Universidad Popular Autónoma del Estado de Puebla
Maestría en Tecnología Educativa
TRIMESTRE 03
MÓDULO: AMBIENTES DE APRENDIZAJE BASADOS EN TIC
Maestro: Giovanni De Simone Maimone
ACTIVIDAD 4 Propuesta de presentación.
María Elena Nava Herrera. ID: 131835
06 de Septiembre de 2014.
ACTIVIDAD 4 Propuesta de presentación.
Ambientes de Aprendizaje basados en TIC Maestro: Giovanni De Simone Maimone.
Práctica de laboratorio Manejo del microscopio y observación de microorganismos por aplicación de la Técnica de Tinción de Gram. Propósito de la práctica: Manejar el microscopio de acuerdo al manual de operación así como aplicar la técnica de tinción de Gram para bacterias para la identificación de su morfología. Introducción: El microscopio es un instrumento de laboratorio que nos es útil para observar microorganismos que no pueden ser observados a simple vista como lo son las bacterias, protozoarios, hongos y levaduras y virus, aunque para estos últimos, se requiere de microscopios más potentes como el electrónico. Y para su manejo deben considerarse las siguientes medidas de seguridad e higiene: Cuando se transporte el microscopio, se debe tomar el brazo con una mano y colocar la otra debajo de la base para sostenerlo manteniendo el microscopio de en posición vertical. En el caso de que la fuente de la luz no sea del tipo integrado, llevar primero el microscopio a la mesa del laboratorio y después regresar por la fuente de la luz no transportar ambas partes al mismo tiempo. Mantener el microscopio por lo menos 15 cm dentro de la mesa de trabajo. No manejar las lentes con los dedos, el sudor contiene ácidos grasosos y otras substancias que pueden opacarla. Para limpiar el sistema óptico utilizar papel para limpieza de lentes. Limpia las lentes del microscopio antes y después de utilizarlo en clases. No jugar con ningún componente del instrumento. Si el microscopio no parece funcionar en forma adecuada, notificarlo inmediatamente al profesor. Así como también, para enfocar a los microorganismos de las preparaciones, se deben seguir las siguientes instrucciones: Limpia todos los lentes con papel especial. • Colocar el objetivo seco débil en posición debajo del tubo del cuerpo del microscopio, se sentirá un chasquido cuando haya quedado bien colocado. • Conectar la fuente de luz y encenderla. • Colocar una preparación sobre la platina del microscopio y asegurarse con las pinzas • Acomoda la preparación que se va a examinar en la apertura central de la platina. • Emplear el tornillo macrométrico, elevar la platina hasta el tope, si el microscopio no tiene tope, observar lateralmente parta evitar que la lente entre en contacto directo con la preparación.
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Usar el objetivo seco débil (10 X), localizar el objetivo a observar con el tornillo macrométrico, cuando sea parcialmente visible, enfocar con el tornillo micrométrico. Ajustar la fuente de luz, cerrar el diafragma y mover el tornillo del condensador hasta que la preparación se observe con la mayor nitidez posible. • Girando el revólver colocar el objetivo seco fuerte (40 X) enfocar ligeramente con el tornillo micrométrico. • Mover ligeramente el revólver para colocar una gota de aceite de inmersión sobre la preparación. En seguida girar el revólver hasta que el objetivo de inmersión quede en su lugar. Incrementa la iluminación abriendo el diafragma o elevando el condensador, al mismo tiempo enfocar con el tornillo micrométrico. • Anotar el nombre de la preparación observada y el objetivo del lente utilizado Para esto también es necesario emplear el material de la manera adecuada cumpliendo las medidas de seguridad e higiene que se indican: Preparación de portaobjetos y cubreobjetos: •
Lavar los portaobjetos y cubreobjetos con jabón y enjuagar con agua destilada. Manteniendo las manos bien limpias, secarlos cuidadosamente con una gasa Colocar portaobjetos y cubreobjetos limpios y secos sobre una gasa limpia
Preparación del frotis Colocar una gota de agua destilada en el centro del portaobjetos con el asa de cultivo previamente flameada. • Flamear el asa nuevamente y transferir a la gota de agua, una asada de los microrganismos a ser observados. • Con un movimiento circular suave, emulsificar los microrganismos en la gota de agua; la gota se extiende a una capa delgada que debe abarcar un área aproximadamente igual al tamaño del cubreobjetos. • Secar al aire y fijar los microrganismos flameando el portaobjetos tres veces consecutivas. • Se puede agregar azul de metileno o lugol, dejándoles actuar por un minuto, enjuagar y secar • Observa al microscopio el frotis preparado • Si se desea observar a los microorganismos vivos después de emulsificar la muestra, no se debe secar ni flamear, solamente se debe TECNOLOGÍA EDUCATIVA
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agregar una gota de lugol o solo asegurarse de tener la cantidad suficiente de agua en la muestra y colocar el cubreobjetos de manera cuidadosa. Observar al microscopio la preparación.
Para facilitar la observación de los microorganismos:
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Observar al microscopio primero a seco débil y hacer el esquema si es que con este aumento se logra distinguir adecuadamente las estructuras y características del espécimen. Observar al microscopio al seco fuerte, si con el objetivo anterior no se obtiene el detalle deseado. Observa al microscopio en objetivo de inmersión, si nuevamente no se logra lo anterior.
Tinción de Gram: La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio bacteriológico. Su utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio de Microbiología las referencias a la morfología celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, etc) se basan justamente en la tinción de GRAM.
Técnica: 1. El Frotis fijado con calor se tiñe 1 min con Cristal violeta, se lava con agua destilada. 2. Se cubre con solución de Lugol (yodo-yoduro de potasio) durante 1 min y se lava con agua destilada 3. Se decolorar con una disolución alcohol etílico/acetona (1:1). 4. Escurrir y cubrir con Safranina (color de contraste) durante 30 seg. 5. Lavar con agua destilada y secar.
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Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativas.
Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la célula grampositiva es gruesa y consiste en varias capas interconectandas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula gram-positiva es peptidoglicano.
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La pared de la célula gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo 10% - 20% de la pared de la célula gramnegativa es peptidoglicano.
Ejemplos de microorganismos bacterianos y su reacción a la Tinción de Gram:
Cocos Gram-positivos Racimos: forma típica de Staphylococcus sp, como S. aureus
Cadenas: forma típica de Streptococcus sp, como S. pneumoniae,Streptococcus grupo B
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Tetradas: forma típica de Micrococcus sp
Bacilos Gram-positivos Gruesos: forma típica de Clostridium sp, como C. perfringens, C. septicum
Finos: forma típica de Listeria sp
Ramificados:
forma
de Actinomycetes y Nocardia,
típica como A.
israelii
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Cocos Gram-negativos Diplococos: forma usual de Neiseria sp, como N. meningitidis También Moraxella
sp y Acinetobacter
sp aparecen con morfología de diplococos. Acinetobacter puede ser pleomórfico, y a veces aparece como coco Gram-positivo.
Cocobacilos: forma usual de Acinetobacter sp, que puede ser Gram-positivo o Gram-negativo, y, a menudo, Gram-variable.
Bacilos Gram-negativos Bacilos finos: forma usual de enterobacteriaceae, como E. Coli
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Cocobacilos: forma usual de Haemophilus sp, como H. influenzae
Curvados: forma usual de Vibrio sp, como V. cholerae, yCampylobacter sp, como C. jejuni
Forma
de
aguja
fina:
forma
usual
de Fusobacterium sp
Medidas de seguridad e higiene: Portar bata blanca de algodón y manga larga. Portar lentes de seguridad Lavarse las manos al inicio y ´termino de práctica No hacer uso inadecuado de materiales y reactivos No jugar en el laboratorio Atender indicaciones y seguir el procedimiento de acuerdo a las recomendaciones realizadas por el docente Limpiar mesas y pisos al inicio y término de la práctica
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Materiales: 1 Asa bacteriológica 1 Mechero bunsen 5 Portaobjetos y cubreobjetos 1 Soporte para tinciones 1 Caja Petri 1 Pizeta Reactivos Agua destilada Lugol Azul de metileno en disolución Procedimiento: 1. Identificar las partes del microscopio 2. Realizar las preparaciones necesarias para observar microorganismos siguiendo el procedimiento indicado y atendiendo las medidas de seguridad e higiene. 3. Identificar la forma de operar el microscopio y manipularlo de acuerdo a las medidas de seguridad e higiene. 4. Realizar las anotaciones necesarias identificando la morfología celular bacteriana. 5. Lavar materiales para su entrega y dejar el espacio de laboratorio empleado limpio y en orden.
REFERENCIA DOCUMENTAL: 1. Microscopio. Tomada de http://academic.uprm.edu/~jvelezg/lab4estudiantes.htm 2. Preparación de frotis. Tomada de Microbiología. Thomas D. Brock. 6ª edición. Editorial Prentice- Hall. 1993 3. Morfología bacteriana. Tomada de http://morfologiabacteriana.blogspot.mx/ 4. Tinción de Gram. tomada de http://www.ebah.com.br/content/ABAAAfd_MAG/manual-microbiologia?part=8 5. Christian Gram. Tomada de http://www.iqb.es/historiamedicina/personas/gram.htm 6. Pared celular gram positivos. Tomada de http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/gram.htm 7. Pared celular gram negativos. Tomada de http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/gram.htm 8. Ejemplos de bacterias Gram positivas y negativas. Tomadas de : http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/gram.htm 9. seguridad e higiene personal en el laboratorio. Tomada de http://www.vivirmejor.com/e-infecciosas-infecciones-bacterianas-infecciones-viricas/ 10. CONALEP. (2012). Prácticas/Ejercicios /Problemas/Actividades. En I. Guía Pedagógica del Módulo(25-33). México: Colegio Nacional de Educación Profesional Técnica.