Методическое указание для студентов к практическому занятию 11 Тема: Изучение колоний. Пигменты бактерий Цель: Освоение практических навыков работы при выделении чистых культур бактерий: ІІ -й день исследования. Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция. Иммунитет. Содержательный модуль 3. Физиология бактерий. Тема 11: Изучение колоний. Пигменты бактерий. Актуальность темы. На плотных питательных средах бактерии образовывают разные по форме и величине колонии - видимые скопления микроорганизмов одного вида, которые формируются в результате размножения одной клетки. Колонии бывают плоскими, выпуклыми, куполовидными, вдавленными, их поверхность - гладкой (S-форма), шероховатой (R-форма), исчерченной, края - равными, зазубренными, волокнистыми, бахромчатыми. Форма колоний также разнообразная: круглая, розеткоподобная, звездчатая. По величине колонии делятся на большие (4-5мм), средние (2-4 мм), мелкие (1-2мм). Колонии различаются за консистенцией, плотностью, цветом. Они могут быть прозрачными и непрозрачными, окрашенными и бесцветными, влажными, сухими, слизистыми. Цвет колоний определяется образованием пигментов, которые делятся на растворимые в воде и спирте (синегнойная бактерия, бактерии синезеленого молока) и нерастворимые (азотобактер, черные и бурые пигменты плесени). Цвет колоний помогает дифференцировать бактерии. Колонии актиномицетов (A. вovis), микрококков окрашены в розовый цвет, стафилококка - в золотистый (S. aureus), лимонно-желтый (S. citreus) и белый цвета (S. albus), синегнойная палочка (P. aeroginosa) - в сине-зеленый, микобактерии туберкулеза (M. tuberculosis) - в желтый. Некоторые пигменты образуются только при свете (каротиноиды в M. tuberculosis), а некоторые обнаруживают антибиотические свойства (P. aeroginosa). Пигменты защищают бактерии от действия видимых и УФ-лучей. • • • • •
Конкретные цели: Выучить методы выделения чистых культур бактерий. Описывать колонии, особенности их формирования у разных видов бактерий. Выучить особенности пигментообразования у бактерий. Описывать наиболее весомые пигменты, которые используются для дифференциации бактерий. Освоить метод пересева колоний для получения чистых культур бактерий.
• Трактовать результаты роста смеси бактерий на плотных питательных средах. • • • • • • •
Уметь: Проводить макроскопическое изучение колоний. Проводить пересев колоний бактерий для выделения чистых культур. Проводить проверку выделенных культур бактерий на чистоту. Готовить микропрепараты из колоний бактерий. Окрашивать микропрепараты по Граму. Проводить микроскопию микропрепаратов с помощью иммерсионного микроскопа. Анализировать полученные данные относительно разнообразия колоний.
Теоретические вопросы: 1. Схема выделения чистых культур. 2. Особенности формирования колоний у разных видов бактерий. 3. Пигментообразование у бактерий и его значение в дифференциации бактерий. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 1. 2. 3. 4.
Практические задачи, которые выполняются на занятии: Продолжение выделения чистых культур бактерий: макроскопическое изучение колоний. Приготовление микропрепаратов из полученных колоний. Окраска микропрепаратов по Граму. Микроскопия микропрепаратов, их анализ и зарисовывание в протокол. Пересев выделенных колоний на МПА для получения чистых культур. Оформление протокола. Литература: Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбаков А.М. Микробиология.М.: Медицина, 1998.- 336с. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.: ГЕОТАФ-МЕД, 2001.- 768с. Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія.- К.: "Вища школа", 1992.– 431с. Конспект лекций.
Дополнительная литература: 1. Коротяев А.И., Бабичев С.О. Медицинская микробиология, иммунология и вірусологія /Учебник для медицинских ВУЗов.- С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с. 2. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.– 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983,- 512с.
Короткие методические указания к работе на практическом занятии: В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию. Самостоятельная работа состоит из макроскопического изучения колоний на МПА. Потом студенты готовят микропрепараты из разнообразных колоний (кишечной палочки, стафилококка и антракоида), окрашивают их по Граму и проводят микроскопию. После анализа микропрепаратов, их зарисовывают в протокол. На втором этапе студенты проводят пересев выделенных колоний на МПА для получения чистых культур. В конце занятие проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента. Технологическая карта проведения практического занятия № п/п 1
2
3 4 5
Этапы
Врем яв мин. Проверка и кор20' рекция исходного уровня подготовки к занятию
Самостоятельная работа
Самоконтроль и коррекция усвоения материала Тестовый контроль Анализ результатов работы
35'
15' 15' 5'
Средства обучения
Оснащение
Таблицы, коллекция питательных сред, чистых и засеянных пигментообразующими бактериями (S.aureus, P. aeroginosa). Графы логической Иммерсионный структуры. микроскоп, краски, предметное стекло, бактериологические петли, собственные посевы смеси культур бактерий на чашках Петри, скошенный МПА в пробирке. Целевые учебные задания
Место проведения
Тестовые задания исходного уровня
Тесты
У Ч Е Б Н А Я
К О М Н А Т А
Целевые учебные задачи к теме «ИЗУЧЕНИЕ КОЛОНИЙ. ПИГМЕНТЫ БАКТЕРИЙ»: 1. Как известно, некоторые пигменты у бактерий образуются только при свете. Какие из пересчитанных бактерий имеют такое свойство? А. P. aeroginosa С. S. albus Е. M. tuberculosis В. S. aureus D. S. citreus 2. У пациента Р. с пищевым отравлением, из испражнений высеяли бактерии, образующие золотистые колонии на МПА. Какой вид бактерий наиболее вероятно дает колонии такого типа? А. Стафилококки С. Кишечная D. Сальмонеллы В. Стрептококки палочка Е. Шигеллы 3. При плановом обследовании персонала одного из детских садов на бактерионосительство патогенных бактерий, у одной из воспитательниц выделена чистая культура бактерий, которая на кровяном агаре образовывала золотистые колонии с зоной гемолиза? Носительство какого вида бактерий можно заподозрить в этом случае? А. P. aeroginosa С. S. albus Е. M. tuberculosis В. S. aureus D. S. citreus 4. В хирургическом отделении возникла вспышка госпитальной инфекции, вызванная Е.соli. Какие колонии образовывают эти бактерии на МПА? А. Бесцветные колонии D. Белые колонии В. Красные колонии Е. Не дают роста С. Желтые колонии 5. Какой пигмент растворим в воде? A. Зеленый пигмент P.aeruginose D. Серый пигмент B.anthracoides B. Белый пигмент S.epidermidis E. Черный пигмент плісені C. Желтый пигмент S.aureus 6. Какой метод используют для получения изолированной колонии? A. Метод разобщающего штриха C. Посев на скошенный агар B. Посев в полужидкий агар D. Посев пипеткой в МПБ E. Посев бактериологической петлей в МПБ 7. Пигменты имеют для бактерий физиологическое значение, а именно: A. Принимают участие в дыхании бактерий B. Имеют антибиотическую активность C. Защищают бактерии от естественной ультрафиолетовой радиации D. Есть акцепторами водорода E. Все выше указано 8. S-форма колонии бактерий характеризуется поверхностью: A. Гладкой C. Радиальной E. Все выше B. Шероховатой D. Волнистой указанное 9. Как называется культура бактерий, в которой бактерии происходят из одной клетки? A. Смешанная C. Чистая E. Ничего из B. Бульонная D. Агаровая указанного
10. Что определяется как видимое скопление бактерий на поверхности агара, которые происходят из одной клетки? A. Пленка D. Колония B. Смешанная культура E. Все указанное C. Бульонная культура 11. Пигментообразующими бактериями есть, кроме: A. S.aureus C. P.aeruginosa E. B.anthracoides B. E.coli D. S.epidermidis 12. Как характеризуется типичная колония E.coli? A. Круглая, средняя, гладкая, бесцветная, прозрачная B. Круглая, маленькая, гладкая, белая, непрозрачная C. Большая, шероховатая, серая, непрозрачная D. Круглая, большая, шероховатая, бесцветная, прозрачная E. Маленькая, гладкая, желтая, непрозрачная 13. Как характеризуется типичная колония B.anthracoides? A. Круглая, средняя, гладкая, бесцветная, прозрачная B. Круглая, маленькая, гладкая, белая, непрозрачная C. Большая, шероховатая, серая, полупрозрачная D. Круглая, большая, шероховатая, бесцветная, прозрачная E. Маленькая, гладкая, желтая, непрозрачная
Алгоритм лабораторной работы: 1. Изучение посевов смеси бактерий (кишечной палочки, стафилококка и антракоида) на МПА в чашках Петри: а) макроскопическое изучение колоний; б) приготовление мазков из разных колоний, окраска по Граму, микроскопия и анализ. 2. Зарисовать изготовленные микропрепараты в протокол. 3. Пересеять изолированные колонии на МПА. 4. Оформление протокола.
Граф логической структуры темы: “ИЗУЧЕНИЕ КОЛОНИЙ. ПИГМЕНТЫ БАКТЕРИЙ” Колонии
По размерам
Крупные
Середние Мелкие
По форме
Круглая
Звездчатая
Розеткоподобная
По цвету
Бесцветные E.coli
Желтые M.tuberculosis
По характеру поверхности Синезеленые
Гладкая
P.aeroginosa
Золотистые S.aureus
Шераховатая
По характеру края Ровные
Зазубренные Бахромчатые