Методические указания для студентов к практическому занятию № 11. Тема: Лабораторная диагностика вирусных гепатитов. Цель: Изучение методов лабораторной диагностики вирусных гепатитов. Модуль 3. Общая и специальная вирусология. Содержательный модуль 14. Специальная вирусология. Тема 11: Лабораторная диагностика вирусных гепатитов. Актуальность темы: На долю вирусных гепатитов в Украине выпадает приблизительно 20% всех вирусных заболеваний, которые приводят к продолжительной потере трудоспособности: острые некрозы печени, циррозы, первичный рак печени. Вирус гепатита А вызывает эпидемический гепатит (инфекционную эпидемическую желтуху, болезнь Боткина). За морфологическими и физико-химическими характеристиками похожий на ентеровирусы. Вирус гепатита В описанный в 1970 г. и получивший название частицы Дейна. Это сложный вирус, который содержит ДНК. Вызывает сывороточный гепатит. За последние годы наблюдается рост заболеваемости этой формой гепатита. ВИРУС ГЕПАТИТА А. Гепатит А (болезнь Боткина) – инфекционное заболевание с фекально-оральным путем передачи, клинически и морфологически характеризующееся поражением печени с развитием симптомокомплекса острого гепатита. Заболевание известно с глубокой древности, его описание содержат труды Гиппократа. Вирус впервые выделил С. Фейстоун (1973). Таксономия. В настоящее время вирус гепатита А включен в род Hepatovirus семейства Picornaviridae. Морфология. Зрелые вирионы сферической формы имеют размер 25-27 нм. Геном образует несегментированная молекула +РНК. Нуклеокапсид организован по типу кубической симметрии: образован капсомерами, состоящими из четырех белков (VP1-4). Суперкапсид отсутствует.
Антигенная структура. Возбудитель представлен одним антигенным типом и содержит главный Ar(HA-Ar),по которому его идентифицируют. Эпидемиология. Резервуар возбудителя - больной человек. Больной выделяет возбудитель в течении 2-3 недель до начала и в течение первых 3-5 суток желтушного периода. Передача возбудителя происходит фекально-оральным путем (через воду, пищевые продукты, грязные руки, различные предметы). Вирус гепатита А устойчив в окружающей среде, при 210С сохраняется несколько недель; полностью инактивируется при температуре 850С. Вирус хорошо переносит низкие температуры, устойчив к хлору, благодаря чему сохраняется в очищенной пищевой воде. Фекальное загрязнение источников водопользования может вызвать формирование эпидемических вспышек. Пик заболеваемости приходится на холодный сезон (поздняя осень или зима). После перенесенного заболевания формируется стойкая невосприимчивость к повторным заражениям. Патогенез. Попадая в организм с водой или пищей, вирус гепатита А размножается в эпителии слизистой оболочки тонкой кишки и регионарных лимфоидных тканях. Затем наступает фаза кратковременной вирусемии. Максимальная концентрация вируса в крови возникает в конце инкубационного периода и в преджелтушном периоде. В это время возбудитель выделяется с фекалиями. Основная мишень для цитопатогенного действиягепатоциты. Репродукция вируса в их цитоплазме приводит к гибели клеток. Цитопатический эффект усиливают иммунные механизмы, в частности NK-клетки, активированные ИФН, синтез которого индуцируется вирусом. Принципы микробиологической диагностики. Маркеры репликации вируса - АТ (IgM и IgG) к Аг вируса гепатита А и вирусная РНК. Указанные маркеры определяют в ИФА и РИА. Выявление Аг вируса гепатита А в фекалиях имеет ограниченное значение, так как пик его образования приходится на инкубационный и начало желтушного периодов. Выявление Аг вируса гепатита А можно использовать для эпидемиологического обследования контактных лиц. К заражению вирусом гепатита А чувствительны приматы, но в широкой клинической практике данный метод диагностики не используют. Монослойные культуры клеток нечувствительны к вирусу гепатита А, и для выделения возбудителя предпочтительнее использовать лейкоцитарные или органные культуры. Вирус отличает слабый цитопатический эффект. Лечение и профилактика. Средства специфической противовирусной химиотерапии отсутствуют, лечение симптоматическое. Разработанный сывороточный Ig предупреждает развитие заболевания в течение 3 месяцев, но также значительно смягчает течение заболевания. Его применяют для пассивной иммунизации лиц, направляющихся в эндемичные районы. Для активной иммунопрофилактики вирусного гепатита А используют убитые и рекомбинантные вакцины. Общие профилактические мероприятия направлены на улучшение санитарной обстановки, включают соблюдение карантинных мероприятий, улучшение условий водоснабжения и повышение гигиенической культуры населения. ВИРУС ГЕПАТИТА В Гепатит В – инфекционное заболевание с кровяно-контактным механизмом передачи, клинически и морфологически характеризующиеся поражением печени с развитием симптомокомплекса острого и хронического гепатита. Возбудитель впервые обнаружил Д. Дейн и соавт. (1970). Таксономия. Вирус гепатита В включен в состав рода Orthohepadnavirus семейства Hepadnaviridae. Морфология. Вирионы вируса гепатита В сферической формы 42 нм в диаметре имеют суперкапсид. Геном образует неполная (одна нить короче) двухнитевая кольцевая молекула ДНК. С короткой “плюс”-нитью ДНК связан праймерный белок. В состав сердцевины также входит ДНК-зависимая ДНК-полимераза. Для эффективной репродукции необходим синтез ДНК-полимеразы, так как вирусная ДНК образуется на
матрице РНК; в динамике процесса вирусная ДНК интегрирует в ДНК клетки. В крови больных гепатитом В циркулируют частицы трех морфологических типов. Наиболее часто обнаруживают сферические частицы около 22 нм в диаметре; реже - нитевидные формы около 22 нм в диаметре и 50-230 нм в длину. Вирусные частицы этих типов не проявляют инфекционных свойств. Лишь 7% частиц представлены комплексными двухслойными сферическими образованиями с полной структурой - частицы Дейна, проявляющие выраженную инфекционность. Их оболочку на 70% поверхности образуют белки. Антигенная структура. Основные Ar частиц Дейна – поверхностный HBsAg и сердцевинный HBcAg. АТ против HBsAg и HBcAg появляются в течении заболевания. Наличие АТ против HBsAg прямо связано с невосприимчивостью к инфекции (постинфекционный или поствакцинальный иммунитет). HВsAg. Первый идентифицированный Ar вируса гепатита В; впервые его выделил Б. Блюмберг (1965) из крови австралийского аборигена, поэтому этот Ar также называют австралийским. HВsAg часто образует дефектные морфологические частицы 1-го типа, лишенные инфекционных свойств (побочные метаболиты репликативного цикла). В цитоплазме зараженных клеток возникает излишек HВsAg, связанного с клеточной мембраной и эндоплазматическим ретикулумом. HВsAg появляется в крови через 1,5 месяца после инфицирования; постоянно циркулирует в сыворотке инфицированных лиц, а его очищенные агрегаты входят в состав вакцины против вируса гепатита В. HВsAg включает два полипептидных фрагмента: preS1 обладает выраженными иммуногенными свойствами (рекомбинантный продукт можно использовать для приготовления вакцинных препаратов); preS2 – полиглобулиновый рецептор, приводящий к адсорбции вируса на гепатоцитах. HВcAg. Сердцевинный HВcAg представлен единственным антигенным типом; его обнаруживают только в сердцевине частиц Дейна. Ar маркирует репликацию вируса в гепатоцитах. Может быть обнаружен только при морфологическом исследовании биоптатов или аутопсийного материала печени. В крови в свободном виде его не определяют. Точечные мутации в участке, кодирующем синтез предшественника HВcAg HВcAg продуцирующих мутантов вируса гепатита В, первоначально выделенных при молниеносных формах гепатита. Переход от HвcAg+ в HвcAg- – формы наблюдают у пациентов с хроническими, сравнительно умеренными поражениями. HВеAg. Не входит в состав частиц Дейна, но связи с ними, так как появляется в сыворотке в инкубационном периоде, сразу после появления HВsAg. Образование HВеAg транслируется, РНК содержащей участки сердцевинного Ar и его предшественника. После завершения трансляции образующаяся молекула HВеAg выводится из клетки. Функции HВеAg неизвестны; тем не менее HВеAg можно расценивать как наиболее чувствительный диагностический показатель активной инфекции. Обнаружение HВеAg у пациентов с хроническим гепетитом указывает на активацию процесса, что представляет высокую эпидемическую опасность. Ar может отсутствовать при инфекции, вызванной мутантным штаммом вируса. HВхAg – наименее изученный Ar. Предположительно опосредует злокачественную трансформацию клеток печени. ДНК появляется в сыворотке одновременно с другими Ar вируса. Исчезает из кровотока в начале второй недели острого заболевания. Длительное персистирование – свидетельство хронической инфекции. В диагностике острого гепатита В определение ДНК используют редко.
Эпидемиология. Резервуар возбудителя - инфицированный человек. Механизм передачи инфекции - кровяно-контактный. Основные пути передачи вируса гепатита В инъекционный, гемотрансфузионный и половой. Также показана возможность вертикальной передачи вируса гепатита В от матери к плоду. 7-10% инфицированных становятся хроническими носителями. Ежегодно заболевает не менее 50 человек. В России отмечают 10-15% рост заболеваемости. Основные группы риска – медицинские работники; лица получающие гемотрансфузии или препараты крови; наркоманы, вводящие наркотики внутривенно; больные гемофилией; лица, находящиеся на гемодиализе; дети матерей-носителей HВsAg; половые партнеры носителей вируса. Патогенез. Вирус гепатита В гематогенно заносится в печень и размножается в гепатоцитах. Во второй половине инкубационного периода (40-180сут) вирус выделяют из крови, спермы, мочи, фекалий и секрета носоглотки. В патогенезе поражений важную роль играют аутоиммунные гуморальные и клеточные реакции, что подтверждает связь между началом клинических проявлений и появлением специфических АТ. Патологический процесс начинается после распознавания вирусиндуцированных Ar на мембранах гепатоцитов иммунокомпетентными клетками. Осложнения хронической формы обусловлены хроническим воспалением и некротическими процессами в паренхиме печени; основные осложнения – цирроз и первичная карцинома печени. Цирроз обычно отмечают у страдающих острым хроническим гепатитом;ежегодно регистрируют более 10000 летальных исходов, обусловленных вирусным гепатитом В. Карцинома печени. Показана четкая связь между злокачестввенной трансформацией гепатоцитов и перенесенным вирусным гепатитом В. В развитии опухолевого процесса принимают участие определенные кофакторы, многие из которых остаются неизвестными. Принципы микробиологической диагностики. Маркеры репликации вируса гепатита В – HВеAg. АТ (IgM) к HВсAg, ДНК вируса и вирусная ДНК-полимераза. Для выявления HВsAg и HВеAg применяют ИФА и РНГА; исследования дополняют выявлением ДНК вируса гепатита В и вирусной ДНК-полимеразы. Вирусоспецифические АТ к HВsAg, HВсAg, HВеAg определяют в ИФА и РНГА. На наличие “свежей” инфекции указывают высокие титры HВsAg, IgM к HВsAg и HВsAg. У пациентов с клинически проявляющимся гепатитом титр HвsAg сначала растет, а затем (по мере развитияиммунных реакций) снижается. АТ к HВsAg можно выявить только через несколько недель, что объясняют их активным связыванием в иммунные комплексы. В течение этого периода (так называемого “окна”) можно обнаружить лишь АТ к HВсAg. АТ к HВсAg. Важный диагностический маркер инфицирования, особенно при отрицательных результатах выявления HВsAg. • IgM к HВсAg. Один из наиболее ранних сывороточных маркеров вирусного гепатита В. При хроническом гепатите маркируют репликацию вируса и активность процесса в печени. Их исчезновение является показателем либо санации организма от возбудителя, либо развития интегративной фазы инфекции. • IgG к HВcAg. Сохраняются многие годы. Свидетельствуют об имеющейся или ранее перенесенной инфекции. АТ к HВеAg. Серологический маркер интеграции вируса. В комплексе с IgG HВсAg и HВsAg свидетельствуют о полном завершении инфекционного процесса. АТ к HВsAg. Протективные АТ; также образуют после вакцинации. Применительно к хроническому вирусному гепатиту, могут свидетельствовать о завершении вирусной инфекции. АТ к preS1- – preS2-фрагментам HВsAg. Свидетельствуют о развитии протективного иммунитета при завершении инфекционного процесса. АТ к Рre-S1 выявляют одновременно с АТ к HВсAg, а АТ к Рre-S2.
Лечение. Средства специфической терапии отсутствуют, лечение в основном симптоматическое. Определенные перспективы имеет применение ингибиторов ДНКполимеразы (например, ламивудина), α-ИФН и его индукторов. Несмотря на то что на терапию ИФН реагируют менее 50% пациентов, показаны достоверное исчезновение всех маркеров инфекции (ДНК вируса гепатита В, HВsAg и HВеAg) и увеличение титров АТ к HВsAg. Иммунопрофилактика. Пассивная иммунизация специфическим Ig (HВIg) показана лицам, контактировавшим с инфицированным материалом и носителями HВsAg (включая половых партнеров и детей, родившихся от HВsAg-положительных матерей). Для активной иммунизации разработаны два типа вакцин. Первые готовят из плазмы пациентов, содержащей Ar. Вируса гепатита В в количествах, достаточных для создания вакцинных препаратов. Главное условие – полная инактивация вируса гепатита В. Вторую группу составляют рекомбинантные вакцины (например, Recombivax B, Engerix B), полученные методом генной инженерии на культурах пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae). Массовая иммунизация – важнейший компонент борьбы с инфекцией. Взрослые получают 2 дозы в течение месяца и бустерную иммунизацию через 6 месяцев. Дети получают первую дозу сразу после рождения, следующие – через 1-2 месяца и к концу первого года жизни. Если мать HВsAg-положительна, то ребенку вводят специфический Ig одномоментно с первой вакцинацией. ВИРУС ГЕПАТИТА D (ГЕПАТИТ ДЕЛЬТА) Вирус гепатита D обнаружил М, Ризетто и сотр. (1977) в ядрах гепатоцитов во время необычно тяжелой вспышки сывороточного гепатита в Южной Европе. Позднее его стали обнаруживать повсеместно, особенно часто в Северной Америке и странах СевероЗападной Европы. Таксономия, морфология, антигенная структура. Возбудитель дельта-гепатита – дефектный РНК-содержащий вирус рода Deltavirus семейства Togaviridae. Его выделяют только от пациентов, инфицированных вирусом гепатита В. Дефектность возбудителя проявляется в полной зависимости от его передачи, репродукции и наличия вируса гепатита В. Соответственно, моноинфекция вирусом гепатита D абсолютно невозможна. Вирионы вируса гепатита D имеют сферическую форму, 35-37нм в диаметре. Геном вируса образует однонитевая кольцевая молекула РНК, что сближает вирус гепатита D с вироидами. Ее последовательности не имеют гомологии с ДНК возбудителя гепатита В, но суперкапсид вируса D включает значительное количество HВsAg вируса гепатита В. Резервуар возбудителя – инфицированный человек; вирус передается парентеральным путем. Возможна вертикальная передача вируса гепатита D от матери к плоду. Патогенез и клинические проявления. Инфицирование HВsAg-положительных лиц сопровождается активным размножением вируса гепатита D в печени и развитием хронического гепатита – прогрессирующего или фульминантного. Клинически проявляется только у лиц, инфицированных вирусом гепатита В. Может протекать в двух вариантах: Коинфекция (одновременное заражение вирусами гепатитов В и D). Отмечают короткий продромальный период с высокой лихородкой; часто мигрирующие боли в крупных суставах; нарастание интоксикации в желтушном периоде; часто болевой синдром (боль в проекции печени или эпигастрии); возникновение через 2-3 недели от начала заболевания или клинико-лабораторного обострения. Течение относительно доброкачественное, но восстановительный период протекает длительное время.
Суперинфекция заражение вирусом гепатита D человека, инфицированного вирусом гепатита В). Отмечают короткие инкубационный и преджелтушный периоды (3-5 дней) с высокой лихорадкой, выраженной интоксикацией, повторной рвотой, болевым синдромом, артралгиями. Характерны выраженная желтуха, развитие отечноасцитического синдрома, выраженная гепатоспленомегалия, повторные клиниколабораторные обострения. При данном варианте возможно развитие злокачественной (фульминантной) формы заболевания с летальным исходом. Принципы микробиологической диагностики. Для диагностики острых и хронических вирусных гепатитов D широко применяют ИФА и РИА Маркеры репликации вируса – АТ (IgМ) к Ar вируса гепатита D и вирусная РНК. Ar вируса гепатита D появляется в крови через 3 недели после инфицирования. Вирусспецифические IgМ появляются через 10-15 дней после развития клинических проявлений. Через 2-11 недель можно идентифицировать вирусспецифические IgG, постоянно циркулирующие у инфицированных лиц. Лечение и профилактика. Средства специфической химиотерапии и иммунопрофилактики отсутствуют. Поскольку репродукция вируса гепатита D невозможна в отсутствие возбудителя гепатита В, то основные профилактические мероприятия должны быть направлены на предупреждение развития гепатита В. ВИРУС ГЕПАТИТА С Гепатит С обычно протекает хронически и характеризуется преимущественным развитием хронических форм гепатита с исходом в цирроз и первичную карциному печени. Таксономия, морфология, антигенная структура. Вирус гепатита С включен в состав рода семейства Flaviviridae. Вирионы сферической формы диаметром 35-50 нм окружены суперкапсидом. Геном образует однонитевая – РНК. Выделяют 6 сероваров, каждый из которых «привязан» к определенным странам. Например, в США распространен вирус гепатита С 1-го типа, в Японии – 2-го. Патогенез и клиническая картина. Резервуар возбудителя – инфицированный человек. Основной путь передачи вируса – парентеральный. Основное отличие от эпидемиологии вируса гепатита В – более низкая способность вируса гепатита С к передаче от беременной к плоду и при половых контактах. Больной выделяет вирус за несколько недель до появления клинических признаков и в течение 10 недель после начала проявлений. Заболевание чаще регистрируют в США (до 90% всех трансфузионных гепатитов) и Африке (до 25%). Для клинической симптоматики вирусного гепатита С характерны изменение консистенции и размеров печени. При активном процессе печень обычно увеличена и болезнена при пальпации, ее консистенция умеренно плотная. Другие проявления включают спленомегалию, диспепсический и астенический синдромы, желтуху, артралгии и миалгии, кардиты, васкулиты, легочные поражения, анемии и др. Осложнения хронического процесса – цирроз и первичная карциома печени.
Принципы микробиологической диагностики. Маркеры репликации вируса – АТ (IgМ) к Ar вируса гепатита С РНК. Маркеры выявляют методами ИФА и ПЦР. Показание для поиска АТ или РНК вируса – любое воспалительное заболевание печени. Вирусспецифические АТ появляются в среднем через 3 месяца и указывают на возможное инфицирование вирусом гепатита С или на перенесенную инфекцию. В серонегативный период выявляют РНК вируса гепатита С. Для подтверждения результатов ИФА, а также при обследовании пациентов, не относящихся к основным группам риска, применяют метод рекомбинантного иммуноблотинга, позволяющий эффективно исключить ложноположительные результаты ИФА. Лечение и профилактика. Средства этиотропной терапии отсутствуют; при хронических инфекциях можно использовать α-ИФН. На фоне терапии ИФН у 40-70% больных отмечают стихание воспалительного процесса (на что указывает снижение содержания концентрации аминотрансфераз в сыворотке), однако по окончании курса у 40-50% пациентов наблюдают рецидив воспаления. Средства специфической иммунопрофилактики не разработаны. ВИРУС ГЕПАТИТА Е Гепатит Е – острое инфекционное поражение печени, проявляющееся симптомами интоксикации и, реже, желтухой. Патогенез и клиническая картина. Вирус гепатита Е включен в род Calicivirus семейства Caliciviridae. Вирионы сферической формы 27-38 нм в диаметре. Геном образован несегментированной молекулой +РНК. Патогенез и клиническая картина. Резервуар возбудителя – человек. Эпидемиология заболевания во многом аналогична гепатиту А; возбудитель вызывает эндемичные вспышки. Инкубационный период не превышает 2-6 недель. Заболевание проявляется общим недомоганием; желтуху наблюдают сравниетльно редко. В большинстве случаев прогноз заболевания благоприятный, и пациенты полностью выздоравливают. Инфицирование беременных, особенно в ІІІ триместре, может закончиться фатально (смертность может достигать 20%). Хронизации процесса не наблюдают. Выздоровление сопровождается формированием стойкой невосприимчивости к повторным заражениям. Принципы микробиологической диагностики. Маркеры репликации вируса – АТ (IgМ) к Ar вируса гепатита Е и вирусная РНК. Вирус-специфические IgМ выявляют методом ИФА, начиная с 10-12 суток после инфицирования; диагностические титры сохраняются в течение 1-2 месяцев. АТ класса IgG к Ar вируса гепатита Е появляются через месяц после перенесенного заболевания. РНК вируса выявляют в реакциях ПЦР и молекулярной гибридизации РНК вируса можно выявлять с первых суток инфицирования; однако в желтушном периоде обнаружить ее невозможно. Лечение. Средства этиотропной терапии и специфической профилактики отсутствуют; проводят симптоматическое лечение. ВИРУС ГЕПАТИТА G Таксономия, морфология, антигенная структура. Таксономическое положение вируса G остается невыясненным. Его условно относят к семейству Flaviviridae. Геном образован несегментированной молекулой +РНК. Нуклеокапсид организован по типу кубической симметрии. По набору Ar вирионов высказывают предположение о наличии, как минимум, трех подтипов вируса. Предположительно, вирус гепатита G является дефектным вирусом, и для его репродукции необходимо присутствие вируса гепатита С. Патогенез и клиническая картина. Резервуар возбудителя – больные острым или хроническим гепатитом G и носители вируса гепатита G. Часто регистрации заболевания сравнительно невелика. В РФ частота выявления РНК вируса гепатита G колеблется от 2% в Москве до 8% в Якутии. В то же время в сыворотке крови доноров частота выявления РНК вируса гепатита G составила 1,4%. Чаще маркеры инфицирования вирусом гепатита G выявляют у лиц, получающих множественные переливания цельной крови или ее
препараты, а также среди пациентов с трансплантатами. Особую группу риска составляют наркоманы (среди лиц, вводящих наркотики внутривенно), частота выявления РНК вируса гепатита G достигает 33-35%). Нарушения иммунного статуса способствует развитию длительного носительства вируса. Доказана возможность вертикального пути передачи вируса гепатита G от инфицированной матери к плоду. Гепатит G в большинстве случаев протекает как микст-инфекция с вирусным гепатитом С, существенно не влияя на характер развития основного процесса. Принципы микробиологической диагностики. Маркеры репликации вируса АТ(IgМ) к Ar вируса гепатита G и вирусная РНК. Вирус-специфические IgМ выявляют методом ИФА, начиная с 10-12 суток после инфицирования; диагностические титры сохраняются в течение 1-2 месяцев. АТ класса IgG к Ar вируса гепатита Е появляются через месяц после перенесенного заболевания. РНК вируса выявляют в реакциях ПЦР и молекулярной гибридизации. РНК вируса можно выявлять с первых суток инфицирования; однако в желтушном периоде обнаружить ее невозможно.
ОСНОВНЫЕ СВОЙСТВА ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ Свойства
HAV
HBV
HCV
HDV
HEV
HGV
Таксономия
Picornaviridae Hepatovirus
Hepadnaviridae Oxthohepadnavirus
Flaviviridae Hepatovirus
Caliciviridae Hepevirus
Flaviviridae
Тип НК Размер Пути заражени я
РНК 27-28 нм Фекально-оральный
ДНК 42 нм Парентеральный Половой Вертикальный
РНК 55-65 нм Парентеральный Половой Вертикальный
Не имеет аналогов, приближается к вироидам РНК 35-37 нм Парентеральный Перинатальный
РНК 32-34 нм Фекально-оральный
РНК 55-65 нм Парентеральный Половой Вертикальный
Инкубационный период Диагностика
10-50 дней (28)
40-200 дней (80)
14-60 дней (42)
Спец. Ig профилактика
Антиген ИЭМ РОПГА ИФА РИА
Антитела антиHAV класса IgM РНГА ИФА РИА
Нормальный иммуноглобулин
Антиген HBsAg HBeAg HBcAg РОПГА ИФА ПЦР
Антитела антиHBs антиHBe антиHBc РНГА ИФА
Иммуноглобулин нормальный и направленного действия
Антиген ПЦР
Антитела антиHCV антитела ИФА
Специфический иммуноглобулин
40-200 дней (80) Антиген ПЦР Молекулярная гибридизация
Антитела анти D антитела ИФА
SEN-V и G вирусы Circoviridae
Антитела ИФА
Специфический иммуноглобулин
Антиген ПЦРобнаружение вирусной РНК, молекулярная гибридизация
Антитела анти G антитела ИФА
Circoviridae
ДНК Парентеральный Перинатальный
ДНК Фекальнооральный Парентеральный Половой Вертикальный 42-70 дней
ДНК ПЦР
ДНК ПЦР
15-40 дней (36) Антиген вирусИЭМ антиген ИФА
TTV
Антитела Иммунологическая РП
Антитела anti-TTV иммунологическая РП
1. 2. 3. 4.
Конкретне цели: Изучить вирусные антигены, которые выделяют от больных гепатитом. Понятие о частице Дейна. Выучить классификацию вирусных гепатитов. Вирус гепатитов А и В. Источники инфекции, пути передачи. Ознакомиться с методами лабораторной диагностики вирусных гепатитов. Специфическая и неспецифичная профилактика вирусных гепатитов.
Уметь: 1. Забирать материал для исследования от больных с подозрением на вирусные гепатиты. 2. Интерпретировать результаты бактериологических исследований. 3. Трактовать результаты серологических исследований сыворотки крови больных с подозрением на вирусные гепатиты. Теоретические вопросы: 1. Классификация вирусов гепатитов. 2. Гепатиты с фекально-оральным механизмом передача: строение вирусов гепатита А и Е; патогенез; специфическая профилактика. 3. Гепатиты с парентеральным механизмом передачи: пути заражения, группы риска. 4. Строение частицы Дейна, антигенная структура. 5. Особенности строения вирусов гепатитов D, C, G, TTV и SEN. 6. Патогенез вирусных гепатитов. 7. Особенности иммунитета. Вирусоносительство, острая и хроническая форма, канцерогенез. 8. Лабораторная диагностика вирусных гепатитов. Серологические маркеры. 9. Специфическая профилактика вирусных гепатитов. Принцип получения генноинженерной вакцины. Практические задания, выполняемые на занятии: 1. Изучение демонстрационных препаратов. 2. Зарисовка демонстрационных микропрепаратов в протокол. 3. Оформление протокола. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 1. 2. 3. 4.
Литература: Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія з вірусологією та імунологією.– Київ.: Вища шк., 1992.– 431с. Воробьев А.В., Биков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиология.– М.: Медицина, 1998.– 336с. Медицинская микробиология /Под ред. В.И. Покровского.– М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001.– 768с. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, Санкт–Петербург «Специальная литература», 1998.– 592 с. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.– 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983,- 512с. Конспект лекции. Дополнительная литература: Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби.- К., 1995.– 321с. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.- М.: Медицина, 1990.- 559 с. БМЭ.- Т. 1, 2, 7. Гайдаш І.С., Флегонтова В.В. Медична вірологія.– Луганськ, 2002.– 357 с.
Короткие методические указания к практическому занятию: В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию. Самостоятельная работа состоит из изучения демонстрационных препаратов, методов профилактики и лечение вирусных гепатитов. Затем студенты зарисовывают микропрепараты и дают необходимые пояснения. В состав самостоятельной работы входит также изучение схемы лабораторной диагностики вирусных гепатитов, микроскопия демонстрационных препаратов и их зарисовка, заполнение протокола. В конце занятия проводится тестовый контроль и анализ итогов результатов самостоятельной работы каждого студента. № п\п 1.
2. 3. 4. 5.
Технологическая карта проведения практического занятия Этапы Время Способы Оборудования Место мин. обучения проведения Проверка и кор20’ Тестовые Таблицы, атлас рекция выходного задания уровня подготовисходного ки к занятию уровня Самостоятельная 35’ Граф логичес- Иммерсионный микработа кой структуры роскоп Самоконтроль и 15’ Целевые Учебная коррекция усвоенобучающие комната ного материала программы Тестовый 15’ Тесты контроль Анализ резуль5’ татов работы
Тестовые задания исходного уровня: 1. Какое из приведA. сложный ДНК-содержащий вирус, имеющий ряд антигенов; B. простой ДНК-содержащий вирус, имеющий один антиген; C. сложный РНК-содержащий вирус, имеющий ряд антигенов; D. простой РНК-содержащий вирус, имеющий один антиген; E. простой РНК-содержащий вирус, имеющий ряд антигенов. 2. Показателями поствакцинального специфического иммунитета против гепатита В в сыворотке крови являются: A. Anti-HBcor-Ig; B. Anti-HBe – антитела; C. Anti-HBs– антитела; D. Anti-HBx– антитела; E. верно В и С. 3. Какое из приведенных ниже определений верно для вируса гепатита С? A. сложный ДНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Flaviviridae; B. простой ДНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Picornaviridae; C. сложный РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Hepadnaviridae; D. простой РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Picornaviridae; E. сложный РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Flaviviridae. 4. При электронной микроскопии был обнаружен ДНК–содержащий вирус сферический формы, размером 45-55 нм, имеющий суперкапсид и капсид икосаэдрального типа симметрии, содержащий 4 основных антигена. О каком вирусе, скорее всего, идет речь? A. вирус гепатита А; B. вирус гепатита В;
C. вирус гепатита С; D. вирус гепатита D; E. вирус гепатита G. 5. Какой антиген вируса гепатита В ранее именовался «австралийским антигеном»? A. HBc- антиген; B. HBe – антиген; C. HBs– антиген; D. HBх– антиген; E. Целевые обучающие задания: 1. В связи с тем, что стоматологи принадлежат к группе риска по заражению вирусными гепатитами, им необходимо провести плановую профилактическую вакцинацию. Какую вакцину необходимо при этом применить? A. вакцину, которая содержит НВs-антиген, полученный генно-инженерным способом; B. вакцину, которая содержит НВе-антиген, полученный из зараженных куриных эмбрионов; C. вакцину, которая содержит НВс-антиген, полученный из организма шимпанзе; D. вакцину против вирусного гепатита А; E. вакцину, которая содержит антиген вирусного гепатита С. 2. Гомосексуалист 21 года поступил в больницу с желтухой, жалобами на светлые испражнения и темную мочу. При обследовании обнаружено незначительное увеличение печени. В крови: повышен общий билирубин, аспартаттрансаминаза и щелочная фосфатаза. При серологическом анализе на наличие вирусного гепатита В установлено: HBs-Аg – «+»,HBе-Аg– «+», анти-HBs- – «-», анти-HBс- IgМ – «+». Как можно интерпретировать полученные результаты? A. у больного гепатоцеллюлярная карцинома; B. у больного печеночная кома; C. У больного ВИЧ-инфекция; D. У больного хронический гепатит В; E. У больного острый гепатит В. 3. В геном вируса осповакцины был интегрирован ген вируса гепатита В, который несет информацию о HBs-Аg. Рекомбинантный вирус планируется использовать в качестве препарата для вакцинации. К какому типу принадлежит полученная таким образом вакцина? A. генно-инженерная; B. ассоциированная; C. комбинированная; D. химическая; E. синтетическая. 4. При обследовании донора, длительно не сдававшего кровь, методом ИФА выявлены анти- HBs– антитела. О чем свидетельствует в данном случае положительный результат ИФА? A. о хроническом гепатите С; B. об остром гепатите В; C. о хроническом гепатите В; D. о перенесенном гепатите В; E. об остром гепатите С. 5. У больного выявлен гепатит. Какой из гепатитов вызывается РНК-геномным вирусом, неспособным репродуцироваться без HBs-Аg? A. гепатит D; B. гепатит А;
C. гепатит В; D. гепатит С; E. гепатит Е. 1. 2. 3. 4. 5. 6.
Алгоритм лабораторной работы: Проверка уровня подготовки студентов к занятию: тесты и опрос. Этиология и эпидемиология вирусных гепатитов. Изучение таксономии и морфологии возбудителей вирусных гепатитов. Изучение методов лабораторной диагностики вирусных гепатитов. Микроскопия демонстрационных препаратов и их зарисовка. Оформление протокола.