Produtos Naturais e o Controle do Barbeiro Rhodnius prolixus, vetor da Doen莽a de Chagas Alphonse Kelecom Departamento de Biologia Geral Universidade Federal Fluminense - Niter贸i, RJ
Colaboradores: Marise Maleck de Oliveira Cabral El贸i de Souza Garcia Patr铆cia Azambuja
O parasita, Trypanosoma cruzi, no tubo digestivo do barbeiro, Rhodnius prolixus
Estรกgios de muda de ninfas de Rhodnius prolixus
A-E : ninfas de 1ยบ - 5ยบ estรกgio
Mamadeira para alimentação do barbeiro membrana de látex saída de água
sangue humano
entrada de água a ~37ºC
Rhonius prolixus, alimentado
Testes com ninfas de Rhodnius prolixus Ninfas de 4º estágio lotes de 25-30 animais mantidos em jejum por um período de 25-30 dias alimentados uma única vez ad libidum pesados antes e depois do repasto mantidos a 28ºC durante 3-4 semanas lote controle: sangue com EtOH-salina (1:4) testes: sangue contendo 1-500 µg/ml da amostra testada
O objetivo original COOCH3 O
OH
O
O HO O
O CH3COO CH3COO
OH
H
O H
O
Azadirachtina A : toxicidade, fagoinibição, deformação das pupas, atraso no desenvolvimento do inseto (DE50 25µg/ml) anti-muda (DE50 40 ng/ml)
Produtos Naturais de Melia(ceae) Cumarinas
Flanon贸ides
Antraquinonas OH
MeO
O
OCH3
OH CH3
HO
O
HO
O
H
O OGal
escopoletina
O
OH
O
nimbaflavona Diterpenos
Ester贸ides
H
OH
O
H
O
nimosona
H HO
O
H
H
azedarachol
OH
OH O
H
HO O
Limon贸ides
OH
OH HO
meliantriol
Estudo fitoquímico de Melia azedarach (Meliaceae) Extração de sementes de M. azedarach com MeOH (rdt.: 12%) extrato apresenta atividades fagoinibidora e anti-ecdise purificação guiada por bioensaio partição MeOH(5% aquoso) versus n-hexano – fração hexânica : inativa
evapora-se o MeOH e a fase aquosa é extraída com EtOAc – fase EtOAc contém toda a atividade
filtração em gel de sílica e ensaio biológico
Efeito de uma fração do extrato de Melia azedarach, contendo azadirachtina A, sobre a ecdise de larvas de 4º estágio de Rhodnius prolixus
COOCH3 O
OH
O
O HO O
O CH3COO CH3COO
OH
H
O H
O
azadirachtina A
• controle - 10 µg/ml - ∆ 25 µg/ml
Isolamento de cinamodiol triterpeno inédito da série do eufano particularidades: • posição da lactona (21-16) • hidroxila em C-12 • hidroxila β em C-3 Atividade biológica em Rhodnius prolixus : • provoca ligeiro atraso da muda • inibe a ecdise em 27% na conc. de 10 µg/ml
O OH O H H HO
H
cinamodiol
Isolamento de quatro lignanas OH
OH
1
O
OMe
H MeO
2
H
O H
MeO
OMe H
O
O HO
HO
OH
OH OH O H
MeO HO
HOOC
OMe
O
H
H
MeO O
3
HO
OMe H
O
COOH
4
1 pinoresinol , 2 bis-epi-pinoresinol , 3 hemicetal , 4 diรกcido
Atividades biológicas de pinoresinol em Rhodnius prolixus 1. 140
25 OH
% m ortality
H
15
MeO
120
OMe
m g ingested blood
20
O H O
HO
10 5
100 80 60 40 20 0
0 control
1
10
concentration
Toxicidade tratamento contínuo
100
control
1ug/ml
10ug/ml 100ug/ml
concentration
Fagorrepelência via repasto sangüíneo
120
120
100
100
80
80 % ecdysis
% ecdysis
Atividades biológicas de pinoresinol em Rhodnius prolixus 2.
60 40
60 40
20
20
0 12
14
16
18
21
0 12
days after treatment
14
16
18
21
24
days after feeding
Anti-ecdise Tratamento contínuo Legenda: ◊ controle ; pinoresinol :
Repasto sangüíneo 1 , ∆ 10 , × 50 , ∗ 100 & • 500µg/ml
Atividades de lignanas em insetos OMe O H MeO
O O
OMe H
H O
O
MeO
eudesmina: • fagorrepelente H
MeO
O
O H
O
O
sesamina: • inibe o crescimento e • mimetiza o hormônio juvenil
O HO
matairesinol:
H
OMe OH
inseticida exerce ação sinergística
Ação de lignanas e neolignanas em Rhodnius prolixus OH H
O
O O
H
MeO
OCH3
O
O
O
O
O
OMe OMe
burchelina
podofilotoxina
em 10 µg/ml • não é fagorrepelente • atrasa a muda em 6 dias • inibe a ecdise em 50% • altamente tóxica • inibe a diurese em ~90%
•não é fagorrepelente • atrasa ligeiramente a muda • não inibe a ecdise • não é tóxica • inibe a diurese em até 80%
An谩lise em CG-EM da hemolinfa de Rhodnius prolixus tratado com 100 碌g/ml de burchelina
OCH3 O
O
O
O
1a : cromatograma (CG) da hemolinfa coletada 30 min ap贸s o repasto 1b : cromatograma (GC) da hemolinfa coletada 1 hora ap贸s o repasto
Identificação dos produtos de degradação da burchelina (1) na hemolinfa de Rhodnius prolixus OCH3
OCH3 O
O
O
1
O
O
O
O
OH
O
OH
O
6
3
NH2 OCH3
OCH3 O
O
O
O
O
O 8b
OCH3 O
O 7b
O
O 8a
OCH3 O
HO 7a
2
OCH3
4 OCH3
O
O 7c
5
Mecanismo provável da degradação da burchelina H
b
H a
O
O
O
O
a
O
b
c O
H
-H2
8b
OCH3
OCH3
OCH3
b
O
O
b
H
-C3H4
O
O
OH
O
1
6
a,c OCH3 O O
O
OCH3
O
8a
OCH3 O O
O HO
H
O
HO
7a
O O
OH
O
3
a degradação ocorre principalmente a nível do anel furânico
Preparação de derivados do álcool piperonílico O H O
OH
O O
O
OAc
O 16
14
O
OH 15
O
O
O
OCH3 O
O
O 17
18
CNPq, DAAD, FAPERJ
Agradeço pela sua atenção