腸道原蟲檢驗講義 by taiwancdc taiwan

腸道原蟲檢驗講義

審閱:李淑英主任攝影主編:許世芬版面設計:林子琦

衛生福利部疾病管制署編印

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MIF 固定、染色及濃縮法 Merthiolate-iodine-formaldehyde concentration method

MIF 目的：供檢查感染腸道寄生蟲患者糞便中蠕蟲蟲卵及原蟲(滋養體及囊體)之固定和染色與鑑定之用 MIF 原理：利用 Merthiolate 可阻斷細胞之代謝作用及原蟲細胞核有嗜碘性之特性而 5%Formalin 可固定細胞並利用 Eosin-Y 的紅色去襯托細胞背景 MIF 配製： MIF 染色液配方為 MF 儲存液：魯氏碘液＝15：1 之比例 (MIF 配製後勿置放超過 24 小時，碘液會揮發而效果遞減)

操作步驟： 1. 1g 糞便 (約拇指頭大小，解出不超過 1hr )放入呈有 10cc MIF 溶液之集卵瓶，利用採便棒充分攪拌均勻後放置室溫 2 小時以上固定&染色，overnight 呈色更好。

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2. ৾௞໳Յ֨ηǴ໣ռ౟࿼‫ܭ‬ӾۭᚆЈᆅ΢٠ᘈઇᖓጢǴа໣ռ౟ ‫ޑ‬ᘠᆛၸᘠϐǴஒᘠనၸᘠԿӾۭᚆЈᆅϣǴᔈၲ 7~8mlǴ҂ၲ ਔӆံуΕ MIF solution Կ 7-8 ml ջёǶ

3. уΌለΌ✊(Ethyl Acetate) 0.5~1 mlǴҔᇂηᇂՐᆅαǴ΢ΠமΚ ᎜ᕏԿϿ 30 ࣾ(‫ ܈‬15 ԛԿ 30 ԛ)Ƕ

85 30

4. ᚆЈ 2000 rpmǴ2 ϩដǴஒ΢మనҧకǴ੮؇෦ऊ 0.5~1 mlǴӆа ා޸෇ᔔ࡬ᆅᏛ‫ڬ‬ൎǴаխ΢ቫనӣࢬǶ 5.

6. а֎ᆅ֎‫ڗ‬؈෦‫᜔ނ‬ᔠϐ

၂ᏊࠔᆅǺ 1. ‫ֿڗ‬؈෦ᆅ(ςዴ‫ޕ‬ϣ֖ WBC ‫ ܈‬Epithelial cell)ऊ 0.6ml ؈෦྽ࠔᆅᔠᡏǶ 2. ஒ MIF 6ml уΕ 0.6ml ֿ؈෦ಒझϣ(10:1)ࢉՅ 3 ϩដǶ 3. ᡉ༾᜔᜔ᔠǴऩಒझࢉԋણआՅջࣁࢉనࠔᆅ೯ၸǶ

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Entamoeba histolytica/E. dispar cyst z 10~20 Pm(த‫ ـ‬12~15 Pm) z Ѧ‫׎‬և༝ౚ‫ރ‬Ƕ z 1~4 ঁਡǴ҂ԋዕ៶ᡏ 1~2 ঁਡǴ όத‫ـ‬Ƕ z PC ᗭಈಒጏǴ೯தελ΋ठЪ ϩѲ֡ϬǶ z ਡϘ(KC)λǴஏჴ‫܈‬ϩණ‫ޑ‬Ǵ z ೯தۚύǴଽԶୃЈǶ z ᜪࢉՅᡏևߏ෇‫׎‬Ǵᜐጔ༝໌Ƕ z ᗐচ༧೯தևණթ‫ރ‬Ǵԃᇸ៶ᡏև༧‫ރ‬Ƕ

10μm

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10μm

Entamoeba histolytica/E. dispar trophozoite z 10~60 Pm(த‫ ـ‬15~20 Pm) z ൂਡ z ਡ‫ࢉڬ‬Յ፦(PC)ᗭಈಒጏǴ ೯தελ΋ठЪϩѲ֡ϬǶ z ਡϘ(KC)λǴஏჴ‫܈‬ϩණ‫ޑ‬Ǵ ೯தۚύǴଽԶୃЈǶ z झ፦Ѧᢀևಒጏᗭಈ‫ރ‬Ǵ ϣ֖ಒ๵‫ ܈‬RBCǶ

z HematophagousǺE. histolytica ੝Ԗ

10μm

10μm 10μm

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Entamoeba hartmanni cyst z 5~10 Pm(த‫ ـ‬6~8 Pm) z Ѧ‫׎‬և༝ౚ‫ރ‬ z 1~4 ঁਡǴ҂ԋዕ៶ᡏ 1~2 ঁਡǴ Ψத‫ـ‬Ƕ z PC ᗭಈಒጏǴ೯தελ΋ठЪϩѲ֡ϬǶ z ਡϘ(KC)λǴஏჴ‫܈‬ϩණ‫ޑ‬Ǵ ೯தۚύǴଽԶୃЈǶ z ᜪࢉՅᡏևߏ෇‫׎‬Ǵᜐጔ༝໌Ƕ z ᗐচ༧೯தևණթ‫ރ‬Ǵԃᇸ៶ᡏև༧‫ރ‬Ƕ

10μm

Entamoeba hartmanni trophozoite z 5~12 Pm(த‫ ـ‬8~10 Pm) z ൂਡ z PC ᗭಈಒጏǴ೯தελ΋ठЪϩѲ֡Ϭ z ਡϘ(KC)λǴஏჴ‫܈‬ϩණ‫ޑ‬Ǵ ೯தۚύǴଽԶୃЈǶ z ಒझ፦ևಒጏᗭಈ‫ރ‬ϣ֖ಒ๵Ƕ

90 35

10μm

Entamoeba coli cyst z 10~35 Pm(த‫ ـ‬15~25 Pm) z ೯தև༝‫׎‬ǴӢ‫ۓڰ‬నၨᜤ຾ΕǴ ଽԶևռ‫׎‬ǵΟ‫ځ܈׎ف‬д‫ރ׎‬Ƕ 1~16 ਡǴ8 ঁਡத‫ـ‬Ǵଽᅟё‫ـ‬ όԋዕ 2 ਡ៶ᡏǶ z PC ᗭಈಉǴελό΋ЪϩѲ ό֡ϬǴՠၨࢲ୏ᡏϩѲ֡ϬǶ z KC εǴϩණ‫܈‬ஏჴ‫ޑ‬Ǵ ೯தୃЈǴଽԶۚύǶ z ᜪࢉՅᡏၨόதр౜Ǵ೯த ԋ຋Т‫ރ‬ǴӾ‫҃׎‬ᆄǶ

10μm

Entamoeba coli trophozoite z 15~50 Pm(த‫ ـ‬20~25 Pm)ǴൂਡǶ z PC ᗭಈಉǴελό΋ЪϩѲό֡ϬǴ ‫׎܈‬ԋ΋ಉ໵ᕉǶ z KC εǴϩණ‫܈‬ஏჴ‫ޑ‬Ǵ೯தୃЈǴ ଽԶۚύǶ z ಒझ፦ևಉᗭಈ‫ރ‬ϣ֖ಒ๵Ǵத‫ݰޜڀ‬Ƕ

91 36

10μm

Iodamoeba bütschlii cyst z 5~20 Pm (த‫ ـ‬10~12 Pm) z ևռ‫׎‬ǵߏᐍ༝‫׎‬ǵΟ‫ځ܈׎ف‬д‫ރ׎‬Ƕ z ൂਡ z ؒԖ PC z KC ࡐεǴ೯தۚύǴԖਔຼᜐൎᙅ๱཮ۙӀϐߚࢉ Յ፦ᗭಈǶ z ᜪࢉՅᡏևᗭಈ‫ރ‬ z ᗐচ༧೯தևమཱϐஏჴ፦༧

10μm

Iodamoeba bütschlii trophozoite z 8~20 Pm(த‫ ـ‬12~15 Pm) z ൂਡ z ؒԖ PC z KC ࡐεǴ೯தۚύǴԖਔຼᜐൎᙅ๱཮ ۙӀϐߚࢉՅ፦ᗭಈǶ z ಒझ፦ևಉᗭಈ‫ރ‬ϣ֖ಒ๵Ǵሇ҆๵Ǵё‫ݰޜـ‬Ƕ

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Endolimax nana cyst z 5~10 Pm(த‫ ـ‬6~8 Pm) z և༝‫׎‬ǵռ‫ߏ܈׎‬ᐍ༝‫׎‬ z 1~4 ਡǴϿ‫ ܭ‬4 ਡϐόԋዕ៶ᡏϿ‫ـ‬Ƕ z ؒԖ PC z KC ࡐεǴևόೕ߾ϐᏀᗺ‫ރ‬Ǵ೯தۚύǶ z ᜪࢉՅᡏևᗭಈ‫܈ރ‬λռ‫׎‬፦༧ z ᗐচ༧೯தևණթ‫ރ‬

10μm 10μm

Endolimax nana trophozoite z 6~12 Pm(த‫ ـ‬8~10 Pm) z ൂਡ z ؒԖ PC z KC ࡐεǴևόೕ߾ϐᏀᗺ‫ރ‬Ƕ z ಒझ፦ևᗭಈ‫ރ‬ϣ֖ಒ๵Ǵё‫ݰޜـ‬Ƕ

93 38

Blastocystis hominis z ғࢲўϝόమཱ z 5~30 Pm(த‫ ـ‬8~10 Pm) z և༝‫׎‬ǵռ‫ߏ܈׎‬ᐍ༝‫׎‬Ƕ z ਡՏ‫ܭ‬ಒझ፦ᜐጔǴ1~4 ਡǴத‫ൂـ‬ਡǴ 2~4 ਡԛϐǶ z ಒझύѧԖ΋ε‫(ݰޜ‬central body)ஒਡ Ϸᗭಈᔒ‫ډ‬ಒझᜐጔ‫׎‬ԋᕉ‫׎‬Ƕ

Dientamoeba fragilis trophozoite z ࣁ΋ᅿᚎЛᙝ z ғࢲўؒԖ៶ᡏ໘ࢤ z 5~15 Pm(த‫ ـ‬9~12 Pm) z ᚎЛόё‫ـ‬ z ᚈਡ‫ൂ܈‬ਡ(ѝэ 20%) z ؒԖ PC z ຋ԋ࿗Тϐ KCǴ‫܈‬և 4~8 ᗭಈϐᘀ໣

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Giardia lamblia cyst z 8~19 Pm(த‫ ـ‬11~12 Pm) z ևռ‫ߏ܈׎‬ᐍ༝‫׎‬ z 4 ঁਡǴ೯தՏ‫ܭ‬΋ୁǶ z ᚎЛᕵӛՏ‫៶ܭ‬ᡏύ z ᠼЛதୁӛ‫܈‬௹ӛҬ‫׃‬࿼‫៶ܭ‬ᡏၨե೽Տ z ಒझ፦࿶தவಒझᏛೀ۳ϣᕭ

10μm 10μm

Giardia lamblia trophozoite z 10~20 Pm(த‫ ـ‬12~15 Pm) z ևఛ‫׎‬ z ᚈਡ z ᚎЛ-ୁᚎЛ 4 ਥǵື(ဎ)ᚎЛ 2 ਥǵ‫׀‬ᚎЛ 2 ਥǶ z ֎ዬэဎ೽߄य़ᑈ 1/2~3/4

10μm 10μm

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Chilomastix mensnili cyst z 6~10 Pm(த‫ ـ‬8-9 Pm) z ևᘗᘔ‫׎‬Ǵ߻ᆄ஥Ԗ೸ܴౚࠠँр‫ނ‬ z ൂਡ z झᡏ஥ԖЍ࡭ᠼЛ

Chilomastix mensnili trophozoite z 6~24 Pm(த‫ ـ‬10-15Pm) z ևఛ‫׎‬ z ൂਡ z ᚎЛ-߻ୁᚎЛ 3 ਥǵझᡏᚎЛ 1 ਥǶ

10μm

z झᡏϐँрӛΠ‫ۯ‬՜ 1/2~1/3 झᡏߏ z ᖥ௽ࠠྎદᑽຫဎ೽߄य़

Artifact-WBC ( White Blood Cells )

10μm

E. histolytica(cyst) Mimics: WBC

96 41

PVA ‫(ݤۓڰ‬Polyvinyl - alcohol fixation) ᏹբ‫؁‬ᡯǺ 1. ‫ڗ‬ᕨߡऊ 0.5g ‫ܫ‬ΕևԖ 1c.c. PVA ‫ۓڰ‬నύ (ᕨߡᆶ PVA Кࣁ 1Ǻ2)Ǵᠳ܏֡Ϭࡕ‫ܫ‬࿼࠻ྕ 2 λਔа΢‫ۓڰ‬ϐǶ

2. ᔠᡏ࿶‫ࡕۓڰ‬Ǵ‫ڗ‬؇ᐘ‫ނ‬ऊ 4~5 ᅀ‫ܭ‬ᘠર΢Ǵ1 ϩដࡕӆ ҔԮ෇‫ڗڊ‬ᕨߡǶ

3. ஒᕨߡ༡‫ܭ‬ၩ࣒Т΢Ǵ࿶႖‫ڹ‬॥ଳࡕջё຾ՉࢉՅǶ

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Trichrome Stain ࢉՅ‫؁‬ᡯ ᏹբ‫؁‬ᡯǺ 1. ஒᇙբӳ‫࣒ޑ‬Т‫ܫ‬Ε֖࿚న‫ ޑ‬70%ଚᆒύǴ5~10 ϩដǶ (CAP ෳ၂ᔠᡏόࢂ PVA ‫ۓڰ‬Ǵό໪Ԝ‫؁‬ᡯ౽ନෛϯ؄ǹၩ࣒Т౽ԿΠ΋ ࢉऌ߻Ǵ໪‫ܭ‬રτ΢ᛅଳၸӭࢉᏊǴᗉխ਀஥‫ׯނ‬ᡂ၂ᛰԋϩǶ)

2. 70ʘଚᆒ 5 ϩដǴӆ‫ܫ‬Ε 70ʘଚᆒ 3 ϩដǶ (CAP ෳ၂ᔠᡏ‫ޔ‬ௗҗԜ‫؁‬ᡯ໒‫ ۈ‬70ʘଚᆒ 5 ϩដǴௗ๱‫ܫ‬Ε Trichrome ࢉऌǴ౽Կ trichrome ࢉऌ߻Ǵ໪‫ܭ‬રτ΢ᛅଳၸӭ 70ʘଚᆒǴᗉխ਀஥ ‫ׯނ‬ᡂ၂ᛰԋϩǶ)

3. ‫ܫ‬Ε Trichrome ࢉऌϣǴࢉ 10~15 ϩដǶ (CAP ෳ၂ᔠᡏߚ؄‫ۓڰ‬ၨόܰ΢ՅǴࡌ᝼ Trichrome ࢉ 30 ϩដǹ Trichrome ࢉࡕၩ࣒Т౽ԿΠ΋ࢉऌ߻Ǵ໪‫ܭ‬રτ΢ᛅଳၸӭ Trichrome ࢉ ᏊǴᗉխ Trichrome ࢉᏊԦࢉΠ΋ࢉᏊǶ)

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4. 酸性酒精脫色(90%酒精+0.5%醋酸)1~3 秒 (視抹片厚薄度，自行斟酌酸性酒精脫色秒數，CAP 測試檢體抹片較薄，建議 two dips only；酸性酒精退染後不須於紙巾上瀝乾過多染劑，請爭取時間快速移至 100%酒精 rinse，以避免酸性酒精繼續脫色。)

5. 95%酒精 rinse 2 次。 6. 100%酒精 rinse 3 次。 7. 100%酒精 3 分鐘，脫水 2 次。 (載玻片移至 Xylene 前，須於紙巾上瀝乾過多 100%酒精)

8. Xylene 5~10 分鐘，浸潤 2 次。

9. 滴上封片膠蓋上蓋玻片後，置於室溫晾乾 (overnight)或者於 37℃中烘乾 1 小時，顯微鏡下鏡檢（use 100X oil immersion objective）。

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ቹៜ Trichrome ࢉՅϐӢન ‫ܓ‬Тϐࠆࡋ ଏࢉਔ໔ϐৡ౦ ঁᡏᕨߡ໔ϐৡ౦

‫ܓ‬ТᇙբϷࢉՅ‫ݙ‬ཀ٣໨ ‫ܓ‬Т‫ࢉܭ‬Յਔಥပ 9 ၩ࣒ТόଳృǴԖ‫ݨ‬ᅄ 9 ‫ܓ‬ТؒԖֹӄଳᔿ 9 ‫ܓ‬Тϼࠆ‫܈‬༡‫ؒ୔ܓ‬Ԗ఼ᇂ‫࣒ډ‬Тᜐጔ ‫ܓ‬Тр౜‫ש‬Ӏ඲ᡏ‫܈‬ᗭಈ 9 ෛϯ؄ѐନόֹӄ ‫ܓ‬Тୃᆘ 9 ࿚ූ੮ ! ่݀ղ᠐;!!!!!!!!!! Nuclear chromatin & chromatoid bodies

Red to purple

Bacteria & ingested RBC’s

Red to purple

Cytoplasm of cysts

Blue/green with purple tinge

Cytoplasm of protozoan trophozoites

Blue/green with purple tinge

Microsporidia spores

Pink/red wall with clear interior

Background

Green

100 45

Trichrome

Stain ‫׎‬ᄊᏢϟಏ

Entamoeba histolytica/E. dispar cyst 12~15 Pm

10μm

E. histolytica/E. dispar trophozoite 15~20 Pm

10μm

101 46

Entamoeba coli Cyst 15~25 Pm

10μm

Entamoeba coli Trophozoite 20~25 Pm

10μm

102 47

Entamoeba hartmanni Cyst 6~8 Pm

10μm 10μm

10μm

Entamoeba hartmanni Trophozoite 8~10 Pm

10μm

103 48

Endolimax nana Cyst 6~8 Pm

10μm Iron-hematoxylin stained

Endolimax nana Trophozoite 8~10 Pm

10μm

10μm 10μm

104 49

Iodamoeba butschlii Cyst 10~12 Pm

10μm

Iodamoeba butschlii Trophozoite 12~15 Pm

10μm

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Dientamoeba fragilis Trophozoite 9~12 Pm

10μm

Blastocystis hominis 8~10 Pm

10μm

Chilomastix mesnili Cyst 8~9 Pm

10μm

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Giardia lamblia Cyst 11~12 Pm

10μm

Giardia lamblia Trophozoite 12~15 Pm

10μm 10μm 10μm

10μm

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阿米巴性痢疾(台灣列入法定傳染病第二類)

致病原痢疾阿米巴原蟲（Entamoeba histolytica）為本病之致病原，其生活史有兩個階段：主司代謝繁殖的活動體（trophozoite；又名營養體）及能耐惡劣環境的囊體（cyst），後者具囊壁，隨寄主之排泄物進入環境，經食入後，在下一寄主腸道脫囊（excystation）成為活動體。活動體可侵入組織造成病變，囊體則為具感染力之階段。

流行病學阿米巴性痢疾屬世界性分布，但熱帶、亞熱帶開發中國家之感染較普遍，長期集體生活之孤兒院、教養院、收容所、監獄為易發之場所。臺灣地區調查發現教養院及精神病患收容所，感染情形較為普遍，此與生活習慣、衛生條件，環境污染及群居狀況關係密切。此外，男同性戀者、國人赴疫區返國者、來自疫區外勞及外籍新娘等為高危險族群。

傳染方式經糞口途徑傳染，主要藉由糞便中之囊體污染的飲用水、食物或病媒（如：蟑螂、蠅）傳染；亦可能由口對肛門的接觸行為造成。

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109 54

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Reference 1. Parasitology benchtop reference guide Cap/College of American Pathologistis 2. Clinical Parasitology A paractical approach 3. Centers for Disease Control and Prevention web 4. Atlas of Human Parasitology/Ash Orihel’s

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