Portafolio fotográfico kelly bueno by GCeva

PORTAFOLIO FOTOGRÁFICO CEPARIO DE MICROORGANISMOS UNIVERSIDAD DE SANTANDER UDES BUCARAMANGA 0

PORTAFOLIO FOTOGRÁFICO MICROORGANISMOS CEPARIO MICROBIOLOGÍA UDES

PRESENTADO POR KELLY YOKARY BUENO CASTELLANOS 10331009

TUTOR JHORMAN NIÑO

JEFE ORIENTADORA MARITHZA PARDO

UNIVERSIDAD DE SANTANDER UDES MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL BUCARMANGA / COLOMBIA 2014 1

CONTENIDO

1. HONGOS ...................................................................................................................4 1.1Trichoderma sp ........................................................................................................6 1.2 Beauveria bassiana .................................................................................................8 1.3 Absidia sp ..............................................................................................................10 1.4 Aspergillus sp ........................................................................................................11 1.4.1 Aspergillus brasilienses ...............................................................................13 1.4.2 Aspergillus clavatus .....................................................................................14 1.4.3 Aspergillus fumigatus ..................................................................................15 1.4.4 Aspergillus flavus .........................................................................................16 1.4.5 Aspergillus niger ...........................................................................................17 1.5 Fusarium sp...........................................................................................................19 1.6 Rhizopus sp...........................................................................................................21 1.7 Penicillum sp. ........................................................................................................23 1.8 Syncephalastrum sp ..............................................................................................26 1.9 Paicelomyces sp ...................................................................................................27 1.10 METODOS DE CONSERVACIÓN ......................................................................29 1.10.1 CRIOPRESERVACIÓN ................................................................................29 1.10.2 METODO DE PRESERVACIÓN EN AGUA DESTILADA PARA HONGOS FILAMETOSOS .......................................................................................................29 1.10.3 CONSERVACIÓN EN AGUA DESTILADA .................................................30 1.10.4 CONSERVACIÓN EN LECHE DESCREMADA ...........................................30 2. BACTERIAS ............................................................................................................31 2.1 GRAM NEGATIVAS ..............................................................................................33 2.1.1 Acinetobacter sp ...........................................................................................34 _Toc4046951422.1.2 Citrobacter sp ..........................................................................36

2.1.3 Escherichia coli .............................................................................................38 2.1.4 Enterobacter sp .............................................................................................40 2.1.5 Klebsiella sp ..................................................................................................42 2

2.1.6 Proteus sp .....................................................................................................44 2.1.7 Pseudomonas sp ..........................................................................................46 2.1.8 Salmonella sp ................................................................................................48 2.1.9 Serratia sp .....................................................................................................50 2.2 GRAM POSITIVAS................................................................................................52 2.2.1 Bacillus sp .....................................................................................................53 2.2.2 Lactobacillus sp ............................................................................................55 2.2.3 Listeria sp ......................................................................................................57 2.2.4 Micrococcus sp .............................................................................................59 2.2.5 Streptococcus sp ..........................................................................................61 2.2.6 Staphylococcus sp .......................................................................................63 2.2.7 Streptomyces griceus ..................................................................................65 2.3 METODOS DE COSERVACIÓN...........................................................................68 2.3.1 PROTOCOLO DE KRISOP (PAPEL FILTRO) ..............................................68 2.3.2 CONSERVACIÓN EN AGUA DESTILADA ..................................................68 2.2.3CONSERVACIÓN EN CRYOBANK ................................................................69 2.2.4CONSERVACIÓN CON GICEROL O ACEITE MINERAL ..............................69

HONGOS

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HONGOS Todos son heterótrofos (quimioorganótrofos) por lo que tienen que alimentarse de materia orgánica preformada que utilizan como fuente de energía y de carbono. • Son eucariontes, es decir, presentan un núcleo diferenciado con membrana bien organizada. • Tienen una pared celular formada por polisacáridos, polipéptidos y quitina; esta pared es rígida, por lo cual no pueden fagocitar partículas alimenticias sino que absorben nutrimentos simples y solubles que obtienen al desintegrar polímeros mediante enzimas extracelulares llamadas despolimerasas. • La estructura fúngica consta de un complejo llamadotalo o micelio (fi gura 3-1) que, a su vez, está constituido por múltiples fi lamentos o hifas (hifomicetos o mohos) o, menos a menudo, por estructuras unicelulares o levaduras (blastomicetos); éstas se reproducen por gemación (Saccharomyces cerevisiae) y casi nunca por fi sión binaria (Schizosaccharomyces pombe); también son una excepción los Chytridiomycetes (citridiomicetos), formados por células redondas grandes con rizoides, y los mohos mucilaginosos, que carecen de pared celular y pueden alimentarse por fagocitosis, estos hongos se adaptan a medios acuáticos Los hongos, de manera natural o inducida por condiciones ambientales y de nutrientes, producen enzimas cuya función está implicada en la fi siopatogenia; se han demostrado proteasas en Coccidioides immitis y Aspergillus niger; en el primero destruyen inmunoglobulinas, mientras en el segundo le confi eren capacidad de invasión. Los organelos son: núcleo rodeado por una membrana, mitocondrias, retículo endoplasmático liso, aparato de Golgi y membrana celular (que contiene ergosterol, característico del reino). Además poseen: 1) cuerpos cisternales o dictiosomas; éstos liberan: a) macrovesículas que atraviesan la membrana celular en un proceso inverso a la picnocitosis; enzimas líticas que abren pequeños poros en la pared y depositan un material amorfo que da lugar a la nueva pared; b) microvesículas que contienen quitina sintetasa, que actúa sobre dicho material para formar quitina y 2) organelos membranosos circulares. La forma de crecimiento depende de la cantidad de macrovesí- culas y microvesículas, y de su disposición; si se concentran en un punto se originará una hifa, y si muestran localización homogénea en la periferia, una levadura.

1.1Trichoderma sp

CARACTERISTICAS Trichoderma es un género de hongos que está presente en todos los suelos, donde son los más prevalentes cultivables hongos. Muchas especies de este género se pueden caracterizar como oportunistas simbiontes de plantas no virulentas. Esto se refiere a la capacidad de varias especies de Trichoderma para formar relaciones endófitos mutualistas con varias especies de plantas.(Harman & Viterbo, 2004).

IMPORTANCIA BIOTECNOLOGÍCA El género Trichoderma contiene especies que son de importancia biotecnológica. Algunas de ellas son usadas como agentes de biocontrol contra enfermedades de plantas, otras para la producción de enzimas y antibióticos, en la biorremediación de ambientes contaminados, y como fuente de genes para la obtención de plantas transgénicas.(Sanchez, 2007)

METODO DE CONSERVACIÓN Clasificación científica

•

Método de preservación con agua destilada para hongos filamentosos

Reino:

Fungi

División:

Ascomycota

Orden:

Hypocreales

Familia:

Clavicipitaceae

IMAGENES

1.2 Beauveria bassiana

CARACTERISTICAS Beauveria bassiana es un hongo deuteromiceto que crece de forma natural en los suelos de todo el mundo. Su poder entomopatógeno le hace capaz de parasitar a insectos de diferentes especies, causando la conocida enfermedad blanca de la muscardina. Pertenece a los hongos entomopatógenos y actualmente es utilizado como insecticida biológico o biopesticidacontrolando un gran número de parásitos de las plantas como son las orugas, las termitas, las moscas blancas, los áfidos, los escarabajos o los tisanópteros.(AGRO 2.0 PRENSA, 2012)

IMPORTANCIA BIOTECNOLOGÍCA Es usado para el control de un gran número de insectos y plagas, es la especie de entomopatógenos comercialmente más usada alrededor del mundo; es líder en el control biológico de la broca del café.(PROCAFE, 2011) CICLO INFECTIVO El modo de acción de este hongo entomopatógeno consta de diferentes etapas. Cuando las esporas microscópicas del hongo entran en contacto con las células de la epicutícula del insecto, estas se adhirieren e hidratan. Las esporas germinan y penetran la cutícula del insecto. Una vez dentro, las hifas crecen destruyendo las estructuras internas del insecto y produciendo su muerte al cabo de unas horas. Tras ello, si las condiciones ambientales son favorables, pueden emerger del cadáver esporas del hongo con capacidad para ser propagadas de nuevo y reinfectar a nuevos insectos.

METODO DE COSERVACIÓN

•

Conservación en leche

IMÁGENES

1.3 Absidia sp CARACTERISTICAS Las especies de Absidia son cosmopolitas y ubicuas en la naturaleza, se encuentran generalmente como contaminantes ambientales, en detritus vegetal y suelo, y pueden ser aislados de alimentos y aire interior. Este género contiene 21 especies, siendo la más frecuentemente aislada y la única especie considerada patógena Absidia corymbifera. Las colonias se caracterizan por ser algodonosas, laxas, de color blanco a gris, con micelio aéreo con puntos grises oscuros, que cubren la caja de Petri.(Tangarife, 2011)

ESPECIES La especie A. corymnifera (Mucor rhizopodiformis) y otras son patógenas para animales de laboratorio y pueden causar micosisgeneralizada o localizada en el ser humano. La especie A. ramosa (Mucor ramosus) es patógena para el hombre, crece en el pan y vegetales marchitos, y causa otomicosis y en ocasiones mucomicosis. Antiguamente recibía los nombres de Leptomitus,Lichtemiay "Lepticum"(Diccionario Enciclopédico ilustrado de Medicina Dorland)

METODO DE CONSERVACIÓN

•

Conservación leche descremada

Clasificación científica

Reino:

Fungi

División:

Zygomycota

Orden:

Mucorales

Familia:

Mucoraceae

IMÁGENES

Septa

Esporangi o

Columela

Esporangiosporas

1.4 Aspergillus sp CARACTERISTICAS El Aspergillus es un género de alrededor de 600 hongos (mohos), y es ubicuo. Los hongos se pueden clasificar en dos formas morfológicas básicas: las levaduras y las hifas. El Aspergillus es un hongo filamentoso(compuesto de cadenas de células, llamadas hifas). El hábitat natural del Aspergillus son el heno y el compostaje. Dentro del tipo de hifas se encuentra en las no pigmentadas que reciben el nombre de hialohifomicetos. A su vez tiene 2 formas de presentación: Una saprofítica en que aparece como un hongo con hifas septadas del que surgen los conidioforos que a su vez tienen una ampliación que es la cabez aspergilar de la que surgen unas estructuras de forma ampular que son las fiálides, de las que surgirán las estructuras reproductivas (también llamados propágulos) que reciben el nombre de fialoconidias.(CABALLERO, 2005)

ESTRUCTURA La estructura microscópica del Aspergillus es única. Tienen hifastabiculares y conidioforas cuya cabeza está localizada en el extremo de un hifa, compuesta por una vesícula rodeada por una corona de fiálides en forma de botella directamente insertadas sobre la vesícula.8 De las fiálides se desprenden las esporas (conidios). Otras estructuras se encuentran en ciertas especies y no en otras, por ejemplo, las células de Hüle.

METODO DE CONSERVACIÓN

• Método de conservación con agua Destilada para hongos filamentosos

Clasificación científica

Reino:

Fungi

Filo:

Ascomycota

Clase:

Eurotiomycetes

Familia:

Trichocomaceae

1.4.1 Aspergillus brasilienses CARACTERISTICAS Es utilizado en las industrias para la producción de enzimas, crece en salvado de trigo y tiene grandes ventajas en realiza degradación de biomasa vegetal, utiliza diferentes fuentes de carbono monómericos.

IMAGENES

Esporas

Esporangio Conidióforo

1.4.2 Aspergillus clavatus CARACTERISTICAS

Aspergillus clavatus es una de las especies de Aspergillus que pueden causar la patología en los seres humanos. Es hipoalergénico y causa una neumonitis por hipersensibilidad llamada malta de trabajo de pulmón; produce la toxina patulina y representa una alternativa prometedora para el control de larvas de los mosquitos.(Seye & Faye, 2009)

IMÁGENES

1.4.3 Aspergillus fumigatus CARACTERISTICAS Esta presenta en el suelo, aire, agua, alimentos, plantas y materia orgánica en descomposición, se encuentra en el polvo y en los alimentos; su desarrollo se ve favorecido por la humedad y as temperaturas elevadas. Es patógeno para los humanos y animales debido a que causa la enfermedad conocida como Aspergillosis.(Rev iberoam Micol 2002, 2009)

IMAGENES

1.4.4 Aspergillus flavus CARACTEISTICAS En la naturaleza, A.flavus es capaz de crecer en muchas fuentes de nutrientes, es predominantemente un saprofito y crece en la planta y el tejido muerto animal en el suelo. Por esta razón es muy importante en el reciclaje de nutrientes. A, flavus también puede ser patógenos en varias especies de plantas y animales, incluyendo los seres humanos y los animales domésticos debido a l producción de afltoxinas .Este hongo puede infectar las semillas de maíz, maní, algodón y nogales. (Center for integrated fungal research, 2005)

IMAGENES

1.4.5 Aspergillus niger CARACTERISTICAS Aspergillus niger es un hongo dañino para los humanos y animales en cantidades grandes y benéfico en cantidades pequeñas y controlables. Puede causar que crezca moho negro en las plantas y, al igual que la mayoría de los mohos, causará enfermedades de pulmón si se inhala demasiado. El Aspergillus Niger también puede causar infecciones de oído graves si muchas esporas de moho se alojan en el canal auditivo. Se usa en la producción de ácido cítrico y glucónico, en la fermentación del té y en los conservadores de comida.(Wood, 2013)

IMPORTANCIA BIOTECNOLOGÍCA LA PRODUCCIÓN DE ÁCIDO CÍTRICO Aspergillus niger puede usarse para producir ácido cítrico una vez que el hongo ha madurado y el moho se ha filtrado. El hidróxido de calcio y el ácido sulfúrico se combinan con la solución restante para producir ácido cítrico. Este es un proceso industrial y no debe hacerse en casa como un experimento. LA CONSERVACIÓN DE LOS ALIMENTOS La producción industrial principal del Aspergillus Niger está enfocada a la conservación de alimentos. Debido a que es un agente de fermentación, puede someterse a un proceso químico que lo hace un polvo que se usa en la conservación de alimentos. Al igual que el jugo de limón o de lima pueden evitar que una manzana o un aguacate se oscurezcan en la presencia del oxígeno, el Aspergillus Niger, que se encuentra en el jugo cítrico, puede ayudar a preservar la comida embotellada y enlatada. PRODUCCIÓN DE ENZIMAS Aspergillus nigeres utilizado comúnmente en la industria alimentaria para producir enzimas como celulasa, invertasa, amiloglucosidasa, amilasa, lactasa, proteasa ácida y pectinasa. El Aspergillus niger también es utilizado para preparar Pu-erh, un té de hoja chino.(Devaney, 2013) 17

IMÁGENES

1.5 Fusarium sp CARACTERISTICAS El género Fusarium representa colectivamente el grupo más importante de patógenos fúngicos de plantas, causando diversas enfermedades en especies de plantas económicamente importantes casi todos. Igualmente preocupante es el riesgo para la salud que representa para los seres humanos y el ganado por la gran cantidad de micotoxinas de Fusarium. Además de su importancia económica, especies de Fusarium también sirven como organismos modelo clave para la investigación biológica y evolutiva.(Broad institute, 2012)

IMPORTANCIA EN LA AGRICULTURA Algunas especies del enero Fusarium son benéficas en la agricultura y se han utilizado en el control biológico de ciertas enfermedades causadas por especies patogénicas, principalmente aquellas pertenecientes a la especie F.oxysporum. Algunas especies se han utilizado como micoherbicidas, por su potencial para destruir malezas. (Arbelaez, 2010)

Clasificación científica

METODO DE CONSERVACIÓN • Criopreservación

Reino:

Fungi

Filo:

Ascomycota

Clase:

Sordariomycetes

Orden:

Hypocreales

Familia:

Nectriaceae

IMÁGENES

1.6 Rhizopus sp. CARACTERISTICAS Algunas spp. De Rhizopus son agentes oportunistas de zigomicosis humana. Pueden causar serias (y con frecuencia mortales) infecciones en humanos y en animales debido a su rápido crecimiento a relativamente altas temperaturas. Algunas especies son patógenos vegetales. Dos son usados en fermentación: Rhizopus oligosporus, en la producción de tempeh, un alimento fermentado derivado de grano de soja; R. oryzae se usa en la producción de bebidas alcohólicas, en partes de Asia y de África. Hongo filamentoso que presenta esporangióforos sin ramificar (de hasta 2 mm x 20 µm), de color pardo oscuro que nace de un gran nudo de rizoides bien desarrollados. Esporangios esféricos negros (de hasta 275 µm de diámetro) con columela.

IMPORTANCIA BIOTECNOLOGÍCA Existen especies de Rhizopus como es R nigricans que tienen importancia en la industria debido a que es clave en la producción de cortisona e hidrocortisona, técnicamente lleva a cabo la hidroxilación esteroespecifica clave de un precursor de la cortisona; por otro lado también es capaz de hidrolizar el almidón y producir etanol.(AAPC, 2013) Clasificación científica

METODO DE CONSERVACIÓN

Reino:

Fungi

División:

Zygomycota

Clase:

Zygomycetes

Orden:

Mucorales

• Método de preservación en agua •

Destilada para hongos filamentosos

IMÁGENES

1.7 Penicillum sp. CARACTERISTICAS El Penicillium es un género grande que puede encontrarse casi por todas partes, siendo el género de hongos más abundante en suelos. La fácil proliferación de los Penicillium en los alimentos es un problema. Algunas especies producen toxinas, sin embargo muchas especies de Penicillium son beneficiosas para los seres humanos. Los quesos tales como el roquefort, brie, camembert,stilton, etc. se crean a partir de la acción de diferentes especies de Penicillium sobre la leche, y son absolutamente seguros de comer. El antibiotico penicilina es producida por el hongo Penicillium chrysogenum, un moho ambiental.(Olivares, 2013)

IMPORTANCIA INDUSTRIAL Varias especies del género Penicillium juegan un papel central en la producción de queso y de diversos productos cárnicos. Para ser más específicos, los moldes de Penicillium se encuentran en el queso azul. Penicillium camemberti y Penicillium roqueforti son los moldes de Camembert, Brie, Roquefort, y muchos otros quesos. Penicillium nalgiovense se utiliza para mejorar el sabor de las salchichas y jamones, y para prevenir la colonización por otros mohos y bacterias. Además de su importancia en la industria alimentaria, especies de Penicillium y Aspergillus sirven en la producción de una serie de enzimas producidas biotecnológicamente y otras macromoléculas, tales como glucónico, cítrico y tartárico, así como varios pectinasas, lipasas, amilasas, , celulasas y proteasas. Algunas especies de Penicillium han mostrado potencial para su uso en biorremediación debido a su capacidad para descomponer una variedad de compuestos xenobióticos. El género es la fuente de los principales antibióticos. La penicilina, un fármaco producida por P. chrysogenum, fue descubierta por Alexander Fleming en 1929, y se encontró que inhiben el crecimiento de bacterias Gram positivas. Su potencial como un 23

antibiótico se realizó a finales de 1930, y Howard Florey y Ernest Chain purificada y concentrada del compuesto. El éxito de la droga en el ahorro de los soldados en la Segunda Guerra Mundial de morir de las heridas infectadas ganó Fleming, Florey y Chain el Premio Nobel de Medicina en 1945. La griseofulvina es un medicamento antifúngico y un agente quimioterapéutico potencial que fue descubierto en P. griseofulvum. Especies adicionales que producen compuestos capaces de inhibir el crecimiento de células tumorales in vitro incluyen: P. pinophilum, P. canescens, y P. glabrum.(E-CENTROCIENCE, 2012)

METODOS DE CONSERVACIÓN •

Conservación en leche descremada

Clasificación científica Reino:

Fungi

Filo:

Ascomycota

Clase:

Eurotiomycetes

Orden:

Eurotiales

Familia:

Trichocomaceae

Género:

Penicillium

IMÁGENES

1.8 Syncephalastrum sp CARACTERISTICAS Syncephalastrum spp. se aísla del suelo y heces de animales sobre todo en áreas tropicales y subtropicales, comúnmente se considera como un contaminante y rara vez se asocia con enfermedades en el humano. La única especie aislada es Syncephalastrum racemosum. Las colonias son algodonosas laxas, con micelio aéreo abundante, de inicio de color blanco que a medida que envejecen se vuelve grises o negras. El reverso es de color amarillo pálido a café.(Tangarife, 2011)

METODO DE OCNSERVACIÓN •

Conservación en leche descremada

IMÁGENES

1.9 Paicelomyces sp CARACTERISTICAS Paecilomyces es un género de hongos nematófagos que mata los nematodos nocivos por patogénesis, que causa la enfermedad en los nematodos. Por tanto, el hongo puede ser utilizado como un bio nematicida para controlar nematodos aplicándolos al suelo.(AGRO 2.0 PRENSA, 2012)

Las especies de Paecilomyces se han aislado a partir de suelo, restos vegetales, y frutas. Usualmente es considerado como contaminante, pero se ha aislado como agente de Hialohifomicosis. Este género contiene varias especies, siendo las más comunes P. lilacinus y P. variotti.(Tangarife, 2011)

METODO DE CONSERVACIÓN •

Conservación en leche descremada

Clasificación científica Reino:

Hongos

Filo:

Ascomycota

Clase:

Eurotiomycetes

Orden:

Eurotiales

Familia:

Trichocomaceae

Género:

Paecilomyces

IMÁGENES

CONIDIA

FILAIDE CONIDIOFORO SEPTOS

HIFA 28

1.10 METODOS DE CONSERVACIÓN 1.10.1 CRIOPRESERVACIÓN Crioconservación es la conservación de material temperaturasRango -20 ºC a -196 ºC (nitrógeno líquido)

biológico

muy

bajas

El nitrógeno líquido es la temperatura práctica más baja disponible. A la temperatura de equilibrio, la difusión molecular es extremadamente lenta y la probablilidad de que ocurran reacciones químicas es prácticamente nula Para realizar Criopreservación se dispensa 1ml de solución estéril %V/V (Glicerol al 10% y agua destilada), luego de preparar la solución e agregan las esporas de los hongos y se llevan a congelación.

1.10.2 METODO DE PRESERVACIÓN EN AGUA DESTILADA PARA HONGOS FILAMETOSOS Para realizar este método lo primero que debe hacerse es preparar agar malta en tubo y con inclinación de pico de flauta, seguidamente inocular el hongo dúrate 5 días, agregar 9ml de agua destilada y agitar en el vortex. Tomar un frasco que contenga 7ml de agua destilada estéril y agregar1ml del inoculo hecho anteriormente, finalmente congelar a -4ºC

1.10.3 CONSERVACIÓN EN AGUA DESTILADA Se prepara agar PDA en tubo con inclinación en pico de tubo de flauta, se inocula el hongo y se deja en crecimiento por 2 semanas a 25ºC, luego de crecido el microorganismo se adiciona 10ml de agua estéril y se homogeniza en vortex, luego se toman 1.8ml de la suspensión y se adiciona en un eppendorf de 2ml, finalmente se lleva a refrigeración a -4ºC.

1.10.4 CONSERVACIÓN EN LECHE DESCREMADA PREPARACIÓN DE LA LECHE DESCREMADA Agua destilada y leche descremada calcium %v/v Se debe alcanzar una emulsión al 20% de la leche descremada y ponerse a autoclavar

PREPARACIÓN DE LA CEPA Se adiciona a la cepa ya crecida 10ml de la leche descremada, se lleva al vortex y se toma una suspensión de 1.8ml que es agregada a un eppendorf y congelada a -20ºC

2. BACTERIAS 17

BACTERIAS Las bacterias son microorganismos unicelulares que presentan un tamaño de algunos micrómetros de largo (entre 0,5 y 5 µm, por lo general) y diversas formas incluyendo esferas, barras y hélices. Las bacterias son procariotas y, por lo tanto, no tienen núcleo ni orgánulos internos. Generalmente poseen una pared celular compuesta de peptidoglucanos. Muchas bacterias disponen de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento y son móviles. Son los organismos más abundantes del planeta. Son ubicuas, encontrándose en todo hábitat de la tierra, creciendo en el suelo, en manantiales calientes y ácidos, en desechos radioactivos, en las profundidades del mar y de la corteza terrestre. Algunas bacterias pueden incluso sobrevivir en las condiciones extremas del espacio exterior. Se estima que hay en torno a 40 millones de células bacterianas en un gramo de tierra y un millón de células bacterianas en un mililitro de agua dulce. En total, se calcula que hay aproximadamente 5×1030 bacterias en el mundo. Las bacterias son imprescindibles para el reciclaje de los elementos, pues muchos pasos importantes de los ciclos biogeoquímicos dependen de éstas. Como ejemplo cabe citar la fijación del nitrógeno atmosférico. Sin embargo, solamente la mitad de los filos conocidos de bacterias tienen especies que se pueden cultivar en el laboratorio, por lo que una gran parte (se supone que cerca del 90%) de las especies de bacterias existentes todavía no ha sido descrita. Las primeras bacterias fueron observadas por Anton van Leeuwenhoek en 1683 usando un microscopio de lente simple diseñado por él mismo. Inicialmente las denominó animalículos y publicó sus observaciones en una serie de cartas que envió a la Royal Society. Louis Pasteur demostró en 1859 que los procesos de fermentación eran causados por el crecimiento de microorganismos, y que dicho crecimiento no era debido a la generación espontánea, como se suponía hasta entonces. (Ni las levaduras, ni los mohos, ni los hongos, organismos normalmente asociados a estos procesos de fermentación, son bacterias). Pasteur, al igual que su contemporáneo y colega Robert Koch, fue uno de los primeros defensores de la teoría germinal de las enfermedades infecciosas. Robert Koch fue pionero en la microbiología médica, trabajando con diferentes enfermedades infecciosas, como el cólera, el ántrax y la tuberculosis. Koch logró probar la teoría germinal de las enfermedades infecciosas tras sus investigaciones en tuberculosis, siendo por ello galardonado con el premio Nobel en Medicina y Fisiología, en el año 1905. (Rinke, n.d.) 32

2.1 GRAM NEGATIVAS ESTRUCTURA La envoltura celular de las bacterias Gram-negativas está compuesta por una membrana citoplasmática (membrana interna), una pared celular delgada de peptidoglicano, que rodea a la anterior, y una membrana externa que recubre la pared celular de estas bacterias.4 Entre la membrana citoplasmática interna y la membrana externa se localiza el espacio periplásmico relleno de una sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas importantes para la nutrición en estas bacterias. Retienen la safranina. La membrana externa contiene diversas proteínas, siendo una de ellas las porinas o canales proteícos que permiten el paso de ciertas sustancias. También presenta unas estructuras llamadas lipopolisacáridos (LPS), formadas por tres regiones: el polisacárido O (antígeno O), una estructura polisacárida central (KDO) y el lípido A (endotoxina).(Ghuysen, 2001)

PATOGENIA Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan enfermedades. Una de las varias características únicas de las bacterias Gram-negativas es la estructura de la membrana externa. La parte exterior de la membrana comprende un complejo de lipopolisacáridos cuya parte lípida actúa como unaendotoxina y es responsable de la capacidad patógena del microorganismo.1 Este componente desencadena una respuesta inmune innata que se caracteriza por la producción de citocinas y la activación del sistema inmunológico. La inflamación es una consecuencia común de la producción de citocinas, que también pueden producir toxicidad. Si la endotoxina entra en el sistema circulatorio, provoca una reacción tóxica con aumento de la temperatura y de la frecuencia respiratoria y bajada de la presión arterial. Esto puede dar lugar a un shock endotóxico, que puede ser fatal. La membrana externa proporciona a estas bacterias resistencia a la lisozima y a la penicilina. Afortunadamente, se han desarrollado otros tratamientos alternativos para combatir la membrana externa de protección de estos patógenos, tales como la lisozima con EDTA, y el antibiótico ampicilina. También pueden usarse otras drogas, a saber, cloranfenicol, estreptomicina yácido nalidíxico.(Salton & Kim, 2000) 33

2.1.1 Acinetobacter sp CARACTERISTICAS Acinetobacter es un género de bacterias Gram-negativas que pertenece al filo Proteobacteria. Las especies de Acinetobacterson bacilos estrictamente aerobios no fermentadores, no móviles, oxidasa-negativos que se presentan en pares al microscopio. Se distribuyen ampliamente en la naturaleza, son importantes en el suelo y contribuyen a su mineralización.(Elsa & Beatriz, 2005)

Acinetobacter baumannii Acinetobacter baumannii es una especie de bacteria patógena gram-negativa que es resistente a la mayoría de los antibióticos. Como resultado de su resistencia al tratamiento con fármacos,1 algunas estimaciones afirman que la enfermedad podría estar matando a decenas de miles de pacientes en los Estados Unidos cada año. La enfermedad producida por la A. baumannnii puede causar neumonía severa e infecciones del tracto urinario (ITU).(Herandez, Garcia, & Gomez, 2010)

IMPORTANCIA INDUSTRIAL Muchas de las características de Acinetobacter, ecología, taxonomía, fisiología y genética apuntan a la posibilidad de explotación de sus características únicas para aplicaciones biotecnológicas. Las cepas deAcinetobacter son a menudo omnipresentes, muestran una gran versatilidad metabólica, son robustas y algunas son adecuadas para los sistemas modernos de manipulación genética molecular. Estas características están siendo explotadas en diversas aplicaciones biotecnológicas incluyendo la biodegradación y biorremediación, la producción de lípidos y péptidos, ingeniería de enzimas, producción de biosurfactantes y biopolímeros y la ingeniería de nuevos productos derivados de estos productos. Se prevé que los avances en estos campos ampliarán la gama de aplicaciones de la biotecnología moderna para Acinetobacter.(Gutnick, 2008)

METODO DE CONSERVACIÓN se realiza por criobank, aceite mineral y glicerol al 3% 34

Acinetobacter

Acinetobacter baumannii CIE9-MC 041.85

Clasificación científica Dominio: Bacteria Filo:

Proteobacteria

Clase:

Proteobacteria gamma

Orden:

Pseudomonadales

Familia:

Moraxellaceae

Género:

Acinetobacter BRISOU & PRÉVOT 1954

TINCIÓN DE GRAM

Especies •

A. baumannii

•

A. baylyi

•

A. bouvetii

•

A. calcoaceticus

2.1.2 Citrobacter sp CARACTERISTICAS Citrobacter forma, junto con Enterobacter, Klebsiella y Escherichia, grupo coliformes de bacterias entéricas.

Son bacterias móviles, con capacidad variable para fermentar la lactosa, algunos pueden utilizar citrato y otros no, el género Citrobacter es un grupo de bacilos Gram negativos aerobios que se encuentran frecuentemente en el agua, el suelo, la comida, vegetación y como flora saprófita en el tracto intestinal de muchos animales además del hombre. Se trata de microorganismos ubicuos que son causa frecuente de infecciones importantes, especialmente en huéspedes inmunodeprimidos. Es uno de los patógenos más importantes en unidades de cuidados neonatales hospitalarios. En los seres humanos producen, por ejemplo, infecciones urinarias, meningitis neonatal y abscesos cerebrales. Destruyen las microvellosidades, formando lesiones muy características denominadas de adherencia y eliminación.(Public health agency of canada, 2012)

IMPORTANCIA INDUSTRIAL Citrobacter freundii Se ha investigado para la biodegradación de ácido tánico (utilizado en tannerys), además produce lipasas alcalinas y tienea hailidad de decolorar los colorantes aplicados al agua y a las telas.

Citrobacter koseri Utiliza el citrato como fuente de carbono y produce arabinonucleosidos.

METODO DE CONSERVACIÓN •

Protocolo de krisop (papel filtro) 36

Citrobacter

Citrobacter freundii

Clasificación científica

Reino:

Bacteria

Filo:

Proteobacteria

Clase:

Gammaproteobacteria

Orden:

Enterobacteriales

Familia:

Enterobacteriaceae

Género:

Citrobacter

TINCIÓN DE GRAM

WERKMAN AND GILLEN, 1932

Especies

C. freundii C. koseri aka C. diversus

2.1.3 Escherichia coli CARACTERISTICAS E. coli es una de las especies bacterianas más minuciosamente estudiadas, y nosolamente por sus capacidades patogénicas, sino también como sustrato ymodelo de investigaciones metabólicas, genéticas, poblacionales y de diversa índole (Neidhardt, 1999). Forma parte de la familia Enterobacteriaceae (Ewing, 1985). Está integrada por bacilos Gram negativos no esporulados, móviles con flagelos peritricos o inmóviles, aerobios-anaerobios facultativos, capaces de crecer en agar MacConkey y en medios simples con o sin agregado de NaCl, fermentadores y oxidativos en medios con glucosa u otros carbohidratos, catalasa positivos, oxidasa negativos, reductores de nitratos a nitritos, y poseedores de una proporción G+C de 39 a 59% en su DNA. Se trata de bacterias de rápido crecimiento y amplia distribución en el suelo, el agua, vegetales y gran variedad de animales.(Liliana & Tanaro, 2007) En conjunto, la importancia de las enterobacterias en patología humana puede cuantificarse constatando que constituyen el 50% aproximadamente de todos los aislamientos clínicamente significativos en los laboratorios microbiológicos, y hasta el 80% de todos los bacilos Gram negativos identificados. Integran también esta familia otros géneros que se consideran en otros capítulos por su asociación con infecciones intestinales, como son Salmonella, Shigella y Yersinia.(htt)

IMPORTANCIA INDUSTRIAL Producción de proteína, productos terapéuticos recombinantes, Amplificación, para obtener muchas copias de un fragmento de DNA de interés, Fabricación de proteínas recombinantes a gran escala (insulina)- Plásmidos de interés biológico en su genoma, como genes de resistencia aantibióticos, Muchos plásmidos son usados como vectores de clonado, Muchos plásmi dos son usados como vectores de expresión, Se busca como indicador de microorganismos contaminantes y de enfermedades, E. Coli ha sido utilizada como sistema modelo para la sobreproducción dediversos metabolitos y proteínas recombinantes de interés comercial(Tamifu), Sobreexpresión de genes para la producción de antibióticos, producción de etanol y lactato.(Bautista, 2013)

METODO DE CONSERVACIÓN •

Protocolo de krisop (papel filtro) 38

Escherichia coli

Clasificación científica

Dominio:

Bacteria

TINCIÓN DE GRAM

Filo:

Proteobacteria

Clase:

Gammaproteobacteria

Orden:

Enterobacteriales

Familia:

Enterobacteriaceae

Género:

Escherichia

Especie:

E. coli ((E. freundi)) MIGULA, 1895

2.1.4 Enterobacter sp CARACTERISTICAS Enterobacter es un género de bacterias Gram negativas facultativamente anaeróbicas de la familia de las Enterobacteriaceae. Muchas de estas bacterias son patógenas y causa de infección oportunista, otras son descomponedoras que viven en la materia orgánica muerta o viven en el ser humano como parte de una población microbiana normal. Algunas enterobacterias patógenas causan principalmente infección del tracto urinario y del tracto respiratorio.(Bertona, raice, & Roriguez, 2005)

IMPORTANCIA INDUSTRIAL Enterobacter aerogenes Producción de butanodiol, producción de lipasas alcalinas, bioconservacion de glicerol y etanol, producción de hidrogeno.

Enterobacter cloacae

Enterobacter cloacae se ha utilizado en un biorreactor, método basado en labiodegradación de explosivos y en el control biológico de las enfermedades de las plantas.(Dalben & Basso, 2008)

METODO DE CONSERVACIÓN •

Protocolo de krisop (papel filtro)

Enterobacter

Enterobacter cloacae

Clasificación científica

Reino:

Bacteria

Filo:

Proteobacteria

Clase:

Gammaproteobacteria

Orden:

Enterobacteriales

Familia:

Enterobacteriaceae

Género:

Enterobacter

TINCIÓN DE GRAM

2.1.5 Klebsiella sp CARACTERISTICAS Los microorganismos del género Klebsiella son bacilos gramnegativos inmóviles que pertenecen a la familia Enterobacteriaceae. El género Klebsiella está formado por varias especies, entre las que se encuentran K. pneumoniae, K. oxytoca, K. planticola y K. terrigena. La capa más externa de Klebsiella spp. Está formada por una gran cápsula de polisacáridos que diferencia a estos microorganismos de otros géneros de esta familia. Aproximadamente del 60 al 80% de los microorganismos del género Klebsiella aislados de muestras de heces y clínicas son K. pneumoniae y dan positivo en la prueba de coliformes termotolerantes. Klebsiella oxytoca también se ha identificado como microorganismo patógeno.(Ainswoth & Bartram, 2009) Las especies del género Klebsiella son fijadoras de nitrógeno y son ubicuas en la naturaleza.

IMPORTANCIA INDUSTRIAL Klebsiella oxytoca Es un diazótrofo , capaz de colonizar huéspedes vegetales y fijar el nitrógeno atmosférico en una forma que la planta puede utilizar; es prometedor en la industria biocombustible por la producción de etanol, produce hidrogeno, elimina cargas elevadas de nitratos(Dien, Cotta, & Jeffries)

METODO DE CONSERVACIÓN •

Protocolo de krisop (papel filtro)

Klebsiella

Klebsiella pneumoniae en agar McConkey

Clasificación científica

Dominio:

Bacteria

Filo:

Proteobacteria

Clase:

Gammaproteobacteria

TINCIÓN DE GRAM

Orden:

Enterobacteriales

Familia:

Enterobacteriaceae

Género:

Klebsiella TREVISAN 1885

Especies

K. granulomatis K. mobilis K. ornithinolytica

2.1.6 Proteus sp CARACTERISTICAS Proteus es un género de bacterias gramnegativas, que incluye patógenosresponsables de muchasinfecciones del tracto urinario.1 Las especies de Proteus normalmente no fermentan lactosa por razón de no tener una β galactosidasa, pero algunas se han mostrado capaces de hacerlo en eltest TSI (Triple Sugar Iron en inglés, o "Triple Azúcar de Hierro"). Sonoxidasa-negativas yureasa-positivas. Algunas especies sonmótiles.2 Tienden a ser organismospleomórficos, noesporulados nicapsulados y son productoras defenilalaninadesaminasa.3 Con la excepción de P. mirabilis, todos los Proteus reaccionan positivos con la prueba del indol.(ECURED, 2011)

IMPORTANCIA INDUSTRIAL Proteus mirabilis Degradación de colorantes de la industria textil. (Cortazar & Gonzales, 2010)

Proteus mirabilis Producción de bacteriocinas, fosforilación de nucleótidos.

Proteus vulgaris Biodegradación de colorantes AZO, fermenta la gucosa, sucrosa y amigdalina, inhibe la producción de biofilm.

METODO DE CONSERVACIÓN •

Aceite mineral, glicerol 3% y criobank.

Proteus

Micrografía electrónica de Proteus

Clasificación científica

Dominio:

Bacteria

Filo:

Proteobacteria

Clase:

Gammaproteobacteria

Orden:

Enterobacteriales

Familia:

Enterobacteriaceae

Género:

Proteus

HAUSER 1885

Especies

P. mirabilis P. morganii P. vulgaris

2.1.7 Pseudomonas sp CARACERISTICAS Pseudomonas es un género de bacilos rectos o ligeramente curvados, Gram negativos, oxidasa positivos, aeróbicos estrictos aunque en algunos casos pueden utilizar el nitrato como aceptor de electrones. El catabolismo de los glúcidos se realiza por laruta de Etner-Doudoroff y el ciclo de los ácidos tricarboxílicos. Algunos miembros del género son psicrófilos, mientras que otros sintetizan sideróforos fluorescentes de color amarillo-verdoso con gran valor taxonómico. Es común la presencia de plásmidos y no forman esporas.(Arana, 2014)

IMPORTANCIA INDUSTRIAL Pseudomonas aureginosa Producción de exopolisacáridos importantes en la industria alimenticia, producción de biopolímeros biodegradables y produce proteasa neutra termoestable.

Pseudomonas fluorescens Producción de ácido L- Aspártico, control de enfermedades de implantación, aumentar, control biológico y producción de metabolitos.

Pseudomonas putida Conversión de morfina y codeína a hidromorfina e hidrocodona, degradación de nalcanos y biorremediación. (Ernesto & Garcia, 2013)

METODO DE CONSERVACIÓN •

Aceite mineral, glicerol 3% y criobank. 46

Pseudomonas

Pseudomonas aeruginosa al microscopio de barrido, con falso color.

Clasificación científica

Reino:

Bacteria

Filo:

Proteobacteria

Clase:

Gammaproteobacteria

Orden:

Pseudomonadales

Familia:

Pseudomonadaceae

Género:

Pseudomonas

MIGULA, 1894

TINCIÓN DE GRAM

2.1.8 Salmonella sp CARACTERISTICAS El género Salmonella pertenece a la familia Enterobacteriaceae. Son bacilos gramnegativos móviles que no fermentan la lactosa, aunque la mayoría producen sulfuro de hidrógeno o gas por fermentación de los hidratos de carbono. Inicialmente, se agruparon en más de 2000 especies (serotipos) en función de sus antígenos somáticos (O) y flagelares (H) (esquema de Kauffman-White). Actualmente se considera que esta clasificación está por debajo del nivel de especie: en realidad sólo hay dos o tres especies (Salmonella enterica o Salmonella choleraesuis, Salmonella bongori y Salmonella typhi) y los serotipos se consideran subespecies. Todos los agentes patógenos entéricos, excepto S. typhi, pertenecen a la especie S. enterica. Por convención, las subespecies se abrevian, de modo que el serotipo S. enterica Paratyphy A se transforma en S. Paratyphi A.(Angulo & Escarin, 2011)

IMPORTANCIA INDUSTRIAL Salmonella entiritidis Salmonella typhimurium METODO DE CONSERVACIÓN •

Aceite mineral, glicerol 3% y criobank.

Salmonella

Microscopía electrónica de Salmonella typhimurium

Clasificación científica

Reino:

Bacteria

Filo:

Proteobacteria

Clase:

Gammaproteobacteria

Orden:

Enterobacteriales

Familia:

Enterobacteriaceae

Género:

Salmonella

Especies

2.1.9 Serratia sp CARACTERISTICAS Serratia es un género debacteria gram negativa,anaerobio facultativo,basiliforme de la familiaEnterobacteriaceae. La especie más común en el género, Serratia marcescens, es normalmente el únicopatógeno y usualmente causa infección nosocomial. Sin embargo, raramente cepas de Serratia plymuthica, Serratia liquefaciens, Serratia rubidaea, y Serratia odoriferae han causa enfermedad por medio de infección.1 Los miembros de este género producen unpigmento rojo característico, laprodigiosina, y puede ser distinguidas de los otros miembros de la familia Enterobacteriaceae por su única producción de tres enzimas: DNasa,lipasa, y gelatinasa.(Basilio & Ania, 2007)

IMPORTANCIA INDUSTRIAL Serratia marcescens Producción de lipasas, industria textil, producción de quitinasas.

METODO DE CONSERVACIÓN •

Aceite mineral, glicerol 3% y criobank.

Serratia

Serratia marcescens, una especie típica en agar XLD.

Clasificación científica

Reino:

Bacteria

Filo:

Proteobacteria

Clase:

Gamma Proteobacteria

Orden:

Enterobacteriales

Familia:

Enterobacteriaceae

Género:

Serratia

TINCIÓN DE GRAM

BIZIO 1823

2.2 GRAM POSITIVAS En microbiología, se denominanbacterias Gram positivas a aquellas bacterias que se tiñen de azul oscuro o violeta por latinción de Gram: de aquí el nombre de "Grampositivas" o también "grampositivas".1Esta característica Química está íntimamente ligada a la estructura de laenvoltura celular por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son uno de los principales grupos de bacterias, y cuando se tratan como taxón se utiliza también el nombre de Posibacteria. Las restantes son las bacterias Gram negativas.(Gram, 1999) La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende lamembrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglucano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas deácido lipoteicoico. La capa de peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram. A diferencia de las Gram-positivas, las Gram-negativas presentan una segunda membrana lipídica externa a la pared celular. (Smith, 2006) Incluyen especies tanto móviles (vía flagelos) como inmóviles con forma de bacilo (Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, Lactobacillus, Listeria) o coco (Staphylococcus, Streptococcus); con gruesas paredes celulares o sin ellas (Mycoplasma). Algunas especies son fotosintéticas, pero la mayoría son heterótrofas. Muchas de estas bacterias formanendosporas en condiciones desfavorables. Realmente, no todas las bacterias del grupo son Gram-positivas (no se tiñen por la aplicación de ese método), pero se incluyen aquí por su similitud molecular con otras bacterias Gram-positivas.(Cavalier, 2006)

2.2.1 Bacillus sp

CARACTERISTICAS

Bacillus es un género de bacterias en forma de bastón y Gram positiva. El género Bacillus pertenece a la División Firmicutes. Sonaerobios estrictos o anaerobios facultativos. En condiciones estresantes forman una endospora de situación central, que no deforma la estructura de la célula a diferencia de las endoesporas clostridiales. Dicha forma esporulada es resistente a las altas temperaturas y a los desinfectantes químicos corrientes.

IMPORTANCIA INDUSTRIAL Bacillus cereus Bacillus cereus no presenta aplicaciones industriales puesto que un microorganismo netamente patógeno.

Bacillus subtilis Es una bacteria que se utiliza como fungicidapara semillas de flores y ornamentales, en semillas de productos agrícolas, semillas de algodón, hortalizas, maní y soja. Se utiliza en la producción comercial de enzimas extracelulares, como B. Amyloliquefaciens alfaamilasa. Puede convertir los explosivos en compuestos inofensivos del nitrógeno, del bióxido de carbono y del agua. (Bacillus subtilis)

METODO DE CONSERVACIÓN •

Aceite mineral, glicerol 3% y criobank.

Bacillus

Bacillus subtilis, con tinción de Gram

Clasificación científica

Dominio:

Bacteria

TINCIÓN DE GRAM Filo:

Firmicutes

Clase:

Bacilli

Orden:

Bacillales

Familia:

Bacillaceae

Género:

Bacillus COHN, 1872

2.2.2 Lactobacillus sp CARACTERISTICAS lactobacilos (también Lactobacillus o bacterias del ácido láctico) son un género de bacterias Gram positivas anaerobias aerotolerantes, denominadas así debido a que la mayoría de sus miembros convierte a la lactosa y a otros monosacáridos enácido láctico. Habitualmente son benignas e incluso necesarias, habitan en el cuerpo humano y en el de otros animales; por ejemplo, están presentes en el tracto gastrointestinal y en la vagina. Muchas especies son importantes en la descomposición de la materia vegetal. La producción de ácido láctico hace que su ambiente sea ácido, lo cual inhibe el crecimiento de bacterias dañinas de la salud. Algunas especies de lactobacillus se usan industrialmente para la producción de yogur y de otros alimentos fermentados. Algunas bebidas de yogur contienen Lactobacillus como suplemento dietético. Muchos lactobacilos son los únicos seres vivos que no requieren hierro para vivir y tienen una tolerancia extremadamente alta al peróxido de hidrógeno. Muchos lactobacilos presentan la característica inusual de operar usando un metabolismo homofermentativo (es decir, sólo producen ácido láctico a partir de azúcares) y sonaerotolerantes a pesar de la ausencia de cadena respiratoria. Esta aerotolerancia es dependiente del manganeso y ha sido estudiada y explicada en el Lactobacillus plantarum. En otro orden de cosas, los lactobacilos tienen un rol fundamental una vez que se inicia lacaries dental y durante su etapa de desarrollo. Por otra parte, desempeñan importantes funciones en el cuerpo humano como, por ejemplo, la regeneración de la flora intestinal.

METODO DE CONSERVACIÓN •

Aceite mineral, glicerol 3% y criobank. 55

Lactobacillus

Clasificación científica

Bacteria

Filo:

Firmicutes

Clase:

Bacilli

Orden:

Lactobacillales

Familia:

Lactobacillaceae

Género:

Lactobacillus BEIJERINCK, 1901

TINCIÓN DE GRAM

Dominio:

2.2.3 Listeria sp CARACTERISTICAS Listeria monocytogenes es una bacteria que se desarrolla intracelularmente y es causante de Listeriosis. Es uno de los patógenos causante de infecciones alimentarias más virulentos, con una tasa de mortalidad entre un 20 a 30%, más alta que casi todas las restantes toxicoinfecciones alimentarias. L. monocytogenes es unbacilo Gram positivo, pequeño (0,4 a 0,5 micrones de ancho x 0,5 a 1,2 de largo) no ramificado y anaerobio facultativo capaz de proliferar en un amplio rango de temperaturas (1 °C a 45 °C) y una elevada concentración de sal. Es catalasa positiva y no presenta cápsula ni espora. Tieneflagelos perítricos, gracias a los cuales presenta movilidad a 30 °C o menos, pero es inmóvil a 37 °C, temperatura a la cual sus flagelos se inactivan.(Patrick, Murray, & Michael, 2009)

IMPORTANCIA INDUSTRIAL Listeria monocitogenes Listeria ivanovii METODO DE CONSERVACIÓN •

Aceite mineral, glicerol 3% y criobank.

Listeria

Listeria monocytogenes

Clasificación científica

Dominio:

TINCIÓN DE GRAM

Bacteria

Filo:

Firmicutes

Clase:

Bacilli

Orden:

Bacillales

Familia:

Lactobacilaceae

Género:

Listeria

2.2.4 Micrococcus sp CARACTERISTICAS Micrococcus es un género debacterias del filoActinobacteria. 'Se encuentran en ambientes diversos, incluyendo agua y suelo. Son bacterias Gram-positivas con células esféricas de diámetro comprendido entre 0,5 y 3 micrómetros que típicamente aparecen en tétradas. Micrococcustiene una gruesa pared celular que puede abarcar tanto como el 50% del materia celular. Su genoma es rico enguanina y citosina (GC), típicamente en porcentaje del 65 al 75% de contenido GC. A menudo contienenplásmidos (de tamaño comprendido entre 1 y 100MDa) que proporcionan al organismo características útiles.(Sims & Sommers, 2001)

IMPORTANCIA INDUSTRIAL Micrococcus, como muchos otros géneros de Actinobacterias, pueden sercatabolicamente versátiles, con la habilidad de utilizar un extenso rango de substratos inusuales, tales como piridina, herbicidas, bifenilos policlorados y petróleo(Doddamani & Ninnerkar, 2001). Pueden también realizar la detoxificación o biodegradación de muchos otros contaminantes ambientales.OtrosMicrococcus producen varios productos útiles, tales como largas cadenas (C21-C34) de hidrocarbonos alifáticos para aceites lubricantes.(Zhuang & Tay)

METODO DE CONSERVACIÓN •

Aceite mineral, glicerol 3% y criobank.

Micrococcus

Micrococcus mucilaginosis

Clasificación científica

Dominio:

Bacteria

Filo:

Actinobacteria

Clase:

Actinobacteria

Subclase:

Actinobacteridae

Orden:

Actinomycetales

Suborden:

Micrococcineae

Familia:

Micrococcaceae

Género:

Micrococcus

COHN 1872

TINCIÓN DE GRAM

2.2.5 Streptococcus sp CARACTERISTICAS Es un grupo de bacteriasformado por cocosgrampositivospertenecientes al filofirmicutes1 y al grupo de las bacterias ácido lácticas. Estas bacterias crecen en cadenas o pares, donde cadadivisión celular ocurre a lo largo de un eje. De allí que su nombre, delgriego στρεπτοςstreptos, significa que se dobla o retuerce con facilidad, como una cadena. Los Streptococc son oxidasa– y catalasa–negativos.(Ryan & Ray, 2004)

Las especies de estreptococus que producen enfermedades son: •

Estreptococos del pyogenes producen amigdalitis e impétigo.

•

Estreptococos del grupo B: Streptococcus agalactiae producenmeningitis en neonatos y trastornos del embarazo en la mujer.

•

Neumococo: Streptococcus pneumoniae es deneumonía adquirida en la comunidad.

•

Streptococcus viridans es una causa importante de endocarditis y de abscesos dentales.

•

Streptococcus mutans causa importante de caries dental. Pertenece al grupo de estreptococos viridans.

METODO DE CONSERVACIÓN •

Aceite mineral, glicerol 3% y criobank.

grupo

A:Streptococcus

principal

causa

Streptococcus-Estreptococos

Clasificación científica

Filo:

Firmicutes

Clase:

Bacilli

Orden:

Lactobacillales

Familia:

Streptococcaceae

Género:

Streptococcus

TINCIÓN DE GRAM

Especies

S. agalactiae S. bovis S. mutans S. pneumoniae

2.2.6 Staphylococcus sp CARACTERISTICAS Es un género de bacteriasestafilococáceas de la clase Cocci. Comprende microorganismos que están presentes en la mucosa y en la piel de los humanos y de otros mamíferos y aves, incluyendo a 35 especies y 17 subespecies, muchas de las cuales se encuentran en los humanos. Las especies que se asocian con más frecuencia a las enfermedades en humanos son Staphylococcus aureus (el miembro más virulento y conocido del género), Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus capitis y Staphylococcus haemolyticus.

Morfológicamente los Staphylococcus son cocos grampositivos. Los estafilococos crecen fácilmente sobre casi todos los medios bacteriológicos, en cultivos su crecimiento es mejor en el medio sal manitol y agar sangre, esto puede llegar a dar problemas en el corazón ó hígado, tales como la pérdida de un hígado. Es un coco anaerobio facultativo, esto significa que puede crecer tanto en condiciones con oxígeno como carente de éste. Su mayor velocidad de crecimiento es a5 - 25 °C; pero también se puede ver en activa fisión binaria entre 30 y27 °C. Además, producen catalasa, lo que los diferencia de los Estreptococos. Tiene importancia médica principalmente el S. aureus, y en humanos además de éste, el S. saprophyticus y el S. epidermidis. (Enfermepedia, 2011)

METODO DE CONSERVACIÓN •

Aceite mineral, glicerol 3% y criobank.

Staphylococcus

Micrografía SEM de colonias de S. aureus; note los grupos como uvas, comunes a las spp. deStaphylococcus.

Clasificación científica

Reino:

Bacteria

Filo:

Firmicutes

Clase:

Bacilli

TINCIÓN DE GRAM

Orden:

Bacillales

Familia:

Staphylococcaceae

Género:

Staphylococcus ROSENBACH 1884

2.2.7 Streptomyces griceus CARACTERISTICAS Streptomyces griseus es una especie de bacteria en el género Streptomyces que se encuentra comúnmente en el suelo. Unas cepastambién se han notificado a partir de sedimentos de aguas profundas. Es un Gram positiva bacteria con alto contenido de GC . Junto con la mayoría de otros estreptomicetos, S. cepas griseus son productores de bien conocidos antibióticos y otras comercialmente significativas en producción metabolitos secundarios . Estas cepas son conocidas por ser los productores de 32 tipos estructurales de compuestos bioactivos diferentes. El primer antibiótico siempre informado de una bacteria proviene de cepas de S. griseus. Recientemente, el conjunto de secuencia del genoma se había completado de uno de sus cepas. La historia taxonómica de S. griseus y sus cepas relacionadas filogenéticamente han sido turbulenta.S. griseus fue descrito por primera vez por Waksman y Henrici en 1948. Se buscó la interés hacia estas cepas debido a su capacidad para producir estreptomicina , un compuesto que demostró significativa actividad bactericida contra organismos tales como Yersinia pestis (el agente causante de la peste) y Mycobacterium tuberculosis ( el agente causal de la tuberculosis). Por su trabajo en estas cepas de bacterias y el antibiótico que producen, Waksman más tarde sería otorgado un Premio Nobel .(Amao, Miyadoh, & Shomura, 2008)

IMPORTANCIA INDUSTRIAL En los últimos años, Streptomyces spp. ha sido objeto de investigaciones en biotecnología para la producción de proteínas recombinantes humanas. Tradicionalmente, escherichia coli era la especie de elección para albergar genes eucariotas puesto que es una bacteria bien conocida y fácil de trabajar. Sin embargo, E. coli introduce algunos problemas tales como una glicosilación incorrecta (o una ausencia de la misma) y un plegamiento proteínico incorrecto, resultando en insolubilidad y pérdida de bioactividad del producto.mStreptomyces spp., por otro lado, tiene la habilidad de secretar proteínas recombinantes correctamente plegadas en el medio de producción, lo que simplifica los pasos subsecuentes de purificación. Estas características, entre otras, hacen de Streptomyces spp. una alternativa más atractiva que otras bacterias como E. coli y Bacillus subtilis.(Binner & Cossar, 1998) 65

El interés en el género Streptomyces para los antibióticos vino después del descubrimiento del antibiótico estreptomicina en una S. cepa griseusen 1943. El descubrimiento de la estreptomicina, un anti tuberculosisantibiótico, ganó Waksman el Premio Nobel en 1952. [17] Las cepas de esta especie son ahora conocidos por ser una rica fuente de antibióticos y para producir 32 tipos estructurales diferentes de importancia comercial metabolitos secundarios . [18] [19] Por otra parte, los estudios genómicos han revelado una sola cepa de S. 13350 IFO griseus tiene la capacidad de producir metabolitos secundarios 34 diferentes. (Ohnishi & Ishkawa, 2007)

METODO DE CONSERVACIÓN •

Conservación en agua destilada

Streptomyces

Cultivo de un Streptomyces sp.

Clasificación científica

Dominio:

Bacteria

Filo:

Actinobacteria

Orden:

Actinomycetales

Suborden:

Streptomycineae

Familia:

Streptomycetaceae

Género:

Streptomyces

TINCIÓN DE GRAM

WAKSMAN & HENRICI 1943

Especies

2.3 METODOS DE COSERVACIÓN 2.3.1 PROTOCOLO DE KRISOP (PAPEL FILTRO) PREPARACIÓN DE LOS VIALES Y PAPEL Tomar 4 viales de 2ml por cada cepa a conservar que corresponden a la viabilidad de 24 horas, 2 meses, 6 meses y un año, se adiciona a cada vial 15 discos de papel filtro Whatman N 4 de 5mm y se esterilizan a 121ºC por 15 minutos.

PREPARACIÓN DE LA CEPA Se realiza un cultivo en caldo BHI incubado a 37ºC en agitación a 200rpm y con una densidad óptica de 0.4-0.5 a 600nm, se toma 0.1ml de cada cultivo y se agrega a los viales previamente preparados, se debe realizar una buena homogenización. Almacenarcen a 4ºC y -30ºC.(Parra, M, & Morales, 2006)

2.3.2 CONSERVACIÓN EN AGUA DESTILADA Se prepara agar PDA en tubo con inclinación en pico de tubo de flauta, se inocula el hongo y se deja en crecimiento por 2 semanas a 25ºC, luego de crecido el microorganismo se adiciona 10ml de agua estéril y se homogeniza en vortex, luego se toman 1.8ml de la suspensión y se adiciona en un eppendorf de 2ml, finalmente se lleva a refrigeración a -4ºC.

2.2.3 CONSERVACIÓN EN CRYOBANK

1. De una placa que contenga un cultivo fresco (de no más de 18 horas), retire una muestra concentrada y disuélvala en el medio que contiene el tubo de CRYOBANK™. 2. Agite hasta incorporar completamente la muestra al medio invirtiendo el tubo, esto permitirá que las bacterias se adhieran a las perlas. 3. Con una pipeta estéril remueva del tubo el medio de cultivo de CRYOBANK™. 4. Inmediatamente después almacene el tubo de CRYOBANK™ a –70°C o en nitrógeno líquido. RECUPERACIÓN

1. Remueva el tubo de CRYOBANK™ del congelador o contenedor de nitrógeno líquido. Remueva la tapa del tubo de CRYOBANK™. Remueva una perla usando pinza o una aza de aguja para inoculación. 2. Pase la perla sobre la superficie de una placa que contenga un medio de cultivo apropiado o deposítela en un caldo nutriente. 3. De inmediato regrese el tubo de CRYOBANK™ con las perlas sobrantes al congelador o contenedor de nitrógeno líquido para prevenir que se descongelen. (CRYOBANK, 2014)

2.2.4 CONSERVACIÓN CON GICEROL O ACEITE MINERAL

Se prepara caldo BHI y se reparte en viales de 1ml y tubos de 3ml inclinados, se siembra en microorganismo a conservar y a las 24 se agrega glicerol o aceite estéril al 3% y los tubo se guardan a 4°C y los viales en freezer a -30°C.

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