Ignatov

На правах рукописи

Игнатов Михаил Юрьевич РОЛЬ ИММУННЫХ И АУТОИММУННЫХ МЕХАНИЗМОВ В РАЗВИТИИ ОСТРОГО ГНОЙНОГО ПЕРИОСТИТА ЧЕЛЮСТЕЙ

14.03.03 – Патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Чита – 2010 Работа

выполнена

в

ГОУ

ВПО

“Читинская

государственная

медицинская академия Росздрава”. Научный руководитель: доктор медицинских наук, Цыбиков Намжил Нанзатович

профессор

Официальные оппоненты: доктор

медицинских

наук,

профессор кандидат медицинских наук

Ведущая организация: ГОУ ВПО

Пинелис Иосиф Семенович Герасимов Александр Александрович

“Новосибирский государственный

медицинский университет Росздрава” (г. Новосибирск). Защита диссертации состоится “__”_____________2010 г. в __часов на заседании диссертационного совета Д 208.118.01 при ГОУ ВПО “Читинская государственная медицинская академия Росздрава” (672090, г.Чита, ул. Горького, 39-а). С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО “Читинская государственная медицинская академия Росздрава”. Автореферат разослан “___”_______________2010г. Ученый секретарь диссертационного совета д.м.н., профессор

Гаймоленко И.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Значительное число пациентов лечебных учреждений стоматологического профиля занимают больные с одонтогенными заболеваниями челюстно-лицевой области (Тер-Асатуров Г.П., 2005; Робустова Т.Г., 2007; Долгушин И.И., 2009; Кабанова С.А., 2009). Более того, в последние десятилетия, несмотря на увеличение объема и качества стоматологической помощи, число больных с воспалительными заболеваниями не уменьшается, а остается на неизменно высоком уровне ( Цеймах Е.А. и др., 2004; Ямуркова Н.Ф., 2007; Коротких Н.Г., 2008; 2009). Тенденция к увеличению таких пациентов стала наблюдаться еще в 60-70-х годах и, несмотря на принимаемые меры, остановить этот процесс не удается ( Левенец А.А., 2006; Робустова Т.Г., 2006). Уникальность одонтогенного воспаления обусловлена, по крайней мере, взаимодействием двух защитных механизмов: местного (собственно в полости рта) и системного (всего организма), которые с одной стороны являются самостоятельными, а с другой представляют систему антимикробной защиты в целом. Интенсивность течения патогенеза одонтогенного воспаления зависит от слаженного взаимодействия всех факторов иммунитета. В последние годы накопилось достаточно много информации о роли про- и противовоспалительных цитокинов в механизмах формирования воспалительных реакций (Мустафаев М.Ш. и др., 2007, Сидякова Е.В. и др., 2008; Момот А.П., 2009). Однако, в большинстве работ, как правило, исследуются либо смешанная слюна, либо сыворотка крови, и лишь в единичных работах отображается цитокиновый профиль зубодесневой жидкости (ДЖ) (Петрова Т.Г. и др., 2007). При наличии такой информации чрезвычайно сложно интерпретировать результаты разрозненных исследований. До настоящего времени остаются неизвестными отдельные звенья патогенеза, связанные с возможностью формирования иммунных комплексов прямо в полости рта, роли белков теплового шока (БТШ), гомоцистеина, S-аденозилгомоцистеина в патогенезе одонтогенных воспалительных заболеваний. Практически не изучен эффект отдачи тканевого фактора моноцитами, инкубированных с ротовой (РЖ) и десневой жидкостями в норме и патологии. Безусловно, решение поставленных вопросов позволило бы расшифровать новые звенья патогенеза одонтогенных воспалительных заболеваний, и увеличить возможность диагностики и прогноза, а, следовательно, профилактики и лечения. Цель настоящего исследования: установить роль иммунных и аутоиммунных механизмов в развитии острого гнойного периостита челюстей.

В ходе работы нами решались следующие задачи: 1. Определить уровень цитокинов и аутоантител к ним у доноров и пациентов до и после лечения острого гнойного периостита челюстей в сыворотке крови, ротовой и десневой жидкостях.

2. Исследовать уровень эндотелина-1, белка теплового шока 70, гомоцистеина и аутоантител к ним в сыворотке крови, смешанной слюне и десневой жидкости у здоровых лиц, а также у больных с острым гнойным периоститом челюстей до и после лечения.

3. Изучить эффект отдачи тканевого фактора моноцитами, инкубированными с различными субстратами (ротовой и десневой жидкостями, гомоцистеином, иммунными комплексами) в динамике воспалительного процесса. Научная новизна. Установлено, что в РЖ и ДЖ доноров и больных с острым гнойным периоститом челюстей регистрируются про- и противовоспалительные цитокины, уровень которых регулируется преимущественно аутоантителами класса sIgA. Впервые показано, что при развитии острого гнойного периостита челюстей в РЖ и ДЖ возрастает абсолютное содержание БТШ-70, а также уровень антител к нему, особенно класса sIgA. Доказано, что при остром гнойном периостите челюстей увеличивается содержание гомоцистеина в ротовой и десневой жидкостях, а также возрастает содержание антител класса sIgA к коньюгату Sаденозилгомоцистеин-альбумин с последующим образованием иммунных комплексов в смешанной слюне. Установлено, что инкубация интактных моноцитов с РЖ и ДЖ как здоровых, так и, особенно, пациентов сопровождается эффектом отдачи тканевого фактора. Последняя реакция дозозависимая, выявляется при инкубации с гомоцистеином, S-аденозилгомоцистеин-альбумином и иммунными комплексами S-аденозилгомоцистеин-альбумин+ sIgA. Теоретическая и практическая значимость. Полученные факты раскрывают новые звенья патогенеза течения острого гнойного периостита челюстей, реализуемые про- и антивоспалительными цитокинами, эндотелином-1, БТШ-70, S-аденозилгомоцистеином, а также антителами к ним в сыворотке крови, РЖ и ДЖ. Результаты исследований могут быть полезными при расшифровке механизмов воспалительных процессов, связанных с эффектом отдачи тканевого фактора моноцитами при течении воспалительных процессов полости рта. Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедр патологической физиологии и хирургической стоматологии и ЧЛХ Читинской государственной медицинской академии. Апробация диссертации. Основные результаты исследования неоднократно докладывались на научно-практических конференциях кафедры патофизиологии ГОУ ВПО ЧГМА. Апробация работы была

проведена на совместном заседании кафедр патофизиологии, хирургической стоматологии и ЧЛХ, отоларингологии, госпитальной педиатрии, терапии факультета постдипломного образования ЧГМА (Чита, 2010). Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 работ, в т.ч. 1 статья – в издании, определенном ВАК Министерства образования и науки РФ для публикации результатов диссертационных исследований. Структура и объём и работы. Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций; иллюстрирована 21 таблицей, 1 рисунком. Указатель литературы включает 168 работы, из которых 88 отечественных и 80 зарубежных. Положения, выносимые на защиту 1. У здоровых лиц максимальное количество цитокинов регистрируется в смешанной слюне по сравнению с сывороткой крови и десневой жидкостью. При развитии острого гнойного периостита челюстей в смешанной слюне возрастает уровень ИЛ-6, ИЛ-8 и уменьшается содержание ИЛ-1β. Параллельно увеличивается концентрация цитокинов в десневой жидкости, а также закономерно меняется уровень аутоантител классов IgG и sIgA у больных в динамике течения воспалительного процесса.

2. При развитии острого гнойного периостита челюстей во всех исследуемых субстратах возрастает концентрация БТШ-70 и уровень аутоантител к нему различных классов.

3. Развитие острого гнойного периостита челюстей сопровождается повышением концентрации гомоцистеина в сыворотке крови, смешанной слюне и десневой жидкости и появлением аутоантител класса IgG и sIgA к коньюгату S-аденозилгомоцистеина.

4. Ротовая и десневая жидкости доноров и, особенно, пациентов с острым гнойным периоститом челюстей, способны усиливать эффект отдачи тканевого фактора моноцитами. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В работе с обследуемыми людьми соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (1964, 2000 ред.). Исследование проводилось в следующих группах. Контрольную группу составили 40 отобранных методом случайной выборки добровольцев мужского пола в возрасте от 18 до 22 лет, проходящих службу в воинских частях СибВО, у которых при клиническом и лабораторном обследовании не было выявлено соматических и стоматологических заболеваний. Опытная группа – 100 пациентов с острым гнойным периоститом челюстей, находившихся на лечении в отделении челюстно-лицевой

хирургии и стоматологии на базе ФГУ «321 Окружной военный клинический госпиталь» СибВО МО РФ г. Читы в период с 2007 по 2009 годы. Все больные были мужского пола, средний возраст 18 лет. Пациенты опытной группы были госпитализированы в стационар в 1-5 сутки от начала заболевания в состоянии средней степени тяжести. Диагноз острого гнойного периостита челюстей выставлялся на основании жалоб, анамнеза, данных объективного осмотра, рентгенографии челюстей, в соответствии с классификаций МКБ-10, шифр К 10.2. Критериями исключения из группы служили: неодонтогенное происхождение периостита, тяжелое течение заболевания, наличие любой сопутствующей патологии, отягощенный аллергологический анамнез. Хирургическое вмешательство всем пациентам производилось в первые сутки нахождения в стационаре. Под местной анестезией гнойный очаг вскрывали широким разрезом по переходной складке, учитывая локализацию процесса. Санацию гнойной полости осуществляли антисептиком (3% раствор перекиси водорода, фурацилин 1:5000). Гнойную полость дренировали, одновременно удаляли причинный зуб. Наряду с хирургическим лечением проводилась антибактериальная (цефалоспорины последнего поколения), десенсибилизирующая и дезинтоксикационная терапия. Физиопроцедуры: местно кварц № 5, УВЧ № 7. Дренаж удаляли на 3 сутки. Рана заживала вторичным натяжением. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалом исследования служили: сыворотка крови (СК), ротовая (РЖ) и десневая жидкости (ДЖ), клетки крови (моноциты, нейтрофилы), выделенные из цитратной донорской крови. Забор крови проводился из локтевой вены натощак в одно и то же время утром. Параллельно собирались РЖ и ДЖ. У больных забор материала проводился в 1 сутки нахождения в стационаре (до начала лечения) и на 7 сутки. У представителей контрольной группы забор субстратов проводился также одновременно один раз. Забор РЖ производили без стимуляции слюноотделения через 10 минут после полоскания полости рта физиологическим раствором. Зубодесневую жидкость получали из десневой бороздки причинного и контактных зубов шлифованной иглой. Полученные образцы жидкостей замораживали и хранили при температуре -20о С до момента исследования. Сроки хранения субстратов составили не более 3-х месяцев. Иммуноферментный анализ. Определение уровня цитокинов (ИЛ-1β, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10), иммуноглобулинов классов А, М, G, а также секреторного sIgA проводилось наборами реактивов ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск), эндотелина-1-«Biomedica» (Швеция), антител к БТШ-70 «Assay Designs» (США). Уровень аутоантител исследовали оригинальным методом. Лунки полистероловых планшетов сенсибилизировали соответствующим антигеном (цитокины, эндотелин-1, БТШ-70, S-аденозилгомоцистеин) в количестве 20

мкг (объем 200 мкл) на одну лунку. Сыворотку предварительно разводили забуференным физиологическим раствором в соотношении 1:100, РЖ – в соотношении 1 : 1 0 , ДЖ не разводили. После 30 минут инкубации лунки трижды отмывали и вводили в тест-системы для определения IgG или sIgA (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск). Полученный раствор спектрофотометрировали при OD - 450, результат выражали в единицах оптической плотности (ед.оп.пл.). Концентрацию гомоцистеина определяли методом ВЭЖХ с твердофазной экстракцией на полимерном сорбенте (Purosep-200) с УФ детекцией по методу А.А. Дутова и соавт. (2007). Определение эффекта отдачи моноцитами тканевого фактора. Моноциты выделяли из крови доноров на двойном градиенте плотности фиколл-урографин (1,077 г/см3 и 1,086 г/см3). Эффект отдачи тканевого фактора определяли по оригинальному методу. Моноциты по 100 000 клеток в аликвотах в 200 мкл физиологического раствора вносили в лунки интактных полистероловых планшетов. В контрольные лунки вводили по 100 мкл забуференного физиологического раствора, в другие контрольные лунки – продигиозан в концентрации 10 мкг/мл по 100 мкл (1 мкг на лунку). В опытные лунки в зависимости от цели эксперимента вводили исследуемые субстраты (по 100 мкл), иммунные комплексы в концентрации 10 мкг/мл в объеме 100 мкл. Затем инкубировали при 370С в течение 2 часов, клетки ресуспензировали и вносили в цитратную тест-плазму, а затем вводили раствор CaCl2 0,277% и регистрировали время свертывания плазмы или активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ). Результат выражали в секундах. Статистическая обработка полученных данных проведена при помощи пакета программ «Biostat», версия 3.03. Учитывая нормальное распределение данных (распределение вариантов проверялось критерием Шапиро - Уилка), при сравнении групп использовался t – критерий Стьюдента для независимых выборок, различия считали значимыми при р<0,05. Результаты исследования представлены как М±SD, где М – среднее значение, SD –среднее квадратичное отклонение. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 1.1. Уровень цитокинов и аутоантител к ним у доноров и больных острым гнойным периоститом челюстей У здоровых содержание ИЛ-1β оказалось значительно выше в РЖ по сравнению с сывороткой (р<0,001) и ДЖ (р<0,001). Аналогичная закономерность наблюдалась при оценке уровня ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8 и ИЛ-10 (табл.1). Обращает на себя внимание относительно низкое содержание интерлейкинов в ДЖ, что скорее всего обусловлено тем, что в составе транссудата, накапливаемого в зубодесневой бороздке, в большей степени находятся нестимулированные фагоциты. Затем при миграции нейтрофилов в

ротовую полость начинается контакт и фагоцитоз микрофлоры, сопровождаемый генерацией цитокинов. При этом ИЛ-10 как в сыворотке крови, так и в зубодесневой жидкости не определялся. Таблица 1 Содержание цитокинов в сыворотке крови, ротовой и зубодесневой жидкости у здоровых и больных острым гнойным периоститом челюстей (M±SD) Изучаемые Здоровые (n=15) Больные (n=25) показатели СК РЖ ДЖ СК РЖ ДЖ ИЛ-1β, 5,2±1,3 199,8±38,0 31,2±4,1 32,5±10,5 165,5±20,1 75,5±8,5 пг/мл р<0,001* р<0,001* р<0,001* р<0,001* р<0,001* р1=0,004* р2<0,001* ИЛ-4, 5,1±1,1 10,7±4,0 1,5±0,6 9,5±2,0 7,0±2,3 0,8±0,2 * * * * пг/мл р<0,001 р<0,001 р<0,001 р=0,007 р<0,001* р1=0,004* р2<0,001* ИЛ-6, 5,8±1,3 49,6±16,8 4,4±1,6 3,7±1,6 143,3±25,1 16,2±5,6 * * пг/мл р<0,001 р=0,014 р<0,001* р<0,001* р<0,001* р1<0,001* р2<0,001* ИЛ-8, 1,5±0,1 19,7±2,5 14,2±1,2 2,6±0,61 122,8±32,1 83,9±39,2 * * пг/мл р<0,001 р<0,001 р<0,001* р<0,001* р1<0,001* р2<0,001* ИЛ-10, 0 4,4±1,8 0 6,0±2,3 1,7±0,5 0,8±0,3 * пг/мл р1<0,001 Примечание: * - достоверность различий при сравнении показателей: р – уровень значимости различий по отношению к показателям сыворотки здоровых; р1 – уровень значимости различий между показателями смешанной слюны здоровых и больных; р2 – уровень значимости различий между показателями зубодесневой жидкости здоровых и больных. При развитии острого гнойного периостита челюстей подавляющее большинство цитокинов значительно возрастало во всех исследуемых субстратах. Однако концентрация ИЛ-4 в ротовой и десневой жидкостях уменьшалась по сравнению с содержанием у здоровых лиц, а уровень ИЛ-10 в ротовой жидкости также уменьшается. Вместе с тем, в ротовой жидкости при остром гнойном периостите челюстей резко возрастало содержание ИЛ-6 и ИЛ-8 (р<0,001), а концентрация ИЛ-1β уменьшалась. Обращает на себя внимание достаточно высокий прирост провоспалительных цитокинов в десневой жидкости. Особенно это касается ИЛ-1β, ИЛ-6 и ИЛ-8. Хорошо известно, что к некоторым цитокинам, особенно в условиях их гиперпродукции, образуются аутоантитела, способные участвовать в элиминации, и, следовательно, регуляции уровня цитокинов (Н.Н. Цыбиков,

2006). Поэтому представлялось интересным оценить уровень аутоантител класса IgG в сыворотке (табл.2) и sIgA в ротовой и десневой жидкостях к некоторым цитокинам. Таблица 2 Содержание аутоантител класса IgG в сыворотке крови к цитокинам у больных острым гнойным периоститом челюстей (M±SD) Изучаемые показатели Здоровые (n=15) Больные (n=17) аАт к ИЛ-6 (ед.оп.пл.)

0,23±0,04 0,20±0,06 аАт к ИЛ-8 (ед.оп.пл.)

0,22±0,04 0,20±0,07 аАт к ИЛ-10 (ед.оп.пл.)

0,15±0,02 0,18±0,05 р=0,04* Примечание: * - значимые различия при сравнении показателей: р – значения различий между показателями сыворотки крови здоровых и больных. Оказалось, что содержание аутоантител класса IgG в сыворотке крови к ИЛ-6 и ИЛ-8 у здоровых и больных острым гнойным периоститом челюстей не изменяется. Однако уровень аутоантител к ИЛ-10 у больных в сыворотке крови возрастал (р=0,04). Выявленный факт, вероятно, объясняется тем, что в крови доноров этот цитокин не определялся, а в сыворотке больных он выявлялся. По-видимому, этой концентрации ИЛ-10 достаточно для инициации аутоиммунного ответа. Уровень аутоантител класса sIgA в РЖ и ДЖ выглядел следующим образом (табл.3). Концентрация аутоантител к ИЛ-8 возрастала в ДЖ больных в подавляющем большинстве случаев . Таблица 3 Содержание аутоантител класса sIgA к цитокинам у больных острым гнойным периоститом челюстей в ротовой и десневой жидкости (M±SD) Изучаемые Здоровые (n=15) Больные (n=25) показатели РЖ ДЖ РЖ ДЖ аАт к ИЛ-6, 0,11±0,02 0,13±0,07 0,12±0,07 0,15±0,07 (ед.оп.пл.) аАт к ИЛ-8, 0,11±0,02 0,12±0,07 0,12±0,05 0,16±0,04 (ед.оп.пл.) р=0,06* аАт к ИЛ-10, 0,13±0,05 0,14±0,04 0,10±0,01 0,11±0,02 * (ед.оп.пл.) р=0,03 р=0,01* Примечание: * - значимые различия при сравнении показателей: р – значения различий между показателями РЖ и ДЖ здоровых и больных. В ротовой и десневой жидкостях мы зарегистрировали сниженное содержание аутоантител класса sIgA к ИЛ-10. Вероятно, выявленный сдвиг отражает «потребление» аутоантител из-за высокой концентрации этого цитокина в полости рта.

1.2. Изменения уровня цитокинов и аутоантител к ним до и после терапии острого гнойного периостита челюстей Содержание ИЛ-1β после лечения значительно снижалось в сыворотке крови (р=0,049). Однако, наряду этим, в сыворотке крови после лечения возрастал уровень ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10. Вместе с тем, содержание ИЛ-4 ощутимо снижалось (р<0,001). В РЖ выявлены следующие закономерности. Оказалось, что лечение острого гнойного периостита челюстей сопровождалось увеличением ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8 и ИЛ-10, снижением ИЛ-4. Однако в десневой жидкости концентрация ИЛ-1 β, ИЛ-4 снижалась. Вместе с тем возрастал уровень ИЛ8, ИЛ-6, ИЛ-10 (р<0,001) (табл.4). Таблица 4 Динамика цитокинов у больных острым гнойным периоститом челюстей до и после лечения (M±SD) Показа До лечения (n=25) После лечения (n=25) тели СК РЖ ДЖ СК РЖ ДЖ ИЛ-1β, 32,5±10,5 165,5±20,1 98,2±9,7 3,6±1,2 195,7±31,1 75,5±8,5 пг/мл р=0,049 р<0,001* р<0,001* ИЛ-4, 9,5±2,0 7,0±2,3 0,8±0,2 7,8±2,2 6,23±2,4 0,04±0,01 пг/мл р=0,029 р<0,001* ИЛ-6, 3,7±1,6 143,3±25,1 16,2±5,6 35,0±11,4 172,2±32,1 22,1±7,5 пг/мл р<0,001* р=0,006* р=0,014* ИЛ-8, 2,6±0,61 122,8±32,1 83,9±39,2 3,2±0,5 266,4±37,8 200,8±41,1 пг/мл р=0,049* р<0,001* р<0,001* ИЛ-10, 6,0±2,3 1,7±0,5 0,8±0,3 7,3±2,7 2,9±0,9 18,9±5,7 пг/мл р<0,001* р<0,001* р<0,001* Примечание: * - достоверность различий при сравнении показателей: р – уровень значимости различий между группами до и после лечения. Изменения содержания аутоантител класса IgG к исследуемым цитокинам в сыворотке крови, ротовой и десневой жидкостях до и после лечения острого гнойного периостита челюстей оказалось недостоверным (р>0,05). Но при этом содержание аутоантител класса sIgA после лечения претерпевали изменения. Так, уровень аАт этого класса к ИЛ-6 в ротовой и десневой жидкостях уменьшался. Вместе с тем, в зубодесневой жидкости и смешанной слюне возрастал уровень аутоантител к ИЛ-8 и ИЛ-10 (табл.5). Последние сдвиги, вероятно, отражают иммуностимулирующий эффект цитокинов, генерирующихся иммунокомпетентными клетками в динамике лечения.

Таблица 5 Динамика уровня аутоантител класса sIgA к цитокинам у больных острым гнойным периоститом до и после лечения (M±SD) Изучаемые До лечения (n=25) После лечения (n=25) показатели РЖ ДЖ РЖ ДЖ аАт к ИЛ-6, 0,12±0,07 0,15±0,07 0,10±0,06 0,11±0,007 (ед.оп.пл.) аАт к ИЛ-8, 0,12±0,05 0,16±0,04 0,16±0,06 0,21±0,04 (ед.оп.пл.) р=0,01* р<0,001* аАт к ИЛ-10, 0,10±0,01 0,11±0,02 0,15±0,02 0,18±0,02 (ед.оп.пл.) р=0,03* р=0,01* Примечание: * - достоверность различий при сравнении показателей: р – уровень значимости различий между группами до и после лечения.

1.3. Содержание иммуноглобулинов при остром гнойном периостите челюстей в динамике терапии В подавляющем большинстве случаев во всех исследуемых субстратах уровень Ig не менялся. Следует лишь указать, что концентрация sIgА заметно повышалась после лечения как в РЖ, так и в ДЖ. Последнее, несомненно указывает на возросшую местную резистентность, реализуемую секреторным иммуноглобулином (табл.6). Таблица 6 Динамика уровня иммуноглобулинов у больных острым гнойным периоститом челюстей до и после лечения (M±SD) Показат ели sIgA, г/л

До лечения (n=25) После лечения (n=25) СК РЖ ДЖ СК РЖ ДЖ 0,17±0,05 17,6±0,90 0,87±0,01 0,16±0,04 19,98±1,18 0,38±0,04 р<0,001* р<0,001* IgA, г/л 2,18±0,66 0,90±0,26 2,55±0,39 1,11±0,19 IgM, г/л 2,49±0,56 0,077±0,01 0,006±0,03 2,34±0,57 0,061±0,02 0,007±0,02 IgG,г/л 18,72±1,16 0,83±0,19 0,53±0,22 21,86±1,51 0,82±0,22 0,52±0,23 Примечание: * – достоверность различий при сравнении показателей, р – уровень различий значимости между группами до и после лечения.

1.4. Содержание эндотелина и аутоантител к нему при остром гнойном периостите У доноров максимальное содержание Эн-1 регистрировалось в сыворотке крови, на порядок ниже – в РЖ, и минимальный уровень этого пептида зарегистрирован в ДЖ (табл. 7). Вместе с тем, при развитии одонтогенной инфекции содержание Эн-1 в сыворотке крови снижалось (р<0,001), в РЖ – возрастало (р<0,001) и практически не изменялось в жидкости зубодесневой бороздки. Аутоантитела класса IgG к этому цитокину у здоровых в РЖ и ДЖ

значительно ниже, чем в сыворотке крови (р<0,001). Аналогичная закономерность сохранялась и при развитии острого гнойного периостита челюстей. Таблица 7 Содержание эндотелина-1 и аутоантител класса IgG к нему у больных острым гнойным периоститом челюстей (M±SD) Показатели Здоровые (n=15) Больные (n=25) СК РЖ ДЖ СК РЖ ДЖ Эндотелин- 4,05±1,2 0,39±0,15 0,24±0,07 1,22±0,52 0,77±0,26 0,19±0,03 1, р<0,001* р<0,001* р<0,001* р<0,001* р<0,001* (фмоль/мл) р1<0,001* р2>0,05 аАт к 0,20±0,01 0,08±0,02 0,16±0,03 0,16±0,06 0,11±0,02 0,12±0,03 эндотелину р<0,001* р<0,001* р=0,015* р<0,001* р<0,001* -1, р1<0,001* р2<0,001* (ед.оп.пл.) Примечание: * - значимые различия: р – значение различий по отношению к показателям сыворотки здоровых; р1 – значение различий между показателями РЖ здоровых и больных; р2 – значение различий между показателями ДЖ здоровых и больных. Таким образом, содержание Эн-1 было максимальным в сыворотке по сравнению с РЖ и ДЖ, а при развитии воспалительного процесса снижался в крови, но возрастал в смешанной слюне. Уровень аутоантител к Эн-1 в РЖ и ДЖ у здоровых был ниже, чем в сыворотке крови, а при развитии одонтогенной инфекции уровень аутоантител снижался в сыворотке крови и ДЖ. Нами показано, что после оперативного лечения и последующих лечебных мероприятий уровень Эн-1 в ДЖ возрастал (р=0,05), что, вероятно, является причиной и свидетельством ликвидации воспалительной гиперемии. Следует сказать, что при этом уровень аутоантител к Эн-1 во всех исследуемых субстратах не изменялся.

1.5. Содержание белка теплового шока-70, антител и аутоантител к нему классов IgG и sIgA при остром гнойном периостите челюстей Антитела закономерно регистрировались в сыворотке крови у здоровых лиц. Причем максимальный уровень Ат к БТШ-70 определялся в РЖ, в несколько меньшей степени – в ДЖ и в минимальном количестве – в сыворотке крови. Высокий уровень антител к БТШ-70 в РЖ, на наш взгляд, вероятно, отражает высокую «стрессированность» как фагоцитов, так и микробов полости рта. Вместе с тем, у больных происходит значительное увеличение уровня антител к белкам теплового шока как в сыворотке крови, так и особенно резко в РЖ и ДЖ (рис.1). Несомненно, эта закономерность указывает на увеличение количества пиогенных микробов и усиление

фагоцитарных реакций, что проявляется избыточной продукцией стрессбелков.

*

*

* **

* * *

Примечание: *- значимые различия по сравнению со здоровыми людьми; ** - значимые различия по сравнению с периодом до лечения. Рис. 1. Содержание антител к БТШ– 70 при острых периоститах челюстей до и после лечения Через 7 дней после лечения острого гнойного периостита челюстей уровень антител к БТШ становился еще выше во всех исследуемых субстратах, несмотря на исчезновение симптомов заболевания. Вероятно, клетки, принимающие участие в эфферентной фазе воспаления и интенсивно регенерирующие, продолжают генерировать БТШ.

* * **

*

*

Примечание: *- значимые различия по сравнению со здоровыми людьми; ** - значимые различия по сравнению с периодом до лечения. Рис. 2. Содержание аутоантител к БТШ – 70 при остром гнойном периостите челюстей до и после лечения

В отдельных исследованиях определяли уровень аутоантител класса sIgA, входящих в общий пул антител, направленных против БТШ-70. Максимальный интерес представляют аАт класса sIgA, так как они образуются местно в слизистой и подслизистой ротовой полости (рис.2). Оказалось, что у здоровых лиц аАт к БТШ-70 обнаруживались как в сыворотке крови, так и в ротовой и десневой жидкостях. Максимальный уровень sIgA зарегистрирован в РЖ. При развитии воспалительного процесса концентрация аутоантител возрастала и, несмотря на проводимые лечебные мероприятия, не снижалась до исходных цифр. Последнее скорее всего свидетельствует о продолжающемся процессе местной иммунизации в пролиферативную фазу воспаления. Следует указать, что среди всего пула антител к БТШ-70 аутоантитела класса sIgA составили от 60 до 70%. При этом в сыворотке здоровых людей, а также больных после лечения БТШ-70 не обнаруживался. Небольшое содержание стресс-белка выявлено в РЖ и ДЖ у здоровых лиц. Однако при остром гнойном периостите челюстей БТШ-70 регистрировался во всех исследуемых субстратах и особенно резко возрастал в РЖ и ДЖ. После лечения уровень белка снижался, однако не достигал исходных значений (табл.8). Таблица 8 Содержание белков теплового шока-70 (пкг/мл) при остром гнойном периостите челюстей до и после лечения (M±SD) Группы обследованных Здоровые (n=15) Больные до лечения (n=25) Больные после лечения (n=25)

Исследуемые субстраты СК РЖ ДЖ СК РЖ ДЖ СК РЖ

Показатели 2,1±0,3 1,8±0,1 0,8±0,4 61,1±10,4 53,2±9,2 34,2±7,2

Значения различий

р<0,001* р<0,001*

р<0,001* р1=0,03* ДЖ 27,1±8,4 р=0,02* р1=0,04* Примечание: * - достоверность различий при сравнении показателей: р – уровень значимости различий по отношению к показателям здоровых; р1 – уровень значимости различий между показателями групп до и после лечения. Таким образом, при развитии острого гнойного периостита челюстей закономерно возрастает уровень БТШ-70 и антител к нему, особенно класса sIgA, что отражает явное участие стресс-белков в воспалительной реакции.

1.6. Содержание гомоцистеина и аутоантител к S-аденозилгомоцистеину при остром гнойном периостите челюстей В сыворотке крови здоровых лиц уровень гомоцистеина не отличался от принятых стандартов, характерных для лиц 18-25 лет. Вместе с тем, в РЖ содержание гомоцистеина составило 0,3±0,05 мкмоль/л, а в ДЖ он не определялся. При развитии острого гнойного периостита челюстей концентрация гомоцистеина нарастала, а после лечения содержание его уменьшалось как в РЖ, так и жидкости зубодесневой бороздки. Оказалось, что аутоантитела класса sIgA постоянно обнаруживались в РЖ и ДЖ как у доноров, так и у больных. Причем следует отметить, что их содержание всегда выше в РЖ, в несколько меньшей – в ДЖ. Вероятно, метаболит метионина - S-аденозилгомоцистеин, накапливаясь в РЖ и ДЖ, оказывает выраженный местный иммуностимулирующий эффект, что проявляется гиперпродукцией аутоантител класса sIgA. У больных как до, так и после лечения содержание аутоантител превышало их уровень у доноров (рис. 3).

* * * *

* **

Примечание: * - значимые различия по сравнению со здоровыми людьми; ** - значимые различия по сравнению с периодом до лечения. Рис.3. Содержание аутоантител к S-аденозилгомоцистеину при острых периоститах челюстей до и после лечения Таким образом, при развитии острого гнойного периостита челюстей увеличивается содержание гомоцистеина и аутоантител класса sIgA к его

метаболиту S-аденозилгомоцистеину в ротовой и десневой жидкостях, что отражает интенсивность воспалительного процесса.

1.7. Секреция тканевого фактора из моноцитов при остром гнойном периостите челюстей Инкубация моноцитов доноров с ротовой жидкостью сопровождается сокращением времени свертывания плазмы практически на 59 секунд, что не может не свидетельствовать о стимуляции моноцитов компонентами смешанной слюны. Несколько меньший эффект оказала десневая жидкость здоровых людей. Вместе с тем, при развитии острого гнойного периостита челюстей и ротовая, и десневая жидкости оказывали выраженный стимулирующий эффект даже по сравнению с моноцитами, активированными продигиозаном. Инкубация гомоцистеина и S- аденозилгомоцистеина с моноцитами сопровождалось выраженным доза-эффектом. С увеличением количества гомоцистеина, вносимого в краткосрочную культуру моноцитов, ускорялось время свертывания тест-плазмы. Особенно отчетливо этот эффект начинает проявляться при концентрации гомоцистеина 10 мкг/мл и нарастает до предельной концентрации в наших исследованиях – 50 мкг/мл. Поскольку S-аденозилгомоцистеин обладает антигенными свойствами, поэтому не исключено, что при одонтогенной инфекции формируются in situ иммунные комплексы, способные модифицировать течение ферментативных реакций, в том числе в системе свертывания крови. Оказалось, что полученный иммунный комплекс способен дозазависимо сокращать время свертывания плазмы и при концентрации 20,0 и 50,0 мкг/мл сокращать АЧТВ. Последняя реакция свидетельствует о генерации тканевого фактора моноцитами. И действительно, если инкубировать иммунный комплекс с культурой моноцитов, то супернатант доза-зависимо сокращает время рекальцификации плазмы. Таким образом, увеличение местного коагуляционного потенциала полости рта при развитии острого гнойного периостита челюстей может быть связано с секрецией тканевого фактора моноцитами, активированными иммунным комплексом S-аденозилгомоцистеин+sIgA.

1.

2.

3.

4.

5.

6.

ВЫВОДЫ У здоровых лиц максимальное содержание цитокинов регистрируется в смешанной слюне по сравнению с сывороткой крови и десневой жидкостью. При развитии острого гнойного периостита челюстей концентрация провоспалительных цитокинов увеличивается в десневой жидкости, а в смешанной слюне возрастает уровень ИЛ-6, ИЛ-8 и падает содержание ИЛ-1β. После лечения в ротовой жидкости увеличивается концентрация ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8. При остром гнойном периостите челюстей в сыворотке крови увеличивается содержание аутоантител класса IgG к ИЛ-10, в десневой жидкости возрастает концентрация аутоантител класса sIgA к ИЛ-8, а в ротовой и десневой жидкостях – уровень аутоантител этого класса к ИЛ-10 снижается, а после лечения – увеличивается. Эндотелин-1 в низких концентрациях регистрируется в ротовой и десневой жидкостях здоровых. При воспалении его содержание в сыворотке и десневой жидкости уменьшается, а в смешанной слюне – возрастает. После лечения уровень эндотелина-1 увеличивается в десневой жидкости. Во всех исследуемых субстратах регистрируются аутоантитела к эндотелину-1. БТШ-70 не выявляется в сыворотке крови здоровых, и в низких концентрациях регистрируется в ротовой и десневой жидкостях. При остром гнойном периостите челюстей уровень БТШ-70 резко возрастает в жидкостях полости рта, а после лечения – снижается. Концентрация антител к БТШ-70 возрастает во всех исследуемых субстратах при развитии острого гнойного периостита челюстей, а после лечения их концентрация увеличивается в еще большей степени. Аналогичную закономерность претерпевают аутоантитела класса sIgA к БТШ-70 в смешанной слюне и десневой жидкости. У здоровых гомоцистеин в минимальной концентрации регистрируется в смешанной слюне и не выявлялся в десневой жидкости. При развитии воспаления уровень гомоцистеина увеличивается в ротовой и десневой жидкостях, а после лечения – снижается. Аутоантитела sIgA к Sаденозилгомоцистеину возрастают при развитии воспаления и уменьшаются после его завершения. Ротовая и десневая жидкости здоровых, и особенно пациентов с острым гнойным периоститом челюстей вызывают эффект отдачи тканевого фактора интактными моноцитами, который является дозозависимым при инкубации моноцитов с гомоцистеином, Sаденозилгомоцистеином и иммунным комплексом Sаденозилгомоцистеин+ sIgA.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Цитокины и аутоантитела к ним при одонтогенных абсцессах челюстнолицевой области / М.Ю. Игнатов, Н.Н. Цыбиков, Е.Т. Доманова, Н.В. Исакова, Е.В.Пруткина // Кубанский научный медицинский вестник. – 2010. - №1. – С. 39-41.

2. Активность нейтрофилов, инкубированных с ротовой и десневой жидкостями при воспалительных заболеваниях челюстно-лицевой области / М.Ю. Игнатов, Н.Н. Цыбиков, Е.Т. Доманова, Е.Ю. Масло // Забайкальский медицинский вестник. – 2010. - №1. – С.14-17.

3. Содержание белка теплового шока-70 и аутоантител к нему при лечении одонтогенных абсцессов/ М.Ю. Игнатов, Н.Н. Цыбиков, Н.В. Исакова, Е.В.Пруткина // Амбулаторная хирургия. – 2010. - №1. – С. 49-51.

4. Уровень цитокинов, эндотелина-1 и аутоантител к ним в сыворотке крови, ротовой и десневой жидкостях у здоровых людей (военнослужащих) / М.Ю. Игнатов, Е.Т. Доманова, Е.Ю. Масло // Забайкальский медицинский вестник.–2010.-№1. – С. 12-14.

5.

5. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и уровень эндотелина-1 у больных катаральным гингивитом и хроническим пародонтитом / Н.Н. Цыбиков, Е.Т. Доманова, М.Ю. Игнатов, Е.Ю. Масло // Забайкальский медицинский вестник. – 2010. - №2. – С.7-9. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ Ат

– антитела

аАт

– аутоантитела

АЧТВ

– активированное частичное тромбопластиновое время

БТШ

– белки теплового шока

ДЖ

– зубодесневая жидкость

ИЛ

– интерлейкины

МКБ

– международная классификация болезней

РЖ

– ротовая жидкость

СибВО

– Сибирский военный округ

ЧЛХ

– челюстно-лицевая хирургия

Эн-1

– эндотелин-1

Ig

– иммуноглобулины

IL

– интерлейкин

sIg

– секреторный иммуноглобулин