Streptococcus

Streptococcus AUTORES DOCENTES MICROBIOLOGIA

CLAUDIA FAJARDO URIBE MARCELA GOMEZ GARZON ADRIANA JIMENEZ ROJAS PATRICIA TRUJILLO ROMAN

Practica #7

Familia Streptococcaceae: Streptococcus y Enterococcus OBJETIVOS DE LA PRACTICA



Estudiar las características del género Streptococcus y Enterococcus



Conocer las pruebas utilizadas en el laboratorio para identificar y diferenciar los dos géneros.



Diferenciar en el laboratorio las especies de importancia medica del genero Streptococ-

cus INTRODUCCIÓN Todos los microorganismos agrupados en estos géneros son cocos gram positivos, catalasa negativos, que generalmente forman cadenas durante su crecimiento. La prueba de catalasa permite la diferenciación de la familia Streptococcaceae de la Micrococcaceae. Las células aisladas son esféricas u ovoides y se dividen en un plano perpendicular al eje de la cadena, de modo que, cuando se presentan en forma de diplococos, pueden tener aspecto de bacilo. Los estreptococos pertenecen a la familia Streptococcaceae, junto con los géneros Pediococcus, Leuconostoc, Lactococcus, Gemella y Aerococcus, que rara vez se aíslan en la clínica.

Los estreptococos son anaerobios facultativos, aunque hay cepas que crecen mejor en condiciones reducidas de oxígeno y que reciben el nombre de microaerofílicos. Los estreptococos son microorganismos ampliamente distribuidos en la naturaleza. Algunos de ellos son flora normal del hombre, otros se asocian a infecciones, bien por acción directa o por fenómenos de hipersensibilidad.

Se trata de un grupo muy heterogéneo de microorganismos, cuya clasificación resulta difícil. Para ello, se recurre a una combinación de características como son:

a. Morfología de las colonias b. Patrones de Hemólisis sobre agar sangre (Hemólisis alfa, beta y gamma) c. Composición antigénica de las sustancias de la pared celular (Clasificación de Lancefield) d. Reacciones Bioquímicas

Uno de los esquemas más útiles de clasificación, se basa en el tipo de hemólisis que produce en Agar Sangre. Esta clasificación preliminar es útil no solo para el laboratorio de microbiología sino también en la clínica porque permite predecir el género y la infección asociada.

TIPO DE HEMOLISIS EN AGAR SANGRE

DESCRIPCION

ALFA

Cuando se presenta destrucción parcial de los glóbulos rojos y da lugar a una pigmentación verdosa. Se observa mejor en agar chocolate.

BETA

Lisis completa de los glóbulos rojos, se observa una zona clara o transparente alrededor de la colonia

GAMMA

No produce hemólisis de los glóbulos rojos.

En la década de los 40s Rebecca Lancefield clasificó los estreptococos B hemolíticos de acuerdo a los antígenos de la pared celular, en grupos denominados A, B, C, D, F y G. Está clasificación, es ampliamente mencionada en la literatura médica, debido a que cada grupo tiende a asociarse con tipos específicos de enfermedad.

CLASIFICACION DE LOS Streptococcus SEGÚN SU TIPO DE HEMOLIIS

TIPO HEMÓLISIS

NOMBRE

ENFERMEDADES RELACIONADAS

S. pyogenes

Faringitis, amigdalitis, escarlatina, erisipela, impétigo, celulitis, secuelas no supurativas: fiebre reumática, glómerulonefritis

S. agalactiae

Corioamninitis, sepsis puerperal y neonatal, meningitis neonatal

C, G y F

Los grupos ocasionalmente causan enfermedad en humanos (especialmente faringitis).

Beta

(S. anginosus, S. milleri) Beta o Gamma

E n t e r o c o c c u s Patógenos oportunistas asociados a infecciones f a e c a l i s , intrahospitalarias principalmente infección de E.faecium vía urinaria, infecciones intrabdominales, infec-

Gamma

S. bovis

Alfa

ciones de tejidos blandos.

Infecciones del tracto genitourinario, heridas, endocarditis

S tr e pt o co ccu s Endocarditis y abscesos dentales, caries.

Grupo Viridans

S. pneumoniae

Neumonía adquirida en la comunidad, meningitis, endocarditis, bacteriemia, empiema y otitis media aguda, sinusitis

Además de las características hemolíticas de los Streptococci es importante observar el pigmento, tamaño, textura, adherencia al agar de las colonias y realizar pruebas adicionales para la identificación definitiva del género y la especie. Estas pruebas son: 1. Prueba de Bacitracina: Esta es una prueba que se realiza a microorganismos betahemolíticos sospechosos de Streptococcus pyogenes. Se siembran en agar sangre de cordero y se coloca sobre ellos un disco de bacitracina, un antibiótico polipéptido, utilizado únicamente para pruebas in vitro, luego de 18 horas de incubación se observa el halo de inhibición. Un halo mayor de 10 mm interpreta que la bacteria es sensible (prueba positiva) y clasifica como Streptococcus pyogenes ; un halo menor de 10 mm se interpreta como que la bacteria es resistente (prueba negativa) y es sugestivo de Streptococcus  hemolíticos diferentes del Grupo A.

2. Prueba de CAMP: CAMP es la sigla de una prueba desarrollada en 1944 por Chrisbie, A Ekins, Much - Peterson y la cual se ha venido utilizando para diferenciar los estreptococos Beta- hemolíticos. Permite detectar la proteína extracelular difusible del Streptococcus agalactiae que intensifica la hemólisis en agar sangre por parte del Staphylococcus aureus. Una prueba positiva se reconoce por una zona de flecha en el sitio donde se cruzan las estrías de S. agalactiae y S, aureus.

Staphylococcus aureus

Streptococcus Beta-hemolìtico

Streptococcus agalactiae

2. Prueba de Optoquina: Esta prueba utiliza un disco de papel filtro impregnado con optoquina (hidrocloruro de etilhidro cupreína) sobre una placa de agar previamente sembrado con cepas alfahemolíticas. Luego de incubación por 18-24 horas, en atmosfera de CO2, se examina la zona de inhibición. La optoquina lisa los neumococos (prueba positiva), pero los otros Streptococcus alfa hemolíticos son resistentes (prueba negativa).

3. Hidrólisis de la esculina. Esta prueba se usa para determinar si un microorganismo es capaz de hidrolizar el glucósido esculina.

La prueba positiva evidencia los géneros Enterococcus y Streptococcus del grupo D ya que ellos pueden hidrolizar el glucósido esculina, en presencia de la bilis, el cual al quedar libre reacciona con el hierro presente en el medio para dar un precipitado negro (prueba positiva).

Los Streptococcus que no pertenecen a estos grupos no modifican el medio (Prueba Negativa)

4. Tolerancia al NaCl: La capacidad de las especies del grupo de Enterococos de crecer en medios con una concentración de NaCl del 6.5% permite diferenciar a estos microorganismos estreptococos del grupo D. El microorganismo se cultiva en medio líquido con 6.5% de NaCl y se incuba por 18 horas a 35°C. Una reacción positiva está dada por el crecimiento en el medio de cultivo que se manifiesta con turbidez del caldo.

ACTIVIDADES Prueba de catalasa para TODOS los miembros del género Streptococcus:

NEGATIVO

A. Streptococcus pyogenes:

Gram: cocos grampositivos en cadenas

Beta hemolisis en Agar Sangre y Sensible a la bacitracina (Taxo A)

B. Streptococcus agalactiae:

Gram: cocos grampositivos en cadenas

Beta hemolisis en Agar Sangre y Resistente a la bacitracina (Taxo A)

Prueba de CAMP

Streptococcus pyogenes CAPM NEGATIVO

Streptococcus agalactiae CAMP POSITIVO

C. Streptococcus pneumoniae:

Gram: Diplococos Gramposivivos

Alfa hemolisis en Agar Sangre y Sensible a la optoquina (Taxo P)

D. Streptococcus grupo Viridans :S.mitis, S.sanguis, S.salivarius

Gram: Cocos agrampositivos en cadenas

Alfa hemolisis en Agar Sangre y Resistente a la optoquina (Taxo P)

E. Enterococcus faecalis / Enterococcus faecium:

Gram: Cocos Grampositivos en cadenas

Bilis Esculina: Positivo

No HemolĂ­tico en Agar Sangre

NaCl 6,5%: Positivo

F. Streptococcus bovis:

Gram: Cocos Grampositivos en cadenas

Bilis Esculina: Positivo

No HemolĂ­tico en Agar Sangre

NaCl 6,5%: Negativo