395_span

C4 Cromatografía y electroforesis

4.1 Bibliografía sobre cromatografía 4.2 Cromatografía de papel y de capa fina 4.3 Cromatografía en columna 4.4 Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) 4.5 Cromatografía de gases 4.6 Electroforesis

C4 Cromatografía y electroforesis 4.1 Bibliografía sobre cromatografía / 4.2 Cromatografía de papel y de capa fina

HANDBOOK CHEMISTRY

STUDENT EXPERIMENTS CHEMISTRY

W. Schäfer, J. Klunker T. Schelenz, T. Meier A. Symonds

Handbook, Glass jacket system, 11 experiments 01196.12 16504.02

12292 Fractional destillation with the bubble tray column

Dietrich Rütten Peter Baumann

General and inorganic chemistry, Part 1

Food Chemistry

01835.02

01196.12

16504.02

Laboratory Experiments CHEMISTRY, Brochure, 110 experiments

Fundamental concepts, unit operations, metals, non-metals, air and water

F. Lindenblatt / W. Jung

Glass jacket system

Experiments included on the topic gas chromatography:

Student experiments chemistry General and inorganic chemistry, Part 1, 65 experiments 01835.02 Experiments included on the topic chromatography:

12244 Gas chromatography

12293 Chromatographic separation procedures: gas chromatography

STUDENT EXPERIMENTS CHEMISTRY

10235 Chromatography

12294 HPLC – high performence liquid chromatography – determination of the van Deemter equation

01839.02

LABORATORY EXPERIMENTS CHEMISTRY

Student Experiments chemistry, Food chemistry, 68 experiments 01839.02 Experiments included on the topic chromatography: 12615 Thin-layer chromatographic sugar identification 12645 Water-soluble dyes

Cámaras de separación y accesorios para láminas de papel y láminas TLC

Con cámaras de separación para cantidades escasas de eluyente, de ahí que sea especialmente adecuado para prácticas escolares.

Frasco con tapa de rosca, 250 ml

46213.00

Cuba de vidrio

06620.00

Para usar como cámara de separación, junto con la placa de vidrio 64736.00 Dimensiones: 100 mm ×50 mm ×120 mm

Como pequeña cámara de generación para láminas DC, tamaño 4 ×8 cm

Placa de vidrio

Cilindro de pie 400 ml 34231.00 Tapón de corcho partido por la mitad 38519.02 para tiras de papel cromatográfico, 2×20 cm

Cámara de separación con tapa 35010.06

396

64736.00

Dimensiones: 120 mm ×60 mm ×2 mm

Recipiente de generación para cromatografía de capa fina Dimensiones: 120 mm ×50 mm ×180 mm

Cámara de separación DC Para todos los formatos de placas hasta 200 mm×200 mm; con ranuras verticales en las paredes transversa-

35011.00 les para un máx. de 5 placas, y tapa de vidrio.

C4 Cromatografía y electroforesis 4.2 Cromatografía de papel y de capa fina

Papeles para cromatografía Papel para cromatografía

32972.00

Juego de 100 tiras, 4×28 cm calidad estándar, absorción semirápida

Papel para filtrar 10 hojas

32976.03

Para rellenar las cámaras de separación cuando se vaya a realizar la cromatografía en una cámara saturada de disolvente; como base, cuando se pulvericen los cromatogramas con reactivos indicadores.

Dimensiones (mm): 580 ×580

Láminas TLC Láminas revestidas con diferentes materiales de separación, para una separación rápida y cómoda de las mezclas de sustancias. Como materiales portadores se utilizan láminas de aluminio, de plástico o placas de vidrio, entre otros. La capa de separación utilizada depende del tipo de separación que se vaya a realizar. A la capa fina se le añade un indicador (F 254), fluorescente a 254 nm, que permite la separación e identificación de sustancias que apagan esta fluorescencia.

Láminas TLC con alúmina 60 neutro 31080.04 Para la separación de colorantes alimentarios, fenoles, vitaminas, carotinoides, alcaloides, etc., juego de 25 unidades; Dimensiones (mm): 200 ×200

Láminas TLC con alúmina F254 31250.04 Capa fina de óxido de aluminio con indicador de fluorescencia, especialmente adecuadas para la separación de sustancias lipófilas. Juego de 25 unidades; Dimensiones (mm): 200 ×200

Láminas TLC, poliamida-6

31253.04

Láminas TLC, poligrama, sílice, F254 35047.00

Láminas TLC, gel de sílice F254 31503.04

Para la separación de compuestos fenólicos, como por ejemplo fenoles isómeros, conservantes, cumarina de las castañas de Indias; juego de 25 unidades; Dimensiones (mm) 200 ×200

Capa fina de gel de sílice sobre poliéster; adecuada para la separación de aniones y cationes, aceites esenciales, terpenoides, etc.; 50 unidades; con indicador de fluorescencia.

Dimensiones (mm): 40 ×80

Lámina estándar con indicador de fluorescencia, p. ej.: para la separación de vitaminas. Juego de 25 unidades; Dimensiones (mm): 200 ×200

Láminas TLC, poliamida-6, F254 31252.04

Láminas TLC, gel de sílice Sil/G,F254, 50 unid. 35048.00

Con indicador de fluorescencia; juego de 25 unidades; Dimensiones (mm): 200 ×200

Capa fina de gel de sílice sobre lámina de aluminio, con indicador de fluorescencia, 50 unid.

Dimensiones (mm): 40 ×80

Láminas TLC, poliamida-6, celulosa 35045.00 Capa de celulosa cobre poliéster; 50 unidades; Dimensiones (mm): 40 ×80

Láminas TLC, poligrama, alúmina, F254 35046. 00 Capa de alúmina sobre poliéster; 50 unidades; con indicador de fluorescencia.

Dimensiones (mm) 40 ×80

Láminas TLC gel de sílice

31502.04

Lámina estándar para separaciones por cromatografía de capa fina, p. ej.: azúcares, ácidos grasos, aminoácidos, diácidos, etc.

Juego de 25 unidades; Dimensiones (mm): 200 ×200

Placas TLC, gel de sílice RP-18, F254 31268.05 Gel de sílice sobre placas de vidrio para la cromatografía de fase reversible (RP = reversed Phase, fase reversible); con indicador de fluorescencia; adecuada para la separación de triglicéridos (lípidos), así como para sustancias con escasa o nula polaridad. Juego de 25 unidades; Dimensiones (mm): 100 x100

Láminas TLC, celulosa 31251.04 Especialmente apropiadas para la separación de sustancias hidrófilas, colorantes alimentarios, alcaloides, aminoácidos. Juego de 25 unidades; Dimensiones (mm): 200 ×200

Determinación de las sustancias sobre el cromatograma Para una determinación cualitativa basta con hacer visibles y localizar las sustancias a determinar. Si se trata de colorantes inmediatamente visibles, puede utilizarse la observación con luz UV para una visualización no específica. Si se aplica una capa de separación con indicador de fluorescencia, las sustancias absorbentes cubren la fluorescencia en la longitud de onda adecuada, apareciendo como manchas oscuras sobre la capa fluorescente.

Si con este método no se consigue caracterizar las sustancias, se aplican procedimientos de detección poscromatográficos, reacciones químicas sobre la lámina DC. Ciertos reactivos de pulverización específicos, en combinación con las sustancias a determinar, producen un compuesto coloreado o fluorescente.

En la página siguiente encontrará una selección de reactivos indicadores utilizados con frecuencia.

Tras hacerlas visibles, las zonas se rodean con lápiz, para permitir su localización tras perder la coloración.

Las reacciones precromatográficas se aplican, por ejemplo, en el caso de los aminoácidos. Los aminoácidos se derivan con cloruro de dansyl (5-dimetilamino-1-naftalenosulfónico) y pueden reconocerse como manchas fluorescentes en el cromatograma.

Lámpara UV de análisis con soporte de sobremesa Lámpara UV de mano con interruptor, para la determinación de sustancias fluorescentes, o absorbentes en el espectro UV, en cromatogramas de papel, capa fina o en columna.

33975.93

Potencia de la lámpara 6W Longitudes de onda (nm) 254 y 366 Alimentación eléctrica 230 V WE/40 VA Dimensiones (mm) 205 x 70 x 55

397

C4 Cromatografía y electroforesis 4.2 Cromatografía de papel y de capa fina

Para aplicar las mezclas de muestras Pipeta graduada 0,01 ml

Plantilla de aplicación para láminas DC, 2 unid.

35017.00

36593.00

Plantilla de plexiglas para una aplicación más sencilla de las muestras sobre láminas DC, tamaño 4 x 8 cm.

En una cara cuenta con 3 puntos de aplicación con 10 mm de intervalo, por la otra, con 4 puntos de aplicación con 8 mm de intervalo.

División 0,001 ml; para la aplicación de sustancias y mezclas en el punto de inicio de la capa portadora.

Microcapilares, 2 µl, 100 unid.

35010.08

100 unidades en envase de plástico; capacidad 0,002 ml cada uno; para aplicar sustancias y mezclas en el punto de inicio de la capa portadora con la ayuda de un portacapilares.

Portacapilares

35010.07

Para fijar los microcapilares 35010.08.

Microcapilares, 1 µl, 50 unid.

35007.00

50 capilares de vidrio, l = 7 cm y capacidad = 0,001 ml, para aplicar muestras en el punto de inicio de la lámina DC. Estos capilares se colocan con la mano, no es necesario un portacapilares.

Columna de extracción, gel de sílice RP-18, 5 unid.

Columna de extracción de un solo uso para la preparación de muestras. peso de relleno 200 mg, volumen 3 ml, co-

35049.00

nexión LUER para la inserción de una cánula (p. ej., 02597.04).

Para aplicar reactivos indicadores Reactivos indicadores Reactivos indicadores preparados: Reactivo de pulverización alcaloide, 100 ml 35044.02 Reactivo de pulverización para cafeína, 100 ml 35044.01 específico para cafeína Reactivo de ácido fosfórico de molibdato, 100 ml 35043.02 específico para grasas y colesterol Solución para pulverización de ninhidrina, 100 ml 31666.10 específica para aminoácidos Reactivo de pulverización de ácido rubeánico, 100 ml 35042.05 para la determinación de cationes de metales pesados Elaboración de algunos reactivos de pulverización: Se recomienda aplicar siempre reactivos recién preparados.

Pulverizador para cromatografía

35012.00

De vidrio, para atomizar los reactivos; el pulverizador y el matraz de Erlenmeyer EN están fijados mediante una abrazadera esmerilada para poder trabajar también con otros generadores de aire comprimido, además del soplador de goma.

398

Pulverizador a presión, 150 ml 35009.00 El tapón de bombeo se mueve arriba y abajo, como una bomba para ruedas de bicicleta, y el frasco puede usarse como pulverizador.

Determinación de fenoles (mediante copulación azoica a compuestos coloreados): 0,5 % de sal de azul sólido (Núm. de pedido 31281.04) en agua; pulverizar después con lejía sódica de molaridad 0,1.

Determinación de fenoles en medio alcalino: 1% de 2,6-dicloroquinona-4-clorimida (Núm. de pedido 31262.03) en etanol; exponer la placa DC a vapores de amoníaco – se forman indofenoles (quinoniminas).

Determinación de aminoácidos: Solución de 0,27 g de ninhidrina (Núm. de pedido 31666.01) y 0,13 g de isatina (Núm. de pedido 31397.04) en 100 ml de metanol Determinación de azúcares: Solución de 0,9 ml de anilina (Núm. de pedido 30029.25) y 1,66 g de ácido ftálico (Núm. de pedido 31729.10) en 100 ml de n-butanol saturado de agua Determinación de lípidos: 0,2% de 2,7-diclorofluoresceína (Núm. de pedido 31256.02) en etanol

C4 Cromatografía y electroforesis 4.2 Cromatografía de papel y de capa fina

Juegos para cromatografía de capa fina Para el tratamiento de problemas de separación específicos en clase o en prácticas, puede elegir entre diferentes juegos completos para cromatografía de capa fina (TLC). Los juegos de experimentación constituyen pequeños mini-laboratorios y contienen todas las muestras, sustancias químicas y materiales necesarios, así como detalladas instrucciones de uso para llevar a cabo las separaciones.

Juego de experimentación TLC Colorantes 35040.00 Este juego contiene sustancias químicas, cámaras de separación y accesorios para realizar las separaciones siguientes: • Separación de una mezcla de colorantes lipófilos (solubles en grasa) • Separación de una mezcla de colorantes de antraquinona • Separación de una mezcla de colorantes alimentarios • Separación de colores de rotuladores Contenido:

Material de repuesto: Mezcla de colorantes, lipófilos, 8 ml colorantes, lipófilos, 4 x 8 ml disueltos en tolueno; compuestos de: amarillo de mantequilla, indofenol, azul Sudán II, rojo Sudán G Mezcla de colorantes de antraquinona, 8 ml colorantes de antraquinona, 7 x 8 ml soluciones acuosas de: azul 1, azul 3, verde, verdiazul rojo, violeta 1, violeta 2 Colorantes alimentarios, 8 ml

35040.01 35040.04

35040.02 35040.05

35040.03

colorantes alimentarios, 7 x 8 ml 35040.06 soluciones acuosas de: negro brillante BN, rojo ponceau 4R, rojo sólido E, eritrosina, tartracina, amarillo-naranja S, rojo naftol S Citrato sódico, 2,5 g 35040.07 en frasco de 100 ml, para rellenar con agua destilada.

Microcapilares, 100 unid.

35010.08 Papel para cromatografía, 100 hojas, 4 x 28 cm 32972.00 Láminas TLC, poligrama, celulosa 35045.00 Láminas TLC, poligrama, alúmina F254 35046.00 Láminas TLC, poligrama, sílice, F254 35047.00

Instrucciones de uso 3 cámaras de separación 1 plantilla de aplicación 50 láminas TLC, poligrama, celulosa, 4 x 8 cm 50 láminas TLC, poligrama, alúmina, 4 × 8 cm 50 láminas TLC, poligrama, gel de sílice F254, 4×8 cm 50 capilares de vidrio 8 ml de mezcla de colorantes (4 colores lipófilos) 8 ml de rojo Sudán G y de azul Sudán II, respectivamente 8 ml de mezcla de colorantes de antraquinona (7) 8 ml de azul 1 y de violeta 2, respectivamente 8 ml de mezcla de colorantes alimentarios (7) 8 ml de amarillo-naranja S y de negro brillante BN, respectivamente 100 ml de tolueno 100 ml de tolueno-ciclohexano 100 ml de cloroformo-acetona 100 ml de solución de citrato sódico al 2,5 % 100 ml de amoniaco-2-propanol al 25% 2 rotuladores

Separación de colorantes de antraquinona

399

C4 Cromatografía y electroforesis 4.2 Cromatografía de papel y de capa fina

Juego de material TLC Bioquímica

35041.00

Este juego es requisito indispensable para llevar a cabo las separaciones con los 3 juegos bioquímicos: separación de aminoácidos, grasas y colesterol, así como fármacos.

Al mismo tiempo, constituye el equipamiento básico para la realización autónoma de otros experimentos de cromatografía de capa fina.

Contenido: 50 capilares de vidrio 50 láminas TLC, poligrama, celulosa, 4 ×8 cm 50 láminas TLC, poligrama, alúmina, 4×8 cm 50 láminas TLC, poligrama, sílice, 4×8 cm 2 cámaras de separación 2 plantillas de aplicación 1 pulverizador para reactivos, de vidrio 1 jeringa de plástico, 1 ml 1 vaso de precipitación, 25 ml 20 hojas de papel filtro Material de repuesto: Cámara de separación, 250 ml 46213.00 Microcapilares, 100 unid.

35010.08 Portacapilares 35010.07 Pulverizador para reactivos 35012.00 Papel filtro, 10 hojas 32976.03 Papel para cromatografía, 100 hojas 32972.00 Láminas TLC, poligrama, celulosa, 50 unid.

35045.00 Láminas TLC, poligrama, alúmina F254, 50 unid. 35046.00 Láminas TLC, poligrama, sílice, F254, 50 unid.

35047.00

400

Juego de experimentación TLC Fármacos 35044.00 Contiene todas las sustancias químicas y muestras necesarias • para la separación de analgésicos (calmantes para el dolor) • para el análisis de drogas con la corteza de quina como ejemplo Además, es necesario el Juego de material Bioquímica 35041.00.

Contenido : 1 Instrucciones de uso 5 tabletas de aspirina 5 tabletas de tomapirina 5 g de corteza de quina 100 ml de reactivo de pulverización para cafeína, 100 ml de reactivo de pulverización alcaloide 8 ml de solución patrón para cafeína 8 ml de solución patrón para paracetamol 8 ml de solución patrón para quinina 100 ml de cloroformo 100 ml de 2-propanol 100 ml de tolueno-éter de dietilo 50 ml de solución de FeCl3 50 ml de solución de K3[Fe(CN)6] 30 ml de ácido acético glacial-acetato de etilo 25 ml de amoníaco al 25 % 25 ml de dietilamina Material de repuesto: Reactivo de pulverización para cafeína, 100 ml 35044.01 Solución patrón para cafeína 8 ml 35044.07 Reactivo de pulverización alcaloide, 100 ml 35044.02 Solución patrón para quinina, 8 ml 35044.05 Solución de cloruro de hierro (III), 100 ml 35044.03 Solución de hexacianoferrato(III) potásico, 100 ml 35044.04 Solución patrón para paracetamol 8 ml 35044.06 Filtro plegado, 100 unid. 35044.08

Juego TLC Aminoácidos 35042.00 Este juego contiene todas las sustancias químicas y accesorios necesarios • para la separación de aminoácidos, mezcla modelo • para la separación de aminoácidos en orina • para la separación de cationes de metales pesados Además, es necesario el Juego de material Bioquímica 35041.00.

Contenido : 1 Instrucciones de uso 8 ml mezcla de aminoácidos 8 ml de solución patrón para triptófano 8 ml de solución patrón para arginina 8 ml mezcla de cationes de metales pesados 8 ml de solución patrón Co2+ 8 ml de solución patrón Mn2+ 8 ml de solución patrón Ni2+ 100 ml de n-butanol 100 ml de reactivo de pulverización de ninhidrina 100 ml de acetona 100 ml de amoniaco al 25% 100 ml de reactivo de pulverización de ácido rubeánico 50 ml de ácido acético al 50% 50 ml de ácido clorhídrico al 18% 50 capilares de vidrio 50 láminas TLC, poligrama, celulosa, 4×8 cm 50 láminas TLC, poligrama, gel de sílice, 4×8 cm Material de repuesto: Mezcla de aminoácidos 8 ml 35042.01 aminoácidos, 4 x 8 ml 35042.02 soluciones acuosas de: alanina, arginina, triptófano, valina Reactivo de pulverización de ninhidrina, 100 ml 31666.10 para la determinación de aminoácidos

Mezcla de prueba de cationes de metales pesados, 8 ml 35042.03 cationes de metales pesados, 4 x 8 ml 35042.04 soluciones acuosas de: Co2+ , Cu2+ , Mn2+ , Ni2+ Reactivo de pulverización de ácido rubeánico, 100 ml 35042.05 para la determinación de cationes de metales pesados

Juego TLC, Grasas y colesterol

35043.00

contiene las sustancias químicas necesarias • para el análisis de las grasas alimenticias • para el análisis de grasas y colesterol en la sangre Además, es necesario el Juego de material Bioquímica 35041.00.

Contenido : 1 Instrucciones de uso 50 capilares de vidrio 50 Láminas DC, poligrama, sílice, F254 5 lancetas para sangre 5 pipetas desechables, 25 µl 5 tapones de algodón 5 vasitos, 2 ml 3 vasitos, 30 ml 100 ml de cloroformo 100 ml de cloruro de metilo 100 ml de tolueno 100 ml de reactivo de pulverización de ácido fosfórico de molibdato 50 ml de acetona con pipeta calibrada 8 ml de solución patrón de colesterol Material de repuesto: Solución patrón de colesterol, 8 ml 35043.01 Reactivo de pulverización de ácido fosfórico de molibdato, 100 ml 35043.02 para la determinación de grasas y colesterol Lancetas para sangre, esterilizadas, 200 unid. 64217.00

C4 Cromatografía y electroforesis 4.3 Cromatografía en columna

Cromatografía en columna La clásica cromatografía en columna a baja presión se utiliza principalmente con fines de preparación y para el control de reacciones, Consiste en la separación de mezclas de sustancias en una columna, que se llena con un adsorbente apropiado y constituye la fase estacionaria. Como fase móvil se utiliza un disolvente apropiado, en el que se disuelvan las sustancias que van a separarse. La separación se produce por la diferente distribución y adsorción de las sustancias en el disolvente y en la fase estacionaria. El efecto de separación depende de la elección del material colocado en la columna, de su granulado y de la homogeneidad de compactación del relleno de la columna. Según el material utilizado, se distingue entre cromatografía de adsorción, de intercambio iónico o por permeabilidad de gel.

Las columnas se rellenan en seco o con el material mezclado con eluyente. Las columnas nunca deben funcionar en seco. En cuanto el eluyente haya atravesado la columna, se aplica la mezcla a separar en la columna, se coloca algodón sobre la columna y se añade el eluyente.

El producto de la elución, que fluye por el extremo inferior de la columna vertical, contiene sustancias individuales de la mezcla a determinados intervalos. Estas sustancias se recogen en pequeñas porciones (Colector de fracciones 35702.93) y puede continuarse el análisis de las mismas mediante espectrofotometría o cromatografía de capa fina. Si no pueden eluirse todos los componentes de la muestra con el disolvente, se procede a cambiar la polaridad de los disolventes durante el paso por la columna (elución de gradientes).

Experimento: Cromatografía de adsorción de colorantes de hojas con almidón como adsorbente Núm. de pedido del experimento

09468

Cromatografía de adsorción de pigmentos de hojas usando almidón como adsorbente. El color verde de las hojas de las plantas está formado por diversos grupos de pigmentos: clorofilas, carotenoides y xantofilas, que cumplen diferentes funciones durante la fotosíntesis.

En este experimento, se puede observar directamente la separación de un extracto de hojas frescas, de color verde uniforme, en 4 fracciones distintas, parcialmente fluorescentes, mediante la cromatografía en columna.

El análisis cuantitativo mediante un espectrofotómetro permite, además, la determinación de las cantidades relativas de los diversos pigmentos en porcentajes, o una comparación de las pautas de distribución en diversas plantas.

Material Columna de cromatografía por intercambio de iones 35025.01 Tubo saliente de vacío, recto 35806.15 Botella de seguridad con manómetro 34170.88 Llave de tres vías, en T 36731.00 Junta para GL 25/8 mm 41242.03

Matraz redondo, 100 ml, GL 25/12 35841.15 Mortero con mano, 250 ml, de porcelana 32605.00 Gafas protectoras con filtro UV 39315.00 Lámpara de análisis UV 33975.93 (Material de soporte, tubos, sustancias químicas, etc.)

Mezclador de gradientes El mezclador de gradientes permite mezclar fácilmente dos líquidos entre sí de modo que, durante su extracción, varíe continuamente la proporción de la mezcla. Este tipo de procedimiento es necesario, por ejemplo, para llevar a cabo una cromatografía de adsorción como elución de gradientes.

El mezclador de gradientes se compone de dos tubos de vidrio (l = 220mm; da = 38 mm) con tubuladuras laterales, que pueden conectarse mediante un

36666.00 tubo de silicona. La conexión puede interrumpirse con la correspondiente pinza de tubo. Uno de los tubos está provisto con una grifo acodado de ventilación con husillo de teflón.

Además, son necesarios: Agitador magnético, mini 35712.93 Varillas agitadoras magnéticas, l = 30 mm 46299.02

401

C4 Cromatografía y electroforesis 4.3 Cromatografía en columna Materiales de adsorción para la columna: Óxido de aluminio 90, neutro 250 g Óxido de aluminio S, básico 250 g Óxido de aluminio S, ácido 250 g Celulosa, microcristalina 500 g Acetato de celulosa 100 g Intercambiador de iones I 100 g para cationes, ácido fuerte Intercambiador de iones II 100 g para aniones, básico débil Intercambiador de iones III 100 g para aniones, básico fuerte Intercambiador de iones IV 100 g para cationes, ácido débil Intercambiador de iones V 100 g Intercambiadores de lecho de mezcla Gel de sílice 60; 0,04–0,063 mm 500 g Gel de sílice 60; 0,2-0,5 mm 500 g Gel de sílice 60; 0,5-1,0 mm 500 g Gel de sílice G 500 g Almidón, en polvo 100 g

Columnas para cromatografía De Duran® con fritas GO; llave de vidrio con husillo de teflón Longitud (mm) 400 400

Diámetro (mm)

Núm. art.

20 10

36671.01 36672.01

Colector de fracciones

30020.25 31085.25 31084.25 31231.50 31973.10 31388.10 31389.10 31390.10 31391.10 31392.10 31506.50 31507.50 31508.50 31499.50 30227.10

Columna de cromatografía por intercambio de iones 35025.01 De DURAN®, con depósito y llave de vidrio con husillo de teflón; Longitud total Longitud de separación Diámetro

450 mm 260 mm 15 mm

35702.93

El colector de fracciones se utiliza ajustarse entre 1 y 60 segundos. El para dividir una cantidad importante anillo exterior tiene capacidad para de muestra en pequeñas dosis de la 40 vasos de centrifugación de 15 ml misma. La distribución se realiza en cada uno, el anillo interior para 40 volúmenes definibles, puesto que el probetas con 2 ml o 4 ml de capacitiempo de fraccionamiento puede dad.

Capacidad para muestras 40×15 ml + 40 ×4 (2) ml Tiempo por fracción 1-60 segundos, regulable Modos de funcionamiento – fraccionamiento – flujo continuo – posicionamiento del plato de muestras Salida Conector BNC con señal de inicio/parada Alimentación eléctrica 230 V~ (otras tensiones disponibles por encargo) Además, es necesario: Vaso de centrifugación 15 ml, 10 unid.

65973.02 Material de repuesto Tubo de silicona, 1 m, di = 1,5 mm 39291.00 Fusible de precisión 0,2 A, 10 unid.

07501.20

Bomba peristáltica Para transportar y dosificar con precisión pequeñas cantidades líquidas de 1 a 60 ml/min. Especialmente apropiadas para acelerar el proceso cromatográfico y para el transporte del producto de la elución al colector de fracciones.

Para ello, la bomba peristáltica se conecta al final de la columna de cromatografía.

Regulación electrónica de las revoluciones; permite su ajuste hasta 80 rpm.

Cabezal de la bomba con portapoleas cuádruple; rodillos de accionamiento con suspensión, para una mejor adaptación al tubo.

Permite sustituir rápidamente el tubo sin necesidad de herramientas.

402

35700.93 Con tubo de Nevoprene, diámetro interior 3,2 mm, grosor 1,6 mm, con piezas de unión de 3 mm de diámetro.

Entrada independiente de 24 V para sistema de mando externo, por ejemplo, mediante ordenador.

Dimensiones (mm) 110×225×10 Conexión eléctrica 230 V~ (otras tensiones disponibles por encargo) Accesorios incluidos: Cable de conexión para entrada de 24 V Accesorio para su fijación a la barra de soporte: Pinza de soporte para cajas pequeñas 02043.10

C4 Cromatografía y electroforesis 4.4 Cromatografía líquida de alta resolución

Experimento: HPLC – Cromatografía líquida de alta resolución – determinación de la ecuación de Van Deemter Núm. de pedido del experimento El poder de separación de las columnas de cromatografía está determinado por la altura de las placas teóricas de separación y por los procesos dinámicos que ocurren durante la separación cromatográfica. La ecuación de van Deemter describe la correlación entre dichos parámetros.

En su forma más general, la ecuación es la siguiente: H=A+B u + C·u

(1)

Donde U es la velocidad de flujo lineal de esta fase móvil: A, B y C son constantes.

Material para la cromatografía Cromatógrafo de líquidos, HPLC 36665.00 Tubo de presión con pieza de acoplamiento 39299.00 Botella de nitrógeno, 10 l, llena 41763.00 Válvula reductora de presión para nitrógeno 33483.00 Jeringa microlítrica 100 µl 02606.00 Tubo de silicona, di = 2 mm 39298.00 Pie en H "PASS" 02009.55

12294 Para un sistema cromatográfico específico, estos valores pueden determinarse a partir de los tiempos de retención y las semiamplitudes, variando la velocidad de flujo de la fase móvil.

En el experimento, se determina la altura de las fases de separación para el p-aminobenzol con relación a la velocidad de flujo de la fase móvil. Como detector se instala un fotómetro espectral UV-VIS con cubeta de flujo en el sistema cromatográfico.

Material para la fotometría Fotómetro espectral UV-VIS 35655.97 Cubeta de flujo, cristal de cuarzo 35665.03 (Material de soporte, materiales de vidrio, piezas pequeñas, sustancias químicas, etc.)

Aparatos especiales Cromatógrafo de líquidos, HPLC Aparato con fines didácticos para la realización, a precios económicos, de separaciones por cromatografía de columna a alta presión.

No es necesaria una bomba especial para generar la presión. La presión se regula en el recipiente de acero para el eluyente mediante una botella de nitrógeno con válvula reductora.

Las columnas de cromatografía se pueden rellenar con los materiales necesarios para los experimentos, prescindiendo de las columnas preparadas con fines industriales, que son relativamente caras.

Como detector se puede utilizar un fotómetro espectral convencional con dispositivo de flujo que, a menudo, ya está disponible en el equipamiento del laboratorio. El registro de los cromatogramas se efectúa, según el modelo de fotómetro, con un registrador o un ordenador.

De este modo, con medios adecuados al entorno de la enseñanza, se puede construir un sistema de análisis cuantitativo completo, que proporciona una buena capacidad de separación para múltiples aplicaciones.

36665.00 Recipiente de acero inoxidable para eluyente, con tubo de paso longitud 550 mm di 40 mm volumen 500 ml Discos de separación de teflón, para evitar la formación de burbujas en el eluyente Columna de separación, de acero inoxidable, vacía longitud 250 mm di 4 mm Empalme rápido para tubo del gas Componentes suministrados: Recipiente para eluyente, con tubo de paso Columna de separación completa, vacía (v. Fig.) Anillo tensor Cabezal con cámara para muestras y entrada de gas 10 tabiques separadores, d = 6 mm, 2 llaves de boca para el montaje de la columna Además, son necesarios: Jeringa microlítrica 100 µl 02606.00 Botella de nitrógeno, 2 l 41777.00 Válvula reductora de presión N2 33483.00 Tubo de presión 39299.00 con pieza de acoplamiento, l=1500mm Soporte de mesa para botella de acero de 2 l 41774.00 Tubo de silicona, di = 1,5 mm 39291.00

Materiales para el relleno de la columna, Gel de sílice 60 0,063-0,2 mm, 500 g 31511.50 Gel de sílice 60 0,04-0,063 mm, 500 g 31506.50 Gel de sílice 60 0,02 mm, 10 g 31510.03 Gel de sílice 60 0,2-0,5 mm, 500 g 31507.50 Poliamida SC 6, 0,05-0,16 mm, 100 g 31765.10 Material de repuesto: Accesorios para HPLC 36665.10 Discos de teflón, filtro de fibra de vidrio y criba metálica para la fijación del agente separador Tabiques separadores, d = 6 mm, 10 unid.

36665.11

Tubo de presión (v. Fig.)

39299.00

Para la bomba del calorímetro y la HPLC; con pieza de acoplamiento en un extremo y dos abrazaderas; tubo de goma con entretela; diámetro interior 8 mm, grosor de pared 4 mm, longitud 1,5 m.

403

C4 Cromatografía y electroforesis 4.5 Cromatografía de gases

Cromatografía de gases El sistema para cromatografía de gases se compone de cromatógrafo de gases con columna de separación, cuya temperatura se puede regular, una parte para la introducción de muestra y la alimentación del gas portador, el detector y el registrador para la elaboración de los cromatogramas. La separación se efectúa mediante la distribución repetida de los componentes de la muestra entre una fase móvil (gas portador) y una fase estacionaria en la columna de separación. La fase estacionaria está constituida bien por un sólido polímero o bien por un líquido, de alta viscosidad en la mayoría de los casos, que se aplica en forma de capa o película fina sobre un material portador. El transporte de la muestra se realiza exclusivamente en la fase móvil gaseosa, la separación en la fase estacionaria. La calidad de una separación, es decir, la disociación de sus componentes individuales, depende de la naturaleza y la frecuencia de la interacción entre la muestra y la fase estacionaria. El cromatograma de gases resultante se compone de una línea de base y un número correspondiente de picos. Para la cuantificación se utiliza la integral de la señal del detector respecto al tiempo (superficie de pico). Para el registro es necesario un detector, en este caso un detector de conductibilidad térmica. Este registra las diferencias en la conductibilidad térmica de los componentes individuales respecto al gas portador puro.

Experimento: Cromatografía de gases de una mezcla gaseosa Núm. de pedido del experimento:

Materials: Columna de separación de gases Camisa de vidrio Pie en H "PASS" Caudalímetro de burbujas de jabón Sonda para cromatógrafo de gases Unidad de alimentación para cromatógrafo de gases Registrador, tY, 1 canal Botella de helio, 2 l, llena Válvula reductora de presión para helio Termostato de suspensión, 100 °C, 1500 W Juego de accesorios para termostato Baño para termostato, 6 l

36670.00 02615.00 02009.55 36675.00 36670.10 36670.95 11414.95 41776.00 33481.00 46994.93 46994.02 08487.02

12244

El montaje de una columna de separación de gases en la camisa de vidrio permite obtener una estructura intuitiva y didáctica, a la vez que se consigue una buena capacidad de separación, para la demostración de los principales modos de funcionamiento de un cromatógrafo de gases para el rango de temperaturas bajas, hasta los 100°C. Como material separador se emplea dinonilftalato sobre harina fósil (kieselgur).

Como fase móvil se utiliza el helio.

La velocidad de flujo se regula y controla mediante un caudalímetro de burbujas de jabón.

Para la detección se utiliza un sensor de conductibilidad térmica. Las señales son enviadas, mediante la unidad de alimentación, para su registro en un registrador Yt o una interfaz.

Para regular la temperatura de la columna de separación de gases, la camisa de vidrio se conecta al circuito externo de un termostato de circulación.

Con este equipamiento es posible tanto la separación de mezclas de gases (p. ej., butano/2-metilpropano) como la de mezclas de líquidos.

Extraído del "Handbook Glass jacket system"

(Material de soporte, piezas pequeñas, sustancias químicas, etc.)

Materiales para el relleno de la columna: Apiezon sobre Cromosorb, 25 g Mezcla W/AW 80–100; apropiado predominantemente para la separación de sustancias no polares, como alcanos, alquenos, alquinos, etc.

404

31063.04 Rango de temperaturas: +50…+250 °C aprox. 20 g por relleno de columna

Dinonilftalato sobre tierra de infusorios Especialmente apropiado para la separación de hidrocarburos gaseosos a temperatura ambiente; rango de temperatura: +20…+130 °C aprox. 35 g por relleno de columna

Como fase estacionaria debe utilizarse dinonilftalato sobre kieselgur.

Tierra de infusorios, 50 g 31501.05 mezcla G-NAW 80–100 Dinonilftalato, 100 ml 31276.10

C4 Cromatografía y electroforesis 4.5 Cromatografía de gases

Experimento: Cromatografía de gases de una mezcla de butano Núm. de pedido del experimento:

13110

El cromatógrafo con la camisa de vidrio también pueden montarse cómodamente como experimento completo sobre el panel para experimentos completos.

Con este cromatógrafo de gases transparente, de gran valor didáctico, se pueden efectuar separaciones de sustancias volátiles hasta los 100°C. Para ello, por ejemplo, resulta adecuada una mezcla de gas butano.

Todos los componentes del sistema, como la alimentación de gas portador, caudalímetro, columna de separación con fase estacionaria, dispositivo de regulación de la temperatura, detector de conductibilidad térmica y registrador son claramente reconocibles, lo que permite una demostración intuitiva del principio funcionamiento.

Extraído de "Handbook, Complete experiments chemistry/biotechnology"

Material Marco para experimentos completos 45500.00 Panel para experimentos completos 45510.00 Soporte con pinza, d = 18…25 mm 45520.00 Soporte con pinza, d = 8…10 mm 45522.00 Soporte para camisa de vidrio 45524.00 Soporte con pinza, sobre fijación magnética 02151.06 Soporte para aparatos de medida manuales 02161.00 Medidor manual 2×NiCr-Ni 07140.00 Termoelemento NiCr-Ni 13615.01 Cable de datos SUB-D/USB 07157.01 Display grande, digital 07157.93 Camisa de vidrio 02615.00 Columna de separación de gases 36670.00 Caudalímetro de burbujas de jabón 36675.00 Sonda para cromatógrafo de gases 36670.10 Unidad de alimentación para cromatógrafo de gases 36670.95 Registrador, tY, 1 canal 11414.95 Botella de helio, 2 l 41776.00 Soporte de mesa para botella de 2 l 41774.00 Válvula reductora de presión para helio 33481.00 Botella de seguridad con manómetro 34170.88 (Materiales de vidrio, piezas pequeñas, sustancias químicas, etc.)

Unidad de alimentación para cromatógrafo de gases 36670.95

Sonda para cromatógrafo de gases 36670.10

Para el suministro eléctrico y el ajuste de la sonda de medida para el cromatógrafo de gases 36670.10 • principio de medición: puente de Wheatstone • ajuste a cero: tecla para ajuste aproximado, potenciómetro para ajuste fino • entrada: conector hembra BNC para sonda • salida conectores hembra de 4 mm para dispositivo indicador (p. ej., registrador) • dimensiones (225 ×113×125) mm • conexión eléctrica 100, 115, 220, 240 V~ conmutable

Se utiliza, junto con la unidad de alimentación para el cromatógrafo de gases (Núm. de pedido 36670.95), como detector. El gas portador con las fracciones individuales fluye a través de la resistencia termosensible incorporada. Las distintas capacidades de conducción térmica de las fracciones generadas y del gas portador producen variaciones en la resistencia del sensor, que son registradas en un dispositivo indicador (un registrador Yt o una interfaz).

Caudalímetro de burbujas de jabón Para medir y regular la velocidad de flujo de los gases portadores durante la cromatografía de gases.

Tubo de vidrio graduado (0-5-10 ml) con capuchones de goma para alojar la solución jabonosa y la tubuladura acodada con oliva, da = 8 mm, para la conexión a la columna de separación.

36675.00 • longitud total: 280 mm • diámetro exterior 12 mm • grosor de pared 1,5 mm Material de repuesto: Capuchones de goma, 10 unidades 39275.03

405

C4 Cromatografía y electroforesis 4.5 Cromatografía de gases

Experimento: Determinación cromatográfica de la mantequilla o margarina contenida en galletas

Núm. de pedido del experimento:

13297

Las grasas alimenticias son ésteres de los ácidos grasos con glicerina.

Antes de su análisis en el cromatógrafo de gases, estos ácidos grasos deben transformarse a un estado volátil. Esto se consigue mediante la transesterificación del éster de glicerina en los ésteres de metilo correspondientes.

Las mezclas volátiles de los ésteres

etílicos de los ácidos grasos se separan por cromatografía de gases.

Para ello, se inyectan aprox. 20 µl de la mezcla en una columna de APL, a una temperatura de aprox. 200° C – 250° C y un volumen de flujo de gas de aprox. 30 ml/min. El cromatograma se registra mediante un registrador o la interfaz Cobra. Se registra el cromatograma de una mezcla de ésteres de metilo de ácidos grasos de la mantequilla y la margarina. El cromatograma de la

Cromatograma de una mezcla de ésteres etílicos de ácidos grasos de la mantequilla

mantequilla se distingue de tal modo del de la margarina, que basta con observarlo para distinguir claramente entre ambos alimentos. Por ejemplo, si se desea analizar si las galletas de mantequilla realmente están elaboradas con mantequilla, se realiza una extracción de la grasa de las galletas con pentano, usando un aparato tipo Soxhlet, se destila el disolvente y se transforman las grasas obtenidas en sus ésteres de metilo correspondientes. El cromato-

Cromatograma de una mezcla de ésteres etílicos de ácidos grasos de la margarina

406

Potencia calorífica Regulación de temperatura Regulación de temperatura con protección contra el sobrecalentamiento detector punto cero ajustable, alimentación eléctrica del puente de medición Conexión eléctrica:

(Materiales de vidrio, piezas pequeñas, sustancias químicas, etc.)

grama obtenido de esta mezcla debe coincidir ampliamente con el cromatograma de la mantequilla.

Cromatograma de una mezcla de ésteres etílicos de ácidos grasos de galletas de mantequilla

Cromatógrafo de gases 2 columnas 36657.93 para la separación de sustancias evaporables no descompuestas hasta 250° C. Dentro de la cámara de horno del cromatógrafo de gases, en el bloque del inyector y del detector, se encuentran fijadas dos columnas de separación, intercambiables, de aprox. 1 m de longitud. La columna I contiene un agente separador polar (polietilenoglicol adípico) y la columna II un separador no polar (grasa Apiezon L) Ambas columnas disponen de una entrada (mediante oliva de unión) y una salida de gas por separado, así como un detector de conductibilidad térmica, que se conecta en función de la columna de separación usada. Mediante la salida hacia el registrador pueden recogerse las señales con un registrador ty o un ordenador.

Materials Cromatógrafo de gases 2 columnas 36657.93 Botella de helio, 2 l 41776.00 Soporte de mesa para botella de 2l 41774.00 Válvula reductora de presión para helio 33481.00 Caudalímetro de burbujas de jabón 36675.00 Jeringa microlítrica 10 µl 02607.00 Material de repuesto: Tabiques separadores para cromatógrafo de gases, 10 unid.

36657.03 Aparatos para el registro de señales: Registrador, tY, 1 cana 11414.95 o Cobra 3, unidad básica 12150.00 Fuente de alimentación para Cobra3 12151.99 Software Cobra3, Registrador universal 14504.61

aprox. 180 W 20…250°C; display digital proporcional 2 células de conductibilidad térmica conectadas en puente 140 mA CC 230 V~ (otras tensiones disponibles por encargo)

Ámbitos de aplicación de las columnas instaladas: Columna de separación con grasa Apiezon L (APL): La grasa APL se utiliza, en un rango de temperaturas de 50 °C a 300 °C, para la separación de sustancias no polares como, por ejemplo, los alcanos, alquenos, éteres, hidrocarburos halogenados, ésteres superiores (ésteres de ácidos grasos), etc.

Columna de separación con polietilenoglicol adípico (PEGA): Este material puede utilizarse hasta los 210°C y es apropiado para la separación de sustancias de polaridad mediana (p. ej.: isómeros cis-trans, monoterpenos como los pinenos, mircenos y limonenos D).

También es posible la separación de mezclas azeotrópicas.

C4 Cromatografía y electroforesis 4.6 Electroforesis

Electroforesis La electroforesis es un método estándar en la biología y la química modernas para la separación, identificación y obtención de moléculas ionizables. Entre las moléculas con grupos ionizables están, por ejemplo, los aminoácidos, los péptidos, las proteínas, los ácidos nucleicos o los glicopéptidos. La separación de estas moléculas ocurre debido a sus diferentes cargas y masas molares al aplicarles un campo eléctrico. Para ello, el medio portador actúa como una especie de filtro de moléculas. El equipo necesario para la electroforesis consiste, básicamente, en un bloque de alimentación eléctrica y una cámara de electroforesis. La fuente de alimentación proporciona una corriente continua estable. La cámara de electroforesis contiene el depósito tampón, los electrodos, el portador para el medio de electroforesis y una tapa. Se puede elegir entre dos tipos de cámaras diferentes, una vertical y otra horizontal.

Por su transparencia, ambas son ideales para la enseñanza demostrativa. Debido a las pequeñas dimensiones de los geles se puede efectuar un proceso por cada hora lectiva.

Experimento: Movilidad electroforética Núm. de pedido del experimento La electroforesis es un método estándar en la moderna bioquímica: permite aislar e identificar moléculas ionizables según sus diferentes factores de migración, en función de sus cargas y masas, en un campo eléctrico. De este modo, pueden analizarse y caracterizarse desde un punto de

12301 vista físicoquímico los aminoácidos, los péptidos, las proteínas, los ácidos nucleicos o los glicopéptidos.

En este experimento, se separan las proteínas contenidas en la clara de huevo mediante electroforesis de gel.

Comparando las proteínas fraccionadas con un referencia de proteí-

na, se pueden determinar aproximadamente sus masas molares.

Extraído de "Laboratory experiments chemistry"

Material Cámara de electroforesis, vertical 35018.20 Fuente de alimentación para electroforesis 35019.93 Pipeta-microlitro, digital, 2…20 µl 47141.01 Pipeta-microlitro, digital, 25…250 µl 47141.04 Puntas, sueltas, 2…100 µl, color amarillo , 1000 unid. 47148.01 Tubos de ensayo desechables, 1,5 ml, 1000 unid.

37653.00 Gradilla para tubos de ensayo desechables 37652.00 Balanza de laboratorio con RS 232, 120/240/620 g 45023.93 (Materiales de vidrio, piezas pequeñas, sustancias químicas)

Cámara de electroforesis, vertical

35018.20

Para la realización de una electroforesis de gel de poliacrilamida SDS para la separación de proteínas. La mini-cámara de gel vertical garantiza unos tiempos de recorrido reducidos, de forma que sea posible llevar a cabo la separación electroforética en una hora lectiva. Para evitar la manipulación de sustancias químicas tóxicas o carcinógenas (poliacrilamida, azul Coomassie), se trabaja exclusivamente con geles o soluciones preparadas véase página 204). El gel preparado simplemente de coloca en el portador de gel y se fija con un dispositivo de pinzas. El portador de gel y el dispositivo de fijación se colocan en el recipiente de plexiglas. El portador de gel forma la cámara interior con un electrodo, el recipiente de plexiglas forma la cámara exterior con el otro electrodo. Ambas cámaras se llenan con la solución tampón. La mu-

estras o los patrones de referencia se vierten en las bolsas para muestras del gel preparado mediante una pipeta microlítrica y una plantilla de aplicación. La alimentación eléctrica sólo se aplica una vez cerrada la tapa de seguridad del recipiente de plexiglas.

El material suministrado incluye: Portador de gel con electrodos y placa reactiva Dispositivo de fijación para 1 gel preparado Recipiente de plexiglas con tapa de seguridad Cable de conexión con clavijas especiales Plantilla de aplicación para geles preparados con 10 bolsas Plantilla de aplicación para geles preparados con 15 bolsas Instrucciones de uso detalladas

407

C4 Cromatografía y electroforesis 4.6 Electroforesis Fuente de alimentación para electroforesis 100/200 V

Sustancias químicas y geles preparados para la electroforesis: Agarosa para electroforesis, 100 g Solución colorante ADN Bio-Safe 500x, 1 ml Tampón para aplicación de muestras ADN, 1 ml Gel preparado de acrilamida al 10 %, 10 unid.

Gel preparado de acrilamida al 15 %, 10 unid.

Patrón SDS-PAGE, alta concentración molecular, 0,2 ml Patrón SDS-PAGE, baja concentración molecular, 0,2 ml Patrón SDS-PAGE, banda ancha, 0,2 ml Solución colorante Coomassie, Bio-Safe, 1 l Tampón para electroforesis TBE 10x, 1 l Tampón EDTA de ácido triacético 50x, 1 l Tampón SDS de triglicina 10x, 1 l Tampón de muestras Laemmli, 30 ml

35018.11 35018.12 35018.13 35018.21 35018.22 35018.23 35018.24 35018.25 35018.26 35019.10 35019.11 35019.20 35019.21

35019.93

El aparato suministra una tensión constante de 100 V para la cámara de electroforesis horizontal 35018.10, o una tensión constante de 200 V para la cámara de electroforesis vertical 35018.20. Se pueden conectar una o dos cámaras en paralelo. El aparato está equipado con bornes de seguridad y sólo debe conectarse a las cámaras de electroforesis mediante cables especiales.

Datos técnicos: Tensión de salida Corriente de salida Potencia de salida Conexión eléctrica

Tubos de ensayo desechables, 1,5 ml 37653.00

Gradilla para tubos de ensayo desechables 37652.00

1000 unid.; ideales para la aplicación de las muestras, PP, transparentes con tapa

PP, para 20 tubos

Dimensiones (mm)

100 ó 200 V máx. 200 mA máx. 40 W 90...264 V, 47…63 Hz, máx. 60 W 155×58×108

Transferpette® (pipeta microlítrica) Pipeta de pistón con cámara de aire.

Para una manipulación sencilla y cómoda, también con guantes, la Transferpette® ofrece un excelente diseño ergonómico. La mano ya no se cansa tan rápidamente. A ello contribuye también su escaso peso.

Gracias a su concepto de probada eficacia, la Transferpette permite manejar todas sus funciones con una sola mano.

Puntas desechables para pipetas microlítricas; de polipropileno, transparentes Color envasadas en bolsas amarillo azul

408

Volumen µl

Unidades

1…200 50…1000

1000 500

Núm. art.

47148.01 47148.02

• La tecla lateral para aspirar • El expulsor de puntas incorporado, de fácil acceso • La regulación del volumen, montada por separado No es posible un accionamiento doble de las funciones que pudiera producir fallos en el funcionamiento, como la expulsión accidental de las puntas de pipeta.

Transferpette® modelo Fix Núm. art.

Volumen µl

Transferpette® modelo digital Núm. art.

Volumen Subdivisión µl µl

47140.01 47140.02 47140.03 47140.04 47140.05 47140.06 47140.07 47140.08 47140.09 47140.10 47140.11

47141.01 47141.02 47141.03 47141.04

5 10 20 25 50 100 200 250 500 1000 2000

2– 20 5– 50 10– 100 25– 250

0,01 0,1 0,1 1,0

C4 Cromatografía y electroforesis 4.6 Electroforesis

Experimento: Fragmentación del plásmido pBR 322 con enzimas de restricción Núm. de pedido del experimento:

10829

Las enzimas de restricción son una clase especial de endonucleasas, capaces de reconocer secuencias específicas de ADN y dividir sólo dichas secuencias. Constituyen una "herramienta estándar" de la genética.

En el experimento, un ácido polinucleico de secuencia conocida, el plásmido pBR 322, se fragmenta de forma determinada mediante diferentes enzimas de restricción. Con la electroforesis de gel horizontal en un gel de agarosa se pueden separar los fragmentos obtenidos según su peso molecular. Dichos fragmentos son visibles bajo radiación UV. La cámara de electroforesis es totalmente transparente, lo que permite ver todos los elementos de su funcionamiento. Debido a las pequeñas dimensiones de los geles se puede efectuar un proceso en una hora lectiva. La seguridad del proceso está garantizada puesto que el circuito eléctrico sólo se cierra cuando está colocada la tapa de seguridad.

Todos los pasos del proceso, desde la obtención de las muestras hasta su análisis, son realizados por los propios alumnos. Esto les da una idea del procedimiento básico de la investigación científica y les permite el aprendizaje intuitivo de temas actuales, como la tecnología genética.

Las sustancias químicas especiales con fecha de caducidad limitada deben adquirirse directamente al fabricante. El manual contiene una relación de los correspondientes proveedores.

Cámara de electroforesis, horizontal Para la realización de electroforesis de gel de agarosa con la "técnica sumergida" con el fin de separar los ácidos nucleicos. Los geles tienen un tamaño de 7×7 cm; la separación por electroforesis se puede llevar a cabo en una hora lectiva. El gel se vierte sobre una tableta extraíble, permeable a la luz UV. Mediante un peine incorporado, se forman las bolsas para aplicar las muestras. El gel vertido sobre la tableta se coloca en la cámara y se cubre con solución tampón – de ahí el nombre de "técnica sumergida".

El circuito eléctrico sólo se cierra

Material Cámara de electroforesis, horizontal 35018.10 Agarosa para electroforesis, 100 g 35018.11 Solución colorante ADN Bio-Safe 500×, 1 ml 35018.12 Tampón para aplicación de muestras ADN, 1 ml 35018.13 Tampón para electroforesis TBE 10×, 1 l 35019.10 Fuente de alimentación para electroforesis 100/200 V 35019.93 Pipeta-microlitro 2 – 20 µl 47141.01 Puntas desechables, amarillas, 1000 unid.

47148.01 Tubos de ensayo desechables, 1,5 ml, 500 unid.

37653.00 Gradilla para tubos de ensayo desechables 37652.00 Lámpara de análisis con soporte 254/366 nm 33975.93 Autoclave, 10 l 04427.00 Placa calefactora 150…1500 W 04022.93 (Materiales de vidrio, piezas pequeñas, sustancias químicas, etc.)

35018.10 cuando se coloca la tapa de seguridad.

El material suministrado incluye: Cámara tampón y tapa de seguridad de plexiglas Cable de conexión con clavijas especiales Tableta de gel permeable a la luz UV 2 puentes para verter el gel, de aluminio Peine, de 8 púas, 1,5 mm Peine, de 15 púas, 1,5 mm Nivel de burbuja para colocar horizontalmente la cámara Instrucciones de uso detalladas

409

C4 Cromatografía y electroforesis 4.6 Electroforesis

Kits escolares para electroforesis de ADN

Descomposición por restricción de ADN, kit escolar

Los experimentos son muy apropiados para explicar los principios básicos y procedimientos de la electroforesis de gel de agarosa, incluido el vertido del gel, la aplicación de las muestras, la separación, la coloración inocua del ADN y la determinación de fragmentos de ADN por su tamaño. El material auxiliar que se acompaña y las preguntas correspondientes contribuyen a consolidar a largo plazo el

Con la ayuda de 3 enzimas de restric- cortan en trozos y los fragmentos se ción (HindIII, PstI y EcoRI) se lleva a analizan mediante la electroforesis de cabo una descomposición de restric- gel de agarosa. Los alumnos elaboran ción del ADN lambda de un bacte- una curva estándar y calculan los riófago (un virus que infecta las bac- pesos moleculares de los fragmentos terias). Es decir, las aprox. 48000 de ADN producidos por la restricción. pares de bases del ADN lambda se Componentes que contiene el kit: Enzima de restricción HindIII, 50 µl Enzima de restricción PstI, 50 µl Enzima de restricción EcoRI, 50 µl Tampón de restricción, 500 µl ADN lambda, sin cortar, 200 µl Tampón para aplicación de muestras, 250 µl Solución de coloración del ADN 500×, 1 ml 60 tubos de reacción 1,5 ml, 6 colores (10 unidades de cada) 8 soportes de tubos de reacción 10 cápsulas para la coloración de los geles

contenido del curso.

El contenido del kit es suficiente para 8 grupos de trabajo escolares (o para experimentos de demostración en 8 clases, respectivamente).

Algunos reactivos tienen fecha disponen de una duración limitada y deben conservarse en el frigorífico o en cámara fría. También es recomendable pedir los kits de modo que se utilicen en un plazo de pocos meses.

Además de los kits, son necesarios los siguientes aparatos y sustancias químicas Cámara de electroforesis, horizontal 35018.10 Agarosa para electroforesis, 100 g 35018.11 Tampón EDTA de ácido triacético 50×, 1 l 35019.11 Fuente de alimentación para electroforesis 100/200 V 35019.93 Pipeta-microlitro 2–20 µl 47141.01 Puntas desechables, amarillas, 1000 unid.

47148.01 Horno microondas Accesorios recomendados: Microcentrifugador para tubos de ensayo de 1,5 ml

Análisis de restricción del ADN, kit escolar En este experimento se ponen de manifiesto los principales métodos de trabajo de la genética. Puede comprobarse el funcionamiento de las enzimas de restricción, las principales herramientas de los biólogos moleculares para trabajar con el ADN. Con la

35019.01

ayuda de la electroforesis de gel de agarosa puede analizarse la velocidad de migración y los patrones de fragmentación del ADN y determinarse el tamaño de los fragmentos de ADN desconocidos.

Componentes que contiene el kit: Enzima de descomposición Lambda-HindIII, 100 µl Enzima de descomposición Lambda-PstI, 100 µl Enzima de descomposición Lambda-EcoRI, 100 µl ADN lambda, sin cortar, 100 µl Tampón para aplicación de muestras, 250 µl Solución de coloración del ADN 500×, 1 ml 60 tubos de reacción 1,5 ml, 6 colores (10 unidades de cada) 8 soportes de tubos de reacción 10 cuencos para la coloración de los geles

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Identificación por ADN, kit escolar En este experimento, los alumnos aprenden los métodos que se aplican en diversos procedimientos médicos y forenses, así como para la determinación de paternidad. El método puede aplicarse también al análisis genético del pedigrí de perros, así como al estudio del comportamiento migratorio de la fauna salvaje. El experimento permite a los alumnos simular la metodología aplicada en la medicina forense con mayor frecuencia, es decir, la extracción de ADN de una célula cualquiera del cuerpo, la descomposición del ADN mediante enzimas de restricción y el análisis de los fragmentos de ADN producidos con ayuda de la electroforesis de gel de

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35019.03 agarosa. Como resultado se obtienen patrones de bandas de ADN, que ponen de manifiesto las diferencias y similitudes respecto al código genético entre varios individuos. En este experimento se descomponen cinco muestras hipotéticas de ADN humano. Una muestra procede del lugar de los hechos del delito, mientras que las otras cuatro corresponden a cuatro presuntos autores del delito. Tras la electroforesis y la coloración, los alumnos analizan los patrones de ADN y comparan el ADN de los sospechosos con el ADN encontrado en el lugar de los hechos. Este kit no contiene ADN humano auténtico.

Componentes que contiene el kit: ADN del lugar de los hechos, 75 µl ADN de los 4 sospechosos, 75 µl de cada uno Marcador de ADN Lambda-HindIII, 100 µl Tampón de enzima de restricción 10×, 120 µl Mezcla de enzimas BamH1/HindIII 10×, 100 µl Marcador frontal 6×, 250 µl Solución de coloración del ADN 500×, 1 ml 80 tubos de reacción 1,5 ml (30 incoloros, 10 de cada color verde/azul/naranja/violeta/rojo) 8 soportes de tubos de reacción 10 cuencos para la coloración de los geles