Anaerobios

ANAEROBIOS AUTORES DOCENTES MICROBIOLOGIA

CLAUDIA FAJARDO URIBE MARCELA GOMEZ GARZON ADRIANA JIMENEZ ROJAS PATRICIA TRUJILLO ROMAN

Practica # 12 ANAEROBIOS

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA: Estudiar las características morfológicas microscópicas de los gérmenes anaerobios.

Conocer las recomendaciones adecuadas para la recolección y transporte de muestras para cultivo de anaerobios.

Conocer las pruebas utilizadas en el laboratorio para identificar y diferenciar los géneros de los microorganismos anaerobios de importancia clínica

INTRODUCCION Los llamados anaerobios, son microorganismos que no se multiplican en presencia de oxígeno o si lo logran, lo hacen en concentraciones muy reducidas del mismo como el Bacteroides fragilis o el Clostridium histolyticum.

Teniendo en cuenta los requerimientos de oxígeno en el laboratorio, podemos diferenciar bacterias microaerófilas, aerotolerantes y anaerobios estrictos u obligados:  Las bacterias microaerófilas resultan dañadas por niveles altos de oxígeno como el atmosférico (21%) y requieren una concentración bajas de CO2 para crecer, en el rango de 2 a 10%.  Anaerobios aerotolerantes son aquellos microorganismos que toleran exposiciones breves al oxígeno atmosférico desarrollándose óptimamente en condiciones anaerobias.  Los anaerobios estrictos no toleran el oxígeno y mueren en su presencia, por lo tanto sólo se multiplican en su ausencia.

Los anaerobios en general poseen un metabolismo de tipo fermentativo, en el cual, sustancias orgánicas son los aceptores finales de electrones, aunque también pueden obtener energía a partir de la respiración anaerobia.

Otras características comunes a los microorganismos anaerobios son sus requerimientos nutricionales complejos, su lento crecimiento y su labilidad al aire atmosférico lo que hace que su aislamiento sea difícil en el laboratorio.

El reservorio natural de los anaerobios son los animales y el hombre, también se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza, siendo su presencia en la tierra y en el agua proporcional al grado de contaminación fecal. En

el intestino la proporción anaerobios: aerobios (Familias Enterobacteriaceae y Streptococaceae) es de 1000:1, mientras que en piel, boca, vías aéreas superiores y tracto genital inferior femenino la relación es de 5:1.

La mayoría de las infecciones por anaerobios son de transmisión endógena con excepción de las infecciones por bacterias del género Clostridium, que en su mayoría son de tipo exógeno.

Patologías relacionadas con Anaerobios Bacteroides fragilis

Oportunistas

Peptostreptococcus

Abscesos abdominales

Prevotella melaninogenicus

Porphyromonas sp

Fusobacterium sp

Infecciones bucofaríngeas Abscesos cerebrales

Oportunistas

Veillonella

Oportunistas raras

Oportunistas

Clostridium botulinum

Botulismo

Oportunistas

Clostridium difficile

Diarrea asociada con uso de antibióticos Enterocolitis

Lactobacillus

Flora Normal

Clostridium perfringes

Celulitis Gangrena gaseosa Enterocolitis

Actinomyces sp

Celulitis crónica

Clostridium tetani

Tétanos

Propionibacterium

Oportunistas raras

Fistulas que drenan

Mobiluncus

Asociado a vaginosis

acnes

Existen una serie de signos y síntomas clínicos que orientan hacia la presencia de este tipo de infección ellos son:

Abscesos o exudado de olor muy fétido Localización de la infección en lugares próximos a las mucosas Necrosis tisular Infecciones tras mordedura Gas en los tejidos Existencia de gránulos de azufre en el pus Las bacterias anaeróbicas se clasifican en: Bacilos Gram Positivo:



Género: Propionibacterium



Género: Actinomyces



Género: Bifidobacterium



Género: Eubacterium



Género: Lactobacillus



Género: Mobiluncus (aparecen como gran negativos cuando se colorea con Gram aunque estructuralmente su pared es del tipo de Gram +)

Bacilo Gram Positivo formador de esporas:



Género: Clostridium.

Bacilo Gram Negativo:



Género: Bacteroides.



Género: Fusobacterium.



Género: Porphyromonas



Género: Prevotella

Cocos Gram Positivos:



Género: Peptostreptococcus



Género: Micromonas micros



Género: Schleiferella asaccharolytica.



Género: Finegoldia magna



Género: Anaerococcus prevotii

Cocos Gram Negativos:



Género: Veillonella

CARACTERISTICAS DE LAS MUESTRAS PARA ANAEROBIOS Teniendo en cuenta que los anaerobios están presentes en gran número, en prácticamente todas las superficies mucosas, es difícil evitar la contaminación de la muestras con estos microorganismos. Es por esto que las siguientes muestras son inaceptables para cultivar en anaerobiosis:

Secreciones oro-nasofaríngeas.

Material superficial de piel tomado con escobillón.

Muestras de los bordes de heridas.

Esputo.

Secreciones genito-urinarias.

Contenido intestinal

Materia fecal, excepto cuando se quiere investigar toxinas de Clostridium difficile o

Clostridium botulinum

El éxito de aislar anaerobios a partir de muestras clínicas, depende de una buena toma de la muestra, se debe tener en cuenta: Disminuir la posibilidad de contaminación con flora normal, para ello, se prefiere tomar las muestras por aspiración directa del sitio donde se encuentra la colección o pus mediante punción con aguja guiada por ecografía o por endoscopia.

Evitar la exposición de la muestra al aire ambiental. Para este objetivo lo ideal sería depositar las muestras en un medio de transporte específico para anaerobios pero también es válido enviarlas en la misma jeringa con la que se la aspirado el material o por lo menos transportarlas en un recipiente herméticamente cerrado.

La viabilidad de estos microorganismos está relacionada con la calidad, volumen y el tiempo transcurrido entre la toma y su procesamiento, por eso no deben pasar más de 10 minutos entre el momento de la recolección y el cultivo.

PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA EN EL LABORATORIO 1)

Siembra en un medio de cultivo adecuado (selectivo para los microorganismos que queremos recuperar).

2)

Incubación en anaerobiosis a una temperatura de 35-37°C por un tiempo de 48 H a 4 días. Algunos de los sistemas generadores de anaerobiosis empleados en los laboratorios de microbiología son: jarras anaeróbicas, bolsas de anaerobiosis y la cámara de anaerobiosis estas se componen de 5-10% de Hidrogeno (H2), 510% de C02, 80-90% de Nitrógeno (N2) y 0% de oxigeno.

3)

Verificación del crecimiento mediante observación directa.

4)

Identificación del anaerobio: se realiza una coloración de gram para orientar morfológicamente el género aislado y luego se realiza una prueba de aerotolerancia para confirmar si estamos frente a un anaerobio estricto.

5) Prueba de suceptibilidad antimicrobianos: Desafortunadamente estas pruebas son técnicamente difíciles de realizar por lo que no se realizan de manera rutinaria en los laboratorios clínicos de los hospitales. Debido a esto no se conoce el patrón de suceptibilidad a antibióticos de las bacterias anaerobias y el tratamiento es de tipo empírico.

ACTIVIDADES 1. Observe y dibuje la Morfología microscópica característica para cada uno de los géneros, revisando la clasificación morfológica descrita en el punto anterior.

FLORA MIXTA BACTERIANA SUGESTIVA DE ANAEROBIOS (COLORACION DE GRAM)

Bacilos Grampositivos Esporulados

Bacilos Grampositivos Esporulados COLORACION SCHAEFFER FOULTON

Género: Veillonella sp.

Cocos Gramnegativos

Géneros: Prevotella, Porphyromonas, Bacteriodes Bacilos Gramnegativos

Género: Mobiluncus sp.

Bacilos Gramnegativos curvos

Género: Fusobacterium sp.

Bacilos Gramnegativos fusiformes

Género: Peptostreptococcus sp.

Cocos Grampositivos

Género: Bifidobacterium sp.

Bacilos Grampositivos

GĂŠnero: Clostridium sp.

Flora mixta y Bacilos Grampositivos esporulados

Clostridium tetani Bacilos Grampositivos esporulados

GĂŠnero: Actynomices sp.

Bacilos Grampositivos ramificados