Staphylococcus AUTORES DOCENTES MICROBIOLOGIA
CLAUDIA CLAVIJO ROMERO MARCELA GOMEZ GARZON ADRIANA JIMENEZ ROJAS DIANA ORTIZ JIMENEZ
Practica # 6 Staphylococcus OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:
Al finalizar la sesión Nª 6, el estudiante estará en capacidad de comprender en forma apropiada características del género Staphylococcus.
Al finalizar la sesión Nª 6, el estudiante estará en capacidad de diferenciar correctamente pruebas utilizadas en el laboratorio para Identificar Genero y especie.
Al finalizar la sesión Nª 6, el estudiante estará en capacidad de identificar correctamente en el laboratorio las especies de importancia medica del genero Staphylococcus
INTRODUCCIÓN La familia Micrococcaceae incluye los Géneros Staphylococcus, Micrococcus, Planococcus y Stomatococcus; sin embargo solo los pertenecientes al género Staphylococcus son de importancia clínica. Los Staphylococcus son células esféricas gram positivas, generalmente dispuestas en racimos, crecen con rapidez sobre muchos tipos de medio de cultivo y son metabólicamente activos, fermentan carbohidratos y producen pigmentos que varían desde el color blanco hasta el amarillo intenso. Algunos son parte de la flora normal de la piel y las mucosas de los humanos y cuando se comportan como patógenos producen infecciones de la piel y tejidos blandos con colecciones de pus, infecciones osteoarticulares, endocarditis e infecciones asociadas a prótesis y dispositivos médicos. Debido a que el estado de portador transitorio se presenta hasta en el 60% de la población, las infecciones pueden ser de tipo endógeno aunque son más frecuentes las de tipo exógeno debido al poder de ubicuidad de los Staphylococci lo que les permite acceder a un sitio normalmente estéril, como resultado de un traumatismo o abrasión de la piel o mucosas. El género Staphylococcus contiene al menos 30 especies que se dividen en dos grandes grupos: 1) Staphylococcus coagulasa positivo cuyo representante es el Staphylococcus aureus y 2) Staphylococcus coagulasa negativo con más de 30 especies, siendo las más importantes el S. epidermidis, S. saprophyticus. Dentro de la especie del Staphylococcus aureus es importante diferenciar y diagnosticar los clones que son resistente a la oxacilina y dicloxacilina denominados en conjunto Staphylococcus aureus meticilino Resistente (SAMR por su sigla en español o MRSA por sus sigla en inglés). Su oportuno reconocimiento es fundamental para poder establecer el tratamiento antibiótico apropiado para el paciente. Las infecciones por SARM están asociadas con cuidados médicos intrahospitalarios (SARM-IH) en donde se presentan en personas que están o han estado recientemente en un hospital u otro centro de atención médica. Las infecciones por SARM extrahospitalarias o adquiridas en la comunidad (SARM-AC) son las que ocurren en personas por lo demás sanas que no han estado recientemente en el hospital. Estas infecciones se presentaron inicialmente entre atletas que comparten equipo o elementos personales (como toallas o máquinas de afeitar) y niños en guarderías, sin embargo actualmente pueden presentarse en la población general. El Staphylococcus epidermidis es parte de la flora normal de la piel y se considera el primer agente etiológico de infecciones asociadas al uso de dispositivos médicos como catéteres intravasculares, reemplazos articulares, reemplazos valvulares. El Staphylococcus saprophyticus está asociado frecuentemente a infecciones urinarias en mujeres jóvenes sexualmente activas; las infecciones en sitios fuera del aparato urinario no son frecuentes.
Diagnostico por el Laboratorio La identificación y diferenciación de las diferentes especies de Staphylococcus se basan en la morfología microscópica bajo coloración de gram, Forma y color de las colonias, producción de hemólisis, producción de las enzimas: Catalasa, coagulasa y DNAsa, Fermentación de carbohidratos (manitol) y comportamiento frente a novobiocina.
Producción de Catalasa:
La catalasa es una enzima que protege a las bacterias frente al peróxido de hidrógeno producido en el metabolismo del oxígeno. La mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas poseen actividad catalasa. La actividad catalasa se detecta añadiendo a unas gotas de peróxido de hidrógeno (3%) unas colonias de microorganismos. El peróxido de hidrógeno se forma como uno de los productos finales del metabolismo oxidativo aeróbico de los hidratos de carbono. Si se deja acumular, el peróxido de hidrógeno es letal para las células bacterianas. La catalasa transforma el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno de acuerdo a la siguiente reacción: H 2O
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H2O + O2 (burbujas de gas)
Producción de Coagulasa
El 100% de las cepas de S. aureus patógenas para el hombre tiene la propiedad de producir una enzima que coagula el plasma humano o de conejo. La actividad de la enzima coagulasa es visualizada en tubo después de adicionar a 1ml de plasma una suspensión bacteriana e incubarla de 1-4 horas a 35°C.
Prueba de la Novobiocina Esta es una prueba de sensibilidad frente a un disco de novobiocina de 5mcg. El procedimiento es el mismo que para la realización de un antibiograma. Esta técnica permite diferenciar las especies de S. epidermidis quien es sensible y el S. saprophyticus que es resistente. -Halos mayores de 16mm son sensibles/Halos menores de 15mm son resistentes
Género Staphylococcus
Coloración de Gram Prueba de Catalasa
A. Staphylococcus aureus
Pigmento y Hemólisis en Agar Sangre
Coagulasa
Prueba de Novobiocina
Staphylococcus aureus resistente a oxacilina (SARM)
Staphylococcus aureus sensible a oxacilina (SASM)
B. Staphylococcus epidermidis
Pigmento y Hemรณlisis en Agar Sangre
Coagulasa
Prueba de Novobiocina