Cuenca lechera Cajamarca
500,000 litros de leche por dĂa
Fasciola hepatica
Investigaciones sobre Fasciola hepatica en Cajamarca
El Problema • Fasciolosis: parasitosis mas importante en ganado vacuno y ovino. Importantes pérdidas. • Control: dosificaciones periodicas (alto costo para el ganadero S/. 30 – 50.00 /animal/año). • Fasciolicidas: Triclabendazole y levamisoles = resistencia parasitaria?. • Residuos químicos. • Las infecciones humanas son frecuentes en Cajamarca.
Ciclo de Vida Fasciola hepatica
多Que conocemos sobre esta parasitosis en Cajamarca?
“Epidemiología de la Fasciolosis en el valle inter-andino de Cajamarca, Perú”
Claxton, J.R., Zambrano, H., Ortiz, P., Delgado, E., Escurra, E. and Clarkson, M.J.
Parasitology International (1998) 46:281-288
OBJETIVO
Conocer la epidemiolog铆a de la infecci贸n en ganado lechero en el valle de Cajamarca
MATERIALES Y METODOS Estudio longitudinal prospectivo Seis establos participantes Se seleccionaron 30 animales por establo: 10 terneros, 10 vaquillonas y 10 vacas adultas. Monitoreo mensual en busca de huevos de F. hepatica en heces Muestras de sangre mensuales: bioquímica, hematología, inmunología Bioquímica: GLDH y gamma GT Hematología: Recuento total, diferencial, hematocrito, Hb Inmunología: Anticuerpos (ELISA y Western Blot)
RESULTADOS
CONCLUSIONES • Existe un ciclo anual definido de infección • Ganado adquiere la infección entre Diciembre a Mayo de cada año. • Producción máxima de huevos: Agosto-Setiembre • Período de mayor infección en caracoles: Enero-Marzo • Período prepatente en ganado: 11 semanas
“Control estratégico de Fasciolosis en el valle inter-andino de Cajamarca, Peru” J.R. Claxton, H. Zambrano, P. Ortiz, E. Delgado, E. Escurra, and M.J. Clarkson
Veterinary Record (1998) 143, 42-45
Trabajos publicados 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.
McGarry J.W., P.L. Ortiz, J.E. Hodgkinson, I. Goreish and D.J.L. Williams (2007). PCR-based differentiation of Fasciola species (Trematoda: Fasciolidae), using primers based on RAPD-derived sequences. Annals of Tropical Medicine and Parasitology Vol. 101, No. 5, 415–421. M.R. Salimi-Bejestani, J.W. McGarry, S. Felstead, P. Ortiz, A. Akca and D.J.L. Williams. (2005). Development of an antibody-detection ELISA for Fasciola hepatica and evaluation against a commercially available test. Res Vet Sci. Apr; 78 (2): 177- 81. Edith Incil O., Elio Delgado A., María Cabrera N., Pedro Ortiz O. (2001). Utilidad de la Técnica de ELISA y Western Blot en diagnóstico de fasciolosis humana. Revista Caxamarca Nº 9, Julio 2001, publicada por la Oficina de Investigaciones de la Universidad Nacional de Cajamarca. P.L. Ortiz, J.R. Claxton, M.J. Clarkson, J. McGarry, D.J.L. Williams. (2000). The specificity of antibody responses in cattle naturally exposed to Fasciola hepatica. Veterinary Parasitology 93, 121134. P.Ortiz, M. Cabrera, J. Jave, J. Claxton, D. Williams. Human fascioliasis: prevalence and treatment in a rural area of Peru (2000). Infectious Diseases Review 2(1):42-46. Claxton, J.R., Sutherst, J., Ortiz, P. and Clarkson, M.J. (1999). The effect of Cyclic Temperatures on Growth of Fasciola hepatica and Lymnaea viatrix. The Veterinary Journal 157:166-171. J.R. Claxton, H. Zambrano, P. Ortiz, E. Delgado, E. Escurra, and M.J. Clarkson. (1998). Strategic control of fasciolosis in the inter-Andean valley of Cajamarca, Peru. Veterinary Record 143, 42-45. Claxton, J.R., Zambrano, H., Ortiz, P., Delgado, E., Escurra, E. and Clarkson, M.J. (1997). The epidemiology of fasciolosis in the inter-Andean valley of Cajamarca, Peru. Parasitology International 46:281-288. Ortiz, P. (1998). Humoral immune response to Fasciola hepatica in experimentally infected calves and in cattle naturally exposed to Fasciolosis in Cajamarca, Peru. PhD Thesis, University of Liverpool, England. Claxton, J.R., Harrison, L.J.S. and Ortiz, P., (1995). Identificación de la Fasciola en Cajamarca mediante la utilización de sondas de ADN. Revista de Investigaciones Pecuarias IVITA 7(2): 133136.
Trabajos de investigaci贸n en actual ejecuci贸n
“Design of effective and sustainable control strategies for LIVER FLUKE in Europe�
Proposal reference number: FP6-023025 08/02/2005
“Diseño de estrategias de control sostenibles y efectivas para Fasciola hepatica en Europa”
Proposal reference number: FP6-023025 08/02/2005
Carta oficial de aceptaci贸n del Proyecto
OBJETIVOS GENERALES 1. Mejorar el entendimiento de la epidemiología de Fasciola hepatica que conduzca a modelos predictivos con estrategias de control basadas en características locales y regionales, entendiendo la diversidad genética de las poblaciones de fasciola en Europa y en países INCO. 2. Mejorar el conocimiento de los mecanismos de la acción fasciolicida y resistencia a los fasciolicidas, de tal manera que estos agentes puedan ser usados solo cuando y donde se requieran, disminuyendo el empleo de drogas y por lo tanto un menor número de residuos de drogas en los animales y el medio ambiente. 3. Desarrollo de estrategias de control inmunoprofilácticas, que conduzcan a un menor uso de drogas, con menor presencia de residuos en alimentos de origen animal.
Participant ID
Short name
Participant
State
1
UCO
University of Córdoba, España
Spain
2
DCU
Dublin City University, Irlanda
Ireland
3
UCD
University College Dublin, Irlanda
Ireland
4
UWA
University of Aberystwyth, Gales
UK
5
UEX
University of Exceter, Inglaterra
UK
6
LSTM
University of Liverpool, Inglaterra
UK
7
WSIP
Witold Stefanski Institute of Parasitology Polish Academy of Sciences, Polonia Queen´s University Belfast, Irlanda
Poland
8
QUB
9
ID-Lelystad
ID-Lelystad, Instituut voor Dierhouderij en Diergezondheid BV, part of the Animal Sciences Group of Wageningen UR, Netherlands
Netherlands
10
AUA
Agricultural University of Athens, Grecia
Greece
11
IEPP-BASc
12
ARG
Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires, Argentina
13
OCF
Oswaldo Cruz Foundation, Fiocruz, Brasil
Brazil
14
UNC
Universidad Nacional de Cajamarca, Peru
Perú
15
LARA
Lara Media Ltd
Institute of Experimental Pathology and Parasitology - Bulgaria
UK
CORDOBA – FEBRERO 2006
Bulgaria
Argentina
Ireland
BELFAST – ABRIL 2007
WP3. INMUNOPROFILAXIS: Actividades 1er A単o
Empleo de vacunas experimentales contra Fasciola hepatica
AntĂgenos
Proteins identified by in vivo and in vitro ES proteomic analysis
pI
3
10 kDa
Adult liver fluke Tegument From Sandra O’Neill
5 4
97.0
1 FABP
66.0
2 GST
45.0
3 Tpx/Prx 4 GAPDH
2
5 Actin
3 30.0
20.1
1 14.4
Fasciola hepatica Tegument 060814Teg Silver stained 12.5% Acryl. 2D SDS-PAGE
Vacunas experimentales contra Fasciola hepatica • FABP = Fatty accid binding proteins • Cathepsin L proteases • Thioredoxine peroxidase
FABP = Fatty accid binding proteins Captan ácidos grasos del huésped, emplean en metabolismo. FABP: Protección ratones hasta 78% Terneros hasta 55% (Hillyer, 1985; Hillyer et al., 1987).
SM14: Protección significativa en conejos contra S. mansoni y en ratones contra F. hepatica. Estudios adicionales (Almeida et al., 2003) Ovinos y ratones: Protección contra metacercarias de F. hepatica, los animales estuvieron completamente libres de daño hepático.
Conferencia sobre SM-14
ANTÍGENO SM14 Proteína Sm14, así como péptidos derivados de esta, confieren protección contra infección de S. mansoni y Fasciola hepatica. Una respuesta Th1 relativa a esta proteína esta asociada a resistencia contra esquistosomas en individuos de áreas endémicas de Egipto y Brasil. Su estructura fue inicialmente deducida por modelamiento molecular y recientemente resuelta por cristalografía y RMN. Tendler et al. (1996) Proc Natl Acad Sci U S A. 93(1):269-73 Vilar et al. (2003) Vaccine. 22(1):137-44 Brito et al. (2000) Scand J Immunol. 51(6):595-601 Angelucci et al. (2004) Biochemistry. 43(41):13000-11
Almeida et al. (2003) Parasite Immunol. 25(3):135-7 Al-Sherbiny et al. (2003) Acta Trop. 88(2):117-30 Fonseca et al. (2005) Microbes Infect. 7(2):204-12 Ramos et al. Manuscrito em preparação
Cathepsin L proteases Funciones: • Migración • Alimentación CL1 y CL2: Mulcahy 1988, 72% protección, mezcla de proteinas CL: Van Milligen et al. (2000), 90% protección en ratas. Dalton et al, 2003: ovinos y vacunos: protección 33% al 79%.
Thioredoxine peroxidase • Proteína antioxidante • Protección contra metabolitos de oxígeno reactivo generados por procesos metabólicos y/o células inmunes efectoras. Salazar et al. 2000 McGonigle et al. 1997 Salazar-Calderon et al. 2001
Vacuna exitosa: Combinación de antígenos “Fasciola antigens as vaccines against fascioliasis and schistosomiasis” Hillyer, GV; Journal of Helminthology (2005) 79, 241–247
Diseùo del Experimento Cinco Grupos Animales: 35 animales en total 7 animales por grupo 1. FABP (recombinant S. mansoni FABP – Sm14). 2. CL1 (recombinant F. hepatica cathepsin L1). 3. TPx (recombinant F. hepatica thioredoxin peroxidase). 4. CL1 + TPx + FABP 5. Grupo control
Vacunas Experimentales
Inmunizaci贸n
Infecci贸n
Recolecci贸n de Muestras
-Anticuerpos -Bioqu铆mica -Hemograma -Examen de heces
Implementaci贸n de laboratorios
Trabajo Futuro
“Resistencia de Fasciola hepatica al Triclabendazole en ganado vacuno lechero naturalmente infectado”
Tesis de Maestría Universidad de Liverpool - Inglaterra
OBJETIVO
Determinar la resistencia de Fasciola hepatica al Triclabendazole en ganado vacuno lechero naturalmente infectado.
METODOLOGIA
128 animales 9 establos lecheros Análisis de heces: Antes, 14 días y 28 días después de dosificación Tratamiento: Fasinex Medición del nivel de anticuerpos en sangre Medición del nivel de antígeno en heces
RESULTADOS
En proceso
“Biodisponibilidad relativa de diferentes formulaciones orales de Triclabendazole”
• Universidad Nacional de Cajamarca • Laboratorio de Farmacología, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires, Argentina.
Plasma concentration (µg/mL)
Comparative systemic availabilities of the main metabolites (sulphoxides) recovered after Albendazole and Triclabendazole treatments in sheep
10
TCBZSO
ABZ-sulphoxide (ABZSO) Cmax: 1.90 µg/ml AUC: 46.0 µg.h/ml
1
ABZSO TCBZ-sulphoxide (TCBZSO)
Cmax: 14.1 µg/ml AUC: 654 µg.h/ml
0.1
0
20
40
60
80
100
120
140
Time (h) IR treatment
160
OBJETIVO • Comparar la biodisponibilidad relativa de diferentes preparados comerciales conteniendo como principio activo triclabendazole en bovinos.
METODOLOGIA • 8 grupos de animales • Dosificados con diferentes formulaciones de Triclabendazole, comercialmente disponibles. • Recoleccion muestras sangre: 1, 3, 6, 9, 12, 18, 24, 30, 36, 48, 72, 120, 144 y 168 horas (7 días) post-tratamiento. • Plasma analizado por HPLC
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