HPLC CƠ SỞ LÝ THUYẾT & ỨNG DỤNG

MỤC LỤC PHẦN I : CƠ SỞ LÝ THUYẾT ............................................................................................. 3 I.1. Khái niệm ............................................................................................................... 3 I.2. Phân loại sắc ký : .................................................................................................... 3 I.3. Đặc điểm và ứng dụng của mỗi loại: ....................................................................... 4 I.4. Các quá trình tách trong cột sắc ký ......................................................................... 5 X(MP) + SP = X(SP) + MP ............................................................... 6 I.5. Các đại lượng đặc trưng trong HPLC ...................................................................... 9 I.6. Cơ chế tách trong phương pháp HPLC: ................................................................ 14 PHẦN II: HỆ THỐNG HPLC .............................................................................................. 15 II.1. Bình chứa dung môi giải ly cột ............................................................................. 15 II.2. Bộ khử khí (Degasse ) .......................................................................................... 17 II.3. Bơm cao áp : ........................................................................................................ 17 II.4. Bộ phận tiêm mẫu ( injection)............................................................................... 18 II.5. Cột sắc ký :........................................................................................................... 19 II.6. Detector ( đầu dò) ................................................................................................. 20 II.6.1. Đầu dò hấp thu tia tử ngoại (UV (Ultraviolet detector). ................................. 22 II.6.2. Đầu dò mạng diod quang (Photodiode array spectrophotometer). .................. 22 II.6.3. Đầu dò phát huỳnh quang (Fluorescence detector). ....................................... 22 II.6.4. Đầu dò chỉ số khúc xạ (Refractive index detector)......................................... 23 II.6.5. Đầu dò đo độ dẫn điện ( Conductivity detector) ............................................ 23 II.6.6. Đầu dò ampe kế (Amperometric detector). .................................................... 23 II.6.7. Đầu dò LC – IR ............................................................................................ 23 II.6.8. Đầu dò LC – MS ........................................................................................... 23 II.7. Bộ phận ghi tín hiệu. ............................................................................................ 24 II.8. In kết quả: ............................................................................................................ 24 Phần III : CHỌN ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ............................................................................... 25 III.1. Pha tĩnh ............................................................................................................ 25 III.1.1. Các yêu cầu của pha tĩnh sử dụng trong HPLC.............................................. 25 III.1.2. Các nguyên liệu sử dụng làm pha tĩnh. .......................................................... 25 III.1.3. Các loại pha tĩnh trong HPLC ....................................................................... 25 III.2. Pha động........................................................................................................... 29 III.3.1. Vai trò và ảnh hưởng của pha động: ............................................................. 29 III.3.2. Các yêu cầu của pha động sử dụng trong HPLC ............................................ 30 III.3.3. Các loại pha động: ........................................................................................ 31 III.3. Một số yếu tố khác ảnh hưởng đến quá trình sắc kí ........................................... 32 III.3.1. Ảnh hưởng của cấu trúc mẫu phân tích ......................................................... 32 III.3.2. Ảnh hưởng của thể tích nạp mẫu ................................................................... 32 III.3.3. Ảnh hưởng của nhiệt độ ................................................................................ 33 PHẦN IV : TIẾN HÀNH SẮC KÍ ....................................................................................... 34 IV.1. Các cách tiến hành sắc kí .................................................................................. 34 IV.1.1. Phương pháp tiền lưu .................................................................................... 34 IV.1.2. Phương pháp rửa giải .................................................................................... 34 IV.1.3. Phương pháp rửa đẩy .................................................................................... 35 IV.2. Chuẩn bị máy ................................................................................................... 35 IV.3. Chuẩn bị pha động ............................................................................................ 36 IV.4. Chuẩn bị mẫu ................................................................................................... 36 PHẦN V : CÁC LĨNH VỰC ỨNG DỤNG .......................................................................... 41 V.1. Phân tích hàm lượng kháng sinh nhóm tetracyclin trong thủy sản bằng sắc kí lỏng hiệu năng cao. .................................................................................................................. 41 V.1.1. Phạm vi áp dụng ........................................................................................... 41 V.1.2. Phương pháp tham chiếu ............................................................................... 41 1

Turn static files into dynamic content formats.

Create a flipbook