Atlas de Microbiología

ATLAS DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA II

Sarah Guajan Orellana Annelise Sandoval Pineda

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA CURSO: MICROBIOLOGÍA II DRA. Jacqueline Escobar, DRA. Andrea Muñoz, DRA. Andrea Pérez AUX. Kimberly Perez

ATLAS DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA II AÑO 2016

Sarah Guajan Orellana 201322103 Annelise Sandoval Pineda 201400383 Guatemala 12 de septiembre de 2016

Indice Pág.

Introducción……………………………………….….…………..1 PRACTICA 1 Toma de muestras para análisis microbiológico……………….2-4 PRACTICA 2 Streptococcus……………………………………….……………..4-9 Staphylococcus………………………………………….…………9-15 PRACTICA 3 – LACTOSA POSITIVAS Escherichia coli………………….…………………………………16-19 Enterobacter sp. …………………………………………………..20-23 Klebsiella…….……………………………………………………..23-26 PRACTICA 4 – LACTOSA NEGATIVAS Salmonella sp. …………………………………………………….27-30 Proteus sp. ………………………………………………………..31-34 PRACTICA 5 Pasteurella multocida…………………………………………….35-38 PRACTICA 6 Brucella abortus …………………………………………………39-41 PRACTICA 7 Bacillus anthracis………………………………… ……………..42-44 PRACTICA 8 Pseudomonas sp. …………………………………………………45-48 PRACTICA 9 Clostridium sp. ………………………………………………… …49-52 Bibliografía………………………………………………………… 53

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INTRODUCCIÓN En el siguiente atlas se encuentran ciertas bacterias con sus respectivos medios de cultivo, coloraciones y pruebas bioquímicas.

Es importante conocer las características de las bacterias en cada medio a utilizar, ya que por medio de estos se puede dar a conocer qué tipo de microorganismo está causando la enfermedad a los animales.

También es importante debido a que de esta manera se puede recomendar un antibiótico sabiendo que será el más eficiente para acabar con determinada enfermedad o infección.

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PRACTICA 1 Toma de muestras para análisis microbiológico 1. Hisopado Hisopado ótico en perro raza Golden Retriver Instrumentos: hisopo de algodón esteril, tubo o bolsa esteril,o culturette.

Pasos: 1. Raspar la zona afectada evitando el contacto con cualquier otra parte del cuerpo 2. Hacer girar sobre el mismo hisopo, frotando contra las paredes tisulares para descamar células.

3. Embeber adecuadamente la muestra con el medio de trasporte.

4. Romper el mango sobrante del hisopo que estuvo en contacto con las manos.

5. Cerrar el tubo o bolsa evitando contaminar su interior.

6. Identificarlo y enviarlo a laboratorio a 4oC Medios de trasporte:  Culturette.  Stuart  Cary y Blaird Microorganismos que se pueden aislar de esta muestra:  Staphylococcus sp.  Pseudomonas sp.  Proteus sp.  E. Coli 2. Orina – cistocentésis antepubica En gato macho de 2 años de edad.

Instrumentos: aguja calibre 22 o 23 de 25 a 38 cm de largo, jeringa de 10 mL,

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Pasos: 1. Posicionar al animal en decúbito dorsal.

2. Rasurar y realizar asepsia.

3. Palpar y fijar la vejiga con la mano.

4. Punción en sentido caudal respecto del ombligo y sobre la línea blanca o media ventral.

5. Aspirar la muestra.

6. Identificarlo y enviarlo a laboratorio a 4oC Microorganismos que se pueden aislar de esta muestra:  Escherichia coli  Micoplasma  clamidia  Lactobacilllus  Proteus  Candida albicans  Haemophilus influenzae  Mycobacterium tuberculosis 3. Prueba de california mastitis test (CMT) Vaca raza Jersey Instrumentos: paleta con cuatro compartimientos, reactivo Alkik Aril sulfonato, jabón, desinfectante, tollas de papel, recipientes estériles.

Pasos: 1.

Sujetar a la vaca adecuadamente 2.

Realizar limpieza y desinfección de ubres.

3.

Secar con toallas de papel 4.

Descartar los primeros chorros de leche.

5.

Posicionar la paleta debajo de las ubres.

6.

Ordeñar cada cuarto y depositar aproximadamente 1 ml de leche en cada compartimiento de la paleta.

7.

Agregar reactivo en la misma cantidad.

8.

Mezclar con movimientos de rotación.

9.

Observar si existen cambios en la leche.

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10. Desinfectar y sellar la ubre de la punta hace la base con yodo.

Dependiendo del grado de infección los resultados pueden ser:  Negativo: sin cambio en coloración y consistencia  Grado 1: no hay formación de gel.  Grado 2: formación de gel y espesamiento en la leche.  Grado 3: leche bastante gelificada.

Microorganismos que se pueden causar mastitis:  Streptococcus agalactiae  Staphylococcus aureus  Eschericha coli  Streptococcus uberis  Streptococcus dysgalactiae  Clostridium perfringens.

PRACTICA 2 Streptococcus Descripción del microorganismo  Gram +  Inmóviles  No producen pigmentos  Algunas especies poseen capsula  Anaerobios facultativos  Saprofitos en el medio ambiente  No esporulados  Hemolisinas: estreptolisinas O, Estreptolisina S.  Enzimas: estreptocinasa, hialuronidasa, estreptodornasa,  toxina eritrogena, Proteina M.  cultivo en jarra de microaerobiosis,  incubación 24-48 horas 37oC Especies Enfermedades importantes S. pyogenes

enfermedad aguda en garganta, fiebre escarlata, piodermas, linfadenitis y erisipela en humanos.

Muestras para diagnostico

Tipo de hemolisis

Fariengeas, hisopado bucal.

Beta

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S. agalactiae S. canis

Mastitis en bovinos, endocarditis, septicemias.

Otitis, metritis, abscesos, faringitis.

S. dysgalactiae

mastitis bovina, lesiones articulares, infecciones urinarias

S. equinus

Papera, moquillo.

S. pneumoniae

Neumonía y meningitis.

Leche, sangre.

Beta

Hisopados vaginales, traqueales, del conducto auditivo.

Leche, liquido articular, amígdalas, hisopado vaginal, orina.

Sangre, líquido cefalorraquídeo.

Fluidos de vías respiratorias.

Beta

Beta

Gamma Gamma

Marcha bacteriológica Medio de cultivo utilizados: Agar sangre diseñado para facilitar el crecimiento de microorganismos exigentes, bacterias Gram-positivas .Contiene una mezcla de peptonas particularmente adaptada al cultivo de microorganismos exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite la determinación de la hemólisis, criterio básico en la orientación hacia la identificación bacteriana.

Resultado: Hemolisis Beta, colonias blancas o grises, lisas con bordes redondos, forma Puntiforme. 2 mm de tamaño.

Colorantes

Tinción de Gram Permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), según se comporten ante esta tinción. La diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gramtienen una capa de peptidoglicano más fina y una capa lipopolisacarídica externa. Tras la tinción con el primer colorante (Cristal violeta) se efectúa un lavado con etanol que

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arrastrará al colorante sólo en las Gram (-), mientras que en las Gram (+) el colorante queda retenido y las células permanecerán azules. Las células Gram (-) se teñirán después con un colorante de contraste (safranina) para que puedan observarse.

Resultado: agrupados en cadenas. Gram +.

Pruebas bioquímicas: Caldo base rojo fenol: la fermentación es un proceso metabólico de óxidoreducción que ocurre en un medio ambiente anaerobio y en lugar de oxígeno, un sustrato orgánico sirve como el aceptor final de hidrogeno. En los sistemas de prueba bacteriológicos, este proceso se detecta observando cambios de color en indicadores pH a medida que se forman productos ácidos.

CBRF+ salicina: se utiliza con el propósito de determinar si la bacteria puede utilizar la salicina como carbohidrato en específico.

Resultado: Positivo, el medio se ve amarillo por producción de ácidos a partir de la fermentación es decir que si existe utilización del carbohidrato.

CBRF+ rafinosa: se utiliza con el propósito de determinar si la bacteria puede utilizar la rafinosa en específico.

Resultado: Negativo, el medio se ve rojo porque no hay producción de ácidos a partir de la fermentación es decir que no existe utilización del carbohidrato.

CBRF+ threalosa: se utiliza con el propósito de

determinar si la bacteria puede utilizar la threalosa en específico.

Resultado: Positivo, el medio se ve amarillo por producción de ácidos a partir de la fermentación es decir que si existe utilización del carbohidrato.

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CBRF+ manitol: se utiliza con el propósito de determinar si la bacteria puede utilizar el manitol en específico.

Resultado: Negativo, el medio se ve rojo porque no hay producción de ácidos a partir de la fermentación es decir que no existe utilización del carbohidrato.

CBRF+ lactosa: se utiliza con el propósito de determinar si la bacteria puede utilizar la lactosa como carbohidrato en específico.

Resultado: Positivo, el medio se ve amarillo por producción de ácidos a partir de la fermentación es decir que si existe utilización del carbohidrato.

Catalasa: La catalasa es una enzima que descompone

el peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno según la siguiente reacción: 2H2O2 2H2O + O2 (burbujas de gas).

Positiva: Una prueba positiva está dada por la aparición rápida y sostenida de burbujas o efervescencia.

Negativa: Unas pocas burbujas pequeñas después de 20 a 30 segundos se considera un resultado negativo. O no se observan burbujas.

Falsas Positivas: Los eritrocitos poseen catalasa, por lo cual debe tenerse cuidado de no tomar eritrocitos del agar sangre junto con el material de la colonia.

Resultado: negativo. No existe producción de burbujas.

Coagulasa: La coagulasa es una proteína, que tiene actividad similar a la protombina, capaz de convertir el fibrinógeno en fibrina, lo que da como resultado la formación de un coágulo visible en los sistemas apropiados.

Resultado: positivo. Se observa formación de coagulo.

Prueba de susceptibilidad a los antibióticos

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Antibiograma: El objetivo del antibiograma es

el de medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es la responsable de una infección a uno o varios antibióticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un tratamiento antibiótico.

Sensible, si existe una probabilidad de éxito terapéutico.

buena

Resistente, si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy reducida.

Intermedia, cuando el éxito terapéutico es imprevisible.

ANTIBIOTICO

TAMAÑO HALO

RESISTENCIA

SENSIBILIDAD

PENICILINA

28mm

X

GENTAMICINA

20mm

ENROFLOXACIN A

18mm

CEFALOTINA

28mm

X

CEFAZOLIN

29mm

X

KANAMICINA

12mm

TETRACICLINA

28mm

CIPROFLOXACI NA

20mm

X

X

X

X

X

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Resultado: las bacterias que presentan sensibilidad ante los antibióticos son los recomendados como tratamiento.

Observaciones: se concluye que la especie aislada de la muestra de leche fue Streptococcus agalactie. Esto debido a la formación de la beta hemolisis, las características macroscópicas y por las pruebas bioquímicas a diferencia de otras especies esta es positiva al carbohidrato salicina.

Staphylococcus             

Gram + Cocos esféricos Inmóvil Sin cápsula No esporas Aerobio En racimos Algunos producen pigmentos Algunos hemolíticos Comensal de piel y mucosas Se dividen en ECN y ECP Coagulasa y proteínas de superficie, proteína A y ácidos teicoicos Enzimas: coagulasa, catalasa, hialuronidasa, lipasa, nucleasa, fibrinolisina,

Especies importantes S. intermedius

Enfermedades

S. aureus

Mastitis bovina, botriomicosis equina Epedirmitis exudativa en cerdos

S. hycus

Otitis, conjuntivitis .

Muestras para diagnostico Hisopado de oreja o de conjuntiva alrededor del ojo.

Leche en bovinos Raspado de piel o muestra del exudado

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Marcha bacteriológica Medios de cultivo utilizados: Agar sangre: diseñado para facilitar el crecimiento de microorganismos exigentes, bacterias Gram-positivas .Contiene una mezcla de peptonas particularmente adaptada al cultivo de microorganismos exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite la determinación de la hemólisis, criterio básico en la orientación hacia la identificación bacteriana.

Resultado: colonias blancas, brillantes y con hemólisis.

Tioglicolato: Es un medio líquido formulado para promover el crecimiento de una amplia variedad de anaeróbicos exigentes y microorganismos microaerófilos.

Resultado: se observa turbidez, lo que indica crecimiento de Staphylococcus.

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Coloración

Resultado: gram +, se agrupan en racimos.

Tinción de Gram: permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram-). Diferencia estructural de la pared celular de ambos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gramtienen una capa de peptidoglicano fina y una capa lipopolisacarídica externa. Tras la tinción con cistal violeta se efectúa un lavado con etanol que arrastrará al colorante en las Gram (-), mientras que en las Gram (+) el colorante queda retenido y las células permanecerán azules. Las células Gram (-) se teñirán con safranina para que puedan observarse.

Pruebas bioquímicas: CBRF + TREHALOSA: Se utiliza para identificación bioquímica basándose en la capacidad de fermentar la trehalosa.

La fermentación de la trehalosa se manifiesta por cambio de color del indicador rojo de fenol que vira de rojo a amarillo.

Resultado: positivo, el medio se observa de color amarillo lo que indica que hubo fermentación del carbohidrato, trehalosa.

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CBRF + LACTOSA: se utiliza con el propósito de determinar si la bacteria puede fermentar la lactosa en específico.

Resultado: positivo, el medio se observa de color amarillo lo que indica que hubo fermentación de lactosa.

CBRF + MANITOL: se utiliza con el propósito de determinar si la bacteria puede fermentar el manitol en específico.

Resultado: positivo, el medio se observa de color amarillo lo que indica que hubo fermentación del manitol.

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CBRF + MALTOSA: se utiliza con el propósito de determinar si la bacteria puede fermentar la maltosa en específico.

Resultados: positivo, el medio se observa de color amarillo lo que indica que hubo fermentación de maltosa.

CBRF + XILOSA: se utiliza con el propósito de determinar si la bacteria puede fermentar la xilosa en específico.

Resultados: negativo, el medio se observa de color rojo lo que indica que no hubo fermentación de xilosa.

PLASMA DE CONEJO: El plasma de conejo citratado funciona para detectar microorganismos productores de coagulasa. Esta enzima, en su forma libre produce la coagulación del plasma ya que activa una globulina parecida a la protrombina.

Resultado: coagulasa positivo

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CATALASA: Las moléculas de peróxido de hidrógeno son separadas mediante la enzima Catalasa en 2 moléculas de H2O y una de O2 que se observa en forma de burbujas. Esta es producida por células con metabolismo aeróbico.

Resultado: catalasa positivo

Susceptibilidad a antibióticos Antibiograma: El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es la responsable de una infección a uno o varios antibióticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un tratamiento antibiótico.

El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolución de las resistencias bacterianas.

Sensible, si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico.

Resistente, si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy reducida.

Intermedia, cuando el terapéutico es imprevisible.

éxito

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Enrofloxacina Cefalotina Cefazolin Kanamicina Tetraciclina Ciprofloxacina Penicilina Gentamicina

28mm 26mm 27mm 15mm 0mm 30mm 15mm 20mm

sensible sensible sensible resistente resistente sensible resistente sensible

Resultado: se recomienda utilizar enrofloxacina como antibiรณtico contra infecciones por Staphylococcus.

Y como segundo tratamiento, cefalotina.

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PRACTICA 3 – LACTOSA POSITIVA Escherichia coli           

Gram – Móvil Bacilos rectos Aislada o en pares Pilis o flagelos Antígeno O, Ag K, Ag H, Ag F. Distribución mundial Transmisión vía digestiva Shigatoxina, CNF, ST y LT. En zonas húmedas y cálidas.

Suelo y agua son fuentes de contaminación Especies importantes E. coli

Enfermedades Provoca diarrea blanca amarillenta, colitis hemorrágica

Muestras para diagnostico Heces, hisopados rectales, abscesos.

Marcha bateriológica Medios de cultivo utilizados: Agar MacConkey: selectivo y diferencial para el aislamiento de Enterobacterias. El medio contiene sales biliares y cristal violeta que son inhibidores de la microbiota Gram +. La lactosa junto al indicador rojo neutro sirven para la comprobación de la degradación de dicho azúcar, dividiendo el grupo en 2: Bacterias fermentadoras y no fermentadoras de Lactosa.

Resultado: colonias opacas de consistencia seca con bordes enteros.

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Agar Rambach: medio selectivo y diferencial para identificar a Salmonella. Aunque permite el crecimiento de enterobacteriaceas. El medio detecta actividad βgalactosidasa (de enterobacterias), por lo que las colonias toman un color dependiendo de la presencia de la βgalactosidasa. (el desoxicolato: inhibe a las bacterias Gram positivas) Resultado: Color: azul verdoso. Esta bacteria posee la enzima βgalactosidasa, la cual al entrar en contacto con un cromógeno del agar se desdobla produciendo una coloración azul verdosa.

Pruebas bioquímicas:

Medio SIM: determina si la bacteria es móvil o inmóvil, si es capaz de liberar ácido sulfhídrico por acción enzimática de los aminoácidos que contienen azufre produciendo una reacción visible de color negro y por último la capacidad de desdoblar el indol de la molécula de triptófano. El desarrollo de un color rojofucsia en la interfase del reactivo y de los medios segundos después de añadir el reactivo de Kovacs indica la presencia de indol y por lo tanto una prueba positiva.

Formación de anillo rojo en la superficie.

Resultados: movilidad positiva: se observa turbiedad del medio. H2S negativa: no color negro.

Indol positivo: se observa anillo rojo en la superficie. Si tiene triptofanasa.

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MR: determina la capacidad de un microorganismo para producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. La prueba Rojo de metilo es cuantitativa para la producción de ácido y requiere que los microorganismos produzcan ácidos fuertes a partir de la glucosa, de forma que el medio del pH descienda a menos de 4.4. Esta distinción puede hacerse a través del indicador Rojo de metilo que presenta color amarillo por encima de un pH de 5.1 y solo presenta color rojo cuando el pH desciende a 4.4.

Resultado: el color rojo naranja en la superficie indica positivo.

presencia de acetoina.

VP: determinar la capacidad de algunas bacterias para generar un producto final neutro (acetoina y 2,3 Butanodiol) a partir de la fermentación de la glucosa. Los productos neutros formados en la presencia de oxigeno atmosférico, alcalisis (Hidróxido de Potasio al 40%) y peptonas, se oxidan en diacetilo, reactante para el color producido en la reacción. El Alfa naftol actúa como catalizador para revelar un complejo color rojo.

Interpretación: positiva está indicada por el desarrollo de un color rojo a los 15 minutos. Una prueba negativa da un color cobrizo.

Resultado: negativo. Indica que no hay

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coloración no es completamente azul.

Agar Simmons Citrato: Generalmente los microorganismos que emplean el citrato como única fuente de carbono, utilizan sales de amonio como única fuente de nitrógeno. El metabolismo del citrato realizado, por algunas bacterias se realiza por el ciclo de krebs y requiere el desdoblamiento del citrato por la enzima citritasa, en presencia de magnesio o manganeso y de transportadores como citrato permeasas.

Interpretación: desarrollo de un color azul intenso en 24-48 horas indica una prueba positiva. La prueba también es positiva en ausencia de color azul si existe crecimiento del microorganismo a lo largo de la estría de inoculación.

Resultado: negativo. No utiliza el citrato como fuente de carbono por lo que la

Enterobacter sp.

Descripción del microorganismo  Bastones  Gram –  Aerobios y anaerobios facultativos  No esporulados  Móviles la mayoría  Producción de toxina similar a la toxina shiga  Incubación 24 horas a 370C Especie E. aerogenes

E. asburiae

enfermedad Infección tracto urinario y respiratorio, septicemia.

Infecciones urinarias, respiratorias, septicemia.

Muestra Orina, sangre, heces.

Sangre, orina, heces, hisopado de tracto respiratorio y de heridas.

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E. sakazakii

E. canderugenus

Bacteremia, meningitis, abscesos cerebrales Neumonía, bacteremia, infección tracto respiratorio.

Osteomielitis.

Sangre, aspirado de abscesos Sangre, liquido cefalorraquídeo,

Marcha bacteriológica Medios de cultivo Agar macConkey: Agar selectivo y diferencial

para el aislamiento de Enterobacterias. El medio contiene sales biliares y cristal violeta que son inhibidores de la microbiota Gram positiva. La lactosa junto al indicador Rojo neutro sirven para la comprobación de la degradación de dicho azúcar, dividiendo el grupo en 2: Bacterias fermentadoras y no fermentadoras de Lactosa.

Las colonias fermentadoras de lactosa dan un color rosado. Las colonias no fermentadoras de lactosa son incoloras, lo anterior por el comportamiento del

indicador de pH Resultado: forma redonda,textura brillante y Cremosa, tamaño mediano, color violeta/fuscia.

Agar Rambach: Es un medio

selectivo (el desoxicolato: inhibe a las bacterias Gram positivas) y diferencial para identificar a Salmonella. Aunque permite el crecimiento de enterobacteriaceas. El medio detecta actividad β-galactosidasa (de enterobacterias), por lo que las colonias toman un color dependiendo de la presencia de la β-galactosidasa.

Resultado: Color: Azul/ verdoso. Esta bacteria posee la enzima Betagalactosidasa, la cual al entrar en contacto con un cromógeno del agar se desdobla produciendo una coloración que tiende a ser de azul a verde.

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Medios para pruebas bioquímicas

Medio SIM : Determina si la bacteria es

anillo rojo en la superficie.

móvil o inmóvil, si es capaz de liberar ácido sulfhídrico por acción enzimática de los aminoácidos que contienen azufre produciendo una reacción visible de color negro y por último la capacidad de desdoblar el indol de la molécula de triptófano.

El desarrollo de un color rojo-fucsia en la interfase del reactivo y de los medios segundos después de añadir el reactivo de Kovacs indica la presencia de indol y por lo tanto una prueba positiva. Formación de

Resultados: movilidad positiva: se observa turbiedad del medio.H2S negativa: no hay ennegrecimiento. Indol negativo: no se observa anillo rojo en la superficie. No tiene enzima triptofanasa.

Agar

Simmons

Citrato:

Generalmente los microorganismos que emplean el citrato como única fuente de carbono, utilizan sales de amonio como única fuente de nitrógeno. El metabolismo del citrato realizado, por algunas bacterias se realiza por el ciclo de krebs y requiere el desdoblamiento del citrato por la enzima citritasa, en presencia de magnesio o manganeso y de transportadores como citrato permeasas.

Interpretación: desarrollo de un color azul intenso en 24-48 horas indica una prueba positiva. La prueba también es positiva en ausencia de color azul si existe crecimiento del microorganismo a lo largo de la estría de inoculación.

Resultado: positivo: utiliza el citrato como fuente de carbono.

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MR: Determina la capacidad de un microorganismo

para producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. La prueba Rojo de metilo es cuantitativa para la producción de ácido y requiere que los microorganismos produzcan ácidos fuertes a partir de la glucosa, de forma que el medio del pH descienda a menos de 4.4. Esta distinción puede hacerse a través del indicador Rojo de metilo que presenta color amarillo por encima de un pH de 5.1 y solo presenta color rojo cuando el pH desciende a 4.4.

El desarrollo de un color rojo estable en la superficie del medio indica positivo. Negativo: observación de un color amarillo.

Resultado: Negativo. Indica que la producción de ácido no es suficiente como para bajar el pH a 4 VP: determinar la capacidad de algunas bacterias para generar un producto final neutro (acetoina y 2,3 Butanodiol) a partir de la fermentación de la glucosa.

Los productos neutros formados en la presencia de oxigeno atmosférico, alcalisis (Hidróxido de Potasio al 40%) y peptonas, se oxidan en diacetilo, reactante para el color producido en la reacción. El Alfa naftol actúa como catalizador para revelar un complejo color rojo.

Interpretación: positiva está indicada por el desarrollo de un color rojo a los 15 minutos. Una prueba negativa da un color cobrizo.

Resultado: positivo: indica la presencia de acetoina.

Observaciones: se concluye que Enterobacter se puede diferenciar de Klebsiella por la textura de las colonias y se descarta Enterobacter sakazakii por la producción de pigmento amarillo brillante y por qué suele formar colonias duras.

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Klebsiella    

Gram – Ag O, Ag K, LPS No todas las colonias son mucoides Distribuida en la naturaleza y en tracto intestinal

Especies importantes K. pneumoniae

Enfermedades Metritis, cervitis, septicemias, mastitis, neumonía.

Muestras para diagnostico Hisopado de orofaringe.

Marcha bacteriológica Medios de cultivo utilizados: Agar MacConkey: selectivo y diferencial para el aislamiento de Enterobacterias. El medio contiene sales biliares y cristal violeta que son inhibidores de la microbiota Gram +.

La lactosa junto al indicador rojo neutro sirven para la comprobación de la degradación de dicho azúcar, dividiendo el grupo en 2: Bacterias fermentadoras y no fermentadoras de Lactosa.

Resultado: colonias convexas, lisas, mucoides, presenta “ojo de pescado” debido a fermentación de lactosa.

Agar Rambach: medio selectivo y diferencial para identificar a Salmonella..

El medio detecta actividad β-galactosidasa por lo que las colonias toman un color dependiendo de la presencia de la βgalactosidasa.

Resultado: Color: azul violeta. Esta bacteria posee la enzima β-galactosidasa, la cual al entrar en contacto con un cromógeno del agar se desdobla produciendo una coloración azul violeta.

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Pruebas bioquímicas:

Medio SIM: determina si la bacteria es móvil o inmóvil, si es capaz de liberar ácido sulfhídrico por acción enzimática de los aminoácidos que contienen azufre produciendo una reacción visible de color negro y por último la capacidad de desdoblar el indol de la molécula de triptófano. El desarrollo de un color rojofucsia en la interfase del reactivo y de los medios segundos después de añadir el reactivo de Kovacs indica la presencia de indol y por lo tanto una prueba positiva.

Formación de anillo rojo en la superficie.

Resultados: movilidad negativa: no se observa turbiedad del medio. H2S negativo: no presenta color negro.

Indol negativo: no se observa anillo rojo en la superficie. No tiene triptofanasa.

MR: determina la capacidad de un microorganismo para producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. La prueba Rojo de metilo es cuantitativa para la producción de ácido y requiere que los microorganismos produzcan ácidos fuertes a partir de la glucosa, de forma que el medio del pH descienda a menos de 4.4. Esta distinción puede hacerse a través del indicador Rojo de metilo que presenta color amarillo por encima de un pH de 5.1 y solo presenta color rojo cuando el pH desciende a 4.4.

Resultado: negativo.

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VP: determinar la capacidad de algunas bacterias para generar un producto final neutro (acetoina y 2,3 Butanodiol) a partir de la fermentación de la glucosa. Los productos neutros formados en la presencia de oxigeno atmosférico, alcalisis (Hidróxido de Potasio al 40%) y peptonas, se oxidan en diacetilo, reactante para el color producido en la reacción. El Alfa naftol actúa como catalizador para revelar un complejo color rojo.

Resultado: positivo. Indica que hay presencia de acetoina

Agar Simmons Citrato: Generalmente los microorganismos que emplean el citrato como única fuente de carbono, utilizan sales de amonio como única fuente de nitrógeno. El metabolismo del citrato realizado, por algunas bacterias se realiza por el ciclo de krebs y requiere el desdoblamiento del citrato por la enzima citritasa, en presencia de magnesio o manganeso y de transportadores como citrato permeasas.

Interpretación: desarrollo de un color azul intenso en 24-48 horas indica una prueba positiva. La prueba también es positiva en ausencia de color azul si existe crecimiento del microorganismo a lo largo de la estría de inoculación.

Resultado: positivo. Si utiliza el citrato como fuente de carbono por lo que la coloración es completamente azul

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PRACTICA 4 – LACTOSA NEGATIVAS Salmonella sp.

Descripción del microorganismo  Bastones gram (-)  Móviles ( por flagelos distribuidos en forma peritrica)  Anaerobios facultativos  No formas esporas.  Son saprofitas del tracto intestinal del humano como el animal.

Especies importantes S. typhimurium

Enfermedades Diarreas, dolores abdominales, vómitos y náuseas.

Muestras para diagnostico

S. typhi CON AFINIDAD Sangre durante pico Fiebre enterica septicemia y S. taratyphi A febril, orina y heces finalmente gastroenteritis.

POR HOMBRE y si así se le desea S. taratyphi C alimentos de S.atbortusovis Septicemia, enteritis aguda, sub- distintos orígenes y agua.

CON AFINIDAD aguda y crónica, también S. abortusequi produce abortos.

POR ANIMAL S. gallinarum causante de Tifus S. gallinarum aviar S. bongori Diarreas, dolores abdominales, vómitos y náuseas.

S. enteritidis Fiebre entérica.

Marcha bactereologica Medios de cultivo Agar MacConkey Agar selectivo y diferencial para el aislamiento de Enterobacterias. El medio contiene sales biliares y cristal violeta que son inhibidores de la microbiota Gram positiva. La lactosa junto al indicador Rojo neutro sirven para la comprobación de la degradación de dicho azúcar, dividiendo el grupo en 2: Bacterias fermentadoras y no fermentadoras de Lactosa.

Las colonias fermentadoras de lactosa dan un color rosado. Las colonias no fermentadoras de lactosa son incoloras, lo anterior por el comportamiento del indicador de pH.

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Resultado: Colonias medianas, lisas, blanquecinas o traslúcidas, forma circular, bordes rugoso.

Agar Rambach: Es un medio selectivo (el desoxicolato: inhibe a las Gram positivas) y diferencial para identificar a Salmonella.

Aunque permite el crecimiento de enterobacteriaceas. El medio detecta actividad β-galactosidasa (de enterobacterias), por lo que las colonias toman un color dependiendo de la presencia de la βgalactosidasa.

Resultado: Evidencia a las salmonelas por su capacidad de metabolizar el propilenglicol, por este medio sus colonias aparecen de color rojo brillante, tamaño mediado, borde rugoso.

Agar XLT4:

El agar Xylosa Lactosa Tergitol 4 (XLT-4) y está especialmente preparado par aislar e identificar la Salmonella. La Salmonella queda perfectamente identificada, ya que debido a cambios bioquímicos y de pH en el medio, quedan diferenciados otros organismos como Escherichia coli y Shigella.

Resultados: borde liso, convexas, color amarillo con punto central negro,tamaño pequeño. Colonias de Salmonella rosas o rojas (no fermentan la lactosa, pero descarboxila la lisina, suben el pH) con punto central negro (por producción de H2S).

Pruebas bioquímicas Indol y Movilidad: Determina si la bacteria es móvil o inmóvil, la capacidad de

desdoblar el indol de la molécula de triptófano.

Interpretación: El desarrollo de un color rojo-fucsia en la interfase del reactivo y de los medios segundos después de añadir el reactivo de Kovacs indica la presencia de indol y por lo tanto una prueba positiva. Formación de anillo rojo en la superficie indicando que la bacteria tiene la enzima triptofanasa.

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Motilidad: Permite determinar la capacidad de movimiento por parte de un microorganismo.

Interpretación: Formación de nata la parte superior de medio indica viabilidad del microorganismo, desarrollo de turbidez hacia los lados de la estría de inoculación indica motilidad positiva.

Resultados: Indol negativo: la bacteria no tiene la enzima triptofanasa.

Movilidad: positivo: se observa turbidez en el medio.

TSI ( tres azucares –hierro) : prueba usada para la fermentación de la glucosa, lactosa y sacarosa y la producción de H2S por parte de la bacteria sumándole producción de gas.

Interpretación: El cambio de color rojoanaranjado (color inicial del medio) a amarillo indica fermentación. Si se fermenta únicamente la glucosa el cambio de color del medio ocurre solamente en el fondo debido a que se encuentra 10 veces menos concentrada que la sacarosa y la lactosa, además los radicales libres no son suficientes para hacer virar el medio.

Si se fermentan los 3 azucares hay cambio de color tanto en la superficie como en el fondo.

La presencia de burbujas que rompen el medio y a veces tienden a expulsarlo indica presencia de gas como producto final de la fermentación.

La producción de H2S se manifiesta por la aparición de un precipitado color negro debido a la reducción de la sal de hierro presente en el medio.

Resultado: No escapaz de fermentar la lactose por lo que no hay producción de ácidoy no se produce el viraje de coloración. Sacarosa y glucosa si se fermentan.

Producción de H2S positive se observa coloracion negra.

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Urea: Los microorganismos que poseen la enzima

medio los suficiente.

Ureasa tienen la capacidad de hidrolizar la urea contenida en el medio con producción de amoniaco, para esta prueba se utiliza el caldo urea de stuart o agar urea de christensen. El caldo stuart está estabilizado con sales de fosfato a un pH de 6.8. el microorganismo en estudio debe producir cantidades relativamente grandes a fin de superar el sistema estabilizador del medio y elevar el pH del

Interpretación: Un cambio de color Rojo fucsia indica que es positivo. Ausencia de cambio de color indica reacciona negativa como para virar el indicador (por encima de 8.0) Resultado: negativo: la urea no fue hidrolizada por que el microorganismo no tiene ureasa.

CBRF + Lactosa: Capacidad metabólica para degradar

carbohidratos lactosa.

Interpretación: vireje de color de rojo a amarillo.

Resultados:negativo: lactagalactocidasa.

Carece

de

la

enzima

B

CBRF+ sorbitol: el sorbitol es un poliol de la familia de los azúcares, la prueba se basa en probar la capacidad de la bacteria de fermentar el sorbitolacidificando.

Interpretación: el medio cambia la coloración de rojo a amarillo.

Resultado: Positivo. Bacteria fermentar el sorbitolacidificando.

capaz

de

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Proteus sp.

    

Gram – Bacilos Móviles No esporas Anaerobios facultativos

Marcha bacteriológica Medios de cultivo utilizados: Agar MacConkey: selectivo y diferencial para el aislamiento de Enterobacterias. El medio contiene sales biliares y cristal violeta que son inhibidores de la microbiota Gram +. La lactosa junto al indicador rojo neutro sirven para la comprobación de la degradación de dicho azúcar, dividiendo el grupo en 2: Bacterias fermentadoras y no fermentadoras de Lactosa.

Resultado: colonias medianas, convexas, traslúcidas, incoloras, forma circular.

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Pruebas bioquímicas:

Medio SIM: determina si la bacteria es móvil o inmóvil, si es capaz de liberar ácido sulfhídrico por acción enzimática de los aminoácidos que contienen azufre produciendo una reacción visible de color negro y por último la capacidad de desdoblar el indol de la molécula de triptófano. El desarrollo de un color rojofucsia en la interfase del reactivo y de los medios segundos después de añadir el reactivo de Kovacs indica la presencia de indol y por lo tanto una prueba positiva. Formación de anillo rojo en la superficie.

Resultados: movilidad positivaa: se observa turbiedad del medio. H2S positiva: presenta color negro.

Indol negativo: no se observa anillo rojo en la superficie. No tiene triptofanasa.

Prueba TSI: el agar triple azúcar hierro contiene tres carbohidratos (glucosa, lactosa y sacarosa).

Cuando dichos carbohidratos se fermentan, la producción resultante de ácido es detectada por el indicador rojo fenol. Se producen cambios de color: amarillo para la producción de ácido y rojo para la alcalinización.

Resultado: Proteus spp. pueden fermentar la sacarosa, pero no la lactosa.

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Prueba de urea: este medio presenta bajo contenido de nutrientes y alta capacidad buffer.

Aquellas bacterias que poseen la enzima ureasa, pueden utilizar el nitrógeno proveniente de la urea, la hidrolizan, liberando amoníaco y dióxido de carbono. Estos productos metabólicos alcalinizan el medio.

Es particularmente útil para diferenciar Proteus spp. de otros miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Resultado: positivo, el medio de cultivo es de color rosado-rojizo. Si posee ureasa.

CBRF + LACTOSA: se utiliza con el propósito de determinar si la bacteria puede fermentar la lactosa en específico.

Resultado: negativo, el medio se observa de color rojo lo que indica que no hubo fermentación de lactosa.

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CBRF + SORBITOL: se utiliza con el propósito de determinar si la bacteria puede fermentar el sorbitol en específico.

Resultado: negativo, el medio se observa de color rojo lo que indica que no hubo fermentación de sorbitol.

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PRACTICA 5

Pasteurella multocida Descripción del microorganismo  Comensales de vías respiratorias superiores y digestivas.  Bacilos /cocbacilos  Gram –  Tinción bipolar  Zoonotica Especies importantes

Enfermedades 

Cólera aviar (aves)



Neumonía y rinitis atrófica, septicemia hemorrágica. (cerdos)



Neumonías (ovinas y caprinas).



Fiebre de embarque, septicemia hemorrágica. (bovinos)

Pasteurella multocida

Muestras de diagnostico  Hisopados traqueales.  Lavados broncoalveolares.  Aspirados de exudados de vías respiratorias.  Aislamiento de animales muertos: hígado, oviducto, sacos aéreos y pulmón.  Cavidad nasal de animales sanos.

Marcha bacteriológica Medios de cultivo Agar sangre diseñado para facilitar el

crecimiento de microorganismos exigentes.

Contiene una mezcla de peptonas particularmente adaptada al cultivo de microorganismos exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite la determinación de la hemólisis, criterio básico en la orientación hacia la identificación bacteriana.

Resultados: gamma hemolisis (no hemolíticas), ovoides, color gris, translúcidas y olor dulce.

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Agar macConkey: Agar selectivo y

diferencial para el aislamiento de Enterobacterias. El medio contiene sales biliares y cristal violeta que son inhibidores de la microbiota Gram positiva. La lactosa junto al indicador Rojo neutro sirven para la comprobación de la degradación de dicho azúcar, dividiendo el grupo en 2: Bacterias fermentadoras y no fermentadoras de Lactosa.

Las colonias fermentadoras de lactosa dan un color rosado. Las colonias no fermentadoras de lactosa son incoloras, lo anterior por el comportamiento del indicador de pH. Resultados: no crece en agar macConkey.

Pruebas bioquímicas

Agar urea Los microorganismos que poseen la enzima Ureasa tienen la

capacidad de hidrolizar la urea contenida en el medio con producción de amoniaco, para esta prueba se utiliza el caldo urea de stuart o agar urea de christensen. El caldo stuart está estabilizado con sales de fosfato a un pH de 6.8. el microorganismo en estudio debe producir cantidades relativamente grandes a fin de superar el sistema estabilizador del medio y elevar el pH del medio los suficiente.

Interpretación: Un cambio de color Rojo fucsia indica que es positivo. Ausencia de cambio de color indica reacciona negativa como para virar el indicador (por encima de 8.0) Resultado: negativo: la bacteria no posee la enzima ureasa.

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CBRF+ lactosa se utiliza con el propósito de determinar si la bacteria puede utilizar la lactosa como carbohidrato en específico.

Resultado: negativo, el medio se ve rojo porque no hay producción de ácidos a partir de la fermentación es decir que no existe utilización del carbohidrato.

CBRF+ xilosa: Esta prueba estudia la capacidad del microorganismo para utilizar un carbohidrato específico incorporado en el medio de cultivo, en este caso xilosa.

Resultado: positivo: existe utilización de este carbohidrato.

Medio SIM (Sulfuro- Indol-motilidad): Determina si la

bacteria es móvil o inmóvil, si es capaz de liberar ácido sulfhídrico por acción enzimática de los aminoácidos que contienen azufre produciendo una reacción visible de color negro y por último la capacidad de desdoblar el indol de la molécula de triptófano.

Interpretación: El desarrollo de un color rojo-fucsia en la interfase del reactivo y de los medios segundos después de añadir el reactivo de Kovacs indica la presencia de indol y por lo tanto una prueba positiva. Formación de anillo rojo en la superficie.

Motilidad: Permite determinar la capacidad de movimiento por parte de un microorganismo.

Interpretación: Formación de nata la parte superior de medio indica viabilidad del microorganismo, desarrollo de turbidez hacia los lados de la estría de inoculación indica motilidad positiva.

Resultados: negativo para movilidad, indol, y sulfuro.

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Colorantes Colorante de Wright: Tinción particular que colorea sólo los dos polos opuestos del microorganismo en cuestión, dejando el resto de la bacteria sin mancha o sin teñir de un color más claro. La tinción tiende a ser descrita en relación con la tinción de Gram-negativos, que distingue entre las bacterias Gram-negativas y Gram-positivas, y proporciona información importante para el diagnóstico. colorante compuesto de azul de metileno que tiñe de color azul las partes acidas de la célula y esosina que tiñe las partes alcalinas, disueltos en metanol que permite la fijación de las células, se addiciona a la preparación buffer de fosfatos que rehidrata a las células después de la exposición con el metanol.

Resultados: bipolaridad.

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PRACTICA 6

Brucella abortus        

Gram – Cocobacilo Aerobio estricto Inmóvil No cápsula No esporas Transmisión por contacto directo Factores de virulencia: polisacárido O, proteína de membrana Especies importantes B. abortus

Afecta a…

B. melitensis

Humanos, perros

B. suis

Cerdos, humanos

B. canis

Perros, humanos

Bovinos

Muestras para diagnostico Fetos Sangre Hisopados vaginales Leche

Marcha bacteriológica Medios de cultivo utilizados:

bordes irregulares, brillantes, lisas.

Agar sangre: diseñado para facilitar el crecimiento de bacterias Grampositivas. Contiene una mezcla de peptonas particularmente adaptada al cultivo de microorganismos exigentes.

El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite la determinación de la hemólisis.

Resultado: colonias pequeñas, con

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Coloraciones:

Resultado: gram –, bacilos pequeños.

Tinción de Gram: permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram-). Diferencia estructural de la pared celular de ambos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano fina y una capa lipopolisacarídica externa. Tras la tinción con cistal violeta se efectúa un lavado con etanol que arrastrará al colorante en las Gram (-), mientras que en las Gram (+) el colorante queda retenido y las células permanecerán azules. Las células Gram (-) se teñirán con safranina para que puedan observarse.

Pruebas bioquímicas

Agar Brucella + TIONINA: este agar contiene tionina que es un colorante que inhibe el crecimiento de Brucella.

Resultado: Brucella no tuvo crecimiento.

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Agar Brucella + FUCSINA: este agar contiene fucsina que ayuda al crecimiento de Brucella.

Resultado: hubo crecimiento.

Agar Brucella en tubo: el papel filtro humedecido con acetato de plomo es utilizado como indicador de producciรณn de H2S.

Resultados: positivo ya que si hay producciรณn de H2S.

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PRACTICA 7

Bacillus anthracis        

Gram + Bacilo Móvil Con cápsula Con esporas centrales Aerobio Hábitat en suelo y agua Es zoonótica Especies importantes B. antracis

Enfermedades

B. cereus

Provoca síndrome emético y diarréico

B. subtilis

No patógeno

Carbunco, ántrax

Marcha bacteriológica Medios de cultivo utiizados:

Muestras para diagnostico Oreja, sangre, material impregnado con sangre de orificios.

Oreja, material impregnado con sangre de orificios.

-

Agar sangre: diseñado para facilitar el crecimiento de bacterias Gram-positivas.

Contiene una mezcla de peptonas particularmente adaptada al cultivo de microorganismos exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite la determinación de la hemólisis.

Resultado: colonia gris, redonda, opaca, sin hemólisis.

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Coloraciones: Tinción de Gram: permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram). Diferencia estructural de la pared celular de ambos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano fina y una capa lipopolisacarídica externa. Tras la tinción con cistal violeta se efectúa un lavado con etanol que arrastrará al colorante en las Gram (-), mientras que en las Gram (+) el colorante queda retenido y las células permanecerán azules. Las células Gram (-) se teñirán con safranina para que puedan observarse.

Resultado: gram + con esporas verdes.

Pruebas bioquímicas:

la superficie. No tiene triptofanasa.

Medio SIM: determina si la bacteria es móvil o inmóvil, si es capaz de liberar ácido sulfhídrico por acción enzimática de los aminoácidos que contienen azufre produciendo una reacción visible de color negro y por último la capacidad de desdoblar el indol de la molécula de triptófano. El desarrollo de un color rojofucsia en la interfase del reactivo y de los medios segundos después de añadir el reactivo de Kovacs indica la presencia de indol y por lo tanto una prueba positiva.

Formación de anillo rojo en la superficie.

Resultados: movilidad negativa: no se observa turbiedad del medio. H2S negativa: no color negro.

Indol negativo: no se observa anillo rojo en

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Gelatina Para la prueba de licuefacción de la gelatina se utiliza como medio de cultivo la gelatina nutritiva, en esta prueba se pretende determinar la capacidad del microorganismo de producir enzimas de tipo proteolíticas (gelatinasas) que licuan/hidrolizan la gelatina o producen cambios evidentes de degradación.

Resultado: licuefacción negativa. No produce la enzima gelatinasa.

CBRF + SALICINA: la peptona de caseína proporciona al medio los nutrientes necesarios para el desarrollo de las bacterias y el indicador de pH es el rojo de fenol que vira de rojo a amarillo por la fermentación de los carbohidratos realizada por los microorganismos.

Resultados: negativo. No fermenta salicina.

CATALASA: Las moléculas de peróxido de hidrógeno son separadas mediante la enzima Catalasa en 2 moléculas de H2O y una de O2 que se observa en forma de burbujas. Esta es producida por células con metabolismo aeróbico.

Resultado: catalasa positivo.

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PRACTICA 8

Pseudomonas sp.

Descripción del microorganismo  Gram negativos  bacilos  Aerobios  Móviles  Algunos producen pigmentos  Cultivo por 24-48 horas a 37º C  Algunas cepas poseen un mucus llamado Slime.  Capacidad de formas biofilm.  Ampliamente distribuidos en la naturaleza, suelo y agua.

Especies importantes

Pseudomonas aeruginosa

Enfermedades

Muestras diagnostico Produce principalmente: Muestras:  Inflamaciones (Otitis,  Orina mastitis, enteritis)  Pus  Infecciones (Oculares, respiratorias,  Exudados intrahospitalarias y genitales)  Raspados superficies  Piometra infectadas.

de

de

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Marcha bacteriológica Medios de cultivo macConkey: Agar selectivo y diferencial para el aislamiento de Enterobacterias. El medio contiene sales biliares y cristal violeta que son inhibidores de la microbiota Gram positiva. La lactosa junto al indicador Rojo neutro sirven para la comprobación de la degradación de dicho azúcar, dividiendo el grupo en 2: Bacterias fermentadoras y no fermentadoras de Lactosa.

Las colonias fermentadoras de lactosa dan un color rosado. Las colonias no fermentadoras de lactosa son incoloras, lo anterior por el comportamiento del indicador de pH. Agar

Resultados: Colonias incoloras, irregulares, con aspecto a huevo frito, lactosa Negativo.

Agar BHI - Brain Heart Infusion: Obtiene los nutrientes de la infusión de cerebro y corazón, la peptona y la glucosa. Las peptonas y la infusión son fuentes de nitrógeno orgánico, carbono, azufre, vitaminas y sustancias de traza. La glucosa es la fuente de carbohidratos que los microorganismos utilizan mediante fermentación. Se utiliza fosfato disódico como tampón en el medio. Utliizado para ver los pigmentos.

Resultados: La producción de pioverdina es dado como producto de la oxidación de precursores incoloros.

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diseñado para facilitar el crecimiento de microorganismos exigentes, bacterias Gram-positivas .Contiene una mezcla de peptonas particularmente adaptada al cultivo de microorganismos exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite la determinación de la hemólisis, criterio básico en la orientación hacia la identificación bacteriana.

Resultados: Hemolisis beta (hemolisis completa), colonias brillantes, pequeñas, mucoides, borde continuo,

Agar

centro opaco, coloración azul verdosa.

sangre:

Observación microscópica:

Resultado:  Bacilos  Gram negativos  Móviles

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Pruebas bioquímicas Agar TSI: TSI ( tres azucares –hierro) : prueba usada para la fermentación de la glucosa, lactosa y sacarosa y la producción de H2S por parte de la bacteria sumándole producción de gas.

Interpretación: El cambio de color rojoanaranjado (color inicial del medio) a amarillo indica fermentación. Si se fermenta únicamente la glucosa el cambio de color del medio ocurre solamente en el fondo debido a que se encuentra 10 veces menos concentrada que la sacarosa y la lactosa, además los radicales libres no son suficientes para hacer virar el medio.

Si se fermentan los 3 azucares hay cambio de color tanto en la superficie como en el fondo. La presencia de burbujas que rompen el medio y a veces tienden a expulsarlo indica presencia de gas como producto final de la fermentación.

La producción de H2S se manifiesta por la aparición de un precipitado color negro debido a la reducción de la sal de hierro presente en el medio.

Resultado: negativo. No fermenta carbohidratos (glucosa, sacarosa y lactosa). No hubo viraje de pH.

Observaciones: se concluye que la bacteria tomada de la muestra es Pseudomonas aeruginosa porque produce ambos pigmentos (piocianina y pioverdina).

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PRACTICA 9 Clostridium sp.

Descripción del microorganismo  Zoonotica  Anaerobio estricto  Habitante del tracto gastrointestinal  Gram +  Productores de esporas  Para cultivo se utiliza jarra de microerobiosis -Empleo de la jarra de Brewer  Incubación por 24 horas a 370 C Especies Enfermedades Muestras importantes para diagnostico C. chauvoei Pierna negra- Tejidos carbunco frescos sintomático intestino, Higado, musculo, heces.

Heces, C. Septicum Edema abomaso. maligno, gangrena y heridas en abomaso.

C. Gangrena y Heces, Perfringes enterotoxemia intestino delgado (duoneno), riñones.

C. botulinum BotulismoHeces, paralisis preestomago s, duodeno.

C.tetani Paralisis Heces, espástica de hisopado músculos mucosa respiratorios ocular, musculo.

C. difficile Colitis Heces. seudomembran osa

Marcha bacteriológica

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Medio de cultivo utilizados: Agar sangre en placa: Es un

medio de aislamiento especialmente diseñado para facilitar el crecimiento de microorganismos exigentes, bacterias Gram-positivas .Contiene una mezcla de peptonas particularmente adaptada al cultivo de microorganismos exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 510 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano y permite la determinación de la hemólisis, criterio básico en la orientación hacia la identificación bacteriana.

Resultados: colonias irregulares y rizoides, colonias pequeñas 3-4 mm, planas y poco convexas. β hemolisis.

Clostricell: Es un medio de cultivo para aislar microorganismos del genero Clostridium de una muestra mixta, ya que inhibe el crecimiento de enterobacterias (exceptuando enterococcus), y de otras bacterias gram positivas por la presencia de neomizida y azida de sodio, con excepción de clostridum, que es un bacilo gram positivo.

Provee medio anaeróbico ya que contiene Tryptic Soy Broth (TBS), tioglicolato y formaldehido de sodio que proporcionan un potencial redox bajo.

Resultado: ase observa turbidez del medio y una burbuja ya que la mayoría produce gas por fermentación butírica.

Thioglicolato: Tiene como componente principal la tripteína de

soya lo que permite el desarrollo de muchos microorganismos, inclusive aquellos nutricionalmente exigentes, las bacterias aerobias estrictas crecen en la parte superior del medio, mientras que las anaerobias facultativas y estrictas crecen en la parte inferior lo que se debe a que la presencia de tioglicolato de sodio y cisteína que son sustancias reductoras, lo que permite un ambiente anaerobio en el medio.

Resultado: ya que clostridium es una bacteria anaerobia estricta se observa crecimiento bacteriano en la profundidad del medio.

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Medios para pruebas bioquímicas Medio

SIM

(sulfuro-indol-motilidad):

Determina si la bacteria es móvil o inmóvil, si es capaz de liberar ácido sulfhídrico por acción enzimática de los aminoácidos que contienen azufre produciendo una reacción visible de color negro y por último la capacidad de desdoblar el indol de la molécula de triptófano.

Interpretación: El desarrollo de un color rojo-fucsia en la interfase del reactivo y de los medios segundos después de añadir el reactivo de Kovacs indica la presencia de indol y por lo tanto una prueba positiva.

Formación de anillo rojo en la superficie.

Motilidad: Permite determinar la capacidad de movimiento por parte de un microorganismo.

Interpretación: Formación de nata la parte superior de medio indica viabilidad del microorganismo, desarrollo de turbidez hacia los lados de la estría de inoculación indica motilidad positiva.

Resultados: producción de H2S negativo, producción de indol negativo, determinar la movilidad negativo.

Gelatina

Para la prueba de licuefacción de la gelatina se utiliza como medio de cultivo la gelatina nutritiva, en esta prueba se pretende determinar la capacidad del microorganismo de producir enzimas de tipo proteolíticas (gelatinasas) que licuan/hidrolizan la gelatina o producen cambios evidentes de degradación.

Resultado: licuefacción positiva. Produce la enzima gelatinasa.

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CBRF+lactosa

La peptona de caseína proporciona al medio los nutrientes necesarios para el desarrollo de las bacterias y el indicador de pH es el rojo de fenol que vira de rojo a amarillo por la fermentación de los carbohidratos realizada por los microorganismos.

Resultado: positivo. Fermenta la lactosa.

Colorantes Schaeffer- Fulton Usado para colorear

biometría hemática para esporas permite observar: Esporas, cuerpos fructíferos, conidias, células gemantes.

Tiñe esporas de verde y bacterias en rojo.

Se utiliza como colorante primario el verde de malaquita y como contra tinción safranina O la cual tiñe la célula vegetativa.

Resultado: esporas subterminales y esporas terminales.

Obervaciones: Debido a que las pruebas de gelatina, glucosa y lactosa fueron positivas podría tratarse de C. perfringens o C. chauvoei ya que además ambas especies son negativas a la prueba de indol.

Debido a que la prueba en medio SIM es negativo a indol y a H2S podría tratarse de C. chauvoei

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