Inmunofluorescencia

INMUNOFLUORESCENCIA AUTORES DOCENTES MICROBIOLOGIA

CLAUDIA CLAVIJO ROMERO MARCELA GOMEZ GARZON ADRIANA JIMENEZ ROJAS DIANA ORTIZ JIMENEZ

GUIA#20 TECNICA DE INMUNOFLUORESCENCIA PARA EL DIAGNOSTICO DE INFECCIONES

OBJETIVOS Al finalizar la sesión Nº 20, el estudiante estará en capacidad de comprender en forma apropiada el fundamento de la prueba de inmunofluorescencia Al finalizar la sesión Nº 20, el estudiante estará en capacidad de aplicar apropiadamente una técnica alternativa para el diagnóstico viral

INTRODUCCION La inmunofluorescencia es una técnica de inmunomarcación ( inmunoensayos) que aprovecha la capacidad que tienen los anticuerpos para unirse con alta especificidad a una determinada molécula blanco; se diferencia de otras técnicas inmunoquímicas en que aquí la marca unida al anticuerpo es una molécula fluorescente como por ejemplo, el isotiocianato de fluoresceína. El anticuerpo marcado se hace reaccionar contra un preparado biológico y luego se expone la muestra así tratada a una fuente de luz de onda corta (ultravioleta o azul) seleccionada por medio de un monocromador. Esta luz de onda corta genera un fenómeno de fluorescencia en la molécula marcadora que a su vez emite luz a una longitud de onda más larga (verde, amarillo o naranja).

La inmunofluorescencia, como técnica de tinción, puede ser utilizada en cortes de tejidos, líneas celulares cultivadas, células individuales y secreciones que contengan células en suspensión (por ejemplo esputo) con la finalidad de analizar la presencia y distribución de proteínas, glúcidos y moléculas pequeñas tanto de origen biológico como no.

Tipos de inmunofluorescencia Existen dos tipos de técnicas de inmunofluorescencia; directa (o primaria) y la indirecta (o secundaria).

Inmunofluorescencia Directa o IFD (Para detección de antígenos) La inmunofluorescencia directa, también conocida por sus siglas IFD, hace uso de un único anticuerpo que se encuentra químicamente unido a un fluorócromo. El anticuerpo reconoce la molécula diana y se une a ella directamente.

Esta técnica presenta algunas ventajas con respecto a la IFI (indirecta). Reduce el número de etapas necesarias, por lo tanto es más rápida y por otro lado es menos sensible a interferencias debidas a reactividad cruzada de los anticuerpos o a reacciones no específicas, las cuales tienden a aumentar el ruido de fondo de la técnica.

Inmunofluorescencia Indirecta o IFI (Para detección de anticuerpos) La inmunofluorescencia indirecta (también conocida por sus siglas IFI) hace uso de dos anticuerpos; el anticuerpo primario es el que reconoce y se une a la molécula diana, mientras que el secundario que es el que se encuentra marcado con el fluorócromo, reconoce al primario y se une a él. Esta técnica es un poco más compleja que la IF, requiere más pasos y es más posible que sufra interferencias, pero en contrapartida es mucho más flexible que una técnica directa y debido a que es posible que un anticuerpo primario una a mas de anticuerpo secundario, implica un efecto de amplificación que también aumenta la sensibilidad de la técnica.

Limitaciones

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Un problema con la inmunofluorescencia es el fotoblanqueo. Es decir la pérdida de la actividad fluorescente causada por la exposición a la luz. Esta pérdida de actividad puede ser controlada reduciendo la intensidad o el tiempo de exposición a la luz, incrementando la concentración de fluorócromo, o empleando fluorócromos menos propensos al fotoblanqueo.

Requerimientos técnicos (microscopio de fluorescencia) no disponibles en todos los laboratorios Personal de laboratorio entrenado en la técnica.

 Lectura e interpretación NO REACTIVO cuando la célula presenta color café- rojizo sin fluorescencia.

REACTIVO cuando se presenta con una fluorescencia verde intensa.

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Aplicaciones: Clasificación

Microorganismo

Tipo de Inmunofluorescencia

Bacterias

Bordetella pertusis

IFI

Legionella pneumoniae

IFI

Chlamydia trachomatis

IFI-IFD

Treponema pallidum

IFI

Adenovirus

IFI

Virus Sincitial Respiratorio

IFD

Herpesvirus

IFI

Adenovirus

IFI-IFD

Virus de la Varicela Zoster

IFI

Virus Parainfluenza

IFI

Virus del Sarampion

IFI

Giardia duodenalis

IF

Cryptosporidium parvum

IFD

Toxoplasma gondii

IFI

Cryptococcus neoformans

IFD

Virus

Parásitos

Hongos

ACTIVIDAD: OBSERVE AL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA, DIBUJE Y COMPLETE:

Técnica de Inmunofluorescencia: INDIRECTA (FTA-Abs) Para la detección de ANTICUERPOS De Treponema pallidum

Técnica de Inmunofluorescencia: INDIRECTA (Toxoplasma G-FIAX) Para la detección de ANTICUERPOS De Toxoplasma gondii