28. Chuẩn bị mẫu cho thẩm định độ lặp lại ..................................................51

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Bảng 4.29. Kết quả thẩm định độ lặp lại của quy trình xác định hàm lƣợng sophoraflavanone G ..................................................................................................51

TR ẦN

Bảng 4.30. Chuẩn bị mẫu cho thẩm định độ tái lập ..................................................52

Bảng 4.31. Kết quả thẩm định độ tái lập của quy trình xác định hàm lƣợng isoxanthohumol .........................................................................................................52

10 00

Bảng 4.32. Kết quả độ chính xác trung gian ở 2 ngày và 2 hệ thống HPLC khác nhau ...........................................................................................................................53

Bảng 4.33. Kết quả hàm lƣợng sophoraflavanone G phân lập .................................53

-H

Bảng 4.34. Chƣơng trình pha động ...........................................................................54

-L

Bảng 4.35. Các thông số sắc ký tƣơng ứng với đỉnh isoxanthohumol sau sáu lần tiêm liên tiếp (n=6) ....................................................................................................55

ÁN

Bảng 4.36. Các thông số sắc ký tƣơng ứng với đỉnh sophoraflavanone G sau sáu lần tiêm liên tiếp (n=6) ....................................................................................................55

IỄ N

ÀN

Bảng 4.37. Kết quả thí nghiệm định lƣợng sơ bộ isoxanthohumol (SF1) và sophoraflavanone G (SF2) trong dƣợc liệu ...............................................................56

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Đ ẠO

Bảng 4.27. Kết quả tuyến tính diện tích đỉnh theo nồng độ mẫu thử sophoraflavanone G ..................................................................................................50

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Bảng 4.26. Chuẩn bị mẫu cho khảo sát khoảng tuyến tính .......................................50

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Bảng 4.25. Các thông số sắc ký tƣơng ứng với đỉnh SF2 sau sáu lần tiêm liên tiếp (n=6) ..........................................................................................................................48

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DANH MỤC HÌNH & SƠ ĐỒ

Hình 2.1. Cây khổ sâm bắc Sophora flavescens Ait ................................................ 2

Sơ đồ 3.1. Quy trình tổng quát phân lập flavonoid từ rễ khổ sâm bắc .....................15

Hình 2.2. Nhóm thế isoprenyl và lavandulyl trên các flavonoid ................................3

Hình 2.3. Cấu trúc một số pterocarpan từ rễ khổ sâm bắc ..........................................5

Hình 4.5. Sắc ký lớp mỏng các phân đoạn từ sắc ký cột cao ethanol toàn phần ......23

http://daykemquynhon.ucoz.com

Hình 4.8. Sắc ký đồ thăm dò điều kiện HPLC điều chế phân đoạn C ......................27

H Ư

Hình 4.9. Sắc ký đồ khảo sát peak 1 và 2 trên HPLC phân tích ...............................28

TR ẦN

Hình 4.10. Sắc ký đồ HPLC điều chế phân đoạn C ..................................................29 Hình 4.11. Kết quả định tính SF1 bằng sắc ký lớp mỏng .........................................29

Hình 4.12. Sắc ký đồ định tính bằng HPLC hợp chất SF1 phân lập.........................31

10 00

Hình 4.13. Phổ UV hợp chất SF1..............................................................................31 Hình 4.14. Phổ hấp thu hồng ngoại IR hợp chất SF1 ...............................................32

Hình 4.15. Phổ ESI-MS của hợp chất SF1 phân lập .................................................32

-H

Hình 4.16. Cấu trúc hợp chất SF1 – isoxanthohumol ...............................................34

-L

Hình 4.17. Kết quả định tính SF2 bằng SKLM ........................................................35 Hình 4.18. Sắc ký đồ định tính bằng HPLC hợp chất SF2 phân lập.........................37

ÁN

Hình 4.19. Phổ UV hợp chất SF2..............................................................................37

Hình 4.20. Phổ hồng ngoại hợp chất SF2 .................................................................38

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Hình 4.7. Sắc ký đồ HPLC phân tích phân đoạn C ...................................................25

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Hình 4.6. Sắc ký lớp mỏng các phân đoạn từ sắc ký cột cao phân đoạn IV .............24

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Hình 4.4. Kết quả sắc ký lớp mỏng của khảo sát chiết .............................................21

IỄ N

ÀN

Hình 4.21. Phổ ESI-MS của hợp chất SF2 phân lập .................................................38

Hình 4.22. Cấu trúc hợp chất SF2 – sophoraflavanone G ........................................41 Hình 4.23. Sắc ký đồ HPLC đánh giá tính đặc hiệu của quy trình định lƣợng SF1 .43 Hình 4.24. Đƣờng biểu diễn mối liên hệ giữa nồng độ và diện tích đỉnh của isoxanthohumol .........................................................................................................44

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Hình 4.26. Đƣờng biểu diễn mối liên hệ giữa nồng độ và diện tích đỉnh của sophoraflavanone G ..................................................................................................50

Hình 4.25. Sắc ký đồ HPLC đánh giá tính đặc hiệu của quy trình xác định hàm lƣợng sophoraflavanone G ........................................................................................49

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Hình 4.27. Đồ thị ảnh hƣởng của dung môi chiết đến hàm lƣợng % isoxanthohumol và % sophoraflavanone G định lƣợng đƣợc trong dƣợc liệu (a) và cắn thu đƣợc (b) ...................................................................................................................................57

vii

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Đầu tiên, em xin đƣợc gửi lời cảm ơn chân thành đến toàn thể quý thầy cô Khoa Dƣợc – Đại học Y Dƣợc thành phố Hồ Chí Minh, những ngƣời đã dành trọn tâm huyết và tri thức để giảng dạy, truyền đạt kiến thức cho em và những kiến thức này không chỉ là nền tảng cho quá trình thực hiện khóa luận mà còn là hành trang để em bƣớc vào đời một cách vững chắc.

LỜI CÁM ƠN

-L

-H

Mặc dù đã có nhiều cố gắng để thực hiện đề tài một cách hoàn chỉnh nhất, song không thể tránh khỏi những hạn chế về kiến thức và kinh nghiệm cũng nhƣ thiếu sót mà bản thân em chƣa thấy đƣợc. Em rất mong nhận đƣợc sự đóng góp ý kiến từ thầy cô để khóa luận đƣợc hoàn chỉnh hơn.

IỄ N

ÀN

ÁN

Một lần nữa, em xin chân thành cảm ơn tất cả!

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

TR ẦN

Em xin cảm ơn tất cả các anh chị kiểm nghiệm viên tại khoa Kiểm nghiệm Đông dƣợc – Dƣợc liệu, khoa Vật lý – Đo lƣờng, khoa Kiểm nghiệm các dạng Bào chế, khoa Kiểm nghiệm Nguyên liệu, Khoa Thiết lập Chất chuẩn và Chất đối chiếu và Khoa Nghiên cứu Phát triển. Thân gửi lời cảm ơn đến những ngƣời bạn cùng thực hiện đề tài đã luôn bên cạnh, động viên và giúp đỡ nhau trong suốt thời gian vừa qua.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Em chân thành cảm ơn thầy PGS.TS. Nguyễn Ngọc Vinh, anh DS. Phan Nguyễn Trƣờng Thắng, ngƣời đã luôn bên cạnh dìu dắt, động viên, giúp đỡ và chỉ bảo em một cách tận tình suốt trong quãng thời gian từ những ngày đầu thực hiện đề tài cho đến lúc hoàn thành khóa luận tốt nghiệp.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Để hoàn thành khóa luận này, em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến cô TS. Trần Anh Vũ đã quan tâm, giới thiệu để em thực hiện đề tài tại viện Kiểm Nghiệm Thuốc TP.HCM đồng thời tạo điều kiện tốt nhất cho em đƣợc thực hiện đề tài, cảm ơn cô đã định hƣớng và giúp đỡ em rất nhiều trong quá trình nghiên cứu.

viii

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

ĐẶT VẤN ĐỀ

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

-L

-H

Tại Việt Nam, cây khổ sâm bắc đƣợc du nhập, nhân giống và đƣợc trồng với quy mô lớn ở Đắk Nông và Sapa, tuy vậy chỉ có ít chế phẩm là thực phẩm chức năng nhƣ Ninh Tâm Vƣơng và Nữ Vƣơng ra đời. Bên cạnh đó, dƣợc điển Việt Nam V vẫn chƣa có chuyên luận về dƣợc liệu khổ sâm bắc gây khó khăn cho việc kiểm tra, đánh giá chất lƣợng nguồn dƣợc liệu khổ sâm bắc trong nƣớc cũng nhƣ ngoại nhập và cho công tác kiểm soát, đánh giá chất lƣợng những chế phẩm từ dƣợc liệu này trên thị trƣờng. Nhận thấy tầm quan trọng của nhóm hợp chất flavonoid cùng với vấn đề đánh giá toàn diện dƣợc liệu khổ sâm bắc, nhóm nghiên cứu tiến hành đề tài “Nghiên cứu phân lập một flavonoid từ khổ sâm bắc (Sophora flavescens Ait.)” với các mục tiêu sau:

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Khổ sâm bắc (Sophora flavescens Ait.) từ lâu đã đƣợc sử dụng trong y học cổ truyền Trung Hoa để chữa nhiều bệnh nhƣ lỵ, mụn nhọt, lở loét, giun và ký sinh trùng [1]. Những nghiên cứu trƣớc đây cho thấy thành phần hóa học có hoạt tính đặc trƣng của dƣợc liệu này là alkaloid với các tác dụng sinh học đáng chú ý nhƣ chống loạn nhịp tim, bảo vệ gan, kháng viêm,…[2] Trên thị trƣờng đặc biệt là Trung Quốc và Hoa Kỳ đã có nhiều sản phẩm là thuốc hay thực phẩm chức năng từ Sophora flavescens nhƣ thuốc tiêm Yanshu, Fufang kushen, viên nén Kushen Pian, thực phẩm bổ sung Kushen Hawaii Pharm và Kushen Nature’s Health đƣợc sản xuất từ dƣợc liệu này đồng thời việc đánh giá chất lƣợng dƣợc liệu khổ sâm bắc đã đƣợc dƣợc điển Hồng Kông 2012 [3] quy định dựa trên 3 thành phần alkaloid là matrine, oxymatrine và sophoridine. Cùng với alkaloid, thành phần flavonoid trong dƣợc liệu khổ sâm bắc cũng đã đƣợc nghiên cứu từ lâu [4, 5, 6, 7] với hàng trăm hợp chất flavonoid đƣợc phân lập trong hơn 5 thập kỷ qua với nhiều tác dụng dƣợc lý quý báu nhƣ kháng tế bào ung thƣ, kháng viêm, kháng khuẩn và kháng nhiều chủng virus nhƣng thành phần này vẫn chƣa trở thành chỉ tiêu trong đánh giá chất lƣợng dƣợc liệu khổ sâm bắc. Gần đây, nhiều tác giả khoa học trên thế giới đã đề nghị nên đƣa nhóm hợp chất flavonoid trở thành một trong những chỉ tiêu chất lƣợng của dƣợc liệu này [7].

CHƢƠNG 1.

Đặt vấn đề

IỄ N

ÀN

- Chiết xuất, phân lập và tinh chế 1 flavonoid từ rễ khổ sâm bắc. - Kiểm tra độ tinh khiết và xác định cấu trúc chất phân lập. - Xây dựng quy trình xác định hàm lƣợng flavonoid phân lập đƣợc.

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

CHƢƠNG 2.

Tổng quan tài liệu

TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1. Tổng quan về cây khổ sâm bắc

2.1.1. Tổng quan về thực vật học

2.1.1.1. Vị trí phân loại

Tên khoa học: Sophora flavescens Ait. (tên khoa học khác là Sophora angustifolia)

2.1.1.2. Mô tả đặc điểm hình thái

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Một số cây khác cũng mang tên Khổ sâm cần chú ý phân biệt: - Croton tonkinensis Gagnep., họ Thầu dầu (Euphobiaceae) - Khổ sâm cho lá - Brucea javanica (L.) Merr., họ Thanh thất (Simarubaceae) - Sầu đâu cứt chuột (Sầu đâu rừng), Khổ sâm cho quả.

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

10 00

Khổ sâm bắc là cây bụi nhỏ, cao 0,5 - 1,2 m. Rễ hình trụ dài, vỏ ngoài màu vàng trắng. Thân phân nhiều cành, cành non có lông tơ rải rác. Lá kép lông chim lẻ mọc so le, gồm 5 - 10 đôi lá chét hình mác dài 3 - 4 cm, rộng 1 - 2 cm, dốc thuôn, đầu nhọn hoặc hơi tù, mặt trên nhẵn, mặt dƣới lông mịn màu xám. Cụm hoa mọc ở kẽ lá hoặc đầu cành thành chùm dài 10 - 20 cm. Hoa màu vàng nhạt, đài 5 răng hình chuông, tràng 5 cánh không đều, nhị 10, rời nhau, bầu có lông mịn. Quả đậu, thắt lại giữa các hạt, thuôn dài 5 - 12 cm, đƣờng kính 5 - 8 mm, đầu có mỏ thuôn dài; hạt 3 - 7, hình cầu, màu đen [1, 2].

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Đ ẠO

Theo hệ thống phân loại Takhtajan A.L (2009), cây Khổ sâm bắc có vị trí phân loại thuộc ngành Ngọc lan (Magnoliophyta), lớp Ngọc lan (Magnoliopsida), phân lớp Hoa hồng (Rosidae), liên bộ Đậu (Fabanae), bộ Đậu (Fabales), họ Đậu (Fabaceae), chi Sophora, loài Sophora flavescens Ait. [8].

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Tên Việt Nam: Dã hòe, Khổ cốt, Khổ sâm cho rễ, Sơn đậu căn, Ðịa sâm…

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Tên thông thường: Khổ sâm bắc

(a) Toàn cây trên mặt đất

(b) Bộ phận dùng – Rễ [3]

Hình 2.1. Cây khổ sâm bắc Sophora flavescens Ait

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Tổng quan tài liệu

10 00

Flavonoid

ÁN

-L

-H

Flavonoid là một trong những thành phần có hoạt tính sinh học chính của Sophora flavenscens và đƣợc chú ý nghiên cứu nhiều. Hơn 124 hợp chất nhóm flavonoid đã đƣợc phân lập, trong số đó kushenol A, B, C, E, F, H, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, U, V, W và X, kurarinone, isokurarinone, norkurarinone, (2S)-2’-methoxykurarinone, kurarinol, neokurarinol, norkurarinol, kosamol A, leachianone A, leachianone G, sophoraflavanone G, 8-lavandulylkaempferol, formononetin, và isoxanthohumol có những tác dụng sinh học in vitro và cả in vivo [7].

IỄ N

ÀN

Cấu trúc các flavonoid từ rễ Sophora flavescens thông thƣờng đƣợc isoprenyl hóa và lavandulyl hóa là dạng thƣờng thấy của các flavonoid phân lập từ rễ hay thân [4]. Những nhóm thế này ở dạng C-isoprenyl và C-lavandulyl tại vị trí C-6 và C-8.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Sophora flavescens, tính đến năm 2015, đã có hơn 200 hợp chất đƣợc phân lập từ dƣợc liệu này bao gồm 124 flavonoid (15 flavonols, 41 flavanones, 13 flavanonols, 27 isoflavones, 3 isoflavanones, 2 homoisoflavones, 7 chalcones, 2 biflavonoids, và 14 pterocarpans); 47 alkaloids, 9 terpenoids và 26 chất là thành phần khác (nhƣ lignan, phenylpropanoid, coumarin và phenolic acid) [7]. Trong đó 2 nhóm hoạt chất chủ yếu đó là flavonoid và alkaloid.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

2.1.2. Tổng quan về thành phần hóa học

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Khổ sâm bắc có nguồn gốc ở Trung Quốc, đƣợc nhập vào Việt Nam vào đầu những năm 1970. Là cây sống nhiều năm, về mùa đông, phần trên tàn lụi, phần gốc còn lại sẽ nảy mầm vào giữa mùa xuân năm sau. Cây ƣa sáng ƣa ẩm, thích nghi với điều kiện của nƣớc ôn đới ẩm và vùng nhiệt đới núi cao, nhiệt độ trung bình năm khoảng 15oC. Cây trồng ở Sa Pa sinh trƣởng tốt, ra hoa nhiều, nhƣng không có quả. Khổ sâm bắc có thể đƣợc trồng để lấy dƣợc liệu, điển hình ở công ty cổ phần sản xuất chế biến nông lâm sản dƣợc liệu sạch Đắk Nông. Bộ phận dùng là rễ phơi khô (Sophorae Flavescentis Radix). Thu hái củ, rửa sạch đất cát, thái phiến, phơi khô; hoặc đem củ tƣơi ngâm nƣớc vo gạo nếp một đêm, rửa sạch, để trong 3 giờ rồi thái phiến, phơi khô [1].

2.1.1.3. Phân bố sinh thái, thu hái và chế biến

Hình 2.2. Nhóm thế isoprenyl và lavandulyl trên các flavonoid

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Tổng quan tài liệu

R4 C C A H D E C A D C H A C

H H H H

C D C C

OCH3 OH OCH3 OCH3

OH OH OH OH

H H H H

H H

C C

OCH3 OH

OH OH

H H

Kuraridin

H H CH3 CH3 H H H H H

C C A H A A H B C

H OH H H H H H H H

D A C C C CH3

OH OH OH OH OH OH

OH OH OH OH OH -

Kuraridinol

CH3

Xanthohumol

CH3

Kushenol D

CH3

OCH3

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

TO ÀN Đ

IỄ N

Chalcon

R7 H H H H H H H H H H OCH3 OCH3 H

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TR ẦN

10 00

ÁN

-L

-H

Flavonol

Flavanonol

R6 H OH OH OH OH OH H H H OH OH OH OH

Leachianone A Sophoraflavanone G Desmethylanhydroicaritin 8-lavandulyl -kaempferol Kusenol C Sophoflavescenol Kusenol H Kusenol L Kusenol M Kusenol X Kosamol A

CH3 CH3 H CH3

R5 OH OH OH OH OCH3 OH OH OH OH H OH OH OH

R3 H H H H H H H H H H H H H

Đ ẠO

R2 H A A C H H H H H H A H H

R1 H H H H H H CH3 H H CH3 H H CH3

Flavanon

http://daykemquynhon.ucoz.com

Hợp chất Kushenol A Kushenol B Kushenol E Kushenol F Kushenol P Kushenol Q Kushenol R Kushenol S Kushenol T Kushenol U Kushenol V Kushenol W Kurarinone 2S-2’methoxykurarinone Kurarinol Isokurarinone Neokurarinol

H Ư

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Khung hợp chất

Bảng 2.1. Một số cấu trúc flavonoid đáng chú ý trong Sophora flavescens

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Tổng quan tài liệu

Các isoflavon đƣợc phân lập nhƣ daidzein, formononetin, calycosin, ononin,… Vài isoflavon có tác dụng bảo vệ tế bào gan nhƣ 3’-hydroxy-4’-methoxyisoflavone-7-Oβ-D-xylopyranosyl-(1-6)-β-D- glucopyranoside, 3’-hydroxy-4’-methoxyisoflavone7-O-β-D-apiofuranosyl-(1-6)-β-Dglucopyranoside và 4’-Hydroxy-3’methoxyisoflavone-7-O-β-D-xylopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside.

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

OCH3

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Kushecarpin D

Maackiain

Trifolirhizin

Pterocarpin

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

Các pterocarpan đƣợc phân lập cũng có một số đặc tính sinh học đáng chú ý, một vài pterocarpan nhƣ kushecarpin D, maackiain, pterocarpin, trifolirhizin.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

OCH3

Đ ẠO

3’-hydroxy-4’methoxyisoflavone-7-O-βD-apiofuranosyl-(1-6)-βD- glucopyranoside 4’-Hydroxy-3’methoxyisoflavone-7-O-βD-xylopyranosyl-(1-6)-βD-glucopyranoside. 3’-hydroxy-4’methoxyisoflavone-7-O-βD-xylopyranosyl-(1-6)-βD- glucopyranoside

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Isoflavon

Hợp chất Formononetin

Khung hợp chất

Bảng 2.2. Cấu trúc một số isoflavon nổi bật có tác dụng sinh học trong Sophora flavescens

Hình 2.3. Cấu trúc một số pterocarpan từ rễ khổ sâm bắc

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Tổng quan tài liệu

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Triterpenoid

G N

http://daykemquynhon.ucoz.com

2.1.3.1. Kháng khối u

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

10 00

TR ẦN

H Ư

Hợp chất nhóm flavonoid trong khổ sâm bắc cho tác dụng kháng khối u nhiều tiềm năng hơn so với nhóm alkaloid [10]. Tính kháng khối u của Sophora flavescens đƣợc thử nghiệm trên các dòng tế bào ngƣời nhƣ SK-OV-3 (buồng trứng), A549, SK-MEL-2 (da), HT29 (đại tràng), NCI-H460 (phổi), XF498 (hệ thống thần kinh trung ƣơng), HCT-15 (đại tràng), HL-60 (bạch cầu dòng tủy) và SPC-A-1 (phổi); và dòng tế bào S180, H22,…[7]. Trên in vitro, dịch chiết nƣớc của Sophora flavescens ức chế tăng trƣởng dòng tế bào EAC (Erlich ascites carcinoma) với tỷ lệ từ 50-66%, dịch chiết ethanol ức chế tế bào u đại tràng HT29 với tỷ lệ cao (định lƣợng bằng MTT), cao toàn phần có tỷ lệ ức chế tế bào u đến 52% cần có chứa cả matrine và các flavonoid [7]. Trong in vivo, flavonoid toàn phần phân lập từ Sophora flavescens ức chế tăng trƣởng của nhiều dòng tế bào u nhƣ tế bào u gan H22, S180, tế bào u phổi Lewis, tế bào u thực quản Eca-109 và dòng tế bào u phổi H460 với tỷ lệ ức chế lần lƣợt 40%, 82,14%, 59,74%, 42,71% và 46,8% [7]. Kurarinone, (2S)2’-methoxykurarinone, leachianon A và sophoraflavone G (những flavanon có C-8 đƣợc lavandulyl hóa) có khả năng ức chế sự tăng trƣởng của nhiều dòng tế bào [10, 11, 12]. Desmethylanhydroicaritin ức chế dòng tế bào u não U87MG và có nhiều tiềm năng trở thành tác nhân trị liệu u não [5].

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

2.1.3. Tác dụng dƣợc lý

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Cho đến nay, chỉ có 9 hợp chất triterpen đƣợc phân lập gồm lupeol, lupenone, monogynol B, β-amyrenol, soyasaponin І và sophoraflavoside І, II, III, IV [7].

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Rễ và hoa chứa nhiều alkaloid thuộc nhóm quinolizidin, trong đó matrin và oxymatrin là các alkaloid chủ yếu trong rễ; 8-dehydrosophoramin, 7,11dehydromatrin, methylcytisin, anagyrin, mamanin, kuraramin, isokuraramin là các alkaloid chủ yếu trong hoa, trong đó mamanin và kuraramin là các chất chuyển hóa của methylcytisin và anagyrin. Ngoài ra còn có sophoranol, sophocarpin, 5episophocarpin, isomatrin, sophocarpin N-oxyd, sophoralin, sophoramin [2].

Alkaloid

2.1.3.2. Kháng viêm – giảm đau Dịch chiết và cả những hợp chất phân lập từ khổ sâm bắc có đặc tính kháng viêm in vitro và in vivo thông qua ức chế sản xuất các yếu tố gây viêm nhƣ COX-2, iNOS, NO, IL-8, IL-6 và TNF-α [7]. Sophoraflavanon G, kuraridin, kurarinon và isoxanthohumol có hoạt tính ức chế COX-2, iNOS, IL-6 cho thấy khả năng điều trị viêm khớp dạng thấp và trifolirhizin ức chế sự biểu hiện của TNF-α, IL-6, COX-2 6

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Tổng quan tài liệu

trong đại thực bào và ức chế sự phát triển của tế bào ung thƣ [13], [14]. Ngoài ra, nghiên cứu gần đây cho thấy thành phần giàu prenyl flavonoid của khổ sâm bắc (đã loại hết alkaloid) ức chế viêm khớp mạnh với liều uống trên chuột thử nghiệm 10100 mg/kg/ngày và cho tác dụng giảm đau[14].

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

2.1.3.3. Kháng dị ứng - hen suyễn

-L

2.1.3.5. Tác động trên hệ tim mạch

IỄ N

ÀN

ÁN

Tác động trên hệ tim mạch của các thành phần trong rễ khổ sâm bắc nhƣ chống loạn nhịp tim, chống xơ hóa tế bào cơ tim, tác dụng dãn mạch và tác động trên sự co thắt cơ tim gây ra bởi dịch chiết ethanol, methanol, nƣớc hoặc các phân đoạn alkaloid và flavonoid toàn phần từ Sophora flavescens trên các mô hình động vật thử nghiệm và cả mô hình in vitro [7].

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

-H

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Sophora flavescens có khả năng ức chế nhiều loài vi khuẩn nhƣ Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Shigella, Shigella flexneri, Staphylococcus citreus, Staphylococcus albus và Bacillus paratyphosus B in vitro [7]. Sophora flavescens đã đƣợc báo cáo khả năng ức chế các nhóm virus nhƣ HSV type 1 và type 2, RSV, rotavirus… Một số flavonoid trong thành phần rễ khổ sâm bắc có tác dụng kháng virus nhƣ kurarinol, kushenol H, kushenol K ức chế HSV type 1 và 2 [7]. Dịch chiết methanol rễ khổ sâm bắc có tác dụng kháng mạnh Toxoplasma gondii với EC50=0,2 mg/mL, dịch chiết cồn ức chế in vitro với Neospora caninum và dịch chiết nƣớc ức chế đáng kể Giardia lamblia và Eimeria tenella [7]. Năm 2012, Liu và cộng sự nghiên cứu tác dụng kháng nấm của cao aceton rễ khổ sâm bắc trên Candida albicans (tỷ lệ ức chế 33%) và Saccharomyces cerevisiae (tỷ lệ ức chế 23%) [16].

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

2.1.3.4. Kháng vi sinh vật

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Một trong những công dụng của khổ sâm bắc là điều trị các bệnh lý dị ứng bao gồm viêm da dị ứng và hen suyễn. Trên mô hình chuột viêm da dị ứng, liều uống 50-200 mg/kg cao methanol làm giảm đáng kể đáp ứng ngứa trên chuột [15]. Đồng thời cao nƣớc từ Sophora flavescens làm giảm đáng kể dị ứng đƣờng hô hấp do hen suyễn trên chuột và ức chế co thắt cơ trơn hô hấp do cảm ứng bởi aceylcholine [6].

2.1.3.6. Tác dụng khác

Nhóm prenyl trong cấu trúc của kushenol A, kurarinon và kuraridin có vai trò quan trọng đối với hoạt tính ức chế trên adenosin monophosphat phosphodiesterase [2]. Formononetin và kushenol F cho tác động ức chế MAO-B [17]. Kushenol A, kurarinon, sophoraflavanone G, 2'-methoxykurarinon và kurarinol có hoạt tính ức chế alpha-glucosidase mạnh và kết quả cho thấy nhóm 8-lavandulyl là yếu tố quan 7

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Tổng quan tài liệu

trọng cho hoạt tính ức chế này [18]. (2S)-2′-methoxykurarinon, sophoraflavanone G, leachianon A và (-) kurarinon có hoạt tính chống sốt rét Plasmodium falciparum. Youn Chul Kim và cộng sự cho rằng nhóm methoxy trong khung flavanon đóng vai trò quan trọng đối với hoạt tính chống sốt rét [19].

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

2.1.3.7. Độc tính

2.2.1. Các phƣơng pháp chiết xuất

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

Các phƣơng pháp chiết xuất dƣợc liệu nhƣ ngâm lạnh, ngấm kiệt, đun hồi lƣu, chiết siêu âm,... với dung môi nhƣ ethanol, nƣớc, methanol,...[22]. Đối với dƣợc liệu khổ sâm bắc, Komatsu và cộng sự (1970) đã chiết xuất dƣợc liệu này bằng methanol với phƣơng pháp ngâm lạnh ở nhiệt độ phòng [23]. Những công trình gần đây đƣợc các tác giả thực hiện chiết xuất bằng ethanol có nồng độ cao, có hoặc không có sử dụng nhiệt độ. Nhìn chung các nghiên cứu trƣớc đây chiết xuất Sophora flavescens bằng những dung môi thông dụng, đa năng, dễ bay hơi nhƣ methanol, ethanol độ cồn khác nhau với phƣơng pháp chiết xuất đơn giản nhƣ ngâm lạnh, ngấm kiệt hay đun hồi lƣu (Bảng 2.3).

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

-H

2.2. Các phƣơng pháp chiết xuất phân lập

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

10 00

Trong Y học cổ truyền khổ sâm bắc dùng chữa lỵ, chảy máu ruột, hoàng đản, tiểu tiện không thông có máu, sốt cao hóa điên cuồng, trị bệnh giun và ký sinh trùng. Nƣớc sắc đặc dùng rửa mụn nhọt, lở loét. Ngày dùng 10-12 g dạng thuốc sắc bột hoặc chia 3 lần uống trong ngày [1].

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

2.1.4. Công dụng và liều dùng

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Năm 2008, viên nang Zhixue một dạng bào chế có chứa cao chiết ethanol của 2 dƣợc liệu là Cortex Dictammi và rễ cây Sophora flavescens đã đƣợc Cục Quản lý Dƣợc và Thực phẩm Trung Quốc thu hồi vì phản ứng có hại gây độc tế bào gan nghiêm trọng ghi nhận trên 7 ca đƣợc báo cáo trên tạp chí Hepatogastroenterology năm 2010 [20]. Sau đó, Qianqian Yu cùng cộng sự dựa trên báo cáo đó đã tiến hành nghiên cứu và phát hiện tác dụng độc tế bào gan là do thành phần prenyl flavonoid của Sophora flavescens gây ra. Thành phần prenyl flavonoid chính gây độc tế bào gan đƣợc xác định in vivo và in vitro là kurarinone và sophoraflavanone G [21]. Do đó nhóm nghiên cứu của Qianqian Yu cùng cộng sự đã đề nghị kiểm soát hàm lƣợng 2 hợp chất kurarinone và sophoraflavanone G ở một hàm lƣợng cho phép trong chế phẩm và không gây độc tính trên gan ngƣời [21].

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Tổng quan tài liệu

ÁN

2.2.3.1. Đánh giá độ tinh khiết hợp chất phân lập được

IỄ N

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

ÀN

- Kiểm tra bằng SKLM: hợp chất phân lập đƣợc đánh giá trên bản SKLM khai triển bằng 3 hệ dung môi pha động có độ phân cực khác nhau, phát hiện các vết bằng đèn UV, thuốc thử chung hay thuốc thử đặc hiệu [22]. - Kiểm tra bằng HPLC phân tích: hợp chất phân lập đƣợc đánh giá trên HPLC phân tích bằng chƣơng trình sắc ký phù hợp.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

-L

2.2.3. Các phƣơng pháp đánh giá hợp chất phân lập đƣợc

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-H

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Sau khi chiết xuất dƣợc liệu thu đƣợc cao toàn phần, tiếp theo tiến hành các phƣơng pháp phân lập tinh chế đã đƣợc sử dụng nhƣ chiết lỏng – lỏng, sắc ký cột cổ điển, sắc ký cột chân không, sắc ký cột pha đảo, sắc ký với pha t nh là hạt sephadex LH20,... để thu đƣợc các phân đoạn tinh sạch hơn [22]. Đối với dƣợc liệu khổ sâm bắc chiết lỏng – lỏng với các dung môi có độ phân cực tăng dần là xu hƣớng thực hiện phân lập các hợp chất flavonoid trên dƣợc liệu khổ sâm mà đƣợc nhiều tác giả thực hiện trong nghiên cứu của mình. Các dung môi nhƣ diethyl ether, dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol và nƣớc đƣợc sử dụng trong phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng. Sau đó các dịch chiết này đƣợc cô đặc thành cao và đƣợc lựa chọn để thực hiện các phƣơng pháp tinh chế khác. Các cao phân đoạn này đƣợc tinh chế qua sắc ký cột pha thuận với một số hệ dung môi nhƣ hexan – aceton, dichloromethane – methanol, dichloromethane – ethyl acetate, benzen - ethyl acetate. Đặc biệt Ryu Shi Yong và cộng sự (1997) đã tiến hành chọn lọc các phân đoạn sau sắc ký cột pha thuận dựa trên tác dụng kháng tế bào u của cao để tiếp tục tinh chế trên sắc ký cột [11]. Sook Kyung Hyun và cộng sự (2008); Hyung-Jun Won và cộng sự (2015); Chang-Won Kang và cộng sự (2016) đã tinh chế các phân đoạn từ sắc ký cột pha thuận bằng sắc ký cột pha đảo với hệ dung môi methanol – nƣớc và thu đƣợc các hợp chất tinh khiết [5, 24, 31]. Yi Shen và cộng sự (2013); Chang-Won Kang và cộng sự (2016) và Rong Huang cùng cộng sự (2017) sử dụng sephadex LH-20 để tinh chế các cao phân đoạn từ sắc ký cột silica gel pha thuận [5, 25, 26]. Năm 2013, Yi Shen và cộng sự với phƣơng pháp HPLC điều chế đã thu đƣợc 24 hợp chất tinh khiết [25]. Năm 2017, Rong Huang cùng cộng sự đã cô lập đƣợc một chất mới chƣa từng đƣợc công bố trƣớc đây là 8-(3-hydroxymethyl-2-butenyl)-5,7,2′,4′tetrahydroxyﬂavanone bằng phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao điều chế [26].

2.2.2. Các phƣơng pháp phân lập, tinh chế

2.2.3.2. Xác định cấu trúc chất phân lập Dùng các kỹ thuật phổ nghiệm nhƣ IR, UV, MS, NMR để xác định cấu trúc hóa học phẳng và không gian trong một số trƣờng hợp đã đƣợc các tác giả sử dụng để xác định cấu trúc các chất phân lập đƣợc [5, 10, 11, 23, 31, 26, 27]. 9

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Tổng quan tài liệu

1984

1997

Ryu S.Y., Lee H.S., Rễ khô cắt nhỏ S. Kim Y.K., Kim S.H. flavescens(3kg) [29]

2003

Soo Jin Kim, Kun Rễ khô Sophora Ho Son, Hyun Wook flavescens (3,65 Chang, Sam Sik kg) Kang, Hyun Pyo

-H -L Ý ÁN

Đ IỄ N D

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

1973

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Komatsu Tomimori Hatayama Mikuriya N. [23] Komatsu M., Rễ khô Sophora Kyogoku K., flavescens (20 kg) Hatayama K., [27] Li Jun Wu et al [28] Bột rễ Sohphora flavescens (10 kg)

1970

10 00

Đối tƣợng M., Rễ Sophora T., angustifolia (tên K., gọi khác)

Nội dung Tóm tắt phƣơng pháp chiết xuất, phân lập & kết quả Chiết xuất bằng MeOH, lắc phân bố cao MeOH với ether. Lắc cao ether với dung dịch KOH 5%, lấy lớp nƣớc acid hóa và lắc lại với ether. Lấy lớp ether này qua sắc ký cột pha thuận. Thu đƣợc isoxanthohumol, xanthohumol và isoanhydroicaritin, noranhydroicaritin Chiết 3 lần với MeOH nóng, cô cạn thành cao. Tiến hành sắc kí cột cao MeOH với hexan – aceton (2:1 – 1:2). Thu đƣợc 3 g isokurarinon, 5 mg formononetin, 10 g norkurarinol, 15 g kuraridinol, 0,5 g neokurarinol, 40 g kurarinol. Đun hồi lƣu với MeOH, lắc phân bố với EtOAc, sắc ký cột cao EtOAc thu đƣợc 120 mg kushenol A, 600 mg kushenol B, 150 mg kushenol C, 60 mg kushenol D, 30 mg kushenin. Chiết xuất với methanol, lắc phân bố cao methanol thu đƣợc 35g cao DCM, 50g cao EtOAc. Sắc ký cột pha thuận phân đoạn DCM với dung môi DCM-MeOH gradient thu 6 phân đoạn, chọn phân đoạn 4 và 5 dựa trên tác dụng độc tế bào cao hơn. Tiến hành tƣơng tự với cao EtOAc. Tinh chế các phân đoạn có tính độc tế bào cao và thu đƣợc 72 mg formononetin, 55 mg kushenol E, 250 mg kushenol B, 480 mg sophoraflavanone G, 30 mg kushenol L, 500 mg kushenol M, 110 mg kuraridin, 120 mg kurarinone, 20 mg kushenol N Ngâm với ethanol 80% ở nhiệt độ phòng, lắc cao ethanol thu đƣợc với DCM, EtOAc, và n-butanol thu đƣợc 128,4; 25,5 và 280,3 g cao tƣơng ứng. Từ cao DCM, tiến hành sắc ký silica gel rửa bằng DCM-EtOAc (gradient) cho 43 phân đoạn. Phân đoạn 2 đƣợc tinh chế trên silica gel bằng benzen-ethyl acetat (10: 1)

H Ư

Tác giả

TR ẦN

Năm

STT

Bảng 2.3. Một số công trình nghiên cứu phân lập flavonoid từ rễ khổ sâm bắc Sophora flavescens Ait.

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Tổng quan tài liệu

2015

Hyung-Jun Won và cộng sự [31]

2006 và 2016

Hee Jin Jung và cộng sự [32] Chang-Won Kang và cộng sự [5].

H Ư

Sook Kyung Hyun, Won-Hee Lee, Da Mi Jeong, Youngsoo Kim, Jae Sue Choi [24]

TR ẦN

2008

ÁN

-L Ý

-H

10 00

Jin Hyo Kim, Young et al[18]

Đ IỄ N D

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

2006

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

thu đƣợc sophoraflavanon G (120 mg). Phân đoạn 33 sử dụng benzen-ethyl acetat (3: 2) thu đƣợc 80 mg kuraridin và 220 mg kurarinon. Chiết xuất với MeOH ở nhiệt độ phòng, lắc cao MeOH với cloroform, thu đƣợc 27 g cao cloroform. Đem sắc ký cột. Rễ khô Sophora Thu đƣợc 410 mg kushenol A, 270 mg kurarinon, 230 mg sophoraflavanon G, flavescens (1 kg) 170 mg 2-methoxykurarinon, 890 mg kurarinol, 13 mg 8-prenylkaempferol, 210 mg isoxanthohumol, 97 mg kuraridin và 47 mg maackian. Bột rễ (1 kg) S. Đun hồi lƣu với MeOH trong 3h, lắc phân bố, thu đƣợc DCM (28 g), EtOAc (23 flavescens g), n-butanol (71 g) và nƣớc (104 g). Phân đoạn cao EtOAc (23 g) đƣợc sắc ký rửa giải trên cột silica gel bằng DCM-MeOH (gradient) thu đƣợc 17 phân đoạn. Phân đoạn 15 (1,5 g) đƣợc tinh chế trên cột silica gel với DCM- MeOH (gradient) để thu đƣợc 150 mg kurarinol và 50 mg kuraridinol. Phân đoạn 16 (15,4 g) đã đƣợc tinh chế trên cột silica gel (hexan-ethyl acetate, gradient), và sắc ký cột RP18 (70% MeOH) thu đƣợc trifolirhizin (700 mg) . Rễ khô S. Chiết xuất với MeOH ở nhiệt độ phòng, lắc phân bố cao MeOH với n-hexan, flavescens (5 kg) chloroform, EtOAc và n-butanol đƣợc 3,9 g; 22 g; 33,5 g và 38,9 g cao tƣơng ứng. Tiến hành sắc kí cao EtOAc với hệ dung môi chloroform-ethyl acetate (gradient) đƣợc 21 phân đoạn. Sắc ký pha đảo phân đoạn 15 (2 g) với hệ dung môi MeOH-H2O (gradient) đƣợc 12 phân đoạn. Tiến hành sắc ký pha đảo phân đoạn 15-9 (120 mg) với dung môi MeOH-H2O (70:30) thu đƣợc 53 mg kuraridin. Rễ S. flavescens Chiết xuất với MeOH, lắc phân bố thu đƣợc 114g cao DCM, 124g cao EtOAc, (5kg) 305 g n-butanol, 524 g cao nƣớc. 70 g Cao DCM sắc ký pha thuận với dung môi DCM-MeOH (gradient) thu 18 phân đoạn. Phân đoạn 9 tinh chế với hệ DCMMeOH (gradient) thu đƣợc 30mg trans-hexadecylsinapic acid, 20 mg 4-hydroxy3-methoxy-(6aR,11aR)-8,9-methylene dioxy-pterocarpan, 140 mg (-)-maackiain,

Đ ẠO

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Kim [30]

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Tổng quan tài liệu

10 00

-H

-L Ý ÁN TO Đ IỄ N D

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Rong Huang, Yi Liu, Lin-Lin Zhao, Xi-xin Chen, Feng Wang, Wei Cai & Lei Che [26]

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

2017

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

H Ư

Yi Shen, Zi-Ming Feng, Jian-Shuang Jiang, Ya-Nan Yang, and Pei-Cheng Zhang [25]

TR ẦN

2013

Đ ẠO

15 mg xanthohumol. Phân đoạn 10 thu đƣợc 30 mg formononetin. Phân đoạn 11 sắc ký cột bằng DCM-MeOH (gradient) thu đƣợc 20 mg desmethylanhydroicaritin, 50 mg (2S)-2'-methoxykurarinone, 35 mg (2S)-3β,7,4'trihydroxy- 5- methoxy- 8 -(ɤ,ɤ- dimethylallyl)-flavanone, 50 mg (2S)-7,4'dihydroxy-5-methoxy-8-( ɤ,ɤ-dimethylallyl)-flavanone. Phân đoạn 14 qua cột sephadex và 1 cột pha đảo thu đƣợc 100 mg umbelliferone, 20 mg kuraridin. Phân đoạn 15 qua sắc ký cột hệ DCM-MeOH (gradient) thu đƣợc 200 mg trifolirhizin. Bột rễ sấy khô Chiết xuất với ethanol 70%. Lắc phân bố cao ethanol thu đƣợc cao PE, EtOAc, n(40kg) Bu. Phân đoạn n-Bu qua cột Diaion HP-20, hệ EtOH-H2O gradient thu đƣợc 6 phân đoạn (A, B, C, D, E, F). Phân đoạn B và C theo nguyên tắc xử lý trên cột sephadex LH-20, rồi sử dụng HPLC điều chế, phân đoạn D đƣợc tinh chế qua cột pha thuận trƣớc khi đƣợc xử lý trên cột sephadex LH-20 và HPLC điều chế để thu đƣợc 12 dẫn chất của dibenzoyl, 5 isoflavone glycoside mới cùng 8 hợp chất đã biết trong cây khổ sâm bắc. Rễ khô Kushen Chiết xuất với ethanol 95% ở 70 oC, cao thu đƣợc lắc phân bố thu đƣợc 350 g cao (10kg) EtOAc. Sắc ký cao này qua cột pha thuận hệ DCM-MeOH (gradient) thu 10 phân đoạn. Phân đoạn B, D, E qua cột sephadex LH-20, cột pha đảo C-18 và HPLC bán điều chế thu đƣợc 8 hợp chất trong đó có một chất lần đầu tiên đƣợc công bố là 8-(3-hydroxymethyl-2-butenyl)-5,7,2′,4′-tetrahydroxyflavanone, 7 chất còn lại đã biết: (2R)-3α,7,4′-trihydroxy-5-methoxy-8-prenylflavanone, (2R)-3β,7,4′trihydroxy-5-methoxy-8prenylflavanone, 3,7-dihydroxycoumarin, shandougenines B, specionin, kushenol N và kushenol I.

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

CHƢƠNG 3. CỨU

Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN

3.1. Đối tƣợng nghiên cứu

3.1.1. Nguyên liệu

-H

3.1.3. Dụng cụ, trang thiết bị

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

- Cân phân tích 4 số lẻ Mettler AE160, Mettler Toledo ML-204/1, Mettler Toledo AT200. - Cân phân tích 6 số lẻ Mettler Toledo PX60. - Máy cô quay Yamato RE801, Buchi R-200. - Bể siêu âm Transonic T700. - Tủ sấy chân không Heraeus. - Bếp cách thủy WNB 14. - Đèn UV 2 bƣớc sóng 254/365 Spectroline CM-10. - Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao Shimadzu LC-2030C 3D. - Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao điều chế Shimadzu LC-20AP. - Máy đo phổ cộng hƣởng từ hạt nhân Bruker 500Mhz. - Máy quang phổ hồng ngoại iS50FT – IR - Máy đo khối phổ LC-MS IT-TOF - Máy đo DSC Q20

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

- Methanol PA, n-hexan PA, ethyl acetate PA, aceton PA, acetonitrile (HPLC), methanol (HPLC) đƣợc sản xuất bởi hãng J.T. Baker, Mỹ. Dichloromethane PA, chloroform PA đƣợc sản xuất bởi hãng Fisher Scientific UK, Anh. Acid acetic (glacial) PA đƣợc sản xuất bởi hãng Merck, Đức. - Bản mỏng silica gel 60 F254 tráng sẵn trên nền nhôm, sản xuất bởi hãng Macherey - Nagel, Đức. Silica gel 60 cỡ hạt 0,043 – 0,063 mm, sản xuất bởi hãng Grace Davison, Đức. - Các thuốc thử FeCl3 5% trong cồn, Dragendoff, H2SO4 10% trong cồn, vanillin sulfuric trong cồn đƣợc cung cấp bởi Khoa Đông dƣợc – Dƣợc liệu, Viện Kiểm nghiệm thuốc TP. Hồ Chí Minh.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

3.1.2. Hóa chất, dung môi

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Rễ khổ sâm bắc của Công ty cổ phần sản xuất chế biến nông lâm sản Dƣợc liệu sạch Đắk Nông, thu hái tháng 7/2017. Dƣợc liệu này đã đƣợc định danh bằng kỹ thuật DNA bởi nhóm nghiên cứu năm 2017 [9]. Rễ khổ sâm bắc thu nhận đƣợc phơi khô, xay mịn vừa qua rây 2 mm, đóng vào túi nilon chống ẩm 2 lớp, mỗi túi khối lƣợng khoảng 2 kg.

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

3.2. Phƣơng pháp nghiên cứu 3.2.1. Chiết xuất, phân lập và tinh chế flavonoid

3.2.1.1. Khảo sát dung môi chiết xuất

Sắc ký cột cao toàn phần

-L

-H

Tiến hành sắc ký cột pha thuận cao toàn phần bằng các dung môi có độ phân cực tăng dần (hexane, chloroform, dichloromethane,...) thu đƣợc các phân đoạn và kiểm tra trên SKLM với hệ dung môi tham khảo [33]. Ghi nhận sắc ký đồ và lựa chọn phân đoạn phù hợp để tiếp tục tiến hành tinh chế.

ÁN

Sắc ký cột cao phân đoạn

IỄ N

ÀN

Các phân đoạn phù hợp đƣợc tiến hành sắc ký cột pha thuận tiếp tục bằng hệ dung môi có độ phân cực phù hợp và kiểm tra trên SKLM với hệ dung môi tham khảo [33] để thu đƣợc các phân đoạn chứa từ 2 – 3 chất chính.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

3.2.1.3. Phân lập flavonoid

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Dƣợc liệu rễ khổ sâm bắc đƣợc tiến hành chiết xuất bằng phƣơng pháp ngấm kiệt: 4 kg dƣợc liệu rễ khổ sâm bắc đƣợc làm ẩm với dung môi, thêm dung môi đủ ngâm ngập bề mặt dƣợc liệu khoảng 2 - 3 cm, ngâm trong 30 giờ, rút dịch chiết với tốc độ 3 ml/phút với tỷ lệ dịch chiết : dƣợc liệu 5,5 : 1 đến khi thu đƣợc 22,0 lít dịch chiết thì ngƣng thêm dung môi. Rút hết dịch chiết trong bình ngấm kiệt và ép bã. Dịch chiết đƣợc cô quay thu hồi dung môi thu đƣợc cao toàn phần.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

3.2.1.2. Chiết xuất cao rễ khổ sâm bắc

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Thăm dò sơ bộ dung môi chiết xuất trên 3,0 g bột dƣợc liệu rễ khổ sâm bắc với các dung môi methanol, ethanol 96%, ethanol 70% và ethanol 40%, tiến hành chiết siêu âm trong 1 h và lặp lại 3 lần cho mỗi mẫu. Các dịch chiết đƣợc lọc qua giấy lọc và gộp lại, cô thành cắn, cân khối lƣợng và kiểm tra trên SKLM với hệ dung môi chloroform – methanol – amoniac (50:10:3) [33]. Lựa chọn dung môi chiết xuất dựa trên đánh giá sắc ký đồ SKLM có các vết rõ, phát hiện bằng thuốc thử đặc trƣng của flavonoid, ít tạp chất, đồng thời sử dụng dung môi ít độc.

Tinh chế bằng HPLC điều chế Khảo sát các phân đoạn

Các phân đoạn chứa 2 – 3 chất chính thu đƣợc từ sắc ký cột pha thuận ở trên đƣợc cân khoảng 5 mg rồi hòa tan trong dung môi phù hợp, lọc qua màng lọc 0,45 µm để khảo sát trên HPLC phân tích với điều kiện sắc ký tham khảo [33] nhƣ sau: Hệ thống sắc ký: Hệ thống HPLC phân tích, đầu dò PDA. 14

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

Bản chất pha tĩnh: pha đảo với bản chất hạt là silica gel C-18

Chương trình pha động: acetonitril – nƣớc, có thể thay đổi phù hợp với điều kiện phân tích.

Bước sóng phát hiện: 210 nm

Tốc độ dòng: 1 ml/phút

Nhiệt độ cột: nhiệt độ phòng.

TR ẦN

Sắc ký điều chế các phân đoạn chứa 2 – 3 chất chính trên HPLC điều chế

10 00

Dựa trên điều kiện sắc ký điều chế đã đƣợc thăm dò, tiến hành điều chế các phân đoạn trên, thu dịch rửa giải theo sắc ký đồ, cô quay thu đƣợc cắn. Cắn sau đó đƣợc sấy chân không ở 40oC, 40 mbar, cân khối lƣợng và tiếp tục thực hiện các phƣơng pháp đánh giá.

-H

Quy trình phân lập flavonoid từ khổ sâm bắc đƣợc tiến hành Sơ đồ 3.1.

-L

Ngấm kiệt với dung môi Cô quay thu hồi dung môi

ÁN

Khổ sâm bắc

Cao toàn phần

Các phân đoạn

Sắc ký cột pha thuận Kết hợp HPLC điều chế

Sơ đồ 3.1. Quy trình tổng quát phân lập flavonoid từ rễ khổ sâm bắc

IỄ N

ÀN

Sắc ký cột pha thuận

Các flavonoid

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Hòa tan một lƣợng từng phân đoạn trên vào dung môi phù hợp để có dung dịch nồng độ khoảng 20 mg/ml. Từ kết quả khảo sát trên HPLC phân tích, tiến hành thăm dò điều kiện sắc ký trên HPLC điều chế về chƣơng trình pha động và thể tích tiêm mẫu với bản chất pha t nh là pha đảo silica gel C-18, bƣớc sóng phát hiện ở 210 nm.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Hoàn chỉnh điều kiện sắc ký phân đoạn chứa 2-3 chất chính trên HPLC điều chế

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Tiến hành sắc ký dung dịch chứa phân đoạn 2 - 3 chất chính, ghi nhận sắc ký đồ.

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

3.2.2. Kiểm tra độ tinh khiết và xác định cấu trúc chất phân lập

Cân chính xác khoảng một lƣợng chất phân lập vào bình định mức 5 ml hòa tan trong dung môi phù hợp, điền dung môi đến vạch, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Dùng các mẫu thử này cho các thí nghiệm kiểm tra độ tinh khiết:

3.2.2.1. Kiểm tra độ tinh khiết

Điều kiện HPLC phân tích

TR ẦN

Bằng phƣơng pháp HPLC-PDA

Hệ thống sắc ký: hệ thống HPLC phân tích, đầu dò PDA.

Cột sắc ký: cột HPLC pha đảo silica gel C-18

Tốc độ dòng: 1 ml/phút

10 00

Chương trình pha động: acetonitril – nƣớc dựa trên tài liệu tham khảo [33] có thể thay đổi phù hợp với điều kiện phân tích.

-H

Nhiệt độ cột: nhiệt độ phòng.

Ghi nhận sắc ký đồ, sắc ký đồ 3 chiều và kiểm tra độ tinh khiết peak chính.

-L

3.2.2.2. Xác định cấu trúc chất phân lập

ÁN

Sau khi kiểm tra độ tinh khiết, các chất phân lập đƣợc tiến hành xác định cấu trúc thông qua các phƣơng pháp phổ nghiệm: Đo quang phổ tử ngoại khả kiến UV – Vis Đo quang phổ hồng ngoại IR Đo khối phổ MS Đo phổ cộng hƣởng từ hạt nhân NMR.

IỄ N

ÀN

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Cân chính xác khoảng 1,0 mg chất phân lập vào chén cân của máy đo nhiệt quét vi sai. Tiến hành đo mẫu theo chƣơng trình nhiệt phù hợp. Ghi nhận điểm nóng chảy và thông số độ tinh khiết của mẫu.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Bằng phƣơng pháp phân tích nhiệt quét vi sai (DSC)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Kiểm tra độ tinh khiết mỗi chất phân lập bằng 3 hệ dung môi có độ phân cực khác nhau, phát hiện bằng thuốc thử phù hợp [33].

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Bằng SKLM

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

3.2.3.1. Xây dựng quy trình xác định hàm lượng các chất phân lập

Xây dựng quy trình xác định hàm lƣợng các chất phân lập bằng phƣơng pháp quy về phần trăm diện tích peak HPLC

3.2.3. Xây dựng quy trình xác định hàm lƣợng chất phân lập bằng phƣơng pháp HPLC quy về phần trăm diện tích peak

Điều kiện HPLC

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Chương trình pha động: acetonitril – nƣớc dựa trên tài liệu tham khảo [33] có thể thay đổi phù hợp với điều kiện phân tích.

TR ẦN

Tốc độ dòng: 1 ml/phút

10 00

Nhiệt độ cột: nhiệt độ phòng

Lựa chọn bước sóng phát hiện: dựa trên quang phổ hấp thu UV-Vis của chất, chọn bƣớc sóng hấp thu cực đại đặc trƣng của chất làm bƣớc sóng phát hiện.

-H

Tiến hành sắc ký dung dịch mẫu thử với điều kiện HPLC đã thăm dò, ghi lại sắc ký đồ, thông số sắc ký, xác định hàm lƣợng chất phân lập dựa trên phần trăm diện tích peak chính tƣơng ứng với chất phân lập trên tổng diện tích các peak trên sắc ký đồ mẫu thử.

-L

Thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng chất phân lập bằng phƣơng pháp quy về phần trăm diện tích peak HPLC

ÁN

Tính tương thích hệ thống

Tiến hành sắc ký 6 lần cùng một dung dịch mẫu thử, ghi lại sắc ký đồ và xác định thời gian lƣu, diện tích peak chính, số đ a lý thuyết và hệ số kéo đuôi.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Cột sắc ký: cột HPLC pha đảo silica gel C-18

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Hệ thống sắc ký: hệ thống sắc ký lỏng HPLC phân tích với đầu dò PDA

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Xử lý mẫu: cân chính xác khoảng một lƣợng chất phân lập vào bình định mức, hòa tan vào dung môi phù hợp, điền dung môi đến vạch, lọc qua màng lọc 0,45 µm.

IỄ N

ÀN

Yêu cầu:

- Độ lệch chuẩn tƣơng đối (RSD%) của thời gian lƣu peak chính không quá 1,0%. - Độ lệch chuẩn tƣơng đối (RSD%) của diện tích peak chính không quá 2,0%. - Hệ số kéo đuôi: 0,8 , số đ a lý thuyết N≥5000 [34]. Độ đặc hiệu

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

Yêu cầu:

10 00

Xác định phƣơng trình hồi quy ŷ = ax + b.

Sử dụng trắc nghiệm t để kiểm tra ý ngh a của các hệ số trong phƣơng trình

-H

- Nếu | | < t0,05 : Hệ số b không có ý ngh a thống kê. - Nếu | | > t0,05 : Hệ số b có ý ngh a thống kê. Sử dụng trắc nghiệm F để kiểm tra tính thích hợp của phƣơng trình hồi quy

ÁN

-L

- Nếu F < F0,05 : Phƣơng trình hồi quy không tƣơng thích. - Nếu F > F0,05 : Phƣơng trình hồi quy tƣơng thích. [34].

Đánh giá hệ số tƣơng quan R2. Yêu cầu: R2 Độ chính xác

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Khảo sát sự tƣơng quan giữa nồng độ và diện tích đỉnh của chất phân tích: chuẩn bị 5 dung dịch có nồng độ 60%, 80%, 100%, 120% và 140% nồng độ định lƣợng, tiến hành sắc ký các dung dịch, ghi lại sắc ký đồ và xác định đáp ứng peak. Xác định phƣơng trình hồi quy, hệ số tƣơng quan tuyến tính giữa nồng độ chất phân tích có trong mẫu và đáp ứng peak thu đƣợc trên các sắc ký đồ bằng phƣơng pháp bình phƣơng tối thiểu:

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Đường tuyến tính

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

- Sắc ký đồ của mẫu trắng không xuất hiện peak ở trong khoảng thời gian lƣu tƣơng ứng với thời gian lƣu của chất cần phân tích. Nếu có đáp ứng peak phải ≤ 2.0% so với đáp ứng píc của mẫu thử - Trên sắc ký đồ dung dịch thử nếu xuất hiện thêm các peak khác (peak tạp) không phải peak của chất cần phân tích, thì peak của chất cần phân tích phải tách hoàn toàn khỏi các peak tạp và đáp ứng các yêu cầu chung của phƣơng pháp sắc ký lỏng đƣợc quy định trong dƣợc điển [34].

Tiến hành sắc ký mẫu trắng và mẫu thử theo quy trình phân tích, ghi lại sắc ký đồ, xác định thời gian lƣu của peak chính.

IỄ N

ÀN

Độ lặp lại

Tiến hành xác định hàm lƣợng 6 mẫu thử độc lập, xác định diện tích peak chính và hàm lƣợng chất phân tích bằng phần trăm diện tích peak chính trên tổng diện tích các peak của sắc ký đồ. Xử lý thống kê, xác định độ lệch chuẩn tƣơng đối. Yêu cầu: Giá trị RSD (%) của diện tích peak chính và kết quả định lƣợng hàm lƣợng chất phân tích có trong các mẫu ≤ 2.0%. Các trƣờng hợp giá trị RSD > 2.0%, cần phải có sự giải thích phù hợp [34] 18

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

Tiến hành xác định hàm lƣợng nhƣ độ lặp lại trên 6 mẫu thử độc lập nhƣng khác ngày và khác hệ thống phân tích. Xác định giá trị trung bình và giá trị RSD (%) của diện tích peak và hàm lƣợng chất phân tích có trong các mẫu ở các ngày khác nhau. Xác định mức độ sai khác kết quả định lƣợng giữa 2 ngày.

Độ chính xác trung gian

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Sau khi đề tài đã phân lập đƣợc các chất, đã đƣợc xác định cấu trúc và xác định hàm lƣợng theo phƣơng pháp quy về phần trăm diện tích peak HPLC, tiếp tục sử dụng các chất mới đƣợc phân lập này nhƣ chất đối chiếu để sơ bộ xác định hàm lƣợng các chất này trong dƣợc liệu rễ khổ sâm. 3.2.4.1. Khảo sát phương pháp xử lý mẫu

10 00

Tiến hành chiết xuất với 7 mẫu bột dƣợc liệu (mỗi mẫu cân chính xác khoảng 3,0 g), với dung môi chiết, thể tích và số lần chiết đƣợc trình bày trong. Dịch chiết đƣợc lọc qua giấy lọc, cô đến cắn và cân khối lƣợng.

Bảng 3.4. Dung môi chiết, thể tích và số lần chiết các mẫu dƣợc liệu

IỄ N

ÀN

ÁN

Dung môi Ethanol 96%/ acid acetic 1% Ethanol 96%/ acid acetic 1% Ethanol 96% Ethanol 70% Ethanol 40% Methanol Methanol

-H Ý

-L

Mẫu E1 E2 E3 E4 E5 M1 M2

Thể tích dung môi (ml) x số lần 30 x 4 30 x 4 30 x 4 30 x 4 30 x 4 30 x 4 30 x 4

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

3.2.4. Sơ bộ xác định hàm lƣợng chất phân lập trong dƣợc liệu rễ khổ sâm

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Đ ẠO

Dựa trên quy trình đã đƣợc thẩm định, tiến hành xác định hàm lƣợng hợp chất phân lập đƣợc bằng phƣơng pháp quy về phần trăm diện tích peak HPLC.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

3.2.3.2. Xác định hàm lượng hợp chất phân lập

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Yêu cầu: Giá trị RSD (%) diện tích peak chính và kết quả định lƣợng của mỗi ngày (n=6) ≤ 2.0% và của cả hai ngày (n=12) phải ≤ 2.0% [34].

Mẫu thử - Cắn đƣợc hòa tan trong methanol vào bình định mức 20 ml điền dung môi methanol đến vạch, lắc đều, hút 2 ml dịch trên cho vào bình định mức 10 ml, điền dung môi methanol đến vạch, lắc đều. - Riêng mẫu cắn E2 và M2 đƣợc phân tán vào 30 ml dung dịch acid acetic 1% và lắc phân bố với từng 50 ml thể tích ethyl acetate (4 lần), dịch ethyl acetate đƣợc cô đến cắn, cân khối lƣợng và hòa tan cắn trên trong methanol vào bình định mức 19

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

-L

Hàm lƣợng chất phân lập/cắn (%) =

IỄ N

ÀN

ÁN

Trong đó, mĐC: khối lƣợng chất đối chiếu đã cân (mg) mthử: khối lƣợng dƣợc liệu ban đầu (mg) mcắn: khối lƣợng cắn thu đƣợc sau khi cô khô dịch chiết (mg) SĐC: diện tích đỉnh tƣơng ứng với đỉnh chất cần định lƣợng thu đƣợc từ mẫu đối chiếu (mAU.s). Sthử: diện tích đỉnh tƣơng ứng với đỉnh chất cần định lƣợng thu đƣợc từ mẫu thử (mAU.s) %TKĐC: độ tinh khiết sắc ký của chất phân lập đƣợc làm chất đối chiếu Dthử, DĐC: độ pha loãng của mẫu thử và mẫu đối chiếu

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

-H

Hàm lƣợng chất phân lập/dƣợc liệu (%) =

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

10 00

Tiến hành định lƣợng mỗi mẫu thử với điều kiện sắc ký trên, mỗi mẫu thực hiện 2 lần tiêm. Ghi nhận sắc ký đồ, thời gian lƣu peak cần định lƣợng, diện tích peak. Tính toán kết quả hàm lƣợng chất phân lập trong dƣợc liệu và trong cắn thu đƣợc theo công thức:

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Tiến hành định lƣợng sơ bộ

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

20 ml điền dung môi methanol đến vạch, hút 2 ml dịch trên cho vào bình định mức 10ml, điền dung môi methanol đến vạch, lắc đều. - Lọc dịch từ các bình định mức 10ml qua màng lọc 0,45 µm. Mẫu đối chiếu - Pha dung dịch mẫu đối chiếu với nồng độ định lƣợng trong dung môi methanol, lọc qua màng lọc 0,45 µm. 3.2.4.2. Tiến hành định lượng sơ bộ chất phân lập trong dược liệu bằng HPLC Điều kiện sắc ký: dựa trên tài liệu tham khảo [33] về hệ thống sắc ký, cột sắc ký, chƣơng trình pha động, tốc độ dòng, bƣớc sóng phát hiện,... có thể điều chỉnh cho phù hợp với điều kiện phân tích. Tính tƣơng thích hệ thống Tiêm lặp lại 6 lần cùng một dung dịch mẫu đối chiếu. Khảo sát các thông số: thời gian lƣu, diện tích peak chính, số đ a lý thuyết và hệ số kéo đuôi. Yêu cầu: - Độ lệch chuẩn tƣơng đối (RSD%) của thời gian lƣu peak chính không quá 1,0%. - Độ lệch chuẩn tƣơng đối (RSD%) của diện tích peak chính không quá 2,0%. - Hệ số kéo đuôi: 0,8 , số đ a lý thuyết N≥5000.

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

CHƢƠNG 4.

Kết quả và bàn luận

KẾT QUẢ & BÀN LUẬN

4.1. Chiết xuất, phân lập và tinh chế flavonoid

4.1.1. Khảo sát dung môi chiết xuất

(d)

(b)

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

B 10 00 A Ó -H Ý -L ÁN TO ÀN Đ

IỄ N

(a)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

(c)

474,7 379,0 621,6 878,1

30 x 4 30 x 4 30 x 4 30 x 4

Khối lƣợng cắn (mg)

TR ẦN

3,0019 3,0567 3,0861 3,0607

Tỷ lệ % cắn/khối lƣợng dƣợc liệu 15,67 12,40 20,14 28,69

Methanol Ethanol 96% Ethanol 70% Ethanol 40%

http://daykemquynhon.ucoz.com

Khối lƣợng dƣợc liệu (g)

Mẫu

Thể tích dung môi (ml) x số lần

H Ư

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Bảng 4.5. Khối lƣợng cắn thu đƣợc với các dung môi chiết khác nhau

Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.5 và Hình 4.4.

Hình 4.4. Kết quả sắc ký lớp mỏng của khảo sát chiết

Chú thích

- (a) Đèn UV 254 nm; (b) Đèn UV 365 nm; (c) H2SO4 10%/cồn, 105 oC; (d) dung dịch FeCl3 5%/cồn. - MeOH, E96%, E70%, E40%: lần lƣợt là dung môi chiết xuất methanol, ethanol 96%, ethanol 70%, ethanol 40%.

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Kết quả và bàn luận

10 00

4.1.3.1. Sắc ký cột thuận cao ethanol toàn phần

Từ 302 g cao ethanol toàn phần tiến hành sắc ký cột silica gel pha thuận (15,0 cm x 6,5 cm) với các dung môi có độ phân cực tăng dần thu đƣợc 7 phân đoạn (vẫn còn tiếp tục).

-H

Bảng 4.6. Các phân đoạn sắc ký cột từ cao ethanol toàn phần

I II III IV V VI VII

Dung môi rửa giải

Khối lƣợng cắn (g)

Hexane

3,19 3,59 3,30 2,16 0,75 0,55

Chloroform

Dichloromethane

Các phân đoạn này đƣợc kiểm tra bằng SKLM với hệ dung môi sắc ký CHCl3 – CH3OH – NH3 (50:10:3). Kết quả đƣợc trình bày trong Hình 4.5.

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

Phân đoạn

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

4.1.3. Phân lập các flavonoid

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

4,05 kg dƣợc liệu rễ khô khổ sâm bắc đƣợc làm ẩm với 1,6 lít ethanol 96%, thêm 3,8 lít ethanol 96% vào bình ngấm kiệt để ngâm trong 30 giờ. Sau đó rút dịch chiết với tốc độ 3 ml/phút đến khi thu đƣợc 22,3 lít dịch chiết thì ngƣng thêm dung môi, tiến hành rút hết dịch chiết trong bình ngấm kiệt và ép bã rồi trộn dịch thu đƣợc với dịch chiết trên để thu đƣợc 23,6 lít dịch chiết. Cô quay thu hồi dung môi thu đƣợc 903 g cao ethanol toàn phần.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Đ ẠO

4.1.2. Chiết xuất cao rễ khổ sâm bắc

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Nhận xét: tỷ lệ khối lƣợng cắn /khối lƣợng dƣợc liệu của các dung môi giảm dần từ ethanol 40% đến ethanol 96%, dung môi methanol có tỷ lệ cắn/dƣợc liệu gần bằng ethanol 96%, tuy nhiên số vết phát quang trong UV 365 nm và bằng thuốc thử FeCl3 của ethanol 40% ít hơn các dung môi còn lại (Hình 4.4), có thể tỷ lệ cắn/ dƣợc liệu ở ethanol 40% và 70% là do các tạp phân cực nhƣ nhựa, đƣờng,... Từ đánh giá thực nghiệm trên cho thấy dung môi methanol và ethanol 96% cho kết quả tốt nhất, mặc dù methanol có tỷ lệ cắn/dƣợc liệu cao hơn chứng tỏ cho lƣợng chất chiết xuất đƣợc tốt hơn nhƣng do yêu cầu dung môi chiết ít độc, rẻ tiền nên đề tài sử dụng ethanol 96% làm dung môi chiết xuất.

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Kết quả và bàn luận

(b) UV 254nm

10 00

(d) Thuốc thử FeCl3 5%/ethanol

Hình 4.5. Sắc ký lớp mỏng các phân đoạn từ sắc ký cột cao ethanol toàn phần

-H

Chú thích

-L

- I – VII: phân đoạn cột từ cao ethanol toàn phần. - TP: cao ethanol toàn phần.

ÁN

4.1.3.2. Sắc ký cột pha thuận phân đoạn IV

IỄ N

ÀN

Từ kết quả sắc ký cột cao ethanol, nhận thấy phân đoạn IV có 2 vết tắt quang lớn và hiện màu đỏ cam với thuốc thử H2SO4 10% và hiện màu đen với thuốc thử FeCl3, đồng thời phân đoạn này chứa ít vết phụ nhất nên nhóm nghiên cứu đã lựa chọn phân đoạn này để tiếp tục phân lập. Từ 3,30 g cao phân đoạn IV tiến hành sắc ký cột với pha t nh là silica gel pha thuận (4 cm x 12 cm) và rửa giải bằng hệ dung môi chloroform – methanol (100:0 – 50:50) thu đƣợc 4 phân đoạn A, B, C, D. Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.7.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

(a) UV 365nm

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Bảng 4.7. Các phân đoạn sắc ký cột từ cao phân đoạn IV Tỷ lệ chloroform methanol 100:0 99:1 99:1 50:50

N N

104 898 1422 485

(d) FeCl3 5%/ethanol

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

A Ó -H Ý -L ÁN TO ÀN Đ

IỄ N D

(b) UV 365 nm

10 00

(a) UV 254 nm

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Các phân đoạn này đƣợc kiểm tra bằng SKLM (Hình 4.6) với hệ dung môi CHCl3 – CH3OH – NH3 (50:10:3)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

A B C D

Khối lƣợng cắn (mg)

Phân đoạn

Hình 4.6. Sắc ký lớp mỏng các phân đoạn từ sắc ký cột cao phân đoạn IV

Chú thích

- A-D: phân đoạn cao rửa giải từ cao phân đoạn IV toàn phần. - IV: cao phân đoạn IV toàn phần. Nhận xét: Từ kết quả sắc ký lớp mỏng nhận thấy phân đoạn C (1422 mg) chứa các vết chính trong cao phân đoạn IV và chứa ít tạp kém phân cực. 24

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

4.1.3.3. Tinh chế bằng sắc ký lỏng điều chế

Tham khảo điều kiện sắc ký dựa trên tài liệu tham khảo [33], khảo sát phân đoạn C trên HPLC phân tích nhƣ sau:

Khảo sát trên HPLC phân tích phân đoạn C

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

A Ó -H Ý -L ÁN TO ÀN Đ

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

10 00

Nƣớc (%) 60 60 20 60 60

Kết quả đƣợc trình bày trong Hình 4.7

IỄ N D

Acetonitrile (%) 40 40 80 40 40

Thời gian (phút) 0 15 30 40 50

TR ẦN

Bảng 4.8. Chƣơng trình pha động sắc ký phân đoạn C

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Mẫu phân tích: cân khoảng 5 mg phân đoạn C hòa tan trong khoảng 5 ml methanol, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Hệ thống sắc ký: Hệ thống sắc ký Shimadzu LC-2030C 3D, đầu dò PDA Cột sắc ký: Gemini NX-C18 (250 mm x 4,6 mm) Nhiệt độ cột: nhiệt độ phòng Thể tích tiêm: 5 µL Tốc độ dòng: 1 mL/phút Bước sóng phát hiện: 210 nm Pha động: acetonitrile – nƣớc rửa giải theo chƣơng trình Bảng 4.8.

Hình 4.7. Sắc ký đồ HPLC phân tích phân đoạn C

Nhận xét: Phân đoạn C (1422 mg) chứa 3 đỉnh chính trên sắc ký đồ HPLC phân tích (Hình 4.7) và các đỉnh này tách nhau hoàn toàn nên có thể sử dụng điều kiện pha đảo và hệ dung môi acetonitrile - nƣớc để tiến hành sắc ký điều chế. Hoàn chỉnh điều kiện sắc ký phân đoạn C trên HPLC điều chế 25

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Kết quả và bàn luận

40 40 60 40 40 50 50 40 40 60 60 40 40 55 55 50 50 40 55 55 40 40 65 40 40

100 µL

1000 µL

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

H Ư

TR ẦN B

60 60 40 60 40 50 50 60 60 40 40 60 60 45 45 50 50 60 45 45 60 60 35 60 60

Thể tích tiêm

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

0 15 30 40 50 0 10 20 22,5 27,5 32,5 37,5 42,5 57,5 67,5 72,5 77,5 0 50 55 62,5 70 80 90 110

Nƣớc (%)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Acetonitrile (%)

Thời gian (phút)

10 00

http://daykemquynhon.ucoz.com

Điều kiện

Bảng 4.9. Các thông số thăm dò điều kiện sắc ký HPLC điều chế phân đoạn C

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Từ điều kiện HPLC phân tích, tiến hành hoàn chỉnh điều kiện sắc ký trên HPLC điều chế pha đảo. Mẫu thử: Hòa tan 1393 mg phân đoạn C vào 50 ml methanol (HPLC), lọc qua màng lọc 0,45 µm. Hệ thống sắc ký: hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao điều chế Shimadzu LC-20AP, đầu dò UV SPD-20A. Cột sắc ký: Agilent Prep – C18 (21,2 mm x 250 mm) 10 µm. Bước sóng phát hiện: 210 nm. Chương trình pha động: acetonitrile – nƣớc theo Bảng 4.9 Tốc độ dòng: 7,0 mL/phút Kết quả đƣợc trình bày trong Hình 4.8

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Kết quả và bàn luận

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

ÁN

Nhận xét :

IỄ N

ÀN

- Điều kiện 1: thời gian phân tích chƣa đủ để ghi nhận tín hiệu của peak thứ 3, peak 1 không tách hoàn toàn khỏi peak tạp. - Điều kiện 2: thời gian phân tích ghi nhận đƣợc các peak nhƣ đã khảo sát, peak 1 đã tách hoàn toàn khỏi peak tạp, peak thứ 2 và 3 chƣa tách nhau. - Điều kiện 3: thời gian phân tích ghi nhận đƣợc các peak nhƣ đã khảo sát, các peak tách nhau hoàn toàn, các dịch thu đƣợc tƣơng ứng với peak 1 và peak 2 trên sắc ký đồ đƣợc kiểm tra trên HPLC phân tích, nhận thấy các phân đoạn thu đƣợc từ sắc ký điều chế cho 1 đỉnh duy nhất trên sắc ký đồ HPLC phân tích, kết quả đƣợc trình bày trong Hình 4.9.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

A Ó -H Ý

-L

Hình 4.8. Sắc ký đồ thăm dò điều kiện HPLC điều chế phân đoạn C

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

(c)

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

(b)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

(a)

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

AcCN-H2O (%)

0 25

40-60 40-60

Thời gian (phút)

AcCN-H2O (%)

0 15 25 30

40-60 80-20 40-60 40-60

Thời gian (phút)

N Y

10 00

Chú thích

Điều kiện sắc ký: hệ thống sắc ký Shimadzu LC-2030C 3D, cột sắc ký Gemini NXC18 (250 mm x 4,6 mm), tốc độ dòng 1 mL/phút, thể tích tiêm 50 µL, chƣơng trình rửa giải acetonitrile – nƣớc (nhƣ trên hình), bƣớc sóng phát hiện 200 nm.

-H

 Nhóm nghiên cứu sử dụng chƣơng trình pha động theo điều kiện 3 để tiến hành sắc ký điều chế phân đoạn C.

-L

Sắc ký điều chế phân đoạn C

ÁN

Tiến hành sắc ký điều chế phân đoạn C (20 mg/mL) với chƣơng trình pha động theo điều kiện 3 (Bảng 4.9).

IỄ N

ÀN

Điều kiện sắc ký HPLC điều chế

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Hình 4.9. Sắc ký đồ khảo sát peak 1 và 2 trên HPLC phân tích

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TR ẦN

(peak 2) Rt=11,796

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

(peak 1) Rt=10,440

Hệ thống sắc ký: hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao điều chế Shimadzu LC-20AP, đầu dò UV SPD-20A. Cột sắc ký: Agilent Prep – C18 (21,2 mm x 250 mm) 10 µm. Thể tích các mũi tiêm: 1000µL Bước sóng phát hiện: 210 nm Chương trình pha động: acetonitrile – nƣớc theo Bảng 4.9 (điều kiện 3) Tốc độ dòng: 7,0 mL/phút 28

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Kết quả và bàn luận

TR ẦN

4.2. Kiểm tra độ tinh khiết và xác định cấu trúc hợp chất phân lập 4.2.1. Đánh giá hợp chất SF1 đã phân lập

4.2.1.1. Kiểm tra độ tinh khiết hợp chất SF1

10 00

Cân chính xác khoảng 5 mg hợp chất SF1 vào bình định mức (BĐM) 5 ml thêm khoảng 2 ml methanol, lắc đều, điền đủ bằng methanol, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Dùng mẫu thử này cho các thí nghiệm kiểm tra độ tinh khiết.

-H

Bằng sắc ký lớp mỏng

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

Thực hiện định tính mẫu thử SF1 bằng SKLM trên bảng silica gel 60 F254 khai triển với 3 hệ dung môi có độ phân cực khác nhau.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Hứng dịch rửa giải theo sắc ký đồ (Hình 4.10), thu đƣợc các chất tƣơng ứng với các đỉnh ở 26,8 phút và 58,1 phút, cô quay đến cắn thu đƣợc tƣơng ứng 316 mg hợp chất SF1 và 91 mg hợp chất SF2

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Hình 4.10. Sắc ký đồ HPLC điều chế phân đoạn C

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

(a)

(b)

(c)

Hình 4.11. Kết quả định tính SF1 bằng sắc ký lớp mỏng

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Thực hiện phƣơng pháp phân tích nhiệt quét vi sai với khoảng 1,1 mg hợp chất SF1 cho kết quả độ tinh khiết cao (94,10%) và nhiệt độ nóng chảy 201,74 oC (PHỤ LỤC 1)

H Ư

TR ẦN

Bằng phƣơng pháp HPLC – PDA

Hệ thống sắc ký: Hệ thống sắc ký Shimadzu LC-2030C 3D, đầu dò PDA

10 00

Cột sắc ký: Gemini NX-C18 (250 mm x 4,6 mm)

Thể tích tiêm: 20 µL

Nhiệt độ cột: nhiệt độ phòng

-H

Mẫu thử: nồng độ 1 mg/ml, trong methanol.

Tốc độ dòng: 1 mL/phút

-L

Bước sóng phát hiện: 200nm

IỄ N

ÀN

ÁN

Pha động: acetonitrile - nƣớc theo Bảng 4.10 Bảng 4.10. Chƣơng trình pha động định tính SF1

Thời gian (phút) 0 5 18 20 45

Acetonitrile (%) 30 30 45 30 30

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Phƣơng pháp phân tích nhiệt quét vi sai (DSC)

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

 Hợp chất SF1 tinh khiết sơ bộ trên SKLM.

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Nhận xét: Từ kết quả kiểm tra độ tinh khiết bằng sắc ký lớp mỏng với 3 hệ dung môi có độ phân cực khác nhau cho thấy hợp chất SF1 hiển thị 1 vết duy nhất.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

(a) Hệ dung môi SKLM: hexane – ethyl acetate (4:6), phát hiện lần lƣợt bằng đèn UV 254 nm; H2SO4 10%/ethanol, 105 oC; đèn UV 365 nm. (b) Hệ dung môi SKLM: chloroform – methanol – amoniac (50:10:3), phát hiện lần lƣợt bằng đèn UV 254 nm; H2SO4 10%/ethanol, 105 oC; đèn UV 365 nm. (c) Hệ dung môi SKLM: dichloromethane – acetone (5:3), phát hiện lần lƣợt bằng đèn UV 254 nm; H2SO4 10%/ethanol, 105 oC; đèn UV 365 nm.

Chú thích

Nƣớc (%) 70 70 55 70 70

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Kết quả và bàn luận

Hình 4.12. Sắc ký đồ định tính bằng HPLC hợp chất SF1 phân lập

-H

10 00

Chú thích:(a) Sắc ký đồ 2 chiều; (b) Sắc ký đồ 3 chiều; (c) Kiểm tra tinh khiết peak Nhận xét: Sắc ký đồ định tính bằng HPLC hợp chất SF1 chứa một đỉnh chính có độ tinh khiết cao ở thời gian lƣu khoảng 19 phút. Từ kết quả SKLM và HPLC phân tích sơ bộ nhận xét chất SF1 tƣơng đối tinh khiết, có thể tiến hành các phƣơng pháp phổ nghiệm để xác định cấu trúc.

IỄ N

ÀN

ÁN

Phổ UV

-L

4.2.1.2. Xác định cấu trúc hợp chất SF1

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

G N TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

(c)

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

(b)

Đ ẠO

(a)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Hình 4.13. Phổ UV hợp chất SF1

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Nhận xét: Phổ UV hợp chất SF1 cho đỉnh hấp thu cực đại tại 200,86 nm và 287,94 nm gợi ý cấu trúc SF1 có nối đôi liên hợp.

Hình 4.15. Phổ ESI-MS của hợp chất SF1 phân lập

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

Khối phổ MS

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

Nhận xét: Từ phổ hấp thu hồng ngoại IR hợp chất SF1, nhận thấy có các vân hấp thu đặc trƣng cho các nhóm chức nhƣ O-H tại 3391,58 cm-1, C=O tại 1644,83 cm-1 và C-O-C tại 1093,12 cm-1.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

TR ẦN

Hình 4.14. Phổ hấp thu hồng ngoại IR hợp chất SF1

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Phổ hồng ngoại IR

Bảng 4.11. Bảng so sánh số khối lý thuyết và số khối chất SF1

Peak ion

Lý thuyết

Chất SF1

Độ lệch (ppm)

[M+H]+

355,1540

355,1524

4,51

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

IỄ N

ÀN

ÁN

Dữ liệu phổ cộng hƣởng từ hạt nhân của hợp chất SF1 đƣợc so sánh trùng khớp với dữ liệu phổ của hợp chất (2S)-7,4’-dihydroxy-5-methoxy-(γ,γ-dimethylallyl)flavanone (hay có tên gọi khác là isoxanthohumol) đã từng đƣợc phân lập và biện giải cấu trúc (Bảng 4.12) [35].

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

-L

-H

Phổ 13C-NMR của SF1 phân lập đo ở 125 MHz trong dung môi DMSO- d6 cho thấy hợp chất SF1 có 21 carbon và theo kỹ thuật phổ DEPT cho thấy SF1 có 3 carbon bậc 1, 2 bậc 2, 7 bậc 3 và 9 bậc 4. Carbon C-4 cũng là Cmax và ở độ dời hóa học 188,1 ppm gợi ý khung cấu tạo của SF1 là một flavanon.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân NMR (PHỤ LỤC 2 - PHỤ LỤC 6) Nhận xét: Phổ 1H-NMR của SF1 đo trong dung môi DMSO-d6 ở 500 MHz Error! Reference source not found.cho các tín hiệu proton đặc trƣng: - 3 tín hiệu proton có tích phân 3 ở vị trí 1,54 ppm (3H, s), 1,59 ppm (3H, s) và 3,70 ppm (3H, s) đặc trƣng cho các proton của nhóm methyl ở vị trí lần lƣợt là H-4”, H-5’’ và proton của nhóm methoxy. - 2 tín hiệu proton tích phân 2 có độ dời hóa học ở vùng thơm 7,28 ppm (2H, dd, J=8,5 Hz) và 6,78 ppm (2H, dd, J=8,5 Hz) cho hằng số ghép 8,5 Hz đặc trƣng cho 4 proton ghép kiểu ortho với nhau trên vòng phenyl B mang một nhóm thế vị trí 4’ do đó có thể gán lần lƣợt cho proton ở vị trí H-2’, H-6’ và H-3’, H-5’. - 1 tín hiệu proton tích phân 1 có độ dời hóa học ở vùng thơm 6,14 ppm (1H, s) cho đỉnh singlet rõ (không ghép với proton nào khác) cho biết có 3 vị trí trên vòng A đã bị thế, đồng thời tại vùng trƣờng rất thấp có đỉnh broad singlet tại 10,37 ppm (1H, br s) gợi ý cho sự có mặt của OH trên vòng A tại vị trí C-5 do tạo đƣợc liên kết hydro với oxy của nhóm carbonyl C-4. - Tín hiệu proton ở 5,10 ppm (1H, tt, J=1,5 Hz; J=7,0 Hz) cho đỉnh triplet của triplet tƣơng ứng với H tại C-2’’ đặc trƣng của nhánh isoprenyl do ghép với cùng lúc 2 proton của C-1’’ có độ dời hóa học tại vị trí 3,12 ppm (2H, d, J=7,0 Hz).

Nhận xét: phổ ESI – MS của hợp chất SF1 cho các peak ion có m/z trùng khớp với số liệu lý thuyết của công thức phân tử dự đoán C21H22O5.

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Bảng 4.12. Bảng so sánh phổ 13C-NMR (125MHz, DMSO-d6, ppm và 1H-NMR (500MHz, DMSO-d6, ppm) của SF1 và isoxanthohumol

1H, s 2H, d, J=8,5Hz 2H, d, J=8,5Hz 2H, d, J=7,0Hz 1H, tt, J=1,5Hz; J=7,0Hz 3H, s 3H, s 3H, s

188,1 159,6 92,7 161,5 107,4 161,3 104,5 129,6 127,7 115 157,3 21,5 122,8 129,9 25,4 17,8 55,3

TR ẦN

10 00

A Ó

-H

6,14 7,28 6,78 3,12 5,09 1,54 1,58 3,70

ÁN TO

IỄ N

ÀN

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

6,14 7,28 6,78 3,12 5,10 1,54 1,59 3,70

2,92

1H, dd, J=3,0Hz; 12,4Hz 1H, dd, J=3,0Hz; 16,4Hz 1H, dd, J=12,4Hz; 16,4Hz 1H, s 2H, d, J=8,6Hz 2H, d, J=8,6Hz 2H, br d, J=7,1Hz 1H, tt, J=1,3; 7,1Hz 3H, br s 3H, br s 3H, s

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

188,2 159,6 92,7 161,5 107,4 161,3 104,5 129,9 127,8 115 157,3 21,4 122,8 129,6 25,5 17,5 55,3

4 5 6 7 8 9 10 1' 2'6' 3'5' 4' 1'' 2'' 3'' 4'' 5'' OMe

44,6

1H, dd, J=12,5Hz; 16,5Hz

2,92

44,6

5,31 2,57

77,8

1H, dd, J=3,0Hz; 12,5Hz 1H, dd, J=3,0Hz; 16,5Hz

5,31 2,57

Đ ẠO

77,8

Dạng phân đỉnh

Tích phân

C H (ppm) (ppm)

H Ư

H (ppm)

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Tích phân

C (ppm)

-L

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Vị trí C

Isoxanthohumol (DMSO-d6) [35]

Chất SF1 (DMSO-d6)

Hình 4.16. Cấu trúc hợp chất SF1 – isoxanthohumol

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Kết luận: Từ kết quả phổ nghiệm (UV, IR, MS, NMR) có thể xác định chất SF1 phân lập đƣợc là isoxanthohumol.

4.2.2. Đánh giá hợp chất SF2 đã phân lập

4.2.2.1. Kiểm tra độ tinh khiết hợp chất SF2

(b)

(c)

-H

(a)

-L

Hình 4.17. Kết quả định tính SF2 bằng SKLM

ÁN

Chú thích

IỄ N

ÀN

(a) Hệ dung môi SKLM: chloroform – acetone (19:4), phát hiện bằng đèn UV 254 nm; H2SO4 10%/ethanol, 105 oC; đèn UV 365 nm. (b) Hệ dung môi SKLM: hexane – ethyl acetate (4:6), phát hiện bằng đèn UV 254 nm; H2SO4 10%/ethanol, 105 oC; đèn UV 365 nm. (c) Hệ dung môi SKLM: Dichloromethane – Acetone (5:3), phát hiện bằng đèn UV 254 nm; H2SO4 10%/ethanol, 105 oC; đèn UV 365 nm.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Thực hiện định tính SF2 bằng SKLM trên bảng silica gel 60 F254 với 3 hệ dung môi có độ phân cực khác nhau.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Bằng SKLM

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Cân chính xác khoảng 1 mg hợp chất SF2 vào bình định mức (BĐM) 5 ml thêm khoảng 2 ml methanol, lắc đều, điền đủ bằng methanol, lọc qua màng lọc 0,45 µm. Dùng mẫu thử này cho các thí nghiệm kiểm tra độ tinh khiết.

Nhận xét: Từ kết quả định tính bằng sắc ký lớp mỏng với 3 hệ dung môi có độ phân cực khác nhau cho thấy hợp chất SF2 hiển thị 1 vết duy nhất.  Hợp chất SF2 tinh khiết sơ bộ trên SKLM 35

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Thực hiện phƣơng pháp phân tích nhiệt quét vi sai với khoảng 1,0 mg hợp chất SF1 cho kết quả độ tinh khiết cao (94,42%) và nhiệt độ nóng chảy 179,17 oC (PHỤ LỤC 7).

Bằng phƣơng pháp phân tích nhiệt quét vi sai (DSC)

Bằng HPLC – PDA

Cột sắc ký: Gemini NX-C18 (250 mm x 4,6 mm)

Thể tích tiêm: 20 µL

http://daykemquynhon.ucoz.com

Mẫu thử: nồng độ 0,2 mg/ml, đƣợc lọc qua màng lọc 0,45 µm.

TR ẦN

Bước sóng phát hiện: 200 nm

H Ư

Tốc độ dòng: 1 mL/phút Pha động: acetonitrile - nƣớc theo Bảng 4.13

10 00

Bảng 4.13. Chƣơng trình pha động định tính SF2

Nƣớc (%) 60 20 60 60

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

Thời gian (phút) Acetonitrile (%) 0 40 15 80 20 40 35 40

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Đ ẠO

Nhiệt độ cột: nhiệt độ phòng

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Hệ thống sắc ký: Hệ thống sắc ký Shimadzu LC-2030C 3D, đầu dò PDA

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Điều kiện sắc ký

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Kết quả và bàn luận

10 00

Chú thích:(a) Sắc ký đồ 2 chiều; (b)Sắc ký đồ 3 chiều (c) Kiểm tra tinh khiết peak Nhận xét: Sắc ký đồ định tính bằng HPLC hợp chất SF2 chứa một đỉnh chính có độ tinh khiết cao ở thời gian lƣu khoảng 12 phút.

-H

Từ kết quả SKLM và HPLC phân tích sơ bộ nhận xét chất SF2 tƣơng đối tinh khiết, có thể tiến hành các phƣơng pháp phổ nghiệm để xác định cấu trúc.

IỄ N

ÀN

ÁN

Phổ UV

-L

4.2.2.2. Xác định cấu trúc hợp chất SF2

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Hình 4.18. Sắc ký đồ định tính bằng HPLC hợp chất SF2 phân lập

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO G N TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

(c)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

(b)

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

(a)

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Hình 4.19. Phổ UV hợp chất SF2

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Nhận xét: Phổ UV hợp chất SF2 cho đỉnh hấp thu cực đại tại 198 nm và 292 nm gợi ý cấu trúc SF1 có nối đôi liên hợp.

ÀN

ÁN

-L

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

-H

10 00

Khối phổ MS

IỄ N D

TR ẦN

Nhận xét: Từ phổ hấp thu hồng ngoại IR hợp chất SF2, nhận thấy có các vân hấp thu đặc trƣng cho các nhóm chức nhƣ O-H tại 3271,43 cm-1, C=O tại 1633,43 cm-1 và C-O-C tại 1068,97 cm-1.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Hình 4.20. Phổ hồng ngoại hợp chất SF2

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Phổ hồng ngoại IR

Hình 4.21. Phổ ESI-MS của hợp chất SF2 phân lập Bảng 4.14 Bảng so sánh số khối lý thuyết và số khối chất SF2

Peak ion

Lý thuyết

Chất SF2

Độ lệch (ppm)

[M–H]-

423,1813

423,1812

0,24

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân NMR (PHỤ LỤC 8 - PHỤ LỤC 12)

Nhận xét : Phổ 1H-NMR của SF2 phân lập đo trong dung môi DMSO-d6 ở 500MHz cho các tín hiệu proton đặc trƣng:

Nhận xét : phổ ESI – MS của hợp chất SF2 cho các peak ion có m/z trùng khớp với số liệu lý thuyết của công thức phân tử dự đoán C25H28O6.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

Dữ liệu phổ cộng hƣởng từ hạt nhân của hợp chất SF2 đƣợc so sánh trùng khớp với dữ liệu phổ của hợp chất sophoraflavanone G đã từng đƣợc phân lập và biện giải cấu trúc (Bảng 4.15) [29].

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

-H

Nhận xét: Phổ 13C-NMR của SF2 phân lập đo ở 125MHz trong dung môi DMSOd6 cho thấy hợp chất SF2 có 25 carbon và theo kỹ thuật phổ DEPT cho thấy SF2 có 3 carbon bậc 1, 4 bậc 2, 7 bậc 3 và 11 bậc 4. Carbon C-4 cũng là Cmax và ở độ dời hóa học 197,1 ppm gợi ý khung cấu tạo của SF2 là một flavanon.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

- Tín hiệu proton với tích phân 1 có độ dời hóa học tại 12,10 ppm (1H, s) cho dạng phân đỉnh singlet đặc trƣng cho nhóm OH tại vị trí C-5 do tạo liên kết hydro với nhóm chức carbonyl C-4. - 3 tín hiệu proton với tích phân 1 có độ dời hóa học lần lƣợt 7,22 ppm (1H, d, J=8,5Hz), 6,34 ppm (1H, d, J=2Hz) và 6,27 ppm (1H, dd, J=2Hz, J=8,5Hz) tƣơng ứng với 3 proton của vòng B tại lần lƣợt các vị trí C-6’, C-3’ và C-5’, do đó vòng B có 2 vị trí tại C-2’ và C-4’ bị thế. - Tín hiệu proton tại 5,94 ppm (1H, s) đặc trƣng cho proton trên C-6 của vòng A, do đó vòng A bị thế tại các vị trí C-5, C-7 và C-8 đồng thời kỹ thuật phổ HMBC cho thấy nhóm lavandulyl đƣợc thế trên vị trí của C-8 do proton H-1’’ của nhánh lavandulyl có tƣơng tác với các carbon C-7, C-8 và C-9. - Các tín hiệu proton có tích phân 3 với độ dời hóa học ở 1,45 ppm (3H, s), 1,54 ppm (3H, s) và 1,58 ppm (3H, s) tƣơng ứng proton của các nhóm methyl trên nhánh lavandulyl và có thể đƣợc gán lần lƣợt với H-7’’, H-6’’ và H-10’’.

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Bảng 4.15. Bảng so sánh phổ 13C-NMR (125MHz, DMSO-d6, ppm và 1H-NMR (500MHz, DMSO-d6, ppm) của SF2 với phổ 13C-NMR (125MHz, DMSO-d6, ppm và 1H-NMR (300MHz, DMSO-d6, ppm) của sophoraflavanone G [29] Sophoraflavanone G (DMSO-d6) [29]

ÀN Đ IỄ N

110,8

10''

18,6

10 00

A Ó

197,1 161,1 95,1 164,8 106,4 160.7 101,6 115,8 155,4 102,3 158,3 106,3 127,6 26,5 46,3 30,7 123,3 130,6 25,4 17,5 147,8 110,7 18,6

5,94 6,34 6,27 7,22 2,46 2,41 1,94 4,91 1,54 1,45 4,49 4,57 1,58

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

2,63

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

9''

41,4

1H, d, J=2,2Hz 1H, dd, J=2,2Hz, 8,4Hz 1H, d, J=8,4Hz 2H, m 1H,m 2H, m 1H, m 3H, s 3H, s 1H, br s 1H, br s 3H, s

-H

5,92 6,33 6,25 7,20 2,42 2,38 1,90 4,85 1,53 1,43 4,46 4,53 1,57

-L

197,2 161,2 95,2 164,8 106,5 160,8 101,6 115,9 155,5 102,4 158,4 106,3 127,6 26,1 46,4 30,8 123,4 130,7 25,5 17,6 147,8

4 5 6 7 8 9 10 1' 2' 3' 4' 5' 6' 1'' 2'' 3'' 4'' 5'' 6'' 7'' 8''

3,11

TR ẦN

2,61

41,5

1H, dd, J=13Hz;2,5Hz 1H, dd, J=17Hz;13Hz 1H, dd, J=17Hz; 2,5Hz 1H, s 1H, d, J=2Hz 1H, dd, J=2Hz;8Hz 1H, d, J=8,5Hz 2H, m 1H,m 2H, m 1H, t, J=6,5Hz 3H, s 3H, s 1H, br s 1H, br s 3H, s

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

5,51

1H, dd, J=17,2Hz;13,2Hz 1H, dd, J=17,2Hz;2,8Hz 1H, s

73,8

1H, dd, J=13,2; 2,8Hz

5,45

Dạng phân đỉnh

73,9

Tích phân

C H (ppm) (ppm)

Đ ẠO

Dạng phân đỉnh

3,08

http://daykemquynhon.ucoz.com

H (ppm)

Tích phân

C (ppm)

H Ư

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Vị trí C

Chất SF2 (DMSO-d6)

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Kết quả và bàn luận

H Ư

TR ẦN

4.3.1.1. Xây dựng quy trình xác định hàm lượng hợp chất isoxanthohumol Quy trình xác định hàm lượng isoxanthohumol phân lập bằng phương pháp quy về phần trăm diện tích peak HPLC

- Chuẩn bị mẫu:

10 00

 Mẫu thử: hòa tan isoxanthohumol phân lập trong methanol với nồng độ 200 ppm, lọc qua màng lọc 0,45 µm.  Mẫu trắng: methanol (HPLC), lọc qua màng lọc 0,45 µm.

-L

Hệ thống sắc ký: Hệ thống sắc ký Shimadzu LC-2030C 3D, đầu dò PDA Cột sắc ký: Gemini NX-C18 (250 mm x 4,6 mm) Thể tích tiêm: 20 µL Tốc độ dòng: 1 mL/phút Bước sóng phát hiện: 286 nm Pha động: acetonitrile - nƣớc theo Bảng 4.16

IỄ N

ÀN

ÁN

     

-H

- Điều kiện HPLC:

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

4.3.1. Xác định hàm lƣợng hợp chất isoxanthohumol (SF1) phân lập đƣợc

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

4.3. Xây dựng quy trình xác định hàm lƣợng chất phân lập bằng phƣơng pháp HPLC quy về phần trăm diện tích peak

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Kết luận: Từ kết quả phổ nghiệm (UV, IR, MS, NMR) có thể xác định chất SF2 phân lập đƣợc là sophoraflavanone G.

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Hình 4.22. Cấu trúc hợp chất SF2 – sophoraflavanone G

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Bảng 4.16. Chƣơng trình pha động định lƣợng SF1 Thời gian (phút) 0 5 18 20 45

Acetonitrile (%) 30 30 45 30 30

Nƣớc (%) 70 70 55 70 70

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Thẩm định quy trình xác định hàm lượng isoxanthohumol phân lập bằng phương pháp quy về phần trăm diện tích peak HPLC

- Tính tƣơng thích hệ thống

- Tiến hành tiêm mẫu thử vào hệ thống sắc ký, ghi nhận các thông số sắc ký.

-H

Nhận xét: Thời gian lƣu có RSD ≤1%, diện tích đỉnh có RSD ≤ 2%, hệ số kéo đuôi trong khoảng 0,8-1,5 và số đ a lý thuyết ≥5000.

ÁN

-L

 Quy trình xác định hàm lƣợng isoxanthohumol phân lập đạt tính tƣơng thích hệ thống. - Tính đặc hiệu

IỄ N

ÀN

 Chuẩn bị mẫu: mẫu isoxanthohumol phân lập có nồng độ 200 ppm, mẫu trắng methanol (HPLC). Mẫu trắng và mẫu thử đƣợc lọc qua màng lọc 0,45 µm.  Tiến hành tiêm mẫu isoxanthohumol và mẫu trắng vào hệ thống sắc ký. Ghi nhận sắc ký đồ, kiểm tra độ tinh khiết peak.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

TR ẦN

Hệ số kéo đuôi (T) 0,932 0,948 0,972 0,982 0,991 0,999 0,971

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Số đĩa lý thuyết (N) 80190 80610 81069 81252 82093 82221 81239

H Ư

Diện tích đỉnh (Area) 10818726 10769563 10709473 10733708 10713296 10515886 10710109 103559 0,97

http://daykemquynhon.ucoz.com

1 2 3 4 5 6 TB SD RSD%

Thời gian lƣu (tR – phút) 19,916 19,871 19,838 19,794 19,788 19,788 19,832 0,05 0,27

10 00

Lần

Đ ẠO

Bảng 4.17. Các thông số sắc ký tƣơng ứng với đỉnh SF1 sau sáu lần tiêm liên tiếp (n=6)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

 Chuẩn bị mẫu: Cân 2,11 mg isoxanthohumol phân lập vào bình định mức 10 ml, hòa tan và điền đến vạch bằng methanol, lọc qua màng lọc 0,45 µm.  Tiến hành tiêm 6 lần dung dịch trên vào hệ thống sắc ký. Ghi nhận sắc ký đồ và các thông số sắc ký. Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.17.

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Kết quả và bàn luận

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

ÁN

Chú thích

IỄ N

ÀN

(a) Mẫu isoxanthohumol có thời gian lƣu peak chính 19,862 phút (b) Mẫu trắng (dung môi methanol – HPLC) (c) Độ tinh khiết peak sắc ký tƣơng ứng với peak chính trong mẫu isoxanthohumol

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

A Ó -H -L

Hình 4.23. Sắc ký đồ HPLC đánh giá tính đặc hiệu của quy trình định lƣợng SF1

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

(c)

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

(b)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

(a)

Nhận xét: Sắc ký đồ mẫu thử có 1 đỉnh hấp thu ở bƣớc sóng 286 nm tại thời gian lƣu 19 phút và sắc ký đồ mẫu trắng không xuất hiện đỉnh trùng với thời gian lƣu của peak chính trong sắc ký đồ mẫu thử, đồng thời peak chính trong sắc ký đồ mẫu thử tách khỏi các peak tạp (với độ phân giải >1,5) và có độ tinh khiết cao (Peak purity index > 0,995), chứng tỏ phƣơng pháp có độ chọn lọc - đặc hiệu tốt.  Quy trình xác định hàm lƣợng isoxanthohumol phân lập đạt tính đặc hiệu. 43

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

 Chuẩn bị mẫu: đƣợc chuẩn bị nhƣ Bảng 4.18.  Tiến hành tiêm các mẫu isoxanthohumol trên vào hệ thống sắc ký. Ghi nhận sắc ký đồ và các thông số sắc ký. Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.19.

- Khảo sát khoảng tuyến tính

129,8 ppm 173,1 ppm 216,4 ppm 259,7 ppm 303,0 ppm

Diện tích đỉnh (Area) 6368273 8557631 10635732 12900195 15169814

TR ẦN

B 10 00 y = 50.682,7852x - 241.425,7215 R² = 0,9997

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

16000000 14000000 12000000 10000000 8000000 6000000 4000000 2000000 0

100

200

300

400

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Nồng độ (ppm) 129,8 173,1 216,4 259,7 303,0

STT 1 2 3 4 5

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Bảng 4.19. Kết quả tuyến tính của diện tích đỉnh theo nồng độ mẫu thử

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Hút 600 µL → 5 ml Hút 800 µL → 5 ml Hút 1000 µL → 5 ml Hút 1200 µL → 5 ml Hút 1400 µL→ 5 ml

Nồng độ

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

10 ml

Pha loãng → BĐM

Đ ẠO

10,82 mg

BĐM

1 2 3 4 5

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Khối lƣợng isoxanthohumol

Mẫu

Bảng 4.18. Chuẩn bị mẫu cho khảo sát khoảng tuyến tính

Hình 4.24. Đƣờng biểu diễn mối liên hệ giữa nồng độ và diện tích đỉnh của isoxanthohumol

Xử lý kết quả bằng phần mềm MS-Excel: Hệ số b có | |=2,21 < t0,05 =2,35 nên hệ số b của phƣơng trình không có ý ngh a. Hệ số a có | |=104,5 > t0,05 = 2,35 nên hệ số a của phƣơng trình có ý ngh a. 44

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

F = 10924,67 > F0,05 = 10,13 do đó phƣơng trình trên tƣơng thích.

Vậy phƣơng trình hồi quy xác định nồng độ isoxanthohumol phân lập phụ thuộc diện tích đỉnh là:

R2 = 0,9997> 0,995: có sự tƣơng quan giữa diện tích đỉnh và nồng độ.

TR ẦN

Nồng độ

5 ml

10 00

BĐM

206,0 204,0 206,0 202,0 202,0 204,0

1 2 3 4 5 6

Khối lƣợng isoxanthohumol 1,03 1,02 1,03 1,01 1,01 1,02

Mẫu

Nồng độ mẫu (ppm)

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

Mẫu thử 1 2 3 4 5 6

-H

Bảng 4.21. Kết quả thẩm định độ lặp lại của quy trình xác định hàm lƣợng isoxanthohumol Diện tích đỉnh

206,0 204,0 206,0 202,0 202,0 204,0 Trung bình SD RSD%

10485778 10323910 10467208 10307306 10303560 10398609 10381062 81740,23 0,79

Diện tích đỉnh/nồng độ 50902 50607 50812 51026 51008 50974 50888,08 158,45 0,31

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

H Ư

Bảng 4.20. Chuẩn bị mẫu cho thẩm định độ lặp lại

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Đ ẠO

 Độ lặp lại  Chuẩn bị mẫu : đƣợc chuẩn bị nhƣ Bảng 4.20  Tiến hành phân tích trên HPLC 6 dung dịch mẫu thử độc lập. Ghi nhận sắc ký đồ và các thông số sắc ký. Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.21

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

- Độ chính xác

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Nhận xét: có sự tƣơng quan tuyến tính giữa nồng độ và diện tích đỉnh của chất isoxanthohumol phân lập.

Nhận xét: diện tích peak chính và diện tích peak chính/nồng độ của 6 dung dịch mẫu thử độc lập cho giá trị RSD < 2%. 45

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Diện tích đỉnh

-H

10417856 10511635 10753846 10538446 10642222 10584101 10574684 115440,44 1,09

Diện tích đỉnh/nồng độ 50572 50537 50726 50666 50677 50400 50596,31 118,81 0,24

ÁN

-L

1 2 3 4 5 6

Nồng độ mẫu (ppm) 206,0 208,0 212,0 208,0 210,0 210,0 Trung bình SD RSD (%)

10 00

Mẫu

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Bảng 4.23. Kết quả thẩm định độ tái lập của quy trình xác định hàm lƣợng isoxanthohumol

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

5 ml

206,0 208,0 212,0 208,0 210,0 210,0

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Nồng độ

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

1 2 3 4 5 6

BĐM

TR ẦN

Khối lƣợng isoxanthohumol 1,03 1,04 1,06 1,04 1,05 1,05

Mẫu

Đ ẠO

Bảng 4.22. Chuẩn bị mẫu cho thẩm định độ tái lập

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

 Độ tái lặp  Chuẩn bị mẫu : đƣợc chuẩn bị nhƣ Bảng 4.22  Tiến hành phân tích trên HPLC với 6 mẫu thử độc lập khác, trên một hệ thống HPLC-PDA khác vào một ngày khác và phòng thí nghiệm khác với thử nghiệm độ lặp lại để xác định độ chính xác trung gian của quy trình. Ghi nhận sắc ký đồ và các thông số sắc ký. Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.23.

 Quy trình xác định hàm lƣợng isoxanthohumol đạt độ lặp lại.

IỄ N

ÀN

Nhận xét: diện tích peak chính và diện tích peak chính/nồng độ của 6 dung dịch mẫu thử độc lập cho giá trị RSD ≤ 2%

 Quy trình xác định hàm lƣợng isoxanthohumol đạt yêu cầu độ tái lập.  Độ chính xác trung gian Độ chính xác trung gian đƣợc xác định trên 12 mẫu lặp lại ở 2 ngày, 2 hệ thống HPLC khác nhau. Kết quả đƣợc trình bày theo Bảng 4.14. 46

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Ơ H N

-H

10 00

Với quy trình thẩm định xác định hàm lƣợng isoxanthohumol bằng phƣơng pháp HPLC quy về phần trăm diện tích peak đạt yêu cầu về tính tƣơng thích hệ thống, độ đặc hiệu, độ lặp lại, độ chính xác trung gian và khoảng tuyến tính xác định, nhóm nghiên cứu đã xác định đƣợc hàm lƣợng isoxanthohumol dựa trên kết quả phân tích của 12 mẫu thử độc lập ở trên. Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.25

STT

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

Bảng 4.25. Kết quả hàm lƣợng isoxanthohumol phân lập

1 2 3 4 5 6 Trung bình SD RSD%

Hàm lƣợng của isoxanthohumol quy về % diện tích peak Ngày 1 Ngày 2 98,92 98,95 98,51 98,84 98,71 98,92 98,80 98,86 98,81 98,67 98,47 98,69 98,76 0,16 0,16

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

4.3.1.2. Xác định hàm lượng hợp chất isoxanthohumol phân lập

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

H Ư

TR ẦN

 Quy trình xác định hàm lƣợng isoxanthohumol đạt yêu cầu độ chính xác trung gian trên 12 mẫu lặp lại ở 2 ngày và ở 2 hệ thống HPLC khác nhau.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Nhận xét: diện tích peak chính và diện tích peak chính/nồng độ của 12 dung dịch mẫu thử độc lập ở 2 ngày và ở 2 hệ thống HPLC khác nhau cho giá trị RSD ≤2%.

http://daykemquynhon.ucoz.com

Diện tích peak / nồng độ Ngày 1 Ngày 2 50902 50572 50607 50537 50812 50726 51026 50666 51008 50677 50974 50400 50742,20 202,60 0,40

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

1 2 3 4 5 6 Trung bình SD RSD%

Diện tích peak Ngày 1 Ngày 2 10485778 10417856 10323910 10511635 10467208 10753846 10307306 10538446 10303560 10642222 10398609 10584101 10477873 138992,75 1,33

Đ ẠO

STT

Bảng 4.24. Kết quả độ chính xác trung gian ở 2 ngày và 2 hệ thống HPLC khác nhau

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

4.3.2. Xây dựng quy trình xác định hàm lƣợng hợp chất sophoraflavanone G (SF2) phân lập đƣợc

 Hàm lƣợng của isoxanthohumol phân lập theo phƣơng pháp quy về phần trăm diện tích peak HPLC là 98,76%.

4.3.2.1. Xây dựng quy trình xác định hàm lượng hợp chất sophoraflavanone G

- Tiến hành tiêm mẫu thử vào hệ thống sắc ký, ghi nhận các thông số sắc ký.

-H

Thẩm định quy trình xác định hàm lượng sophoraflavanone G phân lập bằng phương pháp quy về phần trăm diện tích peak HPLC

-L

- Tính tƣơng thích hệ thống

IỄ N

ÀN

ÁN

 Chuẩn bị mẫu: Cân 2,06 mg sophoraflavanone G phân lập vào bình định mức 10 ml, hòa tan và điền đến vạch bằng methanol, lọc qua màng lọc 0,45 µm.  Tiến hành tiêm 6 lần dung dịch trên vào hệ thống sắc ký. Ghi nhận sắc ký đồ và các thông số sắc ký. Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.26.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

H Ư

TR ẦN

Hệ thống sắc ký: Hệ thống sắc ký Shimadzu LC-2030C 3D, đầu dò PDA Cột sắc ký: Gemini NX-C18 (250 mm x 4,6 mm) Thể tích tiêm: 10 µL Tốc độ dòng: 1 mL/phút Bước sóng phát hiện: 292 nm Pha động: acetonitrile - nƣớc theo Bảng 4.13

10 00

     

- Điều kiện HPLC:

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Đ ẠO

 Mẫu thử: hòa tan sophoraflavanone G phân lập trong methanol với nồng độ 200 ppm, lọc qua màng lọc 0,45 µm.  Mẫu trắng: methanol (HPLC), lọc qua màng lọc 0,45 µm.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

- Chuẩn bị mẫu:

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Quy trình xác định hàm lượng sophoraflavanone G phân lập bằng phương pháp quy về phần trăm diện tích peak HPLC

Bảng 4.26. Các thông số sắc ký tƣơng ứng với đỉnh SF2 sau sáu lần tiêm liên tiếp (n=6)

Lần 1 2 3 4

Thời gian lƣu (tR – phút) 12,48 12,49 12,50 12,51

Diện tích đỉnh (Area) 3905283 3882159 3879008 3865963

Số đĩa lý thuyết (N) 53430 51882 50684 50077

Hệ số kéo đuôi (T) 1,249 1,248 1,233 1,224

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

3860529 3862640 3875930 16870 0,44

50389 49894 51060

1,209 1,193 1,226

12,55 12,58 12,52 0,04 0,29

5 6 TB SD RSD%

Kết quả và bàn luận

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Hình 4.25. Sắc ký đồ HPLC đánh giá tính đặc hiệu của quy trình xác định hàm lƣợng sophoraflavanone G

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-H Ý ÁN

-L

(c)

TO ÀN Đ

IỄ N D

(b)

(a)

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Nhận xét: Thời gian lƣu có RSD ≤1%, diện tích đỉnh có RSD ≤ 2%, hệ số kéo đuôi trong khoảng 0,8-1,5 và số đ a lý thuyết ≥ 5000.  Quy trình xác định hàm lƣợng sophoraflavanone G phân lập đạt tính tƣơng thích hệ thống. - Tính đặc hiệu  Chuẩn bị mẫu: mẫu sophoraflavanone G phân lập có nồng độ 200 ppm, mẫu trắng methanol (HPLC). Mẫu trắng và mẫu thử đƣợc lọc qua màng lọc 0,45 µm.  Tiến hành tiêm mẫu sophoraflavanone G và mẫu trắng vào hệ thống sắc ký. Ghi nhận sắc ký đồ, dùng chức năng kiểm tra độ tinh khiết peak sắc ký.

Chú thích (a) Mẫu trắng (dung môi methanol – HPLC) (b) Mẫu sophoraflavanone G có thời gian lƣu peak chính tại 12,527 phút Nhận xét: Sắc ký đồ mẫu thử có 1 đỉnh hấp thu ở bƣớc sóng 292 nm tại thời gian lƣu 12,5 phút và sắc ký đồ mẫu trắng không xuất hiện đỉnh trùng với thời gian lƣu 49

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Kết quả và bàn luận

H Ư

TR ẦN

10,33 mg

123,8 ppm 165,0 ppm 206,3 ppm 247,6 ppm 288,8 ppm

Diện tích đỉnh (Area) 2320611 3086019 3839931 4613484 5393940

10 00

Nồng độ (ppm) 123,8 165,0 206,3 247,6 288,8

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

STT 1 2 3 4 5

Bảng 4.28. Kết quả tuyến tính diện tích đỉnh theo nồng độ mẫu thử sophoraflavanone G

6000000

y = 18.599,3996x + 13.740,8609 R² = 1,0000

5000000

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Hút 600 µL → 5 ml Hút 800 µL → 5 ml 10 ml Hút 1000 µL → 5 ml Hút 1200 µL → 5 ml Hút 1400 µL→ 5 ml

Nồng độ

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Pha loãng → BĐM

1 2 3 4 5

http://daykemquynhon.ucoz.com

Khối lƣợng BĐM sophoraflavanone G

Mẫu

Đ ẠO

Bảng 4.27. Chuẩn bị mẫu cho khảo sát khoảng tuyến tính

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

của peak chính trong sắc ký đồ mẫu thử, đồng thời peak chính trong sắc ký đồ mẫu thử tách khỏi các peak tạp (với độ phân giải >1,5) và có độ tinh khiết cao (Peak purity index > 0,995), chứng tỏ phƣơng pháp có độ chọn lọc - đặc hiệu tốt.  Quy trình xác định hàm lƣợng sophoraflavanone G phân lập đạt tính đặc hiệu. - Khảo sát khoảng tuyến tính  Chuẩn bị mẫu: đƣợc chuẩn bị nhƣ Bảng 4.27.  Tiến hành tiêm các mẫu sophoraflavanone G trên vào hệ thống sắc ký. Ghi nhận sắc ký đồ và các thông số sắc ký. Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.28.

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

4000000 3000000 2000000 1000000 0 0

100

200

300

400

Hình 4.26. Đƣờng biểu diễn mối liên hệ giữa nồng độ và diện tích đỉnh của sophoraflavanone G

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Xử lý kết quả: Hệ số b có | | = 0,91 < t0,05 =2,35 hệ số b của phƣơng trình không có ý ngh a.

Hệ số a có t= 264,19> t0,05 = 2,35 nên hệ số a của phƣơng trình có ý ngh a.

F = 74218,12 > F0,05 = 10,13 do đó phƣơng trình trên tƣơng thích.

10 00

5 ml

201,0 206,0 203,0 201,0 202,0 202,0

-L

Nồng độ mẫu (ppm)

Diện tích peak

Diện tích peak/nồng độ

1 2 3 4 5 6

201,0 206,0 203,0 201,0 202,0 202,0

3800367 3838211 3801995 3799081 3819739 3805409 3810800 15388,58 0,40

18907 18599 18729 18901 18910 18839 18814,15 125,92 0,67

ÀN

ÁN

Mẫu thử

Trung bình SD RSD%

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Nồng độ (ppm)

Bảng 4.30. Kết quả thẩm định độ lặp lại của quy trình định lƣợng sophoraflavanone G

IỄ N D

BĐM

-H

1 2 3 4 5 6

Khối lƣợng sophoraflavanone G 1,01 1,03 1,02 1,01 1,01 1,01

Mẫu

TR ẦN

Bảng 4.29. Chuẩn bị mẫu cho thẩm định độ lặp lại

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Nhận xét: có sự tƣơng quan tuyến tính giữa nồng độ và diện tích đỉnh của chất sophoraflavanone G phân lập. - Độ chính xác  Độ lặp lại  Chuẩn bị mẫu : đƣợc chuẩn bị nhƣ Bảng 4.29  Tiến hành phân tích trên HPLC 6 dung dịch mẫu thử độc lập. Ghi nhận sắc ký đồ và các thông số sắc ký. Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.30

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Vậy phƣơng trình hồi quy xác định nồng độ SF2 phụ thuộc diện tích đỉnh là:

R2 =1,0000 > 0,995 : có sự tƣơng quan giữa diện tích đỉnh và nồng độ.

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

 Quy trình xác định hàm lƣợng sophoraflavanone G đạt độ lặp lại.

5 ml

206,0 204,0 206,0 208,0 202,0 206,0

Bảng 4.32. Kết quả thẩm định độ tái lập của quy trình xác định hàm lƣợng isoxanthohumol

Nồng độ Diện tích peak Diện tích peak/nồng độ mẫu (ppm) 206,0 3808931 18490 1 204,0 3768332 18472 2 206,0 3836563 18624 3 208,0 3868323 18598 4 202,0 3755265 18590 5 206,0 3779847 18349 6 3802876,8 18520,53 Trung bình 43463,13 104,25 SD 1,14 0,56 RSD (%) Nhận xét: diện tích peak chính và diện tích peak chính/nồng độ của 6 dung dịch mẫu thử độc lập cho giá trị RSD ≤ 2%  Quy trình xác định hàm lƣợng sophoraflavanone G đạt yêu cầu độ tái lặp.  Độ chính xác trung gian

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

Mẫu

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

TR ẦN

1 2 3 4 5 6

Nồng độ

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

BĐM

Khối lƣợng sophoraflavanone G 1,03 1,02 1,03 1,04 1,01 1,03

Mẫu

Bảng 4.31. Chuẩn bị mẫu cho thẩm định độ tái lập

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

 Độ tái lặp  Chuẩn bị mẫu : đƣợc chuẩn bị nhƣ Bảng 4.31  Tiến hành phân tích trên HPLC với 6 mẫu thử độc lập khác, trên một hệ thống HPLC-PDA khác vào một ngày khác và phòng thí nghiệm khác với thử nghiệm độ lặp lại để xác định độ chính xác trung gian của quy trình. Ghi nhận sắc ký đồ và các thông số sắc ký. Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.32.

Nhận xét: diện tích peak chính và diện tích peak chính/nồng độ của 6 dung dịch mẫu thử độc lập cho giá trị RSD ≤2%.

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Độ chính xác trung gian đƣợc xác định trên 12 mẫu lặp lại ở 2 ngày, 2 hệ thống HPLC khác nhau. Kết quả đƣợc trình bày theo Bảng 4.33.

Ơ H N

ÀN

ÁN

-L

-H

Với quy trình thẩm định xác định hàm lƣợng sophoraflavanone G bằng phƣơng pháp HPLC quy về phần trăm diện tích peak đạt yêu cầu về tính tƣơng thích hệ thống, độ đặc hiệu, độ lặp lại, độ chính xác trung gian và khoảng tuyến tính xác định, nhóm nghiên cứu đã xác định đƣợc hàm lƣợng sophoraflavanone G dựa trên kết quả phân tích của 12 mẫu thử độc lập ở trên. Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.34. Bảng 4.34. Kết quả hàm lƣợng sophoraflavanone G phân lập Hàm lƣợng của sophoraflavanone G STT quy về % diện tích peak Ngày 1 Ngày 2 1 96,45 95,03 2 96,45 94,60 3 96,37 95,01 4 96,38 95,21 5 96,43 95,28 6 96,38 94,82 95,70 Trung bình

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

4.3.2.2. Xác định hàm lượng hợp chất sophoraflavanone G phân lập

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

10 00

 Quy trình xác định hàm lƣợng sophoraflavanone G đạt yêu cầu độ chính xác trung gian trên 12 mẫu lặp lại ở 2 ngày và ở 2 hệ thống HPLC khác nhau.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Đ ẠO

TR ẦN

Nhận xét: diện tích peak chính và diện tích peak chính/nồng độ của 12 dung dịch mẫu thử độc lập ở 2 ngày và ở 2 hệ thống HPLC khác nhau cho giá trị RSD < 2%.

IỄ N D

Diện tích peak / nồng độ Ngày 1 Ngày 2 18907 18490 18599 18472 18729 18624 18901 18598 18910 18590 18839 18349 18667,34 188,84 1,01

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

1 2 3 4 5 6 Trung bình SD RSD%

Diện tích peak Ngày 1 Ngày 2 3800367 3808931 3838211 3768332 3801995 3836563 3799081 3868323 3819739 3755265 3805409 3779847 3806839 31359,51 0,82

H Ư

STT

Bảng 4.33. Kết quả độ chính xác trung gian ở 2 ngày và 2 hệ thống HPLC khác nhau

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Hàm lƣợng của sophoraflavanone G phân lập theo phƣơng pháp quy về phần trăm diện tích peak HPLC là 95,70%.

0,76 0,80

SD RSD%

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

4.4.1. Khảo sát phƣơng pháp xử lý mẫu

-H

Hệ thống sắc ký: Hệ thống sắc ký Shimadzu LC-2030C 3D (máy 67), đầu dò PDA

Cột sắc ký: Gemini NX-C18 (250mm x 4,6mm)

-L

Nhiệt độ cột: nhiệt độ phòng

ÁN

Thể tích tiêm: 10µL

Tốc độ dòng: 1 mL/phút

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Điều kiện sắc ký

4.4.2. Tiến hành định lƣợng sơ bộ isoxanthohumol và sophoraflavanone G trong dƣợc liệu

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Mẫu thử: đƣợc chuẩn bị nhƣ mục 3.2.4.2. Mẫu đối chiếu - Isoxanthohumol đối chiếu: cân chính xác khoảng 1 mg isoxanthohumol phân lập đƣợc vào bình định mức 5 ml, thêm 3 ml methanol hòa tan hoàn toàn, điền đủ dung môi methanol đến vạch, lắc đều. - Sophoraflavanone G đối chiếu: cân chính xác khoảng 2 mg sophoraflavanone G phân lập đƣợc vào bình định mức 10 ml (Bảng 4.38) hòa tan trong methanol vào bình định mức 10 ml (bình 2), điền dung môi methnaol đến vạch. - Hút chính xác 1 ml dung dịch isoxanthohumol và 3 ml dung dịch sophoraflavanone G vào bình định mức 5 ml, điền dung môi methanol đến vạch, lắc đều. Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 µm.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

4.4. Sơ bộ xác định hàm lƣợng isoxanthohumol và sophoraflavanone G trong dƣợc liệu rễ khổ sâm

ÀN

Bước sóng phát hiện: 290nm

IỄ N

Pha động: acetonitrile - nƣớc theo Bảng 4.35. Bảng 4.35. Chƣơng trình pha động Thời gian (phút)

Acetonitrile (%)

Nƣớc (%)

0 15 30 45

40 40 80 40

60 60 20 60

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

Tính tƣơng thích hệ thống

-H

10 00

Diện tích đỉnh (Area) 2347210 2352476 2342088 2333670 2334534 2320530 2338418 11367 0,49

Số đĩa lý thuyết (N) 220287 218653 218039 216129 213479 212606 216532

Hệ số kéo đuôi (T) 1.028 1.032 1.021 1.019 1.012 1.007 1.020

ÁN

1 2 3 4 5 6 TB SD RSD%

Thời gian lƣu (tR – phút) 26,44 26,43 26,43 26,43 26,45 26,47 26,44 0,02 0,07

-L

Lần

IỄ N

ÀN

Nhận xét: Thời gian lƣu và diện tích đỉnh của 2 peak tƣơng ứng với hợp chất isoxanthohumol và sophoraflavanone G sau 6 lần tiêm liên tiếp có RSD% ≤ 2%, hệ số kéo đuôi nằm trong khoảng (0,8-1,5), số đ a lý thuyết ≥ 5000.  Quy trình đạt tính tƣơng thích hệ thống.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Bảng 4.37. Các thông số sắc ký tƣơng ứng với đỉnh sophoraflavanone G sau sáu lần tiêm liên tiếp (n=6)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Hệ số kéo đuôi (T) 0,961 0,965 0,949 0,943 0,935 0,928 0,947

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Số đĩa lý thuyết (N) 13064 13032 12885 12831 12734 12591 12856

Diện tích đỉnh (Area) 945621 942516 936378 932837 933620 933116 937348 5445 0,58

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

1 2 3 4 5 6 TB SD RSD%

Thời gian lƣu (tR – phút) 11,96 11,98 11,97 11,98 12,01 12,03 11,99 0,03 0,21

TR ẦN

Lần

Bảng 4.36. Các thông số sắc ký tƣơng ứng với đỉnh isoxanthohumol sau sáu lần tiêm liên tiếp (n=6)

Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.36 và Bảng 4.37.

Tiến hành định lƣợng Kết quả đƣợc trình bày trong Bảng 4.38. Coi các mẫu isoxanthohumol và sophoraflavanone G là các chất đối chiếu có độ tinh khiết lần lƣợt là 98,76% và 95,70%. 55

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Kết quả và bàn luận

0,218

0,201

0,304

0,306

0,261

0,248

0,241

2,798

2,452

1,517

0,911

1,568

2,988

0,446

0,630

0,598

0,458

0,593

0,534

6,208

5,081

2,968

1,596

3,749

6,628

Đ IỄ N D

H Ư

TR ẦN

10 00

E4 3,0861

Ethanol 70%

M1 3,0019

M2 3,0299

Methanol

30 x 4 474,7 1685258 3660508

30 x 4 243,9* 1649916 3324944

A Ó -H

1,734 0,447 3,512

(*) Khối lƣợng cắn sau khi lắc phân bố với ethyl acetate

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

30 x 4 621,6 2135212,5 3794339

E5 3,0607 Ethanol 40% 30 x 4 878.1 1810956 2883401

E3 3,0567 Ethanol 96% 30 x 4 379,0 2103978 3960612

Thể tích (ml) x số lần chiết Khối lƣợng cắn (mg) SISO-thử SSOP-thử Hàm lƣợng isoxanthohumol/ dƣợc liệu (%) Hàm lƣợng isoxanthohumol /cắn (%) Hàm lƣợng sophoraflavanone G/dƣợc liệu (%) Hàm lƣợng sophoraflavanone G/cắn(%)

E2 3,0003 Ethanol 96%/ acid acetic 1% 30 x 4 215,5* 1365116,5 2751853,5

-L Ý

Dung môi chiết

E1 3,0119 Ethanol 96%/ acid acetic 1% 30 x 4 378,2 1484692,5 2767480

ÁN

Mẫu Khối lƣợng (g)

SSOP-ĐC = 2338418, %TKSOP=95,70%

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

mSOP =1,98 mg

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

SISO-ĐC = 937348, %TKISO=98,76%

Đ ẠO

mISO =1,1 mg

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Bảng 4.38. Kết quả thí nghiệm định lƣợng sơ bộ isoxanthohumol (SF1) và sophoraflavanone G (SF2) trong dƣợc liệu

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Kết quả và bàn luận

0,200

2,000 0,000 E5

Hàm lượng isoxanthohumol/ dược liệu (%)

Hàm lượng isoxanthohumol /cắn (%)

Hàm lượng sophoraflavanone G/dược liệu (%)

Hàm lượng sophoraflavanone G/cắn(%)

(b)

http://daykemquynhon.ucoz.com

(a)

TR ẦN

H Ư

Hình 4.27. Đồ thị ảnh hƣởng của dung môi chiết đến hàm lƣợng % isoxanthohumol và % sophoraflavanone G định lƣợng đƣợc trong dƣợc liệu (a) và cắn thu đƣợc (b)

Nhận xét:

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

10 00

- Qua kết quả của thí nghiệm sợ bộ định lƣợng isoxanthohumol và sophoraflavanone G trong dƣợc liệu nhận thấy với cùng các điều kiện chiết, dung môi chiết đƣợc hàm lƣợng (%) 2 hợp chất trên cao nhất là sử dụng dung môi ethanol 96% (E3), các dung môi ethanol 70% (E4) và methanol (M1) khác nhau không quá nhiều. - Mẫu chiết với dung môi là ethanol 96% chứa 1% acid acetic (E1) và ethanol 40% (E5) thu đƣợc hàm lƣợng 2 hợp chất này thấp hơn so với các dung môi khác. - Với mẫu E2, M2 nhận thấy hàm lƣợng sophoraflavanone G và isoxanthohumol trong cắn cao vƣợt trội so với các cắn còn lại. Qua đó, nhận thấy việc lắc phân bố với ethyl acetate làm giảm lƣợng tạp chất trong cắn. - Tuy nhiên nhận thấy việc xử lý mẫu bằng chiết lỏng – lỏng với ethyl acetate có sự giảm hàm lƣợng hơn so với không lắc phân bố (E2 và M2) nên cần đƣợc khảo sát chặt chẽ hơn số lần lắc để đảm bảo chiết kiệt đƣợc 2 hợp chất khảo sát phục vụ cho định lƣợng.  Qua các kết quả định lƣợng sơ bộ đề tài nhận thấy sử dụng dung môi chiết xuất tốt nhất là ethanol 96%, đồng thời việc lắc phân bố với ethyl acetate sẽ giúp làm giảm lƣợng tạp chất trong mẫu thử hỗ trợ cho việc phân tích dễ dàng hơn.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

0,000

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

4,000

0,400

6,000

0,600

8,000

0,800

Kết quả định lƣợng sơ bộ từ Bảng 4.38 đƣợc thể hiện trên các đồ thị sau (Bảng 4.38 và Hình 4.27):

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

CHƢƠNG 5.

Kết luận và đề nghị

KẾT LUẬN & ĐỀ NGHỊ

Qua thời gian thực hiện đề tài “Nghiên cứu phân lập một flavonoid từ rễ khổ sâm bắc (Sophora flavescens Ait.)”, đã thu đƣợc một số kết quả nhƣ sau:

5.1. Kết luận

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

1. Thiết lập hồ sơ chất đối chiếu cho 2 flavonoid phân lập đƣợc. 2. Tiếp tục phân lập flavonoid khác từ các phân đoạn của cột cao toàn phần ethanol. 3. Hoàn chỉnh quy trình định lƣợng isoxanthohumol và sophoraflavanone G trong dƣợc liệu.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

-H

Để góp phần hoàn thiện nghiên cứu, đề nghị tiếp tục thực hiện đề tài theo những hƣớng sau:

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

5.2. Đề nghị

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

1. Xây dựng đƣợc quy trình phân lập và tinh chế 2 flavonoid bằng sắc ký cột và đồng thời ứng dụng phƣơng pháp HPLC điều chế vào việc phân lập, tinh khiết hóa 2 chất này, HPLC điều chế là phƣơng pháp dễ lặp lại, quy trình đơn giản, tiết kiệm thời gian. 2. Sau khi đánh giá chất phân lập bằng các phƣơng pháp phổ nghiệm (IR, UV, MS, NMR) đã xác định cấu trúc 2 flavonoid phân lập đƣợc là isoxanthohumol và sophoraflavanone G với khối lƣợng lần lƣợt là 316 mg và 91 mg. 3. Xây dựng quy trình xác định hàm lƣợng 2 flavonoid phân lập đƣợc bằng phƣơng pháp quy về phần trăm diện tích peak HPLC đã đƣợc thẩm định đạt các yêu cầu về tính tƣơng thích hệ thống, độ đặc hiệu, khoảng tuyến tính, độ lặp lại và độ chính xác trung gian. Kết quả xác định hàm lƣợng isoxanthohumol và sophoraflavanone G phân lập đƣợc lần lƣợt là 98,76% và 95,70%. 4. Đã sơ bộ xây dựng quy trình xác định hàm lƣợng isoxanthohumol và sophoraflavanone G trong dƣợc liệu bằng phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao dựa trên 2 chất mới đƣợc phân lập.

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Tài liệu tham khảo

IỄ N

ÀN

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

-L

-H

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

1. Võ Văn Chi (1997), Từ điển cây thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội, tr. 622. 2. Đỗ Huy Bích (2004), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam-Tập 1, Nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật, Hà Nội, tr 89-93. 3. “Sophora flavescentis Radix”, www.cmd.gov.hk, Mar. 28, 2017. [Online]. Available: http://www.cmd.gov.hk/hkcmms/vol4/Vol4_pdf_English/D_Monographs/27 -Sophorae%20Flavescentis%20Radix.pdf. [Accessed Date: Jul. 09, 2018]. 4. Denis B., Ragai K. I. (1996), “Isoprenated flavonoid – a survey”, Phytochemistry, 43(5), 921-982. 5. Chang-Won K., Nan-Hee K., Huyn Ah J., Hyung-Wook C., Min-Jae K., JaeSue C., Gun-Do K. (2016), “Desmethylanhydroicaritin isolated from Sophora flavescens, shows antitumor activities in U87MG cells via inhibiting the proliferation, migration and invasion”. Environmental Toxicology and Pharmacology, 43, 140-148. 6. Yang, N., Liang, B., Srivastava, K., Zeng, J., Zhan, J., Brown, L., Sampson, H., Goldfarb, J., Emala, C., Li, X.M. (2013). “The Sophora flavescens flavonoid compound trifolirhizin inhibits acetylcholine induced airway smooth muscle contraction”. Phytochemistry. 95. p.259-267. 7. Xirui H., Jiacheng F., Linhong H., Jinhui W., Xiaoqiang H. (2015), “Sophora flavescens Ait.: Traditional usage, phytochemistry and pharmacology of an important traditional Chinese medicine”. Journal of Ethnopharmacology, 172, 10–29. 8. Takhtajan A. (2009), Flowering Plants, Springer Science & Business Media B.V., Russia, p. 352. 9. Lƣơng Ngọc Lan Thanh (2017), “Nghiên cứu quy trình chiết xuất, phân lập flavonoid trong rễ khổ sâm bắc (Sophora flavescens Ait.)”, Khóa luận tốt nghiệp Dƣợc s đại học. 10. Zhao Y., Zhang R. Y. (1991), “Research on chemical constituents of Sophora flavescens,” Natural Product Research and Development, 3, 93– 103. 11. Ryu S. Y., Choi S. U., Kim S. K., No Z., Lee C. O., Ahn J. W. (1997), “In vitro antitumour activity of flavonoids from Sophora flavescens,” Phytotherapy Research, 11(1), 51–53. 12. Tai-Hyun K., Sei-Joon J., Won-Gil K., Na-Young K., Byung-Hoon L., Masanori I. ,Tomofumi M., Ryuichi H., Youn-Chul K. (2000), “Cytotoxic

TÀI LIỆU THAM KHẢO

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Tài liệu tham khảo

IỄ N

ÀN

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

-L

-H

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Lavandulyl Flavanones from Sophora flavescens”. J. Nat. Prod., 63(5), 680681. 13. Huiping Z., Herman L., Zhihong C., Liangli Y. (2009), “Anti-Inflammatory and Antiproliferative Activities of Trifolirhizin, a Flavonoid from Sophora flavescens Roots”. J. Agric. Food. Chem., 57(11), 4580-4585. 14. Jeong H. J. , Ju S. K., Sam S. K., Kun H. S., Hyun W. C., Hyun P. K. (2010), “Anti-inflammatory and anti-arthritic activity of total flavonoids of the roots of Sophora flavescens”, J. Ethnopharmacol. 127(3). p. 589-595. 15. Yamaguchi-Miyamoto, T., Kawasuji, T., Kuraishi, Y., Suzuki, H., (2003). “Antipruritic effects of Sophora flavescens on acute and chronic itch-related responses in mice”. Biol. Pharm. Bull. 26(5), p.722–724. 16. Liu, Q., Luyten, W., Pellens, K., Wang, Y., Wang, W., Thevissen, K., Liang, Q., Cammue, B.P., Schoofs, L., Luo, G. (2012). “Antifungal activity in plants from Chinese traditional and folk medicine”. J. Ethnopharmacol., 143(3), 772–778. 17. Ji-Sang H., Seon A. L., Seong S. H., Kyong S. L., Myung K. L., Bang Y. H., Jai S. R. (2005), “Monoamine oxidase inhibitory components from the roots of Sophora flavescens”, Arch. Pharm. Res., 28(2), 190. 18. Jin H. K., Young B. R., Nam S. K., Byong W. L., Jong S. H., Ill-Yun J., Ki H. P. (2006), “Glycosidase inhibitory flavonoids from Sophora flavescens”, Biol. Pharm. Bull., 29(2), 302-305. 19. Youn C. K., Hye-Sook K., Yusuke W., Dong H. S., Tai H. K., Myung S. K., Yong M. K., Geon-Mok L., Jong-Duk C., Hyun P. (2004), “Antimalarial Activity of Lavandulyl Flavanones Isolated from the Roots of Sophora flavescens”, 27. p. 748-750. 20. Tai W.P., Yue H., Zhai H.Z (2010), “Zhixue capsule caused seven cases of drug induced hepatitis”, Hepatogastroenterology, 57(100), 571-572. 21. Qianqian Y., Nengneng C., Xiaojun N. (2013), “Identifying 2 prenylflavanones as potential hepatotoxic compounds in the ethanol extract of Sophora flavescens”, Journal of Food Science, 78(11), 1830-1834. 22. Trần Hùng (2012), Phương pháp nghiên cứu dược liệu, Đại học Y Dƣợc thành phố Hồ Chí Minh, Tp. Hồ Chí Minh. 23. Komatsu M., Tomimori T., Hatayama K., Mikuriya N., (1970), “Studies on the constituents of Sophora species. IV. Constituents of the root of Sophora angustifolia siebet zucc”, Yakugaku Zasshi, 90(4), 463–468. 24. Sook K. H., Won-Hee L., Da M. J., Youngsoo K., Jae S. C. (2008), “Inhibitory Effects of Kurarinol, Kuraridinol, and Trifolirhizin from Sophora

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Tài liệu tham khảo

IỄ N

ÀN

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

-L

-H

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

flavescens on Tyrosinase and Melanin Synthesis”, Biol. Pharm. Bull., 31(1), 154-158. 25. Yi S., Zi-Ming F., Jian-Shuang J., Ya-Nan Y., Pei-Cheng Z. (2013), “Dibenzoyl and Isoflavonoid Glycosides from Sophora flavescens: Inhibition of the Cytotoxic Effect of D Galactosamine on Human Hepatocyte HL7702”, J. Nat. Prod., 76(12), 2337−2345. 26. Rong H., Yi L., Lin-Lin Z., Xi-xin C., Feng W., Wei C., Lei C. (2017), “A new flavonoid from Sophora flavescens Ait.” J. Nat. Prod., 31(19), 22282232. 27. Kyogoku K., Hatayama K., Komastu M. (1973), “Constituents of a Chinese crude drug Kushen (the root of Sophora flavescens). Isolation of five new flavonoids and formononetin”, Chem. Pharm. Bull., 21(12), 2733–2738. 28. Li J. W., Toshio M., Akira U., Masanori K., Tadataka N., Seigo F. (1984), “Studies on the Constituents of Sophora flavescens Ait.” , Chem. Pharm. Bull., 33(8), 3231-3236. 29. Ryu S.Y., Lee H.S., Kim Y.K., Kim S.H. (1997), “Determination of isoprenyl and lavandulyl positions of flavonoids from Sophora flavescens by NMR experiment.”, Arch. Pharm. Res., 20(5). 491-495. 30. Soo J. K., Kun H. S., Hyun W. C., Sam S. K., Hyun P. K. (2003), “Tyrosinase Inhibitory Prenylated Flavonoids from Sophora flavescens.”, Biol. Pharm. Bull., 26(9), 1348-1350. 31. Hyung-Jun W., Jae-Ho J., Seung W. L., Young B. R., Hyung J. J., Kyungsook J., Jae S., Kyoung-Oh C., Woo S.L., Mun-Chual R., Su-Jin P. (2015), “In vitro anti-reovirus activity of kuraridin isolated from Sophora flavescens against viral replication and hemagglutination.”, J. Pharmacol. Sci., 128(4), 159-169. 32. Hee J. J., Sam S. K., Sook K. H., Jae S. C. (2005), “In Vitro Free Radical and ONOO- Scavengers from Sophora flavescens”, Arch. Pharm. Res., 28(5), 534-540. 33. Hildebert W., Rudolf B., Dieter M., Pei-Gen X., Anton S. (2011), Chromatographic Fingerprint Analysis of Herbal Medicine, Springer, Vienna, p. 743-754. 34. Đặng Văn Hòa, V nh Định (2015), Kiểm nghiệm thuốc, Nhà xuất bản Giáo dục Việt Nam, V nh Phúc, tr. 135-180. 35. Sam S. K., Ju S. K., Kun H. S., Hyun W. C., Hyeun P. K. (2000), “A new prenylated flavanone from the roots of Sophora flavescens”, Fitoterapia, 71(5), 511 – 515.

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Phụ lục

PHỤ LỤC

IỄ N

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

ÀN

ÁN

-L

-H

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

PHỤ LỤC 1. Kết quả phân tích nhiệt quét vi sai (DSC) hợp chất SF1 .................2 PHỤ LỤC 2. Phổ 13C-NMR của SF1 phân lập (125MHz,  = ppm, DMSO-d6) ..3 PHỤ LỤC 3.Phổ 13C CPD & DEPT của SF1 phân lập (125MHz,  = ppm, DMSOd6) ................................................................................................................................6 PHỤ LỤC 4. Phổ 1H-NMR của SF1 phân lập (500MHz,  = ppm, DMSO-d6) ...8 PHỤ LỤC 5. Phổ HSQC của hợp chất SF1 phân lập (DMSO-d6) ......................11 PHỤ LỤC 6. Phổ HMBC của hợp chất SF1 phân lập (DMSO-d6) .....................14 PHỤ LỤC 7. Kết quả phân tích nhiệt quét vi sai (DSC) hợp chất SF2 ...............18 PHỤ LỤC 8.Phổ 13C-NMR của SF2 phân lập (125MHz,  = ppm, DMSO-d6) ...................................................................................................................................19 PHỤ LỤC 9.Phổ 13C CPD & DEPT của SF2 phân lập (125MHz,  = ppm, DMSOd6) ..............................................................................................................................24 PHỤ LỤC 10. Phổ 1H-NMR của SF2 phân lập (500MHz,  = ppm, DMSO-d6) .26 PHỤ LỤC 11. Phổ HSQC của hợp chất SF2 phân lập (DMSO-d6) ......................29 PHỤ LỤC 12. Phổ HMBC của hợp chất SF2 phân lập (DMSO-d6) .....................32 PHỤ LỤC 13. Sắc ký đồ và số liệu thô tính tƣơng thích hệ thống trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF1 ............................................................................38 PHỤ LỤC 14. Sắc ký đồ và số liệu thô tính tuyến tính trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF1 ...........................................................................................41 PHỤ LỤC 15.Số liệu thô độ lặp lại trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF1 ............................................................................................................................43 PHỤ LỤC 16. Số liệu thô độ chính xác trung gian trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF1 ..................................................................................................43 PHỤ LỤC 17. Sắc ký đồ và số liệu thô tính tƣơng thích hệ thống trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF2 ............................................................................44 PHỤ LỤC 18. Sắc ký đồ và số liệu thô tính tuyến tính trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF2 ...........................................................................................47 PHỤ LỤC 19.Số liệu thô độ lặp lại trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF2 ............................................................................................................................49 PHỤ LỤC 20. Số liệu thô độ chính xác trung gian trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF2 ..................................................................................................49 PHỤ LỤC 21. Sắc ký đồ và số liệu thô tính tƣơng thích hệ thống của hỗn hợp chuẩn isoxanthohumol và sophoraflavanone G ........................................................50 PHỤ LỤC 22. Sắc ký đồ và số liệu thô kết quả thí nghiệm định lƣợng sơ bộ isoxanthohumol và sophoraflavanone G trong dƣợc liệu .........................................53

MỤC LỤC PHỤ

PL.1

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PHỤ LỤC 1. Kết quả phân tích nhiệt quét vi sai (DSC) hợp chất SF1

PL.2

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PHỤ LỤC 2. Phổ 13C-NMR của SF1 phân lập (125MHz,  = ppm, DMSO-d6)

PL.3

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.4

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.5

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PHỤ LỤC 3. Phổ 13C CPD & DEPT của SF1 phân lập (125MHz,  = ppm, DMSOd6)

PL.6

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.7

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PHỤ LỤC 4. Phổ 1H-NMR của SF1 phân lập (500MHz,  = ppm, DMSO-d6)

PL.8

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.9

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.10

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PHỤ LỤC 5. Phổ HSQC của hợp chất SF1 phân lập (DMSO-d6)

PL.11

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.12

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.13

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PHỤ LỤC 6. Phổ HMBC của hợp chất SF1 phân lập (DMSO-d6)

PL.14

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.15

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.16

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.17

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PHỤ LỤC 7. Kết quả phân tích nhiệt quét vi sai (DSC) hợp chất SF2

PL.18

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PHỤ LỤC 8. Phổ 13C-NMR của SF2 phân lập (125MHz,  = ppm, DMSO-d6)

PL.19

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.20

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.21

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.22

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.23

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PHỤ LỤC 9. Phổ 13C CPD & DEPT của SF2 phân lập (125MHz,  = ppm, DMSOd6)

PL.24

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.25

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

PHỤ LỤC 10.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

Phổ 1H-NMR của SF2 phân lập (500MHz,  = ppm, DMSOd6)

PL.26

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.27

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.28

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

PHỤ LỤC 11.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

Phổ HSQC của hợp chất SF2 phân lập (DMSO-d6)

PL.29

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.30

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.31

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

PHỤ LỤC 12.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

Phổ HMBC của hợp chất SF2 phân lập (DMSO-d6)

PL.32

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.33

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.34

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.35

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.36

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.37

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

PHỤ LỤC 13.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

Sắc ký đồ và số liệu thô tính tƣơng thích hệ thống trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF1

PL.38

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.39

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.40

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

PHỤ LỤC 14.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

Sắc ký đồ và số liệu thô tính tuyến tính trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF1

PL.41

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.42

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Phụ lục

Số liệu thô độ lặp lại trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF1

PHỤ LỤC 16.

Số liệu thô độ chính xác trung gian trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF1

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

PHỤ LỤC 15.

PL.43

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

PHỤ LỤC 17.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

Sắc ký đồ và số liệu thô tính tƣơng thích hệ thống trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF2

PL.44

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.45

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.46

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

PHỤ LỤC 18.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

Sắc ký đồ và số liệu thô tính tuyến tính trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF2

PL.47

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.48

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

Số liệu thô độ chính xác trung gian trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF2

G N

IỄ N

ÀN

ÁN

-L

-H

10 00

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

PHỤ LỤC 20.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Số liệu thô độ lặp lại trong thẩm định quy trình xác định hàm lƣợng SF2 MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

PHỤ LỤC 19.

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Phụ lục

PL.49

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

PHỤ LỤC 21.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

Sắc ký đồ và số liệu thô tính tƣơng thích hệ thống của hỗn hợp chuẩn isoxanthohumol và sophoraflavanone G

PL.50

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.51

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.52

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

PHỤ LỤC 22.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

Sắc ký đồ và số liệu thô kết quả thí nghiệm định lƣợng sơ bộ isoxanthohumol và sophoraflavanone G trong dƣợc liệu

PL.53

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.54

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.55

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

ÀN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

-H B

10 00 TR ẦN G

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-L

Khóa luận tốt nghiệp DSĐH

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com Phụ lục

PL.56

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial