Espiroquetas

ESPIROQUETAS AUTORES DOCENTES MICROBIOLOGIA

CLAUDIA CLAVIJO ROMERO MARCELA GOMEZ GARZON ADRIANA JIMENEZ ROJAS DIANA ORTIZ JIMÉNEZ

PRACTICA # 15 ESPIROQUETAS

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA Al finalizar la sesión Nº 14, el estudiante estará en capacidad de identificar en forma apropiada el agente causal de la sífilis dentro la familia Treponemataceae Al finalizar la sesión Nº 14, el estudiante estará en capacidad de describir correctamente los métodos realizados en el laboratorio para el diagnostico presuntivo y confirmativo del Treponema pallidum.

INTRODUCCIÓN El agente causal de la sífilis pertenece a la familia Treponemataceae, el cual agrupa tres géneros de bacterias de importancia clínica; Leptospira, Borrelia y Treponema, cuya característica es tener una pared celular flexible, lo que hace que se presente en forma de espiral.

En esta práctica de laboratorio, haremos referencia al Treponema pallidum, agente causal de la sífilis, enfermedad de transmisión sexual (ETS). El hombre se infecta a través de una persona infectada que presente lesiones mucosas.

Si la enfermedad no es tratada a tiempo puede pasar desde una fase primaria con la aparición de un chancro sifilítico, a una fase secundaria con diferentes manifestaciones neurológicas y finalmente a sífilis terciaria con compromiso de SNC, aneurisma sifilítico o gomas sifilíticos.

El diagnóstico de laboratorio está basado en la detección de anticuerpos o en la visualización directa del Treponema.

DETECCION DE ANTICUERPOS INESPECIFICOS Son pruebas de tamizaje (o screening en el habla inglesa) que poseen alta sensibilidad (Capacidad de detectar los enfermos con un resultado positivo, pocos falsos negativos) pero baja especificidad (Capacidad de detectar los NO enfermos con un resultado negativo, pocos falsos positivos), en otras palabras, con estas pruebas se puede detectar la mayoría de paciente con sífilis, pero debido a su baja especificidad, se obtendrá un número considerable de falsos positivos (pacientes SIN enfermedad pero con la prueba positiva). Su principal utilidad es el diagnóstico presuntivo de la enfermedad y el seguimiento al tratamiento.

Son pruebas cuya lectura se realiza teniendo en cuenta el grado de floculación, se fundamentan en la detección o presencia de reaginas (Anticuerpos inespecíficos) utilizando como antígeno la cardiolipina; se pueden realizar cualitativa y cuantitativamente. Las más comunes son el V.D.R.L. (Venereal Disease Research Laboratory) y el R.P.R. (Rapid Plasma Reagin) ambas detecten anticuerpos séricos inespecíficos y se conocen como “no treponémicas” Es importante tener en cuenta que las pruebas “no treponémicas” han sido recomendadas por ser rápidas, baratos y convenientes para examinar un gran número de sueros, o como indicadores de la actividad clínica de la sífilis, en el control de la terapéutica ya que los títulos iniciales se reducen a los 6-12 meses después de un tratamiento eficaz, llegando a ser indetectables varios años después.

Para diagnosticar la enfermedad del SNC, se debe utilizar El VDRL en muestras de LCR. Las causas de falsos positivos con pruebas no treponémicas son diversas e incluyen a enfermos con colagenosis, edad avanzada, uso de drogas por vía parenteral, enfermedad crónica hepática, (hepatitis) infecciones crónicas graves (T.B.C., V.I.H.) y otra enfermedades como artritis, mononucleosis infecciosa, lepra, paludismo, entre otras, aunque vale la pena aclarar que los títulos de anticuerpos anticardiolipina que se obtienen de estos paciente son “bajos” (en general hasta 1:8).

Técnica de laboratorio: VDRL: Se toma suero del paciente, si se usa líquido cefalorraquídeo sólo se debe centrifugar. Luego, la muestra se mezcla con un antígeno, que es una solución salina tampón de cardiolipina,y lecitina adosadas a partículas de colesterol. Esta prueba se puede realizar en lámina y observarse al microscopio.

Los resultados de la prueba de VDRL en lámina se informan como no reactivos (no hay floculación), y reactivos si se observa un precipitado grueso (floculación definitiva). Todos los sueros reactivos deben ser diluidos seriadamente; a cada dilución se le realiza la prueba de VDRL, y se informa el título máximo obtenido.

RPR: Es una prueba diseñada para detectar de manera rápida la presencia de reagina en el suero, examinando macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación, tiene el mismo fundamento del VDRL y se diferencia porque el Antígeno de cardiolipina se encuentra recubierto con microparticulas de carbón.

Los falsos negativos se pueden producir por errores técnicos y los falsos positivos son los mismos que para la prueba de VDRL. Se han desarrollado variantes de esta prueba en las que la muestra puede ser plasma, sin que se pierda su sensibilidad y especificidad.

DETECCION DE ANTICUERPOS ESPECIFICOS Los métodos directos o pruebas treponémicas son utilizadas para confirmar los resultados de una prueba no-treponémicas (reagina) positiva. Permitiendo la confirmación de los casos de sífilis de tal manera que se evite la medicación de aquellos pacientes cuyas serologías “no treponémicas” fueron reactivas, pero el resultado en ésta fue negativo. Contribuye a eliminar gastos innecesarios en antibióticos y por ende, se evita el abuso de éstos que conduce al incremento de la resistencia al medicamento.

Son conocidas también como pruebas treponémicas dentro de las cuales se encuentran: el FTA-ABS (Fluorescent Treponemal-Antibody Absorption) y TPHA (Treponema pallidum, Haemagglutination Assay) y detectan anticuerpos anti-treponémicas específicos mediante la técnica de inmunofluorescencia indirecta o hemaglutinación respectivamente.

A pesar de su mayor especificidad, también puede dar falsos positivos en los sueros con globulinas anormales, factores antinucleares, factor reumatoide, herpes genital, drogadicción, embarazo y diabetes.

VISUALIZACION DEL TREPONEMA El treponema no colorea con Gram, podría visualizarse en biopsias coloreadas con tinción de plata o mediante la técnica de campo oscuro que permite ver los treponemas móviles en muestras de chancro de sifílis primaria. Esta técnica no está disponible en los laboratorios de microbiología.

Es importante tener en cuenta que el Treponema. pallidum no ha podido ser cultivado in vitro y la inoculación del conejo es el único medio disponible para aislar este microorganismo.

- Vista previa restringida Manual de técnicas de laboratorio en hematología Joan Lluís Vives i Corrons, Josep Lluís Aguilar Bascompte 2006 - 741 páginas - Vista previa restringida Fundamentos y técnicas de análisis bioquímico María Carmen d' Ocón Navaza, María José García García-Saavedra, José Carlos Vicente García 2005 - 440 páginas - No hay vista previa disponible

ACTIVIDAD A continuación se ilustra la forma en que se leen en el laboratorio las pruebas no treponémicas, obsérve y compare con las pruebas demostrativas. Realice su propia lectura y anote los resultados en las tablas correspondientes.

LECTURA DE VDRL

El siguiente cuadro muestra como se evalúan los resultados de la prueba RPR.

Tipo de Aglutinación

RESULTADO

Agregados grandes o me- (reactivo) Positivo dianos Agregados pequeños

(reactivo débil) Positivo débil

Ningún agregado o ligera rugosidad

(No-reactivo) Negativo

Grafique lo observado en el laboratorio

VDRL NO REACTIVO

RPR NO REACTIVO

VDRL REACTIVO

RPR REACTIVO