Protozoos tisulares 1

PROTOZOOS TISULARES 1 AUTORES DOCENTES MICROBIOLOGIA

CLAUDIA CLAVIJO ROMERO MARCELA GOMEZ GARZON ADRIANA JIMENEZ ROJAS DIANA ORTIZ JIMENEZ

PRACTICA PARASITOLOGIA # 3 PROTOZOOS TISULARES (1ª PARTE) Trichomonas vaginalis, Leishmania sp., Trypanosoma sp.

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Phylum I. Sarcomastigophora (pseudopodia, flagella)  Subphylum I. Mastigophora (flagella)  Class 2. Zoomastigophorea  Order 2. Kinetoplastida o Leishmania, Trypanosoma  Order 7. Trichomonadida o Trichomonas

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

Al finalizar la sesión Nº 3, el estudiante estará en capacidad de identificar correctamente el trofozoito de Trichomonas vaginalis en las diferentes muestras clínicas útiles para el diagnostico como secreción vaginal, exudado uretral y sedimento urinario.

Al finalizar la sesión Nº 3, el estudiante estará en capacidad de describir apropiadamente las técnicas de laboratorio utilizadas en el diagnóstico de la Leishmania.

Al finalizar la sesión Nº 3, el estudiante estará en capacidad de reconocer en forma apropiada las estructuras morfológicas de algunos estadios del ciclo de vida del parásito Al finalizar la sesión Nº 3, el estudiante estará en capacidad de definir puntualmente las diferentes muestras para el diagnóstico de Leishmania Al finalizar la sesión Nº 3, el estudiante estará en capacidad de sustentar en forma correcta las características más sobresalientes del agente causal de la Tripanosomiasis o enfermedad de Chagas.

Al finalizar la sesión Nº 3, el estudiante estará en capacidad de sustentar en forma correcta las técnicas de laboratorio utilizadas en el diagnóstico de esta parasitosis.

INTRODUCCIÓN Trichomonas vaginalis Es un protozoo patógeno de cavidad urogenital de hombres y mujeres. Es un microorganismo de transmisión sexual y produce vaginitis y uretritis.

La única forma de vida que presenta es el trofozoito y su identificación en secreciones vaginales o uretrales permite el diagnóstico. Clave para su identificación, es observar el trofozoito en movimiento, lo cual se aprecia en los denominados montajes en “fresco” (secreción en estudio más solución salina), en esta misma preparación se aprecian muy bien los flagelos. También se puede identificar en preparaciones coloreadas con Gram (Realizadas en laboratorios de microbiología) o Papanicolaou (Coloración de elección para las citologías vaginales), aunque con estas coloraciones fijas no se observa el movimiento ni se visualizan claramente los flagelos. Este parásito es cultivable, aunque esta técnica no se requiere para su identificación y por lo tanto no se realiza de manera rutinaria en los laboratorios.

Leishmania La Leishmaniasis es una enfermedad zoonótica transmitida por vectores (moscas de arena) del género Lutzomya y Phlebotomus. Las formas clínicas dependen de la especie de Leishmania, la respuesta inmune celular del huésped, la interacción huésped-parásito, la localización geográfica y el vector, lo que determina una diversidad de presentaciones clínicas y que su tratamiento y pronóstico no puedan ser generalizados como en una receta de cocina.

Se reconocen dos formas de vida: 1) El promastigote qué es la forma ovalada y móvil que es transmitida por el mosquito y 2) Amastigote que es la forma redondeada, sin flagelos que se encuentra en el interior de los macrófagos del mamífero infectado.

Diagnóstico de laboratorio:

1) Examen directo: En improntas (Examen directo del raspado del borde interno de la ulcera de menor tiempo de evolución) o biopsias de la lesión. Estas muestras se tiñen con Giemsa o hematoxilina-Eosina.

2) Amplificación Del DNA por medio de PCR. Permite Identificación a nivel de especie que es importante para la elección del tratamiento.

3) Diagnóstico Inmunológico. Determinación de anticuerpos por técnica de ELISA o Inmunofluorescencia. Por lo general es positivo en Leishmaniasis visceral y negativos en la cutánea.

4) Intradermorreacción o Prueba de Montenegro. Se realiza mediante la inoculación de extractos parasitarios en la piel. Si el paciente ha estado expuesto previamente a la Leishmania, se genera una reacción de hipersensibilidad de tipo celular que se manifiesta por rubor y tumefacción en el área inoculada. Esta prueba es semejante a la tuberculina usada para el diagnóstico de tuberculosis. Por lo general es positiva en la leishmaniasis cutánea y negativa en la visceral.

5) Cultivo: Permite la transformación de los amastigotes en promastigotes, los cuales se pueden observar finalmente en el microscopio. Puede tardar semanas en hacerse positivo.

Trypanosoma El Tripanosoma cruzi es el agente etiológico de la tripanosomiasis americana o enfermedad de Chagas, enfermedad zoonótica transmitido por vectores triatominos, de los cuales el implicado con más fecuencia es el Rhodnius prolixus (chinches). El hombre se infecta a través de la picadura de los chinches, cuando depositan sobre la piel heces que contienen formas infecciosas tripomastigotes que entran a través de la picadura o atraviesan las mucosas. Los parásitos invaden después los macrófagos en el punto de entrada, se transforman en amastigotes que se multiplican mediante fisión binaria, y son liberados como tripomastigotes hacia la sangre y los

espacios tisulares, desde donde infectan a otras células, como el miocardio, los músculos, el sistema nervioso y sistema reticuloendotelial.

La enfermedad también puede ser adquirida por transfusiones sanguíneas u órganos transplantados, razón suficiente por la cual se reglamentó en Colombia, a través de la resolución 1738 de 1995, la obligatoriedad de realizar la prueba de Chagas en los donantes de sangre.

Diagnostico de laboratorio: 1) Examen directo: Identifica el parásito durante la fase aguda de la enfermedad ya que el número de parásitos en sangre es alto, lo que permite que los parásitos se detecten con facilidad en extensiones de sangre periférica teñidas con coloraciones especiales (Wright, Giemsa) o en exámen de gota gruesa. El parásito también se puede observar en biopsias de tejidos comprometidos o en fluidos como líquido cefalorraquídeo, aspirado de médula ósea, líquido pericárdico.

2) Cultivo: está indicado cuando hay alta sospecha clínica pero no se ha evidenciado el Trypanosoma en exámenes directos. Se puede cultivar sangre u otros fluidos corporales. El inconveniente es que el cultivo tarda semanas en volverse positivo y en el estado del paciente puede no dar espera a este resultado.

3) Diagnóstico Inmunológico: Es útil en la fase crónica de la enfermedad mediante la cuantificación de anticuerpos tipo IgG. La determinación de IgM en la fase aguda NO es de utilidad. Se pueden emplear diferentes técnicas para la identificación de los anticuerpos como: Hemaglutinación Indirecta (HAI), Inmunofluorescencia Indirecta (IFI), Doble Difusión (DD), Electrosinéresis (ES), Inmunoelectroforesis (IEF) y ELISA.

4) Técnicas moleculares: Detección de ADN del parásito mediante PCR. Es de especial utilidad en la fase crónica de la enfermedad donde a pesar de que hay pocos parásitos circulantes, se pueden detectar las secuencias del DNA extracromosomal contenido en el Kinetoplasto.- Vista previa restringida

Formas de Vida de Trypanosoma.

ACTIVIDADES 1) Grafique la forma de trofozoito de Trichomonas vaginalis que observa en el microscopio y señale sus partes sobre la imagen que se presenta.

2) Lea la descripción microscópica de las formas de vida de los siguientes protozoos tisulares, observe al microscopio, identifique las estructuras y haga su propia representación gráfica.

TROFOZOITO DE Trichomonas vaginalis Citología vaginal con tinción de Papanicolaou.

DESCRIPCION MICROSCOPICA

Estos parásitos se observan de forma alargada, ya sea aisladamente ó agrupados en forma de corona parasitando las células epiteliales.

TROFOZOITO DE Trichomonas vaginalis con Coloración de Gram secreción vaginal

DESCRIIPCION MICROSCOPICA      

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Tamaño 15-18 micras, ovalado y de gran tamaño Forma periforme Citoplasma ligeramente granular Núcleo anterior Axostilo que atraviesa todo el parasito Penacho de cuatro flagelos anteriores Membrana ondulante

AMASTIGOTES DE Leishmania sp. EN BIOPSIA DE TEJIDO MUCOCUTÁNEO COLOREADA CON GIEMSA

DESCRIPCION MICROSCOPICA 

Forma redonda u ovalada

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No presenta flagelo.

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Citoplasma claro o azul

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Núcleo excéntrico y rojo

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Cinetoplasto lateral en forma de barra.

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Vacuola.

TRIPOMASTIGOTES DE Trypanosoma cruzi en sangre periférica con coloración de Wright

DESCRIPCION MICROSCOPICA 

Tamaño: 20 um x 1.5 um aprox/

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Formas alargadas fusiformes

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Citoplasma azul claro

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Núcleo central color rojo

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Cinetoplasto grande, subterminal

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Membrana ondulante

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Flagelo anterior

AMASTIGOTES DE Trypanosoma cruzi EN BIOPSIA DE MIOCARDIO

DESCRIPCION MICROCOPICA 

Tamaño: 1.5 a 4 micras de diámetro

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Forma: redonda o oval

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No existe flagelo

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Posee núcleo y cinetoplasto