Pruebas de susceptibilidad

PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD AUTORES DOCENTES MICROBIOLOGIA

CLAUDIA CLAVIJO ROMERO MARCELA GOMEZ GARZON ADRIANA JIMENEZ ROJAS DIANA ORTIZ JIMENEZ

Practica # 5

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS OBJETIVO 

Al finalizar la sesión N° 5, el estudiante estará en capacidad de comprender en forma apropiada el fundamento de las pruebas de sensibilidad antimicrobiana que se emplean en la práctica clínica.



Al finalizar la sesión N° 5, el estudiante estará en capacidad de interpretar correctamente los informes de laboratorio de los resultados de las pruebas de sensibilidad y realizar una aproximación a su interpretación.

INTRODUCCION Una paciente tiene una infección de vía urinaria. Con base en el fundamento teórico, el médico que la atiende sabe que el agente etiológico que tiene la mayor probabilidad de causar la infección, es una Escherichia coli, un bacilo gram negativo; también sabe que el trimetoprim sulfametoxazol (TMP/SMX) actúa sobre este tipo de microorganismos, por lo que decide tratar a la paciente con este antibiótico. Tres días después la paciente no presenta ninguna mejoría. Si el antibiótico era el adecuado, ¿Qué pasó?

El médico decide ordenar un urocultivo y una prueba de sensibilidad antimicrobiana. El laboratorio informa el aislamiento de una Escherichia coli resistente al TMP/SMX. Como en el ejemplo anterior, todos los días, los médicos con base en sus conocimientos de infectología deben ordenar antibióticos a sus pacientes para el tratamiento de diferentes procesos infecciosos. A este acto médico se le denomina “tratamiento empírico”, lo cual no puede interpretarse con base en el significado exacto de la palabra “empirismo” (conocimiento que se adquiere con base en la experiencia); este término hace referencia a la conducta de prescribir antibióticos sin tener los resultados de cultivos y pruebas de sensibilidad, con base en el conocimiento sobre la patogénesis de la enfermedad. Es un ejercicio médico completamente adecuado, ya que en general la condición del paciente no permite esperar 3 o más días a los resultados de las pruebas de laboratorio.

El problema radica en la creciente resistencia de las bacterias a los antibióticos. Con contadas excepciones, no existe ningún género de bacteria que de manera constante sea 100% sensible a algún antibiótico. Dentro de un mismo género hay diferentes clones distribuidos en diferentes partes del mundo, en determinado tipo de pacientes, que muestran diferente sensibilidad frente a un antibiótico. Analizando datos epidemiológicos locales, los médicos y microbiólogos determinan cuál es el antibiótico de elección para un microorganismo. Este análisis se debe repetir periódicamente porque las bacterias van adquiriendo diferentes mecanismos de resistencia en relación con los antibióticos a las que son expuestos. ¿Cómo saber a cuales antibióticos una bacteria es sensible o resistente? Mediante pruebas de laboratorio denominadas pruebas de sensibilidad antimicrobiana o antibiograma.

TIPOS DE PRUEBA DE SENSIBILIDAD Existen pruebas que son empleadas de manera rutinaria en Centros de atención de pacientes y otras pruebas de mayor complejidad que son empleadas con fines de investigación (Ejs.: Macro y Microdilución en caldo, E Test, dilución en agar). Estas últimas no serán contempladas en la presente guía.

Las pruebas que se realizan diariamente en los Centros de Atención son de dos tipos: 1) Prueba cualitativa de difusión en disco (Método de Kirby Bauer).

2) Prueba cuantitativa por método de dilución.

1)

Prueba cualitativa de difusión en disco de Kirby Bauer.

Esta prueba fue ideada por el equipo de Kirby y Bauer. Se emplea en los Hospitales donde no cuentan con métodos automatizados y para realizar algunas pruebas confirmatorias. En esta prueba se emplean pequeños discos de papel de filtro impregnados con una concentración conocida de determinado antibiótico (sensidiscos), que son puestos sobre la superficie de un medio de cultivo sobre el que se siembra simultáneamente la bacteria cuya sensibilidad a determinado antibiótico se desea establecer. El antibiótico durante el tiempo de incubación, difundirá de manera concéntrica alrededor del sensidisco inhibiendo el crecimiento de la bacteria que sea sensible. El diámetro del halo de inhibición determinará si la bacteria es Sensible (S), Resistente (R) o Intermedio (I) al antibiótico según se observa en la siguiente gráfica:

NO SE OBSERVA HALO

HALO DE INHIBICION DE CRECIMIENTO

Para medir el halo de inhibición, el instrumento que ofrece mayor exactitud es el caliper, que es el que se emplea en el laboratorio. También puede ser usado una regla corriente.

2) Prueba cuantitativa por técnica de dilución: Macrodilución en tubo y microdilución por método automatizado.

Los métodos cuantitativos tienen la ventaja que permiten establecer la mínima concentración que inhibe una bacteria y no simplemente clasificarla como sensible o resistente. Establecer la Concentración Inhibitoria Mínima es de utilidad para la toma de decisiones sobre cuál de los antibióticos a los que una bacteria aparece como sensible es la mejor opción. La técnica de microdilución por método automatizado, es una adaptación del método de dilución en tubo, técnica que ya no se realiza en los hospitales debido a que requiere volúmenes de medio de cultivo más grandes y a que en su lectura se introduce el error humano. En las pruebas cuantitativas, se preparan en tubo o en placas o paneles (Microdilución) diluciones decrecientes del antibiótico, posteriormente se añade a cada tubo una cantidad establecida de bacterias, se lleva a incubar y después se observa (método macroscópico) o se realiza la lectura mediante un turbidímetro (método automatizado) para establecer cuál fue la concentración más pequeña del antibiótico que inhibió el crecimiento bacteriano (Concentración Inhibitoria Mínima=CIM).

CIM=2gr

CONTROL NEG.

POS.

MIC = 2gr Según la representación anterior, ¿Cuál sería la CIM para esta bacteria?

Gm (gentamicina): >8, Va (vancomicina): <2, Lvx( levofloxacina ): 4, Lzd (Linezolide ): 1 Una de las ventajas de este método es que permite en una sola placa probar la sensibilidad de la bacteria para varios antibióticos. El siguiente, es la representación de un panel comercial automatizado para bacterias Gram positivas.

Establecer la CIM para la bacteria no es suficiente para establecer si la bacteria es sensible o resistente. Ej.: Se prueba la sensibilidad frente a la oxacilina de tres cepas de S.aureus. Cada uno tiene una CIM diferente: 0.25, 1 y 4. ¿Cuáles son sensibles y cuáles resistentes? Para responder la pregunta los laboratorios de referencia en Estados Unidos y en Europa, establecen los denominados “Puntos de Corte” que corresponden a una concentración determinada de antibiótico que divide las bacterias en Resistentes, Sensibles o Intermedias.

Con estos valores de referencia se deben comparar los resultados obtenidos en los centros asistenciales.

ACTIVIDADES COMPLETA LAS TABLAS CON LOS RESULTADOS Staphylococcus aureus—OXACILINA BACTERIA: Método Difusión Puntos de corte Tamaño del Establecidos (Tamaño halo medido del halo) S

I

R

Interpretación

ANTIBIOTICO: Método Dilución (Macro o Micro) Puntos de corte CIM Interpreestablecidos encontrada tación (microgramos/ml) S

I

R

DIFUSION POR KIRBY BAUER

MACRODILUCION

MICORDILUCION

Staphylococcus aureus—OXACILINA BACTERIA: Método Difusión Puntos de corte Tamaño del Establecidos (Tamaño halo medido del halo) S

I

R

Interpretación

ANTIBIOTICO: Método Dilución (Macro o Micro) Puntos de corte CIM Interpreestablecidos encontrada tación (microgramos/ml) S

I

R

DIFUSION POR KIRBY BAUER

MACRODILUCION

MICRODILUCION

Escherichia coliâ&#x20AC;&#x201D;AMPICILINA

DIFUSION POR KIRBY BAUER

MACRODILUCION

MICRODILUCION

Escherichia coliâ&#x20AC;&#x201D;AMPICILINA

DIFUSION POR KIRBY BAUER

MACRODILUCION

MICRODILUCION