La fecundaci贸n in vitro
'omni celula ex celula'
'omni celula ex celula' La fecundaci贸n in vitro 2
1. Introducción y justificación……………………………...
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2. Objetivos…………………………………………………………..
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3. Metodología………………………………………….…..…....
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4. La fecundación in vitro en la especie humana .…
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5. Entrevista al Doctor Ochoa (CEFIVA) ……………....
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6. La fecundación in vitro en invertebrados …….....
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7. Conclusiones…………………………………………………....
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8. Bibliografía ………………………………………………….….. 28
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Introducción y justificación Este trabajo se planteó, cuando nuestra profesora de “Ciencias Para el Mundo Contemporáneo” nos brindó la posibilidad de realizar un estudio sobre la fecundación in vitro, cuestión que nos llamó la atención de inmediato, ya que el desconocimiento que teníamos nos alentó a querer saber más sobre este método de reproducción. Nuestra motivación fue sencilla: la magia de la biología, los secretos del cuerpo humano y el avance de la tecnología, nos permitiría avanzar en nuestros conocimientos. La sola idea de poder utilizar los instrumentos de laboratorio para investigar, nos llenaba de ilusión por descubrir, y de ánimo para estudiar los nuevos conceptos sobre la fecundación in vitro, de la aplicación de esas nuevas técnicas oímos hablar habitualmente, pero que no sabíamos exactamente en qué consistían. Nos pusimos manos a la obra. Y descubrimos que... había muchos aspectos sobre los que trabajar. ¡Lo cual no nos desanimó en absoluto! Comenzamos a leer sobre la fecundación in vitro y a documentarnos, y surgían preguntas de aspectos científicos, y también éticos que se debían resolver. No fue demasiado difícil darles respuesta cuando logramos hablar con el Doctor Ochoa, (de Cefisa), que nos explicó todos los aspectos sobre esta técnica. Y así empezó nuestro estudio, nos reunimos varias tardes, para organizar las tareas entre todas las interesadas y discutir aspectos del trabajo. Por ejemplo, ¿con que material de estudio podríamos nosotros ver una fecundación in vitro? Y en la investigación descubrimos que necesitábamos, animales tuvieran fecundación externa, fáciles de conseguir y baratos de adquirir, como por ejemplo equinodermos y moluscos, así pues, acordamos utilizar erizos de mar y mejillones, dado que abundan y estaban en época de reproducción. Y así fue como empezamos nuestra investigación.
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1. Objetivos 1.
Trabajar con rigurosidad, siguiendo el protocolo que requiere un trabajo científico.
2.
Realizar preparaciones y observarlas Fotografiarlas y realizar videos.
3.
Diferenciar los gametos masculinos y femeninos
4.
Identificar las diferentes fases de desarrollo del cigoto
5.
Trabajar en grupo conocimientos.
6.
Responsabilizarse de mantener orden y limpieza en el material del laboratorio.
compartiendo
al
microscopio.
descubrimientos
y
2. Metodología 1.
Seleccionar de todo el material, textos, webs, fotos etc. aquella
información
que
fuera
relevante
para
nuestra
investigación. 2.
Entrevistar a alguna persona que trabaje en el campo de la fertilización humana y a fin de ampliar la información sobre esta técnica.
3.
Realizar las prácticas en el laboratorio de la fertilización del mejillón, y del erizo, hacer fotografías de las distintas fases.
4.
Realizar un pequeño vídeo explicando cómo se realizan las prácticas y mostrando los resultados obtenidos
5.
Redactar el trabajo definitivo, buscando la sencillez y claridad.
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4 La fecundación in vitro en la especie humana 4.1. ¿Qué es la Fecundación In Vitro? La fecundación in vitro (FIV o IVF por sus siglas en inglés) es una técnica por la cual la fecundación de los ovocitos por los espermatozoides se realiza fuera del cuerpo de la madre. La FIV es el principal tratamiento para la infertilidad cuando otros métodos de reproducción asistida no han tenido éxito. El proceso implica el control hormonal del proceso ovulatorio, extrayendo los ovocitos de los ovarios maternos, para permitir que sean fecundados por los espermatozoides en un medio líquido. El ovocito fecundado (el zigoto) se transfiere entonces al útero de la paciente con la intención de iniciar un embarazo. El término in vitro es un término en latín que significa en cristal. Se utiliza porque en los primeros experimentos biológicos en los que se realizaban cultivos de tejidos fuera de los organismos vivos de los cuales procedían, se realizaban en contenedores de cristal, tales como tubos de ensayo, probetas o placas de Petri. (Fig1)
Fig.1
En la actualidad, el término in vitro se refiere a cualquier procedimiento biológico que se realiza fuera del organismo en el que tendría lugar normalmente, para distinguirlo de un experimento in vivo, donde el tejido permanece dentro del organismo vivo en el que normalmente se encuentra. Coloquialmente, a los bebés concebidos a través de FIV se les denomina bebés probeta. Sin embargo, normalmente la fecundación in vitro se realiza en placas de Petri; actualmente estas plástico, sin embargo, el nombre FIV sigue conservándose.
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¿Qué es necesario saber antes de iniciar un ciclo de FIV? Es importante recibir una información completa sobre el proceso, realizándose entrevistas con los siguientes especialistas
¿Qué pruebas son necesarias antes de hacer una FIV?
Pruebas previas
Ecografía confirmar que el útero y los ovarios están en condiciones de iniciar el tratamiento
Analítica hormonal
Prueba de catéter para conocer las medidas y forma del utero
Control de semen
.
¿Hay que firmar algún consentimiento? Si, es un requisito legal que la mujer o la pareja firme un consentimiento específico de la técnica de reproducción asistida que va a realizar.
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¿Qué riesgos tiene la FIV?
¿Es un tratamiento doloroso? No es un tratamiento doloroso, de hecho la gran mayoría de las pacientes coinciden en que lo peor es la ansiedad que se produce a lo largo de las diferentes fases del ciclo, especialmente cuando los embriones ya se han depositado en el útero y se espera el resultado. De ahí la importancia de entrevistarse con el/la psicóloga especialista en este tema para prepararse lo mejor posible en este aspecto.
4.2.¿Qué es la estimulación ovárica? Consiste en inducir una ovulación múltiple mediante la toma hormonas femeninas obtenidas por ingeniería recombinante y similares a las que se segregan en el organismo de la mujer a lo largo del ciclo. Durante el ciclo menstrual espontáneo inician su desarrollo muchos folículos dentro de cada ovario, pero cuando uno de ellos alcanza un tamaño un poco mayor se produce una inhibición del crecimiento de los demás; con el tratamiento se intenta que se desarrollen hasta la madurez completa varios folículos
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¿Qué es un folículo? Es el lugar del ovario donde se desarrolla el ovocito, la célula reproductora femenina. A lo largo de la primera fase del ciclo menstrual de la mujer se produce el desarrollo del folículo, empieza siendo de tamaño microscópico y crece rellenándose de líquido con nutrientes para el ovocito hasta unos 22 mm. En ese momento se abre un orificio en su pared y sale el ovocito; esto es la ovulación
Fig.2
¿Cuánto tiempo dura la fase de estimulación ovárica? Habitualmente unos 12-14 días, durante estos días la paciente deberá recibir una inyección cada día, que puede ser subcutánea o intramuscular dependiendo de la pauta de medicación elegida para ella, de su edad, la morfología de los ovarios, la analítica hormonal, o la masa corporal. Se evitan las pautas estándar puesto que cada paciente presenta unas características únicas.
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¿Qué riesgos tienen las medicaciones? Si se produce una respuesta excesiva puede dar lugar a un síndrome de hiperestimulación ovárica, en cuanto al riesgo de cáncer no se ha podido demostrar que sean causa de esta patología.
¿Puede hacerse la FIV sin estimulación ovárica? Sí, pero las probabilidades de embarazo evolutivo son inferiores al 5%. Cuando se produce desarrollo de menos de tres folículos, las posibilidades de éxito son muy bajas
4.3. Los ovocitos llegan al laboratorio: ¿Qué es un ovocito? Un ovocito es la célula reproductora femenina. Los ovocitos se forman en el ovario, en el interior de los folículos. El funcionamiento del ovario en la especie humana es cíclico y cada 28 días aproximadamente se produce la maduración de un ovocito (Fig. 2) Los ovocitos llegan al laboratorio en tubos estériles e inmersos en el líquido folicular. Se localizan mediante el microscopio, se limpian y se guardan en el incubador con medio de cultivo y a 37ºC.
Fig.3
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Tras la punción ovárica (Fig. 3) se obtiene un grupo heterogéneo de ovocitos, de los que aproximadamente el 80% son maduros, pero también hay ovocitos inmaduros y ovocitos con aspecto degenerado, estos no son aptos para la Fecundación in Vitro
4.4. Los espermatozoides llegan al laboratorio. Se obtiene la muestra por masturbación, en un recipiente estéril. Para ello se le proporciona un recipiente estéril, unas gasas y unos guantes. La muestra se entrega directamente a los biólogos/as que la etiquetarán y la empezarán a procesar antes de transcurrida una hora de su obtención Las muestras de semen se pueden congelar pero es mejor fresco ya se pierde movilidad espermática en el proceso de congelación-descongelación.
4.5. La fecundación: la unión del ovocito y el espermatozoide Consiste en facilitar el encuentro entre el ovocito y los espermatozoides. Se ponen en contacto los ovocitos y una concentración determinada de espermatozoides procesados (cien mil espermatozoides de buena movilidad), en medio de cultivo y se incuban a 37ºC hasta el momento de detectar la fecundación. (Fig.4) Fig.4
¿Qué sucede los días siguientes de la fecundación? Transcurridas 17-20h. de la inseminación se observan los ovocitos bajo el microscopio a 400x aumentos para detectar si se ha producido o no fecundación. Un ovocito fecundado presenta dos pronúcleos, Podemos encontrar ovocitos fecundados correctamente, ovocitos fecundados de forma anómala y otros no fecundados. Se pueden detectar las fecundaciones anómalas, por ejemplo, que hayan entrado dos espermatozoides. Es importante detectarlas ya que estos ovocitos se podrían dividir correctamente y dar lugar a embriones morfológicamente normales pero genéticamente anómalos que en ningún caso deben ser transferidos.
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¿Qué se observa dos días después de la Fecundación in Vitro? A las 48 horas de la FIV se observan los primeros embriones. En este momento ya puede estar dividido en 2, 3, 4 o 5 células. Se puede considerar que un buen embrión en el segundo día si presenta 4 células de igual tamaño, con porcentajes de fragmentación no superiores al 10-15% Fig.5
¿Cómo son los embriones tres días después de la fecundación? Han duplicado el número de células que tenían en el segundo día. presenta entre 7 y 9 células, con porcentajes de fragmentación variables no superiores al 5-15 %. Fig.6
¿Cómo se prepara la transferencia de embriones? La transferencia embrionaria es la introducción de los embriones en el útero materno. Los embriones se cargan en el extremo del catéter de transferencia y se depositan suavemente dentro de la cavidad uterina.
Fig.7
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5. La entrevista Entrevista al Doctor Ochoa, Andrólogo-Urólogo y embriólogo, miembro fundador de y director de los laboratorios de Andrología y embriología de Cefiva (Centro de Fecundación In Vitro Asturias).
Pregunta. ¿Cuál es el perfil de las personas donantes?¿Son muchas las personas que donan o que recurren a estos métodos? Respuesta. Las personas donantes son gente joven, por ley, menores de 35 años, generalmente estudiantes solidarios. P. ¿Y el de las personas que recurren a medios de reproducción asistida para tener hijos? R. Las personas recurren a estos métodos por diversas causas; las mujeres, en general, puede ser o bien por que estén solas, es decir, que no tengan con quien tener un hijo, que sean homosexuales, y obviamente, estas tampoco tendrían con quien tener un hijo; o bien porque por un desarrollo de su vida profesional ha retrasado su maternidad. Por otro lado, los hombres, suelen recurrir a la reproducción asistida porque no tienen suficientes espermatozoides o son débiles. Cada vez son más las personas que recurren a la reproducción asistida, pero con sus propios gametos. En cuanto a los gametos almacenados, se necesita una continua renovación, ya que se necesitan donantes con variedad de características. Por otro lado, aunque estos métodos son cada vez más habitual, no hay muchos donantes.
P. ¿Por qué en Asturias hay una población infantil tan baja? ¿Es un problema de fertilidad ¿
La baja población infantil es el resultado de un problema social-económico y no de fertilidad. Asturias es una comunidad autónoma en la que hace años hubo un gran desarrollo industrial, y por tanto la gente dedicó precisamente estos años en que toca reproducirse a desarrollar su vida profesional antes que su vida personal. Últimamente, la cosa ha cambiado y la crisis de empresas del sector público, minería, siderurgia y naval también dan como resultado el posponer la etapa reproductiva.
P. ¿Puede haber algún tipo de rechazo o efectos secundarios al tratamiento hormonal en la mujer o ante la inseminación?
R. Generalmente no hay ni rechazo ni efectos secundarios, pero no es imposible, y puede que por ejemplo, una mujer presente una reacción alérgica. Al tomar una aspirina nadie se plantea los efectos secundarios que pueden presentarse, y desde luego como cualquier medicamento puede tenerlos; lo mismo ocurre con la hormonación o con la inseminación artificial. En nuestro caso, al estar la mujer continuamente bajo observación, durante todo el tratamiento, los posibles riesgos asociados se minimizan mucho, y en este sentido no hay mayor problema. P. ¿Podría explicarnos en qué consiste el proceso de vitrificación? R. Es el último método para congelar óvulos. Es una “congelación” a alta velocidad, es tan rápido que no les da tiempo a estropearse, así se consigue un índice más alto de óvulos viables.
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P. Las mujeres que tienen cáncer muchas veces recurren a la congelación de sus óvulos. ¿Por qué hacen esto?. ¿Se hace la congelación independientemente del tipo de cáncer que sufren?. R. Los tratamientos contra el cáncer implican el uso de radioterapia y quimioterapia y en algunos casos los óvulos podrían verse afectados, producirse mutaciones. Si una mujer antes de someterse al tratamiento guarda, congelados sus óvulos, después de que haya superado el cáncer, puede recurrir a estos óvulos que están en buen estado para que sean fecundados. La extracción y conservación de óvulos la pueden hacer mujeres con cualquier tipo de cáncer, pero siempre vigilando que dicho cáncer no se transmita de padres a hijos (esto en el caso de que se conozca la etiología del cáncer, que esté perfectamente establecido que la causa es un oncogen y que éste está en sus gametos).
P. ¿Cómo se realiza una extracción de óvulos? ¿Podría explicarnos de en que consiste la punción ovárica?
(que no tiene obviamente función reproductora, sino de nutrir y proteger a los espermatozoides del medio ácido del aparato genital femenino). Este líquido es en general donde se encuentran los virus VHI, por tanto lo que se hace es quita el líquido y se quedan los espermatozoides. Estos espermatozoides, se analizan y dependiendo de si esta sanos o infectado, se podrá utilizar o no.
P. ¿Pueden, las personas que acuden a estos métodos para tener hijos, escoger en cierto modo las características de los donantes que prefieren?
En España NO. Es el equipo médico el que elige en función de las características de los/las receptoras, buscando unas características parecidas a las de las madres/padres y sobre todo vigilando de que no se pase a la descendencia algún tipo de enfermedad ligada al sexo. Sin embargo, en EE.UU. los médicos enseñan un “book” a sus pacientes y ellos/ ellas escogen al/la donante
Para la extracción de ovocitos, es necesario estimular a los ovarios mediante la hormonación, para que su producción sea mayor de la habitual. Esta ovulación esta controlada por ecografías. Cuando se ve que los óvulos están desarrollados, aproximadamente a las 36 horas, se punzan con una cánula extrayendo “la pepita de la uva”. Esto se repite con todos los óvulos.
P. ¿En qué consiste un día normal de trabajo?
P. ¿Cómo se realiza la fecundación in Vitro con personas con SIDA? ¿Tiene peligro de pasar a la descendencia?
Los pacientes van en busca de soluciones, y antes de encontrar una solución, hay que encontrar el problema, y según el problema se le aplica un tratamiento u otro.
R. Todo el trabajo esta realizado por un equipo del que forman parte desde la señora de la limpieza (por la estricta esterilización necesaria), pasando por técnicos/as de laboratorio, coordinadores/as, hasta los médicos/as.
R. El semen está formado por los espermatozoides y un líquido seminal
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Fecundación in vitro del Erizo de mar Tetrapygus niger y seguimiento de su desarrollo embrionario. El objetivo de la práctica es realizar la fecundación del erizo de mar Tetrapygus niger ya que es fácil obtener sus gametos y realizar fecundaciones, además nos permitirá seguir paso a paso el desarrollo embrionario de las fases de zigoto hasta el estadio de larva , la “ larva pluteus “
MATERIAL
1 litro de agua de mar
10 Erizos(oricios) de 6 cm de diámetro
KCl 0,5 M
10 vasos de precipitados
Portaobjetos y cubreobjetos
Placas de Petri y pipetas Pasteur
Nevera
Microscopio y cámara de vídeo
Prepararemos 100ml de KCl siguiendo los siguientes pasos: 1.- Depositar 3,73 g de KCl en un matraz aforado de 100ml. 2.- Agregar agua destilada hasta la marca de aforo 3.- Mezclar.
Previo a la realización de la práctica Hay que asegurarse de que los erizos que compramos están vivos para ello nos fijamos que tenga todas sus púas y observar que hace pequeños movimientos de las mismas. Es difícil saber si el oricio es macho o hembra, nos podemos fijar en la zona del anus, si vemos un líquido viscoso y blanquecino, seguro que será macho, en las hembras se podría ver un masa viscosa de color anaranjado, pero esto no siempre es seguro,. Si la práctica no se va a hacer inmediatamente, para asegurarse de que se mantengan vivos, deben guardarse en la nevera.
Es aconsejable realizar una esterilización del agua, este proceso puede ser sencillo, mantener a "Baño María" un recipiente con el agua de mar, durante 45 minutos a temperatura de 100ºC. De esta manera se evita la contaminación del agua durante el desarrollo embrionario.
Preparación de la disolución de KCl
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unos minutos hasta que el proceso se pare y retiramos los erizos de los vasos.
PROCEDIMIENTO 1. LIBERACIÓN DE LOS GAMETOS. La liberación de los gametos se llevará a cabo mediante el método de estímulo químico. que consiste en la aplicación de un compuesto químico o reactivo (KCl) en el individuo, el cual actúa directamente sobre las gónadas induciendo la salida de los gametos.
Se debe inyectar en la cavidad del cuerpo del erizo y no en la boca. Luego se sacude suavemente el erizo para mezclar la solución de KCl dentro de él. En esta etapa como no sabemos el sexo del erizo se debe esperar la salida de los gametos, depositando cada uno de los animales en una placa de Petri, una vez comenzada la salida de gametos, de acuerdo a la coloración se depositan en un vaso de precipitados, lleno de agua de mar con la parte aboral hacia abajo.
Antes de proceder a la fecundación hemos de asegurarnos de que realmente tenemos gametos, tomamos una muestra tanto de los vasos donde creemos que tenemos espermatozoides, y óvulos, y los miramos al microscopio óptico. LA FECUNDACIÓN Es importante destacar que por ser un proceso de fecundación externa, las especies presentan algunos mecanismos para reconocer los gametos de la misma especie, en este caso los ovocitos, poseen una capa de gelatina que reconoce e interactúa sólo con los espermatozoides de erizos negros. La fecundación la hacemos en un vaso de precipitados donde colocamos 50 ml vaso que contiene los espermatozoides (previamente hemos de homogeneizar la suspensión de espermatozoides, revolviendo con una varilla de vidrio) .y al que añadimos 2 ml de muestra de oocitos (cogidos del fondo del vaso) Justo en el momento de añadir los espermatozoides a los óvulos, anotaremos la hora y la consideraremos como el tiempo 0.
Cabe mencionar que la coloración de los gametos es roja para las hembras y blanco para los machos Una vez que se ha comprobado que hay liberación de gametos se espera
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Se puede apreciar la denominada corona de espermios, esto es, varios espermatozoides rodeando al ovocito 2.
LAS MUESTRAS
A partir de este momento, iremos tomando muestras de forma periódica, anotando el tiempo y observando al microscopio óptico las diferentes fases del desarrollo embrionario: mórula, gástrula, blástula y larva. Iremos tomando fotografias y pequeños vídeos, anotando los aumentos con los que vemos las mustras. La toma de muestra se debe hacer durante 48 horas, para ir viendo el desarrollo embrionario En el momento de tomar las muestras es importante revolver la suspensión con una varilla de vidrio para homogenizarla. Con una pipeta tomaremos las muestras en el centro del vortex que se forma al revolver, justo cuando este vortex está a punto de desaparecer, de esta manera nos aseguramos de que cogemos
Nota: En el caso del erizo no observamos el desarrollo embrionario, no sabemos si los óvulos se murieron por efecto del KCl o quizás el agua de mar que llevaba más de una semana en la nevera no reunía las condiciones de limpieza necesarias
La mejor época para llevar a cabo esta experiencia es durante los meses de enero, febrero y marzo que es cuando hay oricios en el mercado. Hay que estar muy al tanto del tiempo meteorológico, pues los días que hay temporal en el mar no los pescadores no salen a faenar y no hay oricios en las pescaderías, esto fue lo que nos sucedió a nosotras, hubo muchos días en que no encontrábamos muestras para empezar el experimento.
Fotografías de los gametos
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Fecundación in vitro del Mejillón (Mytilus sp.) y seguimiento de su desarrollo embrionario. El objetivo de la práctica es inducir la liberación de los gametos del mejillón para todo seguido forzar la fecundación. Esto nos permitirá seguir paso a paso el desarrollo embrionario de las fases de zigoto hasta el estadio de larva
MATERIAL
3 litros de agua de mar
10 Mejillones
10 vasos de precipitados
Portaobjetos y cubreobjetos
Pipeta Pasteur
Termómetro
Nevera
Microscopio
Cámara de vídeo
Previo a la realización de la práctica Hay que asegurarse de que los mejillones que compramos están vivos para ello nos fijamos en los que tienen las valvas un poco abiertas les damos un pequeño golpe en la concha y veremos que las valvas se cierran fuertemente. elegimos estos, nos sabremos si serán machos o hembras, por eso es conveniente coger por lo menos 10 ejemplares. Si la práctica no se va a hacer inmediatamente, para asegurarse de que se mantengan vivos, deben guardarse en la nevera.
PROCEDIMIENTO 3. LIBERACIÓN DE LOS GAMETOS. La liberación de los gametos se llevará a cabo mediante el método de choque térmico. Primero meteremos en el congelador en una bandeja con agua de mar los diez mejillones, durante 25 minutos. Mientras tanto calentamos 3 litros de agua de mar al baño María hasta que tenga una temperatura comprendida entre 28-30ºC (se tiene
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que evitar que se evapore el agua, para que no varíe su salinidad). Transcurridos los 25 minutos se sacan del congelador y se meten cada uno en un vaso de precipitados diferente y se cubre con unos 150 ml del agua de mar caliente (28-30ºC). En este segundo periodo que durará 55 minutos, puede que algún mejillón comience a liberar gametos, pero estos los desecharemos. Al final de este segundo periodo, se decanta el agua caliente y la sustituimos por agua de mar fría (1012ºC) durante aproximadamente 2 horas, tenemos que observar los vasos, ya que si todo va bien se tienen que observar la liberación de gametos. Las hembras liberan unos cordones de color anaranjado, que rápidamente se precipitan en el fondo del vaso. En cambio los machos liberan un fluido blanquinoso que se disuelve rápidamente en el agua de mar, haciendo que esta se enturbie. (figura de la página anterior). Una vez que se ha comprobado que hay liberación de gametos se espera unos minutos hasta que el proceso se pare y retiramos los mejillones de los vasos. Antes de proceder a la fecundación hemos de asegurarnos de que realmente tenemos gametos, tomamos una muestra tanto de los vasos donde creemos que tenemos espermatozoides, como de los que contienen óvulos, y los miramos al microscopio óptico.
Óvulo rodeado de espermatozoides 400x
4.
LA FECUNDACIÓN
La fecundación la hacemos en un vaso de precipitados donde colocamos 100 ml de agua de mar a temperatura ambiente y al que añadimos 2 ml de muestra de oocitos (cogidos del fondo del vaso). y 50 ml de material recogido del vaso donde estarán los espermatozoides, previamente hemos de homogeneizar la suspensión de espermatozoides, revolviendo con una pipeta. Justo en el momento de añadir los espermatozoides a los óvulos, anotaremos la hora y la consideraremos como el tiempo 0.
5.
LAS MUESTRAS
A partir de este momento, iremos tomando muestras de forma periódica, anotando el tiempo y observando al microscopio óptico las diferentes fases del desarrollo embrionario: mórula, gástrula, blástula y larva.
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Iremos tomando fotografias y pequeños vídeos, anotando los aumentos con los que vemos las mustras. La toma de muestra se debe hacer durante 48 horas, para ir viendo el desarrollo embrionario En el momento de tomar las muestras es importante revolver la suspensión con una varilla de vidrio para homogenizarla. Con una pipeta tomaremos las muestras en el centro del vortex que se forma al revolver, justo cuando este vortex está a punto de desaparecer, de esta manera nos aseguramos de que cogemos
Mórula
400x
La mejor época para llevar a cabo esta experiencia es durante los meses de enero y febrero
Fotografías de los gametos y embriones en las diferentes fases
Primera división del cigoto 400x
Blastocito 400
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Para facilitar el seguimiento de la práctica hemos hecho este cuadro en el que podemos visualizar los tiempos y las acciones que tenemos que ir haciendo. Tiempo
Acción Colocar los mejillones en el congelador
30 minutos
Mientras tanto calentar al baño María 3 litros de agua de mar a 28º-30ºC Colocarlos uno a uno en vasos con 150 ml a 28ºC
55 minutos
Al final de este periodo, decantar el agua y cambiarla por agua de mar a 10-12ºC Añadir en cada vaso 150 ml del agua a
2 horas
10ºC. ir observando durante estas dos horas si hay liberación de gametos FECUNDACIÓN
En un vaso de precipitados con 100 ml de agua de mar a temperatura ambiente Añadir: 2 ml de la muestra de oocitos 50 ml de la muestra de espermatozoides Homogeneizar e ir tomando muestras. Observar las muestras durante dos días. e ir tomando fotografías
Nota: Las fotografías, fueron tomadas con el aumento indicado, pero después al colocarlas en este texto las hemos ampliado más o menos, de manera que no se mantiene la proporción que indicamos.
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7. Conclusiones Quizás lo que más nos impresionó después de acabar el trabajo, mientras charlábamos y reflexionábamos informalmente, sobre todo lo que habíamos hecho, fue lo sencillo que se presentaba ante nuestros ojos la fertilización (con los erizos y los mejillones) y lo complicado que era en los humanos. ¡Tantos tratamientos a los que se tenían que someter la mujeres para producir los óvulos, y luego extraerlos, y fecundarlos… y todo, en aquella atmósfera de esterilidad!. Y sin embargo, allí delante de nosotras, en aquellos vasos de precipitados millones de espermatozoides con su baile, felices,… y, al cabo de una horas, ya teníamos mórulas. Bueno, era todo tan impresionante!. Durante el trabajo, hubo momentos de desilusión pero se vieron recompensados con la visualización de esas imágenes, y las fotos y vídeos que hicimos. ¡Observar al microscopio la imagen espectacular de los espermatozoides intentando fecundar al ovulo!. Óvulos y espermatozoides, uniéndose… ¡la vida creándose ante nuestros propios ojos!. Otro aspecto que debe de ser mencionado, es la satisfacción que crea el trabajo en equipo, comprobar que somos capaces de ponernos de acuerdo en la distribución de tareas, en aceptar los cambios que se van haciendo sobre la marcha, porque a veces se presentaban inconvenientes con los que no contábamos, por ejemplo el temporal marítimo que hizo que durante una buena temporada no hubiera erizos y no podíamos realizar la práctica. Pero al final, resultó una experiencia muy agradable y enriquecedora; y sobre todo, sentir ese gusanillo del saber, del conocimiento y la ciencia que nos pica, y poder satisfacer el ansia de descubrir e investigar un poquito y a grandes rasgos, este amplio mundo de la Ciencia, y mostrárselo al resto de nuestros compañeros, compartiendo con ellos todo lo que habíamos aprendido.
AGRADECIMIENTOS Al Dr. Ochoa por el tiempo que nos dedicó la información y el material que nos prestó para poder desarrollar la parte del trabajo correspondiente a nuestra especie. Por último, agradecer a nuestra profesora de CMC esta oportunidad, ya que si no fuera por su ánimo, su trabajo y su apoyo en cuanto necesitábamos no nos hubiéramos metido en esta aventura, de la que tanto hemos aprendido.
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1. ATLAS DE REPRODUCCIÓN ASISTIDA. Coordinadores Dr. Julio Herrero Dra. Carmen Márquez. Universidad Autónoma de Barcelona. Valñl d’Hebron. Serono 2. (Mytilus
sp.)
i
seguiment
del
seu
desenvolupament
embrionari Montserrat Bigas, Escola del Mar de Badalona. Laia Pibernat, estudiant de Biologia Montserrat Cabello, Centre de Documentació i Experimentació en Ciències i Tecnologia (CDECT)
http://www.cefiva.com/index.php?lang=en
http://www.reproduccionquiron.com/index.php?option=com_content&task=view&id=16&Ite mid=85
http://www.institutomarques.com/fecundacion_antes_invitro.html
http://www.stanford.edu/group/Urchin/first.htm#timing
http://virtualurchin.stanford.edu/index.html Imprescindibles, información sobre el material y método para realizar las practicas de desarrollo embrionario, ambas páginas tienen presentaciones en flash que ilustran cómo realizar diferentes procedimientos, y tiene pequeños vídeos en los que se observan el desarrollo embrionario visto al microscopio.
Nota:Nuestro vídeo, en la contraportada: La fecundación in vitro 24
La fecundación in vitro Autoras : PATRICIA Álvarez Arias VERONICA Patallo Trueba MARINA Sánchez Acero MARIA
Sánchez García
Tutora: Esther Fernández
IES Dr. Fleming OVIEDO (ASTURIAS)
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