Faglig Årsberetning 2009 Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter
Annual Report 2009 Danish Fur Breeders Research Center
Redaktion: Peter Sandbøl
Pelsdyrerhvervets Forsøgsog ForskningsCenter
Danish Fur Breeders Research Center
Herningvej 112 C, 7500 Holstebro, Danmark.
Herningvej 112 C, DK-7500 Holstebro, Denmark.
Tlf.: Fax.: e-mail:
Phone.: Fax.: e-mail:
96 13 57 00 96 13 57 14 pfc@kopenhagenfur.com
Faglig Årsberetning 2009 Oplag: Forsidefoto: Typografi: Layout: Tryk: Redaktion:
350 stk. Jesper Clausen Arial Sonja Lind Mose DP/DPA Peter Sandbøl
Redaktionen sluttede jauar 2010 ISSN 1395-198X
+45 96 13 57 00 +45 96 13 57 14 pfc@kopenhagenfur.com
Forord Forord ved Forskningschef Peter Sandbøl .....................5
Adfærd Lavenergifoder med bygskalmel reducerer stereotypi i vinterperioden .......................................... 7-15 Low energy feed with barley hulls reduces stereotypies in the winter period Clausen, T. N, Hansen, S.W & Sandbøl, P.
Avl og Reproduktion Mulighed for at selektere for reduceret aggression i gruppe-indhusning .......................................... 17-22 Possibilities for selecting for reduced aggression in group-housing Berg, P. & Møller, S. H.
Tilsyneladende og sand fordøjelighed af aminosyrer hos minkhvalpe i den tidlige vækstperiode, ved fodring med forskelligt protein og kulhydrat niveau ...................................... 71-78 Apparent and true digestibility of nitrogen, fat energy, and amono acids Hellwing, A. L. F., Hansen, N. E. & Tauson, A.-H.
Fysiologi og Analyseteknik Kompensatorisk vækst hos minkhvalpe (Mustela vison) efter reduceret protein indtag efter fravænning ......................................................... 79-83 Compensatory growth in mink kits (Mustela vison) following reduced protein intake after weaning. Schulin-Zeuthen. M & Sandbøl, P.
Sundhed Nedarvningsforhold for sorte ganer hos mink........ 23-25 Inheritance of black palate in mink Christensen, K., Anistoroaei, R., Fredholm, M. & Nielsen, V. H. Niveau af indavl og genetisk afstand på danske mink farme (Neovison vison ..................................... 27-32 Level of inbreeding and genetic distance in Danish farm mink (Neovison vison) Larsen, P. F., Bækgaard, H., Sønderup, M., Møller, H. H., Hansen, B. K., Nielsen, V. H., Demontis, D., Loeschcke, V. & Perfoldi, C.
Ernæring og fodring Protein til mink I drægtighedsperioden. Fortsatte undersøgelser ............................................................ 33-37 Protein to mink in the gestation period. Continued investigations Clausen, T. N. & Sandbøl, P. Minkhvalpe, optimal tilvækst og god skindstørrelse (innovationslovs bevilling)........................ 39-44 Mink kits, optimal growth and good skin size Clausen, T. N. & Sandbøl, P. Glycerol i minkfoder i vækst- og pelssætningsperioden ...................................................................... 45-50 Glycerol in mink feed in the growing- furring period Clausen, T. N. & Sandbøl, P
Minkhvalpes modtagelighed for diarré – Effekt af foderets sammensætning .......................................... 85-90 Susceptibility of post weaning diarrhoea in mink kits – Effects of diet composition Damgaard, B. M. & Hedemann, M. S Diarré i fravænningsperioden hos minkhvalpe VII: Evaluering af en ELISA metode til påvisning af antistoffer specifikke for mink astrovirus............ 91-96 Evaluation of an ELISA for detection of antibodies to mink astrovirus Ullman, K., Baule, C., Hammer, A. S., HammerJensen, T. & Czifra, G. Dødsårsager fra fødsel til 1. august ....................... 97-103 Kit death from birth to August the first Clausen, T. N. Foderforbrugets betydning for urinens pH .......... 105-109 Importance of feed consumption for urine pH Clausen, T. N. Undersøgelse af vildtype hvalpesygevirus og DNA vaccination i mink.......................................... 111-118 Investigation of wildtype canine distemper virus and DNA vaccination in mink Nielsen, L., Søgaard, M., Hammer-Jensen, T., Karlskov-Mortensen, P., Andersen, M. K., Jensen, T. D., Aasted, B. & Blixenkrone-Møller, M.
Effekten af L- og DL- methionin til mink i vækstperioden ...................................................................... 51-56 Investigation on the effect of L- and DL- methionine to mink in the growing-furring period Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
Undersøgelse af nye vildtyper af hvalpesygevirus ......................................................................... 119-125 Phylogeny investigation of new wildtypes of canine distemper virus Nielsen, L., Hammer-Jensen, T., Hammer, A. S., Banyard, A. C., Barrett, T. & Blixenkrone-Møller, M.
Effekten af aminosyrerne phenylalanin og tyrosin, samt chelateret jern, kobber og zink på pelsfarven hos mink (Mustela vison) ....................... 57-65 Investigation on the importance of the aminoacids phenylalanine (phe) and tyrosine (tyr), and the minerals iron (Fe), cupper (Cu) and zink (Zn) on pelt colour in black and brown mink Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
DNA vaccination beskytter minkhvalpe mod hvalpesyge .............................................................. 127-133 DNA vaccination protects mink kits against distemper Jensen, T. H., Nielsen, L., Aasted, B. & Blixenkrone-Møller, M
Tilsyneladende fordøjelighed af Glycerol hos mink............................................................................. 67-70 Apparent digestibility of Glycerol in mink Schulin-Zeuthen, M. & Sandbøl, P.
Undersøgelser af tyggemuskelbetændelser hos mink ......................................................................... 135-140 Outbreak of masticatory myositis in farmed mink , Hammer A. S., Jensen T.H., Salomonsen, C. M., , , Harslund J.L.F., Christensen L. R., Chriel, M., Clausen, T.
Faglig Årsberetning 2009
3
Driftsforhold Betydning af redekassens udformning og redemateriale på overlevelse og trivsel hos minkhvalpe, et pilotprojekt.............................................141-146 Importance of nest box size and material, for litter size, a pilot study Sønderup, M., Bækgaard, H., Larsen, P. F. & Clausen, T. N.
4
Reducering af foderspild i vækstperioden ved hjælp af metalplader i burene ............................... 147-150 Reducing feed loss in the growing period by metal plates in the cage Clausen, T. N., Blæsbjerg, M. & Sandbøl, P. Tidligt og sent fødte minkhvalpes tilvækst i vækstperioden ........................................................ 151-154 Importance of birth date on kit growth in the growing period Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
Faglig Årsberetning 2009
Forord ved Forskningschef
Peter Sandbøl Faglig Årsberetning 2009 er kvantitativt omkring det gode gennemsnit. Dette på trods af, at det offentlige bidrag til forskning i primærproduktion fortsat er stærkt aftagende. Dette er bl.a. muliggjort via indhentning af medfinansiering gennem konkrete ansøgninger og dels via inddragelse af et større antal mere praktiske undersøgelser. Der er i denne beretning en noget større vægt end hidtil på det sundhedsmæssige område. Dette skyldes dels, et par problemer fra praksis, som har drillet mere end vanligt og som derfor har afstedkommet nogle fokuserede undersøgelser. Dertil kommer rapporteringer fra nogle større afsluttede projekter. Indholdet i Faglig Årsberetning 2009 har således en lidt anden vægtning end de forrige år; men der er dog stadig både bredde og dybde, således at artiklerne dækker både grundforskning, metodeudvikling og undersøgelser med direkte relevans for den praktiske anvendelse.
Jeg vil gerne sige inderligt tak til alle bidragsydere, som har lagt et stort stykke arbejde i såvel den forudgående forskning, som i de herværende artikler. Yderligere vil jeg gerne takke vores vikar Sonja Lind Mose, som kompetent har forestået koordinering og layout. Faglig Årsberetning er inddelt i hovedafsnit. Alle artikler indledes med både et dansk sammendrag, samt et engelsk abstract. Selve de faglige artikler er sat med to spalter, dog således at større figurer og tabeller er i fuld sidebredde Artiklerne i Faglig Årsberetning 2009 er sat således, at begge spalter før en gennembrydning læses færdigt, inden man går videre til den gennembrydende figur eller tabel og de nedenstående spalter. Artiklerne fra Faglig Årsberetning findes desuden på Kopenhagen Furs hjemmeside, som pdf filer. Med håb om at Faglig Årsberetning 2009, må blive fundet spændende, lærerig og bevaringsværdig, ønsker jeg alle god fornøjelse med læsningen. Holstebro, ultimo januar 2010 Peter Sandbøl
Faglig Årsberetning 2010
5
6
Faglig Ă…rsberetning 2010
Lavenergifoder med bygskalmel reducerer stereotypi i vinterperioden. Tove N. Clausen2, Steffen W. Hansen1 & Peter Sandbøl2. 1
Danmarks JordbrugsForskning, ForskningsCenter Foulum, Postboks 50, 8830 Tjele. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Herningvej 112C, 7500 Holstebro.
2
Sammendrag Til en undersøgelse af, hvorledes anvendelse af fiber til et lav- og et højkoncentreret foder i vinterperioden påvirker tævernes stereotypi frekvens og ædemønster, blev anvendt 3 hold standard á 175 tæver. Kontrolholdet (Kon) havde et lavt energiindhold, til dette blev tilsat 15 % bygskalmel (Fib1), til sammenligning blev til et højenergifoder tilsat 15 % bygskalmel (Fib2). Hvis tæver fodres med samme energimængde, vil en tilsætning af fiber (15 % bygskalmel) og vand til foderet, reducere tomgangstiden. Dette skyldes både en effekt af større fodervolumen og at fiber øger mæthedsfornemmelsen ved en større fyldning i mave-tarmsystemet. Stereotypi frekvensen reduceres signifikant ved fodring med lav energifoder og dermed øget fodermængde. Tæver der bevæger sig mindre er dog i større huld ved flushing, og der var flere døde hvalpe ved fødsel. Clausen, T. N., Hansen, S.W & Sandbøl, P. 2010. Lavenergifoder med bygskalmel reducerer stereotypi i vinterperioden. Faglig Årsberetning 2009, 7-15, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Summary To an investigation on the use of fibre in low and high concentrated mink feed in the winter period, we used tree groups of 175 black mink females each. The control group (Kon) was feed a low concentrated feed, to that feed we added 15 % fibre (Fib1), to compare we added 15 % fibres to a high concentrated feed (Fib2). If females are feed the same amount of energy, an addition of fibres and water to the feed, will increase time with feed on the cage. This is due to both an effect of bigger feed volume and that fibres increase the feeling of satiety by increasing the filling of the digestive system. Stereotypic behaviour is reduced significantly by using low energy feed and thereby a bigger feed volume. However females who reduce there activity have a bigger body score before flushing, and had a higher number of dead kits at birth. Clausen, T. N., Hansen, S.W & Sandbøl, P. 2010. Low energy feed with barley hulls reduces stereotypies in the winter period. Annual Report 2009, 7-15, Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: fiber, huldstyring, vinterperioden
Baggrund På grund af den nye pelsdyrbekendtgørelse er vi nødt til at tage fodringen i vinterperioden op til revision. Ifølge bekendtgørelsen skal mink have opfyldt deres mæthedsbehov hele året, på nær i en kort periode på 8 dage, forud for parring (flushing perioden), hvor det er tilladt at reducere fodertildelingen med 20 % af den normale foderration. (Flushing er en kortvarig reduktion i fodertildelingen og en efterfølgende kraftig foderoptagelse, flushing øger antallet af løsnede æg og dermed kuldstørrelsen (Tauson 1993). Normal farmprocedure med slankning af tæverne i december, er således ikke
tilladt, men hvis tæverne skal reagere optimalt på flushing, må de ikke være for fede. Der er imidlertid stillet spørgsmål ved, hvorvidt en længerevarende restriktiv fodring forud for flushing er nødvendigt for korrekt flushing (Tauson 1993). Aktive mink har stor tilbøjelighed til at udvikle stereotypier og da stereotypier har en arvelighed på ca. 26 % (Hansen et al., 2006) er miljøet, herunder fodringsrutiner, ansvarlig for 80 %. Som mål for om dyrene er sultne eller ej, bruger vi ofte frekvensen af stereotypi.
Faglig Årsberetning 2009
7
Clausen, T. N., Hansen, S. W. & Sandbøl, P.
Derfor er det væsentlig, om vi kan få dyrene til at føle sig mætte, selvom deres kalorieindtag sænkes. Muligheden for at sikre mæthedsfornemmelsen når minken fodres restriktivt er blevet undersøgt ved tilsætning af fyldstoffer til foderet, således at de æder samme fodermængde, men energiindholdet sænkes. Disse fiberstoffer skulle øge mæthedsfornemmelsen ved en større fyldning i mavetarmsystemet og derved nedsætte tomgangstiden. Formålet er således, at kunne slanke minken uden samtidig at stimulere udviklingen af stereotypier. Tilsætning af bygskalmel nedsætter tomgangstiden og reducerer stereotypifrekvensen hos minktæver (Hansen et al, 2004). Tilsætning af citruspectinaffald i foderet og i mindre grad tryptofan, nedsætter tomgangstiden. Imidlertid bevirkede den kortere tomgangstid ikke altid en reduktion af stereotypierne (Clausen et al, 2005), muligvis på grund af en smagseffekt af produkterne. Tilsætning af 5 % roeaffald reducerede tomgangstiden i forhold til kontrolholdet, men reducerede ikke stereotypierne (Hansen & Clausen, 2006), muligvis på grund af at fodringsniveauet i en periode var for lavt til at undgå udviklingen af stereotypier. Tilsætning af havreskalmel reducerede aktiviteten inklusiv stereotypi og nedsatte tomgangstiden (Hansen et al, 2007). De afprøvede produkter havde ingen negativ effekt på de senere reproduktionsresultater. Hos rotter er det fundet, at de generelt vil æde den fodermængde der tilfredsstiller deres energibehov, og det er vist, at det daglige kalorie indtag forbliver konstant, når foderet indeholder fra 0 – 30 % fedt. Når rottefoderet fortyndes med ufordøjeligt materiale, ses en tilsvarende stigning i foderoptagelsen. For fravænnede hunrotter kunne foderet fortyndes 40 % før kalorieindtaget blev reduceret, hvor-
8
imod foderet kunne fortyndes 50 % til udvoksede hunrotter. Energibehovet til lakterende rotter er høj og en 10 % fortynding af foderet med ufordøjeligt materiale gav signifikant nedgang i energiindtaget (NR, 1995). Når foderet til mink tæver ændres til et meget lavere energiindhold og dermed et stort fodervolumen, vil tæven i en periode på én uge til 14 dage æde den samme fodermængde som den er vænnet til, dernæst vil den øge foderoptagelsen for at få den samme energimængde som før (Damgaard & Hansen, 2002). Afprøvninger på Vest tyder dog på, at der allerede sker markante forandringer i løbet af 3 dage, således at de æder en større fodermængde (Hejlesen, 2002). En periodevis nedsættelse af energiindholdet i foderet gennem vinterperioden ved at tilsætte fibre, ville evt. kunne ”snyde” tæverne i en periode. Derfor blev tilsætning af 15 % (11,5 %) bygskalmel periodevis, 3 dage om ugen hhv i 3 perioder á 5 dage forsøgt. Fodringssystemet sænkede stereotypi frekvensen og tomgangstiden, i forhold til et kontrolhold med normal farmfodring, men tæverne tabte sig ikke tilstrækkelig i vægt og kuldstørrelsen blev reduceret (Hansen et al., 2009). Fodringen blev styret efter at der skulle være mellem 30 og 70 % klatter tilbage på burene om morgenen, denne metode viste sig ikke at være brugbar. Der var forskel i huldvurderingen af tæverne ved fødsel, således at tæver i kontrolholdet var i lavere huld end tæver i et af fiberholdene. Tævens huld i forbindelse med selve fødslen er væsentlig, fede tæver føder færre levende hvalpe (Bækgaard et al., 2007, 2008, 2009; Clausen et al., 2007). Ligeledes er det væsentlig at tæverne ikke taber i huld fra primo april til ultimo april (Bækgaard et al., 2007, 2008, 2009), hvis tæven allerede er for fed efter flushing, er det således ikke
Faglig Årsberetning 2009
Lavenergifoder med bygskalmel reducerer stereotypi i vinterperioden
muligt at få hende i passende huld til pelsning. I undersøgelsen over tilsætning af fibre i perioder i vinteren 2008 (Hansen et al., 2009) var tævernes huld ved fødsel i et fiberhold højere end i kontrolholdet, hvilket kan have været den væsentligste årsag til et lavere hvalperesultat ved fødsel. En vejning af tæverne i forbindelse med fødsel, burde havde fundet sted. Formålet med vinterfodringen i 2009, var at se hvorledes anvendelse af fiber til et lav- og et højkoncentreret foder påvirkede tævernes stereotypi frekvens og ædemønster.
Materialer og metoder: Der blev anvendt 3 hold standard á 175 tæver (ca. 2/3 ungtæver). Forsøget startede medio december. Holdene blev placeret i hver sin hal, for at gøre fodringen lettere. Helsøskende blev fordelt så godt som muligt mellem holdene. Fodringsrækkefølgen varierede fra dag til dag. Hannerne blev fodret og behandlet efter normal farmprocedure, tæverne blev behandlet i henhold til tabel 1, foderplanerne ses af tabel 2.
Tabel 1. Forsøgsopstilling, fiberfodring i vinterperioden.
Hold Kon Fib1 Fib2
Behandling Normal farmprocedure, trækkes ned til passende huld d. 7/1. Der fodres efter huld med lavenergi foder, energifordeling 50:38:12, der antages omkring 200 kcal/tæve/dag (gennemsnit i hele perioden, afhængig af vejr og vind etc.) Tæverne fodres med kontrolfoder og med samme daglige energimængde, men med tilsætning af 15 % bygskalmel + vand i hele perioden Tæverne fodres med højenergi foder, energifordeling 30:52:18, med tilsætning af 15 % bygskalmel + vand i hele perioden og med samme daglige energimængde som i de andre hold
Tabel 2. Planer over grundfoderet til standard i vinterperioden 2009.
Kon og grundfoder Hold til Fib1 Grundfoder til fib2 Fiskeafskær < 3 % fedt 22,5 8,31 Industrifisk 8-12 % fedt 30 30 Fjerkræaff. Farmfood 24,9 25 Fiskemel 3,5 2 Hæmoglobinmel 3 0,94 Kartoffelprotein 2 2 Majsgluten 3 2 Byg poppet 3,62 7,45 Hvede poppet 3,62 7,45 Soyaolie 3,43 Svinefedt 1,72 Vit.-bl. 0,2 0,2 Vand 3,62 9,46 Plantal: Energiindhold: kcal/100g 159 201 MJ/kg 6,7 8,4 MJ/kg tørstof 17,5 19,6 Tørstof, % 38 43 Energifordeling 50:38:12 30:52:18 Aske, % 3,3 2,5
Som fiber tilsætning blev anvendt 15 % bygskalmel. Efter fiber- og vandtilsætning blev det procentvise indhold af fiber i Fib1 og Fib2 hhv. 11,2 og 11,1 %. Per energienhed er der imidlertid et højere fiberindhold i Fib1 end i Fib2. Dagligt foderforbrug til tæverne blev registreret ved at fodermaskinen blev vejet holdvis. Der blev fodret efter huld, farvede mærkater blev anvendt for at angive, hvilke tæver der skulle have mere og hvilke der skulle have mindre i forhold til de andre. Foderet blev undersøgt for indhold af tørstof, protein, fedt og aske hver gang der blev lavet en ny portion. Efter 21/2 blev alle tæver behandlet ens indtil dag 28 i dieperioden. Ungtæver blev vejet ved sortering, alle tæver blev vejet ved start i december (17/12), primo januar (5/1), 20. januar, 5. februar, 18. februar samt dag 28.
Faglig Årsberetning 2009
9
Clausen, T. N., Hansen, S. W. & Sandbøl, P.
Tæverne blev huldvurderet 3/2, 18/2 og ved fødsel. Hvalpene blev talt ved fødsel og dag 28. Tæverne blev fodret samme tid hver dag (8.15 – 9.15). Der blev udført adfærdsobservationer 20/2 lige før tæverne blev slanket i forbindelse med flushing. Ved adfærdsobservationen blev fodringen udsat til kl. 13 og adfærdsobservationen foretaget i tidsrummet 9 til 13. Formålet med at udsætte fodring var, at mink med nedsat mæthedsfornemmelse ville have et øget aktivitetsniveau i forhold til mink med større mæthedsfornemmelse. Tæverne blev scannet 10 gange og typen af igangværende adfærd registreret. Følgende adfærdselementer blev registreret: I redekassen, aktiv ude i buret (uspecifik), passiv ude i buret, samt de forskellige former for stereotypi (stereotypi er defineret som et bevægelsesmønster der gentages (minimum 5 gange) og som ikke har nogen umiddelbar funktion): pendel (stereotyp bevægelse frem og tilbage i buret), lokomotorisk stereotypi (bevægelses stereotypier som ikke er pendlen), stationær (hovedrulninger og vertikal op-ned bevægelse), slikke stereotypi (stereotyp slikken på trådnet). Running (ufuldstændig stereotypi der ikke gentages 5 gange) og kontakt med rør (minken er i røret eller manipulerer med røret) blev ligeledes registreret. Tomgangstiden blev vurderet i de forskellige hold i januar (27/1) og i februar (19/2) for at få et indtryk af, hvor stor forskel der var mellem holdene. Tomgangstiden blev vurderet ved at tælle hvor mange foderklatter der lå på tråden 2, 4, 6, 9, 13, og 24 timer efter udfodring af foderet. De statistiske beregninger er udført med statistikprogrammet SAS. Procedurerne GLM (ss4), LSMEANS /
10
PDIFF er anvendt med 5 % som signifikansniveau ved beregninger over vægt og reproduktions-resultater. Forskel i huld, goldprocent og ædetid blev analyseret med χ2 test / Probit. Relevante kovariater er medtaget i de tilfælde de er signifikante. Forskel i adfærd mellem hold blev analyseret med proceduren GENMOD.
Resultater og diskussion Foder Foderanalyserne (tabel 3) viste et højere proteinindhold i grundfoderet end beregnet. Tabel 3. Foderanalyser. Hold
Tørstof
Energifordeling
Aske
Energi, kcal / 100 g
Kon
34,8
53,5 : 33 : 13,5
2,85
140,0
Fib1
35,9
51 : 32 : 17
2,95
115,3
Fib2
40,4
34 : 46 : 20
2,28
151,0
Dette gælder både for lavenergifoderet og højenergifoderet, og skyldes et afvigende indhold i råvarerne i forhold til tabelværdierne. Da undersøgelserne er omkring foderets energiindhold har det imidlertid ikke nogen nævneværdig betydning for resultaterne. Foderets analyserede energiindhold i Kon var 140 kcal/100 g, en tilsætning af 15 % bygskalmel og vand sænkede energi-indholdet til 115 kcal / 100g i Fib1. På trods af fibertilsætning til højenergifoderet var det endelige energiindhold i Fib2 151 kcal/100 g og altså stadig mere end i Kon. Tildelt daglig energimængde (figur 1) var ens mellem holdene og den gennemsnitlige daglige energioptagelse pr tæve gennem hele perioden var hhv 216, 214 og 217 i hhv Kon, Fib1 og Fib2 (tabel 4). Da formålet var at få ens energitildeling dagligt, må det siges at være opfyldt. Som følge af fiber tilsætningen var der derimod stor forskel i den dagligt tildelte fodermængde (figur 2 og tabel 4).
Faglig Årsberetning 2009
Lavenergifoder med bygskalmel reducerer stereotypi i vinterperioden
kcal/dyr/dag 300
250
200 Kon Fib1
150
Fib2
100
50
0 19/1225/12
26/12 1/1
2/1 8/1
9/115/1
16/122/1
23/129/1
30/1 5/2
6/2 12/2
13/222/2
Dato
Figur 1. Energitildeling i kcal / tæve / dag, gennemsnit over en uge
gram/dyr/dag
250
200
150
Kon Fib1 Fib2
100
50
0 19/1225/12
26/121/1
2/1 8/1
9/1 15/1
16/122/1
23/129/1
30/1 5/2
6/2 12/2
13/222/2
Dato
Figur 2. Fodertildeling i gram / tæve / dag, gennemsnit over en uge
Tabel 4. Daglig energi- og foderoptagelse pr tæve, gennemsnit over hele perioden 19/12 – 22/2.
Kon Fib1 Fib2
kcal / tæve / dag 216,3 214,0 217,2
gram / tæve / dag 155,2 186,9 143,0
Tæverne i Fib1 åd hver dag omkring 32 gram foder mere end tæverne i Kon og omkring 44 gram mere end tæverne i Fib2. Tomgangsvurderingen 27/1 (figur 3) viser forskel i hvor hurtigt tæverne i holdene åd foderet. 4 og 6 timer efter
Faglig Årsberetning 2009
11
Clausen, T. N., Hansen, S. W. & Sandbøl, P.
fodring var der flere tæver i Kon der havde ædt op end i de øvrige hold (p=0,001 hhv. p< 0,0001). Fib1 og Fib2
åd lige hurtigt på nær 6 timer efter fodring, hvor Fib2 havde flest tæver der havde ædt op.
% ædt op 100 90 80 70
Kon
60
Fib1
50
Fib2
40 30 20 10 0 2t
4t
6t
9t
13t
24t
tim e r e fter fodring
Figur 3. Vurdering af tomgangstiden d. 27/1 ud fra hvor mange der havde ædt op 2, 4, 6, 9, 13 og 24 timer efter fodring.
Ved tomgangsvurderingen 19/2 var forskellen tydeligere (figur 4). To timer efter fodring var der ingen forskel mellem holdene, men allerede ved 4 timer var der flere i Kon der havde ædt op end i Fib1 og Fib2 (p < 0,0001). 6, 9, 13 og 24 timer efter fodring var der forskel mellem alle holdene (p < 0,0001), således at der var flest i Kon der havde ædt op, dernæst i Fib2 og
endelig var Fib1 tæverne dem der var længst tid om at æde dags-portionen. Daglig energi tildeling med foderet var ens, men Fib1 tæverne skulle æde en noget større fodermængde end de øvrige, 32 gram mere end Kon og 44 gram mere end Fib2 (tabel 4), derudover var der lidt større fiberindhold pr energienhed til Fib1 tæverne end til Fib2 tæverne.
pct ædt op 100 90 80 70 Kon
60
Fib1
50
Fib2
40 30 20 10 0 2t
4t
6t
9t
13t
24t
timer efter fodring
Figur 4. Vurdering af tomgangstiden d. 19/2 ud fra hvor mange der havde ædt op 2, 4, 6, 9, 13 og 24 timer efter fodring.
12
Faglig Årsberetning 2009
Lavenergifoder med bygskalmel reducerer stereotypi i vinterperioden
Større foderportion med samme energiindhold vil således nedsætte tomgangstiden, dette blev ligeledes vist af Hejlesen et al. (2005) der nedsatte energiindholdet med vandtilsætning. Fib2 tæverne fik den mindste fodermængde ca. 12 gram mindre end Kon (tabel 4), men var imidlertid længere om at æde foderrationen. Da den totale energi-mængde var ens, må det skyldes at fiber i Fib2 foderet får dyrene til at føle sig mætte længere, idet fiber giver en større fyldning i mavetarmsystemet. Stereotypi Forekomsten af stereotypi (pendel + lokomotorisk + stationær + slikke) i procent af observationer fordelt på hold, er vist i tabel 5. Den laveste frekvens var hos Fib1 tæverne, der har haft foder på tråden længst, det største antal gram foder at optage og det mindste
energiindhold i foderet. Der var ingen forskel mellem Kon og Fib2 tæverne. Tabel 5. Stereotypi hos tæver.
Hold Kon Fib1 Fib2
Stereotypi d. 20/2 12,8 (18,7) b 5,5 (11,9) a 14,1 (18,6) b < 0,0001
Vægt udvikling i vinterperioden Ved sortering var der ikke forskel mellem vægten af ungtæverne (tabel 6), men ved vejning af alle tæver 17/12 var kontrolholdets tæver tungest, dette ændrede sig således at tæverne i Fib1 vejede mest ved vejning 20/1 og resten af perioden indtil fødsel. Tæverne optog samme mængde kcal total set, men Fib1 tæverne var langsommere til at æde, og stereotyperede mindre end de øvrige tæver, hvorfor de også har forbrugt færre kcal. Ved vejning dag 28 var der ikke længere forskel mellem holdene.
Tabel 6. Vægtudvikling i vinterperioden Vægt \ Hold Sortering, g * 17/12, g 5/1, g 20/1, g 3/2, g 18/2, g dag 28, g Kon 1511 (133) 1399 (153) a 1282 (158) a 1203 (168) b 1179 (170) (b) 1257 (134) (b) 1320 (143) Fib1 1513 (121) 1370 (128) b 1271 (127) a 1232 (130) a 1211 (129) (a) 1285 (106) (a) 1322 (136) Fib2 1508 (127) 1366 (133) b 1226 (135) b 1170 (124) c 1187 (117) (ab) 1265 (119) (ab) 1299 (128) p-værdi NS 0,04 0,0002 < 0,0001 NS (0,07) NS (0,06) NS * ca. 117 ungtæver; NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene, forskellige bogstaver i en kolonne angiver at der er forskel
Huldudviklingen (tabel 7) viste ligeledes at tæverne i Fib1 var i bedre huld 18/2 end tæverne i Kon, ved fødsel var der ingen forskel i huldvurderingen.
Reproduktionsresultater Der var ikke statistisk sikker forskel i goldprocenten mellem holdene (tabel 8).
Tabel 7. Huldudvikling i vinterperioden
Tabel 8. Reproduktionsresultater Antal Levende tæver Gold pr. ved Uparrede % kuld v. Døde pr. start tæver Hold * kuld v. fødsel fødsel Kon 176 6 10,7 6,16 (2,50) 0,57 (1,02) b Fib1 177 11 8,0 5,84 (2,65) 0,87 (1,31) a Fib2 175 7 11,6 6,26 (2,38) 0,52 (0,95) b p-værdi NS NS 0,01 * Korrigeret for sterile hanner; NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene, forskellige bogstaver i en kolonne angiver at der er forskel
Hold Kon Fib1 Fib2 p-værdi
huld 3/2 2,82 (0,48) 2,89 (0,38) 2,84 (0,36) NS
huld 18/2 2,94 (0,37) b 3,01 (0,17) a 2,98 (0,15) ab 0,04
Huld v. fødsel 3,03 (0,23) 3,00 (0,26) 3,06 (0,42) NS
NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene, forskellige bogstaver i en kolonne angiver at der er forskel
Antal fødte hvalpe pr kuld i holdene var ens (tabel 8), der var dog flere døde hvalpe ved fødsel hos Fib1 tæverne. Hvorvidt dette skyldes at tæverne i dette hold var i lidt bedre huld før
Faglig Årsberetning 2009
13
Clausen, T. N., Hansen, S. W. & Sandbøl, P.
flushing end tævene i de øvrige hold, samt at Fib1 tæverne havde haft en lavere grad af stereotypi og dermed en svagere kondition, bør undersøges nærmere. Stereotyperende tæver får flere hvalpe (Hansen & Damgaard, 2002) og Bækgaard et al., (2008) viste at tæver ultimo februar bør have en huld lidt under middel for at opnå det største antal hvalpe ved fødsel. Dødsfald blandt tæverne i hele perioden var lav. Hvalpevægte Ved vejning af hvalpene dag 28 blev der ikke set forskel mellem holdene (tabel 9). Tabel 9. Hvalpevægte i dieperioden
Hold Kon Fib1 Fib2
Antal hvalpe dag 28 5,78 (2,40) 5,39 (2,69) 5,93 (2,26) NS
Han hvalpe vægt dag 28, g 219 (36) 217 (41) 219 (36) NS
Tæve hvalpe vægt dag 28, g 196 (32) 195 (34) 196 (34) NS
NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene
Konklusion Hvis tæver fodres med samme energimængde, vil en tilsætning af fiber (15 % bygskalmel) og vand til foderet, reducere tomgangstiden. Dette skyldes både en effekt af større fodervolumen og at fiber øger mæthedsfornemmelsen ved en større fyldning i mave-tarmsystemet. Stereotypi frekvensen reduceres signifikant ved fodring med lav energifoder og dermed øget fodermængde. Tæver der bevæger sig mindre er dog i større huld ved flushing, og der var flere døde hvalpe ved fødsel. Referencer Bækgaard, H., Larsen, P.F., Clausen, T.N & Sønderup, M. 2009. Indflydelse af mink tævers huld og huldudvikling på antallet af hvalpe. Faglig Årsberetning 2008, 123-128, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark.
14
Bækgaard, H., Hansen, M.U., Larsen, P.F. & Sønderup, M 2008 Sammenhæng mellem tidlig hvalpedød og minktævers huld og aktivitet i perioden fra februar til fødsel. Faglig Årsberetning 2007, 109-116, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Bækgaard, H., Hansen, M. U., Sønderup, M. & Clausen, T. 2007. Sammenhæng mellem tidlig hvalpedød og minktævers huld og foderforbrug i perioden januar til fødsel. Faglig Årsberetning 2006, 185-192. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Clausen, T. N., Sandbøl, P. & Hejlesen, C. 2007. Huldvurdering af minktæver i vinter- og dieperioderne. Faglig Årsberetning 2006, 181-184, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Clausen, T.N., Hansen, S.W., Houbak, B. 2005. Fyldfoder i vinterperioden II. Betydning for adfærd og den senere reproduktion. Faglig Årsberetning 2004, 15-26, Pelsdyrerhver-vets Forsøgs- og ForskningsCenter. Damgaard, Birthe Marie & Hansen, Steffen W. 2002. Low dietary energy concentration to mink females : Effects on behaviour and performance. I: NJFSeminar 347, pp.4. Hansen, B.K., Jeppesen, L.L., Berg, P. 2006. In: Book of abstracts: CD communication 17-05, 4 pp. Belo Horizonte, Brazil: WCGALP, 2006, p. 172 (Conference: World Congress on Genetics Applied to Livestock Production, nr. 8, Belo Horizonte, Brazilian, 18 August 2006). Hansen, S.W. & Damgaard; B.M. 2002. Vinterfodringens betydning for minktævers adfærd og velfærd. I: Damgaard,
Faglig Årsberetning 2009
Lavenergifoder med bygskalmel reducerer stereotypi i vinterperioden
B.M & Hansen, B.K. (Red.) Kvalitetsskind fra sunde mink. Intern rapport nr. 163, september 2002, 11-19. Hansen, S.W. & Clausen, T.N. 2006. Fyldfoder i vinterperioden III. Effekt af tilsætning af roeaffald i foderet. Faglig Årsberetning 2005, 31-40, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter. Hansen, S. W., Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2009. Vinterfodring med henblik på lav stereotypi og høj reproduktion. Faglig Årsberetning 2008, 7-18. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Hansen, S.W., Clausen, T.N., Sandbøl, P. & Houbak, B. 2007. Fyldfoder i Vinterperioden IV. Effekt af tilsætning af havreskalmel til foderet. Faglig Årsberetning 2006, 13-19, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter. Hansen, S.W., Clausen, T.N., Malmkvist, J., Damgaard, B.M. &
Hejlesen, C. 2004. Fyldfoder i vinterperioden. Betydning for adfærd og den senere reproduktion. Faglig Årsberetning 2003, 27-34, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter. Hejlesen, C. 2002. Pers. medl. Hejlesen, C., Sandbøl P. & Gregersen, K. 2005. Vand som mæthedsfaktor hos mink. Faglig Årsberetning, 2004, 137142, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro Danmark. Nutrient Requirements of Laboratory Animals, Fourth Revised Edition, 1995; Subcommittee on Laboratory Animal Nutrition; Committee on Animal Nutrition; Board on Agriculture; National Research Council Tauson, A.-H. 1993. Effect of body condition and dietary energy supply on reproductive processes in the female mink (Mustela vison). J. Reprod. Fert., Suppl. 47, 37-45.
Faglig Årsberetning 2009
15
16
Faglig Ă&#x2026;rsberetning 2009
Mulighed for at selektere for reduceret aggression i gruppeindhusning. Peer Berg1) & Steen H. Møller2) 1)
Aarhus Universitet, Det Jordbrugsvidenskabelige Fakultet, Institut for Genetik og Bioteknologi. Postboks 50, 8830 Tjele. 2)Aarhus Universitet, Det Jordbrugsvidenskabelige Fakultet, Institut for Husdyrsundhed og Biologi. Postboks 50, 8830 Tjele Sammendrag Der er evidens fra andre arter (eksempelvis fjerkræ) at selektion kan medvirke til at reducere aggression i grupper af dyr, og selektion kunne dermed være en måde at reducere aggression mellem mink i etagebure. På denne baggrund er der igangsat et selektionsforsøg med henblik på at reducere antallet af bidmærker på lædersiden af skindet. Avlsdyr udvælges på baggrund af antallet af bidmærker hos deres helsøskende i gruppeindhusning. Denne undersøgelse beskriver variationen i bidmærker i den første generation. I undersøgelsen indgår bedømmelser af bidmærker på i alt 640 mink fra etagebure og 289 af deres helsøskende der har gået parvis (han+tæve)i standardbure. I etagebure er der betydeligt flere bidmærker end hos de tilsvarende helsøskende i standardbure. Der ser også ud til at være en dårlig sammenhæng mellem antallet af bidmærker i standard og etagebure. I etagebure er tæverne generelt mere bidte end hannerne, men den mest bidte han er i gennemsnit mere bidt end den mindst bidte tæve. Der er en højere sammenhæng mellem antal bidmærker hos dyr af samme køn (de to hanner og de to tæver) end mellem kønnene i et etagebur. Det indikerer at bidmærker i høj grad skyldes kampe indenfor køn. Der fandtes en meget stor variation mellem helsøskende grupper/bure i antallet af bidmærker. Dette indikerer at genetiske forskelle er en væsentlig faktor for frekvensen af bid. Selektion for reduceret antal bidmærker vil fortsætte i de kommende år. Berg, P. & Møller, S. H. 2010. Mulighed for at selektere for reduceret aggression i gruppeindhusning. Faglig Årsberetning 2009. 17-22. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og Forsknings Center, Holstebro, Danmark. Abstract There is evidence from several species (e.g. poultry) that selection can contribute to reducing aggression in groups, and selection thus could be one way of reducing aggression in groups of mink in group housing. On this background, a selection experiment was started, aiming at reducing the number of bite marks on the skin side. This study describes variation in bite marks in the first generation. The study includes evaluation of bite marks on a total of 640 mink in group housing and 289 of their full sibs in standard cages (two animals).In group housing significantly more bite marks are observed than on the corresponding full sibs in standard cages. In addition, there seems to be a weak relationship between number of bite marks in group housing and standard cages. In group housing the females are generally more bitten than males, though the most bitten male has on average more bite marks than the least bitten female. A higher correlation between number of bite marks are observed between animals of the same sex (the two males and the two females) than between sexes in group housing. This indicates that bite marks to a large extent is due to fights within sexes. A large variation between full sibs/cages was found in the number of bite marks. This indicates that genetic differences are an important factor contributing to the number of bite marks. Selection for reduced number of bite marks continues in the coming years. Berg, P. & Møller, S. H. 2010. Possibilities for selecting for reduced aggression in grouphousing. Annual Report 2009. 17-22. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: bite marks, aggression, group housing, genetic effects
Faglig Årsberetning 2009
17
Berg, P. & Møller, S. H.
Indledning Flere undersøgelser har påvist flere bidmærker, når dyr holdes i grupper eksempelvis i etagebure (Hansen & Houbak 2005; Jeppesen 2009, Møller et al. 2003), mens en enkelt undersøgelse ikke kunne påvise forskelle i antal bidmærker mellem standardbure og etagebure (Lindberg et al. 2007). Bidmærker kan relateres til aggression og frygtsom adfærd, og er derfor en indikator for reduceret dyrevelfærd (Hansen & Jeppesen 2008, Møller et al. 2003). Tidligere undersøgelser har fokuseret på at reducere aggression og dermed bidmærker ved eksempelvis at give dyrene adgang til en ekstra redekasse (Jeppesen 2009). Dette har vist sig at kunne reducere antallet af bidmærker. En anden mulig vej, er at selektere for en reduceret aggression i etagebure. Det har tidligere vist sig, at indirekte selektion hos æglæggende høner i bure har kunnet reducere aggression, resulterende i et fald i dødelighed fra 68 % i generation 2 til 9 % i generation 6 (Muir 1996). På denne baggrund er der på Forskningscenter Foulum igangsat et selektionsforsøg for at reducere aggression i etagebure. Dette gøres ved at selektere imod antallet af bidmærker ved pelsning. Praktisk gennemføres dette ved, at bidmærker registreres på hvalpe der har gået to hanner og to tæver i etagebure og derefter udvælges avlsdyr til næste generation blandt deres søskende der har gået i standardbure. Selektionsforsøget startede i 2009 og kører indtil 2012. I denne undersøgelse præsenteres resultater fra den første generation, før der er foretaget selektion. Formålet er at beskrive frekvensen af bidmærker og årsager til variation i
18
antallet af bidmærker gruppeindhusning.
på
mink
i
Metode I projektet indgik hvalpe fra 170 kuld. Fra hvert kuld blev 4 helsøskende (to hanner og to tæver) ved fravænning sat i et etagebur, mens de resterende helsøskende blev placeret i standardbure (én han og én tæve). Alle hvalpe i etagebure blev pelset. Ved pelsning blev bidmærker bedømt på skindsiden efter skrabning. Antallet af bidmærker blev subjektivt bedømt med en skalakarakter som beskrevet i Tabel 1. Tabel 1. Bid karakter anvendt ved subjektiv bedømmelse af antal bidmærker i forbindelse med pelsning.
Bid karakter 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Antal bid mærker 0 1-5 6-10 11-15 16-20 21-25 26-30 31-35 36-45 Mere end 45
I alt blev bidmærker bedømt på 640 dyr fra etagebure. Antal bidmærker blev bedømt på Nakke (fra næsetip ned til skulder/forben), Krop (fra skulder og ned til 10 cm over halerod) og Hale (fra 10 cm over halerod til halespids, inkl. bagben). En samlet bid karakter blev beregnet som summen af de tre bedømmelser. Baseret på bedømmelserne af de 640 dyr i etagebure, blev der udvalgt avlsdyr blandt helsøskende indhuset i standardbure. De helsøskende der har gået i standardbure, og ikke blev selekteret til avl, er også blevet bedømt ved pelsning. Det var 199 hanner og 90 tæver.
Faglig Årsberetning 2009
Mulighed for at selektere for reduceret aggression i gruppeindhusning
Resultater I figur 1, 2 og 3 er vist fordelingen af bidbedømmelserne på henholdsvis nakke, krop og hale. Heraf fremgår det klart, at tæverne har flere bidmærker end
hannerne. Specielt er der flere hanner der ikke har bidmærker på enten nakke, krop eller hale (17 % til 26 %) end der er tæver (6 % til 12 %).
Nakke 50 45 40 35
%
30 Han
25
Tæve
20 15 10 5 0 0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Bid karakter
Figur 1. Fordelingen af bidmærker i nakken, fra næsetip ned til skuldrene, hos han- og tævehvalpe i etagebure, bedømt efter den skala der er beskrevet i Tabel1.
Krop 40 35 30
%
25 Han
20
Tæve
15 10 5 0 0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Bid karakter
Figur 2. Fordelingen af bidmærker på kroppen, fra skuldrene ned til 10 cm over haleroden, hos han- og tævehvalpe i etagebure, bedømt efter den skala der er beskrevet i Tabel1.
Faglig Årsberetning 2009
19
Berg, P. & Møller, S. H.
Hale 40 35 30
%
25 Han
20
Tæve
15 10 5 0 0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Bid karakter
Figur 3. Fordelingen af bidmærker i haleregionen, fra halespids til 10 cm over halerod, hos han- og tævehvalpe i etagebure, bedømt efter den skala der er beskrevet i Tabel1.
Der var stor variation i forekomsten af bidmærker imellem bure. De 10 % af burene der havde færrest bid mærker havde en samlet karakter på under 2,75, svarende til mindre end ca. 11 bidmærker per dyr, hvorimod dyr i de 10 % af burene med mest bid havde en samlet karakter på 12,4, svarende til mere end 50 bidmærker per dyr. Samlet udgjorde variationen mellem bure ca. 27 % af den samlede variation i bid karakteren. Da dyrene i et bur er helsøskende, indikerer dette at arvbarheden kan være helt op til 50 %. Hos både hanner og tæver var der en positiv korrelation mellem bid karakteren i de tre områder på mellem 0,45
og 0,77. Dette betyder at flere bidmærker i et område generelt også betyder flere bidmærker i de andre to områder. De 4 dyr i et etagebur blev rangeret efter antallet af bidmærker. I tabel 2 er vist den gennemsnitlige totale bidkarak-ter og korrelationen mellem total karakter for de 4 dyr. Af Tabel 2 fremgår at den mest bidte han har flere bidmærker end den mindst bidte tæve. Det fremgår desuden, at der er en højere sammenhæng mellem antal bid hos de to hanner og de to tæver end mellem hanner og tæver i et bur. Tabel 2 viser resultatet for den samlede bidkarakter. Resultatet var stort set det samme for bid i de enkelte regioner.
Tabel 2. Gennemsnit, spredning og koorelation mellem den totale bidkarakter på de 4 dyr i etagebure. Han1 og tæve 1 er hannen og tæven med lavest bidkarakter.
Han 1 Han 2 Tæve 1 Tæve 2
20
Bid karakter Gennemsnit Spredning 3.15 2.68 7.17 4.75 5.85 4.50 10.56 6.24
Han 1 -
Faglig Årsberetning 2009
Korrelationer Han 2 Tæve 1 0.54 0.35 0.44 -
Tæve 2 0.33 0.30 0.67 -
Mulighed for at selektere for reduceret aggression i gruppeindhusning
Der var en betydeligt lavere frekvens af bid blandt dyr i standardbure. Således havde under 5 % af hannerne bidkarakter på 2 eller højere, mens det for tæverne var 11 %, 8 % og 6 % for henholdsvis nakke-, krops- og haleregionen. Blandt hannerne havde 81 % til 84 % ingen bidmærker i hale- og kropsregionen, mens de tilsvarende tal for tæver var 69 % i begge regioner. Henholdsvis 72 % og 48 % af hanner og tæver havde ingen bidmærker i nakken. Da dyrene fra standard bure er selekteret kan der ikke laves en direkte sammenligning mellem parvis og gruppeindhusning. I tabel 3 er derfor lavet en sammenligning af de dyr fra standardbure der havde fået en bidkarakter på 0 (ingen bidmærker) eller 1 (1-5 bidmærker) med deres søskende af samme køn i etagebure. Bidkarakter over 1 er udeladt, da meget få dyr i standardbure fik denne karakter. Tabel 3. Gennemsnitlig bidkarakter for dyr i etagebure afhængig af karakter for deres helsøskende af samme køn i standardbur. ’Karakter’ er bid karakter i standardbur og ’Gennemsnit’ angiver det tilsvarende gennemsnit for de helsøskende af samme køn der gik i etagebure. N angiver antal dyr i standardbure, med ca. dobbelt så mange i etagebure. Spredningen på gennemsnit er imellem 1 og 1,5. Hanner i etagebur Tæver i etagebur Kropsdel Karakter N Gennemsnit N Gennemsnit 0 143 1.41 43 2.14 Nakke 1 48 1.19 36 2.72 0 161 2.00 62 1.94 Krop 1 31 2.31 19 1.97 0 167 1.79 61 3.01 Hale 1 26 1.54 22 2.82
Tabel 3 viser at der er betydeligt flere bid på de dyr, der har gået i etagebure. Der er ikke nogen tydelig sammenhæng mellem antal bid i standard og etagebure, da der generelt er meget lille forskel på bid karakteren uafhængigt af om helsøskende i standardbure er bidt eller ej.
Diskussion Der blev fundet en meget stor variation i antallet af bidmærker mellem bure med 4 helsøskende. Dette indikerer at genetiske forskelle kan være en væsentlig faktor for niveauet af bid i et bur. I dette studie udgjorde variationen mellem bure 27 % af den samlede variation og dette indikerer at den genetiske variation kan udgøre op til halvdelen af den samlede variation. Der er derfor en forventning om at den påbegyndte selektion vil resultere i forskelle i mængden af bidmærker i de kommende år. I modsætning til Jeppesen (2009) fandt vi ikke, at de to hanner var højst rangerede baseret på antallet af bidmærker. Tværtimod var den mindst bidte tæve mindre bidt end den mest bidte han. Korrelationen mellem antallet af bidmærker var højere mellem de to hanner og de to tæver end mellem kønnene. Dette indikerer at bidmærkerne i stor udstrækning er et resultat af slagsmål indenfor køn og i mindre grad slagsmål mellem kønnene. Denne tendens var mest tydelig i nakken og på kroppen, men mindre tydelig for antal bid i hale regionen. Der var betydeligt flere bidmærker blandt dyr indhuset i etagebure sammenlignet med deres helsøskende i standardbure. Baseret på det begrænsede materiale så det ud til, at der ikke var nogen direkte sammenhæng mellem hvilke familier der havde bid i standardbure og hvilke der havde i etagebure. Dette indikerer dels at der var meget få bid ved parvis indhusning, hvor de fleste med karakter 1 kun havde 1 eller 2 bid, dels at der kan være en forskellig motivation for at bide i henholdsvis standard og etagebure.
Faglig Årsberetning 2009
21
Berg, P. & Møller, S. H.
I forbindelse med aflivning af dyrene er der udover bidmærker registreret vægt, bidsår og ar på skindet. Sammenhængen mellem disse er under analyse, og vil blandt andet kunne beskrive hvor meget bidmærker på lædersiden afspejler sår og ar observeret ved pelsning. Referencer Hansen, S.W. & Jeppesen, L.L. 2008. Bidmærker som velfærdsindikator hos mink. Faglig Årsberetning 2007, 13-23. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter. Hansen, S.W. & Houbak, B. 2005. To skridt frem og tre tilbage – gruppeind-husning af mink. Faglig Årsberetning 2004, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter.p. 39-47.
22
Jeppesen, L. L. 2009 Ekstra redekasse i klatrebure og ekstra etage til standardbure. Effekt på adfærd, bidmærker og undersorter hos mink. Faglig Årsberetning 2008, 23-36. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter. Lindberg, H.M.K., Hansen, S.W., Alden, E. & Lidfors, L. 2007. Effect of climbing cages and group size on behaviour and production in juvenile mink. NJF-seminar 403, Kolding, Denmark. 6 pp. Muir W.M. 1996. Group Selection for Adaptation to Multiple-Hen Cages – Selection Program and Direct Responses. Poultry Science Vol.75(No.4)
Møller, S.H., Hansen, S.W. & Sørensen, J.T. 2003. Assessing animal welfare in a strictly synchronous production system: The mink case. Animal Welfare 12: 699-703.
Faglig Årsberetning 2009
Nedarvningsforhold for sorte ganer hos mink. K. Christensen1, R. Anistoroaei1 M. Fredholm1 & V. H. Nielsen2. 1) Det Biovidenskabelige Fakultet, Institut for Basal Husdyr- og Veterinærvidenskab, Sektion for Genetik & Bioinformatik, Grønnegaardsvej 3, DK-1870 Frederiksberg C. 2) AArhus Universiter,Det Jordbrugsvidenskabelige Fakultet, Inst. for Genetik og Bioteknologi, Blichers Allé 20, Postboks 50, 8830 Tjele.
Sammendrag Nedarvningsforholdene for sorte ganer er blevet undersøgt hos mere end 1000 F2 dyr, der stammede fra en krysning af Wild-mink og “short nap” sort Standard. Der blev fundet en statististisk significant sammenhæng mellem ganefarven hos forældre og afkom. Der blev også fundet en statististisk significant sammenhæng mellem ganefarven og en genmarkør Mvi1950; men arvegangen af ganefarve kunne ikke forklares alene ved udspaltning af alleller i et genpar. Der var overhovedet ingen sammenhæng mellem ganefarve og pelsfarve. Christensen, K., Anistoroaei, R., Fredholm, M. & Nielsen, V. H. 2010. Nedarvningsforhold for sorte ganer hos mink. Faglig Årsberetning 2009, 23-25. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark
Abstract The inheritance of black palate colour has been investigated in more than 1000 F2 animals derived from a cross between Wild-mink and “short nap” Black mink. A statistically significant relationship was found between the palate colour in parent and offspring. In addition was found a statistically significant relationship between the palate colour and a gene marker Mvi1950; but the inheritance of palate colour could not be explained by segregation of the alleles in one locus alone. Absolutely no relationship was found between the colour of the palate and coat colour scored from one to seven. Christensen, K., Anistoroaei, R., Fredholm, M. & Nielsen, V. H. 2010. Inheritance of black palate in mink. Annual Report 2009, 23-25. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: genetics, palate-colour, coat-colour
Indledning Der har blandt minkfarmere været en formodning om, at der var en sammenhæng mellem ganefave og pelsfarve, således at mørk ganefarve gav de mørkeste mink. Der har i årene 2005-8 været gennemført et krydsningsforsøg med Vild-mink og ”short nap” Standard mink, hvor der er produceret mere end 1000 F2 dyr (anden krydsningsgeneration). Dyrene indgår i et projekt, hvis formål er at kortlægge gener for pelskvalitetsegenskaber. Der er i dette projekt blandt mange andre registreringer også registreret ganefarve. Her vil blive præsenteret undersøgelser over sammenhæng mellem ganefarven hos forældre og afkom, sammenhæng mellem ganefarve og genmarkører, (Anistoroaei et al, 2009), og endelig sammenhæng mellem ganefarve og score for pelsfarve.
Materiale og metoder Materialet omfatter i alt 1050 F2 dyr efter 22 fædre og 92 mødre i F1 generationen, hvor F1 generationen var krydsninger mellem Vildmink og short nap Standard mink. Alle dyr er blevet undersøgt for farven af ganen og har fået en værdi H for hvid og B for sort. Alle skindene er blevet farve klassificeret med en score fra 1 til 7 på det automatiske sorteringsanlæg hos Kopenhagen Fur Glostrup. Skalaen går fra lys til mørk. Dyrene er endvidere blevet typet for mere end 50 genetiske markører (mikrosatelliter) på det Biovidenskabelige Fakultet. De statistiske undersøgelser er gennemført v.h.a. Statistical Analyse System, SAS proc freq.
Faglig Årsberetning 2009
23
Christensen, K., Anistoroaei, R., Fredholm, M. & Nielsen, V. H.
Resultater. Som det ses af Tabel 1 er chancen for at få sort gane ca. 3 gange større når begge forældre har sort gane (50 %) end når de har lys gane (17,6 %). Forskellen mellem grupperne er statistisk set meget betydelige. Som det fremgår af den statistiske analyse vil et sådant resultat (Prob) kun forekomme 1 ud af 10.000 gange såfremt der ikke var nogen sammenhæng. Tabel 1. Sammenhæng mellem forældrenes og afkommets ganefarve givet ved antal i hver klasse. Ved den statistiske test er forældrene kombinationerne H B og B H slået sammen til en gruppe
Ganefarve
% Sorte
Far
Mor
Afkom B
H
B
B
68
68
B
H
86
717
50
H
B
87
144
35,5
H
H
75
351
17,6
Statistic DF Value Prob Chi-Square 2 63.8520 <.0001
Som det ses af Tabel 2 er chancen for at få sort gane ca. 2 gange større når dyret har genotypen Mvi1950 170-170 (39,9 %) end når de har genotypen 172-172 (20,0 %). Forskellen mellem grupperne er statistisk set meget betydelige. Mvi1950 er lokaliseret til minkens kromosom 7. Tabel 2. Sammenhæng mellem F2 dyrenes ganefarve og deres genotype for mikrosatellite Mvi1950 givet ved antal i hver klasse.
Mvi1950
Ganefarve B
H
170-170
139
216
355
39,9
170-172
86
250
336
25,6
20
80
100
20
245
546
791
172-172 Total
Total
% Sorte
Statistic DF Value Prob Chi-Square 2 21.2924 <.0001
Sammenhængen er blevet fundet ved hjælp af koblingsanalyseprogrammet CRIMAP og allokering alle B B forældre som heterozygote for dominant farve og de 68 afkom med lys gane som homozygot recessive.
24
Som det ses af Tabel 3 er fordeling af pelsfarve score næsten ens uanset om ganefarven er hvid eller sort. Tabel 3. Sammenhæng mellem F2 dyrenes ganefarve og deres pelsfarve score givet ved antal i hver klasse.
Ganefarve
Pelsfarve score
B
4
5
6
7
70
71
53
44
Total 238
H
142
157
126
100
525
Total
212
228
179
144
763
Statistic Chi-Square
DF 3
Value 0.5661
Prob 0.9041
Proportionen af hvid og sort er praktisk taget den samme uanset i alle farveklasser. Tallene kunne med 90 % sandsynlighed (Prob) opstå rent tilfældigt. Som det ses af Tabel 4 er fordeling af pelsfarve score næsten ens uanset om ganefarven er hvid eller sort. Tallene kunne med 74 % sandsynlighed (Prob) opstå rent tilfældigt. Tabel 4. Sammenhæng mellem F2 dyrenes pelsfarve og deres genotype for mikrosatellite Mvi1950 givet ved antal i hver klasse.
Mvi1950
Pelsfarve score 4
5
6
7
170-170
105
99
76
67
347
170-172
86
97
81
60
324
172-172
21
32
22
17
92
212
228
179
144
763
Total
Total
Statistic DF Value Prob Chi-Square 6 3.4692 0.7481
Diskussion Som det ses af Tabel 1 er der statistisk sikker sammenhæng mellem forældrenes farvetype og afkommets. Det er dog ikke muligt at forklare udspaltningen ved hjælp af simpel Mendelsk udspaltning i et lokus. Såfremt der kun var tale om et lokus med simpel udspaltning må der kun forekomme udspaltning ved parring i en af de rene parringstyper, f.eks. H gange H. Så at ganefarve nedarves via et enkelt gen kan udelukkes. Men der kan opsættes hypoteser om at udspaltningen skyldes alleler i mere end 1 lokus. F.eks. udspaltningen i B gange B forældre kan minde lidt om dominant arvegang for B
Faglig Årsberetning 2009
Nedarvningsforhold for sorte ganer hos mink
(sort). Og de forældre der har givet både lyse og sorte ganer må være heterozygote i dette lokus (hypotese 1). Tilsvarende kan der fremsættes en (hypotese 2) for udspaltning af B blandt parringstypen H gange H i de familier hvor der er kommet B afkom. Ved anvendelse af de to hypoteser, har det været muligt at undersøge sammenhængen til de typede genmarkører i QL projektet og nedarvningen af ganefarve. Der blev fundet en betydelig sammenhæng mellem hypotese 1 og mikrosatellit Mvi1950 og resultaterne er præsenteret i tabel 2. Her er der påvist statistisk sikker sammenhæng mellem udspaltningen af ganefarve og genmarkøren. Så en del af nedarvningen af ganefarve kan tilskrives et lokus koblet til Mvi1950.
I tabel 3 og 4 er vist sammenhængen mellem ganefarve og score for pelsfarvens mørkhedsgrad. Der blev ikke fundet nogen sammenhæng hverken til ganefarve eller til genmarkøren Mvi1950. Så konklusionen må være at ganefarve ikke på nogen måde kan bruges som indikator for minkpelsens mørkhedsgrad. Referencer Anistoroaei R, Ansari S, Farid A, Benkel B, Karlskov-Mortensen P, Christensen K. An extended anchored linkage map and virtual mapping for the American mink genome based on homology to human and dog. Genomics. 2009, 94 :204-210.
Faglig Årsberetning 2009
25
26
Faglig Ă&#x2026;rsberetning 2009
Niveau af indavl og genetisk afstand på danske mink farme (Neovison vison) Peter Foged Larsen1,#, Henrik Bækgaard1, Michael Sønderup1, Hans Henrik Møller1, Bente Krogh Hansen2, Vivi Hunnicke Nielsen2, Ditte Demontis3, Volker Loeschcke3 & Cino Pertoldi3 1 Dansk Landbrugdrådgivning, Landscentert Pelsdyr, Udkærsvej 15, 8200 Skejby, Danmark 2 Århus Universitet, Afdeling for Genetik og Bioteknologi, Blichers Allé, 8830 Tjele, Danmark. 3 Århus Universitet, Biologisk Institut, Ny Munkegade, 8000 Århus C, Danmark # nuværende adresse: KomTek Solutions ApS, Drivervej 8, 6670 Holsted, Denmark, Mobil: +45 28764790, E-mail: depet22@hotmail.com Sammendrag Med fokus på niveauet af slægtskab (R) indenfor mink fra forskellige farvetyper og farme i Danmark præsenterer vi her resultatet af et microsatellit studie. Der blev observeret store forskelle i niveauet af R (R fra 0,017-0,520) og i genetisk afstand (FST range: 0-0.29) mellem farvetyper og farme. Ved at korrelerede niveauet af R med avlsresultatet for de enkelte mink stammer fandt vi en stærk og statistisk sikker negativ sammenhæng mellem de to parametre (R2=0.60, p<0.001). Det er første gang en sådan korrelation er blevet beskrevet på kommercielle minkfarme. Derfor foreslår vi at microsatellitter, eller en anden type markør f.eks. VeraCode, SNPlex eller Fluidigm EP1 systemer, som kan anvendes til at vurdere niveauet af R I mink stammer med reproduktive problemer, eller anvende genetisk information når der skal købes nye avlsdyr for at optimere fitness. Alternativt kan teknikken også anvendes til at opnå heterosis indenfor en farvetype ved at bruge den genetiske variation, som findes indenfor typen. Vi håber at dette nye molekylære genetiske redskab/information kan anvendes i praktisk minkavl i fremtiden. Larsen, P. F., Bækgaard, H., Sønderup, M., Møller, H. H., Hansen, B. K., Nielsen, V. H., Demontis, D., Loeschcke, V. & Perfoldi, C. 2010. Niveau af indavl og genetisk afstand på danske mink farme (Neovison vison). Faglig Årsberetning 2009, 27-31, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Abstract With special emphasis on the level of relatedness (R) within mink color types (Neovison vison) originating from different mink farms in Denmark we present here the results from a microsatellite analysis study. Large differences were observed in level of R (R range: 0.017-0.520) and in genetic distance (FST range: 0-0.29) between strains and farms. Moreover, we correlated the level of R and breeding result for individual mink populations and found a very strong and highly significant negative correlation between these two parameters (R2=0.60, p<0.001). To our knowledge this is the first time that such a correlation has been demonstrated in mink from commercial mink farms. As a result we suggest using microsatellite or an alternative type of markers e.g. VeraCode, SNPlex and Fluidigm EP1 systems, which can be utilized to evaluate level of R in mink strains with reproductive problems and apply information from genetic markers when e.g. buying in new breeding animals in order to optimize fitness. Alternatively this technique could also be employed in order to obtain heterosis within color types applying the genetic variation found within a color type. We hope that this new molecular genetic information can be applied in practical mink farming in the future. Larsen, P. F., Bækgaard, H., Sønderup, M., Møller, H. H., Hansen, B. K., Nielsen, V. H., Demontis, D., Loeschcke, V. & Perfoldi, C. 2010. Level of inbreeding and genetic distance in Danish farm mink (Neovison vison). Annual report 2009, 27-31, Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark Keywords: Indavl, genetisk afstand, farvetyper, microsatellitter.
Indledning Indtil for få år siden var de genetiske ressourcer nødvendige for at studere genetisk populationsstruktur i mink (Neovision vison) meget begrænsede,
men i de seneste år er en lang række af markører blevet publiceret (f.eks. Anistoroaei et al, 2006, 2007). Fra de hidtil begrænsede undersøgelser om-
Faglig Årsberetning 2009
27
Larsen, P. F., Bækgaard, H., Sønderup, M., Møller, H. H., Hansen, B. K., Nielsen, V. H., Demontis, D., Loeschcke, V. & Perfoldi, C.
handlende mink genetik, er det blevet vist, at der er store genetiske forskelle mellem forskellige stammer af mink (f.eks. Hammershøj et al, 2005). Omvendt fandt, Belliveau et al. (1999), at der var et lavt niveau af genetisk variation mellem farvetyper mellem farme. Ligeledes udviste farm mink klassiske tegn på indavl, såsom overskud af homozygotes eller heterozygote underskud, samt høj FIS (Belliveau et al, 1999; Bifolchi et al. 2009). Andre nye undersøgelser har antydet, at udavlsdepression, som følge af krydsning mellem vilde og undslupne farm mink, delvist er ansvarlig for tilbagegangen i vilde mink populationer i deres naturlige habitat i Canada (Bowman et al. 2007). Igennem det seneste årti har der været en stagnerende til svagt faldende tendens i avlsresultatet på danske minkfarmer (Clausen 1996, Østergaard 2006, Hansen et al. 2008). Samtidig har goldprocenten også været stigende, og ændringen i disse to faktorer – avlsresultat og goldprocent - er typiske indikatorer for indavlsdepression (Berg 1996a, b). Derfor, med de nye genetiske muligheder indenfor mink, ville det være interessant at undersøge, hvorvidt graden af indavl er stigende på danske minkfarme og i hvilket omfang dette kan være relateret til faldende avlsresultat og stigende goldprocent. Ydermere var det interessant udfra et avlsmæssigt synspunkt at estimere den genetiske variation indenfor farvetyper og få en ide om hvordan udvælgelse efter størrelse, kvalitet, hår længde og farve har påvirket minkens genetik gennem mere end 70 år, siden de første farme blev etableret. I denne undersøgelse undersøgte vi variation i 20 microsatellit loci i 20 ikke relaterede individer fra 33 stammer/ populationer af mink fra 13 forskellige farme i Danmark. Det primære formål var at estimere niveauet af slægtskab
28
(relatedness - R) inden for de enkelte populationer. R kan betragtes som et mål for graden af indavl, idet jo mere relaterede individer er jo større er indavlen, idet indavl er defineret som parring mellem beslægtede individer. Dernæst ville vi gerne belyse den genetiske afstand/struktur mellem farvetyper og specielt indenfor farvetyper. Endelig ville vi prøve at korrelere niveauet af R med avlsresultatet for de enkelte minkstammer, for undersøge sammenhængen mellem de to parametre. Flere typer af mink er inkluderet i undersøgelsen, men hovedvægten er lagt på sort, hvid og vildtype mink. Materiale og metoder Materiale og metode afsnit er til rådighed fra den korresponderende forfatter, hvis nogen skulle være interesseret. Derudover vil en detaljeret beskrivelse af materialer og metoder blive publiseret i et passende internationalt tidsskrift. Alle molekylære analyser blev udført ved universitetet i Warszawa i Polen. I hver gruppe er 20 mink scoret for 20 microsatellit loci. Resultater Slægtskab (R) indenfor farvetyper Indenfor de sorte mink observerede vi den største variation i niveauet af slægtskab. Nogle farme med sorte mink havde ekstremt høje slægtskabs niveauer (se figur 1). I vild mink og hvide mink, var slægtskabet lavere og mere ens på tværs af farme, og kun få farme udviste høje niveauer af indavl. Tre populationer af safir mink var inkluderet i analysen, og de viste alle en høj grad af R. Højeste niveau af R, blev dog observeret i pearl mink (kun en prøve), mens prøver fra mahogny og silver viste et lavt niveau af R (måske ikke overraskende pga. deres oprindelse som ”Blandingdyr”). Kun 3 populationer var ikke signifikant forskellige fra nul (population 6, 22 og 23).
Faglig Årsberetning 2009
Niveau af indavl og genetisk afstand på danske mink farme (Neovison vison).
Figur 1. Niveau af slægtskab (R) blandt individer, inden befolkning. Første otte populationer (fra venstre) er sorte mink. De næste otte populationer er hvide mink, tre safir mink, elleve vildtype mink, og endelig en silver, en mahogany og en pearl mink befolkning (se farven på bar i bunden af figuren).
Genetisk struktur Den genetiske struktur (FST), dvs. niveauet af genetisk forskellighed indenfor og mellem mink stammer og minkfarme, viste en høj grad af genetisk variation. Mellem forskellige mink farvetyper 0,06-0,40 (data ikke
vist). I sorte mink (herunder amerikanske short nap mink) fandt vi FST værdier mellem 0,02-0,29, i hvide mink FST: 0-0,6, indenfor wild type mink FST: 0-0,07 og indenfor safir mink FST: 00,02.
Figur 2. Genetisk landkort, som viser den genetiske afstand mellem farvetyper.
Korrelation mellem slægtskab og avl resultat Ved at korrelere graden af relatedness og avlsresultatet i de enkelte mink-
stammer fandt vi en stærk signifikant (p <0,001) negativ lineær korrelation (R2 = 0,60).
Faglig Årsberetning 2009
29
Larsen, P. F., Bækgaard, H., Sønderup, M., Møller, H. H., Hansen, B. K., Nielsen, V. H., Demontis, D., Loeschcke, V. & Perfoldi, C.
en del af en mulig forklaring, såsom farmmanagement mht. fodring og huldstyrring, fandt vi i undersøgelsen en meget høj korrelation i slægtskab R og avlsresultat. Vi er derfor overbeviste om, at sådanne oplysninger kan anvendes i praksis til udvikling af forbedrede driftsmetoder på danske minkfarme. I første omgang er det nødvendigt at afprøve metoderne i teorien, og derefter skulle en avler/ avlere stille dyr til rådighed for at vi kunne prøve disse molekylære genetiske værktøjer på rigtige farme.
Figur 3. Genetisk sammenhæng mellem omfanget af R (slægtskab) og avlsresultat.
Diskussion Genetiske struktur Gennem detaljeret genetisk analyse af forholdet mellem de enkelte mink stammer, med hensyntagen til oplysninger om transport/salg af mink blandt avlere, bemærkede vi, at nogle farme, som udveksler hanner regelmæssigt – havde en tydelig tendens til at udvise et lavere niveau af genetisk strukturering mellem farme (data ikke vist). Dette eksempel viser klart en homogenisering effekt af sådanne udvekslinger (gen flow) blandt genpuljer. På nuværende tidspunkt har vi ikke et overblik over, hvor mange hanner pr. generation der kan udveksles inden stammerne bliver genetisk meget ens. Selvfølgelig afhænger det også af nye hanners parringssucces og deres anvendelse - men er klart et spørgsmål, som har relevans i praktisk minkavl, og som vi på nuværende tidspunkt ved for lidt om. Korrelation resultat Til trods af bidrager til de enkelte
30
mellem slægtskab og avl at mange eksterne faktorer variation af avlresultatet på farme og indavl kun udgør
Inden for dette projekt vil vi i kommende undersøgelser simulere hybrider mellem rene linjer indenfor farvetyper med henblik på at vurdere "den potentielle fitness" (som har været vist i denne undersøgelse at være negativt korreleret med slægtskab) i hybride individer og sammenligne med fitness i rene linjer. Med fitness mener vi ikke kun avlsresultat, men også andre fitness relaterede egenskaber, som f.eks. kropsstørrelse, længde, vægt ved fødslen osv. Når vi kender den genetiske afstand mellem rene linjer vi vil potentielt være i stand til at foreslå avlere bedre avl strategier. Det betyder at hvis f.eks. alle topavlere (avlsdyrsælgere) har en "genetisk profil" for deres dyr - kan vi, baseret på genetiske data fra en evt. køber farm, som gerne vil ud og købe nye hanner – rådgive ham/hende om hvilkensælger farm de genetisk set skal købe fra for at minimere graden af slægtskab – og måske endnu mere interessant, hvem de ikke skulle købe fra. Nogle avlere har købt hanner fra samme sælgerfarm i mange år, og som vi også har vist i denne undersøgelse, vil sådanne to farme ende med at være genetisk meget ens. Hvis en avler har to farme, som han/hun er interesseret i at købe avlsdyr fra – så kan den genetiske analyse afsløre om den ene farm, f.eks. rent tilfældigt er genetisk
Faglig Årsberetning 2009
Niveau af indavl og genetisk afstand på danske mink farme (Neovison vison).
meget ens med ens egne dyr, hvorimod den anden farms dyr er genetisk set meget forskellige. Vi har en god idé om, hvem vi ville købe nye hanner fra den sidste (i hvert fald ifølge teorien). Ved at inkludere genetisk information ved overvejelser om krydsningsproduktion for at få flere hvalpe, kan vi måske være i stand til at opnå heterosis effekter indenfor farvetyper. Heterosis er oftest noget man taler om mellem farvetyper (Hansen et al. 2008), men ved at kunne genetisk aflæse den genetiske afstand indenfor farvetyper, kan det være muligt at se sådanne heterosis effekter indenfor farvetyper. En mulighed, som ofte er mere attraktiv, idet man ikke primært producerer brune mink af tvivlsom størrelse og kvalitet. Fremtidige undersøgelser skal være med til at vise, hvorledes den genetiske afstand indenfor farvetyper er relateret til andre vigtige egenskaber såsom skindkvalitet, uld tæthed, størrelse osv. Konklusion Anvendelse af disse nye genetiske markører skal kunne anvendes i praktisk minkavl og derved kunne hjælpe med til at løfte sløret for nogle af de problemer, vi står over for i dag, men også bidrage til at løse disse problemer ved at inddrage genetisk viden i avlsarbejdet i fremtiden. Referencer Anistoroaei, R., Farid, A., Benkel, B., Cirera, S., Christensen, K. (2006). Isolering og karakterisering af 79 microsatellite markører fra den amerikanske mink (Mustela vison). Anim Genet 37:185-188. Anistoroaei, R., Menzorov, A., Serov, O., Farid, A., Christensen, K. (2007). Den første kobling kort over den amerikanske mink (Mustela vison). Animal Genetics 38: 384-388.
Belliveau, AM, Farid, A., O'Connell, M. og Wright, JM (1999). Vurdering af den genetiske variation i fangenskab og vilde amerikanske mink (Mustela vison) ved hjælp af microsatellite markører. Canadian Journal of Animal Science 79: 7-16. Berg, P. (1996a). Udvikling og resultat af stærkt indavlede stamme af mink. Anim. Prod. Gennemgang. Appl. Sci. Rep 27, 195-197. Berg, P. (1996b). Virkningen af indavl på reproduktion og produktion træk i mink, Anim. Prod. Review, Appl. Sci. Rep 27, 57-62. Bifolchi, A., Picard, D., Lemaire, C., Cormier, JP, Pagano, A. (2009). Beviser for blanding mellem opdelte genetiske puljer på regionalt plan i en invasiv kødædende. Conservation Genetics. Online udgivelsesdato: 17Feb-2009. Bowman, J., Kidd, AG, Gorman, RM, Schulte-Hostedde, AI (2007). Vurdere potentialet for påvirkninger af vildtlevende mink i vilde mink i Canada. Biological Conservation 139, 12-18. Clausen, J. (1996). Pelsdyrbestanden 1996. Dansk Pelsdyravl 6: 270-271. Hammershøj, M., Pertoldi, C., Asferg, T., Møller, TB, Kristensen, NB (2005). Dansk fritgående mink populationer består hovedsageligt af husdyr. Oplysninger fra microsatellite og stabil isotop analyser. Journal for Nature Conservation 13: 267-274. Hansen, BK., Berg, P. & (2008). Heterosis i mink, IX International Scientific Fur Animal Production, (Scientifur 4).
Larsen, PF. Proceedings Congress in s. II-14b P
Østergaard, J. 2006. Avl resultat 2006. Dansk Pelsdyravl 9: 16-17.
Faglig Årsberetning 2009
31
32
Faglig Ă&#x2026;rsberetning 2009
Protein til mink i drægtighedsperioden. Fortsatte undersøgelser. Tove N. Clausen & Peter Sandbøl Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Herningvej 112C, 7500 Holstebro. Sammendrag Til fortsatte undersøgelse af behovet for protein i drægtighedsperioden (6/4 til 26/4) ved varieret fedt og kulhydrat niveau, blev anvendt 7 hold brune mink á ca. 134 tæver pr hold. Tæverne blev fodret med fodercentralfoder indtil 6/4. Fra 6/4 blev foderets proteinindhold ændret således at andelen af den omsættelige energi fra protein (OEp) udgjorde fra 35 til 45 %, andelen af fedt udgjorde fra 40 – 55 OEf og andelen af kulhydrat udgjorde 10 – 20 OEk. Fra 26/4 til dag 28 fik alle tæver 30 OEp, derefter blev fodret med fodercentralfoder. Kun tæver der fødte i perioden 26/4 til 5/5 blev inddraget i undersøgelsen. Resultaterne viste ikke signifikante forskelle mellem nogen af holdene, hvorfor de indtil videre gældende anbefalinger for protein og aminosyrer i drægtighedsperioden ikke ændres. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2010. Protein til mink i drægtighedsperioden. Fortsatte undersøgelser. Faglig Årsberetning 2009, 33-37, Pelsdyrerhvervets Forsøg- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Summary To continue the investigations on the need of protein, fat, carbohydrates and amino acids in the gestation period (April 4 to April 26) we used 6 groups each consisting of 134 brown mink females. The females were fed with feed from the local Feedkitchen until April 6, thereafter the protein content was varied in the groups from 35 to 45 percent of metabolisable energy from protein (MEp) fat was varied from 40 to 55 MEf and carbohydrates was varied from 10 – 20 MEc. After April 26 these females had 30 MEp until day 28 in the nursing period, thereafter feed from the local feed kitchen was used. Only females giving birth between April 26 and May 5 was included in investigation. The results showed no significant difference between any of the groups, so the current recommendations for protein and amino acids in the gestation period will not be changed. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2010. Protein to mink in the gestation period. Continued investigations, Annual Report 2009, 33-37, Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: minktæver, foder, drægtighed
Baggrund Resultater fra tidligere undersøgelser (Clausen & Sandbøl, 2009 og 2008; Clausen et al, 2007) viser at foder fra 6. april til 26. april bør indeholde mindst 40 procent af den omsættelige energi fra protein (OEp) for at få mange levende hvalpe ved fødsel og god hvalpevækst, ved 28 OEp og derunder vedbliver hanhvalpene at være små helt frem til pelsning, og der er en tendens til at tævehvalpe født efter lav proteinfodring i drægtighedsperioden (24 OEp), får færre hvalpe i den kommende dieperiode (Clausen & Sandbøj, 2009).For at få en bedre klarlæggelse af protein behovet i drægtighedsperioden, er det nødvendigt at indskrænke området for protein niveau og samtidig
variere forholdet mellem fedt og kulhydrat. Materiale og metoder Der blev anvendt 7 hold á 135 brune mink tæver (tabel 1). Tabel 1 Holdopstilling
Hold P45 P40-1 P40-2 P40-3 P35-1 P35-2 P35-3
foder 6/4 – 26/4 45:40:15 40:50:10 40:45:15 40:40:20 35:55:10 35:50:15 35:45:20
26/4 – dag28
30:52:18
Indtil 6/4 blev alle tæver fodret med fodercentral foder. Reel drægtighed for mink er 30 dage, tæver der føder fra 26/4 til 5/5 har således overstået
Faglig Årsberetning 2009
33
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
implantationen i perioden 27/3 til 5/4. Da tæverne blev fodret med forsøgsfoder fra 6/4 til fødsel, var implantationen overstået før fodringsstart for alle tæver der fødte i perioden 26/4 til 5/5. Da vi udelukkende ønskede at se på fodringseffekten i drægtighedsperioden, blev kun de tæver der fødte i denne periode inddraget i de statistiske beregninger. Efter fødsel blev alle tæver fodret ens med energifordelingen 30:52:18 indtil dag 28, hvorefter der blev anvendt fodercentral foder. Tæverne blev huldvurderet dagen efter fødsel efter en skala udviklet af Rouvinen og Armstrong (Clausen, 2006). Tæverne blev vejet primo januar og 20. februar, dag 28 og dag 49. Hvalpene blev talt ved fødsel samt vejet og talt dag 28 og dag 49 i dieperioden. Tabel 2. Foderplaner i perioden 6/4 - 26/4 2009. Hold P45 Fiskeafskær < 3% fedt (001) 25,0 Industrifisk 8-12% fedt (082) 29,5 Fjerkræaff. Farmfood (244) 24,8 Fiskemel (322) 1,48 Hæmoglobinmel (371) 3,0 Kartoffelprotein (541) 2,0 Majsgluten (521) 3,0 Byg poppet (627) 5,0 Hvede poppet (667) 5,0 Soyaolie (871) 0,69 Svinefedt (352) 0,345 Vit.-bl. (743) 0,2 Vand 0 Eddikesyre 0,2 Plantal: Energiindhold: kcal/100g 169 MJ/kg 7,1 MJ/kg tørstof 17,7 Tørstof, % 40 Energifordeling 45:40:15 Aske, % 3,2 Analysetal: Energiindhold: kcal/100g 154 MJ/kg 6,5 MJ/kg tørstof 18,3 Tørstof, % 35 Energifordeling 43:42:15 Aske, % 2,1
34
Foderet blev analyseret regelmæssigt og aminosyreindholdet analyseret på en blandeprøve opsamlet gennem hele perioden. Foderplaner ses af tabel 2. I de anvendte foderblandinger overholdt P45, P40-1, P40-2 og P40-3 blandingerne det anbefalede aminosyreindhold for den pågældende periode. I P35-1, P35-2 og P35-3 blandingerne var kravene sænket med 9 – 14 % i forhold til anbefalingerne. De statistiske beregninger er udført med statistikprogrammet SAS. Procedurerne GLM (ss4), LSMEANS / PDIFF er anvendt med 5 % som signifikansniveau ved beregninger over vægt og kuldstørrelse. Relevante kovariater er medtaget i de tilfælde de er signifikante. Goldprocent er analyseret med proceduren PROBIT eller χ2.
P40-1 20,0 30,0 20,5 4,5 1,97 2,0 3,0 3,53 3,53 2,73 1,36 0,2 6,66 0,2
P40-2 20,0 28,8 20,0 4,5 1,78 1,14 2,54 5,32 5,32 1,77 0,89 0,2 7,65 0,2
P40-3 20,0 29,4 20,0 4,5 1,66 0,185 1,72 6,97 6,97 0,78 0,39 0,2 7,15 0,2
P35-1 18,6 30,0 24,0 4,0 1,89 2,0 1,82 4,04 4,04 3,97 1,98 0,2 3,42 0,2
185 7,8 19,4 40 40:50:10 3,2
176 7,4 18,4 40 40:45:15 3,2
167 7,0 17,5 40 40:40:20 3,2
203 8,5 20,3 42 35:55:10 3,2
194 184 8,1 7,7 19,3 18,4 42 42 35:50:15 35:45:20 3,0 2,9
181 7,6 19,6 39 40:51:9 3,1
163 6,8 18,9 36 39:48:13 2,9
145 6,1 17,6 34 40:41:19 2,7
189 7,9 20,3 39 35:55:10 2,8
177 163 7,4 6,8 19,7 18,6 38 37 34:52:14 34:47:19 2,6 2,6
Faglig Årsberetning 2009
P35-2 15,0 30,0 20,6 4,0 1,76 2,0 1,56 5,97 5,97 3,05 1,53 0,2 8,3 0,2
P35-3 15,0 30,0 16,3 4,0 1,63 2,0 0,79 7,76 7,76 2,30 1,15 0,2 11,1 0,2
Protein til mink i drægtighedsperioden. Fortsatte undersøgelser.
Resultater og diskussion Foder Foderets kemiske sammensætning ses af tabel 2, for de fleste af holdene svarede det til plantallene, i P45 var proteinindholdet dog lidt under det forventede. Den analyserede aminosyre-
sammensætning (tabel 3), varierede lidt i forhold til de beregnede værdier, uden at der var en systematik i variationerne, hvorfor dette betragtes som analyse usikkerheder.
Tabel 3. Foderets analyserede aminosyre indhold (g fordøjelige aminosyrer pr 100 kcal), sammenholdt med plan tal og anbefalet indhold. P45
P40-1
P40-2
P40-3
P35-1
P35-2
P35-3
analyse plan analyse plan analyse plan analyse plan analyse plan analyse plan analyse plan anbefaling met 0,22
0,23
0,20
0,22
cys 0,10
0,10
0,085
0,090 0,096
0,19
0,091 0,094
0,22
0,21
0,090 0,079
0,22
0,19
0,080 0,085
0,19
0,18
0,081 0,076
0,19
0,18
0,079 0,07
0,19
0,22
lys 0,66
0,67
0,55
0,62
0,55
0,61
0,55
0,61
0,53
0,55
0,56
0,55
0,53
0,56
0,61
thr 0,39
0,38
0,32
0,35
0,32
0,34
0,32
0,33
0,32
0,31
0,33
0,30
0,30
0,30
0,33
trp 0,080
0,099 0,082
0,087 0,077
0,086 0,078
0,086 0,075
0,077 0,072
0,079 0,075
0,080 0,08
his 0,29
0,32
0,22
0,26
0,22
0,26
0,20
0,26
0,21
0,23
0,21
0,23
0,19
0,23
0,26
phe 0,50
0,51
0,45
0,44
0,46
0,43
0,44
0,41
0,44
0,38
0,43
0,38
0,41
0,38
0,41
tyr 0,32
0,35
0,36
0,32
0,30
0,31
0,30
0,29
0,39
0,27
0,33
0,27
0,27
0,27
0,28
leu 0,89
0,98
0,98
0,85
0,79
0,83
0,76
0,79
0,76
0,72
0,90
0,71
0,66
0,69
0,71
ile 0,39
0,40
0,30
0,38
0,37
0,38
0,39
0,37
0,39
0,34
0,30
0,34
0,34
0,34
0,34
val 0,69
0,64
0,57
0,55
0,57
0,54
0,56
0,53
0,55
0,49
0,56
0,49
0,49
0,48
0,51
arg 0,51
0,60
0,46
0,54
0,48
0,54
0,44
0,55
0,48
0,48
0,49
0,48
0,49
0,48
0,53
Tæver Ved vejning af tæverne blev 18. februar fundet lavere vægt hos tæverne i P35-2 og P35-3 end i de øvrige hold (tabel 4), tendensen til dette blev set allerede 5.
januar. Tæverne blev udtaget og fodret ens, hvorvidt den lavere vægt har haft en betydning for hvalperesultatet kan ikke afgøres. Der er ikke forskel i huld ved fødsel.
Tabel 4. Reproduktionsresultater for minktæver fodret med forskelligt protein indhold i foderet i drægtighedsperioden (6/4 til 26/4). Kun tæver der har født i perioden 26/4 til 5/5 (begge incl.) er med i opgørelsen. Antal tæver Antal kuld født Golde, Vægt Vægt Levende pr Døde pr kuld Huld ved ved start 26/4-5/5 % kuld v. fødsel ved fødsel fødsel Hold 5. januar 18. februar P45
134
109
8,6
1338 (194)
1264 (145) a
7,09 (2,37)
0,54 (1,01)
3,03 (0,35)
P40-1
131
108
7,8
1326 (177)
1264 (151) a
6,91 (2,71)
0,80 (1,39)
2,91 (0,38)
P40-2
130
113
4,0
1339 (207)
1290 (176) a
6,74 (2,19)
0,77 (1,32)
2,99 (0,34)
P40-3
133
108
7,8
1355 (215)
1278 (185) a
7,06 (2,31)
0,64 (1,06)
2,93 (0,35)
P35-1
132
108
10,2
1323 (196)
1269 (168) a
6,70 (2,35)
0,77 (1,25)
3,00 (0,47)
P35-2
138
120
7,4
1292 (179)
1200 (145) b
6,81 (2,69)
0,85 (1,70)
2,96 (0,38)
P35-3
134
107
8,0
1299 (162)
1189 (151) b
6,73 (2,17)
0,50 (0,99)
2,95 (0,25)
p-værdi NS NS < 0,0001 NS NS NS * ca. 75 ungtæver; NS angiver at der ikke er signifikant forskel mellem holdene, forskellig bogstaver i en kolonne angiver at der er forskel
Reproduktionsresultater Goldprocenten lå fra 4 til 10,2 %, uden at der var signifikant forskel mellem holdene (tabel 4). Der var ingen sterile hanner i holdene. Der var ingen signifikant forskel i hvalperesultaterne mellem holdene. De største kuldstørrelser blev dog set ved 45 og 40 OEp, frem
for 35 OEp, både ved fødsel og dag 28 (tabel 4 og 5). Dette svarer til tidligere resultater hvor 35 OEp nogle år viser sig at være tilstrækkeligt (Clausen et al., 2007), hvorimod det andre år ikke er nok til at sikre optimal kuldstørrelse ved fødsel (Clausen & Sandbøl, 2009 og 2008). Variationer i fedt fra 40 til 55
Faglig Årsberetning 2009
35
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
OEf og i kulhydrat fra 10 til 20 OEk inden for de anvendte proteinniveauer,
så ikke ud til at have betydning for resultaterne.
Tabel 5. Vejeresultater i dieperioden i hold fodret med forskelligt protein indhold i drægtighedsperioden (6/4 til 26/4). Kun tæver der har født i perioden 26/4 til 5/5 (begge incl.) er med i opgørelsen.
Hold
Tæve vægt dag 28, g
Antal hvalpe dag 28
P45
1406 (179)
P40-1
1416 (166)
P40-2
Vægt dag 28, g
Vægt dag 49, g
Tæve vægt Hanhvalpe Tævehvalpe dag 49, g
Antal hvalpe dag 49
Hanhvalpe Tævehvalpe
6,51 (2,35)
193 (36)
175 (29)
1188 (154)
6,17 (2,47)
569 (92)
486 (71)
6,37 (2,63)
192 (34)
173 (33)
1214 (155)
6,00 (2,81)
572 (82)
487 (64)
1428 (173)
6,31 (2,30)
195 (39)
175 (37)
1221 (170)
6,15 (2,32)
576 (85)
484 (74)
P40-3
1439 (213)
6,56 (2,41)
193 (37)
172 (29)
1228 (216)
6,39 (2,47)
560 (90)
489 (59)
P35-1
1435 (185)
6,15 (2,42)
192 (38)
172 (36)
1227 (169)
5,92 (2,51)
576 (79)
486 (65)
P35-2
1423 (195)
6,24 (2,80)
191 (35)
174 (30)
1197 (155)
6,04 (2,75)
567 (81)
483 (68)
P35-3
1479 (167)
6,26 (2,20)
200 (32)
185 (28)
1225 (147)
6,12 (2,14)
575 (78)
495 (62)
NS
NS
NS
NS
NS
NS
NS
p-værdi NS
Vejeresultater I denne undersøgelse så det ud til at 35 OEp i drægtighedsperioden og variationer i fedt fra 40 til 55 OEf og i kulhydrat fra 10 til 20 OEk var tilstrækkelig til god kuldstørrelse og gode hvalpevægte. Hvalpevægtene og tævevægtene gennem dieperioden var således ikke forskelligt mellem holdene (tabel 5). Tidligere resultater viste lavere hvalpevægte dag 28 ved 36 OEp i forhold til 44 OEp (Clausen et al., 2007), og lavere tilvækst fra dag 28 til dag 49 ved 36 OEp i forhold til 40 OEp ved undersøgelsen i 2007 (Clausen & Sandbøl, 2008). Antal tæver der døde i dieperioden var lav (tabel 6) og sundhedstilstanden hos hvalpene var generelt god. Tabel 6. Dødsfald blandt tæver i vinter og dieperioden.
Hold P45 P40-1 P40-2 P40-3 P35-1 P35-2 P35-3 p-værdi
Antal / pct døde total 6 / 4,5 2 / 1,5 4 / 3,1 1 / 0,8 2 / 1,5 3 / 2,2 6 / 4,5
Konklusion Ud fra resultaterne i denne undersøgelse ser det ud til at 35 OEp kan anvendes til tæver i drægtighedsperioden, når fedtindholdet varierer fra 45 til 55 OEf og kulhydratindholdet varierer fra 10 til 20 OEk. Hvis vi
36
sammenholder med resultaterne fra tidligere undersøgelser bør vi dog stadig fastholde at foder fra 6. april til 26. april bør indeholde mindst 40 procent af den omsættelige energi fra protein (OEp) for at være sikker på at få mange levende hvalpe ved fødsel og god hvalpevækst. Andelen af fedt og kulhydrat kan varieres i området 40 – 50 OEf og 10 – 20 OEk. Anbefalingerne til indholdet af aminosyrer i drægtighedsperioden fastholdes ligeledes. Referencer Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2009. Effekt af lav protein i drægtighedsperioden på skindstørrelse og kvalitet, samt på den efterfølgende dieperiode. Faglig Årsberetning 2008, 51-54, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2008. Protein til mink i drægtighedsperioden. Fortsatte undersøgelser. Faglig Årsberetning 2007, 55-60, Pelsdyrerhvervets Forsøg- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Clausen, T. N., Sandbøl, P. & Hejlesen, C., 2007. Protein til mink i drægtighedsperioden. Faglig Årsberetning 2006, 7176, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark.
Faglig Årsberetning 2009
Protein til mink i drægtighedsperioden. Fortsatte undersøgelser.
Clausen, T. N., 2006. Huldvurdering af mink. Faglig Årsberetning 2005, 175182, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark.
Faglig Årsberetning 2009
37
38
Faglig Ă&#x2026;rsberetning 2009
Minkhvalpe, optimal tilvækst og god skindstørrelse (Innovationslovs bevilling) Tove N. Clausen & Peter Sandbøl Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Herningvej 112C, 7500 Holstebro. Sammendrag Til en undersøgelse af optimal fodring af minkhvalpe i den tidlige vækstfase, blev anvendt 7 hold a 135 wildmink tæver og deres hvalpe. Der blev fodret med fodercentralfoder indtil hvalpene var knapt 28 dage. Derefter blev fodret med forskellige proteinniveauer frem til ca. 12 ugers alderen. Resultaterne bekræfter hvad der tidligere er fundet. Hvalpe i perioden 4 – 8 uger skal have 45 procent af den omsættelige energi fra protein (OEp) kombineret med et lavt kulhydratniveau (10 og 15 OEk). I perioden 8 – 12 uger har hvalpe der får 35 OEp en lige så god tilvækst som de hvalpe der får 45 OEp. Tilvæksten fra 8 til 12 uger viser en tydelig nedgang i vægtene ved stigende kulhydrat inden for samme proteinniveau. Hvalpe fodret med 30 OEp fra 4 – 12 uger vedblev at være mindst til pelsning. De anbefalede aminosyre normer ser ud til at være gældende. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2010. Minkhvalpe, optimal tilvækst og god skindstørrelse (Innovationslovs bevilling). Faglig Årsberetning 2009, 39-44, Pelsdyrerhvervets Forsøgsog ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Summary To an investigation on optimal feeding of mink kits in the early growing period, we used 7 groups consisting of 135 wildtype mink females and their kits. Until the kits were 28 days we used feed kitchen feed, after that feed with different amounts of protein were used until 12 weeks of age. The results confirmed what we have found earlier. Kits in the period 4 to 8 weeks, need 45 percent of the metabolisable energy from protein (MEp) combined with a low amount of carbohydrates (10 and 15 MEc). In the period 8 to 12 weeks, the body weight increase is equally good in kits fed 35 MEp and 45 MEp. Further the body weight increase is reduced with increasing carbohydrates in that period. Kits feed 30 MEp from 4 to 12 weeks are smallest at pelting. The amino acid recommendations for that period, seems to be sufficient. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2010. Mink kits, optimal growth and good skin size. Annual Report 2009, 39-44, Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: tidlig vækstperiode, tilvækst, skindegenskaber
Indledning Optimal tildeling af energi og protein / aminosyrer til minkhvalpe fra 4 til ca. 12 uger blev i 2007 undersøgt på afdelingen for Pelsdyr KU-Life, ved hjælp af balance- og respirationsforsøg kombineret med brug af 13C og 15N mærkede aminosyrer og plasmaprofiler. Der blev undersøgt 3 forskellige foderblandinger. I dieperioden 2008 blev udført produktionsforsøg på forsøgsfarmen for at konsolidere resultaterne fra KU-Life, samt for at se, hvorvidt den anvendte fodring i dieperioden påvirkede hvalpenes pelsegenskaber.
Materiale og metoder Til undersøgelsen blev anvendt 7 hold á 135 wildmink tæver og deres hvalpe. Tæverne blev fodret med fodercentralfoder indtil hvalpene var knapt 28 dage. Derefter blev fodret med den ved KULife fundne aminosyreprofil med forskellige proteinniveauer frem til ca. 12 ugers alderen (tabel 1a og 1b). Tabel 1a. KU-Life hold i dieperioden 2007, med markering af rækkefølge for bedst tilvækst
Energifordeling 45:40:15 45:30:25 30:55:15 30:45:25
Faglig Årsberetning 2009
Tilvækst rækkefølge 1 3 4 2
39
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
Tabel 1b. Forsøgsopstilling fra 4 til 12 ugers alderen
Hold 1 2 3 4 5 6 7
Energifordeling 45:45:10 45:40:15 45:35:20 40:45:15 35:50:15 35:45:20 30:45:25
Overgang til forsøgsfoder foregik over 3 dage med ½ FC foder + ½ forsøgsfoder. Ved udsætning (8 uger, ca. 26/6) blev hvalpene sat ud parvis, én han og én tæve fra hvert kuld fortsatte på fodringen indtil 12 uger (ca. 24/7). Tæverne blev vejet ved sortering, dag 28 og 49. Hvalpene blev talt ved fødsel, talt, køns sorteret og vejet dag 28 og dag 49 (fravænning). Ved udsætning (dag 56) og ved 12 uger (ca. 24/7) blev de hanhvalpe der fortsatte på fodringen vejet enkeltvis. Efter 1/8 blev alle hvalpene fodret med FC foder indtil
pelsning. Alle hvalpe blev vejet og livdyrsorteret, hos de aflivede hvalpe blev derudover foretaget skindsortering og længdemåling. Foderplanerne ses af tabel 2. Foderet i den tidlige vækstperiode blev undersøgt regelmæssigt for kemisk sammensætning, efter forsøget blev aminosyreindholdet analyseret på en samleprøve. De statistiske beregninger er udført med statistikprogrammet SAS. Procedurerne GLM (ss4), LSMEANS / PDIFF er anvendt med 5 % som signifikansniveau ved beregninger over vægt og længde. Relevante kovariater er medtaget i de tilfælde de er signifikante. Ved skindkvalitet, farve og renhed er anvendt en non-parametrisk test (GENMOD). Silket, fyldighed og metallic er analyseret med proceduren PROBIT eller X2.
Tabel 2. Foderplan til minkhvalpe i den tidlige vækstfase (4 – 12 uger) Hold 1 2 3 Fiskeafskær < 3 % fedt (001) 25 25 25 Industrifisk 8-12 % fedt (082) 30 29,6 29 Fjerkræaff. Farmfood (244) 24 25 25 Fiskemel (322) 3,5 1,48 0 Hæmoglobinmel (371) 3,0 3,0 3,0 Kartoffelprotein (541) 2,0 2,0 2,0 Majsgluten (521) 3,0 3,0 2,91 Byg poppet (627) 3,21 4,8 6,27 Hvede poppet (667) 3,21 4,8 6,27 Soyaolie (871) 1,57 0,71 0 Svinefedt (352) 0,78 0,36 0 Vit.-bl. (743) 0,25 0,25 0,25 Vand 0,44 0 0,30 Eddikesyre 0,2 0,2 0,2 Plantal: Energiindhold: kcal/100g 177,6 169,3 161,9 MJ/kg MJ/kg tørstof Tørstof, % 40 40 40 Energifordeling 45:45:10 45:40:15 45:35:20 Aske, % 3,44 3,25 3,1 Analysetal: Energiindhold: kcal/100g 158 149 141 MJ/kg 6,62 6,25 5,91 MJ/kg tørstof 18,5 17,7 17,0 Tørstof, % 36 35 35 Energifordeling 45:45:10 45:40:15 44:36:20 Aske, % 2,9 2,7 2,7
40
4 25 28,9 20 4,0 1,78 0,83 2,23 5,14 5,14 1,81 0,91 0,25 4,0 0,2
5 15 30 20,1 4,0 1,76 2,0 1,78 5,73 5,73 3,15 1,58 0,25 8,9 0,2
175,2
6 15 30 15,6 4,0 1,62 2,0 1,08 7,46 7,46 2,43 1,21 0,25 11,8 0,2
7 11 23 20,7 2,96 1,10 1,97 0,86 9,77 9,77 2,81 1,40 0,25 14,4 0,2
184,8
192,1
194,1 40 40:45:15 3,4
42 35:50:15 3,0
42 35:45:20 2,9
44 30:45:25 2,6
155 6,48 18,3 35 39:45:16 2,7
176 7,37 19,3 38 35:50:15 2,5
160 6,68 18,4 36 35:45:20 2,3
151 6,31 18,2 35 31:45:24 2,3
Faglig Årsberetning 2009
Minkhvalpe, optimal tilvækst og god skindstørrelse (Innovationslovs bevilling)
Resultater Foder De kemiske analyser af foderet, viste at indholdet svarede godt til det planlagte (tabel 2). Foderets beregnede og analyserede aminosyreindhold ses af tabel 3. Fra 40 OEp og derover er aminosyre indholdet på eller over det der foreløbig anbefales for perioden 4 – 8 uger. Alle hold har en aminosyre indhold der er over det der anbefales for perioden 8 – 12 uger. Det
analyserede indhold svarer pænt overens med det beregnede, på nær for tryptofan i hold 1, hvor det analyserede indhold er omkring halvdelen af det beregnede. Da resten af aminosyrerne passer med de beregnede værdier, og de øvrige hold ligeledes passer med de beregnede værdier, samt råvarevalget i holdene er ens, er det mest sandsynlige, at det drejer sig om en analysefejl.
Tabel 3. Beregnet og analyseret (A) aminosyreindhold i foderet, g fordøjelig aminosyre / 100 kcal ud fra plan sammenholdt med as plantal (P) og forslag til anbefaling i de pågældende perioder forslag 21/530/6 * 1 - 45:45:10 2 - 45:40:15 3 - 45:35:20 4 - 40:45:15 5 - 35:50:15 6 - 35:45:20 7 - 30:45:25 A
P
A
P
A
P
A
P
A
P
A
0,22
0,19
0,19
0,17
P
A
P
norm
0,19
0,16
0,16
as FK, forslag 1/731/7 # norm
met 0,23
0,24
0,22
0,23
0,23
0,22
0,22
0,22
0,14
cys 0,11
0,10
0,10
0,11
0,11
0,11
0,089 0,091 0,073 0,084 0,11
0,083 0,084 0,081 0,07
0,06
lys
0,67
0,70
0,65
0,68
0,63
0,66
0,58
0,61
0,53
0,55
0,51
0,56
0,45
0,46
0,61
0,27
thr
0,41
0,39
0,42
0,38
0,41
0,38
0,35
0,34
0,31
0,31
0,31
0,31
0,28
0,26
0,33
0,17
trp
0,051 0,10
0,12
0,10
0,11
0,10
0,093 0,087 0,078 0,080 0,078 0,081 0,096 0,070 0,08
0,05
his
0,28
0,32
0,28
0,32
0,27
0,32
0,26
0,26
0,23
phe 0,56
0,50
0,58
0,51
0,56
0,51
0,49
0,42
0,42
0,38
0,41
tyr
0,38
0,35
0,38
0,35
0,37
0,35
0,37
0,30
0,34
0,28
0,34
leu
1,11
0,97
1,18
0,98
1,14
0,98
0,81
0,80
0,69
0,72
0,71
ile
0,41
0,41
0,42
0,40
0,41
0,39
0,39
0,37
0,35
0,34
val
0,64
0,64
0,61
0,64
0,64
0,64
0,58
0,53
0,52
0,49
arg 0,62 0,61 0,60 0,60 0,63 0,60 0,50 0,55 * ca. 4 – 8 uger; # ca. 8 – 12 uger (Sandbøl & Lassén, 2006).
0,45
0,48
Dieperioderesultater Da tæverne fik ens foder indtil dag 28 i dieperioden, skyldes eventuelle forskelle mellem holdene andre faktorer end forsøgsbehandlingen (tabel 4). Der er således ingen forklaring på, hvorfor der var signifikant forskel mellem antal levende hvalpe ved fødsel. Tæverne vejede dag 28 ikke signifikant forskelligt, dag 49 var der forskel mellem holdene, således at tæver der fik 30 OEp havde tabt sig mest i den pågældende periode (tabel 5).
0,23
0,22
0,23
0,21
0,19
0,26
0,16
0,38
0,41
0,33
0,41
0,29
0,28
0,34
0,24
0,28
0,18
0,70
0,61
0,59
0,71
0,50
0,35
0,34
0,32
0,30
0,34
0,26
0,51
0,48
0,47
0,41
0,51
0,35
0,50
0,48
0,47
0,42
0,53
0,30
Tabel 4. Data fra vinter og dieperioden mens tæverne fik ens foder
Hold
% golde
Levende
Døde
1
Energifordeling, fra 4 – 12 uger 45:45:10
8,4
2
45:40:15
13,3
3
45:35:20
5,6
4
40:45:15
6,8
5
35:50:15
5,5
6
35:45:20
9,7
7
30:45:25
11,9
p-værdi
NS
6,60 BC 6,58 BC 7,18 AB 7,00 AB 7,32 A 6,36 C 6,71 ABC 0,04
0,47 (1,30) 0,51 (1,10) 0,40 (0,84) 0,69 (1,35) 0,43 (0,90) 0,49 (1,05) 0,49 (0,95) NS
(2,77) (2,57) (2,36) (2,48) (2,43) (2,42) (2,73)
NS angiver at der ingen statistisk sikker forskel er. Forskellige bogstaver angiver, at der er statistisk sikker forskel mellem holdene.
Faglig Årsberetning 2009
41
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
Tabel 5. Tævevægte og antal hvalpe dag 28 og 49, samt kuldgennemsnitsvægte for han og tæve hvalpe dag 28 og dag 49.
Hold
Energifordeling, fra 4 – 12 uger
Tæve vægt dag 28, g
Antal hvalpe dag 28
1
45:45:10
2
45:40:15
1446 (174) 1417 (169)
3
45:35:20
4
40:45:15
5
35:50:15
6
35:45:20
7
30:45:25
6,04 (2,76) cd 6,27 (2,67) bcd 6,79 (2,38)ab 6,48 (2,36) abc 7,00 (2,61) a 5,83 (2,53) d 6,22 (2,72) bcd 0,008
p-værdi
1430 (161) 1467 (145) 1465 (155) 1448 (142) 1461 (177) NS (0,08)
Han hvalpe vægt dag 28, g 200 (38) 207 (36)
209 (28) 205 (32)
201 (35) 210 (31) 204 (33)
NS
Tæve hvalpe vægt dag 28, g 183 (32) 183 (31)
Tæve vægt dag 49, g
Antal hvalpe dag 49
Tæve hvalpe vægt dag 49, g
5,73 (2,83) cd 6,14 (2,75) bcd
Han hvalpe vægt dag 49, g 541 (109) ab 554 (104) a
1216 (197) a 1161 (171) b
188 (27) 186 (28)
1156 (156) b 1214 (178) a
6,56 (2,38) ab 6,19 (2,45) bc
523 (98) bc 529 (104) ab
455 (78) abc 452 (80) abc
183 (31) 190 (32) 183 (29)
1197 (170) a 1184 (152) b 1146 (188) b
6,91 (2,61) a 5,55 (2,49) d 5,95 (2,71) bcd
496 (109) c 520 (104) bc 434 (99) d
433 (86) c 453 (95) bc 387 (86) d
NS
0,0009
0,001
< 0,0001
< 0,0001
470 (75) a 468 (79) ab
NS angiver at der ingen statistisk sikker forskel er. Forskellige bogstaver angiver, at der er statistisk sikker forskel mellem holdene.
Hvalpevægte Hvalpevægtene dag 28 er som forventet ikke forskellig mellem holdene (tabel 5), men dag 49 er der forskel, således at de bedste tilvækste fra dag 28 til 49 hos både han og tæve hvalpe (tabel 7), blev set ved det højeste protein indhold (45 OEp) kombineret med de laveste kulhydratniveauer (10 og 15 OEk). Dette svarer til tidligere undersøgelser, hvor vi har set at proteinindholdet bør være mindst 45 % af den omsættelige energi i den første del af hvalpenes vækstfase (indtil dag 42) og fra dag 42 til dag 56 skal hvalpene have 40 OEp eller mere for at opnå optimal tilvækst (Clausen et al, 2004; Clausen et al, 2005; Clausen et al, 2006). Den laveste tilvækst for både han og tævehvalpe blev set ved det laveste proteinindhold (30 OEp) kombineret med et højt kulhydratindhold (25 OEk). På KU-Life havde dette hold gode tilvæksts resultater. Dag 56 blev én han fra hver kuld udvalgt til videre forsøg og vejet enkeltvis, vægtene fra disse hanner dag 56, passer nogenlunde med kuldgennem-
42
snitsvægtene fra dag 49, med hensyn til at de bedste vægte ses hos hvalpe der har fået højest protein (45 OEp) og lavest kulhydrat (10 og 15 OEk), og de dårligste vægte er hos de hanner, der har fået lavest protein og højest kulhydrat (30 OEp og 25 OEk) (tabel 6). Tabel 6. Hvalpevægte for hanhvalpe fodret frem til 12 uger. Hold Energifor- Hanhvalpe Hanhvalpe Pelsnings deling, fra dag 56, g 12 uger, g vægt, g 4 – 12 (8 uger) * uger 1 45:45:10 781 (123) 1597 3204 a (170) a (367) ab 2 45:40:15 766 (126) 1542 3150 ab (152) b (370) ab 3 45:35:20 726 (115) 1476 3134 c (124) c (350) bc 4 40:45:15 739 (115) 1523 3121 bc (150) b (345) bc 5 35:50:15 731 (129) 1558 3159 bc (168) ab (357) ab 6 35:45:20 759 (122) 1526 3253 abc (159) b (389) a 7 30:45:25 645 (127) 1403 3029 d (169) d (389) c p-værdi < 0,0001 < 0,0001 0,02 * fra 90 – 103 kuld; Forskellige bogstaver angiver at der er forskel mellem holdene
Faglig Årsberetning 2009
Minkhvalpe, optimal tilvækst og god skindstørrelse (Innovationslovs bevilling)
Dette er ligeledes gældende for vejeresultaterne ved 12 uger, og især tilvæksten fra dag 56 til 12 uger viser en tydelig nedgang i vægtene ved
stigende kulhydrat inden for samme proteinniveau (tabel 7).
Tabel 7. Tilvækste for han og tæve hvalpe fra dag 28 til dag 49 (gennemsnit af kuldet), samt tilvækst for hanhvalpe fra dag 56 til 12 uger og fra 12 uger til pelsning.
Hold
1 2 3 4 5 6 7
Energifordeling, fra 4 – 12 uger 45:45:10 45:40:15 45:35:20 40:45:15 35:50:15 35:45:20 30:45:25 p-værdi
Tilvækst hanhv dag 28 - 49, g
Tilvækst tævehv dag 28 - 49, g
Tilvækst hanhv dag 56 til 12 uger, g
Tilvækst fra 12 uger til pelsning, g
342 (84) ab 347 (83) a 314 (82) c 321 (87) bc 294 (89) c 310 (88) c 230 (91) d < 0,0001
287 (54) a 285 (64) ab 267 (65) bc 267 (63) c 250 (67) c 261 (81) c 204 (76) d < 0,0001
819 (85) a 779 (89) b 749 (81) d 783 (90) b 825 (95) a 768 (91) bc 752 (113) cd < 0,0001
1618 (277) 1621 (292) 1663 (282) 1621 (266) 1625 (282) 1722 (320) 1643 (339) NS
NS angiver at der ingen statistisk sikker forskel er. Forskellige bogstaver angiver, at der er statistisk sikker forskel mellem holdene.
Desuden ses at hvalpe der får 35 OEp i denne periode har en lige så god tilvækst som de hvalpe der får 45 OEp fra 8 til 12 uger. Dette svarer til tidligere resultater fra undersøgelser i juli måned der viser at andelen af omsættelig energi fra kulhydrat i juli måned må være højst 18, og at 32 OEp er tilstrækkelig til en optimal tilvækst i den periode (Clausen et al., 2008; Clausen & Sandbøl, 2009). Fra 12 uger til pelsning fik hvalpene fodercentralfoder og der var ingen forskel i tilvæksten mellem holdene i den periode, så det hold der havde fået det laveste proteinindhold fra 4 – 12 ugers alderen, vedblev at være mindst.
Skindegenskaber Skindlængden var forskellig i holdene (tabel 8), således at de korteste skind blev set hos de hvalpe der havde fået 30 OEp og 25 OEk i perioden 4 til 12 uger. De største skind blev set i 45:45:10 og 35:45:20. Kvaliteten var ikke forskellig mellem holdene. Der var forskel i farven, uden at denne forskel umiddelbart kan forklares. Der var ikke forskel i renheden eller i antallet af silkede skind, men der var forskel i frekvensen af flade og fyldige skind.
Tabel 8. Sorteringsresultater for de hvalpe der fik forsøgsfoder fra 4 - 12 uger Energifordeling, fra Skindlængde, 4 – 12 cm Hold uger Antal Kvalitet Farve Renhed
Silket, %
Uld, % Flade
Normale
Fyldige
1
45:45:10
58
92,7 (4,5) a
5,9 (2,2)
2,8 (1,0) bc
3,1 (0,9)
17,2
22,4
70,7
6,9
2
45:40:15
68
91,3 (4,3) b
6,6 (2,9)
3,4 (0,9)
14,9
13,4
74,6
11,9
3
45:35:20
70
91,3 (3,5) b
6,2 (2,4)
3,1 (0,9) ab 3,1 (0,9) abc
3,1 (0,9)
22,9
14,3
77,1
8,6
4
40:45:15
63
91,5 (3,9) ab
6,6 (2,5)
2,9 (1,0) bc
3,3 (1,0)
14,3
14,3
77,8
7,9
5
35:50:15
58
91,6 (4,3) ab
6,3 (2,4)
2,8 (1,0) c
3,2 (0,9)
6,9
12,1
75,9
12,1
6
35:45:20
77
92,9 (4,6) a
6,6 (2,1)
3,3 (0,9) a
3,2 (0,9)
13,0
23,4
67,5
9,1
7
30:45:25
65
90,3 (4,2) b
7,4 (2,8)
3,0 (1,0) bc
3,5 (1,0)
18,5
10,8
61,5
27,7
p-værdi 0,008 NS (0,11) 0,01 NS (0,07) NS 0,01 NS angiver at der ingen statistisk sikker forskel er. Forskellige bogstaver angiver, at der er statistisk sikker forskel mellem holdene.
Faglig Årsberetning 2009
43
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
Konklusion Resultaterne bekræfter hvad der tidligere er fundet. Hvalpe i perioden 4 – 8 uger skal have 45 OEp kombineret med et lavt kulhydratniveau (10 og 15 OEk). I perioden 8 – 12 uger har de hvalpe der i denne undersøgelse får 35 OEp en lige så god tilvækst som de hvalpe der får 45 OEp. Tidligere undersøgelser har vist at 32 OEp i juli er tilstrækkelig til en god tilvækst. Tilvæksten fra dag 8 til 12 uger viser en tydelig nedgang i vægtene ved stigende kulhydrat inden for samme proteinniveau. Hvalpe fodret med 30 OEp fra 4 – 12 uger vedblev at være mindst til pelsning. De anbefalede aminosyre normer ser ud til at være gældende.
Referencer Clausen, T., Hejlesen, C. & P. Sandbøl 2004. Proteinforsyning til minktæver og hvalpe i første halvår. Faglig Årsberetning 2003, 75-79. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Clausen, T.N., Hejlesen, C., Sandbøl, P., 2005. Protein til mink i dieperioden og i den tidlige vækstfase. Faglig årsberetning 2004, 77-81, Pelsdyr-
44
erhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter. Clausen, T.N., Sandbøl, P. & Hejlesen, C. 2006. Protein til mink i dieperioden og i den tidlige vækstfase. Fortsatte undersøgelser. Faglig Årsberetning 2005, 65-70. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark Clausen, T. N., Sandbøl, P. & Hejlesen, C. 2008. Foder med forskellig energifordeling til minkhvalpe fra juli til medio september. Faglig Årsberetning 2007, 61 - 67, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2009. Energifordelingen i hvalpenes tidlige vækstfase - II. Faglig Årsberetning 2008, 55 - 60, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Sandbøl, P. & Lassén, T.M., 2006. Minkens krav til aminosyrer under forskellige produktionsfaser. Internt notat fra arbejdsgruppen omkring aminosyre normer til mink. Dansk Landbrugsrådgivning, Landscentret Pelsdyr. august 2006.
Faglig Årsberetning 2009
Glycerol i minkfoder i vækst- og pelssætningsperioden Tove N. Clausen & Peter Sandbøl Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Herningvej 112C, 7500 Holstebro. Sammendrag Til afprøvning af glycerol i stigende iblanding 0 – 2 – 4 – 6 – 8 % til minkhvalpe i vækstperioden, blev anvendt 5 hold a 132 wildmink hvalpe. Resultaterne viser at vi uden problemer kan anvende op til 8 % glycerol i minkfoder til erstatning af 8 % majsstivelse, med forbehold for påvirkninger af foderets konsistens. Råvaren bør analyseres for Na og methanol inden anvendelse. Skindkvaliteten var bedst ved 8 % glycerol og ingen majsstivelse, ligeledes ser det ud til at glycerol sænker leverens fedtindhold. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2010. Glycerol i minkfoder i vækst- og pelssætningsperioden. Faglig Årsberetning 2009, 45-50, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Summary To the investigation of increasing amounts of glycerol 0 – 2 – 4 – 6 – 8 percent to mink kits in the growing period, we used 5 groups of 132 wildtype mink kits each. The results showed that we can use up to 8 % glycerol instead of 8 % cornstarch, with reservations to changes in feed consistency. Glycerol should be analysed for Na and methanol before use. The skin quality was best at 8 % glycerol and no cornstarch, also it seems that glycerol reduces the liver fat content. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2010. Glycerol in mink feed in the growing- furring period. Annual Report 2009, 45-50, Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: glycerol, vækstperioden, tilvækst, skindegenskaber
Formål Glycerol, der også benævnes glycerin, er en tyktflydende, farveløs og lugtløs væske med en sødlig smag. Glycerol er fuldstændig opløseligt i vand (Nielsen & Kristensen, 2004). Farven af råglycerol afhænger af hvilken råvare den er lavet ud fra (Kerr et al., 2008). Glycerol findes naturligt i fodermidler som en del af råfedtindholdet. Ved fremstillingen af biodisel, fremkommer glycerol som et biprodukt (Produktionen af biodiesel er baseret på fedtsyrer fra rapsfrø og sojabønner, idet der primært anvendes sojabønner i USA og rapsfrø i Europa) (Nielsen & Kristensen, 2004). Glycerol har været afprøvet i foder til kvæg (Nielsen & Kristensen, 2004), grise (Kerr et al., 2008; Lammers et al., 2008) og fjerkræ (Dozier, 2008), som erstatning for en del af kulhydratindholdet. Der anvendes methanol i fremstillingen af glycerol, dette fjernes ikke helt fra produktet, og indholdet i de forskellige partier kan variere meget alt efter hvor grundig en oprensning der har fundet
sted. Methanol oxideres til formaldehyd, hvorefter formaldehyd oxideres videre til myresyre. Da myresyren vanskeligt metaboliseres videre, sker der en opkoncentrering som giver anledning til acidose. Forgiftningssymptomerne er CNS forstyrrelser, opkastninger, alvorlig metabolisk acidose, blindhed og parkinson lignende bevægelses forstyrrelser (Kerr et al., 2008). I USA er der sat en maksimal grænse på 0,50 % methanol i rå glycerol. Tyskland og Frankrig anvender også denne grænse for methanol. Der er ingen maksimalt tilladt niveau fastsat i EU-lovgivningen for methanol i glycerol, men det anbefales at man bruger maksimalgrænseværdien på 0,50 % (Advi. Commi, 2007), det angives at indholdet af methanol i glycerol sædvanligvis er 0,1 – 0,2 %. Methanol indholdet i færdigfoderet til grise bør ikke overstige 150 ppm (0,015 %) (Kerr et al., 2008). Hvis der er 0,15 % methanol i produktet, bør der således anvendes max 10 % glycerol i
Faglig Årsberetning 2009
45
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
det færdige foder. Da to analyser (Kerr et al., 2008) angiver stor spredning i metanol indholdet, 0,03 hhv 0,32 % methanol, bør det aktuelle produkts indhold af metanol undersøges. Ved 0,32 % methanol i glycerolen og en anvendelse af 8 % i foderet giver det 0,026 % i foderet total, hvilket er over det anbefalede niveau. Ligeledes bør dyrenes sundheds tilstand følges nøje (nyrer, lever, øjne, makroskopiske og histologiske forandringer). Na tilsættes ofte som katalysator til processen, hvilket resulteret i et højt indhold af salt i råglycerolen, mængden afhænger af oprensningsteknikken (Kerr et al., 2008). Kerr et al. (2008) fandt på amerikansk fremstillet glycerol et NaCl indholdet på 2,93 hhv 3,13 %, i EU oplyses det at NaCl normalt er 5 %, max 8 %. Ved 8 % iblanding af glycerol i foderet vil det ved et maximalt saltindhold på 8 % bidrage med 0,64 % salt. 10 – 12 uger gamle hvalpe tåler op til 1 % salt i vådfoder før de skal øge deres vandoptagelse (Clausen & Sandbøl, 2009), og med et naturligt saltindhold på 0,2 – 0,4 % i vækstperioden, kan det give et total indhold i foderet omkring 1 %. Man bør således analysere Na indholdet for at undgå for høje niveauer. I vækstperioden blev glycerol (lys) afprøvet til minkhvalpe med stigende iblanding, produktet erstattede majsstivelse. Materiale og metoder Til undersøgelsen blev anvendt 5 hold á 132 wildmink han- og tævehvalpe. Forsøgsopstillingen ses af tabel 1. Tabel 1. Anvendelse af glycerol som kulhydratkilde til minkhvalpe i vækstperioden, % indhold.
Hold Gly0 Gly2 Gly4 Gly6 Gly8
Majsstivelse 8 6 4 2 0
Glycerol (lys) 0 2 4 6 8
Ud fra undersøgelser hos andre dyrearter antages det at energiindholdet i glycerol er på niveau med indholdet i majs-stivelse, og der foretages en 1:1 udskiftning af majsstivelse med glycerol. Tidligere undersøgelser har vist at majsstivelse kan anvendes med lige så gode resultater som byg og hvede i vækstperioden (Clausen et al., 2006). Glycerolen omrøres før brug, idet der er en brun rand foroven, denne formodes at være den lille mængde fedt der er i glycerolen. Glycerolens kemiske sammensætning blev analyseret, derudover blev analyseret for methanol og mineralindhold (Na). Foderet blev ligeledes analyseret for kemisk sammensætning, samt mineralindhold. Forsøgsfodringen startede 7/7. De første blandinger indeholdt ensilage. Da glycerol er en tynd væske, nogenlunde som vand, bevirkede det, at vi ved de høje iblandinger (6 og 8 %) ikke kunne styre konsistensen (roesnitter tilsat). Ensilage blev taget ud fra 11/7. Foderplanen for grundfoderet (efter 11/7) ses af tabel 2a. Hvalpene blev vejet ved udsætning (2/7), 1. august, 15. september og ved pelsning. Gødningskonsistensen blev vurderet, og til pelsning blev skindlængde og kvalitet vurderet. Til pelsning blev yderligere, i GLY0, GLY4 og GLY8, udtaget lever og nyrer til bestemmelse af vægt i procent af kropsvægt og leverfedtprocenten hos hanhvalpe fastet i 48 timer. I de hold, hvor der ikke blev udtaget dyr, blev der stadig fastet 15 hanner, for at få samme behandling i alle hold. Lever samt nyre blev frosset, til evt. senere analyse, for at se efter makroskopiske og histologiske skader.
Resten af kulhydraterne er fra byg/hvede
46
Faglig Årsberetning 2009
Glycerol i minkfoder i vækst- og pelssætningsperioden
De statistiske beregninger er udført med statistikprogrammet SAS. Procedurerne GLM (ss4), LSMEANS / PDIFF er anvendt med 5 % som signifikansniveau ved beregninger over vægt og længde. Relevante kovariater er medtaget i de tilfælde de er signifikante. Ved skindkvalitet, farve og renhed er anvendt en non-parametrisk test (GENMOD). Silket, fyldighed og metallic er analyseret med proceduren PROBIT eller χ2. Resultater Foderets kemiske sammensætning svarede for alle holdene til det forventede, holdene blev analyseret enkeltvis, men var nogenlunde ens (tabel 2a). Den analyserede aminosyresammensætningen i holdene (tabel 2b), viste at de fleste af aminosyrerne svarede nogenlunde til de beregnede værdier. Dog var leucin indholdet i hold 30 og 31 meget høj i forhold til de andre hold, dette må bero på en analysefejl, idet eneste forskel mellem holdene er ikke proteinholdige råvarer.
Tabel 2a. Foderplan til undersøgelse af glycerol til minkhvalpe i vækstperioden.
Hold Industrifisk, 8-12 % fedt Fjerkræ Farmfood Fiskemel Hæmoglobinmel Kartoffelprotein Majsgluten Majsstivelse Byg Hvede Soyaolie Svinefedt Vit.-bl. Plantal: Energiindhold: kcal/100g MJ/kg MJ/kg tørstof Tørstof, % Energifordeling Aske, % Analysetal: Energiindhold: kcal/100g MJ/kg MJ/kg tørstof Tørstof, % Energifordeling Aske, % P, g/kg tørstof K, g/kg tørstof
40 30 5 2 2 2 8 * 2,556 2,556 3,752 1,876 0,25 238 10,0 20,5 48,5 30,5:51,5:18 2,9 221 & 9,3 20,5 45 31:51:18 2,4 8,2 – 8,9 4,8 – 5,2
* Udskiftes med glycerol (se tabel 1); & holdene blev analyseret enkeltvis, men var nogenlunde ens; Foder pH varierede fra 6,1 til 6,2 på samleprøver.
Tabel 2b. Analyseret aminosyresammensætning i samleprøver af holdene sammenholdt med aminosyre plantal (g ford as / 100 kcal)
met cys lys thr trp his phe tyr leu ile val arg
Gly0 analyse plantal 0.15 0.17 0.071 0.074 0.47 0.49 0.28 0.27 0.074 0.070 0.17 0.20 0.35 0.34 0.26 0.25 0.99 0.65 0.23 0.31 0.38 0.44 0.37 0.41
GLy2 analyse plantal 0.14 0.17 0.072 0.074 0.46 0.49 0.28 0.27 0.077 0.070 0.16 0.20 0.36 0.34 0.27 0.25 0.98 0.65 0.23 0.31 0.38 0.44 0.35 0.41
Gly4 analyse plantal 0.16 0.17 0.083 0.074 0.49 0.49 0.29 0.27 0.077 0.070 0.18 0.20 0.37 0.34 0.27 0.25 0.66 0.65 0.23 0.31 0.40 0.44 0.38 0.41
Den omsættelige energi i råglycerol til grise er fundet til 321 kcal/100 g (Lammers et al., 2008), den omsættelige energi i majsstivelse, der er en ren kulhydratkilde, er 358 kcal/100 g til
Gly6 analyse plantal 0.15 0.17 0.076 0.074 0.49 0.49 0.29 0.27 0.072 0.070 0.21 0.20 0.39 0.34 0.27 0.25 0.64 0.65 0.27 0.31 0.43 0.44 0.40 0.41
Gly8 analyse plantal 0.16 0.17 0.073 0.074 0.50 0.49 0.30 0.27 0.077 0.070 0.23 0.20 0.39 0.34 0.29 0.25 0.66 0.65 0.25 0.31 0.41 0.44 0.41 0.41
mink. Analyser af den anvendte glycerol (tabel 3) viste et energiindhold på 323 kcal/100 g, og en FKk på 93 (Schulin-Zeuthen & Sandbøl, 2010).
Faglig Årsberetning 2009
47
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
Na indholdet i glycerolen var 2,53 %, svarende til 6,4 % salt (tabel 3), Tabel 3. Analyse af den anvendte sammenlignet med data for majsstivelse
% indhold Tørstof Protein Fedt Aske Beregnet kulhydrat FKk kcal/100 g Na NaCl (beregnet) Methanol pH
Glycerol 85,8 0,04 0,36 3,5 81,9 93 * 323 2,53 6,4 < 0,002 5,05
glycerol,
Majsstivelse 93 0 0 1,4 91,6 93 358
* fordøjelighedsforsøg (Schulin-Zeuthen & Sandbøl, 2010)
det analyserede Na indhold i de færdige foderblandinger ses af tabel 4. Tabel 4. Analyseret indhold af Na, samt beregnet NaCl indhold i foderet i %, samleprøver gennem perioden. Hold GLY0 GLY2 GLY4 GLY6 GLY8 Analyseret Na, mg/kg 1250 1765 2321 2660 3250 Omregnet til NaCl, % 0,32 0,45 0,59 0,68 0,83
Da 10 – 12 uger gamle hvalpe tåler op til 1 % salt i vådfoder før de skal øge deres vandoptagelse (Clausen & Sandbøl, 2009), udgør det maximalt analyserede indhold på 0,83 % NaCl i GLY8 foderet ikke noget problem. Laveste niveau af salt i foderet 0,32 % (GLY0) opfylder behovet på 0,15 % salt i vækstperioden (Clausen et al, 2009). Indholdet af methanol var under detektionsgrænsen på 20 ppm (0,002%) (tabel 3) og udgør dermed ikke nogen sundhedsfare for dyrene. I EU anbefales det at man bruger maksimalgrænseværdien på 0,50 % (Advi. Commi, 2007). Methanol indholdet i færdigfoderet til grise bør ikke overstige 150 ppm (0,015 %) (Kerr et al., 2008), vi er således langt under dette niveau. Vejeresultaterne ses af tabel 5, der blev set de bedste kropsvægte i august og september ved iblanding af 4 % glycerol og mere.
Tabel 5. Vægtudviklingen gennem vækstperioden hos hvalpe der fik stigende andel af glycerol. Vægt Tilvækst, g Udsætnings pelsning, vægt 3/7, g Vægt 4. aug, g Vægt 15. sep, g 12/11, g Hold Antal Udsætning -aug Aug - sep Sep - pelsning GLY0 133 829 (125) 1686 (137) b 2593 (219) b 2989 (321) 854 (92) c 915 (150) 386 (203) ab GLY2 130 826 (120) 1672 (156) b 2562 (233) b 2962 (332) 843 (118) c 889 (136) 406 (210) a GLY4 131 831 (118) 1739 (179) a 2654 (258) a 3030 (340) 907 (112) b 917 (140) 373 (177) ab GLY6 133 829 (116) 1751 (179) a 2670 (283) a 3027 (376) 922 (125) ab 920 (166) 353 (208) bc GLY8 132 829 (116) 1767 (168) a 2660 (283) a 2972 (357) 937 (132) a 893 (172) 315 (185) c p-værdi NS < 0,0001 0,002 NS < 0,0001 NS 0,003 NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene, forskellige bogstaver angiver at der er signifikant forskel
Fra september til pelsning kompenserede de hold der fik den laveste glycerol mængde, således at der ikke var forskel i vægtene til pelsning. Der var ingen forskel i skindlængden til pelsning (tabel 6), men skindkvaliteten var bedst i det hold der fik 8 % glycerol i
foderet og dårligst i det hold 8 % majsstivelse. Der var ikke forskel i farven mellem holdene, men der var forskel i renhedsgraden, uden at der blev set en klar linie. Der var ingen forskel i silkede, flade og fyldige skind (tabel 6).
Tabel 6. Pelsegenskaber hos hvalpe der fik stigende andel af glycerol Uld, % Hold Antal Skindlængde, cm Kvalitet Farve Renhed Silket, % Flade Normale GLY0 118 90,7 (4,3) 6,8 (2,4) b 2,9 (0,9) 3,2 (0,8) a 14,4 11,0 78,8 GLY2 112 90,1 (4,0) 7,3 (2,4) ab 2,9 (1,0) 3,2 (0,9) a 18,9 9,9 75,7 GLY4 126 91,0 (3,7) 7,0 (2,6) ab 2,9 (1,0) 2,8 (0,9) b 17,1 14,6 73,2 GLY6 119 91,6 (4,5) 7,1 (2,4) ab 2,9 (1,0) 3,1 (1,0) a 18,6 3,4 80,5 GLY8 127 90,8 (4,5) 7,6 (2,3) a 2,9 (0,9) 2,8 (0,9) b 15,8 6,3 75,6 p-værdi NS 0,05 NS 0,0008 NS NS NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene, forskellige bogstaver angiver at der er signifikant forskel
48
Faglig Årsberetning 2009
Fyldige 10,2 14,4 12,2 16,1 18,1
Glycerol i minkfoder i vækst- og pelssætningsperioden
Levervægten i procent af kropsvægten var forskellig mellem holdene, uden at der kunne ses nogen logisk forklaring på dette (tabel 7). Leverens fedtindhold ved pelsning hos normalt fodrede ikke fastede hvalpe er 8 – 10 %, hos hvalpe fastet 48 timer er der 13 – 16 % fedt i leveren (Clausen & Sandbøl, 2007).
I denne undersøgelse var der en tendens til faldende leverfedtinfiltration med stigende glycerol i foderet. Dette forhold vil blive undersøgt nærmere. Organerne blev ikke sendt til videre undersøgelse, da methanol i glycerolen var under detektionsgrænsen.
Tabel 7. Undersøgelse af lever og nyrer til pelsning Hold Pelsvægt, g Levervægt, g Lever i % af krop, g Nyrevægt, g * Nyre i % af krop * Lever fedt % Gly0 2901 (310) 65,1 (9,3) 2,24 (0,22) b 6,03 (0,51) 0,21 (0,02) 14,7 (5,7) (a) Gly4 2984 (379) 74,0 (13,3) 2,47 (0,26) a 6,30 (0,98) 0,21 (0,02) 12,5 (3,7) (ab) Gly8 2872 (398) 68,8 (12,2) 2,39 (0,23) ab 6,09 (0,73) 0,21 (0,02) 10,7 (3,2) (b) p-værdi NS NS 0,05 NS NS NS (0,06) * pr nyre, gennemsnit af begge nyrer; NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene, forskellige bogstaver angiver at der er signifikant forskel
Ved undersøgelse af gødningskonsistensen i august og september, blev ikke observeret forskelle mellem holdene. Der var ingen forskel i antallet af dødsfald gennem perioden (tabel 8). Tabel 8. Procent døde hvalpe (hanner og tæver) i forsøgsperioden
Hold Gly0 Gly2 Gly4 Gly6 Gly8
% døde hanner og tæver 0,4 0,8 0,4 0,4 0,8
Konklusion Undersøgelserne viser at vi uden problemer kan anvende op til 8 % glycerol i minkfoder til erstatning af 8 % majsstivelse, med forbehold for påvirkninger af foderets konsistens. Skindkvaliteten var bedst ved 8 % glycerol og ingen majsstivelse, ligeledes ser det ud til at glycerol sænker leverens fedtindhold. Råvaren bør analyseres for Na og methanol inden anvendelse. Referencer Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2009. Stigende saltindhold i foderet og dets betydning for 11 uger gamle minkhvalpes vandoptagelse. Faglig Årsberetning 2008, 97 - 102, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark.
Clausen, T. N. & Sandbøl, P., 2007. Sammenhæng mellem leverfedtprocent og ketonstoffer (β – hydroxybutyrate) i blodet. Faglig Årsberetning 2006, 147150. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark Clausen, T. N., Damgaard, B.M. & Sandbøl, P., 2009. Behov for natrium til udvoksede minkhanner. Faglig Årsberetning 2008, 91- 95, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Clausen, T. N., Sandbøl, P. & Hejlesen, C. 2006. Proteinniveau til mink i pelssætnings-perioden. Betydning af fedt/kulhydratforhold og kulhydratkilde. Faglig Årsberetning 2005, 89-98. Pelsdyrerhvervets Forsøgs og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Dozier III, W.A., Kerr, B.J., Corzo, A., Kidd, M.T., Weber, T.E. og Bregendahl, K. 2008. Apparent metabolizable energy of glycerine for broiler chickens. Poult Sci, 87, 317-322. EU: Advisory committee on animal feedingstuffs ACAF minutter: 4. Dec. 2007 Kerr, B.J., Honeyman, M., Lammers, P., Hoyer, S., 2008. Feeding Bioenergy
Faglig Årsberetning 2009
49
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
Coproducts to Swine. Feed and Nutrition Featured Articles. Iowa State University Lammers, P.J., Kerr, B.J., Weber, T.E., Dozier, W.A., Kidd, M.T., Bregendahl, K., Honeyman, M.S. 2008. Digestible and metabolizable energy of crude glycerol for growing pigs. J. Anim Sci. 86, 602-608.
50
Nielsen, N.I. & Kristensen, N.B., 2004. Glycerol til malkekøer en discountudgave af propylenglycol? Landbrugsinfo, Kvæginfo nr. 1420. Schulin-Zeuthen, M. & Sandbøl, P. 2010. Tilsyneladende fordøjelighed af glycerol hos mink. Faglig Årsberetning 2009.
Faglig Årsberetning 2009
Effekten af L- og DL- methionin til mink i vækstperioden Tove N. Clausen & Peter Sandbøl Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Herningvej 112C, 7500 Holstebro. Sammendrag For at undersøge effekten af L-met eller DL-met til mink i vækstperioden, blev anvendt 7 hold a 132 wildmink han- og tævehvalpe. Til et grundfoder med lavt methionin indhold blev tilsat L-met eller DL-met i forskellige niveauer op til et beregnet indhold i foderet på 0,10, 0,13 og 0,16 g fordøjeligt methionin / 100 kcal opnået med hhv L- eller DL met tilsætning. Den største pelsningsvægt og de længste skind blev set ved den højeste iblanding af DL-methionin. Fra 0,14 g analyseret methionin / 100 kcal og derover var der tilfredsstillende skindlængde og de bedste kvaliteter, gældende norm er således tilstrækkelig. Det ser derudover ud til at dyrene er i stand til at udnytte noget af D formen, idet en tilsætning af DL methionin i dobbelt mængde af L methionin gav bedre resultater. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2010. Undersøgelse af effekten af L- samt DL- methionin til mink i vækstperioden. Faglig Årsberetning 2009, 51-56, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Summary To investigate the effect of L-met or DL-met to mink in the growing-furring period, we used 7 groups of 132 wildtype male- and female mink kits each. To a control feed with low methionine we added L-met or DL-met up to a calculated content of 0.10, 0.13 and 0.16 g digestible met / 100 kcal. The heaviest male kits and the longest skins at pelting were seen in the group with the highest addition of DL-met. From an analysed content of 0.14 g met / 100 kcal and more the skin size and pelt quality was good, and existing norm is adequate. Further it seems that the animals are able to use some of the D form of methionine, as an addition of DL-met in twice the amount of L-met gave better results. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2010. Investigation on the effect of L- and DL- methionine to mink in the growing-furring period. Annual Report 2009, 51-56, Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: L-methionin, DL-methionin, tilvækst, skindegenskaber
Indledning Methionin er den først begrænsende aminosyre til mink i vækstperioden. Methionin har stor betydning for pelsens kvalitet, og der er således en stor interesse i at anvende syntetisk methionin, for at kunne sænke foderets proteinindhold. Ved fremstilling af syntetisk methionin fremkommer både en D- og en L- form. L-formen er den der findes i naturen og således den som dyrene sædvanligvis bruger. Nogle dyrearter kan imidlertid godt udnytte D-formen. Dahlman (2003) finder således at ræve udnytter begge forme lige godt. Ifølge Elnif & Hansen (2005) bruger mink mindre end 30 % af D-formen i forhold til L-formen. Derudover finder de at frie aminosyrer tilført foderet omsættes meget hurtigere i dyrene end aminosyrer der kommer fra foderets protein.
Yderligere er genfindingen af tilsatte frie aminosyrer ikke 100 % (SchulinZeuthen, pers medl., 2008), hvilket kunne tyde på en vis omsætning i foderet. Traditionelt har vi i minkfoder, ved mangel på methionin, anvendt DL- met i den dobbelte mængde af L methionin, altså gået ud fra, at der ikke var nogen nyttevirkning af D-formen. I de senere år har mange fodercentraler anvendt rent L-met. Det er imidlertid noget dyrere end den dobbelte mængde DL-met. Da der har været en del diskussion om brugen af L-met eller DL-met til mink i vækstperioden, blev det besluttet at afprøve de to produkter overfor hinanden.
Faglig Årsberetning 2009
51
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
Materiale og metoder Til undersøgelsen blev anvendt 7 hold a 132 wildmink han- og tævehvalpe. Forsøget startede op primo juli. Til undersøgelsen blev fremstillet et grundfoder med så lavt et methionin indhold som muligt (Tabel 1). Generelt var proteinindholdet lavt (28 % af den omsættelige energi fra protein) i forhold til det optimale i juli måned (32 OEp) (Clausen & Sandbøl, 2009), men for at opnå et lavt methionin indhold i grundfoderet, var vi nødsagede til at acceptere lavt protein i juli og dermed generelt lavere tilvækst af hvalpene. Tabel 1. Grundfoderets sammensætning, Procentiblanding
Hold Tysk varm fjerkræ Svinepulp Tørrede fedtegrever Blosol Soyaprotein AK510 Fjermel Byg Hvede Soyaolie Svinefedt Vit.-bl. Vand Plantal: Energiindhold: kcal/100g MJ/kg MJ/kg tørstof Tørstof, % Energifordeling Aske, % Met g/100 kcal Analysetal: Energiindhold: kcal/100g MJ/kg MJ/kg tørstof Tørstof, % Energifordeling Aske, %
KON 23,5 8,0 0,36 2,43 5,0 4,0 8,40 8,40 4,48 2,24 0,25 33,0
207 8,7 18,8 46 28:52:20 2,7 0,082 #
184 & 7,7 18,3 42 27:50:23 2,3
# cys er 0,10; & holdene blev analyseret enkeltvis, men var nogenlunde ens i kemisk sammensætning
Til dette foder blev tilsat L-met eller DLmet i forskellige niveauer (tabel 2).
52
Tabel 2. Procent tilsætning af L- eller DL- methionin til forsøgshold. L met DL- met Beregnet ford. met Hold Behandling tilsætning tilsætning g/100 kcal * KON Kontrol 0,082 L10 L-met 0,10 0,0389 0,10 DL-met DL10 0,10 0,0778 0,10 L13 L-met 0,13 0,104 0,13 DL-met DL13 0,13 0,208 0,13 L16 L-met 0,16 0,1695 0,16 DL-met DL16 0,16 0,339 0,16 * Da det antages at dyrene ikke udnytter D-formen tilsættes dobbelt så meget DL som L.
Hvalpene blev vejet ved udsætning (3. juli), 4. august, 15. september og ved pelsning (17. november). Skindene blev sorteret og længdemålt. Foderet blev undersøgt regelmæssigt for kemisk sammensætning, efter forsøget blev aminosyreindholdet analyseret på en samleprøve. Til pelsning blev udtaget lever til bestemmelse af fedtprocenten hos hanhvalpe fastet 48 timer fra holdene 20, 25 og 26. I de hold, hvor der ikke blev udtaget dyr, blev der dog stadig fastes 15 hanner, for at få samme behandling i alle hold. De statistiske beregninger er udført med statistikprogrammet SAS. Procedurerne GLM (ss4), LSMEANS / PDIFF er anvendt med 5 % som signifikansniveau ved beregninger over vægt og længde. Relevante kovariater er medtaget i de tilfælde de er signifikante. Ved skindkvalitet, farve og renhed er anvendt en non-parametrisk test (GEN-MOD). Silket, fyldighed og metallic er analyseret med proceduren PROBIT eller X2. Resultater Foder De kemiske analyser af foderet (tabel 1) viste at indholdet svarede nogenlunde til det forventede, der var et lidt lavere protein og fedtindhold end planlagt, men det var ens for alle hold. Den analyserede aminosyresammensætning ses af tabel 3a og 3b. Ud fra analyse af grundblandingen (KON) ses
Faglig Årsberetning 2009
Effekten af L- og DL- methionin til mink I vækstperioden
det (tabel 3a), at indholdet af methionin er i underkanten af det beregnede. Det lidt lavere proteinindhold i foderet synes ikke at kunne forklare hele forskellen, idet de fleste af de øvrige aminosyrer svarer nogenlunde til de beregnede værdier (tabel 3a). Ved at tage højde for dette underindhold og anvende den total tilsatte mængde (D + L met) og sam-
menligne med de analyserede værdier (analysen finder både D og L met) ses at det analyserede indhold i de øvrige hold svarer fint til det beregnede indhold (tabel 3b). I tabel 3b er derudover beregnet g fordøjelig methionin / 100 kcal, hvis det antages at 30 % af D-methionin anvendes, og der korrigeres for et lavere indhold i grundblandingen.
Tabel 3a. Analyseret aminosyreindhold (A) i foderet ud fra teoretiske aminosyre FK, sammenholdt med aminosyre plantal (P) (g fordøjelige aminosyrer / 100 kcal)
met cys lys thr trp his phe tyr leu ile val arg
KON A P 0.06 0.082 0.102 0.102 0.27 0.34 0.21 0.23 0.067 0.067 0.13 0.18 0.32 0.33 0.21 0.21 0.52 0.55 0.18 0.26 0.33 0.42 0.39 0.44
L10 A P 0.084 0.10 0.113 0.102 0.28 0.34 0.23 0.23 0.061 0.067 0.15 0.18 0.35 0.33 0.21 0.21 0.54 0.55 0.20 0.26 0.40 0.42 0.39 0.44
DL10 A P 0.10 0.10 * 0.113 0.102 0.29 0.34 0.23 0.23 0.065 0.067 0.14 0.18 0.33 0.33 0.21 0.21 0.56 0.55 0.19 0.26 0.36 0.42 0.38 0.44
L13 A P 0.11 0.13 0.110 0.102 0.28 0.34 0.22 0.23 0.066 0.067 0.14 0.18 0.33 0.33 0.22 0.21 0.54 0.55 0.21 0.26 0.39 0.42 0.40 0.44
DL13 A P 0.14 0.13 * 0.105 0.102 0.29 0.34 0.22 0.23 0.062 0.067 0.15 0.18 0.35 0.33 0.25 0.21 0.57 0.55 0.24 0.26 0.42 0.42 0.41 0.44
L16 A P 0.14 0.16 0.109 0.102 0.28 0.34 0.22 0.23 0.066 0.067 0.13 0.18 0.33 0.33 0.22 0.21 0.57 0.55 0.20 0.26 0.36 0.42 0.40 0.44
A 0.20 0.105 0.30 0.23 0.068 0.14 0.34 0.23 0.55 0.22 0.39 0.41
DL16 P 0.16 * 0.102 0.34 0.23 0.067 0.18 0.33 0.21 0.55 0.26 0.42 0.44
* Der blev tilsat DL-methionin Tabel 3b. Analyseret total methioninindhold (L og D) g/100 kcal *, plantal korrigeret for lav indhold i grundblandingen samt omregnet til totalindhold (g/100 kcal) (vil svare til g fordøjelig /100 kcal hvis D udnyttes 100 %) #. Derudover beregnet g fordøjelig methionin / 100 kcal, hvis det antages at 30 % af D-methionin anvendes, og der korrigeres for et lavere indhold i grundblandingen &. met KON L10 DL10 L13 DL13 L16 DL16 analyse * 0.065 0.084 0.099 0.11 0.14
0.14 0.20
plantal #
0.065 0.083 0.10
0.11 0.16
0.14 0.22
Værdi &
0.065 0.083 0.088 0.11 0.13
0.14 0.17
Vægt Vægtudviklingen gennem perioden ses af tabel 4. Ved udsætning vejede hvalpene ens, resten af perioden var der tydelig forskel mellem holdene. Hvalpe i kontrolholdet med det laveste niveau af methionin var mindst, dernæst kom der stigende vægt med stigende iblanding af methionin, dog således at hvalpe der
fik DL-met var tungere end hvalpe der fik ren L-methionin op til samme beregnede mængde g fordøjeligt methionin pr 100 kcal. Tilvæksten i de forskellige perioder afspejlede det samme, dog blev der set kompensatorisk vækst i KON fra d. 15. september til pelsning. Den bedste pelsningsvægt blev således set i DL16. DL10 vejede ved pelsning nogenlunde det samme som L13 og DL13 vejede nogenlunde det samme som L16, det kunne således se ud som om dyrene er i stand til at udnytte noget af D formen, idet det analyserede methionin indhold (total met = naturligt indhold + L met + D met, tabel 3b) er nogenlunde den samme i DL10 og L13 og i DL13 og L16. L-met tilsat op til 0,16 g fordøjeligt pr 100 kcal har i andre forsøg vist sig tilstrækkelig til vækst og kvalitet, i denne undersøgelse er tilsæt-
Faglig Årsberetning 2009
53
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
ning af DL-met op til 0,16 imidlertid bedre, dette skyldes måske at det analyserede methionin indhold i L16 kun var 0,14 g fordøjeligt pr 100 kcal.
Der ses en god sammenhæng mellem foderets analyserede totale methioninindhold og pelsningsvægten (R2=0,96) (figur 1).
Tabel 4. Hvalpevægte og tilvækst gennem vækstperioden Udsætnings Vægt 4. Vægt 15. Pelsnings vægt Tilvækst, g vægt (3/7), g august, g september, g (17/11), g Hold Fra 3/7 til 4/8 Fra 4/8 til 15/9 Fra 15/9 til 17/11 KON 851 (141) 1412 (209) e 2234 (323) d 2558 (373) d 560 (141) d 832 (206) c 328 (177) abc L10 854 (126) 1440 (198) de 2319 (296) c 2552 (318) d 585 (140) cd 870 (197) bc 231 (190) d DL10 857 (133) 1467 (189) cd 2333 (299) c 2647 (342) c 612 (127) c 858 (218) bc 312 (217) bc L13 856 (137) 1517 (179) ab 2356 (339) bc 2663 (399) c 656 (120) b 843 (235) c 303 (199) c DL13 849 (124) 1512 (150) ab 2406 (246) ab 2757 (322) b 661 (99) ab 892 (169) ab 357 (187) ab L16 852 (144) 1497 (188) bc 2373 (273) bc 2710 (351) bc 644 (131) b 877 (189) bc 339 (196) abc DL16 856 (143) 1545 (183) a 2476 (301) a 2848 (369) a 689 (128) a 933 (178) a 372 (191) a p-værdi NS < 0,0001 < 0,0001 < 0,0001 < 0,0001 0,002 < 0,0001 NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene, forskellige bogstaver angiver at der er signifikant forskel
Pelsningsvægtens afhængighed at foderets beregnede indhold af fordøjelig methionin / 100 kcal, når der antages en udnyttelsesgrad af D-formen på 30% (beregnet i tabel 3b), giver R2=0,88. Det ser således ud som om dyrene kan udnytte en stor del af D- methioninen til vækst.
2900
pelsningsvægt, gram
2850 2800 2750 2700 2650 2600 2550 2500 0.000
0.050
0.100
0.150
0.200
0.250
analyseret g m ethionin / 100 kcal
Figur 1. Pelsningsvægtens afhængighed at foderets 2 analyserede totale methioninindhold (R =0,96)
Skind Skindlængden afspejler pelsningsvægtene (tabel 5), således at der blev set stigende skindstørrelse med stigende methioninindhold i foderet.
Tabel 5. Skindlængde og pelskvalitet Uld, % Hold Antal Skindlængde, cm Kvalitet Farve Renhed Silket, % Flade Normale KON 121 85,7 (5,3) d 4,8 (2,1) e 3,1 (1,0) 2,8 (1,0) bc 6,8 16,1 83,9 L10 111 86,6 (4,0) cd 5,7 (2,0) d 3,1 (0,9) 2,5 (1,1) c 8,0 8,9 88,4 DL10 117 87,1 (4,4) bc 5,9 (2,3) cd 3,1 (0,9) 2,8 (0,9) ab 10,5 15,8 78,1 L13 115 88,2 (5,5) ab 6,1 (2,4) bc 3,0 (0,9) 2,8 (1,0) b 8,9 8,9 77,7 DL13 123 88,9 (4,4) a 6,8 (2,3) a 3,0 (1,0) 3,1 (0,9) a 17,2 9,0 76,2 L16 116 88,8 (4,1) a 6,6 (2,8) ab 3,0 (1,0) 2,8 (1,0) b 9,8 9,8 70,5 DL16 116 89,2 (4,9) a 6,3 (2,4) ab 2,8 (1,0) 3,0 (0,9) ab 16,5 13,9 77,4 p-værdi < 0,0001 < 0,0001 NS 0,0008 NS (0,07) < 0,0001 NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene, forskellige bogstaver angiver at der er signifikant forskel 89.5 89 88.5 skindlængde i cm
De længste skind blev således set ved DL16, fra L13 og højere iblanding blev ikke set statistisk sikker forskel i skindlængden. Igen var der tendens til at DL-methionin gav lidt bedre størrelse end L-methionin på samme niveau, hvilket kunne antyde at dyrene udnytter en vis del af D-formen. Skindlængdens afhængighed af foderets analyserede totale methio-ninindhold ses af figur 2 (R2=0,97).
Fyldige 0 2,7 6,1 13,4 14,8 19,6 8,7
88 87.5 87 86.5 86 85.5 85 0.000
0.050
0.100
0.150
0.200
0.250
analyseret g m ethionin / 100 kcal
Figur 2. Skindlængdens afhængighed at foderets 2 analyserede totale methioninindhold (R =0,97)
54
Faglig Årsberetning 2009
Effekten af L- og DL- methionin til mink I vækstperioden
Skindlængdens afhængighed at foderets beregnede indhold af fordøjelig methionin / 100 kcal, når der antages en udnyttelsesgrad af D-formen på 30% (beregnet i tabel 3b), giver R2=0,98. Ud over kortere skind i lav methioninholdene er der også en meget dårlig kvalitet i disse skind. Skindkvaliteten stiger med stigende methioninindhold op til et analyseret total indhold på 0,14 g met / 100 kcal fra DL-methionin, der giver den bedste kvalitet. Yderligere stigning i methionin indholdet giver ikke en yderligere forbedring af kvaliteten. Sammenhængen mellem foderets analyserede totale methioninindhold og skindkvaliteten ses af figur 3 (R2=0,98).
Sundhed Leverens fedtindhold ved pelsning hos normalt fodrede ikke fastede hvalpe er 8 – 10 %, hos hvalpe fastet 48 timer er der 13 – 16 % fedt i leveren (Clausen & Sandbøl, 2007). Hvalpene i denne undersøgelse havde været fastet i 48 timer og deres leverfedtindhold svarede for de undersøgte hold til det forventede (tabel 6). Leveren udgjorde i alle tre hold ca. 2,5 % af kropsvægten. Der døde fra 0,4 til 4,5 % af hvalpene i løbet af vækstperioden, der var ikke nogen klar linje i dødsårsagerne (tabel 7). Tabel 6. Levervægt, og leverfedtprocent hos hvalpe fastet 48 timer.
8
Hold KON L16 DL16
7 6
kvalitet
5
Stk. 15 15 15
Pelsnings vægt, g 2634 (368) 2671 (366) 2789 (241)
Levervægt, g 67,0 (8,5) 67,5 (8,7) 70,2 (13)
Lever i % af kropsvægt 2,57 (0,31) 2,55 (0,25) 2,50 (0,34)
Lever fedt % 15,4 (4,6) 14,8 (4,1) 14,3 (5,2)
p-værdi NS NS NS NS NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene
4 3 2
Tabel 7. Frekvensen af døde han- og tævehvalpe
1 0 0.000
0.050
0.100
0.150
0.200
0.250
analyseret g m ethionin / 100 kcal
Figur 3. Skindkvalitetens afhængighed at foderets 2 analyserede totale methioninindhold (R =0,98)
Skindkvalitetens afhængighed at foderets beregnede indhold af fordøjelig methionin / 100 kcal, når der antages en udnyttelsesgrad af D-formen på 30% (beregnet i tabel 3b), giver R2=0,94. Der var ikke forskel i farven mellem holdene, men der var de mest røde skind i det hold der havde den bedste kvalitet (tabel 5). Der var en tendens til de flest silkede skind i de hold der fik DL-methionin frem for L-methionin på samme niveau og de færrest silkede i kontrolholdet uden methionin tilsætning. I kontrolholdet var der derudover mange flade og slet ingen fyldige skind. Flest fyldige skind blev set ved 0,11 g methionin pr 100 kcal og der over.
Hold KON L10 DL10 L13 DL13 L16 DL16
% døde hanner og tæver 2,3 2,3 4,5 2,3 0,4 3,1 1,5
Konklusion Den største pelsningsvægt og de længste skind blev set ved den højeste iblanding af DL-methionin. Fra 0,14 g analyseret methionin / 100 kcal og derover var der tilfredsstillende skindlængde og de bedste kvaliteter, gældende norm er således tilstrækkelig. Det ser derudover ud til at dyrene er i stand til at udnytte noget af D formen, idet en tilsætning af DL methionin i dobbelt mængde af L methionin giver bedre resultater. Denne undersøgelse antyder at Dformen udnyttes 100 %, andre undersøgelser antyder at 30 % anvendes, indtil videre undersøgelser er udført,
Faglig Årsberetning 2009
55
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
kan man således tillægge DL- methionin en værdi på mindst 65%. Referencer Clausen, T. N. & Sandbøl, P., 2007. Sammenhæng mellem leverfedtprocent og ketonstoffer (β – hydroxybutyrate) i blodet. Faglig Årsberetning 2006, 147150. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark Clausen, T. N. & Sandbøl, P., 2009. Energifordelingen i hvalpenes tidlige vækstfase, fortsatte undersøgelser.
56
Faglig Årsberetning 2008, xx-xx, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Dahlman, T., 2003. Protein and amino acids in the nutrition of the growingfurring blue fox. Academic dissertation. University of Helsinki. Dept. of Animal Sciences, Publications 69, Finland. Elnif, J. & Hansen, N.E., 2005. Metabolism of D- and L- methionin in mink (Mustela vison). NJF seminar nr 377, Uppsala, Sweden, Oct. 5-7, 2005.
Faglig Årsberetning 2009
Effekten af aminosyrerne phenylalanin og tyrosin, samt chelateret jern, kobber og zink på pelsfarven hos mink (Mustela vison). Tove N. Clausen & Peter Sandbøl Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Herningvej 112C, 7500 Holstebro. Sammendrag For at belyse det optimale niveau af phe+tyr for såvel vækst, som pelsfarve, samt betydningen af Fe, Cu og Zn for pelsfarven, blev der anvendt 5 hold a 142 standard mink hanner og tæver og 2 hold a 122 wildmink hanner og tæver. Til et grundfoder med et lavt indhold af phe og tyr (0,41 g fordøjelig phe + tyr / 100 kcal) blev tilsat phe + tyr op til hhv 0,47 og 0,55 g fordøjelig phe + tyr / 100 kcal. Yderligere blev i to hold tilsat chelate mineral forbindelser, kobber (Cu), zink (Zn) og jern (Fe) i to niveauer til grundfoderet. Resultaterne viste en tendens til den laveste vægt ved lavest phe + tyr, og en tendens til den mørkeste farve ved det højeste indhold, både i standard og wildmink. Øget tilsætning af mineraler i de her anvendte mængder, gav en lidt bedre tilvækst, men havde ingen signifikant effekt på skindenes længde, kvalitet eller farve. Farven var dog mørkest ved den højeste iblanding, og der var en tendens til den dårligste kvalitet ved den højeste iblanding. Leverens fedtindhold var højest ved den højeste tilsætning af chelate mineraler, dog var leverens mineralindhold ikke påvirket signifikant af en øget tilsætning af Fe, Cu og Zn i de her anvendte mængder og former, men der var en tendens til et højere indhold. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2010. Undersøgelse af betydningen af aminosyrerne phenylalanin (phe) og tyrosin (tyr), samt mineralerne jern (Fe), kobber (Cu) og zink (Zn) for pelsfarven hos sorte og brune mink. Faglig Årsberetning 2009, 57-65, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Summary To find the optimal level of phe+tyr for body growth and pelt colour and to find the importance of Fe, Cu and Zn for pelt colour, we used 5 groups of 142 black male and female mink kits each, and 2 groups of 122 wildtype male and female kits each. To a control feed with a low content of phe+tyr (0.41 g digestible phe + tyr / 100 kcal) we added phe + tyr up to a total content of 0.47 vs. 0.55 g digestible phe + tyr / 100 kcal. Further we had two groups with and addition of chelated minerals, cupper (Cu), zink (Zn) and iron (Fe) in two levels to the control feed. The results showed a tendency towards the lowest weight at the lowest phe + tyr level and a tendency towards the darkest skins at the highest level, both in black and wildtype mink kits. Increased addition of minerals in the amounts used here gave a better body growth, there were no significant difference in skin length and pelt quality, but a tendency towards lower skin quality, and darker colour at the highest addition. The liver fat content was highest at the highest addition of chelated minerals. There was a tendency towards an increased liver mineral content when the feed mineral content increased, but no significant increase. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2010. Investigation on the importance of the aminoacids phenylalanine (phe) and tyrosine (tyr), and the minerals iron (Fe), cupper (Cu) and zink (Zn) on pelt colour in black and brown mink. Annual Report 2009, 57-65, Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: phenylalanin, tyrosin, jern, kobber, zink, pelsfarve
Indledning Yu et al. (2001) fandt, at foder med et lavt indhold af aminosyren tyrosin (tyr) bevirkede at sorte katte blev rødhårede. Sorte hunkatte fodret med dette foder fødte rødhåret afkom. De konkluderede at behovet, for at opretholde den sorte farve var større end 4,5 g tyr plus 12 g
phenylalanin (phe); men mindre end 24 g phe / kg foder. Indholdet af omsættelig energi (OE) i foderet er ikke angivet; men beregnet udfra det energiindhold de medvirkende forskere typisk har brugt i tidligere undersøgelser, svarer dette til 0,10 g tyr
Faglig Årsberetning 2009
57
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
plus 0,26 g phe / 100 kcal OE henholdsvis 0,51 g phe / 100 kcal OE (niveauer er angivet som total indehold af aminosyrer). Morris et al. (2002) argumenterede at udviklingen af rødhårede katte skyldtes mangel på phe og/eller tyr, som indgår i dannelsen af pigmenter (melanin). De indsnævrede yderligere det nødvendige niveau til at ligge mellem 17,6 og 24 g phe+tyr / kg foder, svarende nogenlunde til intervallet mellem 0,37 og 0,51 g phe+tyr / 100 kcal OE. Phe og tyr indgår i dannelsen af såvel sorte, brune og røde pigmenter og Morris et al. (2002) pegede på, at en mulig grund til at der dannedes røde pigmenter, kunne være en ubalance i forholdet mellem cys og phe+tyr, da også cys indgår i dannelsen af røde pigmenter. På baggrund af forsøg udført af Anderson et al. (1980) og Williams et al. (1987) var NRC normen til katte fastsat til 8,5 g phe+tyr / kg foder (4700 kcal OE / kg), hvoraf minimum 4,0 g skulle være phe. Morris et al. (2002) mener at normen for phe+tyr bør være minimum 18 g / kg foder for at undgå at sorte katte bliver rødhårede. Dette svarer til 0,38 g / 100 kcal OE. Gældende norm til mink i vækstperioden (Børsting & Clausen, 1996) anbefaler 0,29 g phe plus 0,18 g tyr / 100 kcal OE, hvilket giver en sum på 0,47 g phe+tyr /100 kcal OE. Umiddelbart burde de eksisterende maksimumnormer til mink således være dækkende. I en afprøvning af kød- og benmel (KBM) til mink i vækstperioden fandt Clausen et al. (2003), at en stigende iblanding gav signifikant flere røde skind hos mink af farve typen black. I et senere forsøg med fedtegrever (Clausen et al., 2004), gav et stigende indhold af fedtegrever en tilsvarende tendens. En øget iblanding af KBM gav et faldende indhold af såvel phe som tyr (Clausen et al., 2003), en øget iblanding af fedtegrever (Clausen et al.,
58
2004) gav et faldende indhold af phe medens tyr var konstant. Tidligere aminosyreforsøg viste tilsvarende, at et lavt indhold af phe henholdsvis tyr gav mere røde skind (Børsting & Clausen, 1995). En nærmere vurdering af disse resultater (Børsting & Clausen, 1996; Børsting & Clausen 1995; Clausen et al., 2004; Clausen et al., 2003) indikerede, at behovet for phe+tyr, for at opnå en mørk pelsfarve, er højere end 0,55 g ford. phe+tyr/100 kcal. Gældende norm angiver 0,47 ford./100 kcal. Der synes dog ikke at være nogen sammenhæng mellem indholdet af met, cys, met+cys eller met+cys/phe+tyr. Derimod indikerede resultaterne fra Børsting & Clausen (1995) og Børsting et al., (1995), at der er en negativ sammenhæng mellem pelsfarven (mørk) og proteinindholdet i foderet. Ifølge Santin (2004) har der i de senere år været en stigende tendens til mere ”røde” skind. Effekten må således forventes at have betydning for alle de farvetyper, som indeholder sorte, brunlige og røde pigment i hårene. Da farvetyperne mahogany, black, brown og glow udgør en betragtelig andel af den danske produktion, vil det således være relevant at få belyst betydningen af indholdet af phe+tyr. Visse mineraler har ligeledes betydning for pigmentdannelsen, generelt er dyrenes behov for de forskellige mineraler dog ikke undersøgt tilstrækkeligt. Behov for Zn til hvalpe er sat til 60 ppm af tørstof (Tauson et al., 1992), behov for Cu er anslået til enten 4,5-6,0 ppm (Glem-Hansen, 1978, pers. medl.) eller 30-50 ppm af tørstof (Treuthardt, 1992). Fe behovet angives ifølge NRC (1982) til 20-90 ppm af tørstof, hvis der ikke er inhiberende faktorer i foderet, og ifølge Treuthardt (1992) til 300-400 ppm af tørstof, det et dog usikkert, hvilken jernkilde han har anvendt. Cu har betydning for dannelsen af melanin der er et mørkt pigment i håret,
Faglig Årsberetning 2009
Effekten af aminosyrer, samt chelateret jern, kobber og zink på pelsfarven hos mink. (Mustela vison)
en mangel ville således give lysere skind. Aulerich et al. (1982) melder om mørkere skind ved tilsætning af 100200 ppm Cu til foderet (som CuSO4; 35 % tørstof; 290-570 ppm i tørfoder), men større hvalpe død og mindre kuldvægt, ved langtids anvendelse af disse mængder. Brandt (1983) fandt tegn på Cu forgiftning (dødsfald hos halvdelen) ved 300 ppm i vådfoder. Fe mangel giver dårlig tilvækst og lys underuld (Tauson et al., 1992), Zn mangel giver nedsat tilvækst (Mejborn, 1986), ligeledes angives hud og hår forandringer (Tauson et al., 1992). Nærværende forsøg gennemføres for, at belyse det optimale niveau af phe+tyr for såvel vækst, som pelsfarve, samt betydningen af Fe og Cu for pelsfarven og Zn for hårvæksten. Mørk farve er det bedste for sorte skind, men er ikke nødvendigvis det bedste for andre farvetyper. Derfor medtages to hold brune mink, for at se effekten af phe + tyr på farven hos denne type. Materialer og metoder Der blev anvendt 5 hold a 142 standard mink hanner og tæver og 2 hold a 122 wildmink hanner og tæver. Til undersøgelsen blev fremstillet et grundfoder (tabel 1) med et lavt indhold af phe og tyr. For at opnå dette, var det nødvendigt at anvende et lavt proteinindhold i foderet (25 OEp).
Tabel 1. Foderplan anvendt til grundblanding i forsøgsserien Hold 70 – 74 og 40, 41 Industrifisk, 8-12 % fedt 43,3 Tørrede fedtegrever 6,35 Hæmoglobinmel 2,32 Fjermel 2,83 Majsstivelse 3,61 Byg 6,52 Hvede 6,52 Soyaolie 6,25 Svinefedt 3,13 Vit.-bl. 0,25 DL-met 0,26 & Vand 18,8 Plantal: Energiindhold: kcal/100g 245 MJ/kg 10,3 MJ/kg tørstof 21,4 Tørstof, % 48 Energifordeling 25:57:18 Aske, % 1,9 Phenylalanin g/100 kcal 0,25 Tyrosin g/100 kcal 0,16 Analysetal: Energiindhold: kcal/100g 237 $ MJ/kg 9,9 MJ/kg tørstof 22,0 Tørstof, % 45 Energifordeling 24:60:16 Aske, % 1,2 & det antages at D formen ikke udnyttes; $ før fedttilsætning: 194 kcal/100g – 40 % tø – 30:52:18 – 1,2 % aske.
25 % af den omsættelige energi fra protein giver ikke optimal tilvækst i den pågældende periode, men det var gældende for alle hold. Forsøgsopstillingen ses af tabel 2.
Tabel 2. Procent tilsætning af phe og tyr til forsøgsfoderet, og beregnet indhold af phe + tyr i foderet, samt tilsætning af mineraler.
Hold 70 st 71 st 72 st 73 st 74 st 40 w 41 w
phe tilsæt. % 0,1076 0,1108 0,1108
tyr tilsæt. % 0,0577 0,2867 0,2867
Beregnet fordøjelig phe+ tyr g/100 kcal 0,25 + 0,16 = 0,41 0,29 + 0,18 = 0,47 (vækst) 0,29 + 0,26 = 0,55 (farve) 0,41 0,41 0,41 0,55
Mineraler, ppm i tørstof Fe+Cu+Zn # 50+15+50 100+30+100 -
# ved 48 % tø giver det hhv 0,015-0,0045-0,012 % og 0,030-0,009-0,024 %. De anvendte mineralprodukter var chelate ® forbindelser fra MACC , mineral indholdet i hhv Fe, Cu og Zn produkterne var: 16, 16 og 20 %
Grundfoderet blev anvendt til et hold standard og et hold wildmink. Et hold standard blev fodret med grundfoder
tilsat phe + tyr op til normen for vækst på 0,47 g fordøjelig phe + tyr / 100 kcal.
Faglig Årsberetning 2009
59
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
Et hold standard og et hold wildmink blev fodret med grundfoder tilsat phe + tyr op til det antagede behov for mørkest farve på 0,55 g fordøjelig phe + tyr / 100 kcal. Derudover blev der til to hold standard tilsat kobber (Cu), zink (Zn) og jern (Fe) i to niveauer til grundfoderet. Til undersøgelsen blev anvendt chelate mineralforbindelser. Chelate forbindelser er komplekser mellem metalionen og en ligand (en binder, i dette tilfælde en aminosyre). Chelate forbindelser er som oftest meget mere stabile end ikke-chelate forbindelser og skulle forbedre optagelsen af mineralerne ind i kroppen, hvorvidt dette er tilfældet er ikke tilstrækkeligt undersøgt endnu. Forsøgsfodringen startede 15. august og fortsatte til pelsning. Mineraler blev tilsat fra d. 26/8. Hanhvalpene blev vejet ved start (15/8), 15. september og ved pelsning. Skindene blev længdemålt og kvalitets sorteret, især blev der fokuseret på farve. Til pelsning blev udtaget lever af 15 ikke fastede hanhvalpe i holdene 70, 73 og 74, leverfedt procenten blev bestemt og leverstykker blev sendt til mineralanalyse (samleprøver á 5 levere). Samleprøver af foderet blev analyseret for aminosyreindhold, og
foder fra hold 70, 73 og 74 blev derudover analyseret for mineralindhold. De statistiske beregninger er udført med statistikprogrammet SAS. Procedurerne GLM (ss4), LSMEANS / PDIFF er anvendt med 5 % som signifikansniveau ved beregninger over vægt og længde. Relevante kovariater er medtaget i de tilfælde de er signifikante. Ved skindkvalitet, farve og renhed er anvendt en non-parametrisk test (GENMOD). Silket, fyldighed og metallic er analyseret med proceduren PROBIT eller X2. Resultater Foderet Analyser af foderets kemiske sammensætning ved opstart af forsøget, viste et højere indhold af protein end planlagt (tabel 1), derfor blev der fra 9/9 og resten af perioden tilsat ekstra fedt (2,5 % soyaolie og 1,1 % svinefedt). Holdene blev analyseret enkeltvis, men var nogenlunde ens, derfor er det opgivet som et gennemsnit af alle analyser. Foderets analyserede aminosyresammensætning ses af tabel 3.
Tabel 3 Foderets analyserede aminosyreindhold ud fra teoretiske aminosyre FK, sammenholdt med aminosyre plantal (g fordøjelige aminosyrer / 100 kcal).
met cys lys thr trp his phe tyr leu ile val arg
70 analyse 0.18 0.058 0.34 0.18 0.046 0.15 0.28 0.17 0.44 0.18 0.34 0.37
plantal 0.16 * 0.060 0.37 0.20 0.050 0.17 0.25 0.16 0.46 0.20 0.35 0.34
71 analyse 0.17 0.054 0.31 0.18 0.046 0.12 0.30 0.19 0.44 0.16 0.30 0.35
plantal 0.16 * 0.060 0.37 0.20 0.050 0.17 0.29 0.18 0.46 0.20 0.35 0.34
72 analyse 0.17 0.059 0.31 0.19 0.045 0.12 0.29 0.25 0.45 0.15 0.29 0.33
plantal 0.16 * 0.060 0.37 0.20 0.050 0.17 0.29 0.26 0.46 0.20 0.35 0.34
73 analyse 0.17 0.052 0.30 0.18 0.043 0.12 0.24 0.15 0.40 0.14 0.26 0.33
plantal 0.16 * 0.060 0.37 0.20 0.050 0.17 0.25 0.16 0.46 0.20 0.35 0.34
74 analyse 0.18 0.055 0.31 0.18 0.047 0.12 0.26 0.15 0.44 0.15 0.28 0.33
plantal 0.16 * 0.060 0.37 0.20 0.050 0.17 0.25 0.16 0.46 0.20 0.35 0.34
phe+tyr
0.44
0.41
0.48
0.47
0.54
0.55
0.39
0.41
0.41
0.41
* Der blev tilsat DL methionin, hvorfor det analyserede indhold burde være 0,21 g / 100 kcal
60
Faglig Årsberetning 2009
Effekten af aminosyrer, samt chelateret jern, kobber og zink på pelsfarven hos mink. (Mustela vison)
Det analyserede aminosyreindhold svarede nogenlunde til det beregnede, men var for enkelte i underkanten af de beregnede værdier, evt. som følge af et lidt lavere proteinindhold i foderet end beregnet efter fedttilsætning. Indholdet af phe + tyr svarer til det beregnede, niveauet i kontrolholdet (70) er i over-kanten, men analyserne af 73 og 74, fremstillet på samme måde som kontrolholdet på nær en tilsætning af mineraler, viser et indhold som beregnet. Mineralindholdet i kontrolholdet og de to blandinger, hvori der blev tilsat Cu, Zn og Fe, ses af tabel 4a og 4b. Tabel 4a. Foderets analyserede mineralindhold (mg/kg tørstof) i kontrolholdet samt de hold hvor der blev tilsat mineraler mg/kg tørstof
70
73
74
Se
0.626
0.570
0.358
Zn
79.7
131.4
180.1
Mn
38.1
25.9
19.7
Cu
6.7
26.6
37.5
Fe
293.7
331.8
373.2
Mg
628
576
615
Ca
4661
3846
3903
P
4518
4029
4193
K
3735
3781
3596
Na
1616
1645
1647
S
6437
5996
6193
Tabel 4b. Foderets analyserede og beregnede indhold af Cu, Zn og Fe (mg/kg tørstof) i kontrolholdet samt de hold, hvor der blev tilsat mineraler
mg Zn/kg tø
analyse tilsat beregnet % afvigelse
70
79.7
73
131.4
50
129.7
1.3
74
180.1
100
179.7
0.2
mg Cu/kg tø analyse tilsat beregnet afvigelse 70
6.7
73
26.6
15
21.7
23.0
74
37.5
30
36.7
2.2
mg Fe/kg tø
analyse tilsat beregnet afvigelse
70
293.7
73
331.8
50
343.7
-3.5
74
373.2
100
393.7
-5.2
Grundfoderet var fremstillet ud fra de samme råvarer, så de øvrige analyserede mineraler burde være ens (tabel 4a). Dette er ikke tilfældet for Se, Mn, Ca og P, disse varierer en del mellem holdene. Årsagen til dette kendes ikke. Foderets analyserede indhold af de tilsatte mineraler Cu, Zn og Fe sammenholdt med de beregnede indhold (tabel 4b) viser en god overensstemmelse, på nær i hold 73, hvor der blev analyseret en del mere Cu end det beregnede indhold. Årsagen til dette kendes ikke på nuværende tidspunkt.
Tabel 5. Hanhvalpevægte gennem vækstperioden Vægt 15. aug, g 1811 (203) 1810 (181) 1811 (183) 1815 (163) 1818 (166) 1867 (160) 1866 (164)
Vægt 15. sep, g 2395 (269) 2402 (259) 2422 (270) 2409 (262) 2450 (228) 2638 (254) 2638 (257)
Vægt v. pelsn., g ¤ 2757 (333) 2760 (317) 2820 (344) 2779 (285) 2843 (286) 3171 (349) 3179 (355)
Hold Antal 70 st K: 0,41 phe+tyr 141 71 st 0,47 phe+tyr 143 72 st 0,55 phe+tyr 137 73 st K+ Fe,Cu,Zn * 143 74 st K+ Fe,Cu,Zn # 141 40 w 0,41 phe+tyr 122 41 w 0,55 phe+tyr 122 * 50-15-50 ppm i tø; # 100-30-100 ppm i tø; ¤ der var forskel mellem 70-73-74: pelsvægt p=0,05 b-ab-a, tilvækst aug-sep p=0,01- b-b-a;
Hvalpevægte Vægten af hanhvalpene ses af tabel 5. Ved sammenligning af kontrolholdet og de to hold med stigende phe + tyr blev der ikke set nogen forskel i vægtresultaterne gennem hele perioden, der var dog en tendens til stigende vægt
Tilvækst aug-sep, g ¤ 580 (161) 591 (130) 612 (147) 594 (152) 632 (132) 769 (154) 772 (171)
Tilvækst sep pelsn., g 363 (250) 367 (185) 398 (238) 371 (177) 387 (211) 535 (197) 537 (216)
med øget phe + tyr. Det kunne passe med at indholdet i kontrolholdet er lidt under behovet til vækst. Ved sammenligning af kontrolholdet og de to hold med stigende mineralindhold, blev set en signifikant øget tilvækst fra 15. august til 15. september
Faglig Årsberetning 2009
61
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
ved det højeste mineralindhold, samt en signifikant større vægt ved pelsning ved stigende mineralindhold i foderet. Fe og Zn mangel kan påvirke tilvæksten (Tauson et al., 1992; Mejborn, 1986).Indholdet i kontrolfoderet var for Fe og Zn hhv 294 og 80 ppm i tørstof. Behov for Zn til hvalpe er sat til 60 ppm af tørstof (Tauson et al., 1992), dette er således overholdt. Fe behovet angives ifølge NRC (1982) til 20-90 ppm af tørstof, og ifølge Treuthardt (1992) til 300-400 ppm af tørstof, det er dog usikkert hvilken jernkilde han har anvendt. Kontrolholdet opfylder således behovet (ifølge Treuthardt (1992) er Fe dog i underkanten). De to wildmink hold med varieret phe + tyr var ens hele vækstperioden. Skind Der var ikke statistisk sikker forskel i skindlængden eller pelsegenskaberne mellem holdene (tabel 6). Ved sammenligning af kontrolholdet og de to hold med stigende phe + tyr blev der set en tendens (p=0,09) til at
skindene blev mørkere ved stigende indhold af phe + tyr. Dette kunne passe med at behovet til mørk farve først er overholdt i holdet med højest iblanding. Ved sammenligning af kontrolholdet og de to hold med stigende mineralindhold blev set en tendens (p=0,08) til en dårligere kvalitet ved det højeste mineralindhold. Der blev ikke set nogen effekt på skindfarven eller de øvrige parametre, skindene blev dog mørkere med stigende iblanding. En mangel på mineralerne Fe, Cu og Zn ville påvirke pelsens farve og kvalitet negativt. Det angivne behov til Fe og Zn er opfyldt i kontrolholdet (Tauson et al., 1992). Behovet for Cu er anslået til enten 4,56,0 ppm (Glem-Hansen, 1978, pers. medl.) eller 30-50 ppm af tørstof (Treuthardt, 1992). I kontrolholdet var Cu indholdet 6,65 ppm i tørstof, det ser således ud til at have været tilstrækkeligt. Skindegenskaberne i de to wildmink hold var ikke signifikant forskellige, der var dog en tendens til en lidt mørkere farve ved det højeste indhold af phe + tyr.
Tabel 6. Skindkvalitet og længde Hold Skindlængde, cm Kvalitet 70 K: 0,41 phe+tyr 86,8 (4,1) 6,7 (2,4) 71 0,47 phe+tyr 87,1 (3,7) 6,5 (2,3) 72 0,55 phe+tyr 87,3 (4,3) 6,6 (2,5) 73 K+ Fe,Cu,Zn * 87,0 (3,6) 6,8 (2,4) 74 K+ Fe,Cu,Zn # 87,4 (3,8) 6,0 (2,5) 40 0,41 phe+tyr 92,2 (4,2) 5,9 (2,3) 41 0,55 phe+tyr 91,9 (4,3) 6,2 (2,3) * 50-15-50 ppm i tø; # 100-30-100 ppm i tø;
Farve Renhed 2,86 (0,97) 3,06 (0,96) 3,10 (0,95) 2,94 (1,01) 3,09 (0,90) 3,0 (1,0) 3,3 (0,8) 3,2 (0,9) 3,2 (0,9)
Organer Tilsætning af mineraler til grundfoderet, havde ingen betydning for levervægten i procent af kropsvægten (tabel 7). Leverens fedtindhold ved pelsning hos normalt fodrede ikke fastede hvalpe er 8 – 10 % (Clausen & Sandbøl, 2007), i denne undersøgelse blev der fundet et højere leverfedtprocent ved det hold der fik det højeste mineraltilskud (tabel 7).
62
Metallic, % 9,0 10,5 9,7 11,9 12,9
Silket, % 21,8 17,2 15,3 18,7 11,4 11,9 13,8
Uld, % Flade Normale 7,5 75,2 14,9 76,1 9,7 71,8 14,2 65,7 13,6 72,0 21,2 74,6 17,2 75,0
Fyldige 17,3 9,0 18,6 20,2 14,4 4,2 7,8
Tabel 7. Levervægt, og leverfedtprocent hos hvalpe fodret indtil pelsning Hold
Antal Pelsningsvægt, g
70 K: 0,41 phe+tyr
73
74
p-værdi
K+Fe,Cu,Zn* K+Fe,Cu,Zn#
15 15 15 2829 2786 (250) 2918 (298) NS (313) 84,5 Levervægt, g (15,1) 89,5 (18,0) 93,0 (18,5) NS Lever % af 2,99 (0,39) kropsvægt 3,20 (0,47) 3,18 (0,51) NS 11,8 Lever fedt % (3,8) b 11,5 (3,5) b 15,1 (3,7) a 0,02 * 50-15-50 ppm i tø; # 100-30-100 ppm i tø; NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene, forskellige bogstaver angiver at der er signifikant forskel
Faglig Årsberetning 2009
Effekten af aminosyrer, samt chelateret jern, kobber og zink på pelsfarven hos mink. (Mustela vison)
Leverens mineralindhold blev analyseret (samleprøver, 3 analyser pr hold (af 5 levere pr analyse); tabel 8), og der blev ikke fundet forskel mellem holdene for de tilsatte mineraler. Der var dog tendens til et større indhold i de hold, hvor der var tilsat mineraler end i kontrolholdet, men på grund af meget store variationer mellem analyseværdierne var forskellen ikke signifikant. Aulerich et al. (1982) fandt stigende Cu indhold i leveren ved tilsætning af 200 ppm til foderet. For de ikke tilsatte mineraler var der stor variation mellem holdene, på trods af ens foder. Der var signifikant forskel på Mn indholdet i leveren mellem holdene, således at 73 havde det signifikant højeste indhold. Tabel 8. Leverens analyserede indhold af mineraler (mg/kg tørstof) i kontrolholdet samt de hold, hvor der blev tilsat mineraler (samleprøver, 3 analyser pr hold (af 5 levere pr analyse)) 70
73
74
Ca 98,7 (14,7)
91,7 (3,8)
83,2 (2,8)
NS
K
5460 (364)
5686 (379)
5037 (348)
NS
P
5770 (242)
5959 (336)
5279 (358)
NS (0,09)
Na 3229 (297)
3168 (179)
2804 (259)
NS
S
6988 (368)
3434 (375)
NS
Zn 81,7 (7,5)
100 (4,4)
107 (20,6)
NS
Cu 37,2 (8,3)
42,7 (2,8)
41,9 (12,2)
NS
Fe 685 (57)
737 (38)
758 (104)
NS
Mg 477 (33)
527 (40)
453 (37)
NS
6536 (407)
p-værdi
Mn 5,16 (0,23) b 6,12 (0,44) a 5,04 (0,54) b 0,04 Værdierne er i mg/kg tørstof. NS angiver at der ingen statistisk sikker forskel er. Forskellige bogstaver angiver, at der er statistisk sikker forskel mellem holdene.
Ligeledes var der forskel mellem foderets indhold af Mn, men her var det 70 der havde det højeste indhold (tabel 4a). Mn blev ikke tilsat og da foderet i alle holdene blev fremstillet ens, må forskellen bero på usikkerheder i forbindelse med analyserne af dette mineral. Se, Co og Mo var under detektionsgrænsen. Hvorvidt det høje mineralindholdet belaster leveren og øger fedtinfiltrationen vil blive undersøgt nærmere.
Dødelighed I holdene var der 2 – 4 hvalpe pr hold der døde med ekstremt forstørret fedtlever (på nær i 71 (ingen)), derudover døde der 1 – 2 hvalpe pr hold med blære/nyrebetændelse (tabel 9). Tabel 9. Frekvensen af døde han- og tævehvalpe
Hold 70 st 71 st 72 st 73 st 74 st 40 w 41 w
Behandling K: 0,41 phe+tyr 0,47 phe+tyr 0,55 phe+tyr K+ Fe,Cu,Zn * K+ Fe,Cu,Zn # 0,41 phe+tyr 0,55 phe+tyr
% døde hanner og tæver 2,1 1,4 2,6 2,1 1,1 0,8 0,4
* 50-15-50 ppm i tø; # 100-30-100 ppm i tø
Konklusion Der er en tendens til den laveste vægt ved lavest phe + tyr, og en tendens til den mørkeste farve ved det højeste indhold, både i standard og wildmink. Tilsætning af chelate mineralforbindelser i de her anvendte mængder, gav en lidt bedre tilvækst. Mineraltilsætningen havde ingen signifikant effekt på skindenes længde, kvalitet eller farve, men farven var dog mørkest ved den højeste iblanding, og der var en tendens (p=0,08) til en dårligere kvalitet ved det højeste mineralindhold. Leverens fedtindhold var højest ved den højeste tilsætning af mineraler, dog var leverens mineralindhold ikke påvirket signifikant af en øget tilsætning af Fe, Cu og Zn i de her anvendte mængder og former, men der var en tendens til et højere indhold. Referencer Aleurich, R.J., Ringer, R.K., Bleavins, M.R. & Napolitano, A., 1982. Effects of supplemental Copper o non growth, reproductive performance and kit survival of standard dark mink and the acute toxicity of copper to mink. Journal of animal science 55, 337-343. Anderson, P.A., Baker, D.H., Sherry, P.A. & Corbin, J.E., (1980). Histidine, phenylalanine-tyrosine and tryptophan
Faglig Årsberetning 2009
63
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
requirements for growth of the young kitten. J. Anim. Sci., 50, 479-483.
2002, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, 33-37.
Anderson, P.J.B., Rogers, Q.R. & Morris, J.G., (2002). Cats require more dietary phenylalanine or tyrosine for melanin deposition in hair than for maximal growth. J. Nutr., 132, 20372042.
Clausen, T.N., Sandbøl, P. & Hejlesen, C., (2004). Fedtegrever til mink i vækstperioden. Indflydelse på sundhed, tilvækst og pelskvalitet. I ”Samlet oversigt over fodringsforsøg i vækstperioden 2003, 10-13. (Intern rapport).
Brandt, A., 1983. Effect of dietary copper and zink on the haematology of male pastel mink kits. A pilot investigation. Scientifur, 7, 61-65.
Mejborn, H., 1986. Zinkomsætning hos mink. Ph. D.-thesis. Den Kgl. Veterinær- og Landbohøjskole, 128 pp.
Børsting, C.F. & Clausen, T.N., (1995). Fastlæggelse af normer for minkens protein- og aminosyreforsyning I vækstperioden. I: Forsøg gennemført i 1992. Faglig Årsberetning 1993/94, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og Rådgivningsvirksomhed A/S, 79-99. Børsting, C.F., Clausen, T.N., & Therkildsen, N., (1995). Fastlæggelse af normer for minkens protein- og aminosyreforsyning I vækstperioden. II: Forsøg gennemført i 1993. Faglig Årsberetning 1993/94, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og Rådgivningsvirksomhed A/S, 100-120. Børsting, C.F. & Clausen, T.N., (1996). Requirements of essential amino acids for mink in the growing-furring period. Proc. VI Int. Sci. Cong. Fur Anim. Prod. (Eds. A. Frindt and M. Brzozowski), Warsaw, Poland. Anim. Prod. Rev., Appl. Sci. Rep., 28, 15-24. Clausen, T. N. & Sandbøl, P., 2007. Sammenhæng mellem leverfedtprocent og ketonstoffer (β – hydroxybutyrate) i blodet. Faglig Årsberetning 2006, 147150. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark Clausen, T.N., Sandbøl, P. & Hejlesen, C., (2003). Kødbenmel til mink i vækstperioden. Faglig Årsberetning
64
Morris, J.G., Yu, S. & Rogers, Q.R., (2002). Red hair in black cats is reversed by addition of tyrosine to the diet. J. Nutr., 132, 1646S-1648S. NRC, National Research Council (1986). Nutrient requirements of cats. National Academy Press, Washingthon, DC. NRC, 1982. Nutrient requirements of mink and foxes. National academy press, Washington, D.C., 72pp. Santin, I., (2004). Personlig kommunikation. Tauson, A.H., Olaffson, B.L., Elnif, J., Treuthardt, J. & Ahlstrøm, Ø., 1992. Minkens och Rävens mineralförsörjning. NJF rapport nr. 79. Kbh 1992. Treuthardt, J., 1992. Hematology, antioxidative trace elements, the related enzyme activities and vitamin E in growing mink on normal and anemiogenic fish feeding. Acta Academiae Aboensis, Serie B, Mathematica et physica, vol 52 (4). Diss. Åbo Akademi, Åbo, Finland, 138pp. Williams, J.M., Morris, J.G. & Rogers, Q.R., (1987). Phenylalanine require-
Faglig Årsberetning 2009
Effekten af aminosyrer, samt chelateret jern, kobber og zink pĂĽ pelsfarven hos mink. (Mustela vison)
ment of kittens and the sparing effect of tyrosine. J. Nutr. 117, 1102-1107.
Yu, S., Rogers, Q.R. & Morris, J.G., (2001). Effect of low levels of dietary tyrosine on the hair colour of cats. J. Small Anim. Pract., 42, 176-180.
Faglig Ă&#x2026;rsberetning 2009
65
66
Faglig Ă&#x2026;rsberetning 2009
Tilsyneladende fordøjelighed af Glycerol hos mink Mette Schulin-Zeuthen & Peter Sandbøl Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenterm Holstebro Danmark Sammendrag En mørk og lys Glycerol blev sammenlignet i et fordøjelighedsforsøg. Den lyse Glycerol indeholdte en anelse mere råprotein, råfedt, råaske og salt (procent af tørstof) og derfor en anelse mindre beregnet råkulhydrat end den mørke Glycerol. Der kunne observeres en forskel i mellem kulhydratindholdet i produktprøven og genfindingen af kulhydrat i foderblandingerne. Den tilsyneladende fordøjelighed af kulhydrater i begge prøver af Glycerol var 93 %. Schulin-Zeuthen, M & Sandbøl, P. 2010. Tilsyneladende fordøjelighed af Glycerol hos mink. Faglig Årsberetning 2009, 67-70. Pelsdyrerhverts Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Abstract A dark and light sample of Glycerol was compared in a digestibility trial. The light Glycerol contained slightly more crude protein, fat, ash and salt (percentage of dry matter) and thus slightly less calculated crude carbohydrates than the dark sample. A discrepancy hydrates in the diets. The apparent digestibility of carborhydrates in both samples of Glycerol was 93 %. Schulin-Zeuthen, M & Sandbøl, P. 2010. Apparent digestibility of Glycerol in mink. Annual Report 2009, 67-70. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: Glycerol, digestibility, crude carbohydrate
Indledning Glycerol, som er et biprodukt fra produktionen af biodiesel, er interessant som et potentielt fodermiddel til husdyr. Produktet har allerede været undersøgt med positive resultater hos grise (Lammers et al., 2008b), fjerkræ (Dozier et al., 2008; Lammers et al., 2008a) og malkekøer (Nielsen & Kristensen, 2004). Kemisk betragtet er Glycerol en alkohol og anses bedst at passe ind i foderets kulhydratfraktion. Glycerols farve kan svinge fra at være næsten klar over til mørkebrun, hvilket afhænger af koncentrationen af pigmenter og andre forbildelser med oprindelse i det anvendte råmateriale til produktionen af biodiesel (Kerr et al., 2007). Yderligere detaljer vedrørende Glycerol kan ses i Clausen & Sandbøl, 2009). Formålet med forsøgene var at måle den tilsyneladende fordøjelighed af råkulhydrat i henholdsvis en lys og en mørk Grycerol.
Materialer og metoder De anvendte prøver af råvaren blev produceret og leveret af Elbe Fetthandel GmbH. Forsøgene blev gennemført som regression designs, bestående af 4 grupper med 3 dyr i hver gruppe. Der blev anvendt voksne hanmink af farvetypen Brown/Glow. Minkene var opstaldet i balencebure (mod. Efter (Jørgensen & Glem-Hansen, 1973). Foder 1 til 4 indeholdt stigensen mængder af Glycerol (Tabel 1). Tabel 1. Sammensætning af foderblanding 1 og 4 (% før vandtilsætning) Fodermiddel
Foder 1
Foder 4, mørk
Foder lys
Glycerol
0,0
10,2
10,2
Torskefilet
80,3
79,7
79,7
Soyaolie
8,4
8,4
8,4
Majsstivelse
8,5
0,0
0,0
Druesukker
1,0
0,0
0,0
Cellulose
1,0
1,0
1,0
Vitaminblanding
0,4
0,4
0,4
Mineralblanding
0,5
0,5
0,5
Faglig Årsberetning 2009
4,
67
Schulin-Zeuthen, M. & Sandbøl, P.
Foderblandingerne er sammensat således at Glycerol udgør fra 0 % (foder 1) til 100 % (foder 4) af foderblandingens samlede råkulhydratfraktion korrigeret for den fraktion som stammer fra cellulose. Foderblandingerne blev justeret til samme konsistens ved tilsætning af vand. Forsøgene bestod af 7 dages forperiode og 4 dages fækal opsamlingsperiode. Foderrationen var 300 kcal omsættelig energi (OE) pr dag i de første seks dage og 250 kcal OE de sidste fem dage. Råvarer, foder og fæses blev analyseret hos Dansk Pelsdyrfoder a.m.b.a., Analyselaboratoriet. Minkene blev fodret 1 gang dagligt. I opsamlingsperiode blev foderindtag registreret dagligt og eventuelle foder rester blev samlet med henblik på analyse af tørstofindhold. Fæses blev indsamlet dagligt og samlet for hver mink inden den kemiske analyse. Råkulhydrat er beregnet som tørstof – (råprotein + råfedt + råaske). Fordøjeligheden af råkulhydrat beregnes som følgende Tilsyneladende fordøjelighed, % = 100 * (CHindtag - CHfæces) / CHindtag
beregnes som den resterende fraktion af tørstof, er indholdet af råkulhydrat højere i den mørke end den lyse Glycerol. Den mængde vand som blev anvendt til at justere foderblandingernes konsistens med faldt signifikant med stigende mængde af Glycerol i foderet. I foderblanding 1 til 4 med mørk Glycerol er vandindholdet henholdsvis 30 %, 25 %,18 % og 13 %. I foderblanding 1 til 4 med lys Glycerol er vandindholdet henholdsvis 30 %, 25 %, 19 % og 12 %. Et dyr i hold 1 indgik ikke i dataanalysen som følge af et utilstrækkeligt foderindtag. Foderindtaget hos de resterende dyr var tilfredsstillende og gødningens konsistens var normal. Den tilsyneladende fordøjelighed af råkulhydrat var 93 ± 0,4 % og 93 ± 0,9 % i henholdsvis mørk og lys Glycerol (Tabel 2). Den højere usikkerhed (SEM) fundet i lys Glycerol er forårsaget af en højere variation mellem dyrene indenfor grupperne. Tabel 2. Kemisk sammensætning og målte fordøjeligheder (Middelværdi ± SEM) i to prøver af Glycerol. Sammensætning Mørk Lys Mørk Tørstof, %
hvor CH er råkulhydrat i gram.
Fordøjelighed, Fordøjelighed,
CHindtag og CHfæces er korrigeret for kulhydrater fra cellulose, som antages at være ufordøjelige. De korrigerede fordøjeligheder hos den enkelte mink plottes dernæst mod andelen af foderets ikke-cellulose kulhydrat som stammer fra Glycerol. Fordøjeligheden af kulhydrat i Glycerol findes ved ekstrapolation af den lineære regression til 100 % af foderets kulhydrater kommer fra Glycerol. Resultater og diskussion På tørstof-basis er indholdet af råprotein, råfedt og råaske (tabel 2) en anelse højere i den lyse Glycerolprøve. Som følge af at indholdet af råkulhydrat
68
Lys
84,7 85,8
% of tørstof Råprotein (N*6.25)
% ± SEM 0,0 0,1
Råfedt
0,2 0,4
Råaske
2,7 4,1
Råkulhydrat, beregnet NaCl
% ± SEM
97,1 95,5
93 ± 0,4
93 ± 0,9
5,1 6,3
Fordøjeligheden af kulhydrat er korrigeret for foderblandingens indhold af cellulose, som antages at være 100 % ufordøjeligt. Derved skulle foder 4 indeholde 100 % kulhydrater fra Glycerol efter justeringen for cellulose. Disse fraktioner var 104 % i mørk og 114 % i lys Glycerol, hvilket indikerer at enten er kulhydrat-koncentrationen i Glycerol overvurderet eller også er nogle af
Faglig Årsberetning 2009
Tilsynelandende fordøjelighed af Glycerol hos mink
kulhydraterne i foderblandingerne forsvundet. Da en foderblanding er mere kompleks end en råvare, er det mere sandsynligt at den kemiske analyse af foderblandingerne som indeholder Glycerol undervurderer koncentrationen af kulhydrater i foderet. Især to muligheder gør sig gældende: 1) under den kemiske analyse kunne dele af Glycerol blive ekstraheret med fedt. Soyaolie er den eneste fedtkilde i foderblandingerne og før vandtilsætning er nøjagtig den samme mængde olie tilsat alle blandingerne. Men den kemiske analyse af blandingerne viser på våd-basis at indholdet af råfedt stiger fra foder 1 til 4. Hvis indholdet af råfedt justeres således at fedtindholdet i foder 2-4 tvinges til at være det samme som i foder 1 medfører det at fordøjelighederne af kulhydrat stiger til 95 ± 0,5 % i mørk og 94 ± 1,1 % i lys Glycerol. Imidlertid tyder tyder det dog på at denne justering er for kraftig idet indholdet af råfedt på tørstof-basis var ens mellem foderblandingerne med mørk Glycerol og varierede 1 %-enhed mellem foderblandingerne med lys Glycerol. 2) Det er kendt at Glycerol er hygroskopisk (i.e. optager fugt fra luften), hvilket f.eks. udnyttes i håndlotions. Ved at optage fugt fra luften vil foderets tørstofindhold falde, hvilket vil resultere i at foderets beregnede indhold af kulhydrat vil falde. 20 g Glycerol i en åben skål vil efter 1 time resulterer i at vægten er øget med 1 % og efter 4 timer 1,5 %. En fugtgivende effekt på foderet skal dog justeres for en modsat rettet fordampning af vand, hvilket ikke blev undersøgt nærmere i dette forsøg. Det viste sig som et sidste alternativ at en tvungen andel af beregnet kulhydrat i foderet på 100 % resulterede i en uforandret kulhydrat fordøjelighed i Glycerol på 93 %.
En beregning af omsættelig energi i de to prøver af Glycerol viste at mørk Glycerol havde 3793 kcal OE / kg og lys Glycerol havde 3730 kcal OE / kg. Dette er i overensstemmelse med 3331 OE fundet hos kyllinger (Dozier et al., 2008), 3772 fordøjelig energi hos grise (Lammers et al., 2007) og 3805 OE hos æglæggere (Lammers et al., 2008a). Konklusion Det konkluderes at fordøjeligheden af kulhydrat i Glycerol er 93 %. Foderblandingernes konsistens påvirkes ved tilsætning af Glycerol og der skal tilsættes væsentligt mindre vand i disse blandinger. Der ses en afvigelse i indholdet af beregnede råkulhydrater fundet i Glycerol og mængden som findes i foderblandingerne. Referencer Clausen, T.N. & Sandbøl, P., 2010. Glycerol in mink feed in the growing and furring periods. Faglig Årsberetning, 2009: 45-50. Dozier, W.A., Kerr, B.J., Corzo, A., Kidd, M.T., Weber, T.E. & Bregendahl, K., 2008. Apparent metabolizable energy of glycerin for broiler chickens. Poultry Science, 87: 317-322. Jørgensen, G. & Glem-Hansen, N., 1973. A cage designed for metabolism and nitrogen balance trials with mink. Acta Agricultura Scandinavica, 23: 3-4. Kerr, B.J., Honeyman, M., Lammers, P. & Hoyer, S., 2007. Feeding Bioenergy Coproducts to Swine. Crude Glycerol. 1-2. Lammers, P., Honeyman, M., Bregendahl, K., Kerr, B.J., Weber, T.E., Dozier, W.A. & Kidd, M.T., 2007. Energy value of crude glycerol fed to pigs. Iowa State University Animal Industry Report, 1-3.
Faglig Årsberetning 2009
69
Schulin-Zeuthen, M. & Sandbøl, P.
Lammers, P., Kerr, B.J., Honeyman, M., Stalder, K., Dozier, W.A., Weber, T.E., Kidd, M.T. & Bregendahl, K., 2008a. Nitrogen-corrected apparent metabolizable energy value of crude glycerol for laying hens 1. Poultry Science, 87: 104-107.
and metabolizable energy of crude glycerol for growing pigs. Journal of Animal Science, 86: 602-608. Nielsen, N.I. & Kristensen, N.B., 2004. Glycerol til malkekøer en discountudgave af propylenglycol? Kvæginfo, nr.: 1420: 1-3.
Lammers, P., Kerr, B.J., Weber, T.E., Dozier, W.A., Kidd, M.T., Bregendahl, K. & Honeyman, M., 2008b. Digestible
70
Faglig Årsberetning 2009
Tilsyneladende og sand fordøjelighed af aminosyrer hos minkhvalpe i den tidlige vækstperiode, ved fodring med forskelligt protein og kulhydrat niveau. Anne Louise Frydendahl Hellwing, Niels Enggaard Hansen og Anne-Helene Tauson Københavns Universitet, Det Biovidenskabelige Fakultet for Fødevarer, Veterinærmedicin og Naturressourcer, Institut for Basal Husdyr- og Veterinærvidenskab, Grønnegårdsvej 3, 1870 Frederiksberg C. Sammendrag Toogtredive par af hanhvalpe blev fordelt på fire forskellige foderblandinger fire uger efter fødslen, og de blev fravænnet 5-6 uger efter fødslen. Den tilsyneladende og den sande fordøjelighed af næringsstofferne blev bestemt, da hvalpene var 6, 9 og 12 uger gamle. Diæterne indeholdt enten 30 % eller 45 % af den omsættelige energi (OE) fra protein, og 15 % eller 25 % af OE fra kulhydrat, benævnt HPHK (høj protein, høj kulhydrat; 45:25), LPHK (lav protein, høj kulhydrat; 30:25), HPLK (45:15) og LPLK (30:15). Den tilsyneladende fordøjelighed af kvælstof og aminosyrer var signifikant lavere på begge LP blandinger end på HP blandingerne, og den sande fordøjelighed for foderblanding LPHK var den samme som for HP blandingerne med undtagelse af leucin, valin, aspargin og serin, som var lavere. Den sande fordøjelighed for LPLK var signifikant lavere end de andre foderblandinger med undtagelse af histidin og glycin. Både den tilsyneladende og den sande fordøjelighed af kvælstof, fedt, energi og aminosyrer faldt med alderen. Hellwing, A. L. F., Hansen, N. E. og Tauson, A.-H. 2010. Tilsyneladende og sand fordøjelighed af aminosyrer hos minkhvalpe i den tidlige vækstperiode, ved fodring med forskelligt protein og kulhydrat niveau. Faglig Årsberetning 2009. 71-78. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og Forsknings Center, Holstebro, Danmark. Abstract Thirty-two pairs of male mink kits were allocated to four different diets four weeks post partum. The kits were weaned when they were 5-6 weeks old. The apparent and true digestibilities of the diets were calculated from quantitative collection of faeces when the kits were 6, 9 and 12 weeks old. The diets contained either 30% or 45% of the metabolisable energy (ME) from protein and 15% or 25% of ME from carbohydrate. The diet codes were HPHC (high protein, high carbohydrate; 45:25), LPHC (low protein, high carbohydrate; 30:25), HPLC (45:15) and LPLC (30:15). The apparent digestibility of nitrogen and amino acids was significantly lower on both LP than on the HP diets. The true digestibility on the LPHC diet was the same as on the HP diets except for methionine, leucine and valine, which were lower. The true digestibility of the LPLC was significantly lower than that of the other diets except for histidine. Both apparent and true digestibility of nitrogen, fat, energy, and amino acids decreased with age. Hellwing, A. L. F., Hansen, N. E. og Tauson, A.-H. 2010. Apparent and true digestibility of nitrogen, fat, energy, and amino acids. Annual Report 2009. 71-78. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark.
Indledning Ved undersøgelse af foderets fordøjelighed kan både den tilsyneladende og den sande fordøjelighed beregnes. Den tilsyneladende fordøjelighed viser, hvor stor en del af næringsstofferne i foderet, der har været til rådighed for dyrets produktion f.eks. vækst. En lav fordøjelighed kan sammen med et lavt indhold af et givet næringsstof medføre, at dyret har færre næringsstoffer
til rådighed til f.eks. vækst. Undersøgelser har vist, at proteinindholdet kan reduceres til 30 % af den omsættelige energi (OE) fra protein uden nogen negativ påvirkning af kvælstofaflejringen (Hellwing et al., 2008) og væksten (Skrede, 1978; Damgaard et al., 1998). Den sande fordøjelighed fortæller hvor stor en del af foderet, der er blevet
Faglig Årsberetning 2009
71
Hellwing, A. L. F., Hansen, N. E. og Tauson, A-H.
fordøjet, når de endogene tab er fratrukket. Det endogne tab af næringsstoffer, udgøres hovedsageligt af rester af fordøjelsesenzymer og afstødte tarmceller, som begge indeholder aminosyrer, der har været optaget i organismen. Det endogne tab er i betragtelig grad relateret til tørstofindtaget (Skrede, 1979). Dette indebærer, at foderblandinger med et lavere indhold af protein godt kan have en sand fordøjelighed af foderprotein på niveau med foderblanding med et højere indhold af protein.
alder. Tidligere undersøgelser har vist, at den tilsyneladende fordøjelighed af protein enten har været den samme eller er steget, når hvalpene var mellem 7 og 10 uger gamle (Elnif and Hansen, 1987; Hejlesen, 2002). Formålet med denne undersøgelse var, at bestemme den tilsyneladende fordøjelighed af næringsstofferne og den sande fordøjelighed af kvælstof og aminosyrer hos minkhvalpe fodret med forskellige niveauer af protein og kulhydrat i foderet i den tidlige vækstperiode.
Sammenligning af den tilsyneladende og den sande fordøjelighed kan være med til beskrive om ændringen i fordøjeligheden skyldes ændringer i foderets fordøjelighed eller ændringer i udskillelsen af endogent stof. Det endogne tab af kvælstof og aminosyrer kan bestemmes ved fodring med kvælstoffrit foder eller ved hjælp af regressionsforsøg (Skrede 1979).
Materiale og metode Toogtredive par hanhvalpe af wildtypen blev fravænnet, da de var 5-6 uger gamle. Hvalpe og tæver blev foderet med fire forskellige diæter, fra hvalpene var fire uger gamle. To af foderblandingerne havde et proteinindhold på 30 % af OE fra protein (LP) og to foderblandinger indeholdt 45 % af OE fra protein (HP). På hvert proteinniveau var der en blanding, der indeholdt 15 % (LK) eller 25 % (HK) af OE fra kulhydrat. Alle fire foderblandinger består af følgende fodermidler i forskellige mængder: fiskeaffald, industrifisk, fjerkræaffald, fiskemel, hæmoglobinmel, kartoffel protein, varmebehandlet byg og hvede, svinefedt (undtagen HPHK), sojaolie (undtagen HPHK), mineraler og vitaminer. Det præcise indhold af de enkelte fodermidler er angivet i Hellwing et al. (2009). Den analyserede sammensætning af foderet samt indholdet af aminosyrer er angivet i tabel 1.
Fordøjeligheden af foderet er vigtig at kende, idet foder med en høj fordøjelighed vil medføre et mindre foderbehov i kg og en lavere udskillelse af næringsstoffer til miljøet i forhold til foder med en lav fordøjelighed. En meget lav fordøjelighed kan medføre, at dyret ikke kan optage foder nok til dække behovet for næringsstoffer i laktationsperioden eller i den intensive vækstperiode modsat kan en lav fordøjelighed være en fordel for dyret i de perioder af året, hvor energibehovet er lavt, og hvor der ønskes en restriktiv energitildeling. Fordøjelighed af næringsstoffer påvirkes bl.a. af fodermidlerne, evt. forarbejdning af fodermidlerne og af dyrenes
72
Faglig Årsberetning 2009
Tilsyneladende og sand fordøjelighed af aminosyrer hos minkhvalpe i den tidlige vækstperiode
Tabel 1 Kemisk sammensætning af foderet og indhold af aminosyrer (Analyseret).
Tørstof (TS) [g/kg] Råprotein (N*6.25) [g/kg] Fedt [g/kg] Brutto energi[MJ/kg TS] Omsættelig energi (OE) 1 [MJ/kg TS] Fordeling af OE: Protein Fedt Kulhydrater
HPHK
HPLK
LPHK
LPLK
363
378
396
418
178 45
198 66
148 85
160 116
21.8
23.0
23.3
24.7
16.4
18.3
18.6
17.2
45 29 26
45 40 15
30 45 25
32 51 17
Indhold af aminosyrer [g/kg] Methionin 3.7 Cystein 2.3 Lysin 10.3 Threonin 7.2 Tryptophan 1.9 Histidin 5.0 Phenylalanin 8.8 Tyrosin 6.2 Leucin 16.2 Isoleucin 6.8 Valin 11.0 Arginin 9.1 Glycin 10.2 Alanin 10.4 Serin 9.0 Asparagin 14.9 Glutamin 24.2
4.4 2.8 12.1 8.5 2.2 5.9 10.1 7.2 18.3 8.0 12.9 10.7 12.0 12.2 10.6 17.4 26.8
3.1 2.3 8.9 6.2 1.7 3.9 7.1 5.1 12.0 6.3 9.0 8.0 8.5 8.0 7.5 12.5 20.7
3.5 2.4 10.8 7.2 1.8 4.6 8.2 5.8 13.9 7.1 10.7 9.4 10.4 9.6 8.6 14.9 22.2
Prolin
12.1
8.8
9.4
rørt sammen, og der blev udtaget prøver til analyse af tørstof og kvælstof. Den resterende del af fæces blev frysetørret og formalet. Det frysetørrede materiale blev analyseret for tørstof, fedt og energi. Fra foderet blev der udtaget prøver til analyse for tørstof, kvælstof, fedt og energi. Den tilsyneladende fordøjelighed blev beregnet på følgende måde: Fordøjelighed (FK) [%] =
10.6
HP: højt protein, LP: lav protein, HK: højt kulhydrat og LK: Lav kulhydrat 1 Værdierne er beregnet ud fra balance og stofskifteforsøg med de samme dyr, se Hellwing et al. (2008).
Fordøjeligheden blev målt, da hvalpene var ca. 6 (periode 1), 9 (periode 2) og 12 (periode 3) uger gamle. I periode 1 blev målingerne gennemført med to hvalpe i balanceburene, medens hvalpene gik enkeltvis i periode 2 og 3 blev. Hver opsamlingsperiode strakte sig over fire dage. Foderindtag og total udskillelse af fæces blev målt. På den sidste dag i forsøgsperioden blev fæces
N i foder - N i gødning _____________________________________ * 100 N i foder
Den endogene udskillelse af kvælstof og aminosyre blev beregnet ud fra de konstanter som Skede (1979) angav for den direkte udskillelse. Den sande fordøjelighed blev beregnet på følgende måde Sand FK [%] = N i foder - (N i gødning-endogent N i gødning) _____________________________________ * 100 N i foder
Den statiske analyse blev lavet i PROC GLM i SAS (SAS institute inc., 1990) med foder, periode og blok som hovedeffekter og foder * periode som vekselvirkning. Variationen er angivet som standard afvigelsen for gennemsnittet. Gennemsnittene for foder og periode er sammenlignet med en t-test (PDIFF i SAS), hvis der var effekt af model. Værdierne blev antaget for være signifikante når p<0.05. Resultater og diskussion Indholdet af OE i foderblanding LPLK var beregnet til at være 20.2 MJ/kg TS, men ud fra forsøgsresultaterne har indholdet kun været 17.2 MJ/kg TS (tabel 1). Denne reduktion i OE skyldes en signifikant reduktion af fordøjeligheden på foderblanding LPLK (tabel 2).
Faglig Årsberetning 2009
73
Hellwing, A. L. F., Hansen, N. E. og Tauson, A-H.
Tabel 2, Effekt af foder på indtag af tørstof i relation til metabolisk legemsvægt, tilsyneladende fordøjelighed af tørstof, kvælstof, fedt, energi og aminosyrer.
HPLK 24 63.7ab
LPHK 24 65.7a
HPHK 24 68.9a
LPLK 23 59.2b
SEM
P-value
N Indtag af tørstof [g/day/kg0.75]
2.0
0.01
Kvælstof [%] Fedt [%] Energi [%]
79.6a 94.9a 82.7a
77.8b 94.1ab 81.8a
79.0ab 91.2b 79.5b
74.5c 76.9c 71.3c
0.5 1.2 0.8
<0.001 <0.001 <0.001
Lysin [%] Methionin [%] Threonin [%] Tryptophan [%] Histidin [%] Isoleucin [%] Leucin [%] Arginin [%] Phenylalanin [%] Valin [%] Cystein [%] Tyrosin [%] Asparagin [%] Serin [%] Glutamin [%] Glycin [%] Alanin [%] Prolin [%]
88.0a 90.1a 81.0a 79.4a 88.0a 85.3a 89.2a 90.1a 88.8a 86.6a 61.6a 85.2a 78.6a 84.4a 86.0a 81.1 87.5a 83.9a
86.6b 88.3b 77.8b 77.5b 85.0b 84.2b 86.7b 88.6b 86.9b 84.1b 62.1a 83.9a 74.6b 81.1b 85.9a 79.7 84.7b 82.4b
87.7a 89.5a 80.3a 78.4ab 87.6a 84.7ab 89.1a 89.9a 88.3a 86.1a 64.1a 84.0a 79.3a 84.3a 86.3a 80.8 86.7a 83.9a
86.1b 86.6c 74.8b 74.2c 85.5b 82.8c 85.7c 87.7c 86.3b 83.1c 53.7b 79.8b 73.8b 78.7c 83.4b 79.8 84.2b 79.0c
0.2 0.2 0.4 0.5 0.3 0.3 0.2 0.3 0.3 0.3 1.0 0.5 0.4 0.4 0.3 0.4 0.3 0.4
<0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 0.05 <0.001 <0.001
HP: Høj protein, LP: Lav protein, HK: Høj kulhydrat og LK: Lav kulhydrat Værdier i den samme række som har forskellig bogstavbetegnelse er signifikant forskellige
Minkene vejede i gennemsnit 1016 g, 995 g, 939 g og 752 g på foderblanding HPLK, LPHK, HPHK og LPLK. Den daglige tilvækst på foderblanding HPLK, LPHK og HPHK var næsten ens (22 g/dag til 27 g/dag). Selvom hvalpene på blanding HPHK havde samme daglige tilvækst i balanceperioderne, var deres samlede vægt signifikant lavere, når de var 12 uger gamle (Hellwing et al., 2009). Dette kan skyldes, det lave indhold af OE i foderblandingen (Tauson, 1988). Tilvæksten på blanding LPLK var 14 g/dag, hvilket er signifikant lavere end på de andre foderblandinger. Indtag af tørstof var signifikant lavere på foderblanding LPLK end på blanding LPHK og HPHK (tabel 2), mens indtaget af bruttoenergi var det samme på alle foderblandinger, hvilket skyldes
74
det høje indhold af bruttoenergi på foderblanding LPLK. Den reducerede fordøjelighed på foderblanding LPLK medførte et lavere indtag af OE, hvilket kan forklare den dårlige tilvækst. Hvalpene vejede henholdsvis 471 g, 929 g og 1376 g i gennemsnit i periode 1, 2 og 3. Tilvæksten var ca. 35 g/dag i de to første perioder, mens den faldt til ca. det halve i periode 3. Tilvæksten på foderbladning LPLK er lavere end de øvrige blandinger i alle 3 perioder. For denne blanding ses der allerede mellem periode 1 og 2 en halvering af tilvæksten, hvilket stemmer overens med at fedtfordøjeligheden bliver kraftig reduceret fra periode 1 til periode 2. Indtaget af tørstof i relation til metabolisk kropsstørrelse var stort set ens i alle perioder (tabel 4).
Faglig Årsberetning 2009
Tilsyneladende og sand fordøjelighed af aminosyrer hos minkhvalpe i den tidlige vækstperiode
Tabel 4 Effekt af periode på indtag af kvælstof I relation til metabolisk kropsvægt, tilsyneladende fordøjelighed af tørstof, fedt og energi og sand fordøjelighed af kvælstof og aminosyrer. Tilsyneladende 3 SEM 32
N Indtag af tørstof 0.75 [g/day/kg ]
1 32
2 31
64.4
67.3
Kvælstof [%] Fedt [%] Energi [%]
78.9 A 91.9 A 81.6
A
77.7 B 88.3 B 78.3
B
76.6 B 87.6 B 76.7
A
B
C
61.4 B
P-values
1.8
0.07
0.4 1.1 0.7
<0.001 0.01 <0.001
1 32
82.8
SAND 3 32
2 31
A
A
81.6
P-values
B
0.4
<0.001
C
0.2 0.2 0.4 0.5 0.3 0.3 0.2 0.2 0.3 0.2 0.9 0.4 0.4 0.3 0.4 0.3 0.2 0.3
<0.001 <0.001 <0.001 <0.001 0.008 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001
B
80.6
B
88.3 B 90.1 C 86.4 C 79.2 B 90.7 B 86.3 B 89.3 C 90.6 C 88.1 C 86.4 C 66.1 C 83.6 C 78.5 C 85.4 C 81.1 C 86.9 B 88.2 C 84.4
Lysin [%] 88.0 87.3 86.0 0.2 <0.001 90.3 89.6 A B C A A Methionin [%] 89.3 88.9 87.7 0.2 <0.001 91.8 91.3 A B C A B Threonin [%] 80.5 78.0 77.0 0.4 <0.001 89.9 87.4 A B C A B Tryptophan [%] 79.6 78.0 74.6 0.5 <0.001 84.0 82.5 A A B AB A Histidin [%] 86.5 87.2 85.9 0.3 0.008 91.3 92.0 A A B A A Isoleucin [%] 85.1 84.3 83.4 0.3 <0.001 87.9 87.3 A A B A A Leucin [%] 88.3 87.8 86.9 0.2 <0.001 90.8 90.3 A B C A B Arginine [%] 90.1 88.9 88.2 0.2 <0.001 92.4 91.3 A B C A B Phenylalanin [%] 89.1 88.0 85.6 0.3 <0.001 91.5 90.4 A B C A B Valin [%] 86.3 85.2 83.4 0.2 <0.001 89.3 88.2 A B C A B Cystein [%] 64.2 60.3 56.6 0.9 <0.001 73.6 69.7 A B C A B Tyrosin [%] 86.4 82.6 80.6 0.4 <0.001 89.4 85.7 A B C A B Asparagin [%] 78.4 76.4 75.0 0.4 <0.001 81.9 79.9 A B C A B Serin [%] 83.7 81.8 80.8 0.3 <0.001 88.2 86.4 A B C A B Glutamin [%] 86.6 85.5 84.1 0.3 <0.001 85.2 83.8 A B C A B Glycin [%] 82.2 80.8 78.0 0.4 <0.001 89.3 88.3 A A B A A Alanin [%] 86.8 86.1 84.5 0.2 <0.001 90.5 89.8 A B C A B Prolin [%] 84.1 82.3 80.5 0.3 <0.001 87.9 86.1 Værdier i den samme række som har forskellig bogstavbetegnelse er signifikant forskellig
Det analyserede indhold af aminosyrer var det samme, eller lidt højere end det planlagte. Alle foderblandinger opfyldte aminosyrernormen i juni og juli (Sandbøl og Lassén, 2006) med undtagelse af LPHK i juni og for alle aminosyrer på LPHK i juli med undtagelse af cystein, der var marginalt lavere end normen. Den tilsyneladende fordøjelighed af kvælstof og aminosyrer var signifikant lavere på LP foderblandingerne end HP
SEM
foderblandinger (tabel 2). Hvis der korrigeres for det endogene tab havde foderblanding LPHK samme sande fordøjelighed af kvælstof og aminosyrer som HP foderblandinger med undtagelse af methionin, leucin, valin, aspargin og serin, som var lavere. Foderblanding LPLK havde imidlertid en signifikant lavere sand fordøjelighed af kvælstof og aminosyrer end HP foderblandinger med undtagelse af histidin og glycin (tabel 3).
Faglig Årsberetning 2009
75
Hellwing, A. L. F., Hansen, N. E. og Tauson, A-H.
Tabel 3 Effekt af diæt på den sande fordøjelighed af kvælstof og aminosyrer
HPLK N
LPHK
HPHK
LPLK
SEM
P-value
78.9b
0.5
<0.001
89.8a
88.5b
0.2
<0.001
ab
89.3c
0.2
<0.001
a
b
24
24
24
23
Kvælstof [%]
82.9a
82.4a
82.6a
Lysine [%]
89.9a
89.4a
a
b
Methionine [%]
92.1
a
91.2
a
91.7
Threonine [%]
88.8
88.9
89.1
84.8
0.4
<0.001
Tryptophan [%] Histidine [%]
82.5a 91.7
83.2a 91.0
82.7a 91.9
79.2b 90.8
0.5 0.3
<0.001 0.05
Isoleucine [%]
87.8a
87.6a
87.5a
85.9b
0.3
<0.001
a
b
a
c
Leucine [%]
91.1
89.7
91.1
88.5
0.2
<0.001
Arginine [%]
92.1a
91.4a
92.1a
90.1b
0.3
<0.001
a
ab
a
b
Phenylalanine [%]
90.8
89.9
90.5
89.0
0.3
0.003
Valine [%]
89.0a
87.8b
88.8a
86.3c
0.3
<0.001
Cysteine [%]
69.7b
72.5ab
73.3a
63.8c
1.0
<0.001
a
a
a
83.1b
0.5
<0.001
a
c
Tyrosin [%]
86.7
a
87.6
b
87.5
Asparagin [%]
81.5
78.8
82.5
77.5
0.4
<0.001
Serin [%] Glycin [%]
88.0a 83.6
86.6b 83.4
88.4a 83.6
83.6c 83.0
0.4 0.4
<.0001 0.68
Glutamate [%]
88.4a
89.0a
88.8a
86.5b
0.3
<.0001
a
b
ab
88.2c
0.3
<.0001
a
b
0.4
<.0001
Alanine [%] Proline [%]
90.5
a
87.0
89.4
a
86.9
90.0
87.3
83.4
HP: Høj protein, LP: Lav protein, HK: Høj kulhydrat og LK: Lav kulhydrat Værdier i den samme række som har forskellig bogstavbetegnelse er signifikant forskellige
Sammenlignes foderblanding LPLK med LPHK er den sande fordøjelighed signifikant lavere med undtagelse af histindin, phenylalanin og glycin. Den tilsyneladende fordøjelighed af fedt og energi er også lavere på foderblanding LPLK end på de andre foderblandinger. Hvalpene på foderblanding LPLK har også den laveste tilvækst og aflejring af kvælstof (Hellwing et al. 2008) men deres tarm er tungere og længere og leveren er større (egne ikke publicerede data). Reduceret tilvækst, øget dødelighed og lavere fordøjelighed af næringsstoffer er også blevet observeret i andre studier med lav protein:høj fedt til hvalpe (Allen et al. 1964 og Damgaard et al. 1998). Til alle fire foderblandinger er der anvendt de samme fodermidler, men i forskelligt forhold (Hellwing et al., 2009). Derfor er det formodentlig ikke
76
fodermidlerne i sig selv, der medfører en reduceret fordøjelighed for foderblanding LPLK. Hvis den tilsyneladende fordøjelighed af de enkelte aminosyrer sættes i forhold til den gennemsnitlige tilsyneladende fordøjelighed for samtlige aminosyrer ses der væsentlige afvigelser for cystein, theronin og tryptopan på foderblanding LPLK (figur 1), men ikke for de øvrige foderblandinger. Udskillelsen af endogent kvælstof er påvirket af proteinniveauet i foderet (Twombly and Meyer, 1961), men hos mink ser det ud til, at effekten er lille (Skrede, 1979). Aminosyrersammensætningen i endogent protein er forskellig fra foderets sammensætning. Idet indholdet af threonin og cystein i endogent materiale er højere end i foderet (Skrede, 1979).
Faglig Årsberetning 2009
Tilsyneladende og sand fordøjelighed af aminosyrer hos minkhvalpe i den tidlige vækstperiode
110 100 90 80 70
lle
am
in o
sy re r Ly M et sin hi o Th nin re Tr o yp nin to ph an H is tid Is ol in eu ci Le n uc in Ph Arg en in yl in al an in Va l C in ys te Ty in ro A sp sin ar ag in Se r G lu in ta m in G ly ci A n la ni n Pr ol in
60
A
Forhold mellem i FK mellem enkelt aminosyrer (as) og alle as [%]
120
HKLP
LPHK
HPHK
LPLK
Figur 1. Forholdet mellem den tilsyneladende fordøjelighed af de enkelte aminosyrer i forhold til den gennemsnitlige tilsyneladende fordøjelighed af samtlige aminosyrer. Værdier over 100 indikere at den pågældende aminosyre fordøjes bedre end gennemsnit for samtlige aminosyrer, mens det modsatte gør sig gældende for værdier der er lavere end 100.
Ydermere er indholdet af cystein og tryptophan henholdsvis 10 % og 8 % højere i proteinaser end i foderprotein (Skrede and Krogdahl, 1985), hvilket er højere end den endogene sammensætning givet af Skrede (1979). Muligvis har hvalpene på foderblanding LPLK af ukendte årsager udskilt flere fordøjelsesenzymer end hvalpene på de andre diæter. Dette forklarer imidlertid ikke den reducerede tilsyneladende fordøjelighed af fedt og energi på foderblanding LPLK. Den lave til syneladende fordøjelighed for fedt kan ikke forklares ud fra nuværende data. En mulig forklaring på denne ændring kan være at produktionen af lipase hos minkhvalpe er meget lavere end hos udvoksede dyr (Elnif et al., 1994), hvilket vil medføre, at dyrenes kapacitet for fedtfordøjelse er overskredet. Både den tilsyneladende og sande fordøjelighed faldt fra periode 1 til 3, og faldet var signifikant med undtagelse af den sande fordøjelighed af histidin. Dette er overraskende, fordi tidligere studier har vist, at den tilsyneladende
fordøjelighed af kvælstof og fedt var den samme eller steg lidt i løbet af perioden (Elnif and Hansen, 1987; Hejlesen, 2002). For den tilsyneladende og den sande fordøjelighed af kvælstof, threonin, leucin, arginin, valin og cystein var der vekselvirkning mellem foder og periode. Dette var også tilfældet for den tilsyneladende fordøjelighed af fedt og energi. Forskellene mellem LPLK foderblandingen og de andre blandinger var mindre i periode 1 end i de andre perioder. Faldet i fordøjelighed var den samme for aminosyrerne mellem periode 1 og 3 for både den sande og den tilsyneladende fordøjelighed (tabel 4). Der kan ikke drages nogen klar konklusion, om årsagen til den lavere fordøjelighed på foderblanding LPLK. Resultaterne på blanding LPHK kan hovedsagligt forklares med det lavere indhold af kvælstof og aminosyrer og dermed relativ højere udskillelse af endogent kvælstof i forhold til kvælstofindholdet i foderet.
Faglig Årsberetning 2009
77
Hellwing, A. L. F., Hansen, N. E. og Tauson, A-H.
Referencer Allen M.R.P., Sibbald I.R. and Evans E.V. 1964. Energy - Protein Relationships in Diets of Growing Mink. Canadian Journal of Physiology and Pharmacology 42, 733-744 Damgaard B.M., Clausen T.N., and Dietz H.H. 1998. Effect of dietary protein levels on growth performance, mortality rate and clinical blood parameters in mink (Mustela vison). Acta Agr Scand A-AN 48, 38-48. Elnif J. og Hansen N.E. 1987. Sammenligning af næringsstoffernes fordøjelighed hos minkhvalpe og udvoksede hanner (pastel type). NJFSeminar 128, Tromsø. Elnif J., Mortensen K., Olesen C.R. og Sørensen H. (1994) Lipaseaktivitet i pancreas fra minkhvalpe. Faglig årsberetning 1993/94, 179-185. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Hellwing, A.L.F., Hansen, N.E., and Tauson, A.-H. 2008. The effect of different protein and carbohydrate supply on protein and energy metabolism in early growth period of mink kits, 147-148, IFASA Congress; August 19-23, Scientifur Hellwing, A.L.F. & Hansen, N.E. 2009. Foderets aminosyre og energiindhold til minkhvalpe. Betydning for vægtudviklingen fra 4 – 12 leveuge. Faglig Årsberetning 2008, 61-66. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Hansen N.E., Finne L., Skrede A. and Tauson A.-H. 1991. Energiforsyningen hos mink og ræv. DSR Forlag Landbohøjskolen, København.
78
Hejlesen C. 2002. Digestibility of nutrients by young mink (Mustela vison) kits and adults, a comparison. NJF Seminar no. 347. Sandbøl P. and Lassén T.M. 2006. Minkens krav til aminosyrer under forskellige produktionsfaser. Internt notat fra arbejdsgruppen omkring aminosyre normer til mink. Intern Notat fra arbejdsgruppen omkring aminosyrenormer til mink. Dansk Landbrugs rådgivning, Landscentret, Pelsdyr. SAS Institute Inc. 1990. SAS/STAT® User’s guide, Version 6, 4th etdition, Cary NC: SAS institute Inc. 943 pp. Skrede A. 1978. Utilization of fish and animal byproducts in mink nutrition. I. Effect of source and level of protein on nitrogen balance, postweaning growth and characteristics of winter fur quality. Acta agric. Scand. 28, 105-129. Skrede A. 1979. Utilization of fish and animal byproducts in mink nutrition. IV. Fecal excretion and digestibility of nitrogen and animo acids by mink fed cod (Gadus Morrus) fillet or meat-andbone meal. Acta agric. Scand. 29, 241257. Skrede A. and Krogdahl Å. 1985. Heat affects nutritional characteristics of soybean meal and excretion of proteinases in mink and chicks, Nutr. Rep. Int. 32, 479-489 Tauson A.-H. 1988. Varied energy concentration in mink diets II. Effects on kit growth performance, female weight changes and water turnover in the lactation period, Acta. Agric. Scand 38, 232-242 Twombly J. and Meyer J.H. 1961. Endogenous Nitrogen Secretions into the Digestive tract, J. Nutr. 74, 453-460
Faglig Årsberetning 2009
Kompensatorisk vækst hos minkhvalpe (Mustela vison) efter reduceret protein indtag efter fravænning. Mette Schulin-Zeuthen & Peter Sandbøl Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Herningvej 112C, 7500 Holstebro Sammendrag To grupper af 8 uger gamle minkhvalpe fik tildelt en syntetisk foderblanding, som indeholdt 17.5 % OEp svarende til 50 % af hvalpenes proteinbehov. Hos den ene af grupperne blev 5 % af fedtfraktionen erstattet med soja-lecithin. En kontrolgruppe blev samtidigt opstaldet under normale farmbetingelser og fodret med almindeligt fodercentralfoder. De to restriktivt fodrede grupper holdt vægten (lecithin-gruppen) eller tabte sig (syntetisk kontrol) under den 11 dage lange begrænsning i protein indtag. To uger efter afslutningen på den restriktive periode vejede alle mink det samme igen og minkhvalpene var således i stand til at udøve kompensatorisk vækst. Schulin-Zeuthen, M. & Sandbøl, P. 2010. Kompensatorisk vækst hos mink hvalpe (Mustela vison) efter reduceret protein indtag efter fravænning. Faglig Årsberetning 2009, 79-83, Pelsdyrerhverts Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Abstract Two groups of 8 weeks old mink kits were offered a synthetic diet containing 17.5 % MEp corresponding to 50 % of the protein requirement of the kits. In one of these groups, soy lecithin replaced 5 % of the dietary fat fraction. A control group was kept under normal farm conditions offered a regular feed kitchen diet. The two restricted groups maintained weight (lecithin group) or loosed weight (synthetic control) during the 11 days of restriction. 2 weeks after conclusion of the restriction period, live weight of all mink kits were the same and therefore the two restricted groups was able to compensate growth. Schulin-Zeuthen, M. & Sandbøl, P. 2010. Compensatory growth in mink kits (Mustela vison) following reduced protein intake after weaning. Annual Report 2009, 79-83, Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro Denmark. Keywords: compensatory growth, mink kits, synthetic diet, protein requirement
Introduktion Konceptet bag kompensatorisk vækst er, at efter en periode med nedsat tilvækst som følge af en reduceret foder tildeling, er dyrene i stand til efterfølgende at indhente væksten på deres jævnaldrende, når der igen er fri adgang til foder. Denne stigning i væksten kan være et resultat af en simpel stigning i foderindtag eller mere interessant en stigning i den effektive foderudnyttelse. Dette forudsætter, at kroppen har en ”viden” om at den er forsinket i sin udvikling, og vil justere dette ved at øge foderoptagelsen eller måske endda gøre foderudnyttelsen mere effektiv. Det sidstnævnte tilfælde kan foderomkostningerne og næringsstofudskillelsen til miljøet dermed reduceres. Evnen til at udvise kompensatorisk vækst er blevet påvist i forsøg med grise (Critser et al. Fabian et al., 2002;
Fabian & Chiba, 2009), kvier (Choi et al., 1997) og fisk (Inness & Metcalfe, 2008). I fisk blev der observeret en stigning i dødeligheden som man antog skyldtes ”omkostninger ved kompensatorisk vækst” Hos observerede mink, (Kumeno et al., 1970) som en side-effekt, at mink er i stand til at yde kompensatorisk vækst. Otte uger gamle minkhvalpe blev tilbudt tre niveauer af protein (26 %, 35 % og 44 % som våd-basis) og tre niveauer af fedt i et 3 x 3 faktor-design. Alle hvalpe blev tilbudt ad libitum pelleterede foderblandinger med tørstofindhold på 95 %. Resultatet var en lavere tilvækst hos hvalpe fodret med det laveste proteinniveau. Ved 12 uger blev hvalpene tilbudt mediumniveauet af protein og højeste niveau af fedt på grund af den dårlige tilvækst. Ved 18 ugers alderen (begyndelsen af september) var den
Faglig Årsberetning 2009
79
Schulin-Zeuthen, M. & Sandbøl, P.
gennemsnitlige daglige tilvækst højest i disse hvalpe, som derved udviste kompensatorisk vækst, men havde samme foderindtag som de andre grupper, og derfor havde disse hvalpe en bedre foderudnyttelse i den følgende periode. En anden undersøgelse fandt i den første halvdel af vækst perioden, en lavere levende vægt hos mink hanner udvalgt til høj foderudnyttelse, end hos mindre effektive hanner. I anden halvdel skiftede vægten til at være højere i de mest effektive hanner. Foderoptagelsen hos alle mink var ens, hvilket tyder på at den forbedrede foderudnyttelse var et resultat af en øget tilvækst (Sørensen, 2002). En syntetisk foderblanding bestående af rene aminosyrer, sojaolie, fedt og stivelse er blevet udviklet (Sandbøl et al., 2005; Schulin-Zeuthen et al., 2009; Schulin-Zeuthen & Sandbøl, 2009). Når fedtfaktionen i denne blanding udelukkende består af raffineret fedt, er der en mulighed for, at mink ikke bliver forsynet med næringsstoffer som findes i intakt fedtstof. Den andel af intakt fedt som fjernes i raffineringsprocessen, koncentreres i lecithinfraktionen. Lecithin består af 90 % fosfolipider (Wang, 2002). Fosfolipider fungerer som strukturelle komponenter og indgår i minkens cellevægge. I den fortsatte udvikling af den syntetiske foderblanding, blev en gruppe mink tilbudt syntetisk foder suppleret med sojalecithin. Foderets proteinindhold lå kun lidt over vedligeholdelsesbehovet (11,5 % OEp) til voksne mink (Hejlesen et al., 2008). Formålet med forsøget var at undersøge minkhvalpenes evne til at lave kompensatorisk vækst, efter 11 dages begrænsning i proteinindtaget. Materialer og metoder I alt 45 minkhvalpe af farvetypen Brown / Glow blev delt i tre grupper:
80
1) 15 minkhvalpe fik tildelt en syntetisk foderblanding indeholdende 17,5 % OE fra protein. 2) 15 minkhvalpe fik den samme syntetiske foderblanding, men hvor 5 % af det samlede fedtindhold (halv sojaolie og halv svinefedt) blev udskiftet med soja-lecithin, og 3) 15 minkhvalpe var opstaldet på farmen og indgik i den (normale farm rutine) og blev fodret med fodercentralfoder. Alle mink er født indenfor de samme to dage. Minkhvalpene blev fodret ad libitum. Begrænsningen forårsaget af den syntetiske foder var derfor begrænset til proteinindtaget og ikke til energiindtaget. Ifølge (Clausen & Sandbøl, 2009), blev minkhvalpene tilbudt ca. halvdelen af det anbefalede proteinniveau (32 OEp) til hvalpe ved denne alder. Den syntetiske foderblanding er sammensat i henhold til ideal protein konceptet (Sandbøl et al., 2005) og blev optimeret efter at opfylde vedligeholdelsesbehovet hos voksne mink. Tørstofindholdet i foderet var 28 %. Foderet indeholdte 136 kcal OE / 100 g foder, og den beregnede energifordeling mellem protein, fedt og kulhydrater var 17,5:62,5:20. Foderet blev suppleret med sojasovs som smagsforstærker (Hvam et al., 2006) og pH justeret til pH 4,6 med NaHCO3 (Schulin-Zeuthen et al., 2009). Efter fravænningen ved 8 uger, blev grupperne, der modtog det syntetiske foder opstaldet i fordøjelighedsbure i 11 dage, og tildelt 280 kcal OE / dag. Bagefter blev alle grupper opstaldet under almindelig farm betingelser, og fulgte den almindelige fodrings rutine (ad libitum) med fodercentralfoder. De 2 grupper med begrænset proteinindtag blev vejet ved starten af forsøget. Alle grupper blev vejet ved udgangen af begrænsningsperioden, og igen henholdsvis 2, og 8 uger senere, samt ved pelsning.
Faglig Årsberetning 2009
Kompensatorisk vækst hos minkhvalpe (Mustela vison) efter reduceret protein indtag efter fravænning
Resultater og diskussion Foderindtaget hos minkhvalpene som fik tildelt syntetisk foder (gruppe 1 og 2) var stigende i de første to dage og gennemsnittet var i de sidste ni dage 199 ± 41 kcal / dag. Seks hvalpe blev udskiftet i de første dage på grund af et utilstrækkeligt foderindtag.
Efterfølgende var foderindtaget tilfredsstillende hos alle 30 hvalpe. I begrænsningsperioden med syntetisk foder, tabte hvalpene på syntetisk foder sig i alt 50 g og hvalpene på syntetisk+lecithin foder fastholdt deres vægt på 850 g (figur 1).
4000
a a a
Levende vægt, g
3500 3000
a a a
2500 2000 a a
1500 1000
a a
a a
a
b
500 0 22/6
3/7
17/7 Dato
1/9
24/11
Figur 1. Vægtudviklingen i tre grupper minkhvalpe: , Syntetisk kontrol , Syntetisk + lecithin Kontrol farm. Farm gruppen blev ikke vejet den 22. juni. De to grupper, der modtog en syntetisk foderblanding var begrænset i proteinindtag fra 22. juni – 3. juli. Kolonner indenfor dato, med forskellige bogstaver, var statistisk forskellige (p < 0,05).
Minkhvalpene var i stand til at øge væksten mest, hvis de havde været udsat for et vægttab, og selv to måneder efter begrænsningen var vægtstigningen højere i de to begrænsede grupper end i farmgruppen. Fra september og frem til pelsning var tilvæksten ens i alle 3 grupper.
50
a b
40 Daglig tilvækst, g/d
Farmgruppen var 162 g og 189 g tungere end de to andre grupper på dette tidspunkt. Efter to uger, hvor alle grupper fulgte de samme farm rutiner, var deres levende vægt ens. Ved den sidste vejning var væksten i gruppen syntetisk+lecithin 260 g højere (NS) end de to andre grupper. Udtrykt som gennemsnitlig daglig tilvækst er kompensatorisk vækst demonstreret i begge grupper (figur 2).
c
a a
30
b
20 10
a a a a b
0 -10 -20
22/6-3/7
3/7-17/7
17/7-1/9
1/9-24/11
Periode
Figur 2. Gennemsnitlig daglig tilvækst I tre grupper minkhvalpe: Syntetisk kontrol, Syntetisk + lecithin, Kontrol farm. Farm gruppen blev ikke vejet den 22. juni. De to grupper, der modtog en syntetisk foderblanding var begrænset i proteinindtag fra 22. juni – 3. juli. Kolonner indenfor dato, med forskellige bogstaver, var statistisk forskellige (p < 0,05).
Som påpeget af (Fabian et al., 2002) kan størrelsen af det kompenserende respons afhænge af flere faktorer, såsom alder, varighed af foderbegrænsningen, foderindtag og genotype.
Faglig Årsberetning 2009
81
Schulin-Zeuthen, M. & Sandbøl, P.
I dette forsøg blev foderindtaget på farmen ikke registreret. En registrering af foderindtag og foderudnyttelse er derfor nødvendig før en potentiel fordel kan konkluderes. Resultaterne i dette forsøg er i overensstemmelse med observationer af Kumeno et al., (1970) og Sørensen, (2002). Alderen på minkhvalpene var den samme som i Kumeno et al., (1970), og selvom foderet her var pelleteret og havde et proteinindhold på 27 % (% af tørstof), og proteinindholdet i dette forsøg, var 20 % (af tørstof). Minkhvalpene i Kumeno et al., (1970) fortsatte med at tage på i vægt, mens vores resultater viste en negativ eller ingen stigning i vægten hos hvalpene. Minkhvalpenes evne til at fastholde vægten gennem perioden med syntetisk + lecithin foder, viser endvidere at sammensætningen af dette foder, er tæt på at opfylde vedligeholdelsesbehovet hos mink og dermed, at OE fra protein på 17,5 % også er tilstrækkelig til at dække vedligeholdelsesbehovet ved 9 uger gamle minkhvalpe. Konklusion Minkhvalpene er i stand til at udvise kompensatorisk vækst efter ca. 50 % begrænsning i foderets proteinindhold i løbet af de første to uger efter fravænning. Yderligere undersøgelser er nødvendige før en konklusion kan nås angående en potentiel forbedring i foderudnyttelsen, hvilket kan medføre sparede omkostninger til foder samt nedsat udskillelse af uudnyttede næringsstoffer. Referencer Choi, Y.J., Han, I.K., Woo, J.H., Lee, H.J., Jang, K., Myung, K.H. & Kim, Y.S., 1997. Compensatory growth in dairy heifers: the effect of a compensatory growth pattern on growth rate and lactation performance. Journal of Dairy Science, 80: 519-524.
82
Clausen, T.N. & Sandbøl, P., 2009. Energifordelingen i hvalpenes tidlige vækstfase - II. Energy distribution in the feed for mink kits in the early growth period - II. Faglig Årsberetning, 2008: 55-60. Critser, D.J., Miller, P.S. & Lewis, A.J. The effects of dietary protein concentration on compensatory growth in barrows and gilts. Journal of Animal Science, 73: 3376-3383. Fabian, J. & Chiba, L.I., 2009. Dietary amino acid restrictions, compensatory growth, and nitrogen balance in growerfinisher pigs. Feedinfo News Service Scientific Reviews. www.feedinfo.com (September 2009). Fabian, J., Chiba, L.I., Kuhlers, D.L., Frobish, L.T., Nadarajah, K., Kerth, C.R., McElhenney, W.H. & Lewis, A.J., 2002. Degree of animo acid restrictions during the grower phase and compensatory growth in pigs selected for lean growth efficiency. Journal of Animal Science, 80: 2610-2618. Hejlesen, C., Sandbol, P. & Hansen, N.E., 2008. Protein requirement for maintenance in adult male mink (Neovison vison). IX International Scientific Congress in Fur Animal Production - Halifax, Nova Scotia, Canada, August 19-23. Scientifur 32 (4): 128133. Hvam, K., Hejlesen, C. & Sandbøl, P., 2006. Taste enhancers in an amino acid diet to mink. NJF-Seminar no. 392: pp 5. Inness, C.L.W. & Metcalfe, N.B., 2008. The impact of dietary restriction, intermittent feeding and compensatory growth on reproductive investment and lifespan in a short-lived fish. Proceedings of the Royal Society B Biological Sciences, 275: 1703-1708.
Faglig Årsberetning 2009
Kompensatorisk vækst hos minkhvalpe (Mustela vison) efter reduceret protein indtag efter fravænning
Kumeno, F., Itoyama, K., Hasegawa, J. & Aoki, S., 1970. Effect of protein and fat levels in complete pelleted diets on the growth of mink kits. Journal of Animal Science, 31: 894-899.
Schulin-Zeuthen, M. & Sandbøl, P., 2009. Fordøjeligheder af individuelle aminosyrer i syntetisk foder til mink (Mustela Vison). Digestibility of amino acids in a synthetic diet. Faglig Årsberetning, 2008: 71-72.
Sandbøl, P., Clausen, T.N. & Hejlesen, C., 2005. Ideal protein til mink (Mustela vison) i vækst- og pelssætningsperioden. Faglig Årsberetning 2004, 111-119.
Sørensen, K., 2002. Selection for feed efficiency in mink (Mustela vison). Ph.D. Thesis, Royal Veterinary and Agricultural University, 1-107.
Schulin-Zeuthen, M., Hvam, K. & Sandbøl, P., 2009. Smagelighed af en syntetisk foderblanding til mink. Palatability of a synthetic diet in mink. Faglig Årsberetning, 2008: 109-112.
Wang, T., 2002. Soybean oil. In: "Vegetable oils in food technology. Composition, properties and uses", Edited by: Gunstone, F. D., Blackwell Publishing, CRC Press, p. 18-58.
Faglig Årsberetning 2009
83
84
Faglig Ă&#x2026;rsberetning 2009
Minkhvalpes modtagelighed sammensætning
for
diarré
–
Effekt
af
foderets
Birthe M. Damgaard & Mette Skou Hedemann Institut for Husdyrbiologi og -sundhed, Det Jordbrugsvidenskabelige Fakultet, Aarhus Universitet, Blichers Allé 20, Postboks 50, DK-8830 Tjele Sammendrag Formålet med projektet var at anvende en sygdomsmodel til måling af modtagelighed for diarré ved fravænning hos minkhvalpe fodret med hvalpefoder (letfordøjeligt foder) og hos hvalpe fodret med farmfoder. Projektet er gennemført med hvalpe i en periode på 7 dage efter fravænning. Hvalpene blev tilført colibakterier (Escherichia coli O68) gennem munden på dag 1 og 2 efter fravænning. Frekvensen af minkhvalpe med diarré var ikke forskellig for hvalpe fodret med hvalpefoder og for hvalpe fodret med farmfoder. Kropsvægt og tilvækst var ikke påvirket af tilførslen af colibakterier og fodersammensætningen. Antallet af erytrocytter, hæmoglobinindholdet og hæmatokrit-værdien i blodet var højere hos hvalpe fodret med hvalpefoder end hos hvalpe fodret med farmfoder. Antallet af leukocytter og neutrofile leukocytter og indholdet af akutfase proteinerne haptoglobin og fibrinogen i blodet var lavere hos hvalpe fodret med hvalpefoder sammenlignet med hvalpe fodret med farmfoder. Muskeltykkelsen i den bageste del af tyndtarmen, arealet af muciner på villi i tyndtarmen og arealet af muciner i krypter i den bageste del af tyndtarmen var større hos hvalpe fodret med hvalpefoder sammenlignet med hvalpe fodret med farmfoder. Damgaard, B.M., Hedemann, M.S. 2010. Minkhvalpes modtagelighed for diarré - Effekt af foderets sammensætning. Faglig årsberetning 2009, 85-90. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Abstract The aim of the project was in a challenge model to measure the susceptibility of post weaning diarrhoea in mink kits. The kits were from litters fed a kit diet (high digestibility) and an ordinary farm diet, respectively. The project was performed during the first 7 days after weaning. The mink kits were orally challenged with coli bacteria (Escherichia coli O68) on day 1 and 2 after weaning. The frequency of mink kits with diarrhoea was not affected by the composition of the diets. The body weight and the body growth were not affected by the diet composition and the challenge with bacteria. The number of erythrocytes, the content of haemoglobin and the haematocrit value in the blood were higher in kits fed kit diet than in kits fed farm diet. The number of leucocytes and neutrophils in the blood and the plasma content of the acute phase proteins haptoglobin and fibrinogen were lower in kits fed kit diet than in kits fed farm diet. The thickness of the muscles in the last part of the small intestine, the area of the mucins on villi in the small intestine and the area of the mucins in the crypts in the last part of the intestine were higher in kits fed kit diet than in kits fed farm diet. Damgaard, B.M., Hedemann, M.S. 2010. Susceptibility of post weaning diarrhoea in mink kits - Effects of diet composition. Annual report 2009, 85-90. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: Mink; weaning; Escherichia coli; diarrhoea; intestine; diet composition; blood parameters
Indledning I diegivningsperioden og fravænningsperioden er minkhvalpe udsat for store belastninger, der har stor indflydelse på deres sundhedstilstand og trivsel. I denne periode er hvalpenes fordøjelsessystem og immunsystem ikke færdigudviklet, hvorfor de er meget sårbare for belastninger. Ved overgangen til fast
føde er hvalpene påvirket af smittepres, hygiejne i redekasser / bure, fodersammensætning og deres medførte sygdomsresistens. Foderskift og fravænning er en belastning for hvalpene. Det betyder, at mange hvalpe får diarré i diegivnings-perioden og fravænningsperioden.
Faglig Årsberetning 2009
85
Damgaard, B. M. & Hedemann, M. S.
Endvidere at mange hvalpe trives dårligt med ringe tilvækst, og at mange af disse hvalpe dør. Hos mink har vi udviklet en sygdoms-model, der måler minkhvalpes modtagelighed for diarré (Damgaard & Hedemann, 2008 og 2009). Modellen gennemføres med hvalpe i en periode på 7 dage efter fravænning. Hvalpene tilføres colibakterier (Escherichia coli O68) gennem munden på dag 1 og 2 efter fravænning. Konsistensen af fæces registreres dagligt for at beskrive forekomsten af diarré. Derudover tages blodprøver, og der udtages prøver af tarmvæv ved forsøgets afslutning for beskrivelse af henholdsvis dyrenes sundhedstilstand og tarmens udviklingsstadie. Målet med dette delprojekt har været at anvende sygdomsmodellen til måling af modtageligheden for diarré og tarmudviklingen hos minkhvalpe fodret med hvalpefoder (letfordøjeligt foder), og hos hvalpe fodret med farmfoder. Materiale og metoder Dette projekt er et delprojekt af projektet med titlen ”Sunde Minkhvalpe”. I første delprojekt blev indkørt modeller til måling af sygdomsmodtagelighed hos minkhvalpe, samt karakterisering af tarmens udviklingsstadie (Damgaard & Hedemann, 2008). I næste delprojekt blev modellerne anvendt på hvalpe født af tæver karakteriseret som henholdsvis aktive (højt aktivitetsniveau) og passive (lavt aktivitetsniveau) (Damgaard & Hedemann, 2009). I dette delprojekt vil modellerne blive anvendt på hvalpe fodret med hvalpefoder og hvalpe fodret med farmfoder. Foder og hvalpe Forsøget er gennemført med minkhvalpe af farvetypen Scanbrown. I forsøget indgik 20 kuld hvalpe med 6-8 hvalpe. Halvdelen af kuldene blev fodret med hvalpefoder, og den anden
86
halvdel blev fodret med farmfoder fra de var 4 uger gamle. Hvalpefoderet var et letfordøjeligt foder, der var baseret på kyllingebrystfilet (20 %), svinelever (20 %), industrifisk (20 %) og fiskeafskær (15 %). Farmfoderet var baseret på fiskeafskær (30 %), industrifisk (20 %) og fjerkræaffald (18 %). Hvalpefoderet indeholdt 179 Kcal/100 g foder og energifordelingen mellem protein, fedt og kulhydrat var henholdsvis 48 %, 41 % og 11 %. Farmfoderet indeholdt 148 Kcal/100 g foder og energifordelingen mellem protein, fedt og kulhydrat var henholdsvis 40 %, 48 % og 12 %. Podningsmodellen Hvalpene blev fravænnet ved 7-8 ugers alderen og fra hvert kuld udtog vi 4 hvalpe, 2 hanner og 2 tæver – i alt 80 hvalpe til podningsforsøg. Halvdelen af hvalpene (1 han og 1 tæve) fra hvert kuld var på podningsholdet, og den anden halvdel var på kontrolholdet. Podningsforsøgene blev gennemført de første 7 dage efter fravænning. Hvalpene gik parvis han og tæve (helsøskende) og placeredes i standardbure med redekasser og netbund. Under burene var der en opsamlingsbakke til fæces, så gødningskonsistensen dagligt kunne vurderes. Staldens temperatur var 18-20 gr. C, og der var normalt dagslys. Hvalpene blev vejet enkeltvis ved fravænning ved forsøgets start og efter 7 dage ved forsøgets afslutning. Hvalpene blev fodret efter ædelyst med den foderblanding, de havde fået i diegivningsperioden, og foderoptagelsen blev målt dagligt. De havde fri adgang til drikkevand via en drikkenippel. Hvalpene på podningsholdet blev podet med Escherichia coli O68 gennem munden på dag 1 og dag 2 i forsøget, mens kontrolhvalpene fik indgivet natriumkloridopløsning (Damgaard og Hedemann, 2008). Der blev indsamlet gødningsprøver (svaberprøver fra endetarmen) fra alle hvalpe dag
Faglig Årsberetning 2009
Minkhvalpes modtagelighed for diarré – Effekt af foderets sammensætning
Blodprøver Ved forsøgets start og afslutning blev udtaget en stabiliseret blodprøve (KEDTA) på alle hanhvalpe. Blodprøverne blev analyseret for hæmatokritværdi, hæmoglobinniveau, antallet af røde og hvide blodceller samt indholdet af akutfase proteinerne haptoglobin og fibrinogen. Karakterisering af tarmens udviklingsstadie. Fra hvert af de to hold (farmfoder og hvalpefoder) i forsøget blev der 7 dage efter fravænning fra hvert kuld aflivet en hvalp fra kontrolholdet og en hvalp fra podningsholdet. Hvalpene blev aflivet ved injektion med natrium-pentobarbital. Bughulen blev åbnet, og mave-tarmkanalen blev udtaget. Tyndtarmens længde blev bestemt, og der blev udtaget vævsprøver (ca. 2 cm) ved 25 % og 75 % af tyndtarmens længde. Vævet blev fikseret i neutral bufferet formalin. Vævet blev indlejret i paraffin, og der blev skåret tynde snit, som blev farvet, hvorefter der blev målt villihøjde, kryptdybde og areal af muciner.
Statistiske analyser Den statistiske behandling af data er foretaget ved hjælp af systemet SAS. Frekvensen af minkhvalpe med diarré er behandlet ved hjælp af PROC GLIMMIX og de øvrige data ved hjælp af PROC MIXED. Resultater og diskussion Resultatet af effekten af podning sammenlignet med kontrolbehandling på forekomsten af diarré er vist i Figur 1. Det fremgår, at der ikke var forskel på procentdelen af hvalpe, der fik diarré, på podeholdet og på kontrolholdet (P=0,98). Der blev ikke påvist effekt af fodersammensætningen på antallet af hvalpe med diarré (P=0,96). I det første delprojekt var frekvensen af diarré hos de podede hvalpe maksimalt 70 % (Damgaard og Hedemann, 2008), i andet delprojekt var frekvensen af hvalpe med diarré maksimalt 40 % (Damgaard og Hedemann, 2009), mens frekvensen af hvalpe med diarré i dette delprojekt var maksimalt 26 %. Årsagen til denne forskel kan skyldes forskelle i følsomhed for diarré mellem forskellige grupper (farvetyper) af mink, forskelle i kropsvægt mellem hvalpene samt forhold ved bakteriekulturen. Procent hvalpe med diarré 30 25 20 %
1 og dag 3 i forsøget til bakteriologisk undersøgelse. Der blev dagligt fortaget en bedømmelse af fæces konsistensen for hvert bur. Konsistensen på gødningen (fæces) blev vurderet på en skala fra 1 til 4. ”1”: fæces med mørk farve og fast konsistens; ”2”: fæces med mørk farve og udflydende konsistens, ”3”: fæces med brunlig farve og lyse klatter samt udflydende konsistens; ”4”: fæces med brun farve og vandig konsistens. Grad 2 blev defineret som tegn på forandring i fordøjelsesfunktionen, en form for diarré. Konsistens af grad 2, 3 og 4 blev defineret som diarré. Derudover registreredes hvalpenes almen tilstand dagligt.
Kontrol
15
Podet
10 5 0 1
2
3
4
5
7
Dag efter fravænning
Figur 1. Frekvensen af minkhvalpe med diarré efter podning med colibakterier (Podet) og på kontrolholdet (Kontrol) fra 1 dag til 7 dage efter fravænning.
Faglig Årsberetning 2009
87
Damgaard, B. M. & Hedemann, M. S.
De bakteriologiske analyser viste, at den bakterie, der blev anvendt til podning, kunne genfindes hos stort set alle minkhvalpe med diarré. Tilsvarende resultat er fundet i de to andre delprojekter.
Minkhvalpenes vægt og tilvækst samt resultaterne af blodanalyserne er vist i Tabel 1.
Tabel 1.Den gennemsnitlige kropsvægt ved fravænning og 7 dage efter fravænning og den gennemsnitlige tilvækst i forsøgsperioden samt antallet af leukocytter (hvide blodlegemer), neutrofile granulocytter og erytrocytter (røde blodlegemer), hæmatokritværdi og indhold af hæmoglobin, haptoglobin og fibrinogen i blod. Værdierne er LSMeans og SEM. Podet
Kontrol
Hvalpefoder
Farmfoder
P-værdi
P-værdi
Effekt af podning
Effect af foder
Kropsvægt, g Dag 0
656 ± 41
Dag 7
866 ± 67
959 ±501
969 ± 52
855 ± 66
0,30
0,21
Tilvækst, g
278 ± 19
252 ± 15
273 ± 15
256 ±19
0,31
0,51
9
6,6 ± 0,81
8,3 ± 0,90
5,7 ± 0,78
9,1 ± 0,97
0,16
0,0088
Neutrofile, 10 /L
3,7 ± 0,66
5,0 ± 0,74
3,1 ± 0,63
5,6 ± 0,79
0,20
0,015
9
1,9 ± 0,18
2,4 ± 0,17
2,1 ± 0,17
2,2 ± 0,19
0,056
0,56
12
Erytrocytter, 10 /L
5,2 ± 0,089
5,3 ± 0,097
5,4 ± 0,082
5,1 ± 0,10
0,30
0,0061
Hæmoglobin, mmol/L
7,9 ± 0,12
8,0 ± 0,12
8,2 ± 0,11
7,7 ± 0,13
0,67
0,0052
Hæmatokrit, %
34,4 ± 0,52
34,9 ± 0,56
35,8 ± 0,48
33,6 ± 0,60
0,51
0,0052
Haptoglobin, g/L
0,62 ± 0,20
0,53 ± 0,19
0,10 ± 0,18
1,05 ± 0,20
0,74
0,0009
Fibrinogen, g/L
3,9± 0,201
4,0 ± 0,19
3,6 ± 0,19
4,4 ± 0,20
0,90
0,0049
Leukocytter, 10 /L 9
Lymfocytter, 10 /L
682 ± 41
689 ± 40
649 ± 43
0,69
0,55
P<0,05 angiver signifikant forskel mellem grupperne
Det ses, at der for vægt og tilvækst, ikke blev påvist forskelle mellem mink på podeholdet og på kontrolholdet. Det betyder, at selv om minkhvalpene havde mindre fordøjelsesforstyrrelser, var deres tilvækst ikke påvirket i negativ retning. Hvalpene i dette forsøg var lidt tungere end hvalpene i tidligere forsøg, hvilket kan være medvirkende til, at frekvensen af hvalpe med diarré var lavere i dette forsøg sammenlignet med tidligere (Damgaard & Hedemann, 2008 og 2009). Kropsvægten og tilvæksten var større for hvalpe fodret med hvalpefoder end for hvalpe fodret med farmfoder, men forskellen var ikke signifikant (P>0,05). Hvalpefoderet har således haft en positiv effekt på tilvæksten, men ikke i en sådan udstrækning, at der var statistisk sikker forskel mellem hvalpene på de to fodersammensætninger.
88
For alle blodanalyser var der ingen forskelle mellem podede hvalpe og kontrolhvalpe. Antallet af røde blodlegemer (erytrocytter) (P= 0,0061), hæmoglobinindholdet (P=0,0052) og hæmatokritværdien (P=0,0052) var signifikant højere hos hvalpe fodret med hvalpefoder end hos hvalpe fodret med farmfoder. Dette indikerer, at hvalpe fodret med hvalpefoder har en større evne til at binde og transportere ilt i blodet og dermed en bedre almen tilstand end hvalpe fodret med farmfoder. Hvalpefoderet bestod af lettere fordøjelige råvarer end farmfoderet og havde et højere indhold af omsættelig energi, hvilket synes at have haft en positiv effekt på hvalpenes sundhedstilstand. Antallet af hvide blodlegemer (leukocytter) (P=0,0088) og antallet af neutrofile leukocytter (P=0,015) var signifikant lavere hos
Faglig Årsberetning 2009
Minkhvalpes modtagelighed for diarré – Effekt af foderets sammensætning
hvalpe fodret med hvalpefoder end hos hvalpe fodret med farmfoder. Indholdet af akutfase proteinerne haptoglobin (P=0,0009) og fibrinogen (P=0,0049) var signifikant lavere hos hvalpe fodret med hvalpefoder end hos hvalpe fodret med farmfoder. Effekterne på de hvide blodlegemer og akutfase proteinerne indikerer, at
hvalpefoder og farmfoder har haft forskellig effekt på hvalpenes immunsystem. Der var ingen effekt af podning på villihøjde, kryptdybde og arealet af muciner på villi og i krypter, derfor er det kun effekten af foderet der præsenteres i Tabel 2.
Tabel 2. Den gennemsnitlige villihøjde, kryptdybde og muskeltykkelse og det gennemsnitlige areal af muciner på villi og i krypter hos minkhvalpe fodret med farmfoder eller hvalpefoder 7 dage efter fravænning. Værdierne er LSMeans og SEM. Hvalpefoder Segment Villihøjde (µm)
Kryptdybde (µm)
Muskeltykkelse (µm)
LSMeans
Farmfoder SEM
LSMeans
P-værdi SEM
Effekt af foder
SI25
655
31
618
34
0,42
Si75
567
24
499
27
0,07
SI25
640
18
629
19
0,67
Si75
588
21
604
22
0,61
SI25
272
14
275
15
0,87
Si75
304
12
262
12
0,02
2
SI25
3996
282
2842
309
0,01
Si75
5182
362
3851
411
0,02
2
SI25
4587
291
4462
308
0,77
Si75
6042
350
4988
371
0,05
Mucinareal på villi (µm )
Mucinareal i krypt (µm )
Villihøjden var ikke påvirket af fodertypen i den forreste del af tyndtarmen (SI25), men der var en tendens (P = 0,07) til, at villi var længere i den bageste del af tyndtarmen. Kryptdybden var ikke påvirket af foderet. Muskeltykkelsen var ens i den forreste del af tarmen hos minkhvalpe fodret med farmfoder og hvalpefoder, men musklen var tykkere i den bageste del af tyndtarmen hos minkhvalpe fodret med hvalpefoder. Arealet af muciner på villi i tyndtarmen var 35-41 % større hos minkhvalpe fodret med hvalpefoder sammenlignet med minkhvalpe fodret med farmfoder (p < 0,02) og i krypterne var arealet af muciner 21 % større i den bageste del af tarmen hos minkhvalpe fodret med hvalpefoder, mens der ikke var nogen forskel i den forreste del af tyndtarmen. De målte villihøjder og kryptdybder er sammenlignelige med tidligere resultater (Damgaard & Hedemann, 2008 og 2009). I lighed med hvad der blev
fundet tidligere, blev der ikke observeret forskel på tarmens udviklingsstadie mellem kontrol- og podeholdet (Damgaard & Hedemann, 2009). Dette kan have sammenhæng med, at hvalpene, som indgik i forsøget, var store, hvilket kan have betydning for hvalpenes følsomhed for diarré. Der var en tendens til en forøgelse af villihøjden i den bageste del af tyndtarmen hos minkhvalpe fodret med hvalpefoder. Hvalpefoderet bestod af lettere fordøjelige råvarer end farmfoderet, det kan have betydet, at flere næringsstoffer har været tilgængelige for tarmen, hvilket er blevet omsat til øget vækst – længere villi, dette underbygges dog ikke af kryptdybden, som var ens i de to hold, da en øget kryptdybde indikerer vækst. Den øgede villihøjde kan også være resultatet af, at afstødelsen af celler fra villus sker langsommere hos hvalpe fodret med hvalpefoder. En forøgelse af villihøjden
Faglig Årsberetning 2009
89
Damgaard, B. M. & Hedemann, M. S.
øger tarmens overflade, dvs. det areal hvor næringsstofferne absorberes. En større forsyning med næringsstoffer er sandsynligvis også forklaringen på det øgede areal af muciner hos minkhvalpe fodret med hvalpefoder. Mucinlaget hindrer bakterier, f.eks. E. coli, i at bindes til tarmoverfladen. Da der ikke var forskel på diarréfrekvensen hos podede minkhvalpe og kontrolhvalpe, kan der ikke siges noget om, hvorvidt det øgede mucinareal ydede en ekstra beskyttelse mod infektion. Konklusion Der blev ikke påvist forskel i følsomhed for diarré hos hvalpe fodret med hvalpefoder og hvalpe fodret med farmfoder, ligesom der ikke var forskel på forekomsten af diarré hos hvalpe på podeholdet og kontrolholdet. Antallet af erytrocytter, hæmoglobinindholdet og hæmatokritværdien i blodet var højere hos hvalpe fodret med hvalpefoder end hos hvalpe fodret med farmfoder, hvilket indikerer en positiv effekt af hvalpefoderet på hvalpenes sundhedstilstand. Antallet af leukocytter og neutrofile granulocytter samt indholdet af akutfaseproteinerne haptoglobin og fibrinogen i blodet var lavere hos hvalpe fodret med hvalpefoder end hos hvalpe fodret med farmfoder. Der blev ikke fundet forskelle i tarmens udviklingsstadie som følge af podning. Muskeltykkelsen var i den bageste del af tyndtarmen tykkere hos hvalpe fodret med hvalpefoder end hos hvalpe fodret med farmfoder. Arealet af muciner på villi i tyndtarmen og i krypterne i den
90
bageste del af tyndtarmen var større hos hvalpe fodret med hvalpefoder sammenlignet med hvalpe fodret med farmfoder. Fodring med hvalpefoder kan have betydet flere tilgængelige næringsstoffer, hvilket kan være forklaringen på det øgede areal af muciner i tyndtarmen hos hvalpe fodret med hvalpefoder sammenlignet med hvalpe fodret med farmfoder. Referencer Carstensen, L., 2003. Post weaning diarrhoea susceptibility in piglets. PhD thesis. The Danish Institute of Agricultural Sciences & The Royal Veterinary and Agricultural University, Denmark. 141 pp. ISBN 87-88976-73-4. Damgaard, B.M. & Hedemann, M.S. 2008. Minkhvalpes modtagelighed for diarré - etablering af en podemodel. Faglig Årsberetning 2007. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, 73-76. Damgaard, B.M. & Hedemann, M.S. 2009. Minkhvalpes modtagelighed for diarré i relation til aktivitet. Faglig Årsberetning 2008. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, 113118. Vulfson, L., Pedersen, K., Chriél, M., Frydendahl, K., Andersen, T.H., Madsen, M. & Dietz, H.H. 2001. Serogroups and antimicrobial susceptibility among Escherichia coli isolated from farmed mink (Mustela vison Schreiber) in Denmark. Vet. Microbio. 79, 143-153.
Faglig Årsberetning 2009
Diarre i fravænningsperioden hos minkhvalpe VII: Evaluering af en ELISA metode til påvisning af antistoffer specifikke for mink astrovirus Karin Ullman1, Claudia Baule1, Anne Sofie Hammer2, Trine Hammer-Jensen2 & Gyorgy Czifra1 1
Department of Virology, National Veterinary Institute, Uppsala, Sweden 2 Afdeling for Fjerkræ, Fisk og Pelsdyr, DTU Veterinærinstituttet, Århus, Danmark Sammendrag Tidligere epidemiologiske undersøgelser har vist en sammenhæng mellem forekomst af mink astrovirus og diarre i diegivningsperioden hos minkhvalpe, både på farm-niveau og på hvalpeniveau. Der var behov for et serologisk redskab med henblik på at muliggøre nærmere undersøgelser af spreding af astrovirus infektioner hos mink og monitorering af antistofproduktion I forbindelse med immuniserings og infektionsforsøg. En indirekte ELISA er derfor blevet udviklet ved anvendelse af et rekombinant mink astrovirus kapsidprotein som antigen. Mikrotiterplader blev coated med kapsidprotein og inkuberet med serum fortyndet 1:100. Som sekundært antistof, blev anvendt et horseradish peroxidase-mærket muse anti-mink IgG. Udvikling af reaktionen blev udført med tetramethylbenzidine som substrat. Aflæsning af resultaterne blev udført ved måling af optisk densitet (OD) ved 450 nm. Den udviklede ELISA er blevet anvendt til forskellige undersøgelser, blandt andet til bestemmelse af kapsidproteinets immunogenicitet og påvisning af antistoffer I serumprøver fra minkfarme med og uden forekomst af sygdomskomplekset “fedtede hvalpe”. Med den udviklede ELISA metode kunne påvises antistofproduktion hos mink immuniseret med fuldlængde kapsidprotein og to korte varianter af kapsidproteinet. Ved anvendelse af ELISA metoden kunne der påvises antistoffer karakteristiske for MiAstV hos mink på farme der oplever udbrud af sygdomskomplekset “fedtede hvalpe”. På farme , hvor der ikke er påvist udbrud af “fedtede hvalpe” kunne også påvises antistoffer karakteristiske for MiAstV, dog med lavere titerværdier. Konklusivt tyder resultaterne af undersøgelserne på, at den udviklede ELISA metode er et velegnet redskab til påvisning af antistoffer karakteristiske for mink astrovirus og at der forekommer både subkliniske og kliniske manifestationer af astrovirus infektioner hos mink. Ullman, K., Baule, C., Hammer, A.S., Hammer-Jensen, T. & Czifra, G., 2010. Evaluering af en ELISA til detektion af antistoffer specifikke for mink astrovirus. Faglig Årsberetning 2009, 91-96. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark Abstract Previous epidemiological studies have shown an association between presence of mink astrovirus and pre-weaning diarrhoea in affected as compared to non-affected farms. In order to enable investigations on the spread of astrovirus infections in mink and to monitor production of antibodies following immunization or challenge experiments, a serological tool was needed. An indirect ELISA was developed using recombinant capsid protein of mink astrovirus as antigen. Plates were coated with capsid protein and incubated with the sera diluted 1:100. As secondary antibody, a horseradish peroxidaselabeled mouse anti-mustelid IgG was used. Development of the reaction was done with tetramethylbenzidine as substrate. The readings were done by measuring the optical density (OD) at 450 nm. This ELISA has been used in different studies, such as for determination of immunogenicity of the capsid protein, and detection of antibodies in sera from farms with and without clinical history of greasy kits. Production of specific antibodies could be detected with the ELISA in mink immunized with the complete and with two short variants of the capsid protein. Also, by means of this ELISA it could be demonstrated that antibodies to mink astrovirus are commonly present in farms reporting the wet kits syndrome. However, also on farms without wet kits antibodies to mink astrovirus could be detected, albeit with lower titres. It is concluded that the developed ELISA is a suitable tool for detection of antibodies against mink astrovirus. Also, the ELISA supports the evidence that infection with astrovirus is common in mink farms, and indicates that different presentations, from subclinical to overt clinical manifestations appear in different farms.
Faglig Årsberetning 2009
91
Ullmann, K., Baule, C., Hammer, A. S., Hammer-Jensen, T. & Czifra, G.
Ullman, K., Baule, C., Hammer, A.S., Hammer- Jensen, T. & Czifra, G., 2010. Evaluation of an ELISA for detection of antibodies to mink astrovirus. Annual report 2009, 91-96. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark Keywords: pre-weaning diarrhoea, mink astrovirus, ELISA
Introduktion Sygdomskomplekset “fedtede hvalpe” er en alvorlig sygdom hos minkhvalpe i diegivningsperioden. Sygdomsbilledet hos minkhvalpene er karakteriseret af alvorlig diarre ledsaget af hudforandringer: hævelse, rødme og exudation af fedtet sekret, især i nakkeregionen og på poter og kløer. Sekretet skyldes oversekretion fra apokrine hudkirtler (Clausen & Dietz, 2004; Czifra et al., 2004) der efterlader huden våd og fedtet. Dette er årsagen til, at sygdomskomplekset kaldes ”fedtede hvalpe” (på engelsk “wet kits”, “sticky kits” eller “greasy kits”). I tidligere undersøgelser er sygdommen blevet associeret med tilstedeværelse af mink astrovirus (MiAstV) og calicivirus i fæcesprøver. Virus er påvist ved hjælp af elektronmikroskopi (EM) (Englund et al., 2002; Czifra et al., 2004) og konfirmeret af real-time PCR (Ullman et al., 2004 og 2006). Begge disse metoder til påvisning af virus er baseret på undersøgelse af fæcesprøver fra inficerede dyr og har vist sig at være anvendelige til såvel diagnostiske, som forskningsrelaterede undersøgelser. Bredere undersøgelser af incidens, prævalens og spredning of MiAstV infektioner, nødvendigør udvikling af et redskab til serologiske analyser. Til dette formål er en ELISA til påvisning af antistoffer blevet udviklet. Formålet med ELISA’en er at kunne påvise og monitorere antistofproduktion som indikator for infektionsstatus ved kliniske udbrud, samt i forbindelse med immuniseringsog infektionsforsøg. Genomet for MiAstV koder for to nonstrukturelle proteiner. Det ene er et replikase protein, og det andet er et strukturelt kapsidprotein (Mitellholzer et
92
al., 2003). Kapsidproteinet er det ydre protein på MiAstV der er eksponeret for værtens immunsystem i forbindelse med infektion, og som derved genkendes af antistoffer specifikke for virus. Derfor kan kapsidproteinet også forventes at være et velegnet antigen til udvikling af en serologisk test til påvisning af antistoffer specifikke for MiAstV Materialer og metoder Udvikling af ELISA til påvisning af antistoffer specifikke for MiAstV kapsidprotein i serumprøver fra mink Ekspression af MiAstV kapsidproteinet der er blevet anvendt som antigen til udvikling af ELISA metoden er tidligere beskrevet (Baule et al., Faglig Årsberetning 2004). Proteinet blev oprenset ved anvendelse af en nikkel affinitetssøjle og koncentrations bestemt. Mikrotiterplader (MaxiSorp 96 wells) blev coated og inkuberet ved 4 C natten over med 500 ng/brønd af det rekombinante kapsidprotein fortyndet i en karbonatbuffer (pH 9.6). Efter 4 afvaskninger med PBS-T (PBS indeholdende 0.05% Tween20) blev serumprøverne fortyndet 1:100 i blokeringsbuffer (PBS/Tween 20 med 5% skummetmælk). Prøverne blev herefter inkuberet ved 37 C i en time. Efter vaskning blev tilsat horseradish peroxidase mærket muse anti-mink IgG fortyndet 1:1600 i blokeringsbuffer. Herefter blev prøverne igen inkuberet ved 37 C i en time. Pladerne blev vasket og herefter inkuberet i 10 min med en substrat opløsning (tetramethylbenzidine). Reaktionen blev stoppet ved at tilsætte 2M H2SO4. Den optiske densitet (OD) blev målt til 450 nm med en ELISA mikroplade aflæser.
Faglig Årsberetning 2009
Diarré I fravænningsperioden hos minkhvalpe VII:……..
4 3,5
Protein A, n=5 3 2,5
Protein B, n=3
2
Protein C, n=7
1,5
Kapsidprotein, n=10 1
Kontrol, n=10
0,5 0 26. feb
12. marts
26. marts
12. april
Fig.1. Påvisning af antistoffer hos mink immuniseret med fuldlængde mink astrovirus kapsidprotein og kortere varianter af dette protein. Resultaterne tyder på at den korte variant kaldet protein A inducerer antistofnivaeuer der er sammenlignelige med dem der induceres af fuldlængde kapsidprotein.
Evaluering af ELISA metoden til forskellige applikationer: a) Test af immunogenicitet af korte varianter af MiAstV kapsidprotein: Blod blev indsamlet fra voksne mink to og fire uger efter immunisering med kortere varianter af MiAstV kapsidprotein. Efter koagulation blev blodprøverne centrifugeret og serum blev indsamlet og analyseret som beskrevet. b) Påvisning af antistoffer specifikke for fuldlængde MiAstV kapsidprotein efter immuniserings og infektionsforsøg: Drægtige minktæver stammende fra en minkfarm som ikke har oplevet udbrud af sygdomskomplekset ”fedtede hvalpe” blev inddelt i tre grupper: 1) immuniserede tæver med hvalpe der blev inficeret med MiAstV kapsidprotein 2) ikke-immuniserede tæver med hvalpe der blev inficeret med MiAstV kapsidprotein 3) Kontrolgruppe med ikke-immuniserede tæver med hvalpe der ikke blev inficeret med MiAstV kapsidprotein Infektionsforsøg blev udført ved oral indgivelse af faecesmateriale indehol-
dende fuldlængde MiAstV kapsidprotein. ELISA metoden blev anvendt til analyse af sera fra tæver og minkhvalpe (udtaget gennem flere uger). c) Test af antistoffer specifikke for MiAstV stammene fra svenske og danske minkfarme: Serumprøver fra problemfarme med en historie om tilbagevendende udbrud af fedtede hvalpe) og problemfrie farme i Danmark (5) og Sverige (3) blev testet for forekomst af antistoffer specifikke for MiAstV med ELISA metoden, som beskrevet Resultater og diskussion Resultater af undersøgelser udført med den udviklede ELISA metode: a) Test af immunogenicitet af varianter af mink astrovirus kapsidprotein: I figur 1 er vist resultater af analyser af serumprøver, resultaterne er vist som korrigerede OD værdier fastlagt i sera fra fem grupper af voksne mink. Disse resultater tillader identifikation af en kort variant af mink astrovirus kapsidprotein, som kan bære antigene determinanter der inducerer samme eller lignende immunrespons som fuldlængde kapsid-
Faglig Årsberetning 2009
93
Ullmann, K., Baule, C., Hammer, A. S., Hammer-Jensen, T. & Czifra, G.
proteinet. På baggrund af heraf, blev dette kortere kapsidprotein produceret i større mængder og effekten (immunogeniciteten) testet i et immuniserings og infektionsforsøg. b) Fastlæggelse af antistofniveau for antistoffer specifikke for mink astrovirus kapsidprotein efter immuniserings og eksperimentel infektion: Som vist i figur 2, blev der påvist produktion af antistoffer specifikke for MiAstV og med høje OD værider (>2.0) ved ELISA undersøgelse af sera fra minkhvalpe født af immuniserede tæver. Der blev også påvist antistoffer specifikke for MiAstV i serum fra ikke-
vaccinerede tæver, hvis hvalpe var blevet eksperimentelt inficeret med MiAstV. OD værdierne var dog lavere hos disse tæver end hos immuniserede tæver. Både i denne gruppe og i kontrolgruppen blev induceret antistofnivauer i minkhvalpene som følge af infektion (C) ved oral indgivelse af virus, og efterfølgende spredning af virusinfektionen mellem kuldene. ELISA metoden har vist sig at være et anvendeligt redskab til undersøgelse af antistofniveauer efter immunisering af minktæver og efterfølgende infektionsforsøg udført på minkhvalpe født af disse tæver.
Fig.2. Påvisning af antistoffer I hvalpe fra immuniserede og ikke-immuniserede tæver (som beskrevet I materialer og metoder), og mink der er eksperimentelt inficeret med astrovirus. ELISA metoden blev anvendt til at fastlægge antistofniveauer i ugerne efter immunisering og infektion. Tidspunkt for immunisering (hvid pil). Tidspunkt for eksperimentel infektion (rød pil).
c) Test af antistoffer specifikke for mink astrovirus stammende fra svenske og danske minkfarme
94
Serumprøver fra fem problemfarme (farme der har oplevet tilbagevendende alvorlige udbrud af fedtede hvalpe) blev
Faglig Årsberetning 2009
Diarré I fravænningsperioden hos minkhvalpe VII:……..
fundet positive for antistoffer specifikke for MiAstV med varierende og høje OD værdier (>1.0). Et eksempel på resultater fra test af problemfrie farme er vist i Figur 3. Dette tyder på, at farme uden kliniske tegn på udbrud af fedtede hvalpe også har dyr der testes positive
for antistoffer specifikke for MiAstV, men med lavere OD værdier (>0.3<1.0, når 0.3 er valgt som cut-off værdi). Dette indikerer forekomst af subkliniske MiAstV infektioner dvs. infektioner der ikke er ledsaget af kliniske symptomer.
Fig.3. ELISA resultater fra mink sera stammende fra sygdomsfrie farme, samt farme med udbrud af fedtede hvalpe I Danmark og Sverige. Antistoffer påvises også i sera fra sygdomsfrie farme, men med lavere OD værdier.
Konklusioner Fuldlængde mink astrovirus kapsidprotein blev anvendt som basis for udvikling af en ELISA test til påvisning af antistoffer specifikke for for MiAstV. Evaluering af antistofsvar hos mink naturligt inficeret med MiAstV og mink eksperimentelt immuniseret og efterfølgende inficeret med MiAstV har vist, at denne ELISA er et anvendeligt redskab til at fastlægge antistof nivaeu efter infektion eller immunisering. Resultaterne af ELISA analyserne tyder på, at
infektioner med astrovirus er almindeligt forekommende på mink farme, og indikerer at infektionerne præsenterer sig forskelligt på forskellige farme, fra subkliniske til alvorlige kliniske manifestationer. Med henblik på at udvikle testen til anvendelse i rutinediagnostik, er det nødvendigt at teste serumprøver fra farme fri for astrovirus infektion, med henblik på at fastlægge cut-off værdier.
Faglig Årsberetning 2009
95
Ullmann, K., Baule, C., Hammer, A. S., Hammer-Jensen, T. & Czifra, G.
Referencer Baule, C., Ullman, K., Hellman, U., Dietz, H.-H., Englund, H. & Czifra, G: Cloning and Expression of the Capsid Protein of Mink Astrovirus (MiAstV). Faglig Ă&#x2026;rsberetning 2004. Clausen T.N. & Dietz H.H. 2004: Wet kits in mink, a review. Proceedings of VIII Int. Cong. in Fur Animal Prod. Eds:
96
Urlings, B., Spruijt, B., Ruis, M., Boekhorst, L. The Netherlands, 87-91. Czifra. G., C. Mittelholzer, K. O. Hedlund, H.H. Dietz & Englund, L. 2004: Mink astrovirus associated with pre-weaning diarrhoea in mink kits (an update). Proceedings of the VIII Int. Cong. in Fur Animal Prod. Eds: Urlings, B., Spruijt, B., Ruis, M., Boekhorst, L. The Netherlands, p 22.
Faglig Ă&#x2026;rsberetning 2009
Dødsårsager fra fødsel til 1. august. Tove N. Clausen. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Herningvej 112C, 7500 Holstebro. Sammendrag Undersøgelse af dødsårsager hos hvalpe fra 828 kuld i perioden fødsel til 1. august. Resultaterne viser at vi mister langt de fleste hvalpe i forbindelse med fødsel. Ca. en halv hvalp pr kuld er dødfødte. Da det især er de fede tæver der mister hvalpene, skal fodring og huldstyring i vinter og drægtighedsperioden optimeres. Resten af maj dør der ikke mange hvalpe, men når hvalpene begynder at æde ved ca. 4 uger, ser vi diarré og utrivelighed. For at undgå dette er management på farmen utroligt væsentlig, god overvågning, gode strømaterialer, god hygiejne, rolige forhold, optimal kvalitet af foderet, optimal vandforsyning og hurtig indsats ved diarré. Er forholdene ikke i orden risikerer vi ligeledes kannibalisme hos hvalpene. Fra midten af juni er blærebetændelse det overvejende problem, foderet i den periode bør indeholde en overvægt af syredannende komponenter, og vandforsyningen skal optimeres. Clausen, T. N., 2010. Dødsårsager fra fødsel til 1. august. Årsberetning 2009, 97-103. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Summary Investigation on the courses of death among kits from 828 litters in the period from birth to August the first. The results showed that we loose many kits in connection with birth. Around ½ a kit per litter is stillborn. Since especially the fat females loose kits, feeding and control of body score in the winter and pregnancy period should be optimised. The rest of May only a few kits die, but when they start to eat, around 4 weeks of age, some kits gets diarrhoea and become unthrifty. To avoid that management at the farm is very important, good bedding materials, hygiene, optimal food quality, water supply and immediate treatment if there is diarrhoea. If those conditions are not optimal we further risk cannibalism among the kits. From the middle of June bladder infections is the main problem, the feed in that period should have acidifying properties and the water supply should be optimised. Clausen, T. N., 2010. Kit death from birth to August the first. Annual Report 2009, 97103. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: hvalpedød, dieperioden
Baggrund Det største tab af minkhvalpe ses i dieperioden. For at få et bedre redskab til at undgå disse tab, er det nødvendigt at vi kender til årsagsforholdene. Den bedste start på en god dieperiode, er fødsel af mange store og livskraftige hvalpe. Der er imidlertid mange forskellige faktorer, der har indflydelse på dette. Udvælgelse af avlsdyr selekteret for stor kuldstørrelse og høj livskraft hos hvalpene, giver fremgang i avlsresultatet (Einarsson, 1987), hvorimod kuldstørrelse og antal levendefødte hvalpe falder, hvis der udelukkende selekteres for høj kropsvægt (Hansen et al., 2008a, Lagerkvist et al., 1994). God flushing op til parring sikrer at der bliver løsnet mange æg (Tauson &
Forsberg, 1992), og en optimal fodring i drægtighedsperioden, sikrer at disse æg kan udvikle sig optimalt, så tæverne ikke aborterer eller føder svage hvalpe (Clausen & Hammer, 2009; Lefevre & Murphy, 2009). I pelsdyravlen er der mange steder for mange golde tæver, og da 25 - 35 % af de golde tæver har været drægtige (Clausen & Hammer, 2009) bør det være et indsatsområde, gennem optimering af fodring og pasning i drægtighedsperioden, men også gennem optimering af parringssystemer, udvælgelse af avlsdyr, fodring og mannagement i vinterperioden. Kuldstørrelsen på vore farme er som regel god, men der dør en del hvalpe i forbindelse med fødsel.
Faglig Årsberetning 2009
97
Clausen, T. N.
Efter fødsel er der stadig meget der kan gå galt, Hunter (2008) beretter, at på nordamerikanske farme mistes der omkring 20 % af fødte hvalpe fra fødsel til fravænning. Mange faktorer spiler ind, bur forhold og strøelses type (Sønderup et al., 2009; Lund & Malmkvist, 2009; Malmkvist, 2005), fodring og mannagement på farmen samt de forskellige sygdomme der opstår i denne periode. Faktorerne varierer meget mellem farmene og fra det ene år til det andet og er af stor betydning for dødeligheden (Clausen, 2006). For at komme nærmere en forståelse af de sygdomsmæssige problemer i dieperioden, blev samtlige hvalpe fra 828 wildmink tæver, der døde i perioden fra fødsel til 1. august obduceret. Materialer og metoder I wildmink avls gruppen (828 kuld) blev samtlige hvalpe der døde fra fødsel til 1. august obduceret. Der blev samlet døde hvalpe sammen to gange dagligt
for at få så friskt materiale som muligt. Første gang der blev samlet ind var dagen efter tæven havde født. Døde hvalpe blev lagt i plastposer med dato, hal, bur og tævenummer og frosset, indtil samlet obduktion. Efter hvalpene begyndte at æde blev foretaget individuel foderregistrering. Resultater og diskussion I alt 868 hvalpe døde fra fødsel til 1. august, det svarede til 14 % af antal registrerede fødte hvalpe. Sundhedstilstanden på farmen var god i dieperioden, og i forhold til andre opgørelser var dødsfaldsprocenten lav. Hunter (2008) angiver således, at man på nordamerikanske farme mister 20 – 25 % af fødte hvalpe fra fødsel til fravænning (ca. 1. juli). Udregnet på kuldstørrelse mistede vi ca. 1 hvalpe pr kuld (1,05), hvoraf ca. halvdelen (0,57) var dødfødte. Den tidsmæssige fordeling af dødsfaldene ses af (fig. 1).
18,0
16,0
døde i % af total døde i perioden
14,0
12,0
10,0
8,0
6,0
4,0
2,0
dato
Figur 1. Fordelingen af dødsfald hos hvalpe fra fødsel til 1. august.
98
Faglig Årsberetning 2009
31-07-09
24-07-09
17-07-09
10-07-09
03-07-09
26-06-09
19-06-09
12-06-09
05-06-09
29-05-09
22-05-09
15-05-09
08-05-09
01-05-09
24-04-09
0,0
Dødsårsager fra fødsel til 1. august
fødsel (fig. 2). 7,7 % af de fødte hvalpe var dødfødte, det svarer til 54,7 % af de døde hvalpe i hele perioden fødsel til 1. august. Hunter (2008) angiver at dødfødte udgør 50 % af fødte hvalpe i perioden fødsel til fravænning. Det er således i forbindelse med fødsel, at vi mister langt de fleste hvalpe. Hvalpene blev optalt dagen efter fødsel, og da tæven æder en del af de dødfødte hvalpe sammen med efterbyrden, ifølge Gade og Malmkvist (2005) op til 2 hvalpe pr kuld, skal tallene altid ses i sammenhæng med optællingstidspunktet. I det første døgn efter fødsel døde der yderligere nogle hvalpe (fig. 2), og 15,8 % af de hvalpe der blev fundet døde dagen efter fødsel og i første omgang talt op som dødfødte, havde været i live et lille stykke tid.
Goldprocenten i gruppen var 7,7 %. De fleste hvalpe døde i forbindelse med En af grundende til mange dødfødte / svagtfødte hvalpe, kan være dårlig kondition ved fødsel. Hansen & Damgaard (2002) fandt at stereotyperende tæver får flere hvalpe, og Clausen et al. (2007) og Bækgaard et al. (2009) fandt færre levendefødte hvalpe hos tæver der var fede ved fødsel. Bækgaard et al. (2009) viste at en god huldstyring gennem vinteren er nødvendig for at få mange levende og få døde hvalpe ved fødsel. De væsentligste indsatsområder for at få flere hvalpe pr indsat tæve til pelsning er således, at få reduceret goldprocenten gennem avl, optimering af parringssystemer og fodring i drægtigheds-perioden. Dernæst at få reduceret fødselsproblemer gennem udvælgelse af avlsdyr samt omhyggelig huldstyring i vinterperioden.
2,5
% af fødte
2,0
1,5
1,0
0,5
18-maj
16-maj
14-maj
12-maj
10-maj
08-maj
06-maj
04-maj
02-maj
30-apr
28-apr
26-apr
24-apr
0,0
dato dødfødte i pct af fødte hvalpe
døde i pct af fødte hvalpe
Figur 2. Døde og dødfødte hvalpe i perioden fødsel til 19/5 i procent af fødte hvalpe.
I slutningen af maj ses igen en lille stigning i antallet af dødsfald (fig. 1), og igennem juni måned er der lidt flere
døde end i maj. Dødsfaldene i juni skyldtes overvejende diarré (1,9 % af
Faglig Årsberetning 2009
99
Clausen, T. N.
de levende fødte) samt afmagring (1,2
% af de levendefødte) (fig. 3).
0,45 0,40
i %af fødte hvalpe
0,35 0,30 0,25
diarré afmagret
0,20
i alt døde
0,15 0,10 0,05
22-jun
20-jun
18-jun
16-jun
14-jun
12-jun
10-jun
08-jun
06-jun
04-jun
02-jun
31-maj
29-maj
27-maj
25-maj
23-maj
0,00
Dato
Figur 3. Døde hvalpe samt hvalpe med diarré og afmagrede hvalpe i perioden 23/5 til 24/6 i procent af fødte hvalpe.
Diarré forekom hos hvalpe i alderen 25 – 45 dage, og må tilskrives at hvalpene i denne periode skal tilvænne sig fast foder. De afmagrede hvalpe ser overvejende ud til at være status efter diarré samt hvalpe der aldrig er kommet ordentlig i gang med at æde. Dette svarer ikke helt til undersøgelser af Hansen et al. (2008b), der fandt kannibalisme som den væsentligste
dødsårsag i juni måned, og tit et overset problem, fordi de mange gang ikke registreres. En af forskellene mellem de to undersøgelser kan være, at der i vores undersøgelse er skelnet mellem hvalpe der tydeligvis er bidt ihjel af deres søskende eller af tæven, og hvalpe der er ædt efter at de var døde (fig. 4).
0,45
0,40
0,35
i % af fødte hvalpe
0,30 ædes efter død
0,25
bidt af søskende bidt af tæve
0,20
døde total
0,15
0,10
0,05
07-jul
05-jul
03-jul
01-jul
29-jun
27-jun
25-jun
23-jun
21-jun
19-jun
17-jun
15-jun
13-jun
11-jun
09-jun
07-jun
05-jun
03-jun
01-jun
30-maj
28-maj
26-maj
0,00
Dato
Figur 4. Døde hvalpe samt hvalpe ædt efter død, bidt af søskende samt bidt af tæven i perioden 26/5 til 7/7, i procent af fødte hvalpe.
100
Faglig Årsberetning 2009
Dødsårsager fra fødsel til 1. august
Hvalpe ædt efter død af anden årsag (i dette tilfælde oftest diarré), ses især fra begyndelsen af juni indtil juli. Opdelt på alder er det fra hvalpene er 30 til 60 dage. Hvalpe direkte bidt ihjel af deres søskende (0,3 % af levendefødte hvalpe) ses især fra midten af juni til begyndelsen af juli, opdelt på alder er det fra hvalpene er 44 til 55 (68) dage. Det ser således ud til, at når hvalpene begynder at æde fast foder (ca. 4 uger) æder de gerne en af deres søskende, hvis den tilfældigvis dør. Når hvalpene er godt i gang med at æde og tævens mælkeproduktion er ved at ophøre (ca. 6 uger) kan der komme slagsmål mellem søskende, formodentlig på grund af sult eller vandmangel. For dyr i
naturen er det således naturligt forekommende at de afliver deres hvalpe / søskende, hvis der er knaphed på føde. Kannibalisme varierer meget fra farm til farm og fra år til år afhængig af vejr forholdene, fodring og vanding samt generel mannagement. Hvalpe med knust kranie (0,09 % af levendefødte), og således aflivet af tæven, blev i denne undersøgelse observeret 5 gange. Tæverne blev fjernet omkring 23/6. Dødsfald som følge af blærebetændese startede i sidste halvdel af juni måned, ved hvalpe der var 54 dage gamle og derover, og udgjorde indtil 1. august 0,37 % af de fødte hvalpe. (fig. 5).
0,16
i % af fødte hvalpe
0,14 0,12 0,10 0,08 0,06 0,04 0,02
27-jul
25-jul
23-jul
21-jul
19-jul
17-jul
15-jul
13-jul
11-jul
09-jul
07-jul
05-jul
03-jul
01-jul
29-jun
27-jun
25-jun
23-jun
21-jun
19-jun
0,00
dato blærebetændelse
døde total
Figur 5. Døde hvalpe samt hvalpe med blærebetændelse i perioden 19/6 til 28/7 i procent af fødte hvalpe.
Foderforbruget blev registreret hos nogle wildmink tæver i dieperioden (fig. 6), i maj var der en moderat stigning i fodertildelingen, men fra begyndelsen af juni steg foderforbruget markant. Forekomsten af blærebetændelse hæn-
ger således godt sammen med at hvalpene begynder at optage store fodermængder, og en forebyggelse bør starte i første halvdel af juni måned.
Faglig Årsberetning 2009
101
Clausen, T. N.
1600 1400
g / bur / dag
1200 1000 800 600 400 200 0
Dato
Figur 6. Daglig foderoptagelse pr bur for hele farmens wildminkgruppe, kun tæver med 5 hvalpe og mere ved anden tælling og som har født i perioden 27/4 - 3/5 er medtaget. Tæverne blev fravænnede omkring 23/6.
Hansen et al. (2008b) fandt ligeledes få med blærebetændelse i første halvdel af juni, men mange i sidste halvdel, samt i juli. Konklusion Jo flere hvalpe der fødes (jo mindre er de) og jo flere dør der, så vi behøver nok ikke få flere fostre i den enkelte tæve, det væsentlige er at holde liv i dem der fødes og at undgå golde tæver. Over halvdelen af de hvalpe der mistes fra fødsel til 1. august, er i forbindelse med fødslen. Ca. ½ hvalp pr kuld er dødfødt. Da det især er de fede tæver der mister hvalpene, er fodring og huldstyring i vinter og drægtighedsperioden således utrolig væsentlig for at øge antal hvalpe til pelsning. Fra fødsel til dag 28 mistes der ikke mange hvalpe, men når hvalpene begynder at æde, ser vi diarré og utrivelighed. For at undgå dette er management på farmen utroligt væsentlig, god overvågning, gode strømaterialer, god hygiejne, rolige forhold, optimal kvalitet af foderet, optimal vandforsyning og hurtig indsats ved diarré.
102
Er forholdene ikke i orden risikerer vi ligeledes kannibalisme hos hvalpene. Fra midten af juni ser vi blærebetændelse, for at undgå dette skal foderet indeholde en overvægt af syredannende komponenter, og vandforsyningen skal optimeres. Referencer Bækgaard, H., Larsen, P. F., Clausen, T. & Sønderup, M. 2009. Indflydelse af minktævers huld og huldudvikling på kuldstørrelse. Faglig Årsberetning 2008, 123-128, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Clausen, T.N. & Hammer, A.S., 2008. Placental scars in barren mink females. IX International Scientific Congress in Fur Animal Production, Halifax, Nova Scotia, Canada, Aug. 19-23, 32 – 33. Clausen, T. N., Sandbøl, P. & Hejlesen, C., 2007. Huldvurdering af minktæver i vinter- og dieperioderne. Faglig Årsberetning 2006, 181-184, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark.
Faglig Årsberetning 2009
Dødsårsager fra fødsel til 1. august
Clausen, T.N. 2006. Hvad dør mink af gennem et produktionsår, Intern rapport, Temadag 2006, 68-71. Danmarks Jordbrugsforskning, Husdyrbrug nr.2., Sept. Einarsson, E. J., 1987. Selection for litter size in mink II. Direct response in litter size at birth. Norwegian Journal of Agricultural Sciences, 1: 155 – 178. Gade, M. & Malmkvist, J., 2004. Ny viden om minkfødsler. Forskning i relation til praktisk minkproduktion, Temamøde 2004, Intern Rapport nr. 208, 33-42. Forskningscenter Foulum. Gade, M. & Malmkvist, J. 2005. Adfærd omkring fødslen i relation til den tidlige hvalpedødelighed hos mink. Faglig Årsberetning 2004, 7-14, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Hansen B.K., Berg P. & Lund, M.S., 2008a. Genetic variation in litter size and survival of mink kits. Journal of Animal Breeding and Genetics (submitted). Hansen, M.U., Weiss, V., Clausen, T.N., Mundbjerg, B. & Lassén, M. 2008b. Årsager til dødsfald hos minkhvalpe fra juni til oktober. Faglig Årsberetning 2007, 99-107, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og Forskningscenter, Holstebro, Danmark. Hansen, S.W. & Damgaard; B.M. Vinterfodringens betydning for tævers adfærd og velfærd. I: Damgaard,B.M & Hansen, (Red.) Kvalitetsskind fra sunde
2002. minkB.K. mink.
Intern rapport nr. 163, september 2002, 11-19. Hunter, D.B., 2008. Review of factors associated with mink kit mortality. IX International Scientific Congress in Fur Animal Production, Halifax, Nova Scotia, Canada, Aug. 19-23, 28 – 29. Lagerkvist, G., Johansson, K., Lundeheim, N. (1994). Selection for litter size, body weight and pelt quality in mink (Mustela vison): Correlated responses. J. Anim. Sci. 72: 1126-1137. Lefévre, P. & Murphy, B.D., 2008. Physiological constraints on litter size in mink. IX International Scientific Congress in Fur Animal Production, Halifax, Nova Scotia, Canada, Aug. 19-23, 13 – 14. Lund, V. & Malmkvist, J., 2009. Periparturient nest building: quality of the nest, kit survival, maternal stress and behaviour in farmed mink (Mustela vison). Proceedings of the 21st Nordic Symposium of the International Society for Applied Ethology, 19-21 January 2009, Bjerringbro, Denmark Malmkvist, J. 2005. Hvordan tilgodeser vi bedst minks redebygning? Intern rapport 227, 20-31. Danmarks jordbrugsforskning. Sønderup, M., Bækgaard, H., Larsen, P.F. & Clausen, T.N., 2009. Importance of nest box size and material, for litter size – a pilot study. NJF seminar no. 427, Vaasa Finland 2009. Tauson A.-H., Forsberg M., Effects of flushing on LH release in mink, Norw. J. Agric. Sci., Suppl. 9 (1992) 235-241.
Faglig Årsberetning 2009
103
.
104
Faglig Ă&#x2026;rsberetning 2009
Foderforbrugets betydning for urinens pH Tove N. Clausen Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Herningvej 112C, 7500 Holstebro. Sammendrag Til en undersøgelse af foderets betydning for urinens pH blev anvendt 2 x 36 otte uger gamle wildmink han og tæve hvalpe. Der blev udtaget urinprøver til pH måling efter en fasteperiode samt på forskellige tidspunkter efter fodring. Resultaterne viste at faste urin pH for minkhvalpe er i området 6,05 til 6,50. Optagelse af foder påvirker urinens pH afhængig af foderets sammensætning, jo større foderforbrug, jo større påvirkning. En god tid at undersøge urinens pH er ca. 4 timer efter fodring med frisk foder, hvor de har optaget den største mængde. Hvis dyrene har foder tilrådighed hele tiden, vil urin pH ikke komme ned på fasteværdierne, med mindre fodersammensætningen disponerer til lavt urin pH, eller at der tilsættes produkter der sænker urin pH. Det anbefales at urin pH 4 timer efter fodring, befinder sig i området 6,0 til 6,4 idet det er værdierne for faste urin og idet der ikke blev set struvit krystaller under pH 6,4. Clausen, T. N., 2010. Foderforbrugets betydning for urinens pH. Faglig Årsberetning 2009, 105-109. Pelsdyrerhvervets Forsøg- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Summary To an investigation on the importance of the feed for urine pH we used 2 x 36 wildtype male and female mink kits. Urine samples for pH measurement were taken after a fasting period, and at different times after feeding. The results showed, that fasting urine pH is in the area 6.05 to 6.50. Consumption of feed influence the urine pH dependent on feed composition and amount. Urine pH is investigated 4 hours after feeding. If there is feed on the wire all day long, urine pH will not reach fasting level unless the feed composition act in direction of low urine pH or unless substances that lower urine pH is added. It is recommended that urine pH 4 hours after feeding is in the area 6.0 to 6.4. Clausen, T. N., 2010. Importance of feed consumption for urine pH, Annual Report 2009, 105-109. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark.
Keywords: foderoptagelse, urin pH
Baggrund Blærebetændelse forekommer overvejende i juni og juli måned (Hansen et al., 2008), hos hurtigt voksende hanhvalpe, disse æder store mængder foder og skal dermed udskille store mængder affaldsstoffer til urinen. Fodring med korn bevirker at pH i urinen stiger (Clausen & Damgaard, 1999, Case et al., 1995), på grund af store mængder K-salte (Clausen & Wamberg, 1997). Ligeledes vil et højt indhold af vegetabilsk protein øge urin pH, idet vegetabilsk protein indeholder mindre af de svovlholdige aminosyrer, methionin og cystein, end animalsk protein, samt mere K og Mg (Clausen & Damgaard, 1999). Hos ildere og katte er det vist, at planteprotein giver en alkalisk urin (Fox, 1998, Holzworth,
1987). Dyrenes behov for mineraler øges jo heller ikke i samme grad som deres foderoptagelse, og jo større belastningen er med affaldsstoffer / mineraler, jo større er risikoen for infektion og overmætning af urinen, og jo mere betydningsfuld må en skævvridning af mineralbalancen være. Ved nedbrydning af protein i kroppen dannes der ammoniak (NH3) / ammoniumioner (NH4+), disse er skadelige for kroppen, og omsættes i leveren til urinstof før koncentrationen bliver for høj. Urinstof (= urea = carbamid = (NH2)2CO) er ugiftigt og udskilles via nyrerne. Af flere forskellige årsager kan der opstå en infektion i blæren med urea-nedbrydende bakterier (f.eks. staphylokokker (intermedius), pseudo-
Faglig Årsberetning 2009
105
Clausen, T. N.
monas, proteus), disse producerer enzymet urease der hydrolyserer urea under dannelse af ammoniak (NH3, gas) og kuldioxid (CO2). Ammoniak reagerer med vand til OH÷ og ammoniumionen (NH4+), dette bevirker en stigning i urinens pH (urinen bliver basisk / alkalisk) (Case et al., 1995). Høj urin pH øger risikoen for infektion (Lydeking, 1987), idet pH optimum for bakterie vækst er i området 6,6 to 7,5. I en alkalisk urin bliver urinen overmættet med salte og der udfælder krystaller (Nguyen et al., 1979). Ammoniak er toxisk for cellerne i blærevæggen og giver inflamation (ud over den betændelse der allerede er der). Proteinstoffer frigjort ved betændelsesreaktionen danner en matrix som struvit krystallerne bruger til at danne sten ved (reaktionen finder kun sted ved alkalisk pH). Sten kan også opstå som følge af nyreskader der kan give polymerisation af normal urin mucoproteiner eller frigørelse af celle bestanddele (rester), deromkring kan opstå stendannelse (Møller Nielsen, 1956; Nguyen, 1979), de fleste sten 60 – 80 % er dog dannet efter en infektion (Møller Nielsen, 1956). Struvit sten udfælder i alkalisk urin med en pH over 7,0 (Case et al., 1995), men opløses i sur urin med en pH under 6,6 (Taton et al., 1984; Case et al., 1995). For katte anbefaler Case et al. (1995) således at urin pH er i området 6,0 til 6,6 for at undgå stendannelse. I en undersøgelse (Clausen & Damgaard, 1999) blev bl.a. set på sammenhængen mellem urin pH og bundfald i form af struvit krystaller. I urinprøver uden struvit krystaller var pH 6,6 og derunder. De fleste af prøverne med krystaller havde pH over 6,6, krystaller blev dog set ned til pH 6,4 (data ikke vist). Det passer med Ching et al. (1989) der anbefaler at urin pH ved katte skal være under 6,4.
106
På den anden side kan en for høj og for langvarig fodring med syredannende stoffer (stoffer der sænker urin pH), bevirke udvikling af kronisk metabolisk acidose (Ching et al., 1989), hvorfor det anbefales i stedet at give foder med lavt base overskud (BE) på en sådan måde, at foderet indeholder så få basedannende komponenter som muligt, der skal neutraliseres af syredannere. Endelig kan en effekt af en forsuret urin blive dannelsen af en anden stentype calcium oxalat. Urin til pH måling bør udtages 4 timer efter fodring, idet der er maksimal værdi på dette tidspunkt (postprandial alkaline tide) (Spears, 2003). pH bør måles umiddelbart efter udtagning for at undgå bakteriel vækst, og andre faktorer der kan influere på urinens pH bør overvejes. For eksempel er det muligt at stress kan resultere i en alkalisk urin på grund af stress induceret respiratorisk alkalose (Buffington & Chew, 1996). For at få et bedre indtryk af fodringens betydning for urinens pH blev iværksat en undersøgelse af urin pH hos fastede og fodrede minkhvalpe i juni. Materiale og metoder I forsøgsstalden blev 19/6 indsat 36 otte uger gamle wildmink han- og tævehvalpe (født 23, 24 eller 25/4). Hvalpene blev fodret med ”urinsten disponerende foder” (foder med højt kulhydratindhold og vegetabilske proteinkilder, tabel 1). Fodertildelingen blev varieret gennem de følgende 3 dage og urinprøver blev udtaget med jævne mellemrum (tabel 2). Der blev forsøgt udtagning af urinprøver fra både hanner og tæver. Der blev målt urin pH straks efter udtagning med pH papir sticks (Advantec Test Paper, MR pH 5,4 – 7,0, Toyo Roshi Kaisha. Japan) og med pH meter (pH 300 i / set, WTW) i de tilfælde, hvor der var tilstrækkelig urin.
Faglig Årsberetning 2009
Foderforbrugets betydning for urinens pH
Tabel 1. Foderplan
Råvare Industrifisk 8-12 % fedt Fjerkræaff. Farmfood Kartoffelprotein Soyaprotein AK510 Byg poppet Hvede poppet Soyaolie Svinefedt Vit.-bl. Vand Plantal: Energiindhold: kcal/100g MJ/kg MJ/kg tørstof Tørstof, % Energifordeling Aske, % Analysetal: Energiindhold: kcal/100g MJ/kg MJ/kg tørstof Tørstof, % Energifordeling Aske, %
% indhold 40,2 15 3 2,45 10,2 10,2 1,61 0,81 0,2 16,2
179 7,5 17,9 42 30:43:27 2,1
161 6,7 18,2 36,9 29,9:44,5:25,6 1,7
Tabel 2. Fodring og udtagning af urinprøver Dato
Kl. 8–9
22/6
23/6
24/6
25/6
urinprøver, fodring ingen foderrest fodring foderrest indsamlet urinprøver
13 – 14 foder fjernet foderrest indsamlet urinprøver foderrest indsamlet urinprøver fodring
17 – 18
21 - 22
Urinprøver foderrest indsamlet urinprøver fodring
urinprøver fodring foderrest indsamlet urinprøver fodring
Resultater og diskussion Foder Foderets analyserede kemiske sammensætning svarede nogenlunde til det beregnede indhold (tabel 1). Foderforbruget blev ikke registreret på burniveau, idet der gik to dyr i samme bur, og man derfor ikke kan vide, hvem der har ædt hvad, men ædelysten blev vurderet i de enkelte perioder. Efter
fodring kl. 9 d. 23/6, var ædelysten dårlig resten af dagen, dette kunne undre, idet hvalpene havde gået uden foder næsten et døgn. Det skyldes formodentlig håndteringen ved urinudtagningen. På tilsvarende vis ser vi således altid en nedgang i foderoptagelsen, når vi har vejet dyrene. For at undgå det samme skulle ske d. 24/6 blev urinudtagningen kl.8 udeladt. Dyrene åd godt og det vurderes at de i den pågældende periode (kl. 22 d. 23/6 til næste dag kl. 13) åd næsten hvad der svarede til deres dagsration (ca. 250 kcal/dyr). Resten af d. 24/6 var foderoptagelsen begrænset, nok overvejende på grund af håndteringen, men vel også fordi de ikke var sultne. Natten mellem d. 24. og 25. juni åd hvalpene igen nogenlunde. Urinopsamling På alle udtagne urinprøver, blev målt pH med sticks. På de prøver, hvor der var nok urin, blev ligeledes målt med pH meter. Der var en god sammenhæng mellem pH målt med sticks og med pH-meter (corr = 0,92), derfor vil de følgende data være resultaterne fra pH sticks, idet der var betydeligt flere prøver. Da det kan være svært at udtage urinprøver, specielt når det skal gøres ved samme dyr mange gange, blev også udtaget fra tævehvalpe, for at få et større materiale. Ved første udtagning blev køn ikke noteret. Køn blev noteret ved alle de følgende udtagninger, og en undersøgelse af data for hanner og tæver viste at disse ved sticks målingerne lå på samme niveau, på nær for værdierne d. 24/6 kl. 21, hvor der var en lille forskel mellem hanner og tæver. Resultaterne bliver derfor vurderet samlet med forbehold for d. 24/6 kl. 21, hvor tæverne havde lidt højere værdier end hannerne (kun 5 hanner). Urin pH værdierne ses af figur 1.
Faglig Årsberetning 2009
107
Clausen, T. N.
6,90 6,80 6,70
urin pH sticks
6,60 6,50 genn begge køn
6,40 6,30 6,20 6,10 6,00 5,90 kl 8 23/6
kl 13
kl 17
kl 21
kl 13 tid
kl 17
24/6
kl 21
kl 8 25/6
Figur 1. Urin pH værdier. Linjerne angiver + / ÷ standard deviationen.
Urin pH ved den første måling ligger i området 6,2 til 6,3 (6,05 til 6,50). Dyrene er fastet til første udtagning, så det må betragtes som faste pH. Morgenurin hos mennesker har en pH værdi i området 5 – 6 (pers medl.). Derefter blev dyrene tilbudt foder, men på grund af håndteringen åd de ikke særligt meget, og urin pH holdt sig i samme område. Fra d. 23/6 kl. 21 til d. 24/6 kl. 13 blev set en signifikant stigning i urin pH. Dette skyldes at dyrene i denne periode åd den største del af deres daglige foderration, pH værdien på dette tidspunkt må således betragtes som den værdi der er betinget af foderet (postprandial alkaline tide, Spears, 2003). Det skal bemærkes, at foderet var fremstillet med henblik på at få et højt urin pH (høj kulhydrat indhold, vegetabilsk protein frem for animalsk (Clausen & Damgaard, 1999)). Den målte værdi ligger højt i forhold til hvad vi anbefaler, pH var i gennemsnit 6,7. Case et al. (1995)
108
anbefaler at man hos katte skal have en urin pH i området 6,0 til 6,6 for at undgå stendannelse, Ching et al. (1989) anbefaler pH under 6,4. Egne undersøgelser med mink (Clausen & Damgaard, 1999) viste at de fleste urinprøver med krystaller havde pH over 6,6, krystaller blev dog set ned til pH 6,4 (data ikke vist). 34, 6 % af hvalpene havde en værdi over 6,6, og må således betragtes som i risikoområdet (88,5 % havde over 6,4). Urin pH faldt igen signifikant fra kl. 13 til 17, på grund af håndtering af dyrene og dermed mindre foderoptagelse, og at dyrene jo allerede havde ædt en stor del af deres daglige foderration. For en del af hvalpene kom værdierne dog ikke ned på fasteværdierne, fordi dyrene til stadighed æder lidt, når der er foder til rådighed. Fra kl. 21 til næste morgen kl. 8 blev der igen ædt en del foder og urin pH værdierne steg signifikant.
Faglig Årsberetning 2009
Foderforbrugets betydning for urinens pH
Konklusion Faste urin pH for minkhvalpe er i området 6,05 til 6,50. Optagelse af foder påvirker urinens pH afhængig af foderets sammensætning, jo større foderforbrug, jo større påvirkning. En god tid at undersøge urinens pH er ca. 4 timer efter fodring med frisk foder, hvor de har optaget den største mængde. Hvis dyrene har foder til rådighed hele tiden, vil urinen ikke komme ned på fasteværdierne, med mindre fodersammensætningen disponerer til lavt urin pH, eller at der tilsættes produkter der sænker urin pH. Det anbefales at urin pH 4 timer efter fodring, befinder sig i området 6,0 til 6,4 idet det er værdierne for faste urin og idet der ikke blev set struvit krystaller under pH 6,4. Referencer Buffington, C.A.; Chew, D.J. 1996. Intermittent alkaline urine in a cat fed an acidifying diet. J Am Vet Med Assoc, 209, 103-104. Ching, S.V., Fettman, M.J., Hamar, D.W., Nagode, L.A., Smith, K.R., 1989. The effect of chronic dietary acidifycation using ammonium chloride on acid-base and mineral metabolism in the adult cat. Jour. Nutr., 119, 902-915. Case, L.P.; Carey, D.P.; Hirakawa, D.A. 1995. Canine and feline nutrition, Cap: 32. Feline lower urinary tract disease. 357-371. Mosby London. Clausen, T. & Damgaard, B. 1999. Dieperiodefoderets betydning for surhedsgraden i urin hos minkhvalpe. Faglig Årsberetning 1998, 87-94. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og Rådgivningsvirksomhed A/S, Holstebro, Danmark
Clausen, T., Wamberg, S. 1998. Ændringer i urin-pH hos minkhvalpe (79 uger gamle) ved forskellig fodring. Faglig Årsberetning 1997, 67-76, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og Rådgivningsvirksomhed A/S, Holstebro, Danmark. Hansen, M.U., Weiss, V., Clausen, T.N., Mundbjerg, B. & Lassén, M. 2008. Årsager til dødsfald hos minkhvalpe fra juni til oktober. Faglig Årsberetning 2007, 99-107, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og Forskningscenter, Holstebro, Danmark Lydeking, E., 1987. Syre-base balancen. HelseNyt. Møller-Nielsen, I. 1956. Urolithiasis in mink: Pathology and experimental production. Jour. Urology, 75, 4, 603613. Nguyen, H.T.; Moreland, A.F.; Shields, R.P. 1979. Urolithiasis in ferrets (Mustela putorius). Lab. Anim. Sci., 29, 2, 243-245. Pers. medl. Urinstix, U – urinundersøgelse med stix. 2007. Klinisk Biokemisk Afdeling, Regionshospitalet Randers, Regionshospitalet Grenå. Spears, J.K., Grieshop, C.M., Fahey, G.C.Jr., 2003. Evaluation of sodium bisulfate and phosphoric acid as urine acidifiers for cats. Arch Tierernahr, 57 (5) 389-398. Taton, G.F.; Hamar, D.W.; Lewis, L.D.; 1984. Urinary acidification in the prevention and treatment of feline struvite urolithiasis. J. Amer. Vet. Med. Ass., 184, 437-443.
Faglig Årsberetning 2009
109
110
Faglig Ă&#x2026;rsberetning 2009
Undersøgelse af vildtype hvalpesygevirus og DNA vaccination i mink Line Nielsen, Mette Søgaard, Trine Hammer Jensen, Peter Karlskov-Mortensen, Mads Klint Andersen, Tove Dannemann Jensen, Bent Aasted, og Merete Blixenkrone-Møller Laboratorium for Virologi og Immunologi, Institut for Veterinær Sygdomsbiologi, Det Biovidenskabelig Fakultet, Københavns Universitet, Stigbøjlen 7, 1870 Frederiksberg C Sammendrag Vi inokulerede mink med to forskellige hvalpesygevirus – en dansk (DK91) og en amerikansk (Snyder Hill) for at undersøge virulensen af de to vildtype virus. DK91 repræsenter en cirkulerende europæisk vildtype genotype, mens Snyder Hill repræsenterer de gamle amerikanske virus genotyper isoleret før 1960. Vi foretog kliniske og parakliniske undersøgelser af dyrene efter inokulation og fandt at de to vildtype hvalpesygevirus havde forskellig sygdomsudvikling og grad af påvirkning af immunsystemet. Den danske vildtype gav anledning til et markant mildere sygdomsforløb end den amerikanske Snyder Hill virus. Herefter undersøgte vi hvorvidt vaccination af mink med DNA vacciner baseret på gener fra vaccinestammer inducerer krydsbeskyttelse mod cirkulerende europæiske hvalpesygevirusstammer. Resultaterne fra vores undersøgelse viste, at DNA vaccinerne havde en beskyttende effekt mod udvikling af hvalpesyge. Resultaterne kan få betydning for fremtidige vaccinestrategier mod hvalpesyge forårsaget af nye vildtypevirus. Nielsen, L., Søgaard, M., Jensen, T. H., Karlskov-Mortensen, P., Andersen, M. K., Jensen, T. D., Aasted, B., og Blixenkrone-Møller. 2010. Undersøgelse af vildtype hvalpesygevirus og DNA vaccination i mink. Faglig Årsberetning 2009, 111-118, Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Abstract Mink were inoculated with two different Canine distemper viruses (CDV) – a Danish (DK91) virus strain and an American (Snyder Hill) virus strain. DK91 represents a circulating European wildtype genotype, while the Snyder Hill strain represents the American genotypes isolated before 1960. Clinical and paraclinical investigations of the mink were performed after inoculation. The wildtype CDVs investigated provoked marked virulence differences. The Danish wildtype showed a mildly virulent course in our natural host model, in contrast to the acute, severe disease outcome in the Snyder Hill challenged mink. Furthermore, we investigated if DNA vaccine consisting of the genes from vaccine strains induced cross-protection against circulating European CDV. Our results indicate that DNA vaccine-induced immunity protected the mink against disease development. Further work on DNA vaccines against circulating wildtype CDVs could lead to new and safer strategies to control and to prevent distemper. Nielsen, L., Søgaard, M., Jensen, T. H., Karlskov-Mortensen, P., Andersen, M. K., Jensen, T. D., Aasted, B., and Blixenkrone-Møller. 2010. Investigation of wildtype canine distemper virus and DNA vaccination in mink. Annual Report 2009, 111-118, Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark Keywords: Hvalpesygevirus, DNA vaccination, beskyttelse, mink,
Indledning Hvalpesygevirus (synonymer: hundesygevirus, Canine distemper virus, CDV) er årsag til en af de vigtigste smitsomme sygdomme hos mink, fritte, hund og andre rovdyr. Hvalpesygevirus kan forårsage akut generaliseret letalt forløbende sygdom med kliniske
symptomer fra luftvejene, mavetarmkanalen og centralnervesystemet (Dahl et al. 2004). En væsentlig faktor for dødeligheden er sekundære opportunistiske infektioner som følge af den virusinducerende hæmning af immunsystemet (Greene, 2006).
Faglig Årsberetning 2009
111
Nielsen, L., Søgaard, M., Hammer-Jensen, T., Karlskov-Mortensen, P., Andersen, M. K., Jensen, T. D., Aasted, B. & Blixenkrone-Møller, M.
Hvalpesygevirus er et Morbillivirus tilhørende Paramyxoviridae familien (Faquet et al. 2005). Morbillivirus slægten består desuden af mæslingevirus (MV) hos menneske, kvægpestvirus (RPV) hos klov-bærende dyr, pest hos små drøvtyggere (PPRV), sælpestvirus (PDV) og delfin og marsvine morbillivirus (DMV og PMV) (Blixenkrone-Møller, 1994). Hvalpesygevirus er et negativt enkeltstrenget RNA-virus, hvis genom er omsluttet af en kappe, hvori det receptor-bindende hæmagglutinin protein (H) og fusionsproteinet (F) sidder. Begge disse proteiner har en betydning for virus indtrængen i værtscellen. Immunsvar imod H proteinet og det indre N protein har betydning for sygdomsbeskyttelse hos mink (Jensen et al. 2009, Nielsen et al. 2009a, Dahl et al. 2004). På grund af det brede værtsspektrum blandt dyr i den vilde fauna er det i modsætning til det nært beslægtede mæslingevirus, ikke realistisk at udrydde hvalpesygevirus. Derfor er basisvaccination af hvalpepopulationen afgørende for at beskytte såvel det enkelte individ som hunde- og minkpopulationerne som helhed (Greene, 2006, Blixenkrone-Møller, 1993). Til forebyggelse mod hvalpesyge bruges en vaccine, der indeholder levende virus i en svækket form. Men selvom disse levende vacciner har reduceret sygdomsforekomsten i pelsdyrproduktionen og blandt hunde, er de ikke effektive under alle forhold. For eksempel kan de antistoffer, der overføres fra moderen til hvalpen primært med kolostrum og modermælken hæmme vaccinen, så der ikke induceres et immunrespons, der beskytter hvalpen mod hvalpesyge. En anden ulempe ved de levende svækkede vacciner er risikoen for at de ændres og derved kan blive sygdomsfremkaldende. Det er derfor nødvendigt at udviklet nye mere effektive og sikrere
112
vacciner. DNA vacciner indeholder intet infektiøst og kan dermed ikke fører til infektion eller sygdom. Men endnu vigtigere er, at DNA vacciner mod hvalpesyge tilsyneladende kan prime et immunrespons i hvalpe med maternelle antistoffer (Jensen et al. 2009, Griot et al. 2004). I det følgende beskrives de sygdomsfremkaldende egenskaber af to forskellige vildtyper af hvalpesygevirus og den beskyttende effekt af en DNA vaccine i mink mod cirkulerende hvalpesygevirus. Materiale og metoder Dyr De 28 vild mink (Neovision vison) tæver, der indgik i studierne, var ved forsøgsstart 10 – 12 måneder gamle. Studierne blev udført på Pelsdyravlernes Forskningsfonds forsøgsfarm ved Roskilde. Dyrene blev passet og tilset i overensstemmelse med gældende regler for forsøgsdyr. Ved forsøgs-afslutning eller ved opståen af kliniske sygdom på hvalpesyge blev minkene aflivet. Aflivningen foregik på bedøvede mink med pentobarbital. Infektions studie 5 mink blev inokuleret med 1.0x106 TCID50 af Snyder-Hill organhomogenat (Gillespie et al. 1958) og 4 mink blev inkuleret med 1,6x106 TCID50 af DK91 organhomogenat (Blixenkrne-Møller et al. 1993). 9 kontrol mink fik organhomogenate lavet udfra ikke inficerede mink. Homogenaterne blev indgivet intraperitonealt og intranasalt/ intraconjuktivalt på bedøvede mink (Nielsen et al. 2009b). DNA vaccine 4 mink blev vaccineret to gange med en DNA vaccine bestående af plasmider (pVIJ), der udtrykte enten det receptorbindende protein H gen (pVIJ-H) eller det indre nucleoprotein N gen (pVIJ-N) (Nielsen et al. 2009a, Dahl et al. 2004).
Faglig Årsberetning 2009
Undersøgelse af vildtype hvalpesygevirus og DNA vaccination i mink
4 kontrol mink fik indgivet tomme plasmider (pTom). I undersøgelsen indgik også 2 mink, der ikke blev vaccineret. De bedøvede minkene blev vaccineret intradermalt og intramuskulært (Nielsen, 2009, Nielsen et al. 2009a, Dahl et al. 2004). Alle 10 mink blev efterfølgende belastet med 1,6x106 TCID50 af DK91 organhomogenat 3 uger efter den sidste vaccination.
al.2009b). Alle mink belastet med Snyder Hill viste et eller flere kliniske symptomer svarende til hvalpesyge, såsom depression, øjenbetændelse, diarre eller kramper. To mink blev aflivet under den akutte infektion på grund af svær kliniske sygdom. Derimod observerede vi ingen markante kliniske tegn på hvalpesyge blandt mink belastet med DK91.
Prøver og analyser Der blev taget blodprøver før og efter belastningsinfektionen med vildtype hvalpesygevirus. Lymfocyttælling blev fortaget på lyseret heparinstabiliseret blod og analyseret ved flowcytometri, hvor lymfocytter og monocytter blev opsamlet i et forward-scatter-versusside-scatter diagram (Jensen et al. 2003). Virusantigen i Ficoll-Paque oprensede perifere blod mononukleære celler (PBMC) og vævspræparater af lungevæv, milt og blære epitel blev påvist ved immunofluorescens (BlixenkroneMøller, 1989). Virusnukleinsyre i hjernevæv blev påvist ved RT-PCR teknik (Dahl et al. 2004). Dyrenes virusspecifikke antistofproduktion blev målt i cellekultur(Blixenkrone-Møller et al. 1991) og cytokinproduktion (IFN-γ, TNF-α og IL-4) i lymfocytter blev undersøgt ved immuncytokemiske undersøgelser på stimulerede lymfocytter ved flowcytometri (Pedersen et al. 2002).
Udviklingen af lymfopeni og viræmi Mink belastet med Snyder Hill udviklede drastisk fald i antallet af lymfocytter i blodbanen (figur 1A), der er et velkendt fænomen under en akut virulent hvalpesygevirus infektion. Hos mink inficeret med DK91 faldt lymfocyttallene kun kortvarigt trods massive infektion af lymfocytter i disse mink (figur 1B). Hovedsaglige lymfocytterne og i mindre grad af monocytterne blev angrebet af virusinfektionen. En uge efter belastning med DK91 var op til 74% af lymfocytterne positive for virus antigen, mens 14% af monocytterne var antigen positive (figur 1B).
Resultater - Undersøgelse af vildtype hvalpesygevirus infektioner i mink Kliniske tegn på hvalpesygevirus Vi belastede mink med enten en nyere dansk vildtype hvalpesygevirus (DK91) (Blixenkrone-Møller et al., 1993) eller med en ældre amerikansk vildtype virus (Snyder Hill) (Gillespie et al. 1958). De to vildtype hvalpesygevirus havde forskellig sygdomsudvikling (Nielsen et
Påvirkningen af immunresponset Vi undersøgte hvilken grad de to vildtype virus påvirkede immunsystemet. Alle mink inficeret med DK91 udviklede et solidt virusspecifikt antistofrespons 2 uger efter belastningen, hvorimod antistofresponset hos minkene inficeret med Snyder Hill udviklede sig langsommere (figur 1C). Påvirkningen af de to vildtype virus på det celle-medierede immunrespons blev undersøgt ved at bestemme de IFN-γ-, TNF-α- og IL-4- producerende lymfocytter i blodet ved flowcytometri (Nielsen et al 2009a). Under begge vildtype infektioner påviste vi at lymfocytterne kunne producere et IFNγ, TNF-α og IL-4 respons (figur 1D, E, F).
Faglig Årsberetning 2009
113
Nielsen, L., Søgaard, M., Hammer-Jensen, T., Karlskov-Mortensen, P., Andersen, M. K., Jensen, T. D., Aasted, B. & Blixenkrone-Møller, M.
Lymfopeni
3000
Snyder-Hill Mock
2500 2000 1500 1000 500 0 0
TNF- α respons
D Positive lymfocytter (%)
Antal lymfocytter per l blod
A
1
2
40 30 20
Snyder Hill DK91 Mock Mock
0 0
3
60 40 20 0 1 2 Uge efter belastning
3
Positive lymfocytter (%)
Antigen-positive celler (%)
Lymfocytter Monocytter
Snyder Hill DK91 Serie2 Serie3 Serie4 Serie6 Serie7 Serie8 Serie9
2
3
*
30 *
20 10 0
F Positive lymfocyter (%)
Virusspecifik antistof titer (log10)
4
40
0
C Virusspecifikt antistofrespons
3
2
IFN - γ respons
E
80
1
Uge efter belastning
Viræmi
100
*
10
Uge efter belastning
B
*
1 2 Uge efter belastning
3
respons IL-4 IL-4 respons
40 30
*
20 10 0
0
1
2
3
Uge efter belastning
1
0 0
0
1
2
3
4
Uge efter belastning Figur 1. A: Udviklingen af lymfopeni efter belastning af mink med Snyder Hill. Ikke-virusbelastede mink (mock) udviklede ikke lymfopeni. B: Udviklingen af viræmi efter belastning med DK91. C: Virusspecifikt antistofrespons efter belastning med Snyder Hill eller med DK91. D, E og F: Cytokinrespons i den akutte fase af vildtype hvalpesygevirus infektioner. TNF-α- (D), IFN-γ- (E) og IL-4- (F) producerende lymfocytter efter belastning af mink med Snyder Hill eller med DK91 sammenlignet med lymfocytter fra ikke-virusbelastede mink. Ved * og ∆ er der en signifikant (p<0.05) forskel mellem virusbelastede mink og ikke-virus belastede mink. Antallet af lymfocytter per µl blod, antallet af antigenpositive celler og cytokinrespons blev bestemt ved flowcytometri, hvor lymfocyt- og monocyt-populationerne blev opsamlet i et forwards-scatter-versus-side-scatter dot plot i en henholdsvis lymfocyte gate og en monocyte gate. For Snyder Hill er antallet af dyr (n) = 5 (undtagen uge 3, hvor n = 3), for DK91 er n = 4 og for mock grupperne er n = 5 eller n = 4. Figuren er modificeret efter Nielsen et al. 2009, J. Gen. Virol. 90: 2157-2165.
114
Faglig Årsberetning 2009
Undersøgelse af vildtype hvalpesygevirus og DNA vaccination i mink
Oversigt over DNA vaccination belastning 1.vac 2.vac DK91 inkulation 0
58 Day
Gruppe
DK91
Antal dyr
pCDV-H/-N
+
n =4
+
n =4 n =2
pTom Ikke-vaccineret
B
+
80
4
pCDV-H/-N pTom
3 2 1 0
D pCDV-H/-N pTom
60 40 20 0 1 2 Uge efter belastning
58
-35 -21 0 1 2 3 6 14 22 29 Dage efter vaccination og belastning
Viræmi 100
% positive lymfocytter
Forsøgsslut
Vaccine-induceret antistofrespons
Antistof titer (log10)
-35 -21
C
3
% positive lymfocytter
A
IFN-γ respons 50
IFN-γ pCDV-H/-N(1) pCDV-H/-N(2) pCDV-H/-N(3)
pTom
25
0 0
6
9 16 23 35 Dage efter belastning
55
pCDV-H/-N(1)
Dag 0
Dag 6
IgG
Figur 2. A: Fire mink blev vaccineret to gange med 2 ugers interval med plasmider pVIJ (p) udtrykkende hvalpesygevirus hæmagglutinin (H) og nucleoprotein (N) gener (pCDV-H/-N) og 4 mink blev vaccineret med tomme plasmider (pTom). To mink forblev ikke vaccineret. Alle 10 mink blev belastet med vildtype hvalpesygevirus (DK91) 3 uger efter sidste vaccination. B: Udviklingen af massiv viræmi i de ikke DNA-vaccinerede mink (pTom) i forhold til de DNA vaccinerde mink (pCDV-H/-N). C: Virusspecifik antistofrespons efter to vaccinationer med plasmider udtrykkende viral H og N (pCDV-H/-N) eller tomme plasmider (pTom) dag -35 og - 21 og belastning med DK9 dag 0. D: Tidligere IFN-γ respons af lymfocytter i PBMC fra de DNA vaccinerede mink (pCDV-H/-N) i forhold til mink vaccineret med tomme plasmider (pTom). Figuren er modificeret efter Nielsen et al. 2009, Vaccine 27(35): 4791-4797.
Forebyggende DNA vaccination yder beskyttelse mod cirkulerende vildtype hvalpesygevirus Vi valgte at undersøge om DNA vaccination af mink kunne beskytte mod cirkulerende hvalpesygevirus ved at belaste med DK91 vildtypen. Minkene blev vaccineret to gange med plasmider kodende det virale H protein og plasmider kodende for virale N
protein. Kontrolmink blev vaccineret med tomme plasmider (figur 2A). Beskyttelse mod udvikling af hvalpesyge 3 uger efter den sidste DNA vaccination blev minkene belastet med vildtype virus (figur 2A). Ingen af de DNA vaccinerede mink udviklede kliniske tegn på hvalpesyge efter belastning,
Faglig Årsberetning 2009
115
Nielsen, L., Søgaard, M., Hammer-Jensen, T., Karlskov-Mortensen, P., Andersen, M. K., Jensen, T. D., Aasted, B. & Blixenkrone-Møller, M.
hvorimod vi observerede kliniske tegn på hvalpesyge såsom øjenbetændelse og betændelse omkring snude og trædepuder hos ikke-vaccinerede mink og mink vaccineret med tomme plasmider (Nielsen at al. 2009a). Yderligere fandt vi, at DNA vaccinen beskyttede mod udviklingen af svær viræmi (figur 1B og 2B). Immunrespons Vi undersøgte det virusspecifikke antistof svar og det cellemedierede immunsvar ved at følge cytokinresponset i PBMC efter belastningen med vildtype virus (Nielsen et al. 2009a). De DNA vaccinerede mink udviklede et tidligere virusspecifikt antistofrespons (figur 2C) og cellemedierede (IFN-γ) respons (figur 2D) efter belastning med den danske vildtype virus sammenlignet med mink, der havde modtaget tomme plasmider. Diskussion og konklusion Vi undersøgte sygdomsudvikling, immunrespons og beskyttelse mod infektion efter belastning med vildtype hvalpesygevirus i mink. Først karakteriserede vi sygdomsbilledet ved de to forskellige vildtype hvalpesygevirus, nemlig den ældre amerikanske Snyder Hill stamme og den nyere danske DK91 stamme. De to vildtypevirus var markant forskellige med hensyn til udviklingen af klinisk sygdom, graden af viræmi og omfanget af lymfopeni under den akutte infektion. DK91-vildtypen viste en markant lavere akut virulens end Snyder Hill vildtypen. Overraskende fandt vi et omvendt forhold mellem den akutte virulens og omfanget af viræmi, idet mink belastet med Snyder Hill udviste alvorlig sygdom, men havde en mildere grad af viræmi. Dette kan skyldes at højt virulente virus som Snyder Hill medfører en hurtig ødelæggelse af de virusinficerede lymfocytter og deraf drastisk lymfopeni og mindre grad af
116
viræmi i modsætning til mindre virulente virus som DK91. Videre undersøgelser er nødvendige for at afdække mekanismerne bag sygdomsudviklingen for forskellige vildtypevirus. På trods af tilstedeværelsen af immunsuppression producerede lymfocytterne et cytokinrespons (TNF-α, IFN-γ, and IL-4) startende en uge efter virusinfektionen. I modsætning til tidligere studier i fritter påviste vi cytokinrespons i mink uafhængig af graden af sygdomsudvikling (Svitek and von Messling 2007, von Messling et al. 2006). Resultaterne af vores DNA vaccine studier i mink peger på, at forebyggende hvalpesygevirus DNA vaccination kan yde beskyttelse mod klinisk sygdom og svær viræmi forårsaget af vildtypevirus. Endvidere påviste vi et tidligere indsættende virusspecifikt antistofrespons og et IFN-γ respons i lymfocytter i de DNA vaccinerede mink i forhold til de ikke DNA vaccinerede mink. Disse resultater kan få betydning for fremtidige vaccinestrategier mod hvalpesyge forårsaget af nye vildtype virus. Undersøgelser af det beskyttende immunrespons i mink mod hvalpesygevirus samt undersøgelser af DNA vacciner der kan gennembryde maternel immunitet har endvidere komparativ betydning for infektioner med det tæt beslægtede mæslingevirus hos børn. Referencer Blixenkrone-Møller, M. 1993: Biological properties of phocine distemper virus and canine distemper virus. APMIS Suppl., 36, 20-26 Blixenkrone-Møller, M. 1989. Detection of intracellular canine distemper virus antigen in mink inoculated with an attenuated or a virulent strain of canine distemper virus. Am. J. Vet. Res. 55 (9): 1616-1620.
Faglig Årsberetning 2009
Undersøgelse af vildtype hvalpesygevirus og DNA vaccination i mink
Blixenkrone-Møller, M., Bolt, G., Gottschalck, and Kenter, M. 1994. Comparative analysis of the gene encoding the nucleocapsid protein of dolphin morbillivirus reveals its distant evolutionary relationship to measles virus and ruminant morbillivirus. J. of Gen. Virol. 75, 2829-2834. Blixenkrone-Møller, M., Svansson, V., Have, P., Örvell, C., Appel, M., Pedersen, I. R., Dietz, H. H., Henriksen, P., 1993. Studies on manifestations of canine distemper virus infection in an urban dog population. Vet. Microbiol. 37, 163-173. Blixenkrone-Møller, M., Pedersen, I. R., Appel, M. J., Griot, C. 1991. Detection of IgM antibodies against canine distemper virus in dog and mink sera employing enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). J. Vet. Diagn. Invest. 3: 3-9. Dahl, L., Jensen, T. H., Gottschalck, E., Karlskov-Mortensen, P., Jensen, T. D., Nielsen, L., Andersen, M. K., Buckland, R., Wild, T. F., and Blixenkrone-Møller, M. 2004. Immunization with plasmid DNA encoding the hemagglutinin and the nucleoprotein confers robust protection against a lethal canine distemper virus challenge. Vaccine 22(27-28): 3642-3648. Faquet, C.M., Mayo, M.A., Maniloff, J., Desselberger, U., Ball, L.A., 2005. Virus Taxonomy: The Classification and Nomenclature of Viruses.The Eighth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses, 609. Elsevier Academic Press, Amsterdam. Gillespie, J. H., Baker, A., Burger, J., Robson, D., Gilman, D., 1958. The immune response of dogs to distemper virus. Cornell Vet. 48, 103-126.
Greene, C.E., Appel, M.J., 2006. Canine distemper. In: Greene, C.E. (Ed.), Infectious diseases of the dog and cat, 25-41. Saunders Elsevier, St.Louis, Missouri. Griot, C., Moser, C., Cherpillod, P., Bruckner, L., Wittek, R., Zurbriggen, A., Zurbriggen, R. 2004. Early DNA vaccination of puppies against canine distemper in the presence of maternally derived immunity. Vaccine 22, 650-654. Jensen, T. H., Nielsen, L., Aasted, B., and Blixenkrone-Møller, M. 2009. Early life DNA vaccination with the H gene of canine distemper virus induces robust protection against distemper. Vaccine 27 (38): 5178-5183. Jensen, P. V., Castelruiz, Y., Aasted, B. 2003. Cytokine profiles in adult mink infected with Aleutian mink disease parvovirus. J. Virol. 77, 7444-7451. Nielsen, L. 2009. Host response during acute canine distemper virus infections in naïve and DNA immunized mink. Pdh.D. Thesis. Laboratory of Virology, Department of Veterinary Disease Biology, Faculty of Life Science, University of Copenhagen. Nielsen, L., Søgaard, M., KarlskovMortensen, P., Jensen, T. H., Jensen, T. D., Aasted, B., and BlixenkroneMøller, M. 2009a. Humoral and cellmediated immune responses in DNA immunized mink challenged with wildtype canine distemper virus. Vaccine 27(35): 4791-4797. Nielsen, L., Søgaard, M., Jensen, T. H, Andersen, M. K., Aasted, B., and Blixenkrone-Møller, M. 2009b. Lymphotropism and host responses during acute wild-type canine distemper virus infections in a highly susceptible natural host. J. Gen. Virol. 90: 21572165
Faglig Årsberetning 2009
117
Nielsen, L., Søgaard, M., Hammer-Jensen, T., Karlskov-Mortensen, P., Andersen, M. K., Jensen, T. D., Aasted, B. & Blixenkrone-Møller, M.
Pedersen, L. G., Castelruiz, Y., Jacobsen, S., Aasted, B. 2002. Identification of monoclonal antibodies that cross-react with cytokines from different animals species. Vet. Immunol. Immunopathol. 88, 111-122. Svitek, N., von Messling, V. 2007. Early cytokine mRNA expression profiles predict Morbillivirus disease outcome in ferrets. Virologi 362, 404-410. Von Messling, Svitek, N., Cataneo, R. 2006. Receptor (SLAM [CD150])
118
recognition and the V protein sustain swift lymphocyte-based invasion of mucosal tissue and lymphatic organs by morbillivirus. J. Virol. 80, 6084-6092. Tak Vi takker Dansk Pelsdyravlernes Forskningsfond, Forskningsrådet for Teknologi og Produktion og Det Biovidenskabelige Fakultet, Københavns Universitet for økonomisk støtte samt Jørgen Østergaard, Leon Langli og Klaus Hartmann for hjælp.
Faglig Årsberetning 2009
Undersøgelse af nye vildtyper af hvalpesygevirus Line Nielsen1), Trine Hammer Jensen2), Anne S. Hammer2), Ashley C. Banyard3), Tom Barrett3) og Merete Blixenkrone-Møller1) 1)
Laboratorium for Virologi, Institut for Veterinær Sygdomsbiologi, Det Biovidenskabelig Fakultet, Københavns Universitet, Stigbøjlen 7, 1870 Frederiksberg C 2) Afdeling for Fjerkræ, Fisk og Pelsdyr, Veterinærinstituttet, Danmarks Tekniske Universitet, Hangøvej 2, 8200 Århus N 3) Institute for Animal Health, Pirbrigth Laboratory, Ash Road, Woking, Surrey Gu24 ONF, United Kingdom Sammendrag Hvalpesygevirus og den nært beslægtede sælpestvirus har overlappende værtspektrum og har begge forårsaget sygdom blandt landlevende og vandlevende rovdyr. Vi har isoleret virus RNA fra nye vildtyper af hvalpesygevirus, udført nukleinsyre sekventering og bestemt vildtypernes slægtskab i fylogenetiske undersøgelser. Analyser af vildtype virus omfatter virus isoleret direkte fra angrebne rovdyr (mink, grævling, ilder, husmår, mår og spættede sæler) i perioden fra 2000 – 2003. Vores resultater viser, at virusangrebne landlevende rovdyr var angrebet af hvalpesygevirus, som fylogenetisk set adskiller sig markant fra sælpestvirus. Direkte epidemiologisk sammenhæng mellem de undersøgte danske fra landlevende rovdyr og sæler kunne dermed udelukkes. Nielsen, L., Jensen, T. H., Hammer, A. S., Banyard, A. C., Barrett, T., BlixenkroneMøller. 2010. Fylogenetisk undersøgelse af nye vildtype af hvalpesygevirus. Faglig Årsberetning 2009, 119-125. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Abstract Canine distemper virus and the closely related phocine distemper virus have an overlapping host range and both have induced disease among terrestrial and marine carnivores. We have characterized the distemper virus among the wildlife in Denmark from 2000 to 2003. We have isolated viral RNA from the new wildtype CDVs, performed nucleic acid sequencing and determined the relatedness of the wildtypes. We found that the isolated virus from the investigated terrestrial carnivores (mink, badger, European polecat, beech marten and pine marten) were canine distemper virus, which was phylogeny separated from virus isolated from diseased seals. Our results revealed no direct epidemiological link between the two distemper viruses isolated from distemper cases among land-living carnivores and the marine carnivore. Nielsen, L., Jensen, T. H., Hammer, A. S., Banyard, A. C., Barrett, T., BlixenkroneMøller. 2010. Phylogeny investigation of new wildtypes of canine distemper virus. Annual Report 2009, 119-125. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark.
Keywords: Hvalpesygevirus, sælpestvirus, fylogenetisk undersøgelse
Indledning Hvalpesygevirus (Canine distemper virus, CDV) og sælpestvirus (Phocine distemper virus, PDV) er nært beslægtede og betegnes samlet distemper virus. Disse virus tilhører begge Mæslingegruppe (Morbillivirus) (Nielsen et al. 2009, Nielsen 2009). Hvalpesygevirus er årsag til en af de vigtigste smitsomme sygdomme hos hund, fritte og mink og er vidt udbredt i verden (Greene og Appel, 2006, Mar-
tella et al. 2006). Hvalpesygevirus kan også fører til sygdom hos vandlevende rovdyr og er blevet konstateret i sæler (Forsyth et al. 1998, Grachev et al. 1989, Osterhaus et al. 1989). Hvalpesygevirus og sælpestvirus har overlappende værtspektrum, forårsager sammenlignelige akutte infektioner (Blixenkrone-Møller et al. 1989). Begge distemper virus kan, ligesom mæslingevirus, isoleres i celler udtrykkende
Faglig Årsberetning 2009
119
Nielsen, L., Hammer-Jensen, T., Hammer, A. S., Banyard, A. C., Barrett, T. & Blixenkrone-Møller, M.
morbillivirusreceptoren SLAM (Signaling lymphocyte aktivation mole-cule)
(Nielsen et al. 2008, Tatsuo et al. 2001) (figur 1).
A
B
Figur 1. Syncytie dannelse i cellekultur der udtrykker vildtype morbillivirus receptoren (SLAM) inficeret med sælpestvirus efter 96 timer (A) og (B) kontrol celler. Syncytiet består af en kæmpecelle med flere kerner, der er opstået ved sammen-smeltning af inficerede celler.
Sælpestvirus blev påvist første gang i 1988 og forårsagede en epidemi hvor over 18.000 europæiske sæler omkom (Osterhaus and Vedder, 1988, Dietz et al. 1989). I 2002 kom endnu et udbrud af sælpest og igen startede epidemien på øen Anholt i Kattegat (Jensen et al. 2002). Resultater fra efterfølgende undersøgelser peger på, at sælpestvirus under den første epidemi overførtes til mink på nærliggende kystnære minkfarme (Blixenkrone-Møller et al. 1992, Blixenkrone-Møller et al. 1990). Med denne baggrund har vi i nærværende arbejde isoleret distemper virus direkte fra en række angrebne danske mink og vildtlevende rovdyr for at undersøge om vi kunne påvise tegn på smitteoverførsel med distemper virus mellem sæler og landlevende rovdyr i tidsrummet omkring sælpestudbruddet i 2002.
120
Materiale og metoder I alt 35 vævsprøver fra 21 mink (Neovision vison) fra minkfarme, 5 grævlinge (Meles meles), 4 ildere (Mustela putorius), 2 husmår (Martes foina), 1 mår (Martes martes) og 2 spættede sæler (Phoca vitulina) blev undersøgt (figur 2). Total RNA blev isoleret fra vævsprøverne med RNA now (Ozyme, France) og cDNA blev syntetiseret ved revers transkription med random priming (Dahl et al. 2004) efterfulgt af PCR med morbillivirus primersæt specifikt for en nukleotid sekvens i det virale phoshoprotein (Barrett et al. 1993). PCR blev udført ved 94oC i 30 sekunder, 35 cykler af (94oC i 20 sekunder, 50oC i 30 sekunder, 72oC i 1 minut) og 72oC i 7 min. Oprensede PCR produkter blev sekventeret og fylogenetiske analyser blev derefter foretaget (Nielsen et al.
Faglig Årsberetning 2009
Undersøgelse af nye vildtyper af hvalpesygevirus
2009) med programmerne ClustalX (Thompson et al.1997) og Phylip (Tamura et al. 2007, Felsenstein, 2006).
Resultater For nærmere karakterisering af virus isoleret fra angrebne rovdyr opsamlet forskellige steder i Danmark (figur 2),
COASTLINE OF
Spættede sæl Grævling Ilder DENMARK Husmår Mår Mink
PDV/DK02,w1 PDV/DK02,w2
Jylland
Sjælland Fyn
PDV/DK88
«
0
20
40
80 Kilome te rs
Figur 2. Oversigt over de virusangrebne rovdyr (21 farmmink, 5 grævlinge, 4 ildere, 2 husmår, 2 spættede sæler og 1 mår), der blev opsamlet mellem juni 2000 og april 2003. Virus RNA blev isoleret direkte fra de virusangrebne rovdyrs væv og et stykke af det virale phosphoprotein gen blev sekventeret. Vildtypernes slægtskab blev efterfølgende analyseret fylogenetisk for at undersøge om der kunne påvises tegn på smitteoverførsel med distemper virus mellem sæler og landlevende rovdyr.
sekventerede vi et fragment af det virale phosphoprotein gen, som efterfølgende blev analyseret fylogenetisk (figur 3). Den fylogenetiske analyse blev foretaget ved hjælp af metoden Neighbour-Joining. Som det ses i det
fremkomne fylogenetiske træ (figur 3) forgrener virus isolaterne fra de landlevende rovdyr sig (fremhævet med sort i figur 3) sammen med tidligere undersøgte hvalpesygevirus isolater.
Faglig Årsberetning 2009
121
CDV/Løve/Tanzania94 01 rn/USA U SA75 askebjø d/ CDV/v /Hun CDV
CDV /H u
CD
CDV/Hund/Jpn07
CDV/Hund/Ger93
CD
86
K 01 M ink5/D Mink3/DK00 M ink7 /DK 02 M Ild ink6/ DK 0 er 2 /D K0 3
0
V/F ritt
e/G er 8 9
CDV/M
/DK vling Gr æ /DK00 Mår 2 Mink1/DK00
V/H un pn9 d/D 2 K9 år/G er9 7 1C CDV/Sæ l/Si88 CDV/Onderstepoort 97 99 acc v i b No c ac v r Fe
nd/J
Mink2/DK00 M M inink4/DK 00 k8/ DK 02
Nielsen, L., Hammer-Jensen, T., Hammer, A. S., Banyard, A. C., Barrett, T. & Blixenkrone-Møller, M.
100
PDV/DK02,w2 PDV/DK02,w1 PDV-1/DK02 PDV/DK88 PDV/NL88 PDV-1/NL02
0.005 0.005
Figur 3. Slægtskabet mellem undersøgte vildtyper af distemper virus. Det NeighbourJoining fylogenetisk træ lavet ud fra det virale phosphoprotein gen (329 base par) af angrebne rovdyr i Danmark fra 2000 til 2003 (fremhævet med sort) og af en række virus isolater publiseret i Genebank (PDV/DK02 (AF525287); PDV/NL02 (AF525288), CDV/Dog/Jpn07 (AB252714), CDV/Dog/Jpn92 (AB028915), CDV/Marten/Ger97 (AJ582389), CDV/Dog/Ger93 (AF259549), CDV/Ferret/Ger89 (AF259550), PDV/NL88 (AF525289), CDV/Seal/Si88 (AF259551), CDV/Lion/Tanzania94 (U76708), CDV/Racoon/USA01 (AY465925), CDV/Dog/ USA75 (AF164967), CDV/Onderstepoort, (AF305419)). Kun bootstrap-værdier over 85 er vist. Figuren er fra Nielsen et al. 2009, Virus Research 44(1-2):326.
På den anden side grupperer de to analyserede virus isolater fra to spættede sæler strandet fra danske farvande i 2002 (PDV/DK02,w1 og w2) sammen med tidligere undersøgte sæl122
pestvirus isolater. Forgreningen mellem gruppen af hvalpesygevirus og gruppen af sælpestvirus har en bootstrapværdi (der repræsentere den relative sandsynlighed for den pågældende forgre-
Faglig Årsberetning 2009
Undersøgelse af nye vildtyper af hvalpesygevirus
ning) på 100. Tilsvarende træstruktur blev fundet ved undersøgelse med alternative fylogenetiske metoder, maximum likelihood og parisimony (data er ikke vist), vidner om robustheden af undersøgelserne. Det vil sige, at de virusangrebne landlevende rovdyr var inficeret med hvalpesygevirus som fylogenetisk var markant forskellig fra sælpestvirus. Diskussion og konklusion Vi har udført fylogenetiske analyser på vildtype virus isoleret direkte fra angrebne rovdyr i Danmark. I alt blev der undersøgt 35 væv fra virusangrebne rovdyr, der inkluderede farmmink, grævling, ilder, husmår, mår og spættet sæl. Vores sekvensresultater og fylogenetiske træer har vist, at virus isoleret fra angrebne landlevende rovdyr er markant forskellige fra sælpestvirus. Med andre ord kan vi udelukke en direkte epidemiologisk sammenhæng mellem de undersøgte distemper virus fra sæler og fra landlevende rovdyr. Det kan selvfølgelig ikke endeligt udelukkes på baggrund af vores relativt begrænsede prøvemateriale, at smittet til landlevende dyr er sket i begrænset omfang i forbindelse med 2002 epidemien blandt sæler, eller visa versa at hvalpesygevirus har smittet sæler, som det er blevet beskrevet tidligere (Forsyth et al. 1998, Blixenkrone-Møller et al, 1992, Blixenkrone-Møller et al. 1990, Grachev et al. 1989, Osterhaus and Vedder, 1988). Hvalpesygevirus brede værtspektrum blandt rovdyr i den vilde fauna og det overlappende værtspektrum mellem hvalpesygevirus og det nært beslægtede sælpestvirus gør det reelt umuligt at udrydde disse typer morbillivirus infektioner i dyr, i modsætning til de bestræbelser der pågår blandt andet i WHO-regi for at udrydde mæslingevirusinfektioner hos menneske (Grais et al. 2007). Basisvaccination af og efter-
følgende regelmæssig vaccination er derfor afgørende for beskyttelse af minkog hunde populationerne (Greene, 2006, Blixenkrone-Møller, 1993). Specielt fordi globalisering og åbne grænser forøger risikoen for nye udbrud af hvalpesygevirus, f.eks som vi oplevede med den smittede importerede spanske gadehund denne sommer. Derfor er det vigtig at sikre udviklingen af mere effektive vacciner mod hvalpesygevirus, der i højere grad er effektive tidligt i hvalpenes liv, hvor maternelle antistoffer kan blokere for de gængse vacciners effekt. Referencer Barrett, T., Visser, I.K., Mamaev, L., Goatley, L., van Bressem, M.F., Osterhaus, A.D., 1993. Dolphin and porpoise morbilliviruses are genetically distinct from phocine distemper virus. Virology 193, 1010-1012. Blixenkrone-Møller, M. 1993: Biological properties of phocine distemper virus and canine distemper virus. APMIS Suppl., 36, 20-26 Blixenkrone-Møller, M., Svansson, V., Appel, M.J., Krogsrud, J., Have, P., Örvell, C., 1992. Antigenic relationships between field isolates of morbilliviruses from different carnivores. Arch. Virol. 123, 279-294. Blixenkrone-Møller, M., Svansson, V., Örvell, C., Have, P., 1990. Phocid distemper virus--a threat to terrestrial mammals? Vet. Rec. 127, 263-264. Blixenkrone-Møller, M., Svansson, V., Have, P., Bøtner, A., Nielsen, J., 1989. Infection studies in mink with sealderived morbillivirus. Arch. Virol. 106, 165-170. Dahl, L., Jensen, T.H., Gottschalck, E., Karlskov-Mortensen, P., Jensen, T.D., Nielsen, L., Andersen, M.K., Buckland,
Faglig Årsberetning 2009
123
Nielsen, L., Hammer-Jensen, T., Hammer, A. S., Banyard, A. C., Barrett, T. & Blixenkrone-Møller, M.
R., Wild, T.F., Blixenkrone-Møller, M., 2004. Immunization with plasmid DNA encoding the hemagglutinin and the nucleoprotein confers robust protection against a lethal canine distemper virus challenge. Vaccine 22, 3642-3648. Dietz, R., Heide-Jørgensen, M. P., Härkönen, T. 1989. Mass deaths of harbour seals (Phoca vitulina) in Europe. Ambio 18, 258-264. Felsenstein, J. PHYLIP (Phylogeny Inference Package) version 3.66. 2006. Department of Genome Sciences and Department of Biology, University of Washington, Seattle, WA, USA.
Jensen, T. H., Van de Bildt, M., Dietz, H. H., Holmen Andersen, T., Hammer, A. S., Kuiken, T., Osterhaus, A. 2002. Another phocine distemper outbreak in Europa. Science 297, 209. Martella, V., Cirone, F., Elia, G., Lorusso, E., Decaro, N., Campolo, M., Desario, C., Lucente, M.S., Bellacicco, A.L., Blixenkrone-Møller, M., Carmichael, L.E., Buonavoglia, C., 2006. Heterogeneity within the hemagglutinin genes of canine distemper virus (CDV) strains detected in Italy. Vet. Microbiol. 116, 301-309.
Forsyth, M.A., Kennedy, S., Wilson, S., Eybatov, T., Barrett, T., 1998. Canine distemper virus in a Caspian seal. Vet. Rec. 143, 662-664.
Nielsen, L. 2009. Host response during acute canine distemper virus infections in naïve and DNA immunized mink. Pdh.D. Thesis. Laboratory of Virology, Department of Veterinary Disease Biology, Faculty of Life Science, University of Copenhagen.
Grachev, M.A., Kumarev, V.P., Mamaev, L.V., Zorin, V.L., Baranova, L.V., Denikina, N.N., Belikov, S.I., Petrov, E.A., Kolesnik, V.S., Kolesnik, R.S., Dorofeev, V.M., Beim, A.M., Kudelin, V.N., Nagieva, F.G., Sidorov, V.N., 1989. Distemper virus in Baikal seals. Nature 338, 209.
Nielsen, L., Actander, P., Jensen, T. H., Dietz, H.-H., Hammer, A.S., Banyard, A. C., Barrett, and Blixenkrone-Møller, M. 2009. Genetic diversity and phylogenetic analysis of the attachment glycoprotein of phocine distemper viruses of the 2002 and 1988 epizootics. Virus Res. 144(1-2):323-8.
Grais, R. F., Dubray, C., Gerstl, S., Guthmann, J. P., Djibo, A., Nargaya, K. D., Coker, J., Alberti, K. P., Cochet, A., Ihekweazu, C., Nathan, N., Payne, L., Porten, K., Sauvageot, D., Scimmer, B., Fermon, F., Burny, M. E., Hersh, B. S., Guerin, P. J. 2007. Unacceptably high mortality related to measles epidemics in Niger, Nigeria, and Chad. Plos. Med. 4(1), e24.
Nielsen, O., Smith, G., Weingartl, H., Lair, S., Measures, L., 2008. Use of a slam transfected vero cell line to isolate and characterize marine mammal morbilliviruses using an experimental ferret model. J. Wildl. Dis. 44, 600-611.
Greene, C.E., Appel, M.J., 2006. Canine distemper. In: Greene, C.E. (Ed.), Infectious diseases of the dog and cat, 25-41. Saunders Elsevier, St.Louis, Missouri.
Osterhaus, A. D. M. E., Groen, J., UydeHaag, F. G. C. M., Visser, I. K. G., Van de Bildt, M. W. G. et al. 1989. Distemper virus in Baikal seals. Nature. 338, 209-210.
124
Osterhaus, A. D. M. E., and Vedder, E. J. 1988. Identification of virus causing recent seal deaths. Nature 335, 20.
Faglig Årsberetning 2009
Undersøgelse af nye vildtyper af hvalpesygevirus
Tatsuo, H., Ono, N., Yanagi, Y., 2001. Morbilliviruses use signaling lymphocyte activation molecules (CD150) as cellular receptors. J. Virol. 75, 58425850. Thompson, J.D., Gibson, T.J., Plewniak, F., Jeanmougin, F., Higgins, D.G., 1997. The CLUSTAL_X windows interface: flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools. Nucleic Acids Res. 25, 4876-4882.
Tak Vi takker Dansk Pelsdyravlernes Forskningsfond, Forskningsrådet for Teknologi og Produktion og Det Biovidenskabelige Fakultet, Københavns Universitet for økonomisk støtte. Vi skylder en stor tak til Hans-Henrik Dietz og Tove Dannmann Jensen. Vi takker Andreas Petersen og Peter Arctander for hjælp med de fylogenetiske analyser.
Faglig Årsberetning 2009
125
.
126
Faglig Ă&#x2026;rsberetning 2009
DNA vaccination beskytter minkhvalpe mod hvalpesyge T. Hammer Jensen*, L. Nielsen, B. Aasted, M. Blixenkrone-Møller Laboratorium for Virologi og Immunologi, Institut for Veterinær Sygdomsbiologi, Det Biovidenskabelige Fakultet, Københavns Universitet, Stigbøjlen 7, 1870 Frederiksberg C *Nuværende adresse: Afdeling for Pels og Vildtsygdomme, Veterinærinstituttet, Danmarks Tekniske Universitet, Hangøvej 2, 8200 Århus Sammendrag NA vaccination er en lovende vaccinationsstrategi med mulighed for at gennembryde maternel overført immunitet. Dette er den første undersøgelse, der beskriver DNA vaccination af minkhvalpe. Minkhvalpe (n=8) blev vaccineret med DNA plasmider kodende for hæmagglutinin proteinet (H) af hvalpesyge virus. De DNA vaccinerede minkhvalpe havde påviselige mængder af virus neutraliserende (VN) antistoffer efter 2 vaccinationer. Efter 3 vaccinationer havde alle minkhvalpene høje niveauer af VN antistoffer, som holdt sig stabile i 4 måneder. De DNA vaccinerede mink viste sig at have rejst en immunitet, der ydede beskyttelse mod den efterfølgende smittebelastning med dansk hvalpesyge vild type virus. Minkene var beskyttet mod viræmi, lymfopeni og klinisk sygdom. T-celle immunresponset i de vaccinerede mink blev boostet af den eksperimentelle smittebelastning med hvalpesygevirus, hvilket indikerer, at vaccinen primede et hukommelsesimmunrespons. Jensen, T. H., Nielsen, L., Aasted, B. & Blixenkrone-Møller, M. 2010. DNA vaccination beskytter minkhvalpe mod hvalpesyge. Faglig Årsberetning 2009. 127-133. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og Forsknings Center, Holstebro, Danmark. Abstract DNA vaccination is a promising vaccination strategy with potentials for inducing immunity in young individuals because of the possibility to overcome maternally derived antibodies. However, the capacity of a DNA vaccine to induce immunity against CDV in young mink without maternal antibodies has so far not been described. In this study young mink kits (n=8) were vaccinated with DNA plasmids encoding the viral haemagglutinin protein (H) of Canine distemper virus (CDV). Virus neutralising antibodies (VN) were induced after 2 immunisations and after the third immunisation all kits had high VN antibody titres which remained for more than 4 months until challenge inoculation. The DNA vaccinated mink were protected against viremia, lymphopenia and clinical disease after challenge inoculation with a recent wild type strain of CDV. The T-cell immune response of the vaccinated mink was boosted by challenge inoculation indicating that the vaccine primed a memory response. Jensen, T. H., Nielsen, L., Aasted, B. & Blixenkrone-Møller, M. 2010. DNA vaccination protects mink kits against distemper. Annual Report 2009. 127-133. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: Hvalpesyge virus, DNA vaccine, mink
Indledning Hvalpesygevirus også kaldet distempervirus (CDV) forårsager en meget smitsom og ofte dødelig sygdom hos mink, hund og andre beslægtede arter (Appel 1969). Selvom Danmark de sidste 2 år har været forskånet for udbrud af hvalpesyge var der i 2006 en del udbrud og i 2007 for første gang i mange år tillige et udbrud på Sjælland. De eksisterende levende svækkede vacciner har generelt reduceret antallet af distemper tilfælde (Carmichael 1999). Maternelle antistoffer kan inter-
ferere med levende svækkede vacciner og dermed begrænse eller inhibere et vaccine induceret immunrespons (Welter et al. 2000). DNA vaccinen til immunisering mod hvalpesygevirus indeholder et gen der har afgørende betydning for at inducere et beskyttende immun-respons overfor den pågældende sygdom. Dette gen klones ind i et plasmid, som man vaccinerer med. Denne type vacciner har store potentialer blandt andet for at kunne gennembryde maternel immunitet. En anden stor
Faglig Årsberetning 2009
127
Jensen, T. H., Nielsen, L., Aasted, B. & Blixenkrone-Møller, M.
fordel ved DNA vacciner er, at de er meget sikre at anvende. Der ikke risiko for at de kan forårsag sygdom fordi DNA vaccinerne kun indeholder et sygdomsgen og ikke selve agens. Tidligere har vi vist, at DNA vaccination med hæmagglutinin (H) genet og nukleo (N) genet af hvalpesyge kan inducere solid beskyttelse mod virulent challenge inokulation af voksne mink (Dahl et al. 2004, Nielsen et al. 2009b). Udenlandske forskere har vist at DNA vaccination af hunde med fusion (F), H og N genet kan inducere et immunrespons (Griot et al. 2004) og reducere omfanget af sygdom efter smitte af hunde med virulent virus (Cherpillod et al. 2000). DNA vaccination af helt unge minkhvalpe er indtil nu først beskrevet i år (Jensen et al. 2009). Her beskrives hvordan helt unge minkhvalpe blev vaccineret med kun H genet fra CDV Onderstepoort vaccine stammen. Samt hvordan disse hvalpe efterfølgende i en alder af 6½ måneder var beskyttet mod sygdom, viræmi og lymfopeni efter eksperimentel hvalpesyge infektion. A
1. vacc
2. vacc
3 uger
Materiale og metoder Mink Fire drægtige mink (Neovison vison) blev købt fra GT Mink, Danmark og indsat på forsøgsfarmen ved Roskilde. Minkene var fri for plasmacytose, CDV og parvovirus enteritis. Redekasserne blev tilset 2 gange dagligt i fødselsperioden. Hvalpenes alder blev defineret ud fra den morgen kuldet blev registreret. De 18 hvalpe blev fravænnet som foreskrevet i lovgivningen. Pasning og forsøg var i overensstemmelse med Dyreforsøgs-tilsynets bestemmelser. DNA vaccination Minkene blev vaccineret med en plasmid vektor indeholdende CDV H genet (pCDV-H) fra Onderstepoort vaccine stammen (Sixt et al. 1998, Dahl et al. 2004, Nielsen et al. 2009b). En anden gruppe mink blev vaccineret med tomt plasmid (pEmpty). En trejde gruppe mink forblev uvaccinerede. Forsøget er skitseret i figur 1.
3. vacc
4. vacc
Infektion
Eksperiment slut
6 uger
9 uger
27 uger/ 6.5 måneder
32 uger
Fødsel
5 dage
B
Vaccine
Smitte
Antal mink
pCDV-H
Mink/DK2004
8
pEmpty
Mink/DK2004
5
Ingen
Mock
5
Alder
Figur 1. Eksperimentelt design. (A) Minkhvalpene blev vaccineret første gang 5 dage efter fødsel og derefter når de var 3, 6 og 9 uger gamle. (B) Mink der fik tomt plasmid (pEmpty) og ikke-vaccinerede (mock inokulerede) mink blev inkluderet i forsøget som kontrol dyr. Alle mink med undtagelse af mock inokulerede blev smittet 6,5 måneder gamle med hvalpesyge.
Minkene blev vaccineret 4 gange. Den første vaccination blev givet da minkene var 5 dage gamle. Den initiale dosis var 200 µg af pCDV-H og blev opdelt i 2 doser. Den første dosis på 70 µg blev givet intradermalt. Den næste dosis på 128
130 µg blev injiceret intramuskulært. Til injektionerne blev brugt 27 G 0,5 ml hypodermiske kanyler (Terumo, Sverige). De intradermale injektioner blev givet i henholdsvis quadriceps og tibialis musklen i begge bagben.
Faglig Årsberetning 2009
DNA vaccination beskytter minkhvalpe mod hvalpesyge
Kombinationen af intradermal og intramuskulær injektion blev valgt fordi denne kombination i tidligere forsøg viste sig, at inducere solidt immunrespons (Dahl et al. 2004). Den næste vaccination blev givet i 3 ugers alderen under bedøvelse med xylazin og ketamin. Dyrene blev bedøvet for at sikre korrekt intradermal og intramuskulær injektion samt for at beskytte dyrene mod eventuelt ubehag i forbindelse med injektionerne. Den anden vaccination bestod af 400 µg fordelt på 140 µg intradermal og 260 µg intramuskulært. Den tredje og fjerde vaccination blev givet da minkene var henholdsvis 6 og 9 uger gamle. Dosis og applikation var tilsvarende den anden vaccination. Blodprøver til undersøgelse for VN blev udtaget ved 3 og 6 ugers alderen fra halevenen og ved 9 ugers alderen fra vena cephalica i forbenet. Eksperimentel infektion og prøveudtagning Da minkene var 6½ måneder gamle blev de eksperimentelt inficeret med en nyere virus stamme, benævnt Mink/DK2004 (Jensen et al. 2007, Jensen et al. 2009). Mink/DK2004 stammede fra et hvalpesyge udbrud i farmede mink i Danmark i 2004. Anne Sofie Hammer, Veterinærinstituttet DTU indsamlede lungevæv fra dette udbrud. Dette væv blev passeret 2 gange i mink (data er ikke vist). Milt og lymfeknuder fra mink inkluderet i disse passager blev homogeniseret og suspenderet i 20 % RPMI 1640 indeholdende penicillin og streptomycin. En samlet infektionsdosis på 3x105 TCID50 blev fordelt på injektioner intraperitonealt og intramuskulært (20 %) suspension. Desuden blev en mindre dosis fordelt på øjen- og næseslimhinden (10 % suspension). Under infektion var minkene bedøvet som tidligere beskrevet. En gruppe mink ”mock inoculerede” fik ikke Mink/DK2004 CDV stammen, men fik et
organ homogenat fra raske dyr. Denne kontrol gruppe blev under hele infektionsforsøget holdt adskilt fra gruppen af mink inficeret med Mink/DK2004. Minkene blev tilset dagligt med henblik på kliniske symptomer. Syge mink blev aflivet med det samme de udviklede symptomer. Aflivning foregik med pentobarbital i ketamin/xylazin bedøvelse som beskrevet ovenfor. Blodprøver blev udtaget til undersøgelse for VN antistoffer, differentialtælling, isolation af perifere blod mononukleære celler (PBMC) og interferon-gamma (IFN—γ) producerende perifere blod leukocytter (PBL). Disse blodprøver blev taget fra vena cephalica før infektion og 2, 6, 10, 14, 21, 28 og 35 dage efter infektion. Eksperimentet blev afsluttet med aflivning af alle mink 35 dage efter infektion. Organprøver (lunge, luftrør og hjerner) blev transporteret på tøris og gemt ved -80ºC indtil RT-PCR blev udført. En svaberprøve fra øjen og næseslimhinden blev udtaget 14 dage efter smitte. Svaberne blev transporteret i RPMI 1640 indeholdende 200 IU/ml penicillin og 200 µg/ml streptomycin på is og gemt ved -80ºC indtil virus isolation og titrering. Laboratorie undersøgelser VN antistoffer blev målt i Veroceller ved hjælp af TCID50 format microtiter assay (Blixenkrone-Møller et al. 1991) med visse modifikationer (Nielsen et al. 2009a, Jensen et al. 2009). Viræmi blev undersøgt ved hjælp af immunofluorescens test af PBMC som tidligere beskrevet (Blixenkrone-Møller et al. 1989, Nielsen et al. 2009a, Jensen et al. 2009). Lymfopeni og procent IFN-γ producerende PBL blev bestemt ved hjælp af flow cytometri (Aasted et al. 2002, Jensen et al. 2009, Nielsen et al. 2009a). Detektion af virus nukleinsyre (RNA) ved hjælp af RT-PCR blev udført som beskrevet af (Dahl et al. 2004; Nielsen et al. 2009, Jensen et al. 2009).
Faglig Årsberetning 2009
129
Jensen, T. H., Nielsen, L., Aasted, B. & Blixenkrone-Møller, M.
Virus titrering af svaberprøverne blev udført som beskrevet tidligere (Jensen et al. 2009).
DNA vaccine induceret immunrespons Efter DNA vaccination af hvalpe 5 dage gamle og igen 21 dage gamle med pCDV-H, havde 6 ud af 8 DNA vaccinerede mink udviklet målbare VN antistoffer. Efter tredje DNA vaccination var gennemsnittet af VN antistof titrer af alle mink >1:100 (figur 2). VN antistof titrerne forblev >1:100 uden signifikant variation mellem 9 og 27 ugers alderen. De 5 hvalpe der fik tom vektor (pEmpty) udviklede først VN antistoffer efter infektion (figur 2). DNA vaccinen beskyttede mod infektionDe 8 DNA vaccinerede mink var beskyttet mod viræmi og lymfopeni og der kunne ikke påvises systemisk spredning af virus eller virusudskillelse fra øjen- eller næseslimhinder (tabel 1).
Virus neutraliserende antistof titer (log10)
5 pCDV-H pEmpty 4
3
2
1
0 3w
6w
Alder i uger (w)
9w
0d
2d
6d 10d 14d 21d 29d 35d
Dage efter infektion (d)
Figur 2. Serum CDV neutraliserende antistof titer blev induceret efter vaccination af unge mink- hvalpe og efterfølgende challenge inokulation
Resultater
Tabel 1. Beskyttende effekt af tidlig vaccination af minkhvalpe med H genet af hvalpesygevirus
Diagnostiske parametre efter infektion Kliniske hvalpesyge symptomer
Mink vaccineret med pCDV-H
Mock inokulerede mink
0/8
2/5
Alvorlig lymfopeni
0/8
5/5
CDV antigen i PBMC
0/8
5/5
CDV RNA i luftveje
0/8
4/5
CDV RNA i hjernen
0/8
4/5
Virus udskillelse
0/8
4/5
Mink vaccineret med pEmpty
Hver boks repræsenterer en mink i gruppen vaccineret med tomt plasmid En hvid boks indikerer negative værdier f.eks ingen symptomer eller ingen RNA. En grå box indikerer mellem værdier. For lymfopeni indikerer det et lymfocyttal på mellem 350 og 500 lymfocytter pr mikroliter blod. For viral udskillelse indikerer det at virus udskillelsen var tilstede, men med en titer på mindre end 5 TCID50/ml En udfyldt boks indikerer positive værdier (symptomer/lymfopeni/antigen etc.)
Der blev ikke observeret kliniske symptomer hos nogen af de DNA vaccinerede mink. I modsætning hertil udviklede minkene, der kun havde fået tom plasmid, viræmi 6 dage efter infektion. Viræmien fortsatte i hele infektionsforløbet. Lymfopeni kunne påvises 6 dage efter infektion og var mest alvorlig 14 dage efter infektion (tabel 1). Lymfopenien 130
persisterede ligeledes til aflivning. Virus RNA kunne påvises i lunger og hjerne i 4 ud af 5 mink der havde fået tom plasmid (tabel 1). Disse 4 mink udskilte også virus fra øjen- og næseslimhinderne (tabel 1). To af minkene der havde fået tomt plasmid udviklede lethargi, konjunctivitits, diarre, respirationsvejs-symptomer og dyskeratose af trædepuderne 3-4 uger efter infektion.
Faglig Årsberetning 2009
DNA vaccination beskytter minkhvalpe mod hvalpesyge
Disse 2 mink havde også den højeste virus udskillelse (780 TCID50/ml og 5.500 TCID50/ml). Den ene mink, hvori der ikke kunne påvises viralt RNA, udskilte heller ikke virus (tabel 1).
net med de ”mock inoculerede” mink. Dette indikerer, at DNA vaccinen inducerede en beskyttende T-celle immunitet mod distemper (figur 3). Den gennemsnitlige procent af IFN-γ producerende PBL fra mink der fik tomt plasmid nåede det maksimale niveau 28 dage efter infektion og var signifikant højere end hos de DNA vaccinerede mink (figur 3).
T-celle immunitet De DNA vaccinerede mink udviste ikke nogen statistisk forskel i procent af IFN-γ producerende PBL sammenlig-
Procent IFN-γ positive PBL
A 25,0
Mock pCDV-H
20,0
pEmpty
15,0
*
10,0
*
*
5,0
*
0,0 0
6
10
14
21
28
35
Dage efter infektion
B
IFN-γ
IgG1 iso-type kontrol
Figur 3. (A) Procent af IFN-γ producerende PBLs. Der var en signifikant forskel (*) mellem procent af IFN-γ producerende PBL fra DNA vaccinerede mink og mink vaccineret med pEmpty 6, 21, 28 og 35 dage efter infektion. (B) (B) IFN-γ antistof profil af mink immuniseret med pCDV-H 6 dage efter infektion og den korresponderende kontrol profil af IgG1 iso-type kontrollen.
Konklusion En infektionsmodel i mink blev etableret med en nyere CDV stamme, Mink/DK2004. Denne model blev brugt til at evaluere den beskyttende effekt af DNA vaccination af minkhvalpe. Dette er også, så vidt vi ved, det første publicerede studie hvor kun 5 dage
gamle hvalpe er blevet vaccineret. DNA plasmider kodende for CDV H proteinet blev anvendt i vaccinen fordi H proteinet har vist sig at spille en væsentlig rolle i induktion af neutraliserende antistoffer mod CDV i voksne mus og mink (Dahl et al. 2004, Sixt et al. 1998). Vi har her vist, at DNA plasmider indeholdende CDV H genet
Faglig Årsberetning 2009
131
Jensen, T. H., Nielsen, L., Aasted, B. & Blixenkrone-Møller, M.
kan inducere produktion af VN antistoffer i de unge minkhvalpe. DNA vaccinen inducerede beskyttende immunitet overfor infektion med en nyere dansk vild type hvalpesygevirus, Mink/DK2004. Videre studier af DNA vacciner i nyfødte dyr er vigtige for at undersøge muligheder for at reducerer antallet af vaccinationer samt nødvendige dosis af DNA. Referencer Aasted, B., Bach, P., Nielsen, J., Lind, P. 2002. Cytokine profiles in PBMC and lymph node cells from piglets infected in utero with porcine reproductive and respiratory syndrome virus. Clinical Diagnostic Laboratory Immunology. 9(6): 1229-34. Appel, M.J.G. 1969: Pathogenesis of canine distemper. American Journal of Veterinary Research, 30 (7), 1167-20. Blixenkrone-Møller, M. 1989: Detection of intracellular canine distemper virus antigen in mink inoculated with an attenuated or a virulent strain of canine distemper virus. American Journal of Veterinary Research, 50 (9), 1616-20. Blixenkrone-Møller, M., Pedersen, I.R., Appel, M.J., Griot, C. 1991. Detection of IgM antibodies against canine distemper virus in dog and mink sera emplying enzyme-linked immunosor-bent assay (ELISA). Journal of Veterinary Diagnostic Investigations. 3(1):3-9.
and canine distemper virus. APMIS Suppl., 36, 20-26. Carmichael LE. 1999. Canine viral vaccines at a turning point – a personal perspective. Advanced Veterinary Medicine. 41:289-307. Cherpillod P, Tipold A, Griot-Wenk M, Cardozo C, Schmid I, Fatzer R, et al. 2000.DNA vaccine encoding nucleocapsid and surface proteins of wild type canine distemper virus protects its natural host against distemper. Vaccine. 18(26):2927-36. Dahl, L., Jensen, T. H., Gottschalck, E., Karlskov-Mortensen, P., Dannemann Jensen, T., Nielsen, L., Klindt Andersen, M., Buckland, R., Wild, T. F. & Blixenkrone-Møller, M. 2004: Immunization with plasmid DNA encoding the hemagglutinin and the nucleoprotein confers robust protection against a lethal canine distemper virus challenge. Vaccine. 22: 3642-3648. Griot, C., Moser, C., Cherpillod, P., Bruckner, L., Wittek, R., Zurbriggen, A., Zurbriggen, R. 2004. Early DNA vaccination of puppies against Canine distemper in the presence of maternally derived immunity. Vaccine. 22:651-655. Jensen, T. H., Lund, M., Jensen, T. D., Aasted, B. & Blixenkrone-Møller, M. 2006. Infektionsmodel i mink med ny vildtype af hvalpesygevirus. Faglig Årsberetning 2005, 133-138.
Blixenkrone-Møller, M., Svansson, V., Appel, M., Krogsrud, J., Have, P. & Ôrvell, C. 1992. Antigenic relationships between field isolates of morbilliviruses from different carnivores. Archives of virology, 123, 3-4, 279-94.
Jensen, T.H., Nielsen, L., Aasted, B., Blixenkron-Møller, M. 2009. Early life DNA vaccination with the H gene of Canine distemper virus induces robust protection against distemper. Vaccine. 27(38):5178-83.
Blixenkrone-Møller, M. 1993: Biological properties of phocine distemper virus
Nielsen L, Søgaard M, Jensen TH, Andersen MK, Aasted B, BlixenkroneMøller M. 2009a. Lymphotropism and
132
Faglig Årsberetning 2009
DNA vaccination beskytter minkhvalpe mod hvalpesyge
host responses during acute wild-type canine distemper virus infections in a highly susceptible natural host. Journal of General Virology. 9:2157-65. Nielsen L, Søgaard M, KarlskovMortensen P, Jensen TH, Jensen TD, Aasted B, Blixenkrone-Møller M. 2009b. Humoral and cell-mediated immune responses in DNA immunized mink challenged with wild-type canine distemper virus. Vaccine.27(35):4791-7. Sixt N, Cardoso A, Vallier A, Fayolle J, Buckland R, Wild TF. 1998 Canine distemper virus DNA vaccination induces humoral and cellular immunity and protects against a lethal intracerebral challenge. Journal of Virology.72(11):8472-6.
Welter J, Taylor J, Tartaglia J, Paoletti E, Stephensen CB. 2000 Vaccination against canine distemper virus infection in infant ferrets with and without maternal antibody protection, using recombinant attenuated poxvirus vaccines. Journal of Virology ;74(14):6358-67. Tak Vi takker Danske Pelsdyravlernes Forskningsfond og Det Biovidenskabelige Fakultet, Københavns Universitet for finansiering. Tak til Anne Sofie Hammer for virus isolat, gennemlæsning mv. Tak til Tove Dannemann Jensen, Jørgen Østergaard, Klaus Hartmann, Leon Langli for hjælp med forsøget.
Faglig Årsberetning 2009
133
134
Faglig Ă&#x2026;rsberetning 2009
Undersøgelser af tyggemuskelbetændelser hos mink Anne Sofie Hammer1, Trine Hammer Jensen1, Charlotte Mark Salomonsen1, Jakob le Fèvre Harslund1, Lena Rangstrup Christensen1, Mariann Chriel1, Tove Clausen2 1 DTU Veterinærinstituttet, Afdeling for Pelsdyr, Fjerkræ og Fisk, Hangøvej 2, 8200 Århus, Danmark 2
Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og Forskningscenter, Herningvej 112C, 7500 Holstebro Sammendrag Nekrotiserende og eosinofil myopati i tyggemusklerne, blev første gang diagnosticeret hos minkhvalpe i Danmark i august 2008. I de følgende måneder blev sygdommen konstateret på i alt 13 farme i den sydvestlige del af Danmark. I 2009 optrådte sygdommen på 6 farme. I alt 202 minkhvalpe med myopati indgik i denne undersøgelse. Histopatologi viste nekrotiserende myositis med fragmentering, hyalinisering og atrofi af muskelfibre. Det cellulære respons i muskulaturen varierede fra et primært eosinofil til hovedsageligt mononukleært celleinfiltrat. Differentialtælling af blodprøver fra to mink viste forhøjede antal eosinofile. Sygdommen forekom hos en stor variation af farvetyper, hvilket gør det usand-synligt at sygdommen er direkte arvelig, men der kan være genetisk relaterede faktorer, der påvirker sygdomsforløbet. Der blev foretaget undersøgelser med henblik på at påvise årsagen til sygdommen, herunder undersøgelser for specifikke virale sygdomme (hvalpesyge, plasmacytose), undersøgelser for protozoer (Toxoplasma gondii, Neospora caninum), bakterier (generel aerobisk og anaerobisk dyrkning), toxiner (Narasin, Monensin, Salinomycin, Lasalocid, melamin) og blodundersøgelser. Resultater af de foreløbige undersøgelser er ikke konklusive og yderligere undersøgelser er nødvendige med henblik på at fastlægge årsagen til sygdommen. Hammer A. S., Jensen, T.H., Salomonsen, C. M, Harslund, J.L.F., Christensen, L. R., Chriel, M., Clausen, T. 2010. Udbrud af tygge-muskelbetændelse hos farmmink. Faglig Årsberetning 2009, 135-140. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Abstract Necrotizing and eosinophilic myopathia was first observed in farmed mink kits in Denmark in August 2008. During the following months the disease was identified on altogether 13 farms in the south-western part of Denmark. In 2009 outbreaks appeared on 6 farms. A total of 202 mink kits with myopathia were included in this investigation. Histopathology showed necrotizing myopathia with fragmentation, hyalinization and atrophy of muscle fibres. Inflammatory cell infiltrations varied from primarily eosinophilic to predominantly mononuclear infiltrations. Differential count of blood samples from two mink showed increased numbers of eosinophilic cells. The disease affects mink of all colour types, which makes it unlikely to be inherited, though there may be genetic factors affecting the course of disease. Testing was conducted to determine the cause of the disease, including tests for specific viral diseases (canine distemper, Aleutian mink disease), tests for protozoa (Toxoplasma gondii, Neospora caninum), bacteria (general aerobic and anaerobic culture) and toxines (Narasin, Monensin, Salinomycin, Lasalocid, melamin) and blood analyses. The preliminary results are inconclusive and further investigations are necessary to identify the cause of the disease. Hammer A. S., Jensen, T.H., Salomonsen, C. M., Harslund, J.L.F., Christensen, L. R., Chriel, M., Clausen, T. 2010. Outbreak of masticatory myositis in farmed mink. Faglig Årsberetning 2009, 135-140. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Keywords: masticatory myositis, eosinophilia, disease, mink
Faglig Årsberetning 2009
135
Hammer A. S., Jensen, T.H., Salomonsen, C. M., Harslund, J.L.F., Christensen, L. R., Chriel, M., Clausen, T
Indledning Der er kun få publicerede undersøgelser af myopatier (muskelsygdomme) hos mink. Hadlow i 1974 og Nordstoga i 1983 har beskrevet en ernæringsbetinget muskeldystrofi relateret til vitamin E/selen mangel. Hegreberg et al. har i 1976 beskrevet en arvelig muskeldystrofi. Hos en række dyr herunder vildtlevende mårdyr er beskrevet muskelinfektioner relateret til parasitter: Neospora caninum, Sarco-cystis spp. (Simpson et al., 2005, Hulland et al. 1993) og Toxoplasma spp. (Pridham and Belcher, 1958, Pridham, 1961 og Frank, 2002). Hos ilder/fritte er beskrevet et polymyositis og myofasciitis syndrom af ukendt årsag (Garner, 2007). Udbrud af nekrotiserende myopati i tyggemusklerne hos farmmink blev observeret i Danmark for første gang i 2008 og igen i 2009. Det er en ny sygdom hos farmmink og årsagen er endnu ikke identificeret. Formålet med denne undersøgelse var at beskrive kliniske karakteristika for sygdommen og patologiske fund, samt resultatet fra laboratorieundersøgelser med henblik på at fastlægge sygdomsårsagen. Materialer Dyr og klinisk historie De første tilfælde blev påvist i august 2008. Diagnosen blev stillet på baggrund af klinisk præsentation og patologiske fund. I 2008 blev sygdommen konstateret på i alt 13 farme i perioden august-oktober. I august-september 2009 blev sygdommen konstateret på 6 farme, hvoraf 5 også havde udbrud i 2008. Alle implicerede farme fik foder fra samme fodercentral. Fordeling Information blev indsamlet fra 8 afficerede farme gennem en spørgeskemaundersøgelse i 2008. Mortaliteten (andelen af mink på farmene, der døde af muskelbetændelse) blev på basis af
136
angivne dødstals-registreringer anslået til mellem 1-2 %. Den øgede dødelighed begyndte i juli-august, toppede i september og strakte sig på nogle farme indtil pelsning. Obduktion af utrivelige eller dødfundne mink uden kliniske tegn på myositis (hævelse i hovedet og udstående øjne) tyder på, at nogle mink har et kronisk uspecifikt sygdomsforløb. Derfor kan den totale andel af mink med sygdommen (morbiditeten) ikke fastslås på baggrund af spørgeskemaundersøgelsen og case-fatality raten (andelen af ramte mink, der dør af sygdommen) kunne ikke estimeres. Sygdommen blev påvist hos flere farvetyper på farmene. Hovedparten af de mink, der indgik i denne undersøgelse var af sorte eller mørke farvetyper (mahogany og wild), men også mink af lyse/grå farvetyper var repræsenteret. Der var en tendens til, at mink af lyse farvetyper havde et mere kronisk sygdomsforløb med et uspecifikt symptombillede og de er muligvis af den grund underrepræsenteret. Alle 202 undersøgte mink var unge (født i april-maj samme år) og kun én ud af de 202 mink var af hunkøn. I perioden maj-september havde flere avlere anvendt fodertilsætninger af forskellig art, f.eks. ammonium-klorid og Vit-E, og kun én af de adspurgte avlere havde ikke anvendt tilskud. Behandling med antibiotika var blevet foretaget på alle farmene med varierende til dårligt resultat. 2008 havde mange farme også forøget forekomst af urinvejslidelser, men dette var ikke tilfældet i 2009. Kliniske tegn Forløbet var ofte akut med udvikling af opsvulmede hoveder, udstående øjne, øjenbetændelse og blindhed, men også mere kroniske forløb, med svækkelse og afmagring, hvor hovedmuskulaturen M. temporalis) var indfalden (atrofisk) blev beskrevet.
Faglig Årsberetning 2009
Undersøgelser af tyggemuskelbetændelser hos mink
Laboratorieundersøgelser I alt 155 minkhvalpe fra 2008 og 47 fra 2009 blev undersøgt. Minkene var selvdøde eller aflivet. Prøver til histologisk undersøgelser inkluderede skeletmuskel (inklusive temporalis- og masseter muskler), hjertemuskel, skeletmuskel, hud, lever, milt, nyrer, tyndtarm og lunger. Vævene blev formalinfixeret, paraffinindstøbt, snittet 5 mm tykkelse og farvet med hematoxylin og eosin (HE). Udvalgte snit blev også farvet med Gram, Giemsa og periodic acid– schiff (PAS). Blod fra dyr med myositis blev udtaget i serum og EDTA rør og blodudstrygninger farvet med HE og hæmacolour. Forsøg på at identificere årsagen inkluderede virologiske, bakteriologiske og parasitologiske undersøgelser. Agens analyseret, analyse og laboratoriet hvor analysen blev udført er angivet i tabel 1. Tabel 1. Laboratorieanalyser af mink med muskelbetændelse. IF = immunofluorosens, MIF = modstrømsimmunelektroforese, PM= protein massespektromofetri, IHC = immunhistokemisk analyse. GBD = Generel bakteriologisk dyrkning, aerob og anaerob, DT= differential tælling Agens Test Laboratorium Antal dyr Hvalpesyge IF a 20 Plasmacytose MIF c 202 Bakterier GBD a 109 Trichinella spp. Digestion a 6 Toxoplasma gondii IF d 26 Neospora caninum IF d 30 Coccidiostatika (Maveindhold) PM b 10 Coccidiostatika PM b 8 (lever) Melamin (Maveindhold) PM b 10 Blodbillede DT d 2 Blodbillede DT a 2 Blodkemisk CPK og LDH analyse d 2 2M antistoffer IHC e 2 a: DTU-Veterinærinstituttet, Danmarks Tekniske Universitet, Danmark b: Plantedirektoratet, Danmark c: Pelsdyrlaboratoriet, Danmark d: Vet. Med. Labor., Tyskland e: Comparative Neuromuscular Laboratory, University of California, USA.
Generel aerob bakteriologisk dyrkning fra muskel, lever og lunge blev udført på blod agar. Pladerne blev inkuberet ved 37oC og undersøgt efter 24 og 48 timer. Immunofluorosens for CDV (Blixenkrone-Møller, 1989), modstrømsimmunelektroforese for ADV (Uttenthal, 1992) blev udført som tidligere beskrevet. Følgende analyser blev rekvireret fra andre laboratorier: undersøgelser for protozoer (Toxoplasma gondii, Neospora caninum), toxiner (Narasin, Monensin, Salinomycin, Lasalocid, melamin) og blodundersøgelser (haemogram, differentialtælling, CPK, LDH, calcium, magnesium, triglycerider). 2M antistoffer blev undersøgt med den metode, der anvendes til diagnosticering af eosinofil myositis hos hund – en sygdom, der klinisk ligner fundene hos disse mink. Laboratoriet der udføre analysen har oplyst, at metoden kan give falsk negative resultater i de kliniske senstadier. Resultater Patologi Typiske obduktionsfund var bilateral exophthalmos (udstående øjne), konjunktivitis (øjenbetændelse) og ødem (væskeophobning) i muskulaturen i hovedregion og svælg, samt dilateret blære og myoglobinuri (mørk portvinsfarvet urin). Lejlighedsvist sås subkutane ødemer og hos nogle mink fandtes nyrerne forstørrede og med nedsat tekstur. Histologiske undersøgelser I tyggemuskulaturen (temporalis og masseter) sås muskelbetændelse og celledød, karakteriseret af fragmenterede, hyaliniserede og atrofierede muskelfibre. Celle-infiltrationerne varierede fra dyr til dyr (formodentlig afhængig af sygdomsstadiet), enten
Faglig Årsberetning 2009
137
Hammer A. S., Jensen, T.H., Salomonsen, C. M., Harslund, J.L.F., Christensen, L. R., Chriel, M., Clausen, T
domineret af eosinofile eller mononukleære inflammatinosceller. Undersøgelser af nyrer fra mink, der havde nyreforandringer, viste tegn på glomerulonephritis. Der blev ikke påvist parasitære elementer (sarcocystis spp., toxoplasma spp., neospora spp.) i organprøverne ved histologisk undersøgelse. Blodundersøgelser På grund af sygdomsforløbet har det kun været muligt at udtage in vivo blodprøver fra to dyr med sygdommen. En havde eosinofili (>7 %) og den anden havde let forhøjede antal eosinofile (6 %). CPK og LDH fandtes forhøjet høs begge mink. Blodprøver fra begge mink blev undersøgt for 2M antistoffer. Resultatet var negativt. Bakteriologiske undersøgelser I de fleste tilfælde var muskulaturen steril. Undtagelsesvis fandtes vækst af streptokokker, stafylokokker eller kolibakterier evt. i blandingskultur. Der blev foretaget anaerob (uden luft) bakteriologiske undersøgelse af muskel og organer. Hos de fleste dyr var undersøgelsen negativ. Hos en mink blev påvist Clostridier af typer, som ikke normalt forårsager sygdom hos dyr, men som ofte kan findes som sporer i muskulatur. Hos én mink blev påvist Clostridium perfringens. Coccidiostatika Der blev undersøgt pools af levervæv (n=10), maveindhold (n=8) og foderprøver (n=7) for Narasin, Monensin, Salinomycin og Lasalocid. Analyserne er udført ved LCMS metoden af Plantedirektoratet. Prøverne var alle negative. Melamin Der blev undersøgt foderprøver (n=4) for ammelid, ammelin, cyanuric acid og
138
melamin udført i henhold til melamine FDA v. 2, May /2007 af Plantedirektoratet. Prøverne var negative for melaminstoffer. Urinundersøgelser Undersøgelsen blev udført med urinstiks og kan ikke skelne mellem hæmoglobin og myoglobin (iltbindingsproteiner i henholdsvis røde blodceller og muskler). Tabel 2. Urinundersøgelse blev udført på 10 urinprøver fra mink kadavere med muskelbetændelse i hovedregionen og portvinsfarvet urin.
Leukocytter (negativ) Nitrit (negativ) Urobillinogen (normal) Protein (4+) Hæmoglobin/myoglobin (3+) Ketonstoffer (negativ) Bilirubin (negativ)
Da der ikke var tegn på urinvejsinfektion (leukocyter og blod i urinen) hos disse dyr antages det, at det er myoglobin, der giver positiv reaktionen i testen. Diskussion De ensartede kliniske symptomer, histopatologi og geografiske lokalisering tyder på, at der er tale om den samme sygdom beskrevet i 2008 og 2009. De karakteristiske patologiske forandringer fælles for minkene var en degenerativ og nekrotiserende myopati i tyggemusklerne. Samtidig er der påvist forhøjet niveau af eosinofile celler. Denne præsentation er ikke forenelig med tidligere beskrevne infektiøse og nutritionelle myopatier hos mink (Pridham and Belcher, 1958, Hadlow, 1974, Hegreberg et al. 1976, Nordstoga, 1983, Pridham, 1961 og Frank, 2002). Præsentationen var heller ikke tilsvarende dem beskrevet ved epizootier af toxoplasmose hos farmmink, hvor der
Faglig Årsberetning 2009
Undersøgelser af tyggemuskelbetændelser hos mink
ses nonsuppurativ encephalitis, myokarditis, pulmonal stase, levernekrose splenitis og Toxoplasma organismer i organerne (Pridham and Belcher, 1958; Pridham,1961; Frank, 2001). På farmene var de fleste farvetyper involveret, hvilket er uforeneligt med en direkte arvelig ætiologi. Desuden adskiller såvel det kliniske forløb som patologi sig væsentligt fra det, der ses ved tidligere beskrevne arvelige muskeldystrofier hos mink (Hegreberg et al. 1976). Noget kan dog tyde på, at minkenes genetik har en betydning for sygdomsforløbet. Hovedparten af de mink, der fik diagnosticeret sygdommen var af sorte eller mørke farvetyper. Sygdommen blev påvist hos mink af lyse/grå farvetyper, som har en medfødt immusupprimerende lidelse (chediak higashi), men der var en tendens til, at disse farvetyper havde et mildere kronisk sygdomsforløb end andre farvetyper. Dette kunne tyde på, at sygdommen kunne være immunmedieret. Immunmedierede myopatier er velbeskrevne hos mennesker (Mantegazza et al. 1997) og hos hunde (Evans et al. 2004, Shelton et al. 1985). Hos hunde er beskrevet en immunmedieret tyggemuskelbetændelse, der forårsager progredierende ødelæggelse af tyggemusklerne. Baggrunden er ukendt, men genetisk prædisposition, parasitter eller immun-stimulerende stoffer (Shelton et al. 1985, Morita et al. 2002 and Evans et al. 2004) har været fremført som mulige årsager. Alle implicerede farme fik foder fra samme fodercentral, hvorfor en fodringsbetinget ætiologi ikke udelukkes. Alle resultater af hidtidige analyser med henblik på identifikation af årsagen til udvikling af de beskrevne udbrud af muskelbetændelser har været negative eller inkonklusive. Undersøgelserne
afkræfter kendte årsager til myopatier hos mink og andre dyrearter. En af årsagerne til at ætiologien ikke er afdækket, kan være, at få dyr er ramt af sygdommen, eller at den udløsende faktor ikke længere er til stede i farmen/dyret på det tidspunkt, hvor dyrene udviser kliniske symptomer og derfor ikke kan påvises. Det kan på baggrund af undersøgelserne udelukkes at dyrene var smittet med hvalpesyge, plasmacytose, sarcocyster, toxoplasmose og neospora, men det er nødvendigt med yderligere undersøgelser for at afdække sygdommens årsag. Referencer Blixenkrone-Møller, M. 1989. Detection of intracellular canine distemper virus antigen in mink inoculated with an attenuated or a virulent strain of canine distemper virus. American Journal of Veterinary Research 50, 1616-1620. Evans J. Levesque D. Shelton G.D. 2004. Canine inflammatory myopathies: a clinicopathologic review of 200 cases. J Vet Intern Med 18, 679–691. Frank, RK. 2001. An outbreak of toxoplas-mosis in farmed mink (Mustela vison S.). Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 13, 245–249. Garner, MM, Ramsell, K, Schoemaker, NJ, Sidor, FR, Nordhausen, IW, Bolin, S, Evermannand, JF, Kiupel, M. 2007. Myofasciitis in the Domestic Ferret. Vet Pathol 44, 25-38. Hadlow WJ. 1974. Myopathies of animals-a brief view. Adv Cardiol. 13, 68-80. Hegreberg G.A., Hamilton M.J., Padgett G.A. 1976. Muscular dystrophy of mink: a new animal model. Fed Proc. 35, 1218-24.
Faglig Årsberetning 2009
139
Hammer A. S., Jensen, T.H., Salomonsen, C. M., Harslund, J.L.F., Christensen, L. R., Chriel, M., Clausen, T
Hulland TJ. 1993. Muscle and tendon. In: Pathology of Domestic Animals Jubb KVF, Kennedy PC, Palmer N, eds. 4th ed., 256–261, Academic Press, San Diego, CA. Mantegazza R, Bernasconi P, Confalonieri P, Cornelio F. 1997. Inflammatory myopathies and systemic disorders: a review of immunopathogenetic mecha-nisms and clinical features. J Neurol 244, 277–287. Morita T, Shimada A, Yashiro S, Takeuchi T, Hikasa Y, Okamoto Y, Mabuchi Y. 2002. Myofiber expression of class I major histocompatibility complex accompanied by CD8+ T-cellasso-ciated myofiber injury in a case of canine polymyositis. Vet Pathol 39, 512-515. Nordstoga, K: Muscular and myocardial degeneration in rapidly growing male kits. Acta Veterinaria Scandinavia 24, 321-324
140
Pridham T.J, Belcher J. 1958. Toxoplasmosis In Mink. Can J Comp Med Vet Sci. Mar;22, 99-106. Pridham T.J. 1961. An outbreak of toxoplas-mosis in ranch mink. Can J Public Health. 52, 389-93. Shelton GD, Cardinet GH, Bandman E, Cuddon P. 1985. Fiber type-specific autoantibodies in a dog with eosinophilic myositis. Muscle Nerve 8, 783– 790. Simpson VR, Panciera RJ, Hargreaves J, McGarry JW, Scholes SF, Bown KJ, Birtles RJ. 2005. Myocarditis and myositis due to infection with Hepatozoon species in pine martens (Martes martes) in Scotland. Vet Rec. 2;156, 442-446 Uttenthal, Å: 1992. Screening for antibodies against Aleutian disease virus (ADV) in mink. Elucidation of dubious results by additive counterimmunoelectrophore-sis. Applied and Theoretical Electrophoresis 3, 83-84.
Faglig Årsberetning 2009
Betydning af redekassens udformning og redemateriale overlevelse og trivsel hos minkhvalpe, et pilotprojekt
på
Michael Sønderup¹, Henrik Bækgaard¹, Peter Foged Larsen¹ og Tove Clausen² ¹Dansk Landbrugsrådgivning, Landscentret | Pelsdyr ²Pelsdyrerhvervets forsøgs- og forskningscenter, PFC.
Sammendrag Redekassens udformning og typen af redemateriale har betydning for hvalpenes overlevelse og trivsel. I denne pilotundersøgelse deltog 12 farme. Som bundmateriale i reden blev , Easy Strø (Produktnavn for varmebehandlet, finsnittet hvedehalm), mod henholdsvis høvlspåner og kortsnittet byghalm undersøgt. Som redemateriale blev langstrået byghalm mod henholdsvis kortstrået byghalm og træuld undersøgt. Det blev ligeledes undersøgt hvorvidt reduceret redekassestørrelse Havde en betydning. Antal levende og døde hvalpe 2 – 5 dage efter fødsel samt antal levende hvalpe ved 3 – 4 ugers alderen blev registreret. I den største af sammenligningerne, Easy Strø i forhold til høvlspåner som bundmateriale, blev der fundet en statistisk sikker forskel til fordel for Easy Strø på total antal hvalpe ved fødsel, antal levende hvalpe ved fødsel samt antal hvalpe ved anden tælling. Der blev ikke fundet en signifikant forskel vedrørende hvalpetabet mellem første og anden tælling. Undersøgelsen påpeger vigtigheden af valg af redemateriale og måske redens udformning. F.eks. blev der fundet en statistisk sikker forskel på 0,20 hvalpe pr. fødende tæve til fordel for Easy Strø i forhold høvlspåner, opgjort som levende hvalpe ved 3 – 4 ugers alderen. Desuden diskuteres fremtidige fokusområder. Sønderup, M., Bækgaard, H., Larsen, P. F. & Clausen, T. N. 2010. Betydning af redekassens udformning og redemateriale på overlevelse og trivsel hos minkhvalpe, et pilotprojekt. Faglig Årsberetning 2009, 141-146. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark.
Abstract Nest box design and type of nesting material affect kit survival and wellbeing. In this pilot study, 12 farms were involved. As background material in the nest was, Easy Stroe (trade name for heat-treated, forage harvester wheat straw), compared with shavings and short cutted barley straw were studied. As nesting material the long cutted barley straw was compared with the short cutted barley straw and the wood shavings. It was also investigated whether reduced nest box size had an impact. The Number of living and dead pups from 2 to 5 days of age and the number of living pups at 3 to 4 weeks of age were recorded. Easy Stroe compared to shavings as bottom material, showed a statistically significant difference in favour of Easy Stroe on a total number of pups at birth, the number of living pups at birth and the number of puppies at the second count.. There was no significant difference for kit loss between the first and second counts. The study points to the importance of choice of nesting material and design. There was found a statistically significant difference of 0.20 kits/female for Easy Stroe over shavings, measured as living pups at 3 to 4 weeks of age. Moreover, future areas of focus will be discussed. Sønderup, M., Bækgaard, H., Larsen, P. F. & Clausen, T. N. 2010. Importance of nest box size and material, for litter size, a pilot study. Annual Report 2009, 141-146. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: redekassemateriale, redekasseudformning, hvalpe trivsel
Introduktion Denne Feltundersøgelse har til formål at undersøge betydningen af redekassens udformning og typen af redemateriale på overlevelse og trivsel hos minkhvalpe, da der i praksis ses en stor variation indenfor disse områder.
Videoovervågning af fødslerne afslører, at en minktæve føder væsentlig flere hvalpe end det bliver bemærket på de danske farme (Gade og Malmkvist, 2004). Det er ligeledes vist, at tævens huld påvirker hvalpeoverlevelsen. 141
Faglig Årsberetning 2009
Sønderup, M., Bækgaard, H., Larsen, P. F. & Clausen, T. N.
(Malmkvist, 2005, Bækgaard et al. 2006, 2007 ,2008). Tævens evne til at passe hvalpene har også stor betydning for deres overlevelse, da de ikke selv er i stand til at termoregulere og kun har fedt depoter til kort tid (Hansen og Malmkvist 1999, Malmkvist 2005). Malmkvist og Palme (2008) undersøgte effekten af redekassens indretning og typen af redemateriale. De fandt, at tæver, der ikke havde adgang til redebygningsmateriale, men blot fødte i høvlspåner havde et mere uregelmæssigt fødselsforløb. Desuden var tæverne langsommere til, at hente 5 dage gamle hvalpe fra buret ind i reden. Endelig blev det fundet, at hvalpenes vægt 7 dage gamle var markant lavere for hvalpe, der kun havde adgang til høvlspåner. En anden undersøgelse af Malmkvist et al.(2009) viste, at der hos minktæver, der havde adgang til tre materialer (halm, høvlspåner og angorakaninuld) blev observeret en lavere hvalpedødelighed. Dødeligheden var ca. fem gange højere hos hvalpe, hvor tæven kun havde adgang til høvlspåner. Angorakaninuld blev valgt for at give tæven mulighed for at skabe så lun en rede som muligt. Desuden blev der fundet en forskel på redens kvalitet afhængig af det materiale tæven havde adgang til. Der er stor fokus på hvalpeoverlevelsen i den danske minkproduktion. Samtidig fokuseres der på effektivisering og omkostningsminimering. Det gælder også på valg af redekasse, redekasseindretning, forberedelse til fødsel samt materiale og tidsforbrug til vedligehold af et godt redekassemiljø. Redekasse og redekassemiljøet udviser derfor en meget stor variation. Derfor var hensigten med denne pilotundersøgelse at udpege fremtidige fokusområder indenfor redekasse og redekasseindretning i praktisk dansk minkproduktion.
142
Materialer og metoder 12 minkfarme indgik med en eller flere sammenligninger i undersøgelsenEasy Strø er firmanavnet på varmebehandlet, fintsnittet halm. I hver undersøgelse blev der kun foretaget en forandring. Nedenfor er de forskellige opsætninger i undersøgelsen beskrevet. Materiale i redebunden, Redemateriale ens: Easy Strø mod henholdsvis høvlspåner eller kortsnittet byg Redemateriale, materiale i bunden ens: Langstrået byg mod kortstrøet byg Langstrået byg mod træuld Redekassens størrelse, redemateriale samt bundmateriale ens: Inderskærm (mindre rede) med adgangen til selve reden er væk fra redekassehullet mod ingen skærm Tæverne i kontrol- og forsøgshold er ligeligt fordelt hvad angår alder, november vægt og kuldstørrelse de er født i. Der veksles desuden mellem forsøgs- og kontrol dyr, så de to grupper går under så ensartede forhold som muligt. Avleren registrerede antal levende og døde hvalpe 2 – 5 dage efter fødsel samt antal levende hvalpe ved 3 – 4 ugers alderen. Tabsprocenten udregnes som forskellen i antal levende hvalpe ved de to tællinger. Goldtæver og mistede kuld registreres. Konsulenterne foretog sammen med avlerne en huldvurdering på typeniveau under fødslerne. Der blev desuden foretaget en systematisk huldvurdering hos en lille del af dyrene i hvert hold. Mellem hvalpenes tredje og fjerde leveuge foretog konsulenter og avler en vurdering af trivelighed på et udsnit af hvalpene. Hertil anvendtes en 5-skala.
Faglig Årsberetning 2009
Betydning af redekassens udformning og redemateriale
Statistik Statistiske analyser er lavet ved hjælp af SAS for Windows. Modellerne, som blev brugt var en lineær regression. Faktorer som viste sig at have signifikant betydning, indgik i modellen som co-variat. Resultater En analyse på tværs af behandlinger viste en svag negativ sammenhæng mellem tævens vægt i november og antal hvalpe både total, levende og ved anden tælling. En svag positiv sammenhæng blev fundet mellem det kuldstørrelse tæven kommer fra og hendes egen kuldpræstation. Korrelationerne er meget små og ubetydelige, men retningen er som forventet. Under fødslerne foretog konsulenterne sammen med avlerne en huldvurdering på typeniveau. Der blev desuden foretaget en systematisk huldvurdering hos en lille del af dyrene i hvert hold. Der blev ikke fundet forskelle blandt de grupper, der skulle sammenlignes. Goldtæver og mistede kuld blev ikke registreret entydigt nok og kunne derfor ikke indgå i opgørelserne. Mellem hvalpenes tredje og fjerde leve uge foretog den tilknyttede konsulent og avler desuden en vurdering af trivelighed på et udsnit af hvalpene. Hertil anvendtes en 5-skala. Også her blev der ikke fundet forskel mellem hvalpe i de hold, der skulle sammenlignes. Easy Strø mod høvlspåner I analysen Easy Strø mod høvlspåner indgik 8 farme med i alt 12.911 avlstæver. Der blev fundet en signifikant positiv effekt af Easy Strø målt sammenlignet med høvlspåner, på total antal hvalpe ved fødsel, antal levende ved fødsel og antal levende hvalpe ved anden tælling (p< 0,0001 for alle). Der blev ingen
forskel fundet på antal døde ved fødsel og hvalpetabet mellem første og anden tælling. Avler, farvetype og tævealder er signifikant betydende faktorer. Nogle data blev fjernet fra den videre behandling, da der manglede anden hvalpetælling, og andre registreringer eller hvalperesultatet var urealistisk høj, hos en mindre del af tæverne. Analysen af de resterende 8304 avlstæver, hvor avler, farvetype og tævealder indgik som co-variater, viste: Tabel 1. Redebund: Easy Strø mod høvlspåner. 6 farme. 8304 avlstæver. Easy Høvlspåner Forskel Redebund Strø 4285 antal kuld 4019 6,770 i alt 1 tælling 6,64 0,13 6,570 Levende 1 tælling 6,41 0,16 0,200 Døde 1 tælling 0,24 -0,04 6,190 Levende 2 tælling 5,99 0,20 0,380 Tab 1 - 2 tælling 0,42 -0,04
Signifikant effekt af: • Avler, farvetype og tævealder • Behandlingen på total antal hvalpe ved fødsel (p=0,001), • Antal levende ved fødsel (p < 0,0001), • Antal ved anden tælling (p < 0,0001), og antal døde ved fødsel (0,01). Ingen signifikant effekt af: • Hvalpetabet mellem første og anden tælling • Tævealder med hensyn til antal døde
143 Faglig Årsberetning 2009
Sønderup, M., Bækgaard, H., Larsen, P. F. & Clausen, T. N.
Easy Strø
-Bunden er med Easy Strø i stedet for kortsnittet byg. tabel 2.
Høvlspåner
Tabel2: Redebund. Easy Strø mod kortsnittet vinterbyg. Levende ved første tælling. 1 farm.
6,9 6,7 6,5 6,3 6,1 5,9 5,7 5,5
* Redebund Easy Strø Kortsnittet byg Forskel
Fig 1. Redebund: Easy Strø mod høvlspåner. Levende hvalpe i kuldet, ved første tælling. p< 0001 på totalmaterialet, Kun signifikant forskel hos farm G (p=0,01). Alle tæver, uanset alder. 8 farme.
I de øvrige sammeligninger var der for få dyr til at en SAS analyse var relevant. Der blev derfor kun beregnet simple gennemsnit og spredninger. Resultaterne, antal levende hvalpe ved første tælling, ses herunder i tabellerne 2 til 5. Det ses, at der ved første tælling (ikke beregnet statistisk sikkerhed) blev fundet lidt flere levende hvalpe hvor:
Farm 1 Antal kuld 309 318
Gns 5,49 5,13 0,36
Std afv 3,04 3,12
-Reden er formindsket med en inderskærm, hvor adgangen til selve reden er væk fra redekassehullet. 2 farme, tabel 3. Tabel 3: Redestørrelse. Med eller uden inderskærm,. Levende ved første tælling. 2 farme. Rede Størrelse Farm 1 Farm 2 Antal Std Antal Std Inderskærm kuld Gns afv Kuld Gns afv Med 380 6,41 2,16 388 5,60 2,98 Uden 436 6,22 2,01 435 5,13 3,15 Forskel 0,19 0,47
Der blev ingen forskel fundet hvor følgende blev sammenlignet: -Langstrået halm og kortsnittet halm. 3 farme. Tabel 4. -Langstrået halm mod træuld. 1 farm, tabel 5.
Tabel 4: Redemateriale. Langstrået byg mod kortsnittet byg. Levende ved første tælling. 3 farme.
Halmtype Langstrået Kortsnittet Forskel
Farm 1 Antal kuld 531 522
Gns. 6,04 6,13 -0,07
Std afv 2,61 2,65
Farm 2 Antal kuld 884 799
Tabel 5: Redemateriale. Lang halm mod træuld. Levende ved første tælling. 1 farm.
Redemateriale Lang halm Træuld Forskel
Farm 1 Antal kuld 679 610
Gns
Std afv
6,10 6,06 0,04
2,21 2,13
Diskussion Avlsresultatet i Danmark har i en årrække været stagnerende. Flere årsager kan være en medvirkende årsag hertil. Udvælgelse efter størrelse, kraftig opformering af små bestande, fokus på en egenskab som tidligere sås hos en mindre del af minkene, korthåret
144
Gns. 5,75 5,68 0,09
Std afv 2,70 2,81
Farm 3 Antal kuld 667 668
Gns. 5,84 5,87 -0,03
Std afv 2,47 2,54
mink og omparring med de bedste avlshanner er andre. Systematiske undersøgelser og observationer i praksis peger dog på, at der kunne være andre medvirkende årsager. Og de indledende undersøgelser vedrørende indretning af redekassen og redemiljøet hos mink har bekræftet dette. Det mest almindelige bundmateriale er høvlspåner og fint snittet halm. De indledende undersøgelser peger på, at høvlspåner er mindre egnet som bundmateriale i forbindelse med fødslerne. Hvorvidt spåner også har en negativ effekt senere i diegivnings-
Faglig Årsberetning 2009
Betydning af redekassens udformning og redemateriale
perioden, kan denne undersøgelse ikke fastslå. Nogle avlere har den opfattelse, at høvlspåner har en positiv effekt på sygdomsfrekvensen på grund af deres sugende effekt, men denne antagelse er ikke efterprøvet? Varmebehandlet, snittet halm (Easy Strø) ser ud til i denne undersøgelse at have et fortrin frem for høvlspåner i forbindelse med fødsel, men gælder den negative effekt alle typer høvlspåner? Tilbagemeldingen fra flere avlere var, at Easy Strø blev i reden, mens nogle minktæver ikke ønskede at have høvlspånerne i reden. I hvilket omfang tæverne smider høvlspåner ud af reden, i forhold til easy strø er ikke undersøgt her, men kunne være særdeles interessant, da det har stor betydning for arbejdsmængden i netop denne periode. Desuden virker det ikke oplagt at bruge et materiale til tæverne, som de muligvis ikke ønsker i reden. Hvorfor ser Easy Strø ud til at have en positiv effekt på kuldstørrelsen? Er det på grund af en lunere rede eller en bedre hygiejne? Denne indledende undersøgelse antyder at redens fysiske udformning kan have en indflydelse på reproduktionen. Det er en almindelig antagelse blandt pelsdyravlere, at tævernes størrelse medfører, at tæverne har behov for hele reden. Modsat tidligere, hvor reden blev opdelt af en inderskærm. Denne antagelse bør testes i en mere omfattende feltundersøgelse. Denne undersøgelse peger på, at en inderskærm af en eller anden type, kan have en positiv indflydelse på antal levende hvalpe. Se tabel 3. Der er i denne undersøgelse ikke blevet set på selve redens fysiske udformning, mængden af redemateriale og herunder evnen til at holde hvalpene varme under forskellige klimatiske forhold. Det vil være nyttigt at kunne påvise hvilke type redekasser, der ville være optimale under forskellige fysiske og klimatiske forhold.
Arbejdsindsatsen i forbindelse med såvel forberedelserne til fødslerne som i selve diegivningsperioden bør ligeledes inddrages i forbindelse med vurderingen af den mest optimale rede under givne omstændigheder. Vurderingen af hvalpenes trivsel som 3 – 4 uger gamle hvalpe var uegnet som mål for hvalpenes tilvækst, som igen skulle afspejle redens beskaffenhed. Der bør forsøges udviklet en praktisk måde, at vurdere redens egnethed på. Måske skal hvalpene og redens beskaffenhed vurderes når hvalpene er 10 – 14 dage gamle. Ved denne alder kan hvalpens trivsel ses eller måles ved hjælp af vejning. Desuden kan redens kvalitet og arbejdet hermed indtil da vurderes. Konklusion I denne undersøgelse blev det vist at bundmaterialet sandsynligvis spiller en væsentlig rolle for tævens evne til at levere mange levende hvalpe. Undersøgelsen er dog kun at betragte som en pilotundersøgelse, og det vil være vigtigt at undersøge hvor effekten af easy strø ligger. Desuden har undersøgelsen åbnet nogle interessante perspektiver, hvor der er flere aspekter der bør undersøges. Referencer Bækgaard, H., Hansen, M.U., Sønderup, M. og Clausen, T., (2006). Sammenhæng mellem tidlig hvalpedød og minktævers huld og foderforbrug i perioden januar til fødsel. Faglig årsberetning 2006, 185 -192. Pelsdyrerhvervets Forsøgs – og Forskningscenter. Holstebro, Denmark. Bækgaard, H, Larsen, P.F. og Sønderup, M. (2007). Sammenhæng mellem tidlig hvalpedød og minktævers huld og aktivitet i perioden februar til fødsel. Faglig årsberetning 2007, 109 116. Pelsdyrerhvervets Forsøgs – og ForskningsCenter, Holstebro, Denmark. 145
Faglig Årsberetning 2009
Sønderup, M., Bækgaard, H., Larsen, P. F. & Clausen, T. N.
Bækgaard H, Larsen, P. F. og Sønderup, M. (2008). Indflydelse af minktævers huld og huldudvikling på kuldstørrelse. Faglig årsberetning 2008, 123 -127. Pelsdyrerhvervets Forsøgsog ForskningsCenter, Holstebro, Denmark. Gade, M. og Malmkvist, J. (2004). Nyt om minkfødslen. Intern Rapport 2008, 33-42. Danmarks jordbrugsforskning. Lund og Malmkvist (2009). Perinutrient nest building: Quality of the nest, kit survival, maternal stress and behavior in farmed mink (mustela vision). Proceedings of the 21st Nordic Symposium of the International Society for Applied Ethology, 19-21, January 2009, Bjerringbro, Denmark
146
Malmkvist og Palme (2008). Periparturient nest building: implications for parturition, kit survival, maternal stress and behaviour in farmed mink (mustela vision). Aplied animal behavior science 114 270-283 (2008) Malmkvist, J. 2005. Hvordan tilgodeser vi bedst minks redebygning? Intern rapport 227, 20-31. Danmarks jordbrugsforskning Malmkvist, J. og Hansen, S.W. 1999. Betydning af minktævers yngelplejeadfærd for den tidlige hvalpedødelighed. Intern Rapport 123. 63 -72. Danmarks jordbrugsforskning.
Faglig Årsberetning 2009
Reducering af foderspild i vækstperioden ved hjælp af metalplader i burene Tove N. Clausen, Maria Blæsbjerg & Peter Sandbøl Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Herningvej 112C, 7500 Holstebro. Sammendrag I et forsøg på at reducere foderspild under burene, i perioden lige efter udsætning, blev sat stålplader under fodertråden i bunden af 155 bure med wildmink hvalpe. Foderforbrug og tilvækst blev registreret i denne gruppe samt i et kontrolhold (155 bure), hvor der ikke var isat plader. Foderspild straks dyrene er sat ud i begyndelsen af juli kan reduceres fra omkring 9 % til ca. 2 % ved at sætte plader under fodertråden, samtidig tenderede tilvæksten til at være bedre. Spildet faldt derefter til ca. 1,2 % hos hvalpe uden plader i starten af august. Der er dog store variationer fra år til år afhængig af foderkonsistens, temperatur, vejr etc. Ved at pladerne fjernes i begyndelsen af september, undgås problemer med klatter i pelsen. Clausen, T. N., Blæsbjerg, M. & Sandbøl, P. 2010. Reducering af foderspild i vækstperioden ved hjælp af metalplader i burene. Faglig Årsberetning 2009, 147-150. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Summary In an attempt to reduce the loss of feed under the cages in early July, we placed metal plates in the bottom of 155 cages with wildtype mink kits. Feed consumption and body growth was registered in this group and in a control group (155 cages) without plates. Feed consumption in early July can be reduced from about 9 % to about 2 % by using metal plates, and body growth tended to increase. The loss of food was reducer gradually to around 1.2 % in early August in cages without plates. However there are great variations from year to year depending of feed consistency, temperature, weather etc. By removing the plates in early September problems with lumps in the pelt was avoided. Clausen, T. N., Blæsbjerg, M. & Sandbøl, P. 2010. Reducing feed loss in the growing period by metal plates in the cage. Annual Report 2009, 147-150. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: foderspild, foderforbrug, metalplader
Indledning Ved at fodre mink på net tråd, vil der komme en vis foderspild under burene. Hvor meget der spildes vil afhænge af bl.a. foderets konsistens, temperaturen, dyrenes alder og fordeling af foder. Tidligere undersøgelser har vist at der spildes fra 4 – 25 % (Sandbøl, Personlig kommunikation). Undersøgelser fra august 2004 viste 7,0 % i begyndelsen af august og 3,8 % i slutningen af august (Clausen, 2004 intern rapport). Officielt regnes der med 8 % foderspild. Ved et foderforbrug pr dyr, fra 1/7 til 1/11 på 23 kg (Sole, 2007) spildes der 1,84 kg foder pr dyr. Ved 18.000 hvalpe på farmen svarer det til ca. 33 Ton foder. Kunne man blot reducere spildet til halvdelen ville dette give en god besparelse både i udgifter
til foder og et mindre tab af kvælstof og fosfor til naturen. Foder konsistens: Mange faktorer påvirker foderets konsistens, de enkelte råvarer binder vand i forskellig mængde, nogle råvarer suger mere vand ved henstand, og nogle råvarer frigør vandet igen. Der kan tilsættes forskellige ingredienser der binder vandet i foderet og forbedrer konsistensen. Foder temperatur: Foderets temperatur er af betydning, hvis foderet ved fremstilling og udfodring indeholder ”kuldegrader” vil foderet blive tyndt og falde igennem, når det ”tør op”. Udetemperatur: Hvis det er meget varmt falder foderet lettere igennem end hvis det er meget koldt.
Faglig Årsberetning 2009
147
Clausen, T. N., Blæsbjerg, M. & Sandbøl, P.
Dyrenes alder: I begyndelsen af vækstperioden spilder hvalpene mere foder end sidst i vækstperioden. Fordeling af foder: Ved foderfordeling spildes der en del af foderresten. I 2004 blev afprøvet plastplader i bunden af buret under fodertråden i hele vækstperioden (Clausen, 2004 intern rapport). Pladerne gik imidlertid nemt løse, de blev fedtede og der kom en del klatter i pelsen. Formålet med denne undersøgelse er at afprøve metalplader, der er tyndere og lettere at sætte fast i buret, samt at isætte pladerne straks ved udsætning og fjerne dem igen før hvalpene sætter pels, for at undgå klatter. Materiale og metoder Til undersøgelsen blev anvendt to haller med hvalpe fra avlsgruppen i wildmink. I den ene side af hver hal blev isat metal plader i bunden af buret lige uden for redekassen og i en længde lidt længere end fodertråden (300 x 200 x 2 mm) (hold 103), i de øvrige bure var der ingen plader (hold 104). Pladerne blev fjernet 3/9, da mange af hvalpene fik dem løse. Der var helsøskende i holdene dette blev medtaget i de statistiske beregninger. Hvalpene blev fodret efter normal farmpraksis, således at der blev tilstræbt samme tomgangsperiode i begge grupper. Hanhvalpene blev vejet ved udsætning 3. juli, 4. september og ved pelsning. Skindene blev længdemålt, og vurderet for klatter. Foderforbruget blev registreret dagligt i perioden 2/7 til 3/9 (fodermaskinen vejet) for hvalpe der havde plader og for hvalpe der ikke havde plader under fodertråden. Foderspild blev registreret straks dyrene var sat ud (2/7-8/7), ultimo juli (22/7-28/7), samt i august (6/8-12/8). Spild blev registreret ved at lægge plastik ud under 2 x 6 bure i hver af holdene. Plastik blev lagt ud på jorden i hele burets /sektionens længde /
148
bredde, efter en uge blev indsamlet foderspild og gødning samt halm blev frasorteret. Frisk foder samt foderspild blev vejet og analyseret for tørstofindhold, for at vide, hvor meget der præcist blev udfodret og ædt i perioden. Hygiejnen på pladen blev vurderet jævnligt, og disse blev rengjort efter behov. De statistiske beregninger er udført med statistikprogrammet SAS. Procedurerne GLM (ss4), LSMEANS / PDIFF er anvendt med 5 % som signifikansniveau. Relevante kovariater er medtaget i de tilfælde de er signifikante. Resultater og diskussion Foderspild Før opstart af en spildopsamlingsperiode blev pladerne rengjort, og løse plader blev sat fast. På trods af at pladerne var klipset fast i bunden af buret, fandt nogle hvalpe ud af at de kunne få dem løse, og aktiviteten omkring pladerne var meget stor. I slutningen af juli skulle 2 – 4 plader sættes fast hver dag, og i løbet af august lærte mange hvalpe efterhånden at løsne pladerne, hvorfor forsøget blev afsluttet d. 3/9. Resultaterne fra opsamling af spild ses af tabel 1. Tabel 1. Procent spild hos hvalpe med plader og hos hvalpe uden plader under fodertråden.
Med plader Uden plader
2/7 – 8/7
22/7 – 28/7
6/8 – 12/8
1,9 8,7
1,0 4,6
0,3 1,2
Der er størst spild i begyndelsen af vækstperioden og størst spild hos hvalpe uden plader. Hos hvalpe med plader var der hele perioden lav spild, og det blev observeret, at når der blev fordelt foder og foderet faldt ned på pladen, åd de det først. Spild i begyndelsen af juli på 8,7 % hos hvalpe uden plader, svarer til det officielle tal for spild.
Faglig Årsberetning 2009
Reducering af foderspild I vækstperioden ved hjælp af metalplader I burene
I slutningen af juli og begyndelsen af august var spildprocenten hos hvalpe uden plader faldet betydeligt. Det passer ikke helt med data fra 2004 (Clausen, 2004 intern rapport), hvor spildet i begyndelsen af august, hos hvalpe med og uden plader var hhv 2,1 og 7,0 %. I slutningen af august 2004 var det 1,1 hhv 3,8 % hos hvalpe med hhv uden plader. Grunden til forskel mellem de to år, kan være forskel i foderkonsistens, fodertemperatur, udetemperatur og andre overordnede faktorer.
Foderoptagelse Foderoptagelsen var i gennemsnit i hele perioden (2/7 til 3/9) 329,3 kcal/dyr/dag i holdet med plader og 339,8 kcal/dyr/dag i holdet uden plader. Dette svarer til at der blev udfodret 20.744 kcal/dyr hhv 21.405 kcal/dyr i holdene med hhv uden plader. Dyr uden plader fik således i gennemsnit i perioden 2/7 til 3/9 tildelt 3,1 % foder mere end dyr med plader (figur 1). I 2004 (Clausen, 2004 intern rapport) blev der totalt i perioden 13/7 til 7/11 tildelt 1,3 % foder mere til hvalpe uden plader.
gennemsnit over en uge 400.0 380.0 360.0
kcal/dyr/dag
340.0 320.0 + plader
300.0
- plader
280.0 260.0 240.0 220.0 200.0 27
28
29
30
31
32
33
34
35
uge
Figur 1. Fodertildeling til hvalpe med og hvalpe uden plader under fodertråden
Skindlængde , vægtudvikling, klatter og sorteringsvægt Der var ingen signifikant forskel i vægtene mellem holdene, det var dog en forskel i tilvæksten mellem holdene således at tilvæksten fra udsætning til september tenderede til at være bedst for de hvalpe der havde plader under fodertråden, hvorimod hvalpe uden plader havde den bedste tilvækst fra
september til sortering (tabel 2). Skindlængden var ens i holdene. Der var 6 (3,8 %) med klat i holdet med plader og 3 (1,9 %) i holdet uden plader. I 2004 hvor hvalpene gik med plader helt frem til pelsning var der 19,9 % skind med klatter i holdet med plader, mod 2,2 % i holdet uden plader (Clausen, 2004).
Faglig Årsberetning 2009
149
Clausen, T. N., Blæsbjerg, M. & Sandbøl, P.
Tabel 2. Vægte og skindegenskaber Udsætnings Pelsnings Hold Antal vægt, g Vægt 4. sep, g vægt, g * Tilvækst uds-sep, g 103 plader 156 835 (158) 2323 (242) 3019 (353) 1486 (184) (a) 104 u/plader 154 853 (156) 2298 (245) 3064 (320) 1445 (189) (b) p-værdi NS NS NS NS (0,06) NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene, forskellige bogstaver angiver at af udtagning af avlsdyr var der kun 118 hhv 116 der blev pelset.
Konklusion Foderspild straks dyrene er sat ud i begyndelsen af juli er omkring 9 %. Denne kan reduceres til omkring 2 % ved at sætte plader i bunden af buret under fodertråden. Derved sparer man, i perioden 2/7 til 3/9, omkring 3 % af foderet, og tilvæksten blandt hvalpene tenderer samtidig til at være bedre, når der er plader under fodertråden. I slutningen af juli er spildet 4,6 % uden plader og i begyndelsen af august spilder hvalpene ca. 1,2 %. Der er store variationer fra år til år afhængig af foderkonsistens, temperatur, vejr etc. Spild primo august 2004 var således 7
150
Tilvækst sep- Skindlængde klatter sortering, g cm antal 739 (227) b 90,2 (3,9) 6 810 (209) a 90,5 (3,6) 3 0,03 NS der er signifikant forskel; * på grund
%, og ultimo august var det 3,8 % hos dyr uden plader. Ved at pladerne fjernes i begyndelsen af september, undgås problemer med klatter i pelsen, og spildet på dette tidspunkt er nedsat betydeligt. Referencer Clausen, T.N., 2004. Foderspild vækstperioden 2004. Intern Rapport IR07-02 Sole, 2007. Solegruppen.
Faglig Årsberetning 2009
Foderudvalgsmøde,
Tidligt og sent fødte minkhvalpes tilvækst i vækstperioden Tove N. Clausen & Peter Sandbøl Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Herningvej 112C, 7500 Holstebro. Sammendrag Formålet med denne undersøgelse var at se, hvorledes foderforbrug og vægtudviklingen forløber hos tidligt og sent fødte hvalpe. Til undersøgelsen blev primo juli udvalgt én hanhvalp fra hver af de 58 tidligst fødte wildmink kuld (født 22/4 – 26/4) og de 52 senest fødte wildmink kuld (født 6/5 – 14/5). Vægtudviklingen hos tidligt og sent fødte hvalpe er ens ved samme alder, og deres totale foderoptagelse fra udsætning til pelsning er ens. I begyndelsen af vækstperioden æder de sent fødte hvalpe mindst, fra september æder de sent fødte hvalpe mest. Pelskvalitet, kropslængde, skindlængde og huld ved pelsning er ens for de to grupper. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2010. Tidligt og sent fødte minkhvalpes tilvækst i vækstperioden. Faglig Årsberetning 2009, 151-154. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark. Summary The purpose of this investigation was to follow feed consumption and body weight growth in early and late borne mink kits. To the investigation we used one male mink kit from each of the 58 first borne wildtype litters (borne April 22 to April 26) and from each of the 52 latest borne wildtype litters (borne May 6 to May 14). Body weight in early and late borne kits was equal at the same age, and the total food consumption from July to pelting was equal. In the beginning of the growing period, late borne kits eat less than early borne, but from September late borne kits eat more. Pelt quality, body length, skin length and body condition at pelting were equal. Clausen, T. N. & Sandbøl, P. 2010. Importance of birth date on kit growth in the growing period. Annual Report 2009, 151-154. Danish Fur Breeders Research Center, Holstebro, Denmark. Keywords: tidlig født, sent født, foderforbrug, tilvækst
Indledning De første minkhvalpe bliver født omkring 18/4 og de sidste helt frem til 18/5. De fleste bliver dog født indenfor ca. 14 dage i perioden 25/4 – 10/5, med variation fra år til år. Fodringen tilpasser vi minkenes alder og der har været diskussioner om, hvorvidt foderet passer til både de sent fødte og de tidligt fødte hvalpe. Vi er nok tilbøjelige til at favorisere de tidligt fødte, idet det er de ”store”, hvorimod de sent fødte bliver glemt lidt i mængden. På forsøgsfarmen bliver tidligt fødte og sendt fødte hvalpe ikke sat ud i forsøgshold. På vækstperiode data fra 2007 for wildmink gruppen ses det, at der er en signifikant korrelation mellem fødselsdatoen og hvalpenes vægt ved udsætning (-0,47), i august (-0,22), til pelsning (0,07) samt til skindlængden (0,11), men ikke til kvaliteten. Ligeledes
blev set en signifikant korrelation mellem antal hvalpe i kuldet dag 42 og hvalpenes vægt ved udsætning (-0,24), i august (-0,15), til pelsning (-0,06) samt til skindlængden (-0,06) og kvaliteten (0,05). Formålet med denne undersøgelse er at se, hvorledes foderforbrug og vægtudviklingen forløber hos tidligt og sent fødte hvalpe. Materiale og metoder Til undersøgelsen blev ved fravænning udvalgt én hanhvalp fra hver af de 58 tidligst fødte wildmink kuld (født 22/4 – 26/4) og de 52 senest fødte wildmink kuld (født 6/5 – 14/5). Der er således i gennemsnit 12 dage til forskel på fødselsdatoen. Dieperiode resultaterne blev registreret gennemsnitlig på kuldbasis, dernæst blev de udvalgte hvalpe vejet og huld vurderet ved udsætning
Faglig Årsberetning 2009
151
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
(primo juli), samt derefter hver 14. ende dag indtil sorteringsvægt og pelsningsvægt. Kroppene blev længdemålt, skindene længdemålt og kvalitetsvurderet, BMI blev beregnet som: BMI = lgm(kg) / (længde(m))3 (Clausen, 2006). Foderoptagelsen blev registreret gennem hele perioden d. 2/7 – 18/11, og det gennemsnitlig foderforbrug pr dyr pr dag blev beregnet. De statistiske beregninger er udført med statistikprogrammet SAS. Procedurerne GLM (ss4), LSMEANS / PDIFF er anvendt med 5 % som signifikansniveau ved beregninger over
vægt og længde. Relevante kovariater er medtaget i de tilfælde de er signifikante. Ved skindkvalitet, farve og renhed er anvendt en non-parametrisk test (GENMOD). Silket, fyldighed og metallic er analyseret med proceduren PROBIT eller X2. Resultater De sent fødende tæver føder færre hvalpe end de tidligt fødende, ved fødsel var der en forskel på 0,68 hvalp pr kuld, dag 49 var forskellen 1,02, de sendt fødende mister således også flere hvalpe (tabel 1).
Tabel 1. Deiperioderesultater for tidligt og sendt fødte kuld. Hold Genn Levende pr kuld v. Døde pr kuld v. Tæve vægt Antal hvalpe Tæve vægt Antal hvalpe fødsels fødsel fødsel dag 28, g dag 28 dag 49, g dag 49 dato 101 25/4 7,47 (2,05) 0,31 (0,75) 1343 (135) 7,17 (1,86) 1066 (147) 7,10 (1,83) tidlig 102 7/5 6,79 (2,25) 0,40 (0,91) 1349 (160) 6,46 (2,06) 1193 (165) 6,08 (2,33) sen p-værdi NS (0,1) NS NS NS (0,06) 0,002 0,01 NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene, forskellige bogstaver angiver at der er signifikant forskel
De tæver der fødte tidligt havde første parringsdato ca. 2,6 dage før de sent fødende, og anden parringsdato ca. 1,3 dage før de sent fødende. 25 % af de tæver der fødte tidligt, var kun parret én gang, derimod var der blandt de sent fødende 94 % af tæverne der parrede to gange, to gange parringer øger kuldstørrelsen. Drægtigheden var 10 dage længere hos de sent fødende tæver, længere drægtighed reducerer kuldstørrelsen. Tævevægten dag 28 var ens for tidligt og sent fødende tæver, dag 49 var der forskel således at de sent fødende vejede mest, det
skyldes overvejende at disse tæver fravænnede en hvalp mindre end de tidligt fødende tæver (tabel 1). Derudover var der tendens til en lidt bedre fravænningsvægt for de tidligt fødte hanhvalpe (tabel 2). Vejeresultaterne for vækstperioden hos tidligt og sent fødte hanhvalpe afhængig af deres alder, ses af figur 1. Det ses, at ved samme alder vejede hvalpene det samme, og ved pelsning var der ikke forskel mellem tidligt og sent fødte.
Tabel 2. Vejeresultater i gram, for tidligt og sent fødte hanhvalpe Hold Antal Dag Dag Dag 49 Dag Udsæt- 16/7 30/7 28 28 hanner 49 ning 3/7 hanner tæve tæve 101 58 195 178 527 447 1022 1402 1661 tidlig (34) (31) (85) (66) (138) (163) (163) 102 52 190 175 503 444 659 1007 1321 sen (38) (32) (102) (78) (131) (139) (146) NS NS NS NS (0,08) NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene
152
14/8
27/8
15/9
1/10
13/10
29/10
Pelsning 19/11
1976 (183) 1722 (181)
2199 (201) 1992 (194)
2614 (253) 2482 (241)
2874 (266) 2808 (283)
2976 (303) 2964 (318)
3021 (328) 3041 (341)
3132 (347) 3132 (344)
Faglig Årsberetning 2009
Tidligt og sent fødte minkhvalpes tilvækst I vækstperioden
3500
3000
Vægt i gram
2500
2000 Tidlig Sen 1500
1000
500
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 84 91 98 105 112 119 126 133 140 147 154 161 168 175 182 189 196 203 210 217
0 Alder i dage
Figur 1. Vejeresultater for tidligt og sent fødte hanhvalpe afhængig af alderen.
Der var ingen forskel i pelsningsresultaterne mellem tidligt og sent fødte hvalpe (tabel 3). Tabel 3. Pelsningsresultater for tidligt og sent fødte hvalpe. SkindKropsHuld ved Kvalitet BMI længde cm Hold længde, cm pelsning 1-12 * # 101 tidlig 49,6 (1,1) 4,5 (0,5) 6,7 (2,5) 25,7 90,9 (3,7) 102 sen 49,5 (1,3) 4,5 (0,5) 6,3 (2,4) 25,8 91,2 (4,4) NS NS NS NS NS 12 er bedst; # BMI beregnes som: BMI = lgm(kg) / 3 (længde(m)) . NS angiver at der ikke er forskel mellem holdene
I perioden 2/7 til 18/11 åd de tidligt fødte hvalpe i gennemsnit 25,3 kg foder, total set var det kun 312 g mere end de sent fødte (1,2 %). Der var således ingen forskel i den optagne fodermængde fra udsætning til pelsning. Foderoptagelsen ses af figur 2. Indtil september åd de tidligt fødte hvalpe mere end de sent fødte, derefter var det i en periode omvendt.
Faglig Årsberetning 2009
153
Clausen, T. N. & Sandbøl, P.
250
g/dyr/dag genn over en uge
200
150
Tidlig Sen
100
50
08
08 12 -
11 -
08
11 -
05 -
10 -
29 -
22 -
10 -
08
08
08
10 -
15 -
10 -
08 -
01 -
10 -
08
08
08
09 -
24 -
09 -
17 -
10 -
09 -
08
08
08
09 -
03 -
27 -
08 -
08
08
08 -
20 -
08 -
13 -
06 -
08 -
08
08
08 30 -
07 -
08
07 -
23 -
07 -
16 -
07 -
09 -
02 -
07 -
08
08
0
dato
Figur 2. Foderoptagelsen hos tidligt og sent fødte hanhvalpe fra 2/7 til 18/11
Konklusion Vægtudviklingen hos tidligt og sent fødte hvalpe er ens ved samme alder, og deres totale foderoptagelse fra udsætning til pelsning er ens. I begyndelsen af vækstperioden æder de sent fødte hvalpe mindre end de tidligt fødte, idet de er yngre og mindre, men fra september æder de sent fødte hvalpe mest, således at den totale
154
foderoptagelse fra primo juli til pelsning er ens. Pelskvalitet, kropslængde, skindlængde og huld ved pelsning er ens for de to grupper. Referencer Clausen, T. N. 2006. Huldvurdering af mink. Faglig Årsberetning 2005, 175182. Pelsdyrerhvervets Forsøgs- og ForskningsCenter, Holstebro, Danmark.
Faglig Årsberetning 2009