Revista porciSapiens - Julio 2021

p. 58

FUNDAMENTOS DEL USO RACIONAL DE ANTIMICROBIANOS EN LA PRODUCCIÓN GANADERA

LAS AMENAZAS SE ADAPTAN...

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* RTU: vacuna Ready To Use. **Cobertura basada en la homología de epítopos de vacunas PCV2a y vacunas PCV2a/PCV2b frente a aislados de campo, utilizando la metodología EpiVax. 1. Bandrick, M., et al. T cell epitope content comparison (EpiCC) analysis demonstrates a bivalent PCV2 vaccine has greater T cell epitope overlap with fi eld strains than monovalent PCV2 vaccines. Veterinary Immunology and Immunopathology 223 (2020).

CircoMax Myco emulsión inyectable para cerdos. Composición: Cada ml contiene: Circovirus porcino recombinante quimérico inactivado tipo 1 conteniendo la proteína de marco de lectura abierta 2 (ORF2) del circovirus porcino tipo 2a: 1,5 – 4,9 PR*; Circovirus porcino recombinante quimérico inactivado tipo 1 conteniendo la proteína ORF2 del circovirus porcino tipo 2b: 1,5 – 5,9 PR*; Mycoplasma hyopneumoniae inactivado, cepa P-5722-3: 1,5 – 4,7 PR*. *Unidad de potencia relativa determinada mediante cuantificación antigénica por ELISA (prueba de potencia in vitro) comparado con una vacuna de referencia. Indicaciones: Para la inmunización activa de cerdos frente al circovirus porcino tipo 2 para reducir la carga viral en sangre y tejidos linfoides, la excreción fecal y lesiones en tejidos linfoides relacionadas con la infección con PCV2. Se ha demostrado protección frente al circovirus porcino tipos 2a, 2b y 2d. Para la inmunización activa de cerdos frente a Mycoplasma hyopneumoniae para reducir las lesiones pulmonares relacionadas con la infección con Mycoplasma hyopneumoniae Establecimiento de la inmunidad (ambos programas vacunales): 3 semanas después de la (última) vacunación. Duración de la inmunidad (ambos programas de vacunación): 23 semanas después de la (última) vacunación. Además, se ha demostrado que la vacunación reduce las pérdidas de ganancia de peso vivo en condiciones de campo. Contraindicaciones: Ninguna. Precauciones: Vacunar únicamente animales sanos. No ha quedado demostrada la seguridad del medicamento veterinario durante la gestación o la lactancia. No utilizar durante la gestación o la lactancia. Precauciones especiales para su uso en animales: No hay información disponible acerca de la seguridad de esta vacuna en verracos. No utilizar en verracos. Precauciones específicas que debe tomar la persona que administre el medicamento veterinario a los animales: Ninguna. Tiempo de espera: Cero días. Conservación: Conservar y transportar refrigerado (entre 2 °C y 8 °C). No congelar. Proteger de la luz. Durante el almacenamiento, podría aparecer un pequeño depósito de color negro y la emulsión podría separarse en dos fases distintas. Tras la agitación, el depósito negro desaparece y la emulsión vuelve a ser homogénea. Período de validez después de abierto el envase primario: uso inmediato. Eliminación: Todo medicamento veterinario no utilizado o los residuos derivados del mismo deberán eliminarse de conformidad con las normativas locales. Titular: Zoetis Belgium SA. Nº Registro: EU/2/20/264/001-006. Medicamento sujeto a prescripción veterinaria.

Nº2 | Julio 2021

LAS AMENAZAS SE ADAPTAN...

* RTU: vacuna Ready To Use

... TU PROTECCIÓN TAMBIÉN DEBERÍA

en EUROPA

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COBERTURA** MÁS AMPLIA Y DURADERA

**Cobertura basada en la homología de epítopos de vacunas PCV2a y vacunas PCV2a/PCV2b frente a aislados de campo, utilizando la metodología EpiVax.

CircoMax Myco emulsión inyectable para cerdos. Composición: Cada ml contiene: Circovirus porcino recombinante quimérico inactivado tipo 1 conteniendo la proteína de marco de lectura abierta 2 (ORF2) del circovirus porcino tipo 2a: 1,5 – 4,9 PR*; Circovirus porcino recombinante quimérico inactivado tipo 1 conteniendo la proteína ORF2 del circovirus porcino tipo 2b: 1,5 – 5,9 PR*; Mycoplasma hyopneumoniae inactivado, cepa P-5722-3: 1,5 – 4,7 PR*. *Unidad de potencia relativa determinada mediante cuantificación antigénica por ELISA (prueba de potencia in vitro) comparado con una vacuna de referencia. Indicaciones: Para la inmunización activa de cerdos frente al circovirus porcino tipo 2 para reducir la carga viral en sangre y tejidos linfoides, la excreción fecal y lesiones en tejidos linfoides relacionadas con la infección con PCV2. Se ha demostrado protección frente al circovirus porcino tipos 2a, 2b y 2d. Para la inmunización activa de cerdos frente a Mycoplasma hyopneumoniae para reducir las lesiones pulmonares relacionadas con la infección con Mycoplasma hyopneumoniae. Establecimiento de la inmunidad (ambos programas vacunales): 3 semanas después de la (última) vacunación. Duración de la inmunidad (ambos programas de vacunación): 23 semanas después de la (última) vacunación. Además, se ha demostrado que la vacunación reduce las pérdidas de ganancia de peso vivo en condiciones de campo. Contraindicaciones: Ninguna. Precauciones: Vacunar únicamente animales sanos.

No ha quedado demostrada la seguridad del medicamento veterinario durante la gestación o la lactancia. No utilizar durante la gestación o la lactancia. Precauciones especiales para su uso en animales: No hay información disponible acerca de la seguridad de esta vacuna en verracos. No utilizar en verracos. Precauciones específicas que debe tomar la persona que administre el medicamento veterinario a los animales: Ninguna. Tiempo de espera: Cero días. Conservación: Conservar y transportar refrigerado (entre 2 °C y 8 °C). No congelar. Proteger de la luz. Durante el almacenamiento, podría aparecer un pequeño depósito de color negro y la emulsión podría separarse en dos fases distintas. Tras la agitación, el depósito negro desaparece y la emulsión vuelve a ser homogénea. Período de validez después de abierto el envase primario: uso inmediato. Eliminación: Todo medicamento veterinario no utilizado o los residuos derivados del mismo deberán eliminarse de conformidad con las normativas locales. Titular: Zoetis Belgium SA. Nº Registro: EU/2/20/264/001-006. Medicamento sujeto a prescripción veterinaria.

1. Bandrick, M., et al. T cell epitope content comparison (EpiCC) analysis demonstrates a bivalent PCV2 vaccine has greater T cell epitope overlap with fi eld strains than monovalent PCV2 vaccines. Veterinary Immunology and Immunopathology 223 (2020).

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DESARROLLO DEL LECHÓN LACTANTEPESO, VIABILIDAD Y RENTABILIDAD ECONÓMICA

Sara Crespo Vicente Técnico veterinario de CEFUSA e Investigadora en el Dpto. de fisiología de la Universidad de Murcia

12/17

LA PROGRAMACIÓN FETAL Y SU IMPACTO SOBRE LOS MARCADORES EPIGENÉTICOS DE LA INMUNIDAD DE LOS LECHONES

Eudald Llauradó-Calero, Enric Esteve-Garcia y Núria Tous Programa de Nutrición Animal del IRTA

18/29

MICROARNS COMO BIOMARCADORES DE SALUD Y BIENESTAR ANIMAL EN CERDOS

Silvia Miretti1, Cristina Lecchi2, Fabrizio Ceciliani2 y Mario Baratta1

1Departamento de Ciencias Veterinarias, Universidad de Turín, Italia

2D epartamento Medicina Veterinaria, Universidad de Milán, Italia

30/34

IMPACTO DEL VIRUS PANDÉMICO DE LA INFLUENZA PORCINA

Sonia Cárceles, Laura Garza, Carlos Casanovas, Salvador Oliver y David Espigares

Servicio Técnico CEVA Salud Animal

36/39

RELACIÓN E INTERACCIÓN ENTRE PRRSV Y GLAESSERELLA PARASUIS

Servicios Veterinarios Grup de Sanejament Porcí de Lleida (GSP)

40/42

ENTREVISTA CON JAVIER MARCOS SAINERO

Director Servicio Técnico

Vetia Animal Health

44/53

MEDICIÓN DEL CORTISOL EN PELO COMO INDICADOR DE ESTRÉS CRÓNICO EN MATERNIDAD

Dierck-Hinrich Wiechers1, Susanne Brunner2, Swetlana

Herbrandt2, Nicole Kemper1 y Michaela Fels1

1Instituto de Higiene, Bienestar y Comportamiento de los Animales de Granja, Facultad de Veterinaria de la Universidad de Hannover, Alemania

2Departamento de Estadística, Universidad TU Dortmund, Alemania

54/57

HERRAMIENTA EPICC - VALORANDO LA EFICACIA DE UNA VACUNA DESDE UN PC

Ivan Díaz Luque

Investigador en Centre Recerca en Sanitat Animal (IRTA-CReSA)

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FUNDAMENTOS DEL USO RACIONAL DE ANTIMICROBIANOS EN LA PRODUCCIÓN GANADERA

Luis A. Olivos-Oré, Manuel I. San Andrés y J. Julio De Luca

Sección Departamental de Farmacología y Toxicología de la Facultad de Veterinaria de la UCM

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TÉCNICAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA: ALIADAS DEL VETERINARIO PARA FRENAR LAS RESISTENCIAS A LOS ANTIBIÓTICOS

Silvia del Caso, Gema Chacón, Lara Domínguez y Ángela Pradilla

Exopol S.L.

76/80

¿ES MOMENTO DE VACUNAR FRENTE A ILEÍTIS PORCINA?

Marcial Marcos, Rut Menjón, Marta Jimenez, Jesús Bollo y Alfredo Romero

MSD Animal Health

82/90

PRIMERA IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE ROTAVIRUS H

EN CERDOS EN EUROPA

Héctor Puente1, Martí Cortey2, Ana Carvajal1, Margarita Martín2,3, Oscar Mencía-Ares1, Manuel Gómez-García1, Lucía Pérez1, Pedro Rubio1, Iván Díaz3 y Héctor Argüello1 1Departamento de Sanidad Animal, Universidad de León, España.

2Departament de Sanitat i Anatomia Animals, Universitat Autònoma de Barcelona, España

3Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA-IRTA), Universitat Autònoma de Barcelona, España

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PREVALENCIA DE DIARREA POSTDESTETE CAUSADA POR ESCHERICHIA COLI EN ESPAÑA

Lorena Pérez Esteruelas

Technical Consultant - Swine Elanco Animal Health

Agradecemos a nuestros anunciantes por hacer posible la publicación de esta revista: Ceva, Elanco, MSD Animal Health, S.P. Veterinaria, Vetia, Vetoquinol y Zoetis.

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Enfrentarse a un proceso patológico en una granja porcina puede convertirse en tal labor detectivesca que, a veces, uno desearía contar con una bola de cristal para llegar a la raíz del problema.

Teniendo en cuenta que, como veterinarios de porcino, tratamos con poblaciones donde influyen innumerables factores, llegar a un diagnóstico certero, identificando el agente causal y, lo que es más importante, encontrar su origen para poder aplicar medidas correctivas, no es siempre una tarea sencilla.

Sin dejar de lado la intuición, la experiencia y el “ojo clínico” que nos permiten encaminar el diagnóstico, cada vez son más las herramientas que podemos incorporar a nuestro arsenal de detectives veterinarios.

No solamente contamos con pruebas laboratoriales cada vez más precisas, sino que tenemos acceso a bases de datos que, gracias a la actitud colaborativa de la comunidad científica, nos permiten entender mejor las características epidemiológicas y filogeográficas de los patógenos que amenazan a nuestras granjas de forma que podamos adoptar las medidas necesarias y oportunas para prevenir su propagación, algo de vital importancia a la hora de combatir las resistencias antimicrobianas

El desarrollo de nuevas tecnologías y nuevos abordajes que integran los conocimientos de diversos campos de estudio nos están permitiendo explorar ideas y enfoques que hasta hace poco eran “ciencia ficción”. Ejemplo de ello es la biología computacional y las ciencias “ómicas” que han revolucionado nuestra forma de entender la salud y la enfermedad.

Los estudios de genómica, proteómica, transcriptómica, metabolómica, epigenómica, farmacogenómica, interactómica, microbiómica y metagenómica nos abren los ojos a un mundo intrigante y lleno de posibilidades.

REDESCUBRIENDO EL ECOSISTEMA PORCINO

Los conocimientos derivados de estas ciencias no se pueden quedar en simples curiosidades teóricas, sino que es fundamental integrarlos en la práctica con un enfoque holístico que considere al individuo en su conjunto.

Pasamos así a considerar a nuestros cerdos, no como simples animales individuales, sino como ecosistemas dinámicos y complejos, entornos simbióticos en los que todo está conectado y en los que cualquier factor puede inclinar la balanza hacia un estado saludable y productivo o un estado enfermo y poco rentable.

¡Se nos presenta así una oportunidademocionantepara influir en la salud porcina y humana de formas que nunca habíamosimaginado!

Las evidencias que nos muestran los cerdos, sus genes y su microbioma aún tienen un enorme potencial por desvelar, solo debemos saber dónde buscar. ¡Es hora de poner a prueba nuestra curiosidad científica y empezar a explorar el ecosistema porcino como nunca antes habíamos hecho!

porciS apiens

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DESARROLLO DEL LECHÓN LACTANTE PESO, VIABILIDAD Y RENTABILIDAD ECONÓMICA

Sara Crespo Vicente Técnico veterinario de CEFUSA e Investigadora en el Dpto. de fisiología de la Universidad de Murcia

LLLos lechones lactantes son muy vulnerables al estrés postnatal debido a la continua competencia por el alimento, la necesidad de evitar los aplastamientos por parte de la madre y la hipotermia postparto. Estas circunstancias se relacionan con unas altas tasas de mortalidad durante los primeros días tras el nacimiento.

Teniendo en cuenta que la mejora productiva de los últimos 20 años ha implicado pasar de 10-11 lechones por cerda a un promedio aproximado de 16 lechones en el caso de las genéticas hiperprolíficas (Kemp et al., 2018; Oliviero et al.,2019; Crespo y Gadea,2021), el control del estrés en los animales con menor viabilidad y peso al nacimiento son aspectos que aún requieren mejoras en la mayoría de las explotaciones.

MORTALIDAD EN LACTACIÓN

Con el fin de analizar las elevadas tasas de mortalidad en la etapa de lactación asociadas a problemas en el manejo de lechones con bajo peso al nacimiento, se diseñó un estudio sobre el peso al nacimiento (Crespo y Gadea., 2021) teniendo en cuenta que, además, hay otros factores que influyen en la mortalidad en lactación durante los primeros días de vida del lechón.

Con ello, y siempre hablando del peso del lechón y sus crecimientos en las diferentes fases, es posible realizar un análisis integral básico de las principales causas que afectan a los datos de mortalidad en las parideras de las granjas españolas en los últimos años.

DESARROLLO FETAL DESARROLLO FETAL

Los ovocitos situados en los oviductos, una vez fertilizados y habiendo sufrido las sucesivas divisiones celulares pertinentes, alcanzan el estadio de blastocisto, desprendiéndose Zona Pelúcida y sufriendo una elongación para terminar uniéndose al epitelio endometrial a los 10 días desde la fecundación (aproximadamente, 13-24 días de gestación).

Este momento es crucial para la supervivencia del embrión, ya que determina que reciba todos los nutrientes necesarios para su desarrollo, siendo la superficie disponible para la implantación un factor determinante del tamaño de la camada (Figura 1) y el desarrollo posterior del embrión, que será mayor en el último trimestre de gestación (días 75-115) (Farmer, 2020).

La nutrición de la cerda durante la gestación influye mucho en el desarrollo fetal, condicionando el desarrollo del sistema gastrointestinal, hepático, renal, cardiaco y pulmonar, así como el del sistema neuronal como resultado de la expresión proteica en los proteomas placentales (Che et al., 2017). Sin embargo, tanto la sobrealimentación como la falta de nutrientes pueden reducir el flujo sanguíneo en la placenta, afectando al transporte de oxígeno (Wu et al, 2004).

El estrés de las cerdas también está relacionado con un desarrollo fetal deficiente, viéndose directamente afectados el crecimiento fetal y la función inmunitaria en situaciones de estrés de comportamiento (Otten et al., 2015) o incluso estrés por calor, lo que demuestra que la viabilidad y el tamaño de los lechones de las gestaciones de verano en determinadas zonas de España se encuentra muy afectada.

FIGURA 1

Receptividad del entorno uterino para la implantación embrionaria.

PESO AL NACIMIENTOFETAL VIABILIDAD PESO AL NACIMIENTO VIABILIDAD

Se ha demostrado que los lechones de bajo peso al nacimiento afectan de manera importante a todos los parámetros productivos de las granjas y tienen una gran repercusión económica en su viabilidad, siendo uno de los principales factores que afectan a la mortalidad en la lactación y al crecimiento de los animales durante todas sus fases productivas.

FIGURA 2

Los lechones con bajo peso al nacimiento presentan reservas limitadas de nutrientes y una menor capacidad para tomar calostro, por lo que su viabilidad en las primeras fases de la lactación también está limitada y las tasas de mortalidad son elevadas (Ferrari et al., 2014, Crespo y Gadea 2021).

Debemos considerar que el peso al nacimiento tiene una baja heredabilidad mientras que la Ganancia Media Diaria (GMD) tiene un mayor componente genético (Wang et al., 2016).

Viabilidad y mortalidad neonatal (Adaptado de Farmer., 2020). Factores como el crecimiento intrauterino restringido, la inmadurez fisiológica y la hipoxia durante el parto influyen en la vitalidad neonatal, de modo que una baja vitalidad se relaciona con una baja movilidad, una reducida capacidad de termorregulación y un amamantamiento tardío y deficiente. Todo ello conlleva un aumento del riesgo de mortalidad neonatal debido al enfriamiento, la inanición y los aplastamientos.

Asimismo, también se ha demostrado que lechones que presentan una masa corporal más baja que sus hermanos, lechones más delgados, pero no necesariamente con bajo peso al nacimiento, presentan altas mortalidades en esta fase (Rootwell et al.,2013; Farmer, 2020) (Figura 2) El bajo peso al nacimiento en genéticas muy hiperprolíficas es una de las principales consecuencias de una alteración en la alimentación en la fase de gestación.

Crecimiento intrauterino restringido

Un aporte insuficiente de nutrientes durante la gestación puede conducir a problemas intrauterinos durante el desarrollo de los fetos. Esto suele ir acompañado de una variación en el peso de los fetos y las placentas dentro del útero, presentando así mayores pesos y mayor concentración de glucosa aquellos lechones que están próximos a la unión útero tubárica que los próximos al cérvix (Che et al., 2016; Crespo y Gadea 2021).

Baja movilidad Enfriamiento

Inmadurez fisiológica al nacimiento

Hipoxia durante el parto

Reducida capacidad de termorregulación

Amamantamiento tardío y deficiente Inanición

MORTALIDAD NEONATAL

Aplastamiento

BAJA VITALIDAD NEONATAL

GRÁFICA 1

Mortalidad por causa en parideras.

Existe una relación directa entre la duración del parto y el tamaño de camada, por lo que los últimos lechones en nacer tras un parto largo presentan una menor viabilidad que sus hermanos, pudiendo tener alterado el comportamiento de succión (Oliviero et al., 2019; Tuchscherer et al., 2000; Crespo y Gadea ,2021).

Con el incremento del tamaño de la camada, aumenta la competencia entre los lechones para la obtención de leche, lo que implica mayores diferencias en el crecimiento entre los individuos de la camada (Houben et al., 2017).

Cabe destacar que el peso al nacimiento está directamente relacionado con la tasa de mortalidad en lactación, observándose una mortalidad del 40-60% en aquellos animales de peso de nacimiento inferior a 0,9 kg mientras que aquellos que superan los 0,9 kg presentan unas mortalidades de entre 8-17%.

El mayor porcentaje de bajas se produce dentro de las primeras 48 horas tras el parto, situándose la mortalidad predestete en granjas comerciales en unos rangos del 13-18%. Asimismo, casi el 60% de las bajas ocurre en los primeros 4 días postparto por inanición, aplastamientos o baja viabilidad (Gráfica 1)

La atención al parto, la gestión del ambiente y un buen manejo han permitido que se trabaje en rangos más bajos de peso, pero el aumento del tamaño de camada hace que cada vez sea más difícil mantener el nivel exigido (Baxter and Edwards.,2013).

TABLA 1 y GRÁFICA 2

Relación entre el peso al nacimiento y la mortalidad global . (Crespo y Gadea, 2021).

Los lechones de baja viabilidad y peso presentan una menor capacidad de reacción que los lechones de mayor tamaño, lo que explica en cierto modo las bajas en lactación de los primeros días. Entre las mejoras que se pueden implementar en el manejo de los animales para reducir las bajas en esta fase, es importante:

Evitar estresar a la cerda durante el amamantamiento.

Guardar a los lechones en sus nidos a la hora alimentar a la cerda.

Garantizar una buena temperatura ambiental que favorezca una correcta termorregulación de los lechones.

Un posible aporte de nutrientes adicional.

ENCALOSTRAMIENTO

La ingestión inadecuada de calostro puede llegar a suponer el 72% de las bajas en lactación (Damm et al., 2005).

Los lechones que consumen menos calostro son menos vigorosos y tendrán menor capacidad de supervivencia en los días posteriores al nacimiento. Por tanto, la ingestión de calostro es necesaria para garantizar el suministro de un aporte de energía adecuado y una inmunidad pasiva óptima (Gráfica 3), ayudando así en la prevención de enfermedades (Zimmerman et al., 2012).

El calostro es la primera secreción de la glándula mamaria y se produce un rápido cambio hacia la producción de leche, pero, a diferencia de la leche, la producción de calostro ocurre de manera ininterrumpida.

El papel inmunitario del calostro es muy importante, ya que ingestas insuficientes darán lugar a deficiencias en la inmunidad pasiva, influyendo en la supervivencia de los lechones y en la salud y desarrollo en las fases posteriores. En este sentido, un mal protocolo del encalostramiento conduce a un incremento de las bajas.

GRÁFICA 3

Concentración de inmunoglobulinas IgG, IgA y IgM (mg/mL) en suero de lechones recien nacidos (Farmer., 2020; adaptación de Klobasa et al., 1981).

DIARREAS

Otra de las principales causas de mortalidad neonatal son las diarreas los primeros días postparto. En los últimos años, las diarreas víricas, como las ocasionadas por Rotavirus o PEDV han tomado cierto protagonismo en las parideras.

Estos procesos diarreicos, que suelen observarse en coinfecciones con E. coli, aumentan de forma significativa las bajas durante los primeros días de vida y, en caso de superar el proceso clínico, deja animales que posteriormente presentarán un retraso en el crecimiento y que requerirán más días de lactación para alcanzar los pesos óptimos comerciales de destete. A este respecto, la manipulación, la suplementación de la alimentación y la rehidratación pueden ayudar a una mejora clínica de los animales (Houben et al., 2017).

Durante las primeras horas de nacimiento, los lechones menos viables tienen menor capacidad de recuperar y mantener su temperatura corporal, y la hipotermia les provoca afectaciones en la capacidad de succión y letargia, lo que implica que la mayoría terminarán siendo aplastados por la cerda (Alexopoilos et al., 2018)

La vitalidad del lechón postparto no solo depende de su morfología externa, sino que su crecimiento, independientemente del peso al nacimiento, también dependerá de su capacidad de supervivencia.

El test de APGAR (Randall 1971), una de las técnicas más útiles en la actualidad para controlar la viabilidad del lechón (Farmer, 2020), consiste en la evaluación de cinco parámetros fisioanatómicos simples del recién nacido:

Tono muscular

Esfuerzo respiratorio

Frecuencia cardiaca

Reflejos

Color de la piel

RENTABILIDAD ECONÓMICARENTABILIDAD ECONÓMICA

Como el campo de la producción porcina lo requiere, la labor del veterinario está muy ligado a la rentabilidad económica de las explotaciones.

Como parte de este estudio (Crespo y Gadea.,2021), se llevó a cabo un análisis en una situación real de cuánto puede suponer económicamente para una empresa en España la producción y engorde de los animales de bajo peso al nacimiento.

Basándose en datos de toda la pirámide productiva (Tabla 2), se puede estimar que el coste del lechón de bajo peso al nacimiento es, aproximadamente, el doble que el de un lechón con un peso de 1,00 -1,22 kg. Se debe tener en cuenta que el análisis se realizó con los lechones más pequeños de una granja de madres, estimando el punto de corte de peso y viabilidad hasta el 1,22 kg, pero hay muchos animales que se quedaron fuera de tabla por presentar pesos superiores a los del estudio.

TABLA 2

Evaluación económica de los costes de producción de lechones o cerdos de cebo de acuerdo con el peso al nacimiento.

Esta estimación de datos se realizó en torno a los crecimientos de los lechones en las diferentes fases donde el manejo de la alimentación, instalaciones y tratamientos debió de ser reforzado, ya que los lechones con menor peso lo requieren para poder pasar por las diferentes fases al igual que sus hermanos de camada. Por ello, es importante tener en cuenta que a estas cifras habría que añadirle el coste de la mano de obra del personal formado y especializado en cada una de las fases.

CONCLUSIONES

Sabemos que los animales con bajo peso al nacimiento necesitan más cuidados en todas las etapas productivas, por lo que debemos de concienciarnos de que las condiciones de campo deben ir ligadas a:

Una modernización de las instalaciones.

Un manejo más exhaustivo de los animales.

Una nutrición adecuada.

Mejoras en el nivel de bienestar animal que nos permitan lidiar con los pros y los contras de las nuevas genéticas.

Los avances en la producción porcina van a velocidad de crucero y los veterinarios de campo debemos subirnos al barco del aprendizaje y cambio que ofrecen las nuevas tecnologías.

BIBLIOGRAFÍA

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LA PROGRAMACIÓN FETAL Y SU IMPACTO SOBRE LOS MARCADORES EPIGENÉTICOS DE LA INMUNIDAD DE LOS LECHONES

P

LLLa incorporación de cerdas hiperprolíficas ha sido uno de los factores clave en el incremento gradual de la cabaña porcina en los últimos años, situando a España como uno de los productores de referencia, tanto a nivel europeo como a nivel mundial.

Tal y como se muestra en la Gráfica 1, según la base de datos BDporc1, el tamaño de camada ha crecido en 3,3 lechones durante los diez últimos años.

Eudald Llauradó-Calero, Enric Esteve-Garcia y Núria TousPrograma de Nutrición

Animal del IRTA

El aumento en la prolificidad de las cerdas ha resultado en un incremento de los lechones con bajo peso al nacimiento caracterizados por ser más débiles y presentar menores posibilidades de supervivencia, aumentando el porcentaje de mortalidad en las camadas en prácticamente un 5%. Asimismo, es previsible que, si se continúa extendiendo la utilización de las líneas hiperprolíficas, este porcentaje de mortalidad podría llegar

ser

GRÁFICA 1

Evolución del número de lechones nacidos y mortalidad por camada durante los diez últimos años (2010-2020) (Fuente: BDporc).

DESTETE: EL PUNTO MÁS CRÍTICO EN EL CICLO DE PRODUCCIÓN PORCINA

El cambio de leche materna a pienso, además del cambio de entorno de los lechones y el establecimiento de nuevas jerarquías, hace que en muchos casos los animales no se adapten al cambio y dejen de comer. Este ayuno se asocia con:

La atrofia de las vellosidades intestinales y la consecuente reducción de la digestión y absorción de nutrientes.

Una respuesta inflamatoria intestinal y la disrupción del epitelio, lo que conduce a que los lechones no sean capaces de hacer frente a los patógenos ambientales, incrementando la probabilidad de sufrir diarreas y, por tanto, la necesidad de realizar tratamientos con antibióticos.

Esta situación se puede ver agravada teniendo en cuenta que la Unión Europea recomienda la supresión del uso preventivo y/o metafiláctico de los antibióticos y la prohibición del óxido de zinc en 2022.

ANTE ESTE ESCENARIO, ES NECESARIO

DESARROLLAR ESTRATEGIAS NUTRICIONALES PRE Y POSTNATALES QUE PUEDAN TENER UN IMPACTO POSITIVO SOBRE EL SISTEMA INMUNITARIO DE LOS LECHONES

NUTRICIÓN PARA LA PROGRAMACIÓN FETAL EN PORCINO

Actualmente, desde el programa de Nutrición Animal del Institut de Recerca i Tecnología Agroalimentaria (IRTA), estamos coordinando el proyecto “Nutrición para la programación fetal en porcino, impacto sobre la supervivencia e inmunidad en razas comerciales e Ibérico” junto con el Centro de Investigaciones Científicas y Tecnológicas de Extremadura (CICYTEX).

En términos generales, el objetivo del subproyecto realizado por nuestro grupo se basa en la incorporación de ácidos grasos n-3 de cadena larga (principalmente EPA y DHA) en las dietas para cerdas gestantes y lactantes y en las dietas pre-starter y starter de los lechones en fase de transición con el fin de mejorar la salud y el crecimiento de los lechones.

PROGRAMACIÓN FETAL

PROGRAMACIÓN FETAL

La programación fetal se caracteriza por producir respuestas adaptativas a diferentes condiciones ambientales especificas durante los primeros estadios de vida y puede alterar la expresión de los genes2

La dieta maternal y, por tanto, el aporte de nutrientes durante el desarrollo del ovocito, embrión o feto es uno de los principales factores ambientales que influyen el desarrollo de la progenie.

A pesar de que actualmente aún existen muy pocos estudios, hay evidencias de que la inclusión dietética de ácidos grasos n-3 de cadena larga durante las fases iniciales del desarrollo puede tener beneficios sobre la descendencia, con un impacto positivo sobre su crecimiento y su sistema inmunitario, sugiriéndose que estos cambios podrían deberse a procesos de regulación epigenética3

Por este motivo, el proyecto mencionado anteriormente también pretende identificar marcadores epigenéticos modificados por la inclusión de los ácidos grasos n-3 de cadena larga en las dietas.

¿QUÉ ES LA EPIGENÉTICA?

¿QUÉ ES LA EPIGENÉTICA?

La palabra “epigenética” proviene del término griego “epi” -por encima” y el término “genética” -rama de la biología encargada del estudio de los genes y los mecanismos que regulan la transmisión de los caracteres hereditarios-.

Siguiendo la acertada definición de la Dra. Laura Elnitski en la web del National Human Genome Research Insitute (NHGRI), la epigenética se puede definir como el estudio de los cambios en la función de los genes que son hereditarios y que no se pueden atribuir a alteraciones de la secuencia de ADN.

Si bien es cierto que la secuencia genética de un animal es constante a lo largo de toda su vida, los mecanismos epigenéticos permiten que individuos con la misma información genética la expresen de manera distinta según el ambiente al que han estado expuestos, lo que implica la aparición de modificaciones en el fenotipo del animal.

Las modificaciones epigenéticas son reversibles, pero aún se desconocen ciertos aspectos, como su duración o el tiempo que tardan en aparecer.

Entre los diferentes mecanismos de regulación epigenética cabe destacar4:

REMODELACIÓN DE LA CROMATINA Y MODIFICACIONES DE LAS HISTONAS

La cromatina es la forma en la que se encuentra el material genético ensamblado dentro del núcleo de las células. Se trata de una estructura dinámica constituida por ADN empaquetado junto a las proteínas histonas, pudiendo encontrarse en dos estados o conformaciones según el grado de empaquetamiento:

La cromatina en estado relajado se asocia con la transcripción génica, ya que los genes quedan accesibles a la maquinaria transcripcional.

La cromatina en estado compacto se asocia con una represión de la expresión génica al quedar los genes “ocultos” a la maquinaria transcripcional.

La conformación de la cromatina está regulada por varios mecanismos que suelen involucrar modificaciones postraduccionales sobre las colas N-terminales de las histonas.

En la actualidad, se han descrito más de 100 modificaciones de histonas, entre las que se incluyen la metilación de lisina, la acetilación de lisina, la fosforilación de serina/ treonina, la ubiquitinación, la sumoilación y la crotonilación.

METILACIÓN DE LA CADENA DE ADN

La metilación del ADN es el tipo de modificación epigenética más estudiado. Consiste en la adición de un grupo metilo en la posición 5’ de los residuos de citosina (principalmente en los dinucleótidos CpG) y puede tener diferentes efectos según su naturaleza:

Si la metilación ocurre en la región promotora de un gen, se producirá una represión transcripcional.

Si la metilación se produce en la unidad transcripcional, puede conducir a un aumento de su activación.

REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE LOS GENES A TRAVÉS DE ARN NO CODIFICANTE

El ARN no codificante consiste en secuencias de ARN cuyo objetivo no es el de ser traducidos para la generación de una proteína, sino que tienen otras funciones, entre ellas, la regulación epigenética.

Un claro ejemplo son los microARNs (miARNs) que, gracias a su complementariedad con un ARN codificante específico, son capaces de unirse a él e impedir su traducción, inhibiendo así la síntesis proteica.

LAS DISTINTAS MODIFICACIONES DE LAS HISTONAS RIGEN EL ESTADO DE LA CROMATINA Y LA ACCESIBILIDAD PARA LA EXPRESIÓN O NO DE LOS GENES

Grupo metilo Factor modificador de histonas Nucleosoma (histonas + ADN)

FIGURA 1

Remodelación de cromatina y modificación de histonas

Gen no accesible para la transcripción

Gen accesible para la transcripción

1 2 3

Represión transcripcional

Metilación en región prromotora

Metilación del ADN

Regulación de la expresión mediante ARN no codificante

(ej.: miARN)

Inhibición de la síntesis proteica

Metilación en unidad transcripcional

Aumento de la expresión genética

Mecanismos de modificación epigenética implicadas en la modulación de la expresión génica. 1. La modificación de la conformación de la cromatina a través de las modificaciones transcripcionales en las colas de las histonas determinan que los genes estén disponibles o no para la transcripción. 2. La adición de un grupo metilo en la posición 5’ de un residuo de citosina conduce a una represión transcripcional (región promotora del gen) o a un aumento de la expresión del gen (unidad transcripcional). 3. La unión de un miARN a su secuencia complementaria en un ARNm determinado conduce a un bloqueo de su traducción, inhibiendo la síntesis proteica del gen diana.

Cromosoma

Cromatina Cromatina relajada

EPIGENÉTICA Y NUTRICIÓN

El destete es el punto más crítico en el sistema de producción porcina actual, más aún en el caso de los lechones nacidos con un bajo peso. No obstante, a través de la regulación epigenética se podrían condicionar diferentes procesos fisiológicos e inmunitarios en los animales a fin de que puedan tener un destete más exitoso.

Teniendo en cuenta el carácter reversible de los cambios epigenéticos, la adaptación de las estrategias nutricionales a las necesidades del animal en las diferentes etapas de crecimiento permitiría cubrir las necesidades fisiológicas y dirigir cambios sobre el epigenoma.

EN RESUMEN

El uso de cerdas hiperprolíficas ha resultado en un aumento del tamaño medio de camada. No obstante, este incremento va ligado a un mayor número de lechones con un bajo peso al nacimiento con una mayor ratio de mortalidad.

El destete, el punto más crítico del sistema productivo porcino, es un reto aún mayor para los lechones de bajo peso al nacimiento.

En este proyecto, la suplementación de dietas con ácidos grasos n-3 de cadena larga, caracterizados por tener un relevante papel antiinflamatorio, pretende servir de base para identificar ciertos marcadores epigenéticos relacionados con la modulación del sistema inmunitario de los lechones.

BIBLIOGRAFÍA

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La programación fetal se caracteriza por producir respuestas adaptativas a diferentes condiciones ambientales específicas durante los primeros estadios de vida y puede alterar la expresión de los genes.

Los mecanismos epigenéticos conducen a modificaciones en la expresión de los genes que no se pueden atribuir a alteraciones de la secuencia de ADN.

La programación fetal a través de diferentes estrategias nutricionales, como la inclusión de ácidos grasos n-3 en la dieta, puede impactar en el epigenoma del animal afectando a su sistema inmunitario y a su crecimiento.

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MICROARNS COMO BIOMARCADORES DE SALUD Y BIENESTAR ANIMAL EN CERDOS

Los microARNs (miARNs) son pequeñas moléculas de ARN no codificante muy conservadas que intervienen en una amplia gama de procesos biológicos mediante la regulación postranscripcional de la expresión génica.

Un aspecto intrigante en la identificación de estas moléculas como biomarcadores se deriva de su papel en la comunicación entre células, su secreción activa desde las células al medio extracelular, su alta estabilidad en los fluidos corporales y su facilidad de obtención.

Todas estas características confieren a los miARNs el potencial para convertirse en una herramienta no invasiva que permita evaluar el bienestar animal en condiciones de estrés metabólico, ambiental y de manejo. Esta revisión ofrece una visión general de los conocimientos actuales sobre el uso potencial de miARNs tisulares y/o circulantes como biomarcadores para la evaluación del estado de salud y bienestar en el porcino.

Silvia Miretti1, Cristina Lecchi2 , Fabrizio Ceciliani2 y Mario Baratta1

1Departamento de Ciencias Veterinarias, Universidad de Turín, Italia

2Departamento de Medicina Veterinaria, Universidad de Milán, Italia

NUEVOS PARÁMETROS DE EVALUACIÓN DEL BIENESTAR ANIMAL

Monitorizar el bienestar y la salud de los cerdos es fundamental para la producción de alimentos seguros y de alta calidad. Este desafío es muy relevante, tanto para la industria porcina como para los consumidores que prestan cada vez más atención a la forma en la que se crían los animales y, en consecuencia, a la forma en que se obtienen los productos alimentarios de origen animal.

Recientemente, el protocolo Welfare Quality introdujo el uso de parámetros basados en los animales centrados en sus necesidades e incluyendo la evaluación de indicadores adecuados (válidos, fiables y viables) que permitan evaluar su bienestar físico y mental1 .

El deterioro del bienestar de los animales suele estar causado por el estrés crónico resultante de la incapacidad para hacer frente a los factores ambientales combinado con la vulnerabilidad genética (por ejemplo, la concentración de neurotransmisores como la serotonina y la respuesta inmunitaria individual)2-4

Por ello, los parámetros basados en los animales son especialmente útiles porque reflejan los efectos de la interacción entre el animal y su entorno.

Según la bibliografía actual, los indicadores de bienestar del ganado se clasifican en tres categorías principales5-8:

1 2 3

Parámetros fisiológicos

Observaciones del comportamiento Calidad

Los parámetros fisiológicos, incluidos los sanguíneos9-11 y la observación del comportamiento permiten evaluar el bienestar animal in vivo 12

La perturbación metabólica sistémica resultante del estrés crónico también se ha investigado mediante la metabolómica y ha permitido la identificación de parámetros directamente asociados a las condiciones de manejo y alojamiento, y regulados por el eje hipotálamo-hipófisissuprarrenal (HHA)13,14 . Otros estudios han tratado de identificar hormonas y otras moléculas encontradas en niveles fuera de los “rangos fisiológicos”15-17

MIARNS COMO POTENCIALES BIOMARCADORES

Los miARN son segmentos cortos de ARN (aproximadamente 22 nucleótidos) que no codifican para proteínas. Codificados en el genoma de la célula, son trascritos en el núcleo, dando lugar a los pri-miARN que son procesados y exportados al citoplasma para realizar su función como miARN maduros18.

La función regulatoria de la expresión génica postranscripcional de los miARN reside en su capacidad para unirse a la región 3’UTR del ARN mensajero (ARNm) del gen diana.

De esta forma, la unión de un miARN a un segmento complementario de ARNm se traduce en una disminución de la síntesis de la proteína codificada por el gen diana18

FIGURA 1

Formación y mecanismo de acción de los miARNs. (1) La transcripción de los miARNs se inicia en el núcleo celular, gracias a la acción de la polimerasa II (Pol II), dando lugar a transcritos de miARN primario (pri-miARN) que son procesados por la ribonucleasa DROSHA para generar pre-miARN. (2) Estas moléculas son transportadas al citoplasma por la exportina 5 (EXPO5). Seguidamente, el complejo DICER elimina el bucle en el pre-miARN para dar lugar al miARN maduro que se incorpora al complejo de silenciamiento del ARN (RISC – del inglés, RNA-induced silencing complex). La unión del miARN a sus secuencias complementarias en el ARNm impide la síntesis proteica al bloquear la traslación del ribosoma o favorecer su degradación al acelerar el proceso de deadenilación (Jung & Suh, 201519 ).

CITOPLASMA

1 2

BLOQUEO DE LA TRASLACIÓN DEL RIBOSOMA

MADURACIÓN

Degradación del ARNm FORMACIÓN

COMPLEJO RISC

ACELERACIÓN DE LA DEADENILACIÓN

Los miARNs coordinan procesos celulares, incluyendo la modulación del desarrollo del animal, la homeostasis, las respuestas inmunitarias y el control de las infecciones, y también son cruciales para la regulación de la renovación de las células madre y la diferenciación de los tejidos20-23 .

Tras un estímulo fisiológico o una lesión, los miARNs circulantes (c-miARNs) pueden ser liberados por las células a la sangre o a otros fluidos corporales de forma activa (secreción) o pasiva (filtración a través de la membrana)24-26

Por ello, parte del interés suscitado por los c-miARNs se relaciona con su implicación en la regulación de vías moleculares en las células receptoras y su notable potencial como biomarcadores de enfermedades y trastornos27

Algunos de los aspectos más interesantes de la identificación de moléculas de miARN como biomarcadores se derivan de su28:

Expresión espacial y temporal altamente regulada

Secreción activa desde las células al entorno extracelular

Gran estabilidad en los fluidos corporales

BIOMARCADORES DE ESTADOS FISIOLÓGICOS

BIOMARCADORES DE ESTADOS FISIOLÓGICOS

Los perfiles de los c-miARNs cambian en el caso de enfermedades e infecciones víricas o bacterianas2931, y según el estado fisiológico (por ejemplo, la gestación)32,33, lo que implica que estas moléculas son biomarcadores adecuados para monitorizar diferentes condiciones fisiológicas en los animales.

BIOMARCADORES DE ESTRÉS

BIOMARCADORES DE ESTRÉS

Evidencias obtenidas en modelos de roedores indican que los c-miARNs también pueden servir como biomarcadores de resiliencia o vulnerabilidad al estrés34 , ya que los miARNs contribuyen a numerosos aspectos de la neurogénesis, la plasticidad neuronal y la respuesta al estrés, a la vez que modulan la expresión de genes implicados en el estrés psicosocial crónico35,36

Relacionar las condiciones estresantes y sus efectos psicológicos es particularmente difícil en los animales de granja, pero se ha demostrado la asociación entre el estrés crónico y los conflictos sociales, el aislamiento y el hacinamiento37-39.

Hasta la fecha, ningún estudio ha investigado el papel de los miARN en los mecanismos moleculares que subyacen a las respuestas al estrés psicológico en las especies ganaderas, pero, dado el inherente carácter social de estos animales, la capacidad de estas moléculas para modular las redes moleculares asociadas al estrés mental merece una mayor atención.

Los c-miARNs se encuentran entre los biomarcadores clínicos más prometedores para la identificación de trastornos relacionados con el estrés en los animales, siendo herramientas válidas para evaluar el bienestar de un animal a lo largo de su vida, además de permitir puntuar la calidad de sus productos a lo largo de la cadena de suministro de alimentos.

Recientemente, se ha propuesto restringir el concepto de estrés a “las condiciones en las que una demanda ambiental excede la capacidad natural de regulación de un organismo, en situaciones particulares que incluyen lo impredecible e incontrolable”, y debe estar estrictamente relacionado con una condición de salud40. Dentro de estas situaciones “imprevisibles e incontrolables” pueden incluirse varios eventos desafiantes durante la vida productiva de los animales:

Estrés inmunológico y metabólico

DETECCIÓN DE MIARN – DEL LABORATORIO AL CAMPO

DETECCIÓN DE mi ARN – DEL LABORATORIO AL CAMPO

Debido al alto nivel de homología de las secuencias, los miARNs pueden ser detectados fácilmente sin necesidad de utilizar anticuerpos o ensayos específicos para cada especie. Por ello, la identificación de miARNs adecuados es un interesante campo de investigación que puede proporcionar una visión más amplia del bienestar y la salud de los animales a nivel molecular.

Estrés asociado al manejo y la manipulación

Estrés por separación y reagrupación de los animales durante su ciclo de producción

Estrés asociado al destete

Estrés asociado a cambios en la dieta

Estrés asociado al transporte

Estrés ambiental

MIARNS RELACIONADOS CON LA SALUD Y EL ESTRÉS EN CERDOS

Muchos de los efectos de los factores estresantes en las granjas porcinas son evidenciables, por ejemplo, la expresión irregular del celo, el aumento de las tasas de aborto, la reducción de la vitalidad de los lechones o el aumento de infecciones. Los efectos del estrés a lo largo del ciclo vital de los cerdos implican cambios fisiológicos que afectan a su salud y bienestar (Figura 2).

MIARNS & ESTRÉS

SISTEMA ENDOCRINO

miR-375, miR-361-3p, miR-7, let-7c

FIGURA 2

Resumen de los miARNs alterados en respuesta al estrés en cerdos. La lista se limita a los miARNs confirmados por secuenciación y validados mediante técnicas moleculares como la RT-qPCR y la hibridación in situ.

INMUNIDAD

miR-122, miR-125a, miR-125b, miR-126-3p, miR-126-5p, miR-1307, miR-145-5p, miR-15a-5p, miR-18a-5p, miR-21-5p, miR-221-5p, miR-23, miR-23a, miR-26a, miR-27b-3p, miR-29a, miR-29b-3p, miR-30c, miR-30e-5p, miR-451, miR-590-3p, miR-92a

LECHE

let-7a, let-7c, let-7d, let-7f, miR-148a-3p, miR-181a, miR-182-5p, miR-191, miR-193a-3p, miR-200c-3p, miR-219, miR-25-3p, miR-30a-5p, miR-30a-3p, miR-30c, miR-30d-5p, miR-320, miR-338, miR-365-5p, miR378, miR-423-5p, miR-4334, miR-574-3p, miR-769-3p

MANEJO

miR-19b, miR-27b, miR-365m miR-144, miR-150, miR-166, miR-194a, miR194b-5p, miR-205, miR-21, miR-30c-5p, miR-31, miR-363

ESTRÉS AMBIENTAL

miR-1, miR-10, miR-125a, miR-128, miR-133a-3p, miR-133b, miR-1468, miR-148a-3p, miR-151-3p, miR-16, miR-181a, miR-181b, miR-181c, miR-186, miR-27b-3p, miR-30a-3p, miR-30d, miR30e-5p, miR-450b-5p, miR-92a

EL SISTEMA ENDOCRINO Y LA RESPUESTA AL ESTRÉS

EL SISTEMA ENDOCRINO Y LA RESPUESTA AL ESTRÉS

La primera reacción frente a un factor estresante es una alteración adaptativa del eje HHA. Sin embargo, el estrés persistente puede inducir cambios en las redes de regulación génica, incluyendo alteraciones en los niveles de los miARNs41

ESTUDIOS RECIENTES HAN DESTACADO EL PAPEL DE LOS MIARNS EN LA REGULACIÓN DEL EJE HHA EN LOS CERDOS 42-45

Ante un evento estresante, la hormona liberadora de corticotropina (CRH) activa al eje HHA, promoviendo la secreción de la hormona adrenocorticotropa (ACTH) por parte de la hipófisis y de glucocorticoides por parte de las glándulas adrenales.

En este sentido, la relación entre la CRH y miR-375 en la regulación de la síntesis de catecolaminas se ha estudiado en la glándula adrenal de cerdas.

Los resultados demuestran que la CRH inhibe la expresión de miR-375, que a su vez inhibe la expresión de catecolaminas42

Además, el miR-375 tiene como diana al gen SP1, un efector descendente de la vía de la proteína quinasa A, disminuyendo la esteroidogénesis y la producción de glucocorticoides42

Tras la estimulación de las células con la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH), el nivel de miR-361-3p disminuyó, mientras que el de FSHB aumentó. El mecanismo subyacente está relacionado con la capacidad de miR-361-3p para unirse directamente a la UTR 3’ del gen FSHB43 .

La capacidad de los miARNs para modular la expresión de la FSH también se ha reportado en el contexto de la exposición a zearalenona (ZEN), una micotoxina no esteroidea producida por Fusarium que se puede encontrar en los piensos y que provoca alteraciones en el sistema reproductor porcino44

Los efectos de la ZEN en la hipófisis incluyeron la modulación de miR-7, que actúa como regulador de la síntesis y secreción de gonadotropinas.

Ye et al. investigaron la capacidad de los miARNs para regular post-transcripcionalmente la expresión in vitro de la hormona foliculoestimulante (FSH) en células de la hipófisis anterior de cerdas43, demostrando que los niveles de expresión de miR-361-3p y la abundancia de FSHB están correlacionados negativamente.

Los autores demostraron que la ZEN aumentó la expresión de miR-7, inhibiéndose la expresión de FSH al actuar directamente sobre el gen FOS44

MIARN VS CRH

MIARN VS ZEN

MIARN VS FSH

MIARN VS GH

Qi et al. exploraron los cambios en la expresión de miARN tras la estimulación de células hipofisarias porcinas con hormona liberadora de la hormona del crecimiento (GHRH) y con cortistatina e identificaron 19 y 35 miARNs con expresión diferencial, respectivamente. Las pruebas funcionales demostraron que let-7c modulaba la expresión de los genes de la hormona del crecimiento 1 (GH1) y del receptor de la hormona liberadora de la hormona del crecimiento (GHRHR) uniéndose a sus respectivos 3’UTRs y promoviendo una disminución de la secreción de GH45

INMUNIDAD INMUNIDAD

Varios estudios han analizado la implicación de los miARNs en la respuesta inmunitaria de los cerdos frente a virus, bacterias y parásitos, mientras que otros han comparado cerdos sanos de diferentes razas utilizando métodos de secuenciación, microarrays y RT-qPCR. Los genes a los que se dirigen los miARNs identificados en estos estudios mediante predicción in silico o mediante validación experimental están implicados en vías relacionadas con la inmunidad, como la apoptosis, la inhibición de la replicación viral y el reconocimiento viral46-51

En este apartado, nos centramos en los estudios que incluyeron la validación experimental de los genes diana y demostraron el potencial de los miARN como biomarcadores o para su uso en la terapia antiviral.

MIARN VS INFLUENZA

El papel de los miARNs como reguladores de la respuesta inmunitaria innata inducida por el virus de la Influenza A H1N2 (IAV) en los pulmones y los leucocitos se ha investigado en un modelo porcino in vivo 46,47,52 .

Brogaard et al. demostraron que varios miARNs y genes relacionados con el sistema inmunitario presentan una expresión diferencial en los pulmones y los leucocitos de los cerdos infectados46,47. En los pulmones, los autores correlacionaron la expresión de algunos miARNs y genes47 :

miR-29b-3p y miR-15a-5p desempeñan un papel en la apoptosis al afectar la expresión de los genes BCL2 y MCL1. miR21-5p modula la expresión de citoquinas pro- y antiinflamatorias.

miR-18a-5p y miR- 590-3p actúan sobre el gen del factor de iniciación de la traducción eucariótica 2 alfa quinasa 2 (EIF2AK2) que codifica un inhibidor de la replicación viral.

En los leucocitos, se detectaron diferentes miARNs en tres momentos tras la infección y el análisis de las interacciones entre miARNs y genes demostró que estaban implicados en la apoptosis y en las respuestas inmunitarias innatas47

miR-29B-3P Y miR-21-5P REPRESENTAN POSIBLES DIANAS CANDIDATAS PARA LA MODULACIÓN DE LA RESPUESTA INMUNITARIA

FRENTE AL VIRUS INFLUENZA A H1N1

MIARN VS PRRS

Se ha investigado ampliamente la capacidad de los miARNs para modular la respuesta inmunitaria durante la infección por el PRRSV.

miR-27b-3p y miR-26a inhiben la replicación del PRRSV al actuar sobre la proteína no estructural 2 del virus en los macrófagos alveolares50, afectando también a factores implicados en la vía del IFN, incluidos los genes MX1 e IFI44/IFI44, las quimioquinas, las citoquinas y el factor del complemento en las células MARC-14553.

miR-29a regula la replicación del PRRSV al unirse directamente a su ARN genómico y promover su replicación mediante su unión al extremo 3’UTR del gen AKT3 48

miR-23 aumenta la expresión de Interferón tipo I (IFN-1) al actuar sobre los genes IRF3/IRF7, lo que puede contribuir a la supresión de la infección por el PRRSV54 miR-30c puede ser estimulado por el PRRSV para impedir la señalización mediada por IFN-I al unirse directamente a los genes JAK1 y de la cadena β del receptor de interferón α/β, promoviendo así la replicación viral55

MIARN VS PESTE PORCINA AFRICANA

El efecto de la infección por el virus de la peste porcina africana (VPPA) sobre la expresión diferencial de miARNs de los cerdos se ha investigado in vivo comparando su expresión en animales infectados con dos cepas virales (virulenta vs atenuada)56

Se seleccionaron diez miARNs para la predicción de dianas basándose en la mayor representación en tejidos: miR-23a, miR-30e-5p, miR-92a, miR-122, miR-125b, miR-126-5p, miR-145-5p, miR-125a, miR-451 y miR-126-3p.

Los potenciales genes diana estaban relacionados con la respuesta inmunitaria, afectando a las vías de señalización de los receptores de linfocitos B y T, la citotoxicidad mediada por células NK o la fagocitosis mediada por receptores Fc gamma, así como a procesos relacionados con la patogénesis de la infección y la interacción virus-huésped56

MIARN VS FIEBRE AFTOSA

Se ha descrito que la expresión del miR-1307 se encuentra aumentada en células renales porcinas en relación a una preactivación y potenciación de la señalización del sistema inmunitario innato en la fase inicial de la infección por el virus de la Fiebre Aftosa (VFA). Este miARN promueve la degradación de la proteína viral estructural VP3 a través de la vía del proteasoma y la regulación de genes relacionados con el sistema inmunitario51.

El potencial terapéutico del miR-1307 también se ha demostrado mediante la inyección subcutánea de miR-1307 agomir en ratones lactantes, donde retrasó la letalidad inducida por el VFA51

MIARN VS DIARREA EPIDÉMICA PORCINA

El aumento de la expresión del miR-221-5p en células MARC-145 infectadas con el virus de la Diarrea Epidémica Porcina (PEDV) se relaciona con la inhibición de la replicación viral al actuar directamente sobre su 3’UTR, además de mejorar la respuesta inmunitaria del hospedador49

Los exosomas presentes en la leche pueden transportar miARN desde las células donantes a las receptoras, regulando así la expresión de los genes diana y la función de las receptoras, pudiendo llegar a diferentes tejidos tras su absorción intestinal57.

miARN – CALOSTRO VS LECHE

Gu et al. investigaron el perfil de expresión de miARNs en cerdas a lo largo de toda la fase de lactación (desde el parto hasta los 28 días), centrándose en la expresión de miARNs relacionados con el sistema inmunitario58

Demostraron que los miARNs relacionados con el sistema inmunitario (miR-148a-3p, miR182-5p, miR-200c-3p, miR-25-3p, miR-30a-5p, miR-30d-5p y miR-574-3p) estaban presentes en mayor cantidad en el calostro que en la leche, y también eran más abundantes en la sangre de los lechones alimentados sólo con calostro en comparación con los alimentados sólo con leche58

Los miARNs liberados por los exosomas de la leche porcina también han sido caracterizados mediante secuenciación y los 10 miARNs más abundantes identificados han sido: miR-193a-3p, miR- 423-5p, miR-320, miR-181a, miR-30a-3p, miR-378, miR-191, let-7a, let-7f y let-7c59

miR-30A Y LOS MIEMBROS DE LA FAMILIA LET-7

TIENEN UN PAPEL CRUCIAL EN LA PROTECCIÓN DE LA SALUD DEL LECHÓN RECIÉN NACIDO

MIARN VS POLISACÁRIDOS DE GINSENG

Se ha investigado el efecto de la suplementación dietética con polisacáridos de ginseng (GPS) sobre los miARNs de la leche para evaluar su capacidad para modular la respuesta inmunitaria de los lechones.

Se identificaron 10 miARNs que tenían una expresión aumentada y 16 que tenían expresión reducida en el grupo tratado con GPS, sugiriéndose que estos miARNs actúan como potenciales reguladores de las funciones inmunitarias60

En este caso, los niveles de expresión de miR-30a y let-7d también se vieron influidos por la suplementación con GPS, lo que vuelve a poner de manifiesto su papel esencial en la leche.

MANEJO MANEJO

MIARN VS CASTRACIÓN & CORTE DE COLAS

Los procedimientos rutinarios de manejo de los lechones, como la castración y el corte de colas, son eventos asociados al dolor agudo que amenazan su bienestar.

En un estudio reciente y por primera vez en una especie porcina, se estudiaron las concentraciones de miARNs en saliva y se evaluaron los niveles de expresión de miR-19b, miR-27b-3p, miR-215, miR-22-3p, miR-155-5p, miR-365-5p y miR-204 para determinar su potencial como biomarcadores del dolor mediante RT-qPCR26 , demostrando que estos miARNs eran más abundantes en los animales en los que el dolor no se mitigaba mediante un anestésico, por lo que podrían ser potenciales biomarcadores para la identificación del dolor en estos casos.

MIARN VS LIPOPOLISACÁRIDO

Xie et al. demostraron el efecto protector de los miARNs de la leche porcina investigando el papel de miR-181a, miR-30c, miR- 365-5p y miR-769-3p en los exosomas de la leche. La elevada expresión de estos miARNs se correlacionó con una disminución significativa de los niveles de expresión de sus genes diana y de las proteínas codificadas que participan en la vía de p5361

Estos autores habían demostrado previamente que, tras la exposición al lipopolisacárido (LPS), miR-4334, miR-219 y miR-338 actuaban sobre los genes TLR4, MyD88 y TP53, respectivamente, reduciendo así la apoptosis inducida por el LPS a través de las vías TLR4/NF-kB y p53 61,62

MIARN VS DESTETE

Para dilucidar el papel de los miARNs en relación al estrés del destete, Tao y Xu 63 compararon los perfiles de miARN del yeyuno y del suero procedentes de lechones durante la lactación y tras el destete.

Se identificó un gran número de miARNs con expresión diferencial en los días 1, 4 y 7, muchos de ellos involucrados en la modulación del metabolismo del intestino delgado, las respuestas al estrés y las funciones inmunitarias63 .

Tres c-miARNs (miR-21, miR-31 y miR-205) mostraron una expresión aumentada y 7 (miR-30c-5p, miR-144, miR-150, miR-186, miR-194a, miR-194b-5p y miR-363) presentaron una expresión disminuida en lechones destetados en comparación con los lechones lactantes.

Dado que la expresión de miR-194b-5p se redujo significativamente en el suero y en el intestino delgado de los lechones destetados, los autores plantearon la hipótesis de que su expresión en el suero podría reflejar la disminución de la expresión en el intestino delgado. Este hallazgo es importante dado que se ha demostrado que el miR-194b-5p inhibe la expresión del pequeño modificador similar a la ubiquitina 2 (SUMO2)64 SUMO2 es fundamental para la homeostasis celular en situaciones de estrés endógeno o ambiental, incluyendo, entre otros, el choque térmico y el estrés nutricional65

miR-19B, miR-365 Y miR-27B SE CORRELACIONARON CON LA INFLAMACIÓN RESULTANTE DE LA CASTRACIÓN Y EL CORTE DE COLAS SIN ANESTESIA 26

miR-194B-5P PODRÍA SER UN CANDIDATO A

BIOMARCADOR PARA CONTROLAR LA SALUD

INTESTINAL DE LOS LECHONES DURANTE EL PERIODO DE DESTETE

ESTRÉS AMBIENTAL ESTRÉS AMBIENTAL

MIARN VS ESTRÉS TÉRMICO

Al carecer los cerdos de glándulas sudoríparas y tener unos pulmones relativamente pequeños en comparación con su masa corporal, son más sensibles al calor que otras especies ganaderas66. Además, las nuevas líneas genéticas de cerdos producen casi un 20% más de calor que las razas anteriores67

El estrés térmico afecta a varios aspectos de la producción porcina, como el rendimiento reproductivo, el consumo de pienso, la condición corporal, la respuesta inmunitaria y la producción de leche68-72, y afecta al desarrollo muscular, modificando el equilibrio entre la síntesis y la degradación de proteínas73

Hao et al. investigaron cómo el estrés térmico afectaba al perfil de expresión de miARNs musculares de los cerdos74. Los cerdos fueron criados a una temperatura ambiental constante moderada (22˚C) o alta (30˚C) durante 21 días. La secuenciación de las muestras recogidas del músculo longísimo puso de relevancia a 58 miARNs con expresión diferencial , 30 con una expresión reducida y 28 con una expresión aumentada74

De los genes a los que potencialmente se dirigían los miARNs con expresión diferencial, se analizaron aquellos relacionados con el metabolismo muscular y la respuesta al estrés, y se descubrió que la expresión de la piruvato deshidrogenasa quinasa 4 (PDK4), la proteína de choque térmico 90 (Hsp90), la desmina (DES), la lactato deshidrogenasa A (LDHA) y la estearoil-CoA desaturasa (SCD) presentaban una correlación inversa con los miARNs con expresión diferencial74

Estos resultados demuestran que el estrés térmico puede modular la expresión de los miARNs en el músculo y la glándula mamaria, influyendo en la estructura y función de los tejidos, la glucólisis y el metabolismo del lactato y los lípidos.

El bienestar de los animales y su rendimiento productivo pueden verse afectados, lo que implica que la identificación y validación de los miARN y sus genes diana es esencial para el desarrollo de nuevas estrategias de reproducción basadas en genes reguladores.

COMPRENDER Y MODULAR LA EXPRESIÓN DE ESTOS

MI ARNS PUEDE AYUDAR A MEJORAR LA CAPACIDAD DE CERDOS PARA

ADAPTARSE AL ESTRÉS TÉRMICO ASOCIADO AL CAMBIO CLIMÁTICO

CONCLUSIONES

Los estudios realizados hasta la fecha se han centrado en gran medida en los biomarcadores de estrés o resiliencia, y muchos de ellos se han centrado en los miARNs que pueden proporcionar información sobre la regulación de diferentes procesos.

Los biomarcadores convencionales pueden ser útiles como marcadores de estrés y lesiones, pero proporcionan información limitada sobre el mecanismo celular que subyace a la adaptación de los animales a los acontecimientos adversos.

Los miARNs extracelulares pueden combinarse con otras mediciones fenotípicas para monitorizar con mayor precisión las respuestas al estrés de animales, permitiendo a los productores monitorizar los cambios en el manejo de los animales o en los sistemas de producción, determinando si estos cambios pueden reducir o eliminar los efectos fisiológicos del estrés.

La falta de un protocolo estándar para la cuantificación de los c-miARNs limita la comparación de los perfiles de expresión de miARNs entre diferentes laboratorios, por lo que el reconocimiento de métodos estandarizados comunes para minimizar los posibles sesgos sigue siendo una cuestión crítica.

Para implementar los c-miARNs como nuevos biomarcadores, debe establecerse su origen celular y su relación con sus tejidos, así como su relación con los factores de estrés.

En un segundo paso, será necesario realizar estudios a gran escala para comparar la expresión de los miARN en las especies ganaderas en condiciones de estrés de duración y fuerza variables, a fin de validar la aplicabilidad de los miARN como biomarcadores.

Artículo traducido y adaptado de: Miretti, S., Lecchi, C., Ceciliani, F., & Baratta, M. (2020). MicroRNAs as Biomarkers for Animal Health and Welfare in Livestock. Frontiers In Veterinary Science, 7. doi: 10.3389/ fvets.2020.578193. (CC BY 4.0)

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En cerdos ya se han identificado varios miARNs con potencial como biomarcadores para la gestión y regulación del estrés y el control de la salud animal.

A pesar de que la investigación sobre los miARNs en las especies ganaderas va por detrás de la de los humanos, estas moléculas tienen un gran potencial como nueva clase de biomarcadores relacionados con el estrés y la salud y representan un nuevo y apasionante campo para evaluar la gestión y el bienestar de los animales.

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IMPACTO DEL VIRUS PANDÉMICO DE LA INFLUENZA PORCINA

V E

EEl virus de la Influenza A (SIV, por sus siglas en inglés Swine Influenza Virus) es un patógeno zoonótico que ocasiona importantes pérdidas económicas en las granjas porcinas.

Los subtipos H1N1, H1N2 y H3N2 son los más extendidos en Europa, pero en el año 2009 apareció una variante del subtipo H1N1 que circulaba en la especie humana y porcina, denominado linaje H1N1 pandémico (H1panN1).

LINAJE H1N1 PANDÉMICO (H1panN1)

Sonia Cárceles, Laura Garza, Carlos Casanovas, Salvador

Oliver y David Espigares

Servicio Técnico

CEVA Salud Animal

El linaje H1panN1 se originó tras varias décadas de evolución y reordenaciones entre virus de origen humano, aviar y porcino y su prevalencia ha ido en aumento en los últimos años.

EL H1panN1 NO PRESENTA REACCIÓN CRUZADA CON EL SUBTIPO H1N1, POR LO QUE LOS PROGRAMAS DE INMUNIZACIÓN FRENTE A SIV SE DEBEN ADAPTAR ANTE SU PRESENCIA

La infección y replicación del virus se limita al tracto respiratorio, siendo la presentación de la enfermedad desde aguda a subclínica, dando lugar a un cuadro febril junto a problemas respiratorios. Además, desde hace años se han descrito casos en granjas porcinas de problemas reproductivos asociados al SIV, pero existen pocos trabajos que traten este tipo de casuística, debido a la dificultad para poder reproducirlos de forma experimental.

VACUNACIÓN EFECTIVA FRENTE A H1panN1

Tras la aparición del virus de la influenza pandémica se desarrolló una nueva vacuna frente al linaje H1panN1.

Los resultados de los estudios clínicos para la eficacia y seguridad de la vacuna se verificaron en condiciones de campo en granjas infectadas con el H1panN1 y donde estaba circulando el virus, mostrando una notable reducción de los problemas reproductivos en las mismas.

Para estudiar el impacto reproductivo del SIV, Gumbert et al. (2020) realizaron un estudio comparativo en 137 granjas de Alemania donde se analizó el impacto reproductivo asociado a la infección por el linaje H1N1 pandémico (H1panN1) del SIV.

En el presente artículo se detallan los resultados reproductivos que registraron Gumbert et al. (2020) antes y después de la vacunación de las cerdas (6 meses en cada caso) con una vacuna comercial frente a este linaje H1panN1 (Respiporc Flupan®, Ceva) en granjas infectadas con este virus.

Para determinar el impacto reproductivo de la vacunación frente al H1panN1, se evaluaron los siguientes parámetros:

Porcentaje de repeticiones

Porcentaje de abortos

Porcentaje de mortinatos

Número de lechones nacidos vivos/camada

Mortalidad pre-destete

Número de lechones destetados/cerda/año

SIGNOS CLÍNICOS ANTES DE LA VACUNACIÓN

SIGNOS CLÍNICOS ANTES DE LA VACUNACIÓN

En las 137 granjas que formaban parte del estudio, y que englobaban un total de 60.153 cerdas, se realizó un cuestionario antes de la vacunación frente al virus H1panN1 con el fin de registrar los signos clínicos que presentaban las cerdas.

TABLA 1

Signos clínicos de las cerdas antes de la

Se detectó un elevado porcentaje de granjas con pérdidas reproductivas, afectando al 79,8% de las granjas estudiadas, siendo también elevado el porcentaje de granjas cuyas cerdas presentaban fiebre y/o problemas respiratorios, con un 62,8% y 61,2%, respectivamente.

En la Tabla 1 se exponen los resultados de 129 granjas del total de las 137, ya que en 8 no se pudo valorar debido a múltiples sesgos en la información proporcionada (coinfecciones, cambio del protocolo vacunal, etc.).

Los resultados de la encuesta realizada previa a la vacunación coinciden con los de otros estudios experimentales y de campo reportados (Brookes et al., 2010; Holyoake et al.,2011)

El consumo de pienso se redujo en un 39,5% de las granjas y la disnea y apatía aparecían en un 17,1% y 14,7% de las explotaciones, respectivamente. Además, se comprobó que el tamaño de la granja no influía sobre los resultados reproductivos.

La dinámica de infección no era estacional, sino que se presentaba a lo largo del año, estando en consonancia con los resultados de otros estudios (Harder et al., 2013; Kyriakis et al., 2011) en los que se constató la ausencia de influencia estacional.

VACUNACIÓN FRENTE AL H1PANN1

VACUNACIÓN FRENTE AL H1 pan N1

La primovacunación de las reproductoras frente al H1panN1 se realizó mediante dos vacunaciones en sábana de todas las cerdas, ambas dosis separadas con un intervalo de 3 semanas.

Tras la vacunación, se registraron mejoras estadísticamente significativas en los parámetros reproductivos (Tabla 2) tales como porcentaje de repeticiones y abortos, número de nacidos vivos/ camada y porcentaje de mortalidad pre-destete, así como en el número de lechones destetados/cerda/año, con un porcentaje de granjas en las que mejoraban dichos parámetros del 74,8%, 57%, 70,4% y 77,1%, respectivamente.

2 Resultados reproductivos antes y después de la vacunación frente a H1panN1.

La reducción de la mortalidad pre-destete podría estar asociada a la inmunidad pasiva tras el encalostrado de los lechones descendientes de cerdas vacunadas. Por el contrario, el porcentaje de nacidos muertos no se alteró significativamente en el estudio actual, pudiendo deberse a un aumento en la prolificidad, teniendo también

en cuenta que estos problemas suelen afectar a pocas camadas (pero con muchos mortinatos) y que solo el 30% de los nacidos muertos son debidos a causas infecciosas mientras que el 70% de los mismos mueren durante el parto por causas no infecciosas (asfixia, distocia, restricción espacio uterino).

Tras la vacunación, la tasa de abortos disminuyó significativamente (p <0.001) con un promedio del 1,8% en el 57% de las granjas y el número de lechones nacidos vivos se incrementó significativamente (p = 0,001) en 70,4% de las granjas con un promedio de 0,6 (± 0,5) lechones.

TABLA

El porcentaje de mortalidad predestete se redujo significativamente (p = 0,023) con una media de 2,29% (± 1,9) en el 49,6% de las granjas y se observó un aumento de 1,98 lechones destetados por cerda y año (± 1,82) en el 77,1% de las explotaciones, mientras que en un porcentaje menor (18,1%) de granjas disminuyó en 1,08 lechones.

Aunque no hay certeza en este punto, parece que los problemas reproductivos asociados al SIV podrían deberse a alteraciones del sistema inmunitario de la cerda durante la gestación, estando indirectamente asociados a la fiebre (liberación citoquinas inflamatorias) y a las reacciones inmunitarias que originan alteraciones hormonales, ya que tras la infección puede reducirse la síntesis de progesterona en el cuerpo lúteo en animales gestantes, induciendo luteólisis y, consecuentemente, la finalización de la gestación.

Por otro lado, existen otros estudios que indican que, tras la vacunación, existe una disminución de la diseminación y transmisión de virus en animales infectados (Lee et al., 2007; Van Reeth et al., 2001), además de la carga viral pulmonar, diseminación de virus y parámetros clínicos como disnea y fiebre.

En 111 de las granjas de las 137 estudiadas se vacunaba a las reproductoras frente a otro subtipo de SIV distinto del H1panN1 y no se encontró asociación entre la vacunación previa contra otros subtipos de SIV y el porcentaje de repeticiones, el porcentaje de abortos, el porcentaje de lechones nacidos muertos, el número de lechones nacidos vivos/camada o la mortalidad pre-destete, mientras que el número de lechones destetados/ cerda/año observado tras la vacunación contra el H1panN1 fue significativamente mayor (p = 0,016) en granjas que ya estaban vacunando frente a otros subtipos de influenza.

Únicamente en 3 de las granjas (2,2%) estudiadas no se registraron mejoras en los parámetros reproductivos valorados en la Tabla 2

Estos resultados quizás pudiesen estar relacionados con el hecho de que en estos casos existía otra clase de problemas de tipo infeccioso (coinfecciones PRRSV, etc.) y/o no infecciosos (manejo animales y vacuna/ vacunación, estrés, inadecuada inmunización de las cerdas, etc.) coexistiendo con el virus H1panN1, o bien que este patógeno no fuese determinante en los problemas reproductivos (cepas de menor virulencia, mayores problemas respiratorios que reproductivos, etc.), al menos, en el momento del estudio, ya que, en caso de un proceso epidémico o una infección reciente, cabría esperar cierta inmunidad durante cierto periodo de tiempo.

Otra razón que podría explicar la ausencia de mejora reproductiva en estas granjas podría ser el método de diagnóstico empleado para detectar el H1panN1 en cada granja.

PCR: en algunas granjas se realizó el diagnóstico mediante la técnica de PCR en animales con sintomatología clínica y/o con problemas reproductivos compatibles con SIV. Este método permite vincular la clínica al problema reproductivo, aunque tiene la limitación de la inmediatez a la hora de tomar las muestras de hisopos nasales, ya que existe un corto periodo de tiempo (3-5 días) de excreción tras la infección.

Serología: en otras granjas, el diagnóstico se realizó mediante la técnica serológica de la inhibición de la hemaglutinación (IH), no pudiendo relacionarse de forma clara la infección por el virus con la sintomatología clínica.

Una posible opción para resolver este condicionante sería valorar la seroconversión de muestras de sangre en los mismos individuos tomadas con 3-4 semanas de intervalo entre sí. Por todo ello, es posible que el H1panN1 estuviera presente en parte de estas granjas, pero sin causar problemas destacables debido a las causas comentadas anteriormente.

IMPACTO SOBRE EL PORCENTAJE DE REPETICIONES

Con el fin de agrupar las granjas en base al porcentaje de repeticiones antes de la vacunación (Tabla 3), las granjas fueron categorizadas en:

Nivel bajo: <10% de repeticiones

Nivel medio: 10-20 % de repeticiones

Nivel alto: >20 % de repeticiones

TABLA 3

Porcentaje de repeticiones agrupadas en categorías antes y después de la vacunación.

Esta categorización evidenció diferencias esperables dado que en las granjas que partían con mejores resultados iniciales el impacto de la vacunación frente a H1panN1 fue menor. Este hallazgo parece evidente, ya que en dichas granjas el rango de mejora era más reducido.

En la tasa de repeticiones, se encontraron diferencias significativas entre los tres grupos de granjas, con un porcentaje de granjas que presentaban mejora del 58,1%, 78,8% y 95,5% según tuviesen un nivel de repeticiones previo a la vacunación bajo, medio o alto, respectivamente.

CONCLUSIONES

Este trabajo demostró que la vacunación de las cerdas con Respiporc Flupan® en granjas donde se detectó el linaje pandémico del virus Influenza (H1panN1) redujo los signos clínicos asociados a la infección por este virus (fiebre, tos, disnea, anorexia y apatía), mejorando los parámetros reproductivos evaluados (% de repeticiones, % de abortos, número de nacidos vivos/camada, la mortalidad pre-destete y el número de destetados/cerda/año).

La mejora de estos parámetros tras el uso de Respiporc Flupan® en las granjas evaluadas podría suponer una reducción del coste de producción entre 29 y 39€/cerda/año. A esto se añadiría la mejora productiva que se pueda obtener durante la fase de transición.

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Casanovas, C., Cárceles, S., Espigares, D., Garza, L. and Oliver, S. (2020). Valoración económica del impacto reproductivo de la influenza porcina. Revista Suis, nº 170, septiembre, 2020.

EN LAS GRANJAS QUE PRESENTABAN UN NIVEL MEDIO O ALTO DE REPETICIONES, EL PORCENTAJE DE LAS MISMAS SE REDUJO UNA MEDIA DE CASI EL 5,5% Y 11%, RESPECTIVAMENTE, CON LA CONSECUENTE MEJORA ECONÓMICA QUE ESTO LLEVARÍA ASOCIADO

LEER MÁS SOBRE ESTE ESTUDIO

Gumbert, S., Froehlich, S., Rieger, A., Stadler, J., Ritzmann, M., & Zoels, S. (2020). Reproductive performance of pandemic influenza A virus infected sow herds before and after implementation of a vaccine against the influenza A (H1N1)pdm09 virus. Porcine Health Management, 6(1). doi: 10.1186/s40813-019-0141-x

Gumbert,

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S., Froehlich, S., Rieger, A., Stadler, J., Ritzmann, M. and Zoels, S. (2020). Reproductive performance of pandemic influenza A

PODER COMBINADO PARA LA PROTECCIÓN MÁS AMPLIA FRENTE A LA INFLUENZA

Protección frente los subtipos H1N1, H3N2, H1N2 y H1N1 pandémico

Reducción de signos clínicos y carga vírica pulmonar

≥ ≥ ≥ ≥

RELACIÓN E INTERACCIÓN ENTRE PRRSV Y GLAESSERELLA PARASUIS

P

A

AActualmente, una de las problemáticas más relevantes en las granjas porcinas en las fases de transición e inicio de cebo es la presencia de enfermedades respiratorias dentro del Complejo Respiratorio Porcino (CRP).

Entre los distintos factores asociados al CRP, la interacción entre un virus (PRRSV – virus del Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino) y una bacteria (Glaesserella parasuis, anteriormente conocido como Haemophilus parasuis) es probablemente uno de los que generan más dificultad en su control, ocasionando un fuerte impacto negativo en resultados productivos (mortalidad, crecimiento e índice de conversión).

Servicios Veterinarios

Grup de Sanejament Porcí de Lleida (GSP)

Ambos patógenos pueden presentarse como agentes causales primarios con una severidad clínica variable, pueden generar un proceso respiratorio y utilizan la vía sanguínea para diseminarse a distintas partes del organismo.

Una de las lesiones macroscópicas más frecuentes en un brote de la Enfermedad de Glässer ocasionada por Glaesserella parasuis es la presencia de neumonía supurativa y poliserositis fibrinosa, aunque hay otros agentes patógenos que pueden ocasionar lesiones parecidas (Mycoplasma hyorhinis, Mycoplasma hyosynoviae, Pasteurella multocida, Bordetella spp. Streptococcus spp., Actinobacillus suis).

IMAGEN 1

Neumonía supurativa y poliserositis fibrinosa asociada a Glaesserella parasuis (Enfermedad de Glässer).

A nivel respiratorio, la lesión típica asociada al virus PRRS es la neumonía intersticial que también puede estar originada por otros agentes víricos (PCV2, virus de la Influenza Porcina, Enfermedad de Aujeszky).

clínicas debemos recurrir a técnicas de diagnóstico laboratoriales

En el caso de clínica y lesiones compatibles con PRRS, se debe confirmar la presencia del virus mediante PCR.

Ante la sospecha de Enfermedad de Glässer, se debe proceder al aislamiento e identificación de Glaesserella parasuis, algunas veces complementado con la PCR

IMAGEN 2. Neumonía intersticial asociada a PRRS.

IMAGEN 3

Aislamiento

examen histopatológico nos puede ayudar a orientar el diagnóstico cuando las lesiones macroscópicas no son suficientemente esclarecedoras para deducir cuáles son agentes patógenos que pueden estar implicados en el proceso infeccioso, siendo útil también para confirmar el diagnóstico presuntivo que nos sugiere la necropsia y otras técnicas de diagnóstico.

de Glaesserella parasuis.

INTERACCIONES ENTRE VIRUS Y BACTERIAS

Hace ya varias décadas que se describieron las primeras asociaciones entre virus y bacterias.

Shobe (1931) demostró la existencia de interacciones entre el virus de la Influenza y Haemophilussuis. Posteriormente, entre 1970-1990 se publicaron varios trabajos sobre la asociación del virus de la Enfermedad de Aujeszky con distintos patógenos (Mycoplasma hyopneumoniae, Pasteurella multocida, Actinobacillus pleuropneumoniae y Haemophilus parasuis).

La aparición del virus PRRS y, posteriormente, el Circovirus Porcino tipo II (PCV2) hizo que se centraran la mayoría de publicaciones científicas en las coinfecciones que involucraban estos dos virus con otros patógenos, la mayoría de origen bacteriano.

Done (1996) publicó que, en lechones con presencia de lesiones secundarias generadas por bacterias, muchas veces podía “esconderse” la típica lesión de neumonía intersticial ocasionada por el virus PRRS.

Solano (1997) fue uno de los pioneros que consiguió reproducir experimentalmente la interacción in vivo entre el virus PRRS y Glaesserella parasuis, detectando un aumento de la mortalidad en cerdos infectados por ambos patógenos, aunque el grado de poliserositis del grupo infectado por ambos agentes no aumentó.

Este tipo de estudios puso de manifiesto que, en procesos de coinfección, la susceptibilidad a la acción de otros patógenos respiratorios o sistémicos se ve afectada, aumentando la morbilidad y la mortalidad.

Posteriormente, Solano (1998) estudió el efecto de la infección con el virus PRRS sobre la capacidad de reconocimiento de Glaesserella parasuis por parte del sistema inmunitario de los lechones.

Comprobó que, tras la infección y superación de la infección por Glaesserella parasuis gracias a la acción de los macrófagos alveolares, la posterior exposición de los lechones al virus PRRS en periodos cortos no tuvo efectos en la capacidad de reconocimiento de Glaesserella parasuis por parte de los macrófagos alveolares.

No obstante, la ampliación de estos períodos de contacto con el virus PRRS, a partir de los 7 días aproximadamente, los macrófagos alveolares de los lechones infectados demostraron tener una menor capacidad de fagocitosis y eliminación de la bacteria.

Estos resultados sugieren que el posible efecto que tendría el virus PRRS sobre Glaesserella parasuis sería un aumento de su persistencia en la granja

Por su parte, Segalés (1999) determinó que la infección previa de cerdos con el virus PRRS no influye en la infección de Glaesserella parasuis.

La combinación de estos dos estudios (Solano, 1998 y Segalés, 1999) indicaría que el efecto del virus PRRS sobre Glaesserella parasuis se relaciona más con un aumento de la persistencia en animales infectados que con un aumento en su capacidad de infección.

La importancia de la interacción entre estos dos agentes patógenos se hace aún más patente si se tiene en cuenta que el virus PRRS es capaz de replicarse en varias células del sistema linfoide, afectando también el sistema mucociliar o destruyendo los macrófagos alveolares.

Esta capacidad de replicación, combinada con su larga persistencia de hasta 49 días en pulmones de cerdos jóvenes (Beyer, 2000) y hasta 150 días tras la infección de las tonsilas (Allende, 2000), explica que la interacción entre el virus PRRS y Glaesserella parasuis tenga mayor impacto

Yu (2012) observó que la presencia de una cepa de alta patogenicidad del virus PRRS en cerdos comerciales fue capaz de acelerar la infección de Glaesserella parasuis 5 días después, aumentando la carga bacteriana en corazón y pulmones.

Kavanová (2015 ) analizó la respuesta inmunitaria frente al virus PRRS y Glaesserella parasuis in vitro simulando una coinfección de ambos en macrófagos alveolares porcinos, obteniendo una respuesta inmunitaria proinflamatoria con un significativo aumento de interleuquina-1β

GLAESSERELLA PARASUIS

En conclusión, ante la presentación de brotes de enfermedad de Glässer en animales postdestete, debemos contemplar medidas de control que no se limiten solamente al uso de antibióticos.

Existen otras herramientas, como las vacunaciones estratégicas, mejorar el confort ambiental del lechón e implementar o mejorar las medidas de bioseguridad interna dentro y entre lotes

Si existe circulación del virus PRRS en transiciones, la reducción de lechones virémicos al virus PRRS permitirá minimizar la interacción entre estos dos patógenos, facilitando el control de la enfermedad.

LA GRAN CAPACIDAD DE REPLICACIÓN Y LARGA PERSISTENCIA DEL PRRSV HACE QUE TENGA UN MAYOR IMPACTO EN LA INFECCIÓN POR

E ENTREVISTA CON JAVIER MARCOS SAINERO

¿CÓMO IMPACTA MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE EN LAS EXPLOTACIONES PORCINAS?

M. hyopneumoniae es el principal patógeno causante de la neumonía enzoótica y un agente clave en el complejo respiratorio porcino. Su distribución es universal y su incidencia creciente. La gravedad y extensión de esta enfermedad es directamente proporcional a la industrialización y a la intensificación de la producción porcina.

En la actualidad se le considera una de las patologías que más perjuicio produce en los cebos porque combina una prevalencia por explotaciones cercana al 100% , siendo su prevalencia en la población ganadera también muy alta. El curso de la enfermedad es mayoritariamente crónico con lo que produce grandes pérdidas por:

Javier Marcos Sainero Director Servicio Técnico, Vetia Animal Health

Falta de rendimiento

Bloqueo de la expresión del potencial genético

Dificultad para el aprovechamiento pleno de los piensos e instalaciones

Concomitancia con otras enfermedades infecciosas de distribución amplia

En numerosos estudios se apuntan pérdidas de 5 a 6 € por cabeza en todo el ciclo, lo que la convierte en un claro objetivo para ser controlada y minimizada.

¿QUÉ HERRAMIENTAS SON LAS MÁS EFICACES PARA EL CONTROL DE ESTA PATOLOGÍA?

La evaluación de la situación de la enfermedad en una determinada explotación debe ser el primer paso que dar para su control. Los factores relacionados con la densidad de los animales y la ventilación en los alojamientos influyen en la incidencia de esta enfermedad.

Todo aquello que pueda evitar situaciones de hacinamiento, estrés y empobrecimiento de la calidad del aire debería ser tenido en cuenta como medios para el control.

La mayoría de las explotaciones tienen una tasa de reposición de reproductoras que ronda el 50%, por lo que puede considerarse un medio adicional el proveerse de una reposición libre de infección para evitar que las reproductoras actúen como diseminadoras.

POR ÚLTIMO, LA VACUNACIÓN MASIVA DE LOS LECHONES, CON VACUNAS INACTIVADAS CONTENIENDO EL ANTÍGENO PRECISO, ES UN MEDIO DE GRAN EFICACIA PARA LA PREVENCIÓN MÉDICA DE LA ENFERMEDAD

Esta es la fórmula de prevención de naturaleza inmunológica que se ha demostrado como eficaz para mantener la enfermedad bajo control.

¿QUÉ SOLUCIÓN PROPONE VETIA AL PROFESIONAL EN ESTE SENTIDO?

La propuesta de Vetia es PORVAXIN M.HYO, una nueva vacuna inactivada indicada en cerdos de engorde para reducir la gravedad de las lesiones pulmonares causadas por la infección por Mycoplasma hyopneumoniae

¿CUÁLES SON LAS PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS

DE PORVAXIN M.HYO?

PORVAXIN M.HYO contiene como antígeno la cepa 1137/99 de Mycoplasma hyopneumoniae, altamente inmunógena, que se ha formulado en emulsión oleosa con aceite no mineral.

EL ESTABLECIMIENTO DE LA INMUNIDAD ES RÁPIDO, A LOS

14 DÍAS POSTVACUNACIÓN, Y SU DURACIÓN LARGA, DE 26 SEMANAS, PROTEGIENDO DURANTE TODO EL PERIODO DE CEBO

La vacuna tiene la capacidad de poder ser utilizada en pauta de aplicación única o doble, en virtud de la situación de la enfermedad en la explotación de destino y de acuerdo con el criterio del veterinario que la prescribe.

La administración es intramuscular, a la dosis de 2 ml , y se aplica a los lechones lactantes:

Pauta de dos dosis: desde el día 7 de vida con revacunación a los 21 días

Pauta de dosis única (la más utilizada): el día 11 de vida

Hay que destacar que la formulación es muy segura, tanto para los animales de destino como para el personal encargado de su administración.

¿QUÉ BENEFICIOS APORTA LA VACUNACIÓN CON PORVAXIN M.HYO?

Como ya se ha mencionado, la versatilidad, la seguridad en su utilización y la eficacia

La aplicación de esta vacuna permite reducir el impacto que causa la neumonía enzoótica en los cerdos de cebo y favorece la expresión de las capacidades productivas de su genética, de su nutrición y de las instalaciones de la explotación. Hablamos de rentabilidad

La vacunación es una parte importante de los medios disponibles que mantienen la enfermedad controlada.

¿QUÉ ESTUDIOS AVALAN A PORVAXIN M.HYO?

Los estudios que la avalan hacen referencia a las exigencias de la Farmacopea Europea en esta materia y son, también reseñables, las pruebas que demuestran la eficacia de PORVAXIN M.HYO, incluso en presencia de anticuerpos maternales, y la seguridad de las aplicaciones con una y dos dosis.

También se ha comprobado la seguridad de las sobredosis que duplican la dosis estándar y la relativa a la aplicación de 2 dosis con intervalo de dos semanas.

Se han descartado los posibles residuos en los alimentos producidos a partir de animales vacunados. Se han descartado impactos de ecotoxicidad y, en numerosos estudios de campo, se ha asegurado que en condiciones de granja no se producen efectos negativos reseñables en esas condiciones. Todas las pruebas están en el sumario del producto.

¿DISPONE VETIA DE ALGUNA OTRA SOLUCIÓN DIRIGIDA AL PORCINO?

Gradualmente vamos aumentando nuestro portfolio dirigido a esta especie, siempre con una clara orientación hacia la prevención

En la actualidad, nuestra línea de biológicos para porcino está formada por:

Colidex-C: frente a la colibacilosis del lechón lactante y destetado

Iberitex: frente al mal rojo del cerdo

Porvaxin Parvo+Ery: frente al mal rojo y la parvovirosis porcina de las cerdas reproductoras

Porvaxin M.hyo: como última incorporación

En el grupo de farmacológicos comercializamos:

Diacol antidiarreico: neomicina en solución oral.

Digestia: restablecedor enzimático de la función digestiva.

IlovetMR: eritromicina inyectable al 20%.

PORVAXIN ® M.hyo Emulsión inyectable para porcino

Genera inmunidad a los 14 días posvacunación

Inmunidad robusta con un óptimo perfil de seguridad

RAPIDEZ RESULTADOS RENTABILIDAD

Asegura toda la fase de cebo, mejorando los índices productivos

Composición por dosis (2 ml): Mycoplasma hyopneumoniae, inactivado cepa 1137/99 PR ≥ 1. Indicaciones y especies de destino: Inmunización activa de cerdos de engorde para reducir la gravedad de las lesiones pulmonares en animales con presencia probada de M. hyopneumoniae Vía de administración: Vía intramuscular, preferiblemente en el cuello detrás de la oreja. Posología:

Dosis: 2 ml. Pauta de vacunación: Una dosis: administrar una única dosis a los lechones a los 11 días de edad. Dos dosis: en explotaciones con una elevada presión de infección administrar 2 dosis a partir de los 7 días de edad, con un intervalo de 3 semanas. Contraindicaciones: Ninguna. Precauciones: Conservar en nevera (entre 2ºC y 8ºC). Proteger de la luz. Proteger de la congelación. Tiempo de espera: Cero días. Con prescripción veterinaria. Titular: Vetia Animal Health, S.A.U. Reg. Nº: 3901 ESP

MEDICIÓN DEL CORTISOL EN PELO COMO INDICADOR DE ESTRÉS CRÓNICO EN MATERNIDAD

C EE

El bienestar animal en la producción porcina intensiva se ha convertido en un tema cada vez más relevante para la opinión pública en los últimos años1. Se ha demostrado que las jaulas de partos restringen a las cerdas, no sólo en su locomoción sino también en otros comportamientos naturales2, lo que les provoca estrés.

Los sistemas de alojamiento libre, sin jaulas de parto, parecen ser ventajosos en este sentido3, por lo que actualmente se están estudiando distintos sistemas alternativos para mejorar el bienestar animal.

Para evaluar los sistemas de alojamiento en relación al bienestar animal, se utilizan indicadores específicos que se centran, sobre todo, en los impactos físicos y en el comportamiento de las cerdas 4 . Sin embargo, un sistema de alojamiento también se debe evaluar en relación al nivel de estrés que experimentan los animales en él 5. Por ello, los estudios que comparan diferentes sistemas de alojamiento suelen incluir también la medición de marcadores de niveles de estrés.

Dierck-Hinrich Wiechers1, Susanne Brunner2 , Swetlana Herbrandt2 , Nicole Kemper1 & Michaela Fels1

1Instituto de Higiene, Bienestar y Comportamiento de los Animales de Granja, Facultad de Veterinaria de la Universidad de Hannover, Alemania

2Departamento de Estadística, Universidad TU Dortmund, Alemania

CORTISOL –BIOMARCADOR DE ESTRÉS

Un método muy utilizado para cuantificar el estrés es medir el nivel de cortisol en los fluidos corporales o en las secreciones como biomarcador.

El cortisol es el principal glucocorticoide en la mayoría de los mamíferos6 y es producido y liberado en la sangre por las glándulas adrenales tras el estímulo por parte de la hormona adrenocorticotrópica (ACTH). Esta hormona es liberada por el eje hipotálamo-hipófisis-adrenal (eje HHA) que se activa7 cuando el animal se enfrenta a un factor estresante.

El estrés agudo conduce a un rápido aumento de los glucocorticoides, con un pico al cabo de unos 15-30 minutos. Este aumento permite la adaptación temporal a las amenazas externas mediante la redistribución de la energía en el organismo.

En caso de estrés crónico, un nivel elevado de glucocorticoides a largo plazo puede ser perjudicial en muchos sentidos9

LOS CERDOS SON MULTIFACTORIALES Y PUEDEN CLASIFICARSE COMO SOCIALES, AMBIENTALES, METABÓLICAS, INMUNOLÓGICAS O ASOCIADAS AL MANEJO8

Se pueden utilizar varias muestras para el análisis del nivel de cortisol como plasma, saliva, orina, heces, leche y pelo7,10 Debido al rápido aumento tras la aparición de un estímulo y a la disminución igualmente rápida tras su eliminación, los niveles de cortisol en plasma y saliva son muestras puntuales muy variables. En la orina y las heces el cortisol representa solamente un período de 24 horas o menos de una situación de estrés, por lo que ninguna de estas muestras proporciona una visión a largo plazo de la actividad del eje HHA11,12

FIGURA 1

Activación del eje hipotálamo-hipofisario-adrenal ante un estímulo estresante. Ante un estímulo estresante, el hipotálamo libera CRH (Hormona Liberadora de Corticotropina) que provoca la secreción de ACTH por parte de la hipófisis. Esta hormona estimula la liberación de cortisol desde las glándulas adrenales a la circulación sanguínea con el fin de ayudar al organismo a hacer frente al estrés, produciéndose un fenómeno de retroalimentación negativa de esta hormona sobre la liberación de CRH y ACTH. El cortisol se puede detectar en distintas muestras, como plasma, saliva, heces y pelo.

Estímulo estresante

Detección de cortisol

Plasma

LAS CAUSAS DEL ESTRÉS EN

DETECCIÓN DE CORTISOL EN EL PELO

Koren et al.13 realizaron uno de los primeros estudios sobre la posibilidad de medir el cortisol en el pelo de los animales. Desde entonces, la investigación sobre este tema se ha intensificado cada vez más para poder medir esta hormona como biomarcador de estrés crónico12 . Además de permitir un análisis a largo plazo, la obtención de pelo es un método no invasivo, y el procedimiento de toma de muestras no influye en los valores medidos. Por el contrario, la toma de muestras de sangre es estresante y dolorosa, pudiendo afectar a los niveles de cortisol detectado en el plasma11

FIGURA 2

Vías de acumulación de cortisol en el pelo. La acumulación del cortisol en el pelo se produce por difusión a través de la circulación sanguínea, en forma de una película de sudor y sebo procedente de las glándulas asociadas al pelo a través de agentes contaminantes externos, y también puede ser sintetizada por el propio folículo piloso.

1 2 3

Contaminación externa

Circulación sanguínea

VÍAS DE ACUMULACIÓN DE CORTISOL EN EL PELO

VÍAS DE ACUMULACIÓN DE CORTISOL EN EL PELO

Para explicar las formas de acumulación del cortisol en el tallo piloso, se suele sugerir como hipótesis básica el modelo multicompartimental14 . Según este modelo, la acumulación de cortisol en el pelo no sólo se produce por difusión desde la sangre hasta el folículo durante la fase anágena de la formación del pelo, sino que también puede incorporarse al pelo en la forma de una película de sudor y sebo procedente de las glándulas asociadas al pelo.

Otra forma posible es la incorporación de cortisol al pelo a través de sustancias externas procedentes del entorno, después de que haya crecido más allá de la capa externa de la piel. En este caso, sería incluso concebible que el cortisol se pueda incorporar tras la toma de muestras, contribuyendo a su contaminación.

El cortisol puede ser sintetizado y secretado por el propio folículo piloso en respuesta a estresores locales en la piel y el pelo. Dado que esta reacción es independiente de la actividad del eje HHA central, cabe suponer que existe un eje de estrés “periférico” adicional, con su propia respuesta de estrés local además de la reacción sistémica15,16

Vías de acumulación de cortisol en el pelo

Sudor y sebo de glándulas asociadas al pelo

Teniendo en cuenta todos estos posibles orígenes, la cuestión sigue siendo hasta qué punto la concentración de cortisol en el pelo está influida por los niveles de cortisol sistémico y si realmente refleja la actividad del eje HHA.

Síntesis en el propio folículo piloso

Algunos estudios han demostrado que el nivel de cortisol en el pelo aumenta con niveles plasmáticos más elevados o tras la administración de ACTH de forma experimental17-19. Así, la concentración de cortisol dependiente del eje HHA en el pelo parece ser lo suficientemente elevada como para poder considerarla como una muestra apropiada para la identificación del estrés crónico.

CORTISOL EN PELO VS SISTEMA DE ALOJAMIENTO

La concentración de cortisol en pelo se ha convertido en un biomarcador útil para determinar el estrés crónico en los animales, pudiendo ser adecuado para evaluar el estrés a largo plazo asociado a diferentes sistemas de alojamiento.

El objetivo de este estudio fue explorar la aplicabilidad de la medición del cortisol en el pelo para evaluar el nivel de estrés crónico en cerdas alojadas en distintos tipos de alojamiento en maternidad.

MATERIAL & MÉTODOS MATERIAL & MÉTODOS

DISEÑO EXPERIMENTAL

El estudio se realizó entre junio de 2018 y enero de 2019 en Alemania y se compararon dos sistemas de alojamiento en maternidad distintos: corrales convencionales con jaulas de partos (FC) y un sistema de alojamiento libre sin jaulas de partos (LH):

Sistema FC (corrales convencionales con jaulas de parto): 8 corrales de 2,6 × 2,0 m (5,2 m2) con una jaula de parto de 1,9 x 0,8 m (1,52 m2 de superficie útil para la cerda) en el centro del corral.

Sistema LH (alojamiento libre): seis corrales de 2,5 x 2,4 m (6 m2) por sala con 4,01 m2 para la cerda suelta, separado de la zona de los lechones por una rejilla de hierro giratoria que podía utilizarse para confinar a la cerda durante los procedimientos de manejo.

Ambos sistemas estaban equipados con el mismo tipo de suelo de slat y estaban sujetos a los mismos procedimientos de gestión. Además, en ambos casos se proporcionó un saco de yute como material de construcción del nido y cuerdas de algodón como material manipulable adicional, instalando también un estante con heno en cada corral del sistema LH.

El manejo de la alimentación en los dos sistemas fue el mismo: las cerdas recibían una dieta de lactación dos veces al día. La cantidad de pienso se racionó durante los días previos al parto (un máximo de 5 kg/día) y el día del parto (un máximo de 2 kg/día). Tras el parto, la cantidad de alimento se incrementó en unos 0,5 kg/día hasta alcanzar un nivel de alimentación ad libitum al cabo de unos 14 días (8-9 kg/día).

En un total de seis lotes, se obtuvieron datos de 69 cerdas. En cinco de ellos, se registraron los datos de todos los parámetros de todas las cerdas (n = 60) y con el fin de aumentar el número de muestras de pelo para los análisis de cortisol, se añadió un lote adicional.

Como algunas cerdas fueron enviadas al matadero antes de la toma de muestras de pelo y no fue posible medir la longitud del pelo de todos los animales, se redujo ligeramente el número de cerdas a examinar para varios parámetros.

TOMA DE MUESTRAS DE PELO

Mediante el uso de maquinillas eléctricas, se afeitó una zona bilateral simétrica de 20 × 30 cm en la zona de transición entre el cuello y las escápulas (Figura 3) lo más próxima posible a la piel.

1 2

Primer afeitado: teniendo en cuenta que el tallo piloso tiene una profundidad en la piel de 3-4 mm20 y una supuesta tasa de crecimiento de 0,7 cm/mes21, se estima que tarda unas 2 semanas en alcanzar la capa más externa de la piel. Por ello, se afeitó a las cerdas 13 días después de entrar a las instalaciones de maternidad, obteniéndose así muestras de pelo representativas del periodo de estudio.

Segundo afeitado: para asegurarse de que el pelo formado durante el periodo experimental había crecido fuera de la piel, se afeitó a las cerdas 15 días después de salir de las instalaciones de maternidad, es decir, 35 días después de su primer afeitado.

FIGURA 3

Localización de las zonas afeitadas en la transición entre el cuello y las escápulas con subsecciones: (A) parte lateral derecha, (B) región sobre la columna vertebral y (C) parte lateral izquierda.

Se analizó un total de 61 muestras (31 de cerdas FC y 30 de cerdas LH) y para cada sección se determinó la longitud de cinco pelos por cerda, calculando la tasa de crecimiento del pelo durante un periodo de 30 días para comparar los resultados con los de estudios anteriores.

A B C

FIGURA 4

Con el fin de obtener muestras del pelo de nuevo crecimiento representativas del período de estancia en la maternidad, se afeitó la superficie de interés dos veces (Figura 4) A

Protocolo de afeitado para el muestreo de pelo

Pelo formado fuera de la fase de maternidad

Pel o formado durante la fase de maternidad

(A) Día de la entrada a maternidad, (B) 13 días después de la entrada (primer afeitado), (C) día de la salida de maternidad, (D) 15 días después de la salida (segundo afeitado para el muestreo de pelo).

B C D

DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE CORTISOL EN EL PELO

La concentración de cortisol en el pelo se analizó mediante un inmunoensayo comercial con detección por quimioluminiscencia.

RESULTADOS RESULTADOS

Se encontraron diferencias muy significativas en la tasa de crecimiento del pelo entre las distintas regiones de la zona afeitada. Mientras que el pelo de las zonas laterales creció de forma casi idéntica a lo largo de 30 días (lado izquierdo: 7,48 ± 3,52mm, lado derecho: 7,44 ± 3,24mm), hubo un crecimiento considerablemente mayor en la zona de 10 cm de ancho por encima de la columna vertebral (12,27 ± 3,95mm).

En general, se registraron unas concentraciones mínimas de cortisol en pelo de 0,49 pg/mg y un máximo de 8,92 pg/mg (1,99 ± 1,23 pg/mg para todas las muestras analizadas).

El promedio de la concentración de cortisol en pelo no difirió significativamente entre los sistemas de alojamiento en maternidad (LH: 1,85 + 0,82 pg/mg, FC: 2,13 + 1,53 pg/mg, P = 0,631) (Tabla 1)

La concentración de cortisol en pelo tampoco se vio afectada por la paridad de las cerdas, el número de lechones nacidos vivos, el número de lechones destetados, la puntuación de lesiones cutáneas, la puntuación de lesiones mamarias, la pérdida de peso corporal individual durante el periodo de estudio, la aparición de estereotipias o las condiciones ambientales en las instalaciones (P > 0,05).

NO HUBO DIFERENCIAS SIGNIFICATIVAS EN LOS NIVELES DE CORTISOL EN PELO ENTRE LOS SISTEMAS COMPARADOS

TABLA 1

Resultados de las concentraciones de cortisol en el pelo (pg/mg) en los dos sistemas de maternidad (LH, alojamiento libre; FC, jaula de parto).

TASA DE CRECIMIENTO DEL PELO

Para utilizar la concentración de cortisol en pelo como biomarcador retrospectivo del nivel de estrés, es importante conocer la velocidad de crecimiento del pelo.

DISCUSIÓN DISCUSIÓN LA VARIACIÓN EN LA TASA DE CRECIMIENTO DEL PELO EN DISTINTAS REGIONES Y SUBREGIONES CORPORALES PUEDE INFLUIR LA REPRESENTATIVIDAD Y FIABILIDAD DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS AL MEDIR LA CONCENTRACIÓN DE CORTISOL

Se debe tener en cuenta que la variación de la velocidad de crecimiento del pelo en las distintas regiones del cuerpo puede dar resultados diferentes al determinar la concentración de cortisol en las muestras dentro del mismo período de estudio22 . Por ello, determinar la tasa de crecimiento del pelo es indispensable a la hora de evaluar el cortisol en pelo como indicador del estrés crónico durante un periodo de tiempo específico.

Actualmente, no existe un procedimiento estandarizado para la toma de muestras de pelo en cerdos, siendo necesario identificar las regiones corporales más adecuadas para obtener resultados fiables y representativos. Se ha demostrado que la concentración de cortisol en el pelo a nivel del cuello es inferior que en la región lumbar22 , que a su vez es inferior al de la cola23 . Asimismo, la tasa de crecimiento del pelo en estas regiones difiere significativamente, siendo más baja a nivel del cuello23 .

En este estudio, la tasa de crecimiento del pelo en las zonas laterales de la región afeitada fue casi idéntica a la descrita por Bacci et al. 21 en la región de la grupa de las cerdas y similar a las encontradas por Heimbürge et al. 23 en el cuello. Sin embargo, se encontraron variaciones en la tasa de crecimiento en la zona encima de la columna vertebral con respecto a las zonas laterales de la región afeitada.

Así, mientras que Heimbürge et al. 23 revelaron diferencias en la tasa de crecimiento del pelo entre las distintas regiones corporales, el presente estudio también aporta pruebas de que tales diferencias se dan dentro de una misma región corporal en los cerdos. Este hallazgo, que podría influir en los resultados de las mediciones de la concentración de cortisol en pelo, debería tenerse en cuenta en futuros estudios.

CONCENTRACIÓN DE CORTISOL EN EL PELO

Se asume que el estrés crónico puede provocar un aumento o una disminución de la respuesta del eje HHA en diferentes momentos a lo largo de una situación estresante: la activación del HHA y unos niveles elevados de cortisol al principio pueden ir seguidos de una respuesta de contrarregulación a lo largo del tiempo, con unos niveles de glucocorticoides por debajo de lo normal por mecanismos de retroalimentación24.

La adaptación a los llamados estresores homotípicos recurrentes o persistentes en términos de una regulación del eje HHA, con una respuesta fisiológica disminuida en comparación con las respuestas de estrés agudo, se conoce como “habituación”.

Este fenómeno depende de las particularidades de la situación de estrés, como la gravedad, la forma de presentación y la duración25 , y es específico del factor estresante26 . Sin embargo, el eje HHA no se habitúa a los estresores especialmente amenazantes27

El confinamiento de las cerdas en jaulas podría considerarse una causa de estrés crónico, de modo que, aunque la hipercortisolemia relacionada con el alojamiento puede ser transitoria28 , la determinación del nivel de cortisol en el pelo se ha recomendado en estudios anteriores como un buen indicador de estrés crónico.

En este estudio, se evaluó si los métodos adaptados de anteriores estudios exitosos de extracción de cortisol del pelo21,22,23 también son aplicables a las cerdas en maternidad alojadas en diferentes sistemas, tratando de identificar diferentes factores de estrés específicos en las salas de maternidad.

Sin embargo, los resultados del estudio no revelaron diferencias significativas en los niveles de cortisol en el pelo entre los sistemas de alojamiento, lo que parece ser parcialmente contradictorio con los resultados de estudios anteriores.

El procedimiento de muestreo podría ser una causa de resultados contradictorios. El método descrito en este estudio fue un intento de mejora con respecto a los métodos anteriores al tener en cuenta el crecimiento del pelo.

Debido al procedimiento estandarizado utilizado, se asume que se obtuvieron resultados significativos, intentando medir el cortisol solamente en pelo formado durante el período de estudio. Para ello, se tuvo en cuenta el tiempo que transcurre entre la incorporación de cortisol en el pelo y la aparición de esta sección de pelo en la superficie cutánea29

Como este procedimiento no se llevó a cabo en todos los estudios anteriores y en el caso de Bacci et al. 21 , las muestras de pelo se tomaron de distintas partes del cuerpo, la comparabilidad de los resultados puede ser limitada.

Independientemente de la región del cuerpo seleccionada para la toma de muestras de pelo, es importante muestrear la misma zona en todos los sujetos12

Casal et al. 22 encontraron una menor concentración de cortisol en el pelo de la parte dorsal del cuello de los cerdos en comparación con otras regiones del cuerpo, algo que podría relacionarse con un menor ensuciamiento con heces, por ello, esta región también fue elegida para el muestreo en este estudio.

Bacci et al. 21 encontraron que las cerdas tenían valores de cortisol en el pelo más elevados cuando se mantenían en jaulas en comparación con el alojamiento en grupo en la zona de gestación. Sin embargo, los sistemas de alojamiento en gestación son distintos a los de maternidad y los altos niveles de cortisol en las cerdas alojadas en jaulas también pueden explicarse por el aumento sistémico de la concentración de cortisol durante el parto30

En cambio, en este estudio se compararon los niveles de cortisol en el pelo de las cerdas en diferentes sistemas de alojamiento durante la misma fase del ciclo reproductivo, lo que permite determinar mejor el efecto del sistema de alojamiento. En este caso, ni el sistema de alojamiento ni el peso corporal ni otros factores investigados afectaron a los niveles de cortisol en el pelo de las cerdas.

La mayoría de los estudios anteriores sobre los niveles de estrés de las cerdas en maternidad alojadas en jaulas o sueltas se han basado en la medición del cortisol en saliva o en sangre, por lo tanto, no son directamente comparables con este estudio30-35

Lawrence et al. 30 encontraron valores de cortisol en plasma más elevados en el periparto, independientemente del sistema de alojamiento. Se detectaron niveles de cortisol más elevados en las cerdas alojadas en jaulas en comparación con las cerdas en libertad durante este periodo, pero posteriormente los niveles de cortisol disminuyeron rápidamente y fueron casi idénticos en las cerdas de ambos grupos sólo un día tras el parto30

Se considera que el cortisol en el pelo es un indicador de la actividad adrenocortical de las semanas o meses previos12 , ya que representa la producción hormonal acumulada durante el periodo de crecimiento del pelo10

En este estudio, un periodo de investigación bastante largo tras el parto pudo haber “diluido” los niveles de cortisol más elevados durante el periparto al ir seguidos de valores de cortisol más bajos después. En consecuencia, las diferencias en los niveles de estrés entre los dos sistemas de alojamiento en nuestro estudio podrían no ser tan evidentes al medir el cortisol en el pelo.

Este estudio no puso de manifiesto otros factores que influyeran en los niveles de cortisol en el pelo de las cerdas, como el número de lechones lactantes o destetados. Esto podría explicarse por la habituación a los constantes factores estresantes durante el periodo de estudio.

Se comprobó que el amamantamiento es un factor de estrés para las cerdas, ya que se encontraron niveles plasmáticos de cortisol más altos el día antes del destete en comparación con el día después del destete. Mientras que el procedimiento de destete es breve, un período de lactación más largo puede tener un mayor impacto en los niveles de cortisol. Aparte de la posibilidad de que los estímulos no sean lo suficientemente estresantes como para causar niveles elevados de cortisol en las cerdas36 , existe la posibilidad de una regulación a la baja del eje HHA en este caso. También es posible que los estresores dominantes con mayor influencia en los niveles de cortisol enmascaren el impacto de otros estresores de menor efecto en el eje HHA. Por tanto, la influencia de estos otros estresores (por ejemplo, el sistema de alojamiento) podría no estar representada por los valores de cortisol registrados.

Por último, también cabe pensar que la medición del cortisol en el pelo de los cerdos no es el método más adecuado para determinar los niveles de estrés.

Heimbürge et al. 37 no encontraron diferencias en la concentración de cortisol en el pelo entre cerdos previamente tratados con ACTH y cerdos control, mientras que en el ganado vacuno sí se encontró un efecto del tratamiento con ACTH sobre el nivel de cortisol en el pelo. Los autores concluyeron que esto puede estar relacionado con una menor respuesta sistémica del cortisol en los cerdos, aunque tampoco se puede descartar un menor crecimiento estacional del pelo o una contaminación cruzada externa del mismo.

Los resultados de este estudio señalan que la validez de las mediciones de cortisol en el pelo en cerdas en el periparto podría ser limitada. Esto puede deberse a las constantes condiciones de estrés durante la fase de maternidad, como el amamantamiento o el alojamiento individual, a las que el eje HHA de las cerdas puede adaptarse con el tiempo, dando lugar a una disminución de los niveles de cortisol. Sin embargo, también es posible que la medición del cortisol en el pelo no sea el método más adecuado para determinar el estrés en los cerdos. Sigue siendo cuestionable el uso rutinario de la concentración de cortisol en el pelo en cerdas para comparar el efecto de diferentes sistemas de maternidad sobre el bienestar animal y es importante seguir investigando sobre la evolución temporal de los niveles de cortisol registrados en el pelo para validar los valores medidos.

Además, la tasa de crecimiento del pelo debería tenerse en cuenta en futuros estudios a la hora de medir la concentración de cortisol en el pelo. Sólo si el pelo recogido crece de forma más o menos homogénea se puede definir el periodo de tiempo del análisis del pelo.

EN FUTUROS ESTUDIOS DEBERÍAN TENERSE EN CUENTA LAS DIFERENCIAS REGIONALES EN LA TASA DE CRECIMIENTO DEL PELO DENTRO DE LA MISMA ZONA AFEITADA

Artículo traducido y adaptado de: Wiechers, D., Brunner, S., Herbrandt, S., Kemper, N., & Fels, M. (2021). Analysis of Hair Cortisol as an Indicator of Chronic Stress in Pigs in Two Different Farrowing Systems. Frontiers In Veterinary Science, 8. doi: 10.3389/fvets.2021.605078

(CC BY 4.0)

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V HERRAMIENTA EPICC VALORANDO LA EFICACIA DE UNA VACUNA DESDE UN PC DD

Determinar qué parámetro inmunológico está relacionado con la protección que otorga una vacuna no siempre es fácil. Las herramientas bioinformáticas pueden ser útiles para valorar la respuesta celular e incluso, en algunos casos, predecir el nivel de protección que otorga una vacuna frente a una cepa concreta.

La inmunidad que generan las vacunas no se basa exclusivamente en la producción de anticuerpos. De hecho, en numerosas situaciones hay protección sin su presencia.

En algunos de estos casos la protección no se ha podido asociar claramente con otro factor; por el contrario, en otros, la protección se ha relacionado directamente con la respuesta celular, como se ha observado eventualmente con el virus del PRRS, el circovirus porcino tipo 2 o el virus de la influenza.

En este sentido, las herramientas bioinformáticas pueden utilizarse para diseñar, evaluar e incluso predecir la respuesta celular de una vacuna y, por tanto, su potencial protector.

Ivan Díaz Luque Investigador en Centre Recerca en Sanitat Animal (IRTA-CReSA)

RESPUESTA INMUNITARIA VACUNAL HUMORAL Y CELULAR

La respuesta inmunitaria generada tras una vacunación se clasifica como humoral o celular.

Sin embargo, aunque uno u otro tipo puede llegar a ser predominante, no son excluyentes.

En general, el rol más importante recae en la respuesta humoral, especialmente en el caso de las infecciones víricas.

Una cantidad suficiente de anticuerpos con capacidad neutralizante en el momento de un desafío puede incluso dar lugar a una inmunidad esterilizante (que neutraliza totalmente el virus e impide su replicación).

ENTONCES, EN AUSENCIA DE ANTICUERPOS, ¿ESTÁ TOTALMENTE DESPROTEGIDO EL ANIMAL?

Tomemos como ejemplo el virus de la influenza A, cuya variabilidad genética es muy elevada. Debido a dicha variabilidad, los antígenos relacionados con la producción de anticuerpos pueden llegar a ser muy distintos entre dos cepas, incluso entre dos que sean de un mismo grupo.

Por ejemplo, imaginemos dos virus influenza (X e Y) que poseen antígenos relacionados con la producción de anticuerpos muy diferentes entre sí. De una forma simplificada, los animales vacunados con X desarrollarán anticuerpos que probablemente no serán capaces de neutralizar a Y.

Este fenómeno se denomina ausencia de anticuerpos de reacción cruzada. Así pues, a priori, cabría pensar que los animales vacunados con X no estar n protegidos frente a Y.

¿Y si no ocurriera asÍ? ¿Y si los animales vacunados con X estuvieran protegidos frente al virus Y, aun en ausencia de anticuerpos de reacción cruzada?

PROTECCIÓN EN AUSENCIA DE ANTICUERPOS DE REACCIÓN CRUZADA

Existen estudios, tanto con virus de gripe humana como porcina, en los que se ha observado protección total o parcial, basada en la reducción de lesiones pulmonares y títulos virales, en ausencia de anticuerpos de reacción cruzada.

En estos casos, la protección podría atribuirse a respuestas mediadas por linfocitos T (respuesta celular).

Cuando un virus está replicándose en el interior de una célula (y no está, por tanto, en el espacio extracelular), la respuesta celular es mayormente la responsable de su control y eliminación.

En nuestro ejemplo, las diferencias entre X e Y en los antígenos que inducen la producción de anticuerpos impiden la existencia de anticuerpos de reacción cruzada. Sin embargo, si existiera similitud en aquellas partes del virus que determinan la respuesta celular, podría existir protección.

Para poder evaluar a priori la similitud o no de estos antígenos, y cómo se relacionarán con los receptores de las células del sistema inmunitario, se usan herramientas bioinformáticas.

HERRAMIENTAS BIOINFORMÁTICAS

La bioinformática es el área de la ciencia basada en la biología y la informática que gestiona, relaciona e interpreta un enorme volumen de datos procedentes de la genómica, la inmunología, etc.

Antes de la aplicación de la bioinformática, localizar epítopos (fragmentos específicos de los antígenos reconocidos por las células del sistema inmunitario) suponía un proceso muy costoso pues había que sintetizar decenas, cuando no cientos, de segmentos solapados de cada proteína del virus y posteriormente realizar los pertinentes análisis inmunológicos.

Sin embargo, la bioinformática simplifica extraordinariamente este proceso, haciéndolo muchísimo más sencillo y barato, ya que se realiza una predicción para escoger posibles candidatos que serían los únicos en ser evaluados.

Así, pasamos de tener que evaluar cientos de analitos a unas pocas unidades. El primer estudio que aplicó herramientas bioinformàticas para la detección y posterior evaluación de epítopos de células T en la especie porcina data del 2009 (Díaz y cols., 2009)

PREDECIR LA EFICACIA VACUNAL CON EpiCC

En un estudio más reciente (Gutiérrez y cols., 2017) se aplican estos conceptos mediante el algoritmo EpiCC (desarrollado por EpiVax) con el objeto de comparar epítopos T de diferentes cepas del virus de influenza A en cerdos, y poder estimar así la respuesta celular cruzada entre ellas.

A NIVEL PRÁCTICO, EPICC PUEDE SER ÚTIL

PARA PREDECIR LA EFICACIA DE LAS VACUNAS

FRENTE A LAS CEPAS CIRCULANTES

Evidentemente, aparte de realizar predicciones, este tipo de herramienta aporta una información muy valiosa, que, junto a la de los análisis filogenéticos y la reactividad cruzada de anticuerpos, puede facilitar la creación de vacunas más racionales y dirigidas.

En el análisis en el que se comparan los epítopos compartidos entre cepas teniendo en cuenta también las secuencias de los receptores de las células del sistema inmunitario, EpiCC otorga una puntuación.

Para marcar el umbral que debería poseer una vacuna (puntuación mínima) para definirla como protectora frente a una cepa concreta, se analizaron los resultados de seis estudios en los que los cerdos habían sido vacunados con una vacuna comercial inactivada (compuesta por cuatro cepas: una H1N2, dos H1N1 y una H3N2) y posteriormente desafiados con una cepa de campo.

En cinco de estos estudios, la vacuna otorgaba protección -en términos de reducción de lesiones a nivel pulmonar y de títulos virales en pulmón e hisopo nasal- a pesar de inducir un nivel de anticuerpos de reacción cruzada muy bajo.

En la Figura 1 se define el umbral (puntuación mínima) a partir del cual podríamos prever que la vacuna otorgaría protección o protección parcial.

En la Tabla 1 se detallan las cepas usadas para marcar el umbral, así como su nivel de protección, tanto real (estudios experimentales) como estimada (puntuación EpiCC).

DEMUESTRA LA UTILIDAD DE ESTA HERRAMIENTA

¹Anticuerpos neutralizantes frente a la cepa de desafío.

²La vacuna se considera protectora si reduce la neumonía a nivel macroscópico, así como el título viral en los hisopos nasales y/o en los pulmones recogidos en la necropsia. Si la vacuna reduce significativamente el título viral, pero no las lesiones pulmonares, se considera como parcialmente protectora.

TABLA 1

Estudios de desafío en animales vacunados con una vacuna comercial Tabla extraída de Gutiérrez y colaboradores (2017).

BIBLIOGRAFÍA

Disponible en https://www.grupoasis. com/suis/bibliografias/SU177EpiCC.pdf

FIGURA 1

Definición del umbral para predecir la eficacia de la vacuna. La línea azul marca la puntuación obtenida mediante EpiCC entre la vacuna (H1γ FS) y cada cepa. Los umbrales de protección y protección parcial se definen en tres áreas: Blanco (protección), Gris claro (protección parcial) y Gris oscuro (sin protección). (P) indica las cepas frente a las cuales hubo protección y (PP) protección parcial, según los estudios experimentales. El resto de cepas no han sido testadas in vivo Gráfico extraído de Gutiérrez y colaboradores(2017).

A FUNDAMENTOS DEL USO RACIONAL DE ANTIMICROBIANOS EN LA PRODUCCIÓN GANADERA

D

Luis A. Olivos-Oré, Manuel I. San Andrés y J. Julio De Lucas

Sección Departamental de Farmacología y Toxicología de la Facultad de Veterinaria de la UCM

DDesde que comenzaron a utilizarse los antibióticos allá por los años 30, hasta el día de hoy, se ha modificado notablemente la forma y filosofía de su empleo. Tras una primera fase de enorme esperanza, se abría un nuevo frente para el control e incluso erradicación de las enfermedades infecciosas. Alertados por las resistencias que iban emergiendo, llegó una segunda fase de “euforia” por la explosión en el descubrimiento y comercialización de nuevos y muy eficaces antibióticos, aparentemente capaces de enmendarlas.

De hecho, en 1969 el “US Surgeon General” declaró en el Congreso Americano que “era el momento de cerrar el libro de las enfermedades infecciosas” (All experts agree that by the year 2000, viral and bacterial diseases will be eliminated”. Time February 1966).

Desde hace unos años esa euforia se ha topado con la cruda realidad: un “vacío” en el descubrimiento de nuevos antibióticos desde 1990 y el crecimiento exponencial de resistencias.

¿CÓMO HA SIDO POSIBLE SALTAR DE TENER LA SOLUCIÓN A AMPLIFICAR EL PROBLEMA?

Son muchas las causas que nos han conducido hasta aquí, como el hecho de no haber sabido asimilar y concienciarnos de una serie de evidencias observadas en las primeras etapas:

La actividad de la penicilina a concentraciones subinhibitorias (Gardner, 1940).

El efecto post-antibiótico (EPA) de la penicilina sobre el Staphylococcus aureus (Eagle y Musselman,1949).

El efecto paradójico de los betalactámicos (efecto Eagle) que recibe el nombre de su descubridor (Eagle, 1950).

La importante contribución del hospedador en la respuesta terapéutica antimicrobiana.

Por supuesto, el primer aviso sobre el problema de las resistencias fue expuesto por Fleming (1945) que señaló que “con el tiempo puede darse el caso de que la penicilina pueda comprarse en cualquier tienda. Entonces existirá el peligro de que gente ignorante se subdosifique a sí mismo y exponga a los microbios a dosis no letales del fármaco, volviéndoles resistentes…”.

El problema de las resistencias no es exclusivo de los antiinfecciosos, ya que otros fármacos como los antiparasitarios, los antitumorales y los antivíricos, también pueden presentarlas.

EL RETO DE LAS RESISTENCIAS ANTIMICROBIANAS

La resistencia bacteriana a los antimicrobianos es un proceso natural e inevitable, pero la presión selectiva ejercida por causas iatrogénicas relacionadas con el régimen terapéutico favorece su amplificación y su potencial transmisión a otras especies, incluida la humana, lo que supone un riesgo real para la salud pública.

El uso individual inadecuado de los antimicrobianos, a pesar de los avisos y recomendaciones de organizaciones internacionales -OIE, OMS, EMA, FAO, etc.-, nos lleva hacia una grave crisis sanitaria a nivel mundial que debe abordarse desde el concepto "ONE HEALTH".

En este sentido, la Unión Europea, a través del Reglamento 2019/6 del Parlamento Europeo y del Consejo, pone de manifiesto una serie de evidencias:

La complejidad del problema, su dimensión transfronteriza y la elevada carga económica. Su impacto va más allá de sus graves consecuencias para la salud humana y la sanidad animal y se ha convertido en un problema de salud pública mundial.

La necesidad de reforzar la utilización prudente de los antimicrobianos, evitando su uso profiláctico y metafiláctico rutinario, e implementar acciones destinadas a limitar su uso en los animales para poder prevenir o tratar infecciones humanas potencialmente mortales.

La importancia de fomentar e incentivar el desarrollo de nuevos antimicrobianos, implementando prácticas ganaderas que incluyan una buena higiene, alimentación, manejo y bioseguridad.

LEER Reglamento 2019/6 del Parlamento Europeo y del Consejo

LA APARICIÓN DE RESISTENCIAS EN BACTERIAS PATÓGENAS SE VE POTENCIADA POR UN USO INCORRECTO, INNECESARIO Y DESPROPORCIONADO DE LOS ANTIMICROBIANOS DISPONIBLES

Es necesario promover la práctica de una antibioterapia óptima, tal y como lo define el Center for Disease Control and Prevention (CDC):

“Aquella práctica que maximiza el impacto terapéutico a la vez que minimiza la toxicidad y el desarrollo de resistencias. El uso inadecuado de antibióticos tiene consecuencias importantes: aumenta el coste, la toxicidad y las resistencias microbianas”.

Por su parte, la OMS advierte de que "si no se toman medidas urgentes, el mundo está abocado a una era post-antibióticos en la que muchas infecciones comunes y lesiones menores volverán a ser potencialmente mortales".

UN FRENTE COMÚN EN LA LUCHA CONTRA LAS RESISTENCIAS ANTIMICROBIANAS

Para evitar el incremento de resistencias, se han publicado numerosas recomendaciones y se han llevado a cabo importantes iniciativas.

El Sistema Mundial de Vigilancia de la Resistencia a los Antimicrobianos (GLASS; Global Antimicrobial Resistance Surveillance System) fue lanzado por la OMS en 2015 ante la necesidad de disponer de una estrategia normalizada de recopilación, análisis e intercambio de datos sobre la resistencia a los antimicrobianos.

La OMS cuenta con una lista de patógenos prioritarios resistentes a los antibióticos y establece una serie de antibióticos de importancia crítica para los seres humanos.

LEER Lista OMS de Antimicrobianos de Importancia Crítica para la Medicina Humana

La OIE propuso identificar los antimicrobianos de importancia crítica para la Medicina Veterinaria.

La EMA diferencia una serie de categorías para el uso de antimicrobianos en Medicina Veterinaria, pudiendo ser necesario restringir o prohibir su utilización.

A nivel europeo, el Informe JIACRA, parte del sistema de vigilancia de consumo de antibióticos veterinarios, está basado en el sistema de análisis de consumo del ESVAC (European Surveillance of Veterinary Antimicrobial Consumption) y está bajo la coordinación de la EMA

LEER Lista de agentes antimicrobianos importantes para la medicina veterinaria

LEER sobre Líneas de acción y Vigilancia de antibióticos críticos

LEER INFORME JIACRA

El Informe JIACRA pone de manifiesto la correlación que existe entre el uso de antimicrobianos en los animales y el desarrollo de resistencias, tanto en animales como en personas (Figura 1)

Una disminución en el consumo de antimicrobianos tendrá una importante repercusión en la reducción de resistencias en el mismo conjunto poblacional, animales o personas. Además, la limitación del uso de antibióticos en Medicina Veterinaria tendrá efectos beneficiosos sobre las resistencias en bacterias aisladas de personas.

FIGURA 1

Correlación entre el consumo de los diferentes antibióticos en animales y el nivel de resistencia del conjunto de especies bacterianas aisladas en animales (A) y personas (B) (JIACRA ESPAÑA 2018).

PCU: Population Correction Unit (Unidades Corregidas de Población).

En España, el PRAN (Plan Nacional Resistencia Antibióticos) desarrolló un plan estratégico y de acción para reducir el riesgo y diseminación de resistencias a los antibióticos, con especial atención a aquellos de importancia crítica en medicina humana. Propone seis líneas estratégicas bajo el concepto ONE HEALTH:

CONTROL PREVENCIÓN VIGILANCIA

Los puntos más relevantes del plan estratégico del PRAN son:

La recogida de datos de ventas y consumo de antimicrobianos en veterinaria.

Una base nacional de prescripción de antibióticos veterinarios -PRESCRIVET- (en este sentido fue esencial el Real Decreto 191/2018).

Los programas REDUCE (programas para la reducción voluntaria del consumo de determinados antibióticos en diferentes especies). Concretamente, el programa REDUCE COLISTINA para porcino ha sido pionero y ha tenido un gran éxito por la fuerte implicación del sector.

La campaña de concienciación de uso prudente "Nimenos,nimás.¡Túdecides!"incluye un póster específico para el sector porcino y un listado de cuestiones fundamentales a considerar a la hora de prescribir y/o administrar antibióticos.

ÍNDICES DE EFICACIA PK/PD

El éxito de la antibioterapia es multifactorial. El uso prudente y racional de los antimicrobianos implica, además de la reducción de su utilización, usarlos de la forma más eficaz posible.

LEER SOBRE LA CAMPAÑA “NI MENOS NI MÁS. ¡TÚ DECIDES!”

Se han desarrollado diferentes índices de eficacia (índices farmacocinéticos-farmacodinámicos -PK/PD-) que se basan en el conocimiento preciso de la farmacocinética del antimicrobiano, su farmacodinamia y la relación entre ellas, así como las características ecológicas de la bacteria sensible al mismo.

Esto permite optimizar el régimen posológico de los antibióticos para prevenir la amplificación de las resistencias y prolongar su vida útil, con los mejores resultados clínicos y los mínimos efectos adversos.

EL ÉXITO DE LA ANTIBIOTERAPIA ES MULTIFACTORIAL, SIENDO IMPORTANTE TENER EN CUENTA LAS CARACTERÍSTICAS FARMACOCINÉTICAS Y FARMACODINÁMICAS DEL ANTIMICROBIANO Y LAS CARACTERÍSTICAS BIOLÓGICAS DE LA BACTERIA

LEER RD 191/2018

COMUNICACIÓN INVESTIGACIÓN FORMACIÓN

PARÁMETROS FARMACOCINÉTICOS

PARÁMETROS FARMACOCINÉTICOS

Para conseguir estos índices de eficacia, la farmacocinética (PK) aporta datos sobre la evolución temporal de las concentraciones del antimicrobiano en el organismo mediante una serie de parámetros:

Concentraciones máximas y mínimas (Cmax y Cmin)

Volumen de distribución (Vd)

Semivida de eliminación (t1/2 λ)

Aclaramiento (Cl)

Área bajo la curva (AUC)

PARÁMETROS FARMACODINÁMICOS

PARÁMETROS FARMACODINÁMICOS

La farmacodinamia (PD) aporta información sobre cómo y dónde actúa el antimicrobiano, es decir, permite determinar sus acciones y efectos.

En el caso de los antimicrobianos, los principales parámetros empleados son la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) y la Concentración Bactericida Mínima (CBM), que nos indican la sensibilidad del microorganismo a un antibiótico determinado.

FACTORES DETERMINANTES

FACTORES DETERMINANTES

DE LA EFICACIA DE LOS ANTIMICROBIANOS

DE LA EFICACIA DE LOS ANTIMICROBIANOS

Se debe tener en cuenta que las concentraciones de los antimicrobianos en plasma y tejidos fluctúan en función del tiempo y la carga bacteriana en el hospedador no es constante. Esto implica un escenario in vivo dinámico, distinto a lo que acontece in vitro.

El éxito terapéutico de un antimicrobiano depende de su concentración en el punto de acción , así como del tiempo de contacto con el microorganismo. Es decir, la eficacia del antimicrobiano dependerá del tiempo de exposición de las bacterias a las diferentes concentraciones (suprainhibitorias >CIM, o subinhibitorias <CIM) y, por ende, el intervalo entre exposiciones (intervalo entre dosis). También debemos considerar factores como el efecto post-antibiótico o el mecanismo de acción del fármaco.

FIGURA 2

Relación entre los parámetros farmacocinéticos y farmacodinámicos que determinan los índices PK/PD.

BACTERICIDAS CON ACTIVIDAD CONCENTRACIÓN DEPENDIENTE

Los aminoglucósidos, las fluoroquinolonas y el metronidazol son antibióticos bactericidas con actividad concentración dependiente, lo que significa que su actividad antibacteriana (velocidad con la que disminuye el número de bacterias viables) se incrementa en función de la concentración alcanzada en el sitio de acción. Estos antibióticos:

Consiguen una rápida reducción de la carga bacteriana Tienen un efecto post-antibiótico prolongado.

Tienen unos esquemas terapéuticos que requieren utilizar dosis que permitan alcanzar un pico de concentraciones plasmáticas elevados e intervalos de dosificación amplios (una dosis diaria e incluso cada 48-72 h).

Los parámetros PK/PD relacionados con su eficacia son Cmax/CIM y/o el AUC/CIM (Figura 2 y Tabla 1).

BACTERICIDAS CON ACTIVIDAD TIEMPO DEPENDIENTE

Los betalactámicos son, en general, bactericidas con actividad tiempo dependiente, es decir, su actividad está relacionada con el tiempo de exposición de las bacterias al antibiótico.

La velocidad con la que logran reducir la población bacteriana es lenta. Su efecto post-antibiótico es muy reducido.

Su esquema terapéutico requiere dosis que permitan mantener las concentraciones plasmáticas o tisulares por encima de las CIM, precisando de intervalos de dosificación más cortos (cada 8-12 h), en función de su semivida de eliminación (t1/2 λ) (a menor semivida, menor intervalo de dosificación).

El parámetro PK/PD relacionado con su eficacia es T>CIM (el tiempo durante el cual las concentraciones permanecen por encima de la CIM; (Figura 2 y Tabla 1).

ANTIBIÓTICOS BACTERIOSTÁTICOS

Los fármacos bacteriostáticos (fenicoles, macrólidos, tetraciclinas, lincosamidas, etc.) han sido considerados clásicamente de actividad tiempo dependiente. Sin embargo, este enfoque se ha ido modificando, ya que muchos de ellos presentan un efecto post-antibiótico marcado y su actividad depende más de la magnitud de su AUC que del tiempo que están por encima de la CIM (T>CIM).

TABLA 1

Clasificación de los ATM según su modo de acción, los índices PK/PD empleados para evaluar su actividad antimicrobiana y los correspondientes criterios de eficacia. En el caso de grupos de antibióticos con diferentes índices PK/PD, se indica en negrita el índice PK/PD de elección.

ESQUEMA TERAPÉUTICO

Dosi cación a intervalos amplios y buscando alcanzar concentraciones plasmáticas elevadas

PARÁMETROS

PK/PD

Cmax/CIM

AUC/CIM

BACTERICIDAS CONCENTRACIÓN DEPENDIENTES

REDUCCIÓN CARGA BACTERIANA

Rápida

EFECTO POST-ANTIBIÓTICO

Prolongado

PARÁMETROS

PK/PD

T>CIM

AUC/CIM

ESQUEMA TERAPÉUTICO

Dosi cación a intervalos cortos buscando mantener concentraciones >CIM

PARÁMETROS

PK/PD

T>CIM

BACTERIOSTÁTICOS

BACTERICIDAS TIEMPO DEPENDIENTES

REDUCCIÓN CARGA BACTERIANA

Lenta

EFECTO POST-ANTIBIÓTICO

Reducido

EFECTO POST-ANTIBIÓTICO

Variable (marcado en algunos casos)

MODELOS PARA MEJORAR LOS ÍNDICES PK/PD

Para minimizar las limitaciones que conllevan los estudios de PK/PD (número de animales utilizados, variabilidad inter e intraindividual, grupos etarios, variaciones fisiopatológicas, etc.), se están utilizando diferentes modelos o técnicas que ayudan a solventar estos problemas.

Uno de estos modelos es la simulación de Montecarlo que permite “agrandar” el tamaño de una muestra, permitiendo “conocer” todos los resultados posibles de las decisiones que tomamos y evaluar el impacto del riesgo, lo que nos permite tomar mejores decisiones en condiciones de incertidumbre.

SENSIBILIDAD DEL MICROORGANISMO CONOCIDO

Con la simulación de Montecarlo se puede calcular la probabilidad de conseguir un determinado índice de eficacia (AUC/CIM, o T>CIM) a partir de un régimen terapéutico. Este valor de probabilidad se conoce como probabilidad de alcanzar el objetivo (Probability of Target Attainment , PTA).

Los valores de PTA > 90% se consideran indicativos de eficacia.

El punto de corte PK/PD (breakpoints) es el valor de CIM que permite alcanzar un valor de PTA>90% , con un determinado régimen de dosificación. De este modo, se pueden considerar tratamientos con elevada probabilidad de éxito.

SENSIBILIDAD DEL MICROORGANISMO DESCONOCIDO

Para el tratamiento empírico, cuando no se conoce la sensibilidad del microorganismo responsable de la infección, la simulación de Montecarlo también permite calcular la fracción de respuesta acumulada (Cumulative Fraction of Response, CFR) a partir de la distribución de valores de CIM de un determinado agente etiológico. Este parámetro (CFR) también se asocia con la probabilidad de éxito del tratamiento antimicrobiano.

SIMULACIÓN DE MONTECARLO SIMULACIÓN DE MONTECARLO

Otro modelo que permite optimizar los cálculos de PK/PD consiste en el uso de programas tipo NONMEM (Nonlinear Mixed-Effects Modelling), que presenta un enfoque alternativo para realizar análisis farmacocinéticos.

LA PRINCIPAL VENTAJA DE ESTE TIPO DE ANÁLISIS ES QUE INCLUYE UNA ESTIMACIÓN PRECISA DE LA VARIABILIDAD INTERINDIVIDUAL , GRACIAS A LA APLICACIÓN DE MODELOS ESTOCÁSTICOS QUE DETERMINAN DICHA VARIABILIDAD Y EL EFECTO DE DIFERENTES COVARIABLES (EDAD, RAZA, ESTADO FISIOLÓGICO O PATOLÓGICO, CONDICIONES DE EXPLOTACIÓN, ETC.) SOBRE LA VARIABILIDAD DEL PARÁMETRO DE POBLACIÓN.

Estos modelos permiten realizar simulaciones de diferentes escenarios, por ejemplo, con diferentes regímenes de dosis en diferentes subpoblaciones de individuos con diferentes valores de covariables. Este planteamiento permite utilizar “in silico” una gran cantidad de individuos, lo que sería muy difícil de llevar a cabo mediante estudios experimentales (por coste, trabajo y problemas éticos por la inclusión de un gran número de individuos).

Combinado con los valores de farmacodinamia, se pueden obtener valoraciones de los índices de eficacia más ajustados a diferentes subpoblaciones, algo que de otro modo sería muy difícil de conseguir.

Como herramienta al servicio clínico, facilita la optimización del régimen de dosificación de un fármaco en aquellos casos en los que se observe una reducción de la eficacia antimicrobiana (p.ej. en infecciones multirresistentes, en pacientes críticos o en pacientes con condiciones fisiológicas/ patológicas especiales).

LA SIMULACIÓN DE MONTECARLO PERMITE AGRANDAR EL TAMAÑO MUESTRAL, MIENTRAS QUE LOS PROGRAMAS TIPO NONMEM PERMITEN UNA ESTIMACIÓN PRECISA DE LA VARIABILIDAD INTERINDIVIDUAL

PREVENCIÓN DE RESISTENCIAS - VENTANAS DE SELECCIÓN DE MUTANTES

Recientemente, se ha incorporado un nuevo concepto para prevenir la emergencia de resistencias. Es sabido que las concentraciones por debajo de las CIM (subCIM) no seleccionan cepas mutantes, pero sí inducen su aparición. Igualmente, cuando las concentraciones plasmáticas están por encima de esas CIM o de las CBM, se controla la población sensible, pero no las cepas más resistentes y éstas, al no contar con competencia, amplían su población.

Para evitar este fenómeno, se debe elevar la concentración plasmática/ tisular del antimicrobiano hasta que la subpoblación resistente se vea afectada por esas concentraciones.

Es lo que se denomina Concentración Preventiva de Mutantes (CPM) y se define como “la concentración que restringe la amplificación de mutantes resistentes de primer paso dentro de una población sensible” porque, por encima de esta concentración, solo se espera que se produzca el crecimiento bacteriano si se dan dos o más mutaciones concomitantes.

Como se ha mencionado anteriormente, algunos estudios indican que el índice AUC/CPM puede ser útil para prevenir la aparición de subpoblaciones resistentes. El problema radica en lo que sucede entre las CIM y las CPM.

Ese intervalo de concentraciones a lo largo del tiempo es lo que se denomina ventana de selección de mutantes (VSM) (Figura 3) y es el momento en el que existe mayor probabilidad de incremento del número de cepas resistentes. Por tanto, conviene que este intervalo sea lo más estrecho posible (valores de CIM y CPM más próximos) y con la mínima duración.

FIGURA 3

Esquema de la ventana de selección de mutantes (VSM) y la selección de subpoblaciones o cepas resistentes.

CPM: Concentración Preventiva Mínima

VSM: Ventana de Selección de Mutantes

Para minimizar el intervalo y la permanencia en la VSM, se requieren regímenes de dosis que permitan alcanzar pronto las CPM y que se mantengan un tiempo determinado, permitiendo así erradicar las subpoblaciones con menor sensibilidad.

Por ejemplo, para fluoroquinolonas el tiempo sobre la CPM debe ser del 80% del intervalo de dosis, es decir < 20% dentro de la VSM.

Estas concentraciones pueden conllevar un cierto grado de toxicidad, según el antimicrobiano. Por ello, a veces, en casos específicos, puede ser necesaria la instauración metafiláctica del tratamiento, a fin de partir de una menor carga microbiana y de reducir la posible presencia de cepas mutantes resistentes, así como la combinación de varios antimicrobianos que permitan reducir la VSM.

ES IMPORTANTE RECORDAR QUE EL USO METAFILÁCTICO DE LOS ANTIMICROBIANOS SE DEBE LIMITAR A SITUACIONES MUY CONCRETAS, DEBIENDO ESTAR BASADO EN UNA VALORACIÓN DE RIESGO DEL GRUPO Y ESTUDIOS ESPECÍFICOS DEL AGENTE CAUSAL Y SU SUSCEPTIBILIDAD AL ANTIMICROBIANO

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TÉCNICAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA: ALIADAS DEL VETERINARIO PARA FRENAR LAS RESISTENCIAS A LOS ANTIBIÓTICOS

A

LLLos antibióticos se utilizan para el tratamiento de infecciones bacterianas, tanto en humanos como en animales. En veterinaria juegan un papel fundamental para preservar el bienestar animal y la bioseguridad alimentaria.

Actualmente, el desarrollo de resistencias frente a este tipo de fármacos es uno de los mayores problemas de salud pública. Desde hace diez años, esta situación, unida a la carencia de desarrollo de nuevos antibióticos, ha requerido la implementación de medidas desde las instituciones sanitarias nacionales e internacionales para promover un uso racional de los antibióticos.

En España, contamos con el Plan Nacional frente a Resistencia a los Antibióticos (PRAN), aprobado en 2014, y que se sigue renovando con nuevos retos. Uno de sus objetivos es controlar el uso de antibióticos en veterinaria y combatir la resistencia a los antibióticos para preservar su eficacia, tanto en animales como en humanos.

LA REALIZACIÓN DE UN ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA EN CADA

Este tipo de ensayos, también denominados antibiogramas, consisten en testar la susceptibilidad antibiótica in vitro con el propósito de correlacionar estos resultados con la eficacia clínica. Para ello, existen distintas técnicas:

Técnica de Kirby-Bauer o método con discos en difusión en agar

Técnicas para determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI):

Método de macrodilución

Método de microdilución

Tiras de celulosa, también denominadas E-test

Silvia del Caso, Gema Chacón, Lara Domínguez y Ángela

PradillaExopol S.L.

PUNTOS CLAVE EN LA REALIZACIÓN DE PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA

TOMA DE MUESTRAS Y ENVÍO AL LABORATORIO

TOMA DE MUESTRAS Y ENVÍO AL LABORATORIO

Uno de los pasos más importantes a la hora de realizar pruebas de sensibilidad antibiótica es la toma de muestras y su envío al laboratorio. Para ello, hay que seleccionar bien a los animales:

Tomar muestras de varios animales con la misma sintomatología.

Tomar muestras de animales que no hayan estado previamente en tratamiento con antibióticos.

Evitar tomar muestras de animales que tengan varios días de evolución o que hayan muerto hace varias horas.

La conservación de las muestras durante el envío es clave para garantizar la viabilidad de las mismas, siendo imprescindible:

Garantizar la refrigeración.

Separar en recipientes herméticos distintos cada órgano.

Asegurarse de que el envío llegue al laboratorio en un periodo máximo de 24 horas.

AISLAMIENTO

AISLAMIENTO

MICROBIOLÓGICO

MICROBIOLÓGICO

Cuando la muestra llega al laboratorio, se siembra en el medio de cultivo apropiado en función del tipo de muestra y la sospecha etiológica. Se cultiva durante 18-24 horas y se procede al aislamiento bacteriano en un cultivo puro y a su identificación para realizar el estudio de sensibilidad antibiótica.

Siembra de la muestra en medio de cultivo

UNA CORRECTA IDENTIFICACIÓN PERMITE

REALIZAR UN BUEN

DIAGNÓSTICO Y APLICAR

LOS PUNTOS DE CORTE APROPIADOS

Identificación para realizar un estudio de sensibilidad antibiótica

Cultivo 18-24h

Aislamiento bacteriano en cultivo

La importancia de un buen diagnóstico

Diagnóstico incorrecto: en un caso de hembras adultas con diarreas, sería un error solicitar úni camente un antibiograma de E. coli sin evaluar otras causas más probables de diarrea en esta edad como, por ejemplo, Brachyspira hyodysenteriae o Lawsonia intracellularis.

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA

A partir del aislamiento, se prepara el inóculo de la bacteria ajustándolo a una concentración estandarizada y se eligen los medios de cultivo apropiados y las condiciones de incubación.

Todos estos aspectos críticos vienen establecidos en protocolos elaborados por organismos oficiales -Clinical & Laboratory Standards Institute (CLSI) y European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST)- y se deben seguir rigurosamente para obtener resultados fiables.

IMAGEN 1

Antibiograma mediante la técnica de Kirby-Bauer. Se pueden observar los halos de inhibición alrededor de los 4 discos superiores y la ausencia en los dos discos inferiores.

Diagnóstico incompleto: en muchas ocasiones, los procesos son multifactoriales y puede que el antibiótico solo sea efectivo frente a uno de los agentes etiológicos, pero no soluciona la clínica por completo si, por ejemplo, también hay una infección vírica. LA

TÉCNICA DE KIRBY-BAUER

CLASIFICACIÓN DE LA BACTERIA EN FUNCIÓN DE SU SENSIBILIDAD ES UN INDICIO DE LA PROBABILIDAD DE ÉXITO TERAPÉUTICO DEL TRATAMIENTO CON EL ANTIBIÓTICO TESTADO,

TÉCNICA DE KIRBY-BAUER

O MÉTODO CON DISCOS EN DIFUSIÓN EN AGAR (ANTIBIOGRAMA)

O MÉTODO CON DISCOS EN DIFUSIÓN EN AGAR (ANTIBIOGRAMA)

La técnica de Kirby-Bauer o método con discos en difusión en agar, también denominado habitualmente como “antibiograma”, es la técnica más común. Consiste en sembrar una placa de agar con el inóculo bacteriano, colocando sobre ella discos impregnados con antibióticos a concentraciones estandarizadas (Imagen 1)

Tras incubar la placa, se forma un halo de inhibición del crecimiento bacteriano alrededor del disco y se procede a medir su diámetro (milímetros). En función de los puntos de corte, se podrá clasificar la bacteria:

Sensible

Sensibilidad intermedia

Resistente

IMAGEN 2

Detección de la CMI mediante el método de microdilución, apreciándose el crecimiento bacteriano como turbidez en el pocillo o con la formación de pellet. La CMI corresponderá con el pocillo con la menor concentración en la que no haya crecimiento bacteriano.

IMAGEN 3

Detección de la CMI mediante tiras de celulosa, observándose la elipse de inhibición con el valor de CMI de 8 µg/mL.

TÉCNICAS PARA DETERMINAR LA CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA

TÉCNICAS PARA DETERMINAR LA CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA

La CMI indica la concentración más baja de antibiótico que inhibe el crecimiento bacteriano. Esta técnica permite conocer, además de la sensibilidad antibiótica de la bacteria, la concentración de antibiótico que debe llegar al órgano diana para que el tratamiento sea efectivo. Si bien, existen distintos métodos, los más frecuentes son el método de microdilución (Imagen 2) y tiras de celulosa (Imagen 3).

Para determinar la CMI se preparan diluciones de menor a mayor concentración y:

Se distribuyen por orden en una placa de pocillos para la técnica de microdilución (Imagen 2)

Se impregnan como un gradiente en una tira de celulosa (Imagen 3).

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DE LAS PRUEBAS DE SENSIBILIDAD

Para valorar la sensibilidad se debe comparar el resultado con los puntos de corte clínicos que vienen determinados en función de:

El antibiótico

La especie animal

La especie bacteriana

El proceso patológico

En la Tabla 1 se muestra un ejemplo de cómo se presentan los resultados en un informe de Kirby-Bauer.

El perfil de sensibilidad de la bacteria frente a los antibióticos aparece en la columna “Resultado”, y se clasifica en base a la interpretación del diámetro de halo con respecto a los puntos de corte. Los antibióticos están categorizados con D, C y B según la clasificación de la Agencia Europea del Medicamento (EMA).

Si el diámetro de halo es mayor o igual al límite superior del rango de referencia se considera sensible.

En la Tabla 2 se pueden ver los resultados de un estudio de CMI. Se muestra el listado de los antibióticos testados con su resultado de CMI y los valores de punto de corte clínico para interpretarlo.

En verde se presentan los antibióticos frente a los que la bacteria aislada es sensible, es decir, los que tienen una CMI menor o igual que el límite inferior del punto de corte.

TABLA 1

Resultados de un informe de Kirby-Bauer: cepa de Escherichia coli aislada a partir de una muestra de heces en un caso de proceso digestivo de porcino.

TABLA 2

Resultados de CMI: cepa de Actinobacillus pleuropneumoniae aislada a partir de una muestra de pulmón de un caso de pleuroneumonía porcina.

¿Por qué el resultado del antibiograma no me funciona en el campo?

Los puntos de corte clínicos siguen siendo una limitación. Aunque cada vez disponemos de más, hay ocasiones en las que hay que utilizar de otra especie o incluso de humanos, produciendo incertidumbre respecto a los resultados.

Los resultados de resistencia antibiótica son más predictivos que los de sensibilidad, si un antibiótico no funciona frente a una bacteria in vitro, lo más probable es que no lo haga in vivo Pero una bacteria puede resultar sensible in vitro y que no tenga el mismo efecto in vivo. Esto puede deberse a diversos factores: las características farmacocinéticas y farmacodinámicas del animal o del medicamento, la correcta dosificación, la respuesta inmune del animal o la presencia de inflamación.

¿CÓMO ELEGIR ENTRE LA TÉCNICA DE KIRBY-BAUER

O LA CMI?

Ambas técnicas son una buena herramienta para el veterinario, aunque hay diferencias entre ellas (Figura 1):

El método de CMI es más preciso y exacto porque permite testar diferentes concentraciones de antibióticos y proporciona el dato de la concentración de antibiótico que debe llegar al órgano diana. Con todo ello, y junto a los datos de farmacocinética y farmacodinámica, permite seleccionar el antibiótico que tiene más probabilidades de éxito.

El método de Kirby-Bauer es más económico y fácil de interpretar, además de ser más versátil, ya que se dispone de más antibióticos para testar que para CMI.

BIBLIOGRAFÍA

CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated From Animals. 4th ed. CLSI supplement VET08. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2018.

The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. Breakpoint tables for interpretation of MICs and zone diameters. Version 11.0, 2021. http://www.eucast.org

Schwarz, Stefan, et al. Antimicrobial Resistance in Bacteria from Livestock and Companion Animals, ASM Press; 2018.

Más preciso y exacto

Aporta más información Más fácil de interpretar

Mayor disponibilidad de antibióticos para testar

Más propabilidades de éxito

FIGURA 1

Ventajas de los métodos de Kirby-Bauer y CMI.

¿ES MOMENTO DE VACUNAR FRENTE A ILEÍTIS PORCINA?

Marcial Marcos, Rut Menjón, Marta Jimenez, Jesús Bollo y Alfredo Romero.

MSD Animal Health

V A

AAnte la pregunta de si es el momento de empezar a vacunar frente a la ileítis porcina, hay que tener en cuenta diversos aspectos que desarrollaremos en este artículo, aunque os adelantamos que nuestra respuesta es SÍ.

DIAGNÓSTICO CONFIRMADO

La primera condición que se debe cumplir para iniciar un programa de vacunación frente a Lawsonia intracellularis en lechones y/o cerdas de reposición en una granja/ pirámide de producción, es tener un diagnóstico positivo.

Existen diversas publicaciones que hacen referencia a la prevalencia de ileítis en las granjas de cerdos de los principales países productores a nivel mundial, coincidiendo todos ellos en que es muy elevada, con más del 90% de las granjas positivas en muchos casos.

GRÁFICA 1

Porcentaje de muestras individuales ELISA (Svanovir) positivas según la edad de muestreo.

Durante los últimos dos años, la unidad de porcino de MSD Animal Health ha realizado un intenso trabajo de diagnóstico, participando en estudios con otros países europeos para conocer cuál es la situación real, sobre todo ahora que el uso de antibióticos ha disminuido significativamente.

Como resultado de este trabajo, se ha demostrado que la prevalencia de Lawsonia intracellularis se mantiene muy elevada.

En granjas con sintomatología clínica digestiva, hasta el 70% de las muestras a nivel individual (Gráfica 1) y el 100% de las granjas (Gráfica 2) fueron positivas a Lawsoniaintracellularispor ELISA , principalmente al final de la fase de engorde.

ANTE LA SOSPECHA DE QUE Lawsonia intracellularis ESTÉ

CAUSANDO UN DETERIORO DE LOS PARÁMETROS

PRODUCTIVOS Y DE LA UNIFORMIDAD DE LOS LOTES DE CERDOS EN CRECIMIENTO, CONFIRMEMOS EL DIAGNÓSTICO APOYÁNDONOS EN LAS TÉCNICAS MÁS APROPIADAS DE ANÁLISIS LABORATORIAL

GRÁFICA 2

Porcentaje de granjas ELISA (Svanovir) positivas según la edad de muestreo. Considerando una granja positiva cuando al menos uno de los sueros analizados por la técnica ELISA es positivo.

Otro aspecto importante para tener en cuenta hoy en día es el alto precio del cerdo, y sobre todo el elevado coste de las materias primas, y, por ende, del pienso. Ante esta situación, hemos de hacer todo lo que esté en nuestra mano para mejorar la salud intestinal , frenando el desarrollo de aquellos patógenos que dificultan la digestión y la absorción de nutrientes, y que repercuten negativamente sobre el crecimiento de los cerdos, haciéndoles menos eficientes.

RENTABILIDAD VACUNACIÓN

Patógenos como Lawsonia intracellularis son ladrones invisibles en los cebaderos, ya que aumentan la mortalidad y el índice de conversión alimenticia, reducen el crecimiento, y generan desigualdad de pesos de los animales al final de la fase de cebo.

Esto último aumenta las penalizaciones por parte del matadero, lo que se suma a las pérdidas por el empeoramiento de los parámetros productivos mencionados.

ESTAMOS ANTE UN CLARO EJEMPLO DE QUE MEJORAR LA SANIDAD CONTRIBUYE A LA MEJORA DE LA PRODUCTIVIDAD Y DE LA

PRESENTE Y FUTURO DE LA LUCHA FRENTE A LA ILEÍTIS PORCINA

Está claro que la ileítis se puede controlar con antibióticos, pero esa no es la solución de futuro, y podemos decir que ya no es la del presente. Cada día se está vacunando más frente a ileítis porcina, con tasas superiores al 50% de los lechones en importantes países productores y exportadores de cerdos, sobre todo del continente americano.

La demanda del mercado es clara, quiere carne de cerdos sanos y con un uso mínimo de antimicrobianos, y aquellos países que sean capaces de cubrir esa necesidad serán líderes en un mercado globalizado como el de la carne de cerdo.

Debemos aprovechar todas las herramientas que tenemos en nuestra mano para conseguir una producción más eficiente y sostenible de carne de cerdo, lo cual nos permitirá alcanzar y mantenernos en los mercados más exigentes a nivel mundial.

RETORNO DE LA INVERSIÓN RETORNO DE LA INVERSIÓN

Teniendo en cuenta todo lo expuesto hasta ahora, nos pondríamos a vacunar inmediatamente. No obstante, vamos a revisar un aspecto más de gran importancia para el sector, el retorno de la inversión

Las vacunas tienen un coste y lo que hemos de valorar y analizar es:

Si con la inversión somos capaces de prevenir el problema sea en su presentación clínica o, la más habitual, subclínica. El obtener.

SON BIEN CONOCIDAS LAS PÉRDIDAS ECONÓMICAS QUE PROVOCA LA ILEÍTIS EN LAS GRANJAS DE CERDOS Y ES EVIDENTE QUE, A TRAVÉS DE UN BUEN CONTROL DE Lawsoniaintracellularis, SE MINIMIZAN LAS PÉRDIDAS Y SE FOMENTA QUE LOS

Son varias las referencias que indican que la mejora en el índice de conversión tras un buen control de ileítis es mayor que esos 50 gramos. A eso habría que sumarle además la mejora en la mortalidad, velocidad de crecimiento y homogeneidad de los lotes de cerdos que van a matadero.

Por ello, cuando valoremos si debemos empezar a vacunar o

¿QUÉ LE PEDIMOS A UNA VACUNA FRENTE A LA

Al igual que ocurre con otras patologías, ileítis porcina es el presente y será el futuro, una vacuna?

En primer lugar, demostradas. Además, hoy en día, no deja de ser tan importante como estos dos aspectos el hecho de que sea versátil y poder ser utilizada junto a otras vacunas que ya estén incluidas en los programas vacunales existentes y que, por otro lado, cada vez incluyen más referencias.

provocadas por Streptococcus suis o Glaesserella parasuis , que también preocupan mucho. SENCILLAS

¿QUÉ TENEMOS DE NUEVO

¿QUÉ TENEMOS DE NUEVO

PARA DAR RESPUESTA A ESTAS NECESIDADES?

PARA DAR RESPUESTA A ESTAS NECESIDADES?

Hasta finales de 2019, en Europa solo se disponía de una vacuna viva oral para administrar en el agua de bebida. Fue entonces cuando comenzó la comercialización en Europa de Porcilis® Lawsonia, primera y única vacuna inyectable para el control de la ileítis porcina, de administración intramuscular en monodosis, que se puede aplicar desde las 3 semanas de edad y que tiene una duración de inmunidad de 21 semanas tras su administración.

Estas características, junto al hecho de ser una vacuna inactivada y que dentro de sus indicaciones incluye la reducción de la excreción, permite plantear un control y prevención de la ileítis eficaz y sencillo, sobre todo si tenemos en cuenta que Porcilis® Lawsonia se puede reconstituir en Porcilis® PCV M Hyo.

De esta forma, con una sola inyección se puede lograr una prevención eficaz frente a tres de los principales patógenos que limitan el crecimiento de los cerdos: Mycoplasma hyopneumoniae, Circovirus porcino Tipo 2 y Lawsonia intracellularis, sin necesidad de modificar ninguna pauta de trabajo y/o tratamiento de la granja.

En 2021 MSD Animal Health ha dado un paso más lanzando al mercado Porcilis® Lawsonia ID, con las mismas especificaciones que Porcilis® Lawsonia y con el añadido de las ventajas de la administración intradérmica:

Respuesta inmunitaria más potente e inmediata

Mejoras en el nivel de bienestar animal

Mejoras en la seguridad de los operarios

Mejoras en la seguridad alimentaria

CONCLUSIONES

Porcilis® Lawsonia ID se puede reconstituir en Porcilis® PCV ID, lo que sin duda facilita el manejo en las granjas, permitiendo proteger frente a la ileítis y la circovirosis porcina con una única dosis de 0,2 ml.

ESTE NUEVO LANZAMIENTO RATIFICA LA APUESTA DE MSD ANIMAL HEALTH POR LA VACUNACIÓN INTRADÉRMICA CON EL DISPOSITIVO IDAL®, QUE ESTE AÑO PRECISAMENTE CUMPLE SU 20 ANIVERSARIO

Es momento de vacunar, SÍ, pero, sobre todo, es momento de mejorar la productividad en nuestras granjas de una manera eficiente y sencilla.

Para ello, también debemos seguir trabajando en mejorar las instalaciones, el manejo y la bioseguridad, perfeccionando los planes de vacunación y trabajando hacia una reducción del uso de antimicrobianos para mejorar la salud y el bienestar animal, así como la seguridad alimentaria.

BIBLIOGRAFÍA

Bibliografía en poder de los autores.

PRIMERA IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE ROTAVIRUS H EN CERDOS EN EUROPA

Los rotavirus (RV) se clasifican en nueve especies o grupos (RVA-RVD y RVF-RVJ). Los RVA, RVB y RVC están bien reconocidos como agentes etiológicos de enfermedades entéricas en las explotaciones porcinas y han sido identificados en todos los países con una producción porcina relevante. Por su parte, los RVH sólo se han identificado en explotaciones porcinas de Japón y, más recientemente, de Brasil, EE.UU., Sudáfrica y Vietnam, pero todavía no en Europa. En nuestro estudio se investigó la presencia de RVH en 103 explotaciones porcinas españolas. Nueve explotaciones resultaron positivas y se obtuvo la secuencia nucleotídica completa en tres aislados y parcial en otro.

Las identidades de estas secuencias con respecto a las secuencias de RVH disponibles en la base de datos GenBank oscilaron entre el 69,4 % y el 93,7 %. Desde el punto de vista filogenético, todos los segmentos genómicos de los aislados españoles de RVH se agruparon estrechamente con otras cepas de RVH porcino, siendo mucho más lejana su relación con los RVH humanos y con la cepa de RVH de murciélago. Se trata de la primera descripción de RVH en granjas porcinas en Europa e incluye su caracterización mediante la secuenciación completa del genoma.

Héctor Puente1, Martí Cortey2, Ana Carvajal1, Margarita Martín2,3, Oscar Mencía-Ares1, Manuel Gómez-García1, Lucía Pérez-Pérez1, Pedro Rubio1, Iván Díaz3, Héctor Argüello1.

1Departamento de Sanidad Animal, Universidad de León, España.

2Departament de Sanitat i Anatomia Animals, Universitat Autònoma de Barcelona, España.

3Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA-IRTA), Universitat Autònoma de Barcelona, España.

E-mail: hpuef@gmail.es

ROTAVIRUS ROTAVIRUS PORCINOS ROTAVIRUS H

Los rotavirus (RV) son miembros de la familia Reoviridae y uno de los principales agentes causantes de gastroenteritis en humanos y animales en todo el mundo.

Su genoma consta de 11 segmentos de ARN de doble cadena que codifican seis proteínas estructurales (VP1-4, VP6 y VP7) y cinco proteínas no estructurales (NSP1-5) (Estes & Kapikian, 2007).

Según el Comité Internacional de Taxonomía de Virus, el género Rotavirus se divide en nueve grupos o especies antigénicamente distintas (RVA, RVB, RVC, RVD, RVF, RVG, RVH, RVI y RVJ) en función de la diversidad de la secuencia del gen que codifica la proteína de la cápside intermedia (VP6) (Matthijnssens et al., 2012; Mihalov-Kovács et al., 2015).

ROTAVIRUS PORCINOS ROTAVIRUS H

Las infecciones por RV son muy prevalentes en las explotaciones porcinas, frecuentemente ligadas a diarreas en lactación y post-destete, causando importantes pérdidas económicas para la industria porcina.

Los principales grupos de RV asociados a brotes de diarrea en el ganado porcino son RVA, RVB y RVC.

Los RVA generalmente afectan a lechones de tres y cinco semanas de edad.

Los RVC son mucho más comunes en neonatos (<7 días de edad).

La detección de los RVB aumenta con la edad del animal, siendo más común identificarlos en diarreas de transición y cebo.

En cualquier caso, se ha comprobado que los tipos más prevalentes varían en función de la localización geográfica y también a lo largo del tiempo para una misma localización (Vlasova, Amimo, & Saif, 2017 ).

En 1997, se describió en China un nuevo RV humano, denominado inicialmente como nuevo rotavirus de la diarrea del adulto, que no pertenecía a ningún grupo previamente establecido y que causó un brote de gastroenteritis entre adultos (Alam et al., 2007; Yang et al., 2004 ). Posteriormente, se identificó este nuevo rotavirus como RVH en base a la secuencia del gen que codifica para la proteína VP6 (Matthijnssens et al., 2012).

En total, entre 1997 y 2002 se identificaron tres cepas humanas de RVH en Asia (ADRV-N y J19 en China y B219 en Bangladesh), así como una cepa porcina de RVH en Japón (SKA-1) (Jiang et al., 2008; Nagashima et al., 2008). Desde entonces, se han identificado RVH en cerdos de Japón (Suzuki & Inoue, 2018; Wakuda et al., 2011 ), EE.UU. (Marthaler et al., 2014 ), Brasil (Molinari, Lorenzetti, Otonel, Alfieri, & Alfieri, 2014 ), Sudáfrica (Nyaga et al., 2016 ) y Vietnam (Phan et al., 2016 ).

11

6

9 grupos ARN de doble cadena

Aunque estos RVH se han detectado en las heces de cerdos con diarrea, las coinfecciones con otros patógenos son muy comunes y no se ha podido establecer de forma clara su papel en la etiología de la enfermedad entérica (Shepherd, Freeman, Culhane, & Marthaler, 2019). Más recientemente, se ha descrito la presencia de RVH en murciélagos de Camerún (Yinda et al., 2018).

antigénicamente distintos: R INVESTIGACIÓN 83

MATERIALES Y MÉTODOS RMUESTREO MUESTREO

El estudio se llevó a cabo entre 2017-2019 en 103 explotaciones comerciales porcinas españolas ubicadas en la mitad norte del país (22 provincias) con brotes de diarrea en los que se sospechaba una etiología viral

Los brotes afectaron a lechones lactantes (<21 días) (26 granjas), etapa post-destete y transición (21-70 días) (11 granjas) o cerdos de engorde (>70 días) (33 granjas) y de cada uno de ellos, se enviaron entre 2 y 6 muestras de heces con fines diagnósticos al Departamento de Sanidad Animal de la Universidad de León (Tabla 1). La edad de los animales afectados no se conocía en 33 granjas.

Y DETECCIÓN DE ARN DE RVH

EXTRACCIÓN Y DETECCIÓN DE ARN DE RVH

Para cada explotación, las muestras recibidas fueron mezcladas en una única muestra que se empleó para la extracción del ARN total utilizando un kit comercial (QIAamp Viral RNA Mini Kit, Qiagen) y siguiendo las instrucciones del fabricante.

A continuación, se realizó una PCR con transcripción inversa (RT-PCR) utilizando un par de cebadores de nuevo diseño basados en las secuencias del gen VP6 de las cepas de RVH porcinas disponibles en GenBank (Tabla 2), y que amplifican un fragmento de 1.240 nt.

Las reacciones de RT-PCR se llevaron a cabo con el kit Verso 1-Step RT-PCR ReddyMix (Thermo Scientific), siguiendo las recomendaciones del fabricante, con las siguientes condiciones:

1. Paso inicial: 50ºC durante 30 min y 95ºC durante 2 min.

2. Paso intermedio: 45 ciclos de 95ºC durante 20 s, 50ºC durante 30 s y 72ºC durante 1 min.

3. Paso final de extensión: 72ºC durante 10 min.

TABLA 1

Distribución de las granjas incluidas en el estudio en función de su ubicación (provincia).

Provincia Nº de granjas

Orense 42

Valladolid 11

Castellón 10

Teruel 5

Zaragoza 5

Burgos 4

Lérida 3

Pontevedra 3

Segovia 3 A

2

Lugo 2

Navarra 2

Palencia 2

Salamanca 2

Badajoz 1

Ciudad Real 1

Gerona 1

Huesca 1

León 1

Madrid 1

Toledo 1

TABLA 2

Cebadores empleados para la detección del RVH porcino en muestras de heces mediante RT-PCR. La posición de los nucleótidos que se indica está basada en el gen completo VP6 de las cepas RVH SKA-1 (AB576626), MRC-DPRU1575 (KT962031), MN.9.65 (KU254587) y OK.5.68 (MH230121).

Cebador Secuencia (5’ →3’)

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Posición nucleotídica

RVH-VP6-F GTGACCCACAAGGATGGATCTCAT 19-42

RVH-VP6-R GAACACTGGATCCCAGTGCGTGAC 1234-1257

SECUENCIACIÓN DE MUESTRAS

SECUENCIACIÓN DE MUESTRAS

POSITIVAS A RVH

POSITIVAS A RVH

Para cada muestra identificada como positiva por RT-PCR a RVH, se llevó a cabo una nueva extracción del ARN total, utilizando en este caso TRIzol LS (Thermo Scientific). El ARN obtenido fue secuenciado directamente, sin necesidad de amplificación previa, en el Servicio de Bioinformática y Genómica (SGB) de la Universidad Autónoma de Barcelona (UAB).

La secuenciación de nueva generación (NGS) se llevó a cabo utilizando una plataforma Illumina Miseq y las secuencias de RVH se obtuvieron a partir de los resultados de la NGS aplicando el protocolo desarrollado por Cortey et al. (2019).

ANÁLISIS FILOGENÉTICO

ANÁLISIS FILOGENÉTICO

Cada segmento identificado fue confirmado mediante análisis BLAST de las secuencias ensambladas.

Acceder a BLAST

Las secuencias se alinearon utilizando CLUSTALW y las relaciones evolutivas entre las secuencias se examinaron mediante un análisis filogenético utilizando el método de máxima verosimilitud y el modelo de sustitución Tamura-Nei con el software MEGAX (Kumar, Stecher, Li, Knyaz, & Tamura, 2018)

Las secuencias obtenidas en este trabajo están depositadas en GenBank con los números de acceso MT644949-MT644992

Acceder a la secuencia del gen VP3 de RVH en Genbank

MT644992

PREVALENCIA DE RVH

PREVALENCIA DE RVH

Se detectó RVH en nueve de las 103 explotaciones muestreadas (8,7 %), la mayoría de ellas con brote de diarrea en cerdos de engorde (6 muestras positivas de 33) o cerdos de transición (2 muestras positivas de 11). Sólo se detectó una muestra positiva en brotes de diarrea en lechones lactantes (1 de 26) (Tabla 3).

Este resultado concuerda con lo descrito en explotaciones porcinas de EE.UU. (15 % de muestras positivas), donde el riesgo de ser positivo a RVH, estimado por la Odds ratio, fue 5,9 mayor en los cerdos de más de 55 días en comparación con los lechones de entre 4 y 20 días (Marthaler et al., 2014)

En nuestra investigación, a pesar de las diferencias observadas, la proporción de brotes con detección positiva de RVH no difirió significativamente entre los grupos de edad cuando se comparó utilizando la prueba exacta de Fisher (p=0,139).

La eliminación de los anticuerpos maternos junto con la mezcla de lechones tras el destete puede explicar un mayor porcentaje de brotes positivos (18 %, 8 de 44) en cerdos postdestete (>21 días de edad) en comparación con los lechones lactantes (4%, 1 de 26).

EL RIESGO DE POSITIVIDAD A RVH ES MAYOR EN CERDOS TRANSICIÓN Y CEBO EN COMPARACIÓN CON LECHONES LACTANTES, LO

QUE PODRÍA ATRIBUIRSE A LA DISMINUCIÓN DE LA INMUNIDAD

MATERNAL Y LA MEZCLA DE ANIMALES TRAS EL DESTETE

RVH se detectó como coinfección con otros RV (A, B o C) en cinco brotes (55,5 %) y con el virus de la diarrea epidémica porcina (PEDV) en cuatro explotaciones (44,4 %) (Tabla 3)

Tan solo en dos de los brotes estudiados, ambos en cerdos de engorde, RVH fue el único agente etiológico viral identificado. No obstante, dado que no se investigó la presencia de agentes bacterianos causantes de diarrea como Brachyspira spp, Lawsonia intracellularis o Salmonella spp., no fue posible establecer la etiología definitiva en estas dos explotaciones.

TABLA 3

Principales características de los brotes en los que se identificó la presencia de RVH: localización, edad de los animales afectados, fecha de muestreo, resultado de secuenciación y otros patógenos víricos entéricos detectados (RVA, RVB, RVC, virus de la diarrea epidémica porcina, VDEP, y virus de la gastroenteritis transmisible, VGET). ID

ANÁLISIS FILOGENÉTICO DE RVH

ANÁLISIS FILOGENÉTICO DE RVH

Se intentó llevar a cabo la secuenciación del genoma completo en todas las muestras positivas, obteniéndose el genoma completo (11 segmentos) en tres de ellas (SP-VC18, SP-VC29 y SP-VC36). En otra cepa (SP-VC19) se obtuvo la secuencia completa de los segmentos VP4, VP6, VP1, NSP1, NSP2, NSP4 y NSP5, mientras que fue parcial para VP7, VP2, VP3 y NSP3.

IDENTIDAD NUCLEOTÍDICA ENTRE LAS MUESTRAS POSITIVAS

La identidad nucleotídica entre las secuencias fue del:

82 %-100 % para VP7

83,2 %-100 % para VP4

86,1 %-100 % para VP6

87 %-100 % para VP1

84,4 %-100 % para VP2

81,6 %-100 % para VP3

84 %-100 % para NSP1

91 %-100 % para NSP2

83,5 %-100 % para NSP3

81,5 %-100 % para NSP4

92,3 %-100 % para NSP5

En concordancia con nuestros resultados, NSP5, NSP2 y VP1, que codifican proteínas directamente relacionadas con la replicación y el ensamblaje viral (fosfoproteína, NTPasa y ARN polimerasa dependiente de ARN, respectivamente), han sido propuestos como segmentos altamente conservados entre los RVH , mientras que VP3 y NSP4, que codifican la guaniltransferasa y la enterotoxina, respectivamente, presentan una mayor diversidad (Estes & Kapikian, 2007)

Al comparar todos los segmentos genómicos de las cepas españolas de RVH porcino con los genotipos propuestos de RVH porcino se observaron identidades de entre el 69,4 y el 93,7 %.

IDENTIDAD NUCLEOTÍDICA

IDENTIDAD NUCLEOTÍDICA

CEPAS DE RVH PORCINO DE ESPAÑA VS

Así pues, los aislados de RVH recuperados en diferentes hospedadores se agruparon en subgrupos claramente diferenciados (porcino, humano y murciélago), lo que sugiere la ausencia de eventos recientes de transmisión entre especies.

OTRAS CEPAS

CEPAS DE RVH PORCINO DE ESPAÑA VS OTRAS CEPAS

Las cuatro secuencias de cepas de RVH porcino recuperadas en granjas españolas se compararon con las disponibles en GenBank, incluyendo secuencias parciales y completas del genoma de cepas de RVH porcino procedentes de Japón (n=11), EE.UU. (n=2), Brasil (n=3), Sudáfrica (n=1) y Vietnam (n=5), así como cepas de RVH humanas (n=3) y de murciélagos (n=1).

Las cepas españolas de RVH porcino estaban escasamente relacionadas con las cepas humanas de RVH (31,3-71,3 %), así como con la cepa de RVH de murciélago (15,9-68 %)

En concordancia, los árboles filogenéticos mostraron que las cepas españolas de RVH porcino estaban estrechamente relacionadas con las cepas de RVH de origen porcino de Japón, EE.UU., Brasil, Sudáfrica y Vietnam, y escasamente relacionadas con las cepas de RVH de origen humano de Bangladesh y China y que también eran distintas de una cepa de RVH identificada en murciélago en Camerún (Figuras 1 y 2)

Esta observación se basa en un número muy limitado de cepas de RVH en las que se ha obtenido la secuencia completa del genoma, particularmente en el caso de aislados de origen humano y de murciélagos, siendo necesarios más estudios que aporten secuencias del genoma completo para determinar de forma concluyente las vías evolutivas de los RVH y su potencial zoonótico.

FIGURA 1

Árboles de máxima verosimilitud construidos con el modelo Tamura-Nei para los segmentos VP7, VP4 y VP6 de RVH. Al principio de las ramas se representa el valor de confianza de la misma mediante 500 réplicas bootstrap, mostrándose solo los valores superiores a 70. Los círculos rellenos sobre las cepas indican las cepas de RVH españolas porcinas identificadas en este estudio. El número de acceso al GenBank, el país y el año se muestran a continuación de las cepas. Los genotipos se indican a la derecha del paréntesis. Las barras de escala indican las sustituciones de nucleótidos por posición.

FIGURA 2

Árboles de máxima verosimilitud construidos con el modelo Tamura-Nei para los segmentos NSP1, NSP2, NSP3, NSP4, NSP5, VP1, VP2 y VP3 de RVH. Al principio de las ramas se representa el valor de confianza de la misma mediante 500 réplicas bootstrap, mostrándose solo valores superiores a 70. Los círculos rellenos sobre las cepas indican las cepas de RVH españolas porcinas identificadas en este estudio. El número de acceso al GenBank, el país y el año se muestran a continuación de las cepas. Las barras de escala indican las sustituciones de nucleótidos por posición.

ESTUDIOS PARA EVALUAR SU POTENCIAL ZOONÓTICO

TABLA 4

GENOTIPADO DE RVH BASADO EN SECUENCIAS GENÓMICAS COMPLETAS

Los rotavirus presentan una alta variabilidad, fruto de su genoma segmentado que favorece fenómenos de reasociación y reordenamiento. Esta variabilidad tiene repercusiones clínicas dado que la inmunidad frente a estos virus es dependiente del genotipo.

Se dispone de sistemas bien establecidos para el genotipado de RVA, pero no para otros grupos. No obstante, recientemente se ha propuesto un sistema de genotipado para los RVH basado en las secuencias genómicas completas (Suzuki & Inoue, 2018)

Teniendo en cuenta los valores de punto de corte recomendados, las cepas de RVH porcinas españolas mostraron cierta variabilidad, clasificándose en uno o dos genotipos diferentes para cada segmento genómico (Tabla 4 y Figura 1)

Genotipos identificados en los aislados de RVH recuperados en explotaciones porcinas españolas según el sistema de genotipado basado en la secuencia del genoma completo propuesto por Suzuki & Inoue, 2018.

Se superaron valores de corte propuestos en el caso del segmento VP7 y las cepas SP-VC29 y SP-VC36 (genotipo X en la Figura 1 y Tabla 4). Sin embargo, este resultado debe tomarse con precaución debido al limitado número de secuencias disponibles.

Este hecho fue particularmente evidente al observar las secuencias correspondientes al segmento VP6 (Figura 1), donde la agrupación del árbol parece apuntar a un único grupo muy diverso, mientras que, según los umbrales propuestos, el aislado SP-VC36 podría considerarse un nuevo genotipo.

SON NECESARIAS MÁS SECUENCIAS DE RVH PARA EL DESARROLLO ADECUADO Y LA REVISIÓN DE LOS UMBRALES EN EL SISTEMA DE GENOTIPADO PROPUESTO

BIBLIOGRAFÍA

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2204-2

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Kumar, S., Stecher, G., Li, M., Knyaz, C., & Tamura, K. (2018). MEGA X: Molecular evolutionary genetics analysis across computing platforms. Molecular Biology and Evolution, 35, 1547-1549. https://doi.org/10.1093/molbev/ msy096

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CONCLUSIONES

En este trabajo se presentan las primeras secuencias genómicas de cuatro cepas de RVH porcinas (tres secuencias completas y una parcial) procedentes de España, siendo las primeras cepas de RVH identificadas en Europa.

Nuestros datos indican que los RVH están relativamente extendidos en la población porcina española, siendo identificados en casi el 9 % de los brotes de diarrea investigados. Además, la secuenciación completa del genoma demostró su utilidad en la caracterización de estos aislados, siendo de utilidad para el desarrollo de nuevas técnicas de diagnóstico que permitan la detección de RVH en las explotaciones porcinas y la vigilancia de esta infección en cerdos a nivel mundial.

Artículo traducido y adaptado de: Puente H, Cortey M, de Nova PJG, et al. First identification and characterization of rotavirus H in swine in Spain. Transbound Emerg Dis. 2021;00:1–15. https:// doi. org/10.1111/tbed.13992

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PREVALENCIA DE DIARREA POSTDESTETE CAUSADA POR ESCHERICHIA COLI EN ESPAÑA

Lorena Pérez Esteruelas Technical Consultant Swine Elanco Animal Health

EM-ES-21-0091

EEEl sector porcino se enfrenta a numerosos retos que conllevan un aumento de la mortalidad en transición, entre ellos, la reducción del uso de antibióticos, la prohibición del uso del óxido de zinc o el aumento del número de lechones que llegan relativamente inmaduros al destete.

RETOS EN TRANSICIÓN

La mortalidad durante la fase de transición (fase 2) va en aumento si la comparamos con años anteriores, con un incremento en casi 2 puntos porcentuales desde 2016 a 2019 (Figura 1). Este fenómeno se ha relacionado, en parte, con la reducción del uso de antibióticos, un aspecto importante a la hora de realizar un uso responsable de los mismos. Este, es uno de los retos a los que se ha estado enfrentando la producción animal desde hace varios años.

Evolución

Otro reto que ha surgido, y que antaño no sucedía de la misma forma, es el aumento del número de lechones nacidos vivos (Figura 2)

Esto conlleva una mayor variabilidad de los pesos al destete con un porcentaje a considerar que se clasifican como animales de bajo peso. Si a esto le sumamos

Evolución del número de lechones nacidos vivos en España entre 2001 y 2019 (Fuente: BDporc).

FIGURA 1

de la mortalidad en transición entre 2016 y 2019 (Fuente: SIP Consultors, 2020)..

Siguiendo con los retos a los que se enfrenta el sector porcino, la retirada del uso de óxido de zinc en 2022 va a suponer un antes y un después en la evolución de los animales. Este hecho tendrá especial repercusión en la fase de postdestete, lo que podría significar que la curva de mortalidad no revierta y siga en aumento si no se toman medidas en muchos aspectos de la producción.

Desde la perspectiva de la patología, la mortalidad en transición se asocia, principalmente, a enfermedades entéricas o respiratorias en las que intervienen diferentes factores como algunos de los mencionados previamente.

Una de las patologías más observadas en esta fase de producción es la diarrea postdestete (DPD), un proceso que puede causar una elevada mortalidad.

Teniendo en cuenta que la aparición de la DPD es multifactorial en la mayoría de los casos (factores determinantes, factores predisponentes y factores contribuyentes), se debe de abordar desde diferentes puntos para hacerle frente, siendo importante llevar a cabo un diagnóstico riguroso

DESENMASCARANDO LOS PATÓGENOS CAUSANTES DE DPD

El presente estudio tuvo como objetivo la determinación de la prevalencia de los principales patógenos causantes de diarrea en el periodo postdestete.

Durante 2018 y 2019, se analizaron un total de 193 granjas localizadas en el territorio nacional. Todas ellas tenían un factor común, la diarrea postdestete.

Se tomaron 579 muestras de animales de entre 4 y 8 semanas de edad y durante la fase aguda de las diarreas (en las primeras 24 horas). Para ello, se obtuvieron muestras de heces de 3 animales por granja utilizando hisopos rectales con medio AMIES. El análisis fue llevado a cabo en el laboratorio de diagnóstico Exopol.

Se analizaron las muestras mediante PCR a tiempo real sobre pool de heces contenidas en los hisopos rectales ( pool de 3) para la detección de Escherichiacoli(E.coli) y sus factores de virulencia (fimbrias y toxinas), Rotavirus tipo A y Diarrea epidémica.

Pool (3 animales/granja) de muestras

Extracción de material genético (ADN/ARN)

Análisis por RT-PCR

Escherichia coli

Factores de adhesión

F4

F18

AIDA-1

EAe

Rotavirus A

Virus de la diarrea epidémica

Tóxinas

EAST-1

Stx2e

STa

STb

RESULTADOS RESULTADOS

De las 193 granjas analizadas, solamente en un 1,6% no se detectó ningún factor de virulencia de E. coli.

El factor de adhesión AIDA-1 fue el de mayor prevalencia (70,1%), seguido de F18 (61,8%) y F4 (48,8%), mientras que en el caso de los genes que codifican para las diferentes toxinas, EAST-1 fue la más prevalente (97,4%), seguida de STb (86,1%) y STa (78,0%)

Por su parte, Rotavirus A fue hallado en el 64,6% de los casos y la diarrea epidémica en un 11,4%.

EL FACTOR DE ADHESION AIDA-1 Y LA TOXINA EAST-1

FUERON LOS MÁS

PREVALENTES EN LA GRANJAS ANALIZADAS

DISCUSIÓN DISCUSIÓN

Los resultados de este análisis demostraron la alta prevalencia de los diferentes factores de virulencia de E. coli en casos de diarrea postdestete.

En relación con las fimbrias F4 y F18, anteriormente se había llevado a cabo otro estudio de prevalencia en España, encontrando una mayor prevalencia de F18 en comparación con F4, F5, F6 y F41 (Sánchez, 2016)

Respecto a las toxinas, en este estudio se demuestra que EAST-1 se encuentra en casi todas las granjas analizadas. Existen otros estudios en los que EAST-1 también es la toxina más prevalente (Li, 2020)

Estos resultados muestran la elevada prevalencia del patotipo E. coli enterotoxigénico (ETEC), uno de los principales patógenos causantes de DPD.

Existe una elevada variabilidad en los factores de virulencia para E. coli entre granjas, siendo necesario llevar a cabo un diagnóstico completo de E. coli a la hora de llevar a cabo acciones eficaces. Asimismo, se ha descrito que algunos virotipos pueden llegar a ser más severos y podrían mostrar una mayor resistencia a determinados antibióticos (Fairborther, 2016).

BIBLIOGRAFÍA

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López

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de Armentia L. 2020. Análisis de la mortalidad en lechones de cerdas hiperprolíficas en la fase de lactación

NO ESPERES, ACTÚA

NO ESPERES A QUE LA BURBUJA ESTALLE

Actúa ya. La prohibición del óxido de zinc está cada vez más cerca y requiere preparación previa; con ello contribuiremos tanto en la lucha contra las resistencias antibióticas como a mantener unos beneficios saludables en las explotaciones.

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1. Vangroenweghe, Frédéric. Improved weight gain and reduced mortality and antibiotic use following vaccination with Coliprotec® F4, an oral live vaccine against post-weaning diarrhoea. 2017. Proceedings ESPHM, Prague, Czech Republic: 254.

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PRECAUCIONES: Vacunar únicamente animales sanos. Precauciones específicas que debe tomar la persona que administre el medicamento veterinario a los animales: Al usuario: Este medicamento veterinario contiene aceite mineral. Su inyección accidental/autoinyección puede provocar dolor agudo e inflamación, en particular si se inyecta en una articulación o en un dedo, y en casos excepcionales podría provocar la pérdida del dedo afectado si no se proporciona atención médica urgente. En caso de inyectarse accidentalmente con este medicamento veterinario consulte urgentemente con un médico, incluso si solo se ha inyectado una cantidad muy pequeña, y lleve el prospecto consigo. Si el dolor persiste más de 12 horas después del examen médico, diríjase de nuevo a un facultativo. Al facultativo: Este medicamento veterinario contiene aceite mineral. Incluso si se han inyectado pequeñas cantidades, la inyección accidental de este medicamento veterinario puede causar inflamación intensa, que podría, por ejemplo, terminar en necrosis isquémica e incluso la pérdida del dedo. Es necesaria atención médica experta, INMEDIATA, a cargo de un cirujano, dado que pudiera ser necesario practicar inmediatamente una incisión e irrigar la zona de inyección, especialmente si están afectados los tejidos blandos del dedo o el tendón. No ha quedado demostrada la seguridad del medicamento veterinario durante la gestación o la lactancia. Precauciones especiales de conservación: Liofilizado y disolvente: Conservar en nevera (entre 2 °C y 8 °C). No congelar. Proteger de la luz. TIEMPO DE ESPERA: Cero días. Reg. Nº: 3814 ESP . Merck Sharp & Dohme Animal Health, S.L. PORCILIS PCV M HYO EMULSIÓN INYECTABLE PARA PORCINO. COMPOSICIÓN POR 2 ml: Sustancias activas: Circovirus porcino tipo 2 (PCV2) subunidad antigénica ORF2 ≥ 2828 UA1 Mycoplasma hyopneumoniae inactivado cepa J ≥ 2,69 UPR2. Adyuvantes: Aceite mineral ligero 0,268 ml, aluminio (como hidróxido) 2,0 mg. 1Unidades antigénicas determinadas en el test de potencia in vitro (ELISA).2Unidades de potencia relativa definidas frente a una vacuna de referencia. INDICACIONES. Para la inmunización activa de cerdos, con el fin de reducir la viremia, la carga vírica en pulmones y tejidos linfoides, la excreción del virus causada por la infección con circovirus porcino tipo 2 (PCV2) y la gravedad de las lesiones pulmonares causadas por la infección por Mycoplasma hyopneumoniae. Para reducir la pérdida de ganancia de peso diaria durante el período de cebo en presencia de infecciones con Mycoplasma hyopneumoniae y/o PCV2 (como se observa en estudios de campo). Establecimiento de la inmunidad con vacunación de dosis única: PCV2: 2 semanas después de la vacunación; M. hyopneumoniae: 4 semanas después de la vacunación. Establecimiento de la inmunidad con vacunación de dos dosis: PCV2: 18 días después de la primera vacunación; M. hyopneumoniae: 3 semanas después de la segunda vacunación. Duración de la inmunidad (ambos programas de vacunación): PCV2: 22 semanas después de la (última) vacunación; M. hyopneumoniae: 21 semanas después de la (última) vacunación. CONTRAINDICACIONES: Ninguna. PRECAUCIONES: Vacunar únicamente animales sanos. Precauciones específicas que debe tomar la persona que administre el medicamento veterinario a los animales: Al usuario: Este medicamento veterinario contiene aceite mineral. Su inyección accidental/autoinyección puede provocar dolor agudo e inflamación, en particular si se inyecta en una articulación o en un dedo, y en casos excepcionales podría provocar la pérdida del dedo afectado si no se proporciona atención médica urgente. En caso de inyectarse accidentalmente con este medicamento veterinario, consulte urgentemente con un médico, incluso si solo se ha inyectado una cantidad muy pequeña, y lleve el prospecto consigo. Si el dolor persiste más de 12 horas después del examen médico, diríjase de nuevo a un facultativo. Al facultativo: Este medicamento veterinario contiene aceite mineral. Incluso si se han inyectado pequeñas cantidades, la inyección accidental de este medicamento puede causar inflamación intensa, que podría, por ejemplo, terminar en necrosis isquémica e incluso la pérdida del dedo. Es necesaria atención médica experta, INMEDIATA, a cargo de un cirujano, dado que pudiera ser necesario practicar inmediatamente una incisión e irrigar la zona de inyección, especialmente si están afectados los tejidos blandos del dedo o el tendón. Conservar en nevera (entre 2 ºC y 8 ºC). No congelar. Proteger de la luz directa del sol. TIEMPO DE ESPERA: Cero días. Reg. Nº: EU/2/14/175/001-010. Intervet International B.V. PORCILIS PRRS LIOFILIZADO Y DISOLVENTE PARA SUSPENSIÓN INYECTABLE PARA PORCINO. COMPOSICIÓN POR DOSIS: Liofilizado: Sustancia activa: Virus PRRS cepa DV vivo atenuado: 104,0-106,3 TCID50*. Disolvente: Adyuvante: Acetato de dl-α-tocoferilo: 75 mg/ml. *Dosis infectiva de cultivo tisular 50%. INDICACIONES Inmunización activa de cerdos clínicamente sanos en un ambiente contaminado con virus de PRRS, para reducir la viremia causada por la infección con cepas europeas del virus de PRRS. Indicaciones específicas: Para cerdos de cebo, el efecto del virus sobre el sistema respiratorio es el más relevante. En las pruebas de campo, los cerdos vacunados, especialmente los lechones vacunados a las 6 semanas de edad, mostraron una mejora significativa de los resultados productivos (reducción de la morbilidad debida a infección con virus de PRRS y mejor crecimiento diario y conversión de pienso) hasta el final del período de cebo. Para cerdos reproductores, el efecto del virus sobre el sistema reproductor es el más relevante. En cerdas vacunadas en ambientes contaminados con el virus de PRRS se observó una mejoría significativa del rendimiento reproductivo y una reducción de la transmisión del virus a través de la placenta después del desafío. El interés de la vacunación con Porcilis PRRS reside en obtener un estado inmune alto y homogéneo frente al virus de PRRS en una explotación. Establecimiento de la inmunidad: 28 días después de la vacunación. Duración de la inmunidad: al menos 24 semanas. CONTRAINDICACIONES: No usar en explotaciones donde la prevalencia de virus de PRRS europeo no haya sido establecida mediante métodos de diagnóstico fiables. PRECAUCIONES: Porcilis PRRS debe utilizarse solamente en explotaciones contaminadas con virus de PRRS, donde se haya establecido la prevalencia de virus de PRRS europeo mediante métodos de diagnóstico virológico fiables. No se dispone de datos sobre la seguridad de la vacuna para el rendimiento reproductivo en verracos. No utilizar en explotaciones en las que se haya adoptado un programa de erradicación de PRRS basado en la serología. Vacunar únicamente animales sanos. Precauciones especiales para su uso en animales: Deben tomarse precauciones para evitar la introducción de la cepa vacunal en un área en la que no esté presente el virus de PRRS. El virus vacunal puede transmitirse a cerdos en contacto durante 5 semanas después de la vacunación. La vía de transmisión más común es el contacto directo, pero no puede excluirse la transmisión a través de objetos contaminados o a través del aire. Deben tomarse precauciones para evitar la transmisión del virus vacunal de animales vacunados a animales no vacunados (es decir, cerdas gestantes sin inmunidad) que deben permanecer libres de virus de PRRS. No utilizar en verracos donantes de semen para explotaciones seronegativas, puesto que el virus de PRRS puede ser excretado en el semen durante muchas semanas. Precauciones específicas que debe tomar la persona que administre el medicamento veterinario a los animales: En caso de autoinyección accidental, consulte con un médico inmediatamente y muéstrele el prospecto o la etiqueta. Gestación: Las cerdas adultas y nulíparas sin inmunidad frente a virus de PRRS no deben ser vacunadas durante la gestación, puesto que esto puede tener efectos negativos. La vacunación durante la gestación es segura cuando se lleva a cabo en cerdas adultas y nulíparas ya inmunizadas frente al virus de PRRS europeo mediante la vacunación o por infección de campo. Lactancia: La vacuna puede ser utilizada durante la lactancia. Precauciones especiales de conservación: Vacuna o caja combinada: conservar en nevera (entre 2 °C y 8 °C). Proteger de la luz. Disolvente: conservar