OTROS BACILOS GRAMNEGATIVOS AUTORES DOCENTES MICROBIOLOGIA
CLAUDIA CLAVIJO ROMERO MARCELA GOMEZ GARZON ADRIANA JIMENEZ ROJAS DIANA ORTIZ JIMENEZ
Practica # 10
Otros Bacilos Gram Negativos OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:
Al finalizar la sesión Nº 10, el estudiante estará en capacidad de distinguir correctamente las características del género Haemophilus, Gardnerella y Helicobacter en el laboratorio
Al finalizar la sesión Nº 10, el estudiante estará en capacidad de interpretar apropiadamente las pruebas utilizadas en el laboratorio para identificar y diferenciar los tres géneros.
Al finalizar la sesión Nº 10, el estudiante estará en capacidad de diferenciar en forma correcta hallazgos de laboratorio que caracterizan el Síndrome de vaginosis bacteriana
INTRODUCCION Los microorganismos que incluiremos en esta guía,
pertenecientes a los Géneros Haemophilus, Gardnerella,
Campylobacter y Helicobacter, comparten características que nos permiten agruparlas en el laboratorio:
Son morfológicamente similares cuando se colorean con gram, ya que se presentan como bacilos pleomórficos gram negativos, es decir, pequeños formas de bacilos o cocobacilos cortos, delgados y/o curvos,
Son exigentes para su aislamiento primario: requieren medios selectivos enriquecidos y condiciones óptimas de incubación
Hacen parte de la flora normal humana, por lo que están relacionadas con infecciones cuando se diseminan a sitios que normalmente son estériles o cuando el paciente presenta alguna alteración en su sistema inmune.
Describiremos a continuación algunas de las características más importantes de cada uno de estos géneros junto con las pruebas existentes en el laboratorio utilizadas para su clasificación:
Haemophilus Las especies de este género hacen parte de la flora normal del tracto respiratorio superior de los seres humanos. La especie de mayor importancia clínica es el Haemophilus influenza , que a su vez se diferencia en cepas capsuladas y no capsuladas. Las cepas capsuladas son más virulentas y están asociadas a infecciones graves como meningitis, epiglotitis, celulitis con bacteremia, artritis séptica y neumonía. Las cepas no capsuladas son las que predominan haciendo parte de la flora normal y por lo común causan infecciones localizadas como otitis media, conjuntivitis y sinusitis. En el laboratorio, los medios de elección para su recuperación, son los medios que contienen hemina (Factor X) y NAD (Factor V) contenidos en la sangre. Un representante de estos medios es el agar chocolate que se prepara calentando una base de agar sangre estéril a una temperatura suficientemente alta (alrededor de 80ºC) como para lisar los eritrocitos de carnero y liberar los factores de X y V. En este medio se identifican pequeñas colonias blancas grisáceas, lisas, translucidas con olor característico a metal o algunas veces a madriguera de ratón. Para su identificación final, los laboratorios realizan una prueba adicional denominada satelitismo, sin embargo, esta prueba no es suficiente para clasificar las diversas especies que conforman este género por lo que se recurre a sistemas de identificación comerciales que incorporan varias pruebas enzimáticas rápidas que por lo general dan buenos resultados. PRUEBA DE SATELITISMO
Esta prueba se realiza sembrando de manera masiva en agar sangre las colonias sospechosas de pertenecer al género Haemophilus
En sentido perpendicular a la siembra efectuada se realiza una estría recta a lo largo de la caja con una cepa de Staphylococcus aureus,
·
Se incuba 24 a 48 horas a 35º C. en ambiente microaerofílico o tensión de CO2 5%
·
Una prueba positiva de satelitismo consiste en el crecimiento de pequeñas colonias de Haemophilus que asemejan gotas de rocio dentro de las zonas de hemolisis producida por Staphylococcus aureus.
Gardnerella vaginalis El género Gardnerella consta de una sola especie conocida, Gardnerella vaginalis. Son bacilos gramnegativos, que colorean como gramvariables debido a poseer una pared celular laminar no típica de gramnegativos. Anaerobio facultativo, catalasa y oxidasa negativo. Muchas cepas son de crecimiento exigente y requieren 48 horas o más para desarrollarse.
G. vaginalis se encuentra formando parte de la flora vaginal de mujeres sanas en porcentajes que oscilan entre el 20% o incluso hasta el 70%. Por otra parte desempeña un papel importante en el síndrome de vaginosis bacteriana (VB).
Este síndrome se diagnostica con base en las características clínicas (flujo vaginal de color blanco-grisáceo, de olor fétido que algunos semejan con el olor del pescado). El diagnóstico clínico se confirma con un examen de laboratorio de secreción vaginal que incluye los siguientes parámetros:
pH: > 4,5
Examen en fresco (montaje entre lamina y laminilla con solución salina): Presencia de “células clave” o guía (se denominan así por la adherencia de numerosas bacterias a la membrana celular)
Test de aminas: positivos. Esta prueba consiste en mezclar una gota de KOH 40% con una gota del exudado vaginal, si se aprecia un fuerte olor a pescado debido a la liberación de aminas, la prueba se considera positiva
Gram de secreción vaginal: Presencia de “células clave” o guía con observación de bacilos coloreados. Cultivo: No es indispensable para el diagnóstico, sin embargo, Gardnerella crece en agar sangre y agar chocolate en 24-48 horas formando colonias pequeñas, grises, translúcidas.
Campylobacter Son bacilos gramnegativos cortos, con forma de coma, espiral o alas de gaviota. Son microaerofílicos, es decir, crecen en atmósferas con baja concentración de oxigeno (5%). Móviles por un único flagelo polar y no esporulados. No fermentan los carbohidratos y dan positivos para la prueba de oxidasa y catalasa. Crecen a 42˚C y en un medio enriquecido lo que dificulta su diagnóstico en los laboratorios clínicos. Habitan en el tracto gastrointestinal de un gran número de animales. En el hombre se asocian a infecciones gastrointestinales, siendo considerado en Estados Unidos como el primer agente etiológico de gastroenteritis. También ha sido asociado a la patogenia del linfoma gástrico tipo MALT. Otras especies menos frecuentes son: C. fetus que produce septicemia en pacientes inmunosuprimidos. C. cinaedi, C. hyointestinales y C. fennelliaee que see han aislado en homosexuales con enteritis y proctitis.
Helicobacter pylori En 1983, se aislaron por primera vez del estómago de pacientes con lesiones gástricas y ulcera péptica, unos bacilos gramnegativos con forma de espiral y con gran actividad de ureasa, a los que se les denomino Campylobacter pyloridis, nombre que posteriormente se rectifico a Campylobacter pylori, Estudios posteriores de este microorganismo demostraron que difería morfológica y genéticamente a este género, llevando a la creación del genero Helicobacter.
H. pylori es un bacilo curvado con forma de espiral, “U”, arnés de bueyes o alas de gaviota. Posee de 1 a 6 flagelos polares. H pylori se localiza preferencialmente en los pliegues de la mucosa gástrica del antro, aunque también puede aislarse del cuerpo y del fondo del estómago, pero no invade el epitelio. La producción de ureasa, hace que desempeñe un papel importante en la supervivencia y crecimiento de este patógeno en el estómago al crear un microambiente alcalino. H. pylori causa gastritis, ulcera péptica y cáncer gástrico.
Las muestras idóneas para su aislamiento son las biopsias, que permiten visualizar el bacilo en la mucosa intestinal en conjunto con la respuesta inflamatorio o la presencia de malignidad. Se pueden colorear con hematoxilina y eosina, pero los bacilos son más evidentes con otras coloraciones como giemsa.
ACTIVIDADES Observe y dibuje la Morfología microscópica característica para cada uno de los microorganismos, así como también las pruebas utilizadas para su clasificación en el laboratorio:
1. Haemophilus sp
COLORACION DE GRAM Bacilos Gramnegativos (pleomórficos)
SATELITISMO
2. Gardnerella vaginalis
COLORACION DE GRAM Bacilos Gramnegativos Células guía
MONTAJE EN FRESCO Células guía
COLORACION DE PAPANICOLAU (PAP) Células guía
3.
Helicobacter pylori
BIOPSIA DE ESTOMAGO COLORACION GIEMSA. BACILOS
PRUEBA DE UREA POSITIVO