Medical Market - Medicină de laborator 2017 by Fin Watch

Medicină de laborator

Conf. Dr. Ioana Brudașcă

Preşedintele AMLR

Ecaterina Tătaru Biolog medical specialist Doctor în Biologie

Dr. Georgeta Hanganu

Medic Director Centrul de Transfuzie Prahova

Asist. Univ. Dr. Antoanela Curici Medic Şef Laborator Central SYNEVO România

Publicaţie adresată cadrelor medicale

Revista profesioniştilor din Sănătate

2017

Sumar

Editor ISSN 2286 - 3443 Calea Rahovei, nr. 266-268, Sector 5, Bucureşti, Electromagnetica Business Park, Corp 60, et. 1, cam. 19 Tel: 021.321.61.23 e-mail: redactie@finwatch.ro

Medicină de laborator

„Ca în orice specialitate medicală, este esențială o pregătire temeinică a medicului de laborator” Interviu realizat cu Conf. Dr. Ioana Brudaşcă

Câteva elemente de bază în selectarea testelor rapide de laborator în practica medicală pentru orientarea diagnosticului etiologic

Analize de laborator pentru detecţia HPV – impact, perspective şi corelaţii cu alte teste de screening

Anticorpii imuni de grup sanguin OAB

Investigații neinvazive în oncologie celulele tumorale circulante (CTC)

Identificarea mutațiilor țintă în cancerul colorectal metastatic

Diagnosticul de laborator în bolile autoimune – abordare inovatoare

Diagnosticul serologic în infecţiile microbiene

www.revistamedicalmarket.ro

Interviu

„Ca în orice specialitate medicală, este esențială o pregătire temeinică a medicului de laborator” Interviu realizat cu Conf. Dr. Ioana Brudaşcă Timişoara găzduieşte în perioada 10-13 mai a doua Conferinţă Naţională a Asociaţiei de Medicină de Laborator din România cu participare internaţională. Aflăm detalii despre acest prestigios eveniment, cât şi despre proiectele AMLR, de la doamna Conf. Dr. Ioana Brudașcă, Preşedintele AMLR. Stimată doamnă Conf. Dr. Ioana Brudașcă, vă rugăm să ne dezvăluiţi care sunt noutăţile tematice ale acestei conferinţe a AMLR. Elementul de noutate în fiecare an este legat de conținutul lucrărilor care se prezintă și de speakerii invitați. În acest an, tematica conferinței cuprinde o serie de aspecte mai generale, așa cum sunt valoarea clinică a medicinei de laborator, formarea profesională continuă, managementul calității în laboratorul clinic, tehnologie, echipamente și evaluarea metodelor de laborator, precum și prezentări pe specialități, din domeniul biochimiei, biologiei moleculare, microbiologiei, hematologiei.

AMLR a reunit toţi specialiştii care activează în laboratoarele medicale: medici, biologi, chimişti, biochimişti. Care sunt personalităţile marcante ce vor participa la acest eveniment, şi care este implicarea societăţilor partenere. Speakerii invitați din străinătate anul acesta sunt Prof. Sedef Yenice (Turcia)-reprezentant al IFCC, Prof. Elizabeta Topic (Croația), Prof. Gabor Kovacs (Ungaria) și Prof. William Au (China). Ne bucurăm de asemenea și de participarea a numeroși colegi de la majoritatea universităților de medicină din țară (Timișoara, Cluj Napoca, Tg. Mureș, București, Iași, Craiova, Oradea, Sibiu, Constanța, Galați). Unii dintre speakerii prezenți la conferință sunt distinși microbiologi și hematologi,

membri marcanți ai societăților naționale respective, partenere în organizarea evenimentului nostru.

Care sunt progresele medicale ce s-au înregistrat în ultima perioadă în specialitatea medicina de laborator? Există posibilitatea efectuării testelor specifice la nivelul ultimelor noutăţi de pe plan mondial şi în România? Sunt şi teste ce nu se pot face în ţara noastră? Aș spune că progresele sunt în primul rând de ordin tehnic, vizând miniaturizarea, posibilitatea detectării simultane a mai multor markeri (paneluri de markeri),

Medicină de laborator

dezvoltarea dispozitivelor de tip Pointof Care. Din punct de vedere medical, se înregistrează progrese impresionante în special în biologie moleculară și genetică. Unele din aceste teste sunt utilizate pentru diagnostic, inclusiv pentru diagnosticul prenatal al unor afecțiuni, sau pentru depistarea predispoziției la anumite boli. De asemenea, există teste care stabilesc în ce mod va răspunde pacientul la un anumit tratament, ceea ce permite instituirea unei strategii terapeutice țintite și individualizate, și deci mai eficiente (în oncologie, de exemplu). O altă direcție importantă de dezvoltare este abordarea epigenetică, care vizează modul în care informația genetică este exprimată în fenotip, aceasta datorându-se interacțiunii genomului cu diverși factori de mediu. Multe laboratoare din România și-au diversificat foarte mult gama de analize efectuate, incluzând teste destul de sofisticate. Chiar dacă din punct de vedere tehnic majoritatea analizelor sunt realizabile, totuși, din punct de vedere economic unele teste implică costuri prea mari/ testare și nu justifică achiționarea reactivilor. Prin urmare, pentru testele speciale, solicitate mai rar, pentru care nu este rentabil să se achiziționeze reactivi foarte costisitori, laboratoarele trimit de obicei probele la laboratoare din străinătate.

Se cunoaşte că medicul de laborator este veriga importantă în luarea deciziilor medicale, mai ales în situaţii de urgenţă, în care testele sunt contra cronometru. Cât de importante sunt pregătirea şi profesionalismul acestuia? Cât de gravă poate fi o eroare a medicului de laborator în realizarea actului medical? Ca în orice specialitate medicală (și ca în orice profesie, de altfel) este esențială o pregătire temeinică a medicului de labora-

www.revistamedicalmarket.ro

Interviu tor. Analizele de laborator (conform unor date din literatura de specialitate) contribuie cu până la 70% la luarea deciziilor medicale. Prin urmare, evident că și erorile pot avea un impact foarte mare asupra actului medical. Trebuie obligatoriu adăugat însă că ciclul total de testare cuprinde mai multe etape: etapa preanalitică (indicarea testelor, identificarea corectă și pregătirea pacientului, recoltarea probelor, conservarea și transportul lor), etapa analitică (efectuarea propriu-zisă a testelor) și etapa postanalitică (transmiterea, luarea la cunoștință și interpretarea rezultatelor de către medicul clinician). Din totalul erorilor, doar aproximativ 15-20% aparțin fazei analitice, restul aparținând celorlalte etape, care conțin foarte multe variabile aflate în afara posibilităților de control ale laboratorului.

Una dintre temele conferinţei se referă la managementul calității în laboratorul clinic. Sunt atinse standardele de calitate pentru munca de laborator? Se aliniază ţara noastră la standardele internaţionale în contextul situaţiei actuale a sistemului sanitar?

rosolilor, al personalului medical și vizitatorilor din spital. În legătură cu prevenirea infecțiilor nosocomiale, unitățile sanitare au protocoale de monitorizare și raportare a acestora, precum și proceduri stricte privind circuitele, măsurile de igienizare, sterilizarea uniformelor, lenjeriei, echipamentului și instrumentarului. Măsuri aparent foarte banale cum ar fi spălarea și dezinfecția riguroasă a mâinilor sunt foarte importante în limitarea infecțiilor nosocomiale. Utilizarea judicioasă, cât mai țintită a antibioticelor, este de asemenea important, pentru a limita selectarea tulpinilor rezistente. Cu toate acestea, infecțiile nosocomiale nu pot fi eliminate în totalitate, dezideratul fiind reducerea cât mai drastică a apariției acestora, prin respectarea strictă a măsurilor menționate anterior.

Infecțiile nosocomiale au fost un subiect amplu dezbătut anul trecut, acestea reprezentând factorul ce a contribuit la agravarea stării pacienţilor şi chiar la decesul acestora. Care sunt cauzele apariţiei şi cum pot fi stopate aceste infecţii?

Într-un interviu anterior aţi declarat că, citez: „sprijinirea colegilor tineri a fost şi rămâne una din priorităţile noastre”. Care sunt metodele de susţinere a acestora în acest an? Foarte multe din lucrările prezentate la conferințele și congresele AMLR sunt lucrări elaborate de tineri colegi (doctoranzi, cercetători), ceea ce reprezintă o ocazie pentru ei de a-și face cunoscute rezultatele cercetărilor. Aceștia sunt stimulați prin două premii, unul este acordat pentru cel mai bun poster (premiul Marcela Zamfirescu Gheorghiu), și altul pentru realizări deosebite în domeniul medicinei de laborator (premiul Eugen Mody). Aceste premii oferă colegilor premiați ocazia de a participa la o manifestare științifică în străinătate sau de a-și achiziționa literatură de specialitate.

Infecțiile nosocomiale sunt infecții apărute în spital. Sursa infecției poate fi mediul exterior, un alt bolnav infectat, personalul medical. În unele cazuri germenii responsabili de infecție sunt proprii germeni ai pacientului, care în mod normal nu sunt patogeni, dar care devin patogeni prin compromiterea statusului imun al bolnavului. Infecția se poate transmite la pacientul susceptibil prin variate căi: prin intermediul lenjeriei de pat, a echipamentului/instrumentarului, al ae-

În încheiere, vă rugăm să ne informaţi despre proiectele şi obiectivele AMRL pentru 2017-2018? Una din prioritățile noastre este perfecționarea pregătirii profesionale. Ne propunem să continuăm organizarea de manifestări științifice ale Asociației (conferințe, congrese, workshopuri, cursuri în cadrul programului de Educație Medicală Continuă) și să venim în întâmpinarea altor societăți profesionale medicale din țară cu care avem puncte

Standardul internațional pentru laboratoarele medicale este de standardul ISO 15189, iar laboratoarele din țara noastră se conformează acestui standard, care ghidează elaborarea sistemului de management al calității. Totodată, acreditarea conform acestui standard confirmă competența laboratoarelor medicale față de beneficiari (pacienți, spitale, coordonatori de studii clinice).

comune de interes. De exemplu, anul trecut în luna decembrie s-a desfășurat la Tg. Mureș un curs de Biologie Moleculară, organizat de către IFCC, AMLR și UMF Tg. Mureș. La acest curs au participat cursanți din toată țara, care au fost instruiți în tehnicile de bază în biologie moleculară având la dispoziție o dotare tehnică de excepție. Încurajăm de asemenea cercetarea științifică și publicarea de lucrări; societatea noastră are o publicație proprie, Revista Română de Medicină de Laborator, indexată în ISI Web of Knowledge -Web of Science - Science Citation Index Expanded (Thomson Reuters Scientific), precum și în bazele de date SCOPUS și EMCARE. De altfel, în fiecare an rezumatele conferinței anuale sunt publicate într-un volum separat al revistei. O atenție deosebită se acordă încurajării colegilor tineri, care sunt stimulați prin premii acordate pentru cel mai bun poster și pentru realizări deosebite cu ocazia conferințelor anuale. De asemenea, ca asociație profesională națională ne-am dori să reușim să avem un impact mai mare la nivelul forurilor de decizie din sistemul sanitar (Ministerul Sănătății, Colegiul Medicilor din România) în ceea ce privește elaborarea curriculei de pregătire în rezidențiatul de medicină de laborator și a tematicilor pentru examenele de specialitate și primariat.

Furnizor de reactivi, echipamente, consumabile şi service pentru laboratoarele de biologie moleculară şi imunologie, aplicând o politică bazată pe calitatea înaltă a produselor şi serviciilor precum şi flexibilitatea în întâmpinarea nevoilor clienţilor.

Distribuitor exclusiv în România pentru: ELDON CARD 2521 can easily be divided into two single cards ELDON ID CARD with your photo. The card can be folded to the format of a credit card.

Lifecodes Fluoroanalyzer BIO SUPPLY DEVELOPMENT SRL București, Sector 3, Str. Vlad Dracu, Nr. 11, Bl. C14, Ap. 58 Tel.: / FAX: 021.322.85.98 E-mail: office@biosupply.ro

BIO SUPPLY DEVELOPMENT oferă o gamă variată de kit-uri şi consumabile pentru HLA, secvenţiere, RT-PCR pentru detecţia patogenilor (virusuri, bacterii, fungi şi paraziţi) şi tehnologia Hi-Res Melting (teste pentru scanarea genelor pentru: cancer, metabolism, markeri cardiaci, hemostază, enzime de transport metabolizante de medicamente, flavine conţinând monooxygenaze, glutathioneS-transferaze, neuronale, familia „solute carrier”. De asemenea comercializează teste pentru monitorizarea gradului de curăţenie în spitale (săli de operaţie, ATI, saloane) cu ajutorul testelor bazate pe tehnologia ATP (Hygiena International-UK).

Articole de specialitate

Câteva elemente de bază în selectarea testelor rapide de laborator în practica medicală pentru orientarea diagnosticului etiologic Rezultatele testelor de laborator influentează peste 60% din deciziile medicale, devenind în ultimii ani un factor crucial al diagnosticului medical. De aici importanţa clarităţii - acurateţii testării în diagnosticul de laborator pentru practica medicală. Gabriela-Dana Pavel1, Elena-Andreea Hărmănescu2, Elena-Corina Șchiriac2 1. Institutul de Boli Cardiovasculare “Prof. Dr. G.I.M. Georgescu”, Iași 2. Laborator analize medicale “Investigații Medicale Praxis”, Iași

iagnosticul de laborator permite atât alegerea deciziilor clinice corecte cât și a tratamentului Toate testele de laborator trebuie interpretate în lumina evoluţiei curente a pacientului, în corelare cu alte rezultate de laborator şi în funcţie de alte afecţiuni conexe ale pacientului. Uneori, metodele de diagnostic in vitro pot ajuta la depistarea unor afecţiuni chiar înainte de declanşarea lor. Testele rapide oferă posibilitatea stabilirii unui diagnostic mai precoce prin simplitatea tehnicii de determinare și timpul scurt de eliberare a rezultatelor. Dat fiind o gamă largă de teste rapide imunocromatografice existente pe piață, de cele mai multe ori, în alegerea unui anumit test, factorul decisiv îl reprezintă prețul. Sunt situații în care în ciuda dialogului activ cu medicul care se așteaptă la un rezultat pozitiv, laboratorul eliberează un rezultat al testului negativ, ori pacientul primește de la două laboratoare rezultate contradictorii; prezentarea

de față nu face subiectul afectării rezultatelor anumitor analiți datorate unor factori biologici de influență sau factori de interferență și nici datorate unor variabile preanalitice legate de modul de recoltare, prelucrare, stocare și transport al probelor. Acest articol descrie pe scurt câteva aspecte importante în selectarea testelor rapide folosite în laborator; cunoașterea doar a informațiilor generale despre analiză nu este suficientă pentru eliberarea unui rezultat calitativ cu o cât mai mare acuratețe.

Deci, cum ar trebui ele evaluate? Se impune precizarea în insert a sensibilității, specificității, a valorii predictiv pozitive și negative, repre-

Medicină de laborator

zentând alături de utilitatea clinică, validitatea testului; referitor la utilitatea clinică, pentru unele teste de înaltă calitate se face o evaluare prin testări comparative cu metode cantitative, cu raportarea rezultatelor, informații disponibile doar la unele teste în inserturi. Precizarea limitei de detectie este o altă informație importantă care ar trebui să ne orienteze în evaluare, deoarece teste cu limita de detecție crescută conduc la rezultate fals-negative, pacientul putând manifesta clinic boala, de unde și rezultate diferite prin testări în paralel în laboratoare diferite; un factor determinant al calității pentru testele rapide reiese din faptul că nu există un standard internațional impus și nici vreun acord asupra datelor cerute pentru a fi avizate spre utilizare, producătorul precizând la informații referitoare la limitările testelor că rezultatele negative nu exclud prezența afecțiunii incriminate, iar rezultatele fals-negative se pot datora nivelurilor scăzute, limita de detecție a metodei.

Recomandări: •• prospectarea pieței pentru alegerea unui test rapid calitativ superior prin informațiile oferite în inserturi; •• testarea în paralel cu un alt test calitativ cunoscut, atunci când se achizitionează un kit nou, de la un alt producator; •• obligativitatea testării cu control intern disponibil în kit sau achizitionat separat; •• personalul laboratorului ar trebui să facă o mențiune pe buletinul de analize la rubrica Comentarii cu precizarea limitei de detecție când aceasta este precizată în insert.

www.revistamedicalmarket.ro

Str. Vatra Luminoasă nr. 45, sector 2, București Tel: 0040 21 344 0771, Fax: 0040 21 410 4009, Mobil: 0040 799 88 2992 e-mail: office@ddsdiagnostic.ro • www.ddsdiagnostic.ro

TESTE RAPIDE LATEX Serologie

Sistem automat de electroforeză - SAIO

CRP ASLO RF RPR CARBON TPHA-detectie serologica sifilis Waaler Rose SLE

Datorită flexibilităţii sale, este soluţia ideală pentru laboratoare cu nivel mediu şi mare de probe. Este un sistem complet automatizat, uşor de utilizat cu un design special dedicat laboratoarelor medicale, ocupă un spaţiu redus şi are computer inclus.

Truse electroforeză Trusă electroforeză proteine serice pe gel de agaroză Trusă electroforeză proteine serice pe acetat de celuloză pentru analizor automat SAIO

Unici producători electroforeză pe gel de agaroză în România

TRUSE ELISA

TESTE RAPIDE Imunocromatografie INFECŢIOASE Test rapid-HBs Ag Test rapid-Anticorpi anti-HCV Test rapid-HIV1/2 Test rapid-Antigen HBe Test rapid-Anticorpi HBe Test rapid-Antigen Helicobacter Pylori din scaun Test rapid-Anticorp Helicobacter Pylori din ser/ plasma/sange Test rapid Syphilis Test rapid-hemoragii oculte/materii fecale Test rapid-Antigen Chlamydia din urina Test rapid-HAV IgM Test rapid-Procalcitonina şi Rota-Adenovirus MARKERI TUMORALI Test rapid –markeri tumorali PSA Test rapid-Alfafetoproteina,AFP Test rapid-Antigen Carcinoembrionar,CEA MARKERI CARDIACI Test rapid Troponina I

HORMONI TIROIDIENI TSH T3 T4 FT4 FT3 TIROIDĂ AUTOIMUNĂ ATPO Anti Tiroglobulină HORMONI FERTILITATE FSH LH PROLACTINA PROGESTERON ESTRADIOL TESTOSTERON DHEA-S INFECŢIOASE HbsAg ELISA HbsAb Anti-HBc ELISA HCv ELISA HBeAc (anti-HBeElisa) HBeAg anti-HBc Anti-Hbe

Anti-HBs cantitativ HDV IgM HDV IgG HDV Ag HEV Ag HEV Ab HEV IgM HEV IgG HIV 1 +2 with CE HP pylori Antigen HP pylori IgG HP pylori IgM Sifilis CITOMEGALOVIRUS-IgG

TOXOPLASMA GONDII- IgM TOXOPLASMA GONDII IgG CITOMEGALOVIRUS-IgM MARKERI TUMORALI AFP CEA PSA FREE PSA ALERGIE ŞI ANEMIE IgE FERITINA

Oferim asistență tehnică și service pentru sistemul automat SAIO

Articole de specialitate

Analize de laborator pentru detecţia HPV – impact, perspective şi corelaţii cu alte teste de screening Virusul Papilloma Uman (HPV)este un reprezentant al Familiei Papillomaviridae, considerat cel mai comun virus transmis pe cale sexuală. In multe cazuri, infecţia cu acest virus este neutralizată de organismul persoanei infectate pe parcursul a până la doi ani, astfel putem spune că majoritatea infecţiilor cu HPV sunt tranzitorii. Există însă situaţii în care infecţia cu HPV persistă (aproximativ 20%) şi se estimează că 3-10% din totalul persoanelor infectate pot dezvolta cancer cervical sau de altă natură (anal, orofaringian etc.). Virusul infectează celulele bazale din epiteliul exocolului, fiind implicat în producerea de leziuni de tipul: veruci, negi genitali (condiloame) sau leziuni neoplazice canceroase şi precanceroase. Ecaterina Tătaru Biolog medical specialist Doctor în Biologie GRAL MEDICAL

rintre cele mai frecvente tulpini incriminate ca fiind implicate în apariţia cancerelor genitale, se numără HPV cu risc crescut (high risk – HR), ca de exemplu HPV 16, 18, 31, 45, 33, 35, 51, 56, 58, 59. O altă categorie o constituie cele cu risc scăzut (LR – low risk), ca de exemplu HPV 6, 11, 42, 44 etc., asociate cu apariţia negilor ano-genitali. O a treia categorie este reprezentată de tulpini cu risc crescut probabil, multe încă în studiu (de exemplu HPV 66, 68, 73, 82).

Genomul HPV Acesta este reprezentat de o moleculă de ADN dublu catenar circular de aproximativ 8000 pb, împartită în 8 cadre de citire deschise - E6, E7, E1, E2, E4, E5, şi respectiv L2 şi L1 – codificatoare pentru funcţii timpurii (E – early) şi târzii (L - late). In cur-

sul carcinogenezei, molecula virală se integrează în ADN-ul celulei gazdă la nivelul E2, întrerupând continuitatea acestei gene. După integrare, o parte din E2, dar şi cadrele de citire adiacente (E4, E5 şi parţial L2) sunt adesea deletate. Transcripţii virali rezultaţi flanchează uniform regiunea E6-E7. Integrarea genomului viral HPV în genomul celulei gazdă la nivelul E2 se va solda cu alterarea morfologiei epiteliului cervical: de la leziuni intraepiteliale cu risc scăzut până la cele cu risc crescut, caracterizate prin atipii celulare şi indice mitotic anormal. Integrarea genomului viral se produce în regiunile care conţin gene importante pentru viabilitatea celulară, din cromozomi diferiţi. Nu este necesară integrarea întregului genom viral, dar cea a genelor E6 si E7 este critică pentru carcinogeneză. Studiile indică faptul că supraexprimarea oncoproteinelor E6 si E7 este asociată cu infecţii persistente şi evoluţie ulterioară spre leziuni precanceroase şi cancer. Celulele care conţin genom viral HPV integrat prezintă un avantaj de creştere faţă de celulele normale, ceea ce stimulează

Medicină de laborator

proliferarea celulară şi pierderea proprietăţii de diferenţiere. Frecvent, în cazul leziunilor intraepiteliale cu risc scăzut (LSIL) nu se constată integrarea ADN-ului HPV, spre deosebire de cele cu risc crescut (HSIL) în care materialul genetic viral este frecvent integrat în genomul gazdei. Integrarea conferă infecţiei HPV un caracter ireversibil. Netratate, un număr semnificativ de HSIL evoluează catre cancer cervical, acest proces putând dura ani de zile. In mod normal, gena E2 codifică o proteină care controlează genele E6 si E7. Dacă gena E2 este inactivată, se va ajunge la expresia necontrolată a genelor E6 si E7, care devin astfel oncoproteine. Ele se leagă şi, deci, inactivează două proteine ale gazdei implicate în ciclul celular: proteina supresoare tumorală p53 şi proteina retinoblastomului pRb. In cazul tulpinilor HPV 16 si 18, efectul oncogen al E6 si E7 este mai ridicat. Majoritatea analizelor de laborator curente nu pot face distincţia între o leziune precanceroasă şi o infecţie nesemnificativă din punct de vedere clinic. Testele de screening al cancerului cervical adesea se bazează pe testul Babes-Papanicolaou (Pap) şi tot mai frecvent sunt asociate cu detecţia ADN HPV. Există două tipuri de citologie Babes-Papanicolaou: frotiul convenţional şi citologia în mediu lichid.

Testele de detecție ADN HPV Infecţia persistentă cu HPV HR este cauza recunoscută a 99,7% dintre cazurile de cancer cervical. Deoarece HPV nu poate fi cultivat, s-au dezvoltat teste care se bazează pe detecţia acizilor nucleici virali în tesuturile infectate. Majoritatea testelor depistează

www.revistamedicalmarket.ro

A15 Analizor automat de biochimie și turbidimetrie 150 teste/oră

•• •• •• ••

BA 400 Analizor automat de biochimie, turbidimetrie 400 teste/oră şi modul ISE Na+, K+, Cl-, Li+

Gama completă de analizoare pentru dotarea laboratorului clinic Reactivi de diagnostic şi teste rapide Sisteme de recoltare Consumabile şi accesorii

BA 200 Analizor automat de biochimie, turbidimetrie 200 teste/oră şi modul ISE Na+, K+, Cl-, Li+

HA3 Analizor automat de hematologie 3 DIFF

Alături de noi, oamenii se simt mult mai bine, oriunde s-ar afla în lume! BIOSYSTEMS DIAGNOSTIC SRL Str. Crișul Alb, nr. 6, sector 4, București, Tel: 021.335.78.15; Fax: 021.335.78.13 E -mail: office@biosystems-diagnostic.ro, www.biosystems-diagnostic.ro

Articole de specialitate

Organizarea genomului HPV 16 ADN-ul viral prin diverse tehnici de amplificare, confirmând astfel prezenţa infecţiei la nivelul celulelor cervicale. Testele bazate pe ADN pot fi împarţite în două categorii: teste de detecţie a tipurilor cu risc crescut/scăzut şi teste de genotipare HPV. La femeile de peste 30 ani aceste teste sunt foarte utile atunci când sunt asociate cu testul PAP, în screeningul curent, indicând adesea o direcţie de urmat în prevenirea cancerului de col uterin. In cazul femeilor sub 30 ani se recomandă mai rar testarea ADNHPV, datorită prevalenţei foarte mari a infecţiilor tranzitorii. Din acest motiv, valoarea predictivă pozitivă a unui rezultat ADN-HPV pentru dezvoltarea leziunilor cervicale cu risc crescut este destul de scazută. De menţionat faptul că unele teste ADN HPV au ca ţintă regiunea înalt conservată L1 a virusului HPV. Aceste teste pot da rezultate fals-negative (4-25% din cazuri) în screening din cauza integrării genomului HPV în genomul celulelor umane, ceea ce poate determina pierderea regiuniiţintă şi imposibilitatea detectării ei. Pentru a pune în evidenţă activi-

tatea oncogenă a HPV au apărut teste mai specifice, care se bazează pe detectarea ARN-ului mesager pentru proteinele E6/E7 pentru câteva tipuri de HPV cu risc crescut. ARNm E6/ E7 traduce activitatea virală directă şi corespunde iniţierii şi menţinerii leziunilor pre-canceroase. Nivelurile ARNm E6/E7 înregistrează creşteri proporţionale cu severitatea leziunilor, astfel încât testele bazate pe ARN au valoare predictivă superioară. Detecţia ADN şi ARNm au frecvent rezultate similare în cazurile cu displazii de grad înalt (HSIL). Semnificativ, detecţia mARN E6/E7 în probe cu citologie normală sau “borderline” indică faptul că virusul îşi exercită activitatea oncogenică înainte ca modificările celulare să poată fi vizualizate. In cazul pacientelor sub 30 ani, raportul pacientelor pozitive la testul ADN HPV este mai mare decât în cazul detecţiei ARNm, ceea ce se traduce practic într-un numar mai redus de paciente care trebuie urmărite; totuşi, la aceasta grupă de vârstă, este dificil de evaluat specificitatea testului. In concluzie, alegerea testelor de detectie ARNm E6-E7 se datorează dorin-

Medicină de laborator

ţei de a exclude acele rezultate cu ADN HPV pozitiv pentru care sistemul imun al gazdei contribuie la remiterea leziunilor. In acest sens, se poate evalua riscul de progresie şi de transformare malignă în special la femeile cu citologie ASC-US sau LSIL, precum şi la cele cu citologie normală şi ADN-HPV pozitiv. Detecţia oncoproteinelor E6 şi E7 se face în scopul de a estima progresia către leziuni scuamoase intraepiteliale de grad înalt. Studiile sunt însă controversate: un rezultat negativ nu exclude prezenţa unei tulpini HPV HR şi posibilitatea dezvoltarii în viitor a HSIL/CIN. Aceste teste sunt teste ELISA, în care anticorpii monoclonali anti-HPV E6 şi E7 se leagă la epitopele comune ale proteinelor E6 si E7 ale genotipurilor HPV cu risc crescut. Deşi s-a scris mult despre acest topic de-a lungul timpului, el ramâne de interes din perspectiva asocierii lui cu numeroase cazuri de cancer cervical. Pe măsură ce studiile avansează şi apar noi instrumente şi metode de screening utile, posibilitatea managementului eficient al unor cazuri mai dificile devine tot mai promiţătoare. Referinte: 1. L. Stewart Massad, Mark H. Einstein, Warner K. Huh si colab. - “2012 Updated Consensus Guidelines for the Management of Abnormal Cervical Cancer Screening Tests and Cancer Precursors”, 2013, American Society for Colposcopy and Cervical Pathology Journal of Lower Genital Tract Disease, Volume 17, Number 5, 2013, S1YS27. 2. Luisa Lina Villa, Lynette Denny “Methods for detection of HPV infection and its clinical utility”, International Journal of Gynecology and Obstetrics (2006), 94 (Supplement 1), S71-S80 3. Joseph Monsonego - “Traite des infections et pathologies genitales a papillomavirus”. Springer-Verlach France, Paris, 2007, 57-58. 4. Agnes Kathrine Lie - “Human papillomavirus E6/E7 mRNA testing as a predictive marker for cervical carcinoma”. In Expert Rev Mol Diagn. 2008; 8(4): 405-415. 5. https://commons.wikimedia.org/ wiki/File:HPV-16_genome_organization.png

www.revistamedicalmarket.ro

Noul Personal LAB este un analizor complet automat cu 2 microplăci ELISA/IFA. Personal LAB este soluția pentru orice laborator care are nevoie de flexibilitate și organizare pentru automatizarea testelor microELISA. Caracteristica inovativă este cea de încărcare tip „kit - instrument”, direct din sticlele de reactivi ale kitului pe platforma de lucru a instrumentului – fără a fi nevoie de alți reactivi consumabile de control.

Noua interfață este ușor de utilizat și vă permite să programați aproape toate protocoalele de teste microELISA disponibile în prezent pe piață. PSID - identificare a probelor pozitive. Maximizează precizia și eficiența de pipetare prin folosirea vârfurilor de 200 uL și 1000 mL. Sistem deschis ce permite o flexibilitate maximă pentru folosirea kit-urilor preferate. Preţ 20.700 Euro fără TVA.

OFERTĂ SPECIALĂ!!!!! ECLECTICA TICA este un analizor imunologic (metoda IEMA-EIA) ce răspunde necesităţilor laboratorului dumneavoastră într-un format compact şi complet automatizat. Tehnologia utilizată se bazează pe particule imunomagnetice marcate cu fluoresceină (FITC). Meniul de teste (29) include

majoritatea testelor de rutină, kit-urile având împachetări de minim 2x50 de teste. Sistem special automat: - 50 de puncte CAS - viteza de lucru de 48 teste/ oră- 28,8 puncte CAS Total: 78,8 puncte CAS Preţ competitiv: 11.500 Euro fără TVA.

PCHEM 3 este un analizor complet automat pentru chimie clinică, destinat laboratoarelor medii şi mari, cu o viteză de 300/500 de teste pe oră. Adaltis oferă pentru sistemul Pchem 3 o gamă completă de reactivi pentru efectuarea rapidă a testelor de rutină. Modulul ISE, disponibil opţional, asigură o viteză globală de 500 de teste pe oră. Preţ de la 15.500 Euro fără TVA.

SISTEM AUTOMAT ELECTROFOREZĂ SAIO Este un sistem compact, cu un design special dedicat laboratoarelor medicale. Preţ 6.300 Euro fara TVA

Tip analiză: Reactivi: Capacitate lucru: Viteza de lucru: Aplicare probe: Sistem de citire: Liniaritate densitometru: Timp păstrare probe în aparat: Brat robotic: Spălare aplicator: Cameră de migrare: Verificare nivel lichid: Interfața: Sursa de alimentare:

Proteine serice, hemoglobină Acetat de celuloză 1 – 16 probe 8 probe – 30 min. 16 probe – 50 min Placă godeuri și aplicator cu spălare automată 8 canale independente 0-2,8 O.D. 2 ore Brat robotic cu verificare electronică Spălare automată cu curent de apă și uscare Fixă cu umplere și golire automată Cu senzori în infraroșu USB, LAN 220-240 V, 50-60 Hz

Proton Impex 2000 SRL - 63, Trilului str., 030401 Bucharest; Tel/Fax:+40-799-763-670; +40-21-224 5281; +40-31-425 0893 E-mail: secretariat@proton.com.ro; Website: www.proton.com.ro

Articole de specialitate

Anticorpii imuni de grup sanguin OAB Convenţional persoanele de grup O sunt considerate donatori universali, fiind oameni al căror sânge poate fi transfuzat la orice primitor, indiferent de grupă: A, B, AB. Dr. Georgeta Hanganu Medic Director Centrul de Transfuzie Prahova

n mod obişnuit sângele de grup O conţine anticorpi grupali α şi β naturali, care sunt IgM. Atunci când se transfuzează sânge sau plasmă O la pacienţi de grup A, B, AB, se pune întrebarea, dacă nu cumva anticorpii naturali α sau β s-ar putea întâlni şi cupla cu antigenele grupale omologe de pe eritrocitele primitorului de grup A, B, AB putând cauza un accident hemolitic. Aceştia însă, sunt inofensivi când ajung în primitorul de grup A, B, AB, deoarece se diluează în torentul circulator, sunt adsorbiţi de substanțele hidroslubile de grup din plasmă şi ţesuturi, se fixează şi pe celulele epiteliale vasculare, iar ceea ce rămâne în plasmă este prea puţin, pentru a se fixa pe eritrocitele primitorului şi a produce hemoliza. Însă, 5-10% din donatorii de grup O, mai au în afară anticorpilor naturali α şi β, de natură IgM, şi anticorpi α şi β imuni, de natură IgG, care atunci când sunt în titru de mare, sunt periculoşi pentru că sunt hemolizanți şi pot cauza accident hemolitic acut. Aceşti anticorpi imuni α şi β de natură IgG, pot apărea prin imunizare la elemente din mediu, bacterii, alergeni diferiţi, după vaccinare, seroterapie, post-transfuzional, sau prin imunizare feto-maternă. Aceşti anticorpi imuni α şi β provoacă hemoliza eritrocitelor primitorului, în situaţia în care un primitor de grup A, B, sau AB este transfuzat cu sânge sau plasmă de grup O de la donator cu anticorpi imuni. Din acest motiv anticorpilor grupali imuni α şi β li se mai spune hemolizine. De aceea este foarte important de studiat prezența anticorpilor grupali imuni α şi β la donatorii de grup O. În aceeaşi situaţie sunt şi gravidele de grup O şi cu făt de grup A sau B, datorat moştenirii de la soţ. Acestea pot prezenta anticorpi imuni α şi β de natură IgG, care să provoace copilului Maladia Hemolitică a Nounăscutului la naştere. De aceea toate gravidele

de grup O căsătorite cu soţ cu grupa A, B, sau AB sunt investigate pe parcursul sarcinii pentru anticorpii grupali imuni α şi β. Există mai multe metode de laborator prin care se pot evidenţia anticorpii imuni α şi β şi a-i diferenţia de anticorpii grupali naturali α şi β. Vom prezenta o metodă în care diferenţierea între anticorpii naturali şi imuni prin evidenţierea puterii hemolizante a anticorpilor imuni α sau β asupra eritrocitelor A sau B, prin aşa numita metodă a hemolizei. Metoda hemolizei Cea mai folosită, cea mai simplă şi mai rapidă metodă, este cea care evidenţiază puterea hemolizantă a anticorpilor imuni α sau β. Principiu: Activitatea hemolizantă a anticorpilor grupali imuni α şi β se poate pune în evidenţă pe serul proaspăt recoltat, (în 2 ore de la recoltare) bogat în complement. Anticorpii imuni α şi/ β, când întâlnesc antigenele omologe A şi/ B pe eritrocite se cuplează cu aceste antigene, cuplul Ag-Ac fixează şi activează Complementul, care la rândul său activează Complexul de atac membranar ce va acţiona pe membrana eritrocitară, va creea pori prin care hemoglobina conţinută în eritrocit va ieşi în mediul lichid şi va da macroscopic culoarea roşie supernatantului. Astfel eritrocitele A şi/ B puse în reacţie vor fi hemolizate. Materiale necesare: Ser proaspăt de cercetat, recoltat cu maxim 2 ore înainte de a fi pus în lucru. Eritrocite proaspete A1 şi B, spălate de 3 ori cu ser fiziologic, resuspendate în SF, dilutie 10% (1 volum de eritrocite în 9 volume SF). Termostat la 37⁰C, Centrifugă de laborator, eprubete, stative. Tehnica: Se folosesc 4 eprubete de hemoliză, se aşează în stativ. Într-o eprubetă de hemoliză se pipetează: 4 pic. ser de cercetat, 1 pic. eritrocite A1 Într-o eprubetă de hemoliză se pipetează: 4 pic. ser de cercetat, 1 pic. eritrocite B În 2 eprubete se realizează martorii: Martor A = 4 pic. ser fiziologic, 1 pic. eritrocite A1 Martor B = 4 pic. ser fiziologic, 1 pic. eritrocite B Se incubează toate eprubetele timp de 30 minute la 37⁰C. Se centrifughează apoi la

Medicină de laborator

2000 turaţii/ minut. Se citeşte reacţia, se interpretează. După centrifugarea eprubetelor, se urmăreşte prezența / absenţa butonului eritrocitar şi hemoliza (culoarea roşie, roz, incolora) supernatantului. Se observă în supernatant gradul de hemoliză (ce apare ca urmare a prezenţei anticorpilor IgG). Dacă nu sunt prezenţi anticorpi imuni supernatantul este incolor, dacă sunt prezenţi supernatantul este roze, adică este hemoliză. Aglutinarea normală ce apare ca urmare a activităţii anticorpilor IgM, α şi β, nu este vizibilă, aglutinatele formate rămân în butonul eritrocitar. Cu cât hemoliza este mai intensă cu atât mai mic este butonul eritrocitar. Hemoliza poate fi totală sau parţială. Hemoliza totală este considerată când lipseşte butonul eritrocitar, iar tot conţinutul eprubetei este roşu. Hemoliza parţială este considerată atunci când există un buton eritrocitar cu un supernatant roze. Absenţa hemolizei este considerată atunci când există un buton eritrocitar cu un supernatant incolor. Dacă apare hemoliza înseamnă că în serul de grup O studiat, în afară anticorpilor grupali naturali α şi β sunt prezenţi anticorpii imuni, de natură IgG, α (în tubul cu eritrocite A) sau β (în tubul cu eritrocite B) sau în ambele tuburi, fiind prezenţi şi α şi β. Donatorii de grup O cu α şi β imuni sunt etichetaţi ca donator ”O periculos” şi se transfuzează doar la persoane de grup O, iar gravidele sunt urmărite şi li se studiază titrul anticorpilor, lucrându-se aceeaşi tehnică pe diluţii binare de ser, titrul fiind indicat de ultima eprubetă de diluție cu hemoliza. Aşadar în cazul în care există anticorpi, trebuie procedat la titrarea lor, lucru util mai puţin pentru donatori, cât mai mult pentru gravide, la care se urmăreşte tot parcursul sarcinii, iar titrarea se va face de mai multe ori pentru a vedea evoluţia cantitativă în timp a anticorpilor şi a lua măsurile cuvenite. Titrul este ultima dilutie de anticorpi dintr-un ser care dă o reacţie pozitivă. Pentru titrare se procedează astfel: în eprubete de hemoliza se fac diluţii binare (1/2, ¼, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64, 1/128, 1/256, 1/512, etc.) din serul de cercetat şi se efectuează tehnica de bază, ca pentru serul iniţial cu fiecare dilutie de ser în parte. Ultima eprubetă de diluție la care reacţia este pozitivă (prezintă hemoliza, chiar şi parţială) indică titrul anticorpilor. Această metodă poate fi aplicată cu succes atât în centrele de transfuzie, cât şi în orice laborator clinic pentru cercetarea Anticorpilor anti-grup, fiind o metodă simplă, fiabilă, fără costuri mari în echipamente şi reactivi.

www.revistamedicalmarket.ro

Articole de specialitate

Investigații neinvazive în oncologie - celulele tumorale circulante (CTC) Incidența cancerului în întreaga lume a crescut rapid din cauza îmbătrânirii populației, a poluării mediului sau a stilului de viață nesănătos. Conform GLOBOCAN, numărul cazurilor noi de cancer și al deceselor cauzate de cancer la nivel mondial a atins circa 12,7 milioane, respectiv 7,6 milioane în 2008, număr ce a crescut la aproximativ 14,1 milioane și, respectiv, 8,2 milioane în 2012 (1). Asist. Univ. Dr. Antoanela Curici Medic Şef Laborator Central SYNEVO România

n ciuda îmbunătățirilor remarcabile în ceea ce privește diagnosticul precoce al cancerului precum și tratamentul chirurgical al tumorii primare, boala metastatică este responsabilă pentru mai mult de 90% din decesele cauzate de cancer (2). În procesul de metastazare, celulele tumorale invadează țesutul înconjurător al tumorii primare, pătrund în vasele sanguine și limfatice, migrează la distanță, extravazează din circulație, se adaptează noului micromediu și în cele din urmă proliferează și colonizează pentru a forma metastaze (3). Celulele tumorale circulante (CTC) sunt celule tumorale eliberate în sângele periferic dintr-o leziune primară sau metastatică, fie spontan, fie printr-o procedură chirurgicală (diagnostică sau terapeutică). Acestea pot apărea în sânge precoce, înainte ca leziunile metastatice să fie detectate prin metode imagistice (1). Pentru ca celulele să fie mobilizate din tumora solidă primară se presupune că acestea trebuie să sufere o modificare fenotipică, denumită tranziție epitelio-mezenchimală, ce favorizează desprinderea de celulele învecinate, navigarea prin matricea extracelulară locală și pătrunderea acestora în microcirculație (4). Ipoteza conform căreia CTC sunt o condiție fundamentală în procesul de metastazare a fost propusă pentru prima oară la mijlocul secolului al XIX-lea de Thomas Ashworth, un patolog australian (Ashworth, 1869). Astăzi, identificarea și caracterizarea moleculară a CTC rămân esențiale pentru evaluarea riscului de progresie și supraviețuire

la pacienții cu cancer metastatic - posibil și la cei cu cancer în stadiu incipient - precum și în ghidarea terapiei oncologice. Numărul crescut de CTC se corelează cu o boală agresivă, riscul înalt de metastazare și timpul redus până la recădere, astfel că CTC constituie un biomarker predictiv important (1, 3). Deoarece CTC sunt extrem de rare (1 CTC la 106-107 leucocite în sângele periferic al pacienților cu cancer) izolarea și identificarea lor au fost extrem de dificile, chiar și la pacienții cu progresia bolii metastatice. Un alt obstacol major pentru detectarea CTC este heterogenitatea acestora. În acest sens, sunt descrise variații semnificative ale caracteristicilor morfologice și profilului imunofenotipic nu numai în cazul CTC derivate din țesuturi diferite, ci și în cadrul CTC provenite din același țesut (5) . De asemenea, o subpopulație potențial metastatică de CTC poate fi în prezent nedetectabilă, ca urmare a interacțiunii cu plachetele sangvine, ce realizează un „scut” în jurul celulor tumorale și le conferă astfel o protecție față de sistemul imun (3). Pe de altă parte, nu toate CTC sunt relevante din punct de vedere clinic. Pacienții cu diferite afecțiuni inflamatorii sau benigne au, de asemenea, celule epiteliale circulante viabile, detectabile. În plus, întrun studiu efectuat pe un model murin de cancer pancreatic, au fost depistate CTC în sânge înainte de apariția tumorii primare (3). Detectarea CTC variază în mare măsură în funcție de tehnologia utilizată pentru izolarea lor. Majoritatea platformelor disponibile în prezent se bazează pe identificarea unor markeri de suprafață sau a proprietăților fizice pentru a distinge CTC de componentele sanguine normale (6). Aceste tehnologii sunt evaluate initial pe linii celulare, fiind analizate numeroase caracteristici de performanță (eficiența/recuperarea captării, diferențierea de leucocite, viabilitatea celulară, viteza

Medicină de laborator

de procesare, capacitatea de eșantionare a sângelui) și apoi validate clinic (5). Cu toate acestea, cercetătorii se confruntă adesea cu diferite provocări metodologice, fapt ce limitează implementarea clinică a testelor CTC și interpretarea corectă a rezultatelor (7). În 2004 a fost introdus Sistemul CellSearch (Veridex, Raritan, NJ), singurul dispozitiv medical aprobat în prezent în SUA de către Food and Drug Administration (FDA) pentru izolarea și cuantificarea CTC în scopul monitorizării cancerului metastatic mamar, colorectal și prostatic (2, 7) . Rezultatele sunt interpretate ca fiind favorabile sau nefavorabile. Astfel, detectarea a 5 sau mai multe CTC/7.5 mL sânge la pacienții cu cancer metastatic mamar sau prostatic și a 3 sau mai multe CTC/7.5 mL sânge în cazul cancerului colorectal metastatic este asociată cu o reducere atât a ratei de supraviețuire fără semne de progresie a bolii cât și a ratei de supraviețuire globală (8). În concluzie, deși s-au înregistrat progrese în ceea ce privește capacitatea de a caracteriza CTC, biologia lor nu este încă elucidată complet. Odată realizabilă, caracterizarea CTC la nivelul celulelor individuale va oferi oportunități fără precedent pentru medicina personalizată, prin analiza biomarkerilor farmacodinamici și/sau biomarkerilor cu valoare predictivă asupra rezistenței dobândite la tratamentul oncologic (2). Referințe

1. Liang SB, Fu LW. Application of single-cell technology in cancer research. Biotechnol Adv. 2017 (article in press). 2. Krebs MG, Hou JM, Ward TH, Blackhall FH, Dive C. Circulating tumour cells: their utility in cancer management and predicting outcomes. Ther Adv Med Oncol. 2010 2(6):351-65. 3. Plaks V, Koopman CD, Werb Z. Cancer. Science. 2013 341(6151):1186-8. 4. Dasgupta A, Lim AR, Ghajar CM. Circulating and disseminated tumor cells: harbingers or initiators of metastasis? Mol Oncol. 2017 11(1):40-61. 5. Harouaka R, Kang Z, Zheng SY, Cao L; Circulating tumor cells: advances in isolation and analysis, and challenges for clinical applications. Pharmacol Ther. 2014 141(2):209-21. 6. Gkountela S, Szczerba B, Donato C, Aceto N. Recent advances in the biology of human circulating tumour cells and metastasis. ESMO 2016 1(4):e000078. 7. Hong B, Zu Y. Detecting Circulating Tumor Cells: Current Challenges and New Trends. Theranostics. 2013 3(6):377-94. 8. Mayo Clinic. Mayo Medical Laboratories. Circulating Tumor Cells (CTC) for Breast Cancer/Colorectal Cancer/Prostate Cancer by CellSearch, Blood. www.mayomedicallaboratories.com. 2017.

www.revistamedicalmarket.ro

www.biomaxima.ro • office@biomaxima.ro

Chimie Clinică - Ioni / Electroliţi

BM 100/BM 200

BM ISE

BM 500 Electroforeză

Sistem EP LINE 1.1 Urini

BM URI 30

BM URI 200

BM URI 500

Hematologie - Linie micrometodă grupe de sânge BM HEM 5+

Dispenser

Centrifugă pentru carduri Cartelă grupaj sanguin Gel® Forward & Reverse

cititor de carduri

Incubatorul pentru carduri

Medii de cultură Medii în tuburi

Discuri antibiogramă

Medii în plăci

Plăci de contact BioCorp Medii de cultură preparate

Suplimente

Medii de cultură deshidratate

MYCO

Medii de cultură în sticlă

ORION

Sisteme pentru testul de identificare prezumtiv și testul de susceptibilitate: - antifungică a drojdiilor și agenților patogeni ai infecțiilor respiratorii acute - antimicrobiană a micoplasmelor urogenitale, a infecțiilor tractului genital, microorganisme în sepsisul neonatal, microorganisme patogene în tractul intestinal, agenți patogeni în meningoencefalitele bacteriene (incluzând drojdiile) precum și enterobacteriilor gram-negative, oxidase negative - antifungică a drojdiilor și agenților patogeni ai infecțiilor respiratorii acute.

Sânge defibrinat berbec sau cal Valabilitate: 50 zile

Teste rapide : latex, stripuri și casete

Sediul central: Str Constantin Nottara, Nr. 44D, Cluj-Napoca, Cluj, 400503, România, Tel +40.37.11.87.339 / Fax +40.37.28.71.792 Punct de lucru / service: Str Mohorului, Nr. 6, Bl. 17, Sc. 6, Et. 2, Ap. 88, Sector 6, 062154, România Tel / Fax +40.21.43.42.042

Articole de specialitate

Identificarea mutațiilor țintă în cancerul colorectal metastatic Tehnologia BAT®- Biochip Array Technology considerată tehnologia “Gold Standard” pentru testarea multiplex dezvoltată de Randox Biosciences, împreună cu platforma Evidence Investigator, detectează simultan, calitativ sau cantitativ, o gamă largă de analiți dintr-o singură probă clinică (sânge integral, ser, salivă, urină, biopsie țesut). Bioch. Cristina Mariaș Product Manager Molecular Biology, Top Diagnostics

estarea multiplex revoluționează domeniul de detecție molecular, oferind avantaje de neegalat: creșterea performanțelor clinice, reducere de costuri și, de asemenea, economie de timp și resurse. Aplicațiile moleculare Randox Biosciences oferă diagnostic, pronostic și soluții predictive pentru o varietate de afecțiuni: infecții cu transmitere sexuală, infecții ale tractului respirator, cancer colorectal, hipercolesterolemie familială (FH) și afecțiuni cardiovasculare (CVD). Cercetătorii de la Randox Biosciences au alocat o atenție deosebită unei probleme majore de sănătate publică la ora actuală, respectiv managementul cancerului colorectal metastatic.

lor inovații terapeutice, prognosticul pacienților cu neoplasm colorectal rămâne rezervat (1 – Ferlay et al). Neoplasmele metastatice reprezintă 40-50% dintre cazurile nou diagnosticate de cancer colorectal și se asociază unei morbidități înalte (1-Ferlay et al, 2). În ultimii ani s-a demonstrat eficiența terapeutică a anticorpilor monoclonali (moAb) în tratamentul cancerului colorectal metastatic, respectiv cetuximab și panitumumab, care au ca țintă receptorul factorului de creștere epidermală (EGFR) (4 – Saltz et al, 5 - Cunningham et al). Acești anticorpi monoclonali (moAb) se folosesc în monoterapie sau asociați cu chimioterapicele și acționează prin blocarea semnalelor

căii inhibitorii a EGFR în aval, inclusiv a evenimentelor mediate de genele KRAS, BRAF, PIK3CA* (v. diagrama de mai jos). Atunci când apar mutații în stuctura genelor KRAS, BRAF și PIK3CA* acestea sunt activate permanent în aval, făcând ca terapia anti-EGFR prin moAb să devină ineficientă. Testul Randox KRAS, BRAF, PIK3CA Array oferă medicului oncolog informații cu privire la mutațiile punctiforme importante din structura genelor KRAS, BRAF și PIK3CA, permițând astfel selecția corectă a pacienților care pot beneficia de terapia cu anticorpi monoclonali antiEGFR.

Ținte detectabile prin testul KRAS, BRAF, PIK3CA* Array Diagnosticul precoce și detecția statusului mutațional au o importanță capitală pentru identificarea și selectarea corectă a pacienților cu cancer colorectal care vor răspunde potențial

Calea EGFR normală și inhibarea căii EGFR prin acțiunea țintită a anticorpilor monoclonali

Detecția rapidă a profilului mutațiilor punctiforme din structura genelor KRAS, BRAF și PIK3CA

Date generale Cancerul colorectal reprezintă al treilea cel mai frecvent tip de neoplasm la nivel mondial. În ciuda recente-

Medicină de laborator

www.revistamedicalmarket.ro

Articole de specialitate to cetuximab and panitumumab in colorectal cancer. Journal of Clinical Oncology 28(7) 1254-1261.

* Research Use Only (RUO)

la terapia cu anticorpi monoclonali. KRAS, BRAF, PIK3CA Array este un test PCR eficient pentru identificarea rapidă și simultană a celor mai relevante mutații punctiforme în structura genelor KRAS, BRAF, PIK3CA din ADN extras din țesut proaspăt, înghețat sau țesut fixat în parafină; în tabelul de mai sus se găsesc țintele detectabile cu ajutorul acestui test:

De ce este utilă testarea genelor KRAS, BRAF, PIK3CA? Studiile clinice efectuate pe loturi de pacienți cu neoplasm colorectal metastatic și care nu au răspuns la terapia cu chimioterapice, precum și pe pacienți care nu au primit chimioterapie, au arătat un răspuns clinic la tratamentul cu anticorpi monoclonali anti-EGFR doar în 10-20% din cazuri (5 - Cunningham et al., 6 – Chung et al). Activarea căii oncogene a EGFR în aval a fost investigată cu privire la eficiența răspunsului terapeutic sub tratament cu molecule țintite antiEGFR. Studiile au confirmat faptul că pacienții cu neoplasm colorectal metastatic care prezintă mutații punctiforme în structura oncogenelor KRAS nu beneficiază de terapia cu anticorpi monoclonali anti-EGFR (7 – Lievre et al, 8 – Benvenuti et al). Literatura de specialitate a recunoscut mutațiile în structura genei KRAS ca factor major de predicție negativă a eficacității terapiei cu moAb (cetuximab și panitumumab) (3 - Bardelli & Sienna). Prezența mutațiilor oncogenei KRAS este responsabilă însă doar pentru 35-45% dintre pacienții non-responderi la terapie cu moAb (3 - Bardelli & Sienna). Devine astfel importantă identificarea unor factori genetici suplimentari care contribuie la apariția statusului de rezistență primară la agenții anti-EGFR: studiile recente s-au concentrat asupra analizei moleculelor implicate în aval în

calea semnalizării EGFR, respectiv mutațiile în structura genelor BRAF (9 - Di Nicolantonio et al.) și PIK3CA (10 - De Rook et al.) au fost găsite responsabile pentru răspunsul alterat al pacienților la terapia țintită cu moAb. Testul Randox KRAS, BRAF, PIK3CA* Array oferă următoarele avantaje: •• Detecție simultană și rapidă (în doar 3 ore) a 20 de mutații cheie •• Metodă ce permite eficientizarea costurilor pentru determinarea statusului mutațional și al răspunsului la tratamentul cu cetuximab și panitumumab •• Reacție PCR multiplex dintr-o singură probă •• Specificitate maximă prin combinarea amplificării PCR cu detecția prin hibridizare pe biocipuri (tehnologia BAT®) •• Acoperă 3 gene frecvent implicate în cancerul colorectal metastatic, reducând astfel necesitatea testării reflexe. Top Diagnostics împreună cu parterul său Randox Biosciences susțin diagnosticul molecular și managementul eficient al pacienților cu cancer colorectal metastatic, prin identificarea rapidă a celor mai relevante mutații în structura oncogenelor KRAS, BRAF, PIK3CA și prin selectarea corectă a pacienților eligibili să primească tratament cu molecule țintite anti-EGFR. Bibliografie: 1. Ferlay, J., Autier, P, Boniol, M., et al. (2007) Estimates of the cancer incidence and mortality in Europe in 2006. Ann Onol 18, 581-592. 2. Centers for Disease Control and Prevention: United States Cancer Statistics: US Cancer Statistics Working Group. http://www.cdc. gov/uscs. 3. Bardelli, A. & Sienna, S. (2010) Molecular Mechanisms of resistance

4. Saltz, L.B., Meropol, N.J., Loehrer, P.J. Sr, et al. (2004) Phase II trial of cetuximab in patients with refractory colorectal cancer that expressed the epidermal growth factor receptor. Journal of Clinical Oncology 22, 1201-1208. 5. Cunningham, D., Humblet, Y., Siena, S., et al. (2008) Cetuximab monotherapy and cetuximab plus irinotecan in irinotecan-refractory metastatic colorectal cancer. New England Journal of Medicine 358, 1160-1174. 6. Chung, K.Y., Shia, J., Kemeny, N.E. et al. (2005) Cetuximab shows activity in colorectal cancer patients with tumours that do not express the epidermal growth factor receport by immunohistochemistry. Journal of Clinical Oncology 23, 1803-1810. 7. Lièvre, A., Bachet, J.B., Le Corre, D. et al. (2006) KRAS mutation status is predictive of response to cetuximab therapy in colorectal cancer. Cancer Research 66, 3992-3995. 8. Benvenuti, S., Sartore-Bianchi, A., Di Nicolantonio, F. et al. (2007) Oncogenic activation of the RAS/RAF signalling pathway impairs the response of metastatic colorectal cancers to anti-epidermal growth factor receptor antibody therapies. Cancer Research 67, 2643-2648. 9. Di Nicolantonio, F., Martini, M., Molinari, F. et al. (2008) BRAF wildtype is required for response to panitumumab or cetuximab in metastatic colorectal cancer. Journal of Clinical Oncology 26, 5705-5712. 10. De Roock, W., Claes, B., Bernasconi, D. et al. (2010) Effects of KRAS, BRAF, NRAS and PIK3CA mutations on the efficacy of cetuximab plus chemotherapy in chemotherapy –refractory metastatic colorectal cancer: a retrospective consortium analysis. Lancet Oncology 11, 753-762.

Articole de specialitate

Diagnosticul de laborator în bolile autoimune – abordare inovatoare Bolile autoimune constituie un grup heterogen de afecţiuni caracterizate de prezenţa anticorpilor circulanţi orientaţi împotriva constituenţilor celulari. Fiecare boală autoimună sistemică are un spectru de anticorpi antinucleari specifici. Scopul acestui studiu a fost de a evalua sensibilitatea şi specificitatea analitică şi clinică pentru mai multe metode de testare a autoanticorpilor şi de a propune un algoritm de diagnostic al bolilor autoimune. În încercarea de a simplifica şi standardiza determinarea anticorpilor antinucleari, ELISA a devenit o alternativă viabilă. Fiecărei boli autoimune îi corespund unul sau mai mulţi autoanticorpi. Există 2 tipuri de truse, unele având antigene purificate izolate, altele antigene recombinate. Din totalul de peste 100 de antigene identificabile pe substrat Hep-2, prin metoda ELISA pot fi determinate cantitativ 8-14 antigene. Deşi sunt multe atribute biochimice care contribuie la patogenicitatea autoanticorpilor (clasă, aviditatea, încărcarea, fixarea complementului), izotipul IgG este în mod cert direct legat de patogeneza bolilor autoimune. Testarea pentru anticorpi antinucleari tip IgG reduce numărul rezultatelor „fals pozitive”. Corina Elena Şchiriac, Daniela Gabriela Pavel, Mioara Claudia Achirecesei, Maria Ştefania Bursuc, Radu Constantin Druica, Roxana Enciu, Cristina Hristodorescu

S.C. Investigaţii Medicale Praxis S.R.L., Iaşi, România

iecare tehnică şi metodă nouă necesită evaluare. Managementul calităţii în laboratoarele de imunologie clinică include procedurile utilizate pentru a asigura acurateţea şi reproductibilitatea rezultatelor testelor. Specificaţiile pentru testele de autoanticorpi ar trebui să includă date cu privire la validitatea testului, standardizarea metodei, precizie, acurateţe, valoarea cut-off, semnificaţia clinică, sensibilitatea şi specificitatea clinică şi analitică. Acest proces trebuie să fie urmat de o colaborare strânsă dintre laboratoare, medici cu experienta care luptă pentru un

diagnostic precis si pacienţi. Există diferenţe calitative remarcabile între diferiţi reactivi; unele kituri conţin un sortiment îngust de antigene, în timp ce altele includ extracte celulare sau extracte celulare îmbogăţite cu antigene slab reprezentate. Mai mult decât atât, unii producători utilizează conjugate IgG specifice, alţii utilizează conjugate direcţionate la întreaga moleculă de imunoglobulină şi alţii pentru toate clasele de imunoglobuline. De aceea, pentru a valida fiecare reactiv sau kit, este necesar să se studieze un număr suficient de pacienţii cu diagnostice bine stabilite. În practica curenta, se utilizeaza mai multe tehnici de detectare a anticorpilor antinucleari pentru screening si confirmare. Pentru screening: imunofluorescenta indirectă şi ELISA (ca tehnică în faza solidă).

Medicină de laborator

Pentru confirmare: •• tehnici în faza solidă: ELISA, imunoblot •• tehnici în faza lichidă: imunodifuzie, contraimunoelectroforeza şi radioimunodetecţie •• hemaglutinarea pasivă Actuala lucrare prezintă evaluarea testelor EL-ANA Screen şi ANA-9-Profil, destinate detectării anticorpilor antinucleari (ANA), sub aspectele mai sus menţionate.

Descrierea metodei Testul EL-ANA Screen patentat de TheraTest utilizează o metodă ELISA cantitativă destinată detectării prezenţei anticorpilor antinucleari (ANA). Pe lângă anticorpii anti –dsDNA, anti-ssDNA, Sm, RNP/Sm, SSA (Ro), SSB (La), Histone, SCL-70 şi Jo1, metoda detectează şi alţi autoanticorpi care prezintă prin metoda de imunofluorescenţă (IFA) variate patternuri pe celulele Hep-2. •• ANA Screen ELISA – design unic în două godeuri •• Faza solidă: 2 godeuri separate (A şi B) din polistiren, tapetate cu antigene purificate respectiv extracte celulare Hep2. •• Calibratorii, controalele şi probele de pacient sunt testate atât în godeurile din setul A (notate ScrA) cât şi în godeurile din setul B (notate ScrB). •• Conjugatul enzimatic: anti-IgG uman (Fcγ specific) marcat cu peroxidaza din hrean •• Tampon substrat + cromogen (3,3’,5,5’ tetrametibenzidina) •• Reactiv pentru stoparea reactiei: acid fosforic 2M •• Calibrator: ser uman + 0.2%ProClin300+gentamicin sulfat •• Control pozitiv: ser uman + 0.2%ProClin300+gentamicin sulfat •• Control negativ: ser uman + 0.2%ProClin300+gentamicin sulfat

www.revistamedicalmarket.ro

Articole de specialitate

Frecvenţa anticorpilor antinucleari pozitivi detectaţi prin EL-ANAscr pe loturi de pacienţi cu diferite boli autoimmune: Boala

Rezultat Pozitiv %

Donatori de sânge

LES

100

Sjogren

Sclerodermie

Poliartrită reumatoidă

MCTD

100

Polimiozită

Fibromialgie

Osteoartrită

În cadrul testului ANA-9-Profil, pentru anticorpii anti-ssDNA, godeurile sunt tapetate cu ADN denaturat extras din timus de viţel pentru o senzitivitate superioară şi specificitate de 95%. •• Valori ale anti-ssDNA mai mari de 99U/ml sunt întâlnite la aproximativ 100% din pacienţii cu LES nou diagnosticaţi şi la aproximativ 15% din pacienţii cu poliartrită reumatoidă.

Ghid de interpretare a rezultatelor INTERPRETARE (validă doar în context clinic, pentru pacienti nou diagnosticaţi, care nu sunt încă trataţi) Cu cât este mai mare valoarea numerică, cu atât este mai mare Pentru toate rezultatele emise. probabilitatea prezenţei bolii. Rezultatele care depăşesc valoarea cut-off cu <30% trebuie interpretate cu prudenţă. ANAscreen >99% sensibilitate ~30% specificitate pentru LES; Positiv pentru ANAscr şi negativ pentru ANAAlte boli vasculare sau de colagen, vârsta înaintată, 3-7% dona9-Profil tori de sânge. A. Profil LES tip I cu ~100% specificitate A. Cel puţin ssDNA şi dsDNA B. Profil LES tip II SLE cu ~100% specificitate B. Cel puţin ssDNA+ Sm+RNP/Sm C. Profil LES tip III cu ~98% specificitate C. Cel puţin ssDNA+ SSA or ssDNA + RNP/Sm D. Tip I+II+III cu ~100% senzitivitate D. Profile combinate E. Cu cât sunt pozitivi mai mulţi anticorpi având valori mari de E. 3 sau mai mulţi anticorpi în ANA-9-Profil concentraţie, cu atât mai probabil este o formă activă a bolii. 1.Modificări ale ANA/9 (crescător/descrescător) 1.Reflectă creşterea/descreşterea activităţii bolii, contemporană în LES şi viitoare. 2.Modificări (crescător/descrescător) ale ssDNA 2. Contributor principal al schimbarilor ulterioare în activitatea în ANA/9 bolii (creştere/descreştere) Inflamaţie; 1-5% din donatorii de sânge; Doar ssDNA la valori de 100-350 Ui/ml a se repeta în 3-6 luni; A se lua în considerare: inflamaţia SNC, Doar ssDNA >350 Ui/ml nefropatie diabetică, pre-eclampsie în curs de dezvoltare, hepatite cronice, morfee, LES. Doar ssDNA de 100-350 Ui/ml şi dsDNA la Rezultate cu valoare de echivoc, a se repeta după 2-3 săptămâni. valori de 41-80 Ui/ml dsDNA pozitiv (>81 Ui/ml), ssDNA negativ Cel mai probabil un artefact, LES este improbabil, a se repeta. ssDNA >200 Ui/ml împreună cu histone (sau cro- Compatibil cu lupus indus medicamentos. Este probabilă matina) la valori >200 UA prezenţa complexelor imune circulante. Doar Sm (nivele scăzute) cu nivele normale de Rar; puţin probabil să fie LES; a se interpreta cu prudenţă. anti-RNP/Sm Compatibil cu sindromul Sjogren, purpură Doar SSA sau SSA + SSB hipergamaglobulinemică. Doar Scl-70 sau Scl-70+ SSA sau Scl-70+RNP/Sm Compatibil cu sclerodermie, forma difuză. Scl-70 împreună cu un profil de LES (I, II sau III) Hipertensiune pulmonară, nefrite, LES activ. Posibil complexe imune circulante, Doar Histone la <1000 UA lupus indus medicamentos, agregate IgG. Doar RNP/Sm (fără Sm) MCTD; a se considera de asemenea ITP, sclerodermie, RA A. Doar Centromer A. Sclerodermie, indeosebi forma limitată, CREST. B. Centromer + Scl-70 B. Cel mai probabil este vorba de un artefact. A se repeta. C. Centromer + panel LES tip I, II sau III C. LES, a se considera de asemenea suprapunere cu sclerodermia. LES si lupus indus medicamentos, senzitivitate >80%, Cromatina indicator al activităţii bolii REZULTATELE TESTELOR DE LABORATOR

Avantajele metodei •• Timp scurt de eliberare a rezultatelor – 1 ora si 15 minute timp de incubare •• Înlocuitor de încredere pentru HEP-2 IFA – sistemul TheraTest cu designul unic în două godeuri permite identificarea a 100% din pacienţi nou diagnosticaţi cu LES fără dezavantajul interpretării dependente de operator. •• Rezultate cantitative Rezultate obţinute prin testarea a 100 pacienţi normali şi 100 pacienţi cu LES utilizând EL-ANA Screen şi IFA (AFT System Hep, Behring Diagnostics Inc.) EL-ANA Screen

EL-ANA Screen

POZITIV

NEGATIV

AFT

101

AFT

–

Testul EL-ANA-9-Profile™ este un test ELISA pentru determinarea simultană, cantitativă a anticorpilor antinucleari specifici. Este aprobat FDA, prezintă senzitivitate ~100% pentru pacienţii nou diagnosticaţi cu LES şi specificitate 98- 100% (1). •• Configuraţia standard a kitului pentru determinarea cantitativă simultană include teste pentru 9 autoanticorpi împotriva următoarelor antigene nucleare: ssDNA, dsDNA (Bacteriofagul lambda), Sm, RNP/Sm, SSA şi SSB, cromatină, Scl70, centromer.

•• Antigene purificate izolate din timus de vitel sau iepure: ssDNA, RNP, Scl-70 şi cromatină •• Antigene purificate izolate din timus + antigene umane recombinante: SSA (60kDa+52kDa) şi Sm+BB’ •• Antigene umane recombinante: centromer şi SSB •• dsDNA: provine de la bacteriofagul lambda

Medicină de laborator

www.revistamedicalmarket.ro

Articole de specialitate

••

Nivele mari (>350U/ml) sunt specifice pentru LES. Nivele patologice ale ssDNA sunt întâlnite în proporţii variabile la pacienţii cu altă patologie decât LES. Prin urmare, în absenţa manifestărilor clinice de LES valorile crescute ale Ac. antissDNA trebuie luate în condiderare în scopul diagnosticului diferenţiat. Astfel, s-au evidenţiat valori crescute în ser pentru pacienţii cu leucemie şi limfoame dar şi în cazul pacienţilor cu tumori solide, hepatite virale şi în majoritatea hepatitelor autoimune. În diabet Ac. Anti-ssDNA sunt indicatori relevanţi ai complicaţiilor renale şi vasculare. Pentru anticorpii anti-ssDNA nu s-au înregistrat valori crescute în sarcină, dar au apărut nivele mari la femeile însărcinate care dezvoltă pre-eclampsia. Din acest motiv poate fi utilizat ca marker timpuriu de către obstetricieni. În afecţiuni neurologice precum encefalita subacută sclerozantă şi scleroza multiplă anti ss-DNA au fost evidenţiaţi atât în ser cât şi în LCR. Se constată că aceşti anticorpi pot avea valoare diagnostică şi în alte tipuri de context clinic, complet diferite decât

cele arhicunoscute din porliartrita reumatoidă şi LES (3). •• O valoare crescută a anti-ssDNA este în mod normal un indicator de boală care nu ar trebui ignorat. Să luăm drept exemplu VSH care, în funcţie de valoare, sugerează o inflamaţie cronică, o infecţie, un proces malign, o vasculită sau diabet. Pentru determinarea anticorpilor anti-dsDNA, antigenele utilizate pentru tapetarea godeurilor sunt reprezentate de ADN de înaltă puritate provenit de la bacteriofagul lambda. Testul nu detectează anti-ss DNA la nici un nivel. Metoda de detecţie şi măsurare a autoanticorpilor anti dsDNA - IgG a fost comparată cu Farr şi IFA (Crithidia luciliae) şi s-a dovedit că pentru o specificitate de 95% sau 99% toate cele 3 metode prezintă aceeaşi înaltă senzitivitate.

Concluzii •• Profilele ANA/9 furnizează o senzitivitate de ~100% şi 98-100% specificitate pentru LES. •• Nivele multiple de autoanticorpi se coreleză semnificativ cu activitatea bolii.

•• Metoda ELISA poate fi utilizatp pentru toate determinprile imunoenzimatice esenţiale în diagnosticul de laborator pentru diagnosticul şi monitorizarea afecţiunilor reumatologice. •• În practica curentă sunt multe kit-uri ce folosesc substratul Hep-2, dar rezultatele nu sunt întotdeauna compararabile. Standardizarea este dificilă. Cauzele acestor diferenţe includ condiţiile de creştere, fixare şi prezervare a celulelor Hep-2, caracteristicile conjugatului folosit şi sistemul optic utilizat în fiecare laborator. •• Ca şi tehnică IMUNOBLOT, profilele ANA/9 pot identifica simultan mai mulţi anticorpi. Între cele două tehnici există diferenţa că imunoblotul este o metoda calitativă, utilă doar pentru screening iar testul ANA-9-Profil este cantitativ, poate fi utilizat pentru confirmare şi monitorizare. De asemenea metoda ELISA prezintă o sensibilitate superioară metodei immunoblot (2). Referinţe bibliografice 1. Gheorghe Paul Ignat, Anne-Christine Rat, Jerry J Sychra, Jacqueline Vo, John Varga and Marius Teodorescu, Information on diagnosis and management of systemic lupus erythematosus derived from the routine measurement of 8 nuclear autoantibodies.The Journal of Rheumatology August 2003, 30 (8) 1761-1769; 2. Ilza Salamunić. Laboratory diagnosis of autoimmune diseases – new technologies, old dilemmas. Biochemia Medica 2010;20(1):45-56 3. Laura J. McCloskey, Paul Christner, Dana Jacobs-Kosmin, Troy D. Jaskowski, Harry R. Hill, Gabriella Lakos, Marius Teodorescu, Myth and reality: practical test system for the measurement of anti-DNA antibodies in the diagnosis of systemic lupus erythematosus (SLE), Journal of Clinical Laboratory Analysis 24 : 77–84 (2010).

A XXIV-a Conferinţă Naţională de Hematologie Clinică şi Medicină Transfuzională Sinaia 4 – 8 Octombrie 2017

www.conferintasrh.ro

Medicină de laborator

4. Marius Teodorescu, M.D., Ph.D, Clinical value of anti-ssDNA (denatured DNA) autoantibody test: beauty is in the eyes of the beholder, Clinical and Applied Immunology Reviews, Volume 2, Issue 2, April 2002, Pages 115–128

www.revistamedicalmarket.ro

TEG® 5000 – trombelastograf computerizat

•• Trombelastograf pentru analiza elasticităţii cheagului de sânge, sensibil la toate interacţiunile între componentele celulare şi plasmatice, măsurând dezvoltarea şi liza cheagului de sânge. •• Permite analiza simultană a 2 probe de sânge în condiţii termice diferite (de ex. studierea hemostazei la un pacient hipotermic şi a altuia în situaţie de temperatură normală). •• Stochează şi analizează testele efectuate. Curba obţinută, poate fi comparată cu curbele din baza de date a analizorului. •• Permite exportarea rezultatelor în format PDF şi transmiterea pe e-mail. •• Efectueză analiza întregului proces al hemostazei cu un singur test fără a fi necesare alte instrumente! •• Are 2 canale de analiză simultane, cu posibilitate de extindere la 8 canale. •• Sistemul de măsură este prevăzut cu fir de torsiune, fără lagăre suplimentare.

•• Funcţionarea este verificată prin controale cu 2 nivele (normal şi patologic). •• Efectuează şi teste de tip “platelet mapping” – mapare plachetară. •• Măsoară şi efectul asupra hemostazei al medicamentelor anticoagulante. •• Permite terapia personalizată a bolnavului.

•• Are implementat un protocol VAD (Ventricular Assist Device), permite lucrul şi în secţiile de chirurgie cardiovasculară. •• Încalzeşte direct proba de sânge, nefiind nevoie de încălzire ambientală, permiţând analiza probelor de la pacienţi în hipotermie sau hipertermie. •• Determină eficacitatea trombocitelor, indiferent de numărul acestora. •• Face distinctia între cauzele sângerării: exces de heparină, deficienţă de factori, activitate plachetară deficitară, fibrinoliza primară/secundară sau cauze chirurgicale. •• Determină taria cheagului în 5-10 minute, iar nivelul Fibrinogenului funcţional în 15-20 de minute. •• Identifică existenţa condiţiilor protrombotice (enzimatice sau plachetare). •• Datorită analizei complexe şi rezultatelor obţinute este util în mai multe departamente ale centrelor medicale sau spitale.

Pentru mai multe detalii, vă rugăm să ne contactaţi!

BALMED S.R.L. B-dul Burebista nr. 1, Bl. D15, Sc. 4, Ap. 126, Sector 3, 031106, Bucuresti, Tel: 0722 677 660, 0724 204 606, 0785 433 588, Tel/Fax: 021 - 327 52 69, E-mail: office@balmed.ro

Str. Louis Blanc Nr. 32, 011752-sector 1, BucureÈ&#x2122;ti Tel: + 40 21 211.52.83, Fax: +40 21 233.96.61

Articole de specialitate

•• Ability to perform 24 tests of different parameters simultaneously •• Custom setup of samples and reagents •• Highly convenient solution to urgent samples and/or low volume parameters •• Affordable instrumentation •• Most extensive panel for infectious diseases in the market

VirClia® Automation VirClia has been specially designed to be used in the ThunderBolt® automatic system, which has customized software for Vircell’s exclusive monotest format.

VirClia® MONOTEST Indirect chemiluminescent immunoassay (CLIA) to test antibodies against different microorganisms in human serum or plasma. Microwell-based assay: every test consists of 3 reaction wells + 5 reagent wells.

Fundamentals The CLIA method is based upon the reaction between the antibodies present in the tested samples and the antigen adsorbed on a polystyrene surface. Unbound immunoglobulins are washed off. An enzyme‐labelled anti‐human globulin binds the antigen-antibody complex in a second step. After a new washing step, bound conjugate is developed adding a

chemiluminescent substrate solution that generates a glow-type luminescence that can be read with a luminometer.

VirClia Test principle ®

Product features:

ThunderBolt® specifications •• Fully automated – load and walk away. •• High capacity – 192 samples or 24 monotest. •• System Architecture – Open, fully cus-

•• Monotest format and ready-to-use reagents •• Simple and automated protocol with fast results (50 minutes) •• Work directly from the primary sample tube •• Each monodose includes a calibrator and a negative control •• Validation and interpretation of results based on each sample, not on stored curves •• Barcode identification of samples and reagents

Main benefits •• Extraordinary sensitivity and accuracy in the results •• Facilitates the automation of infectious serology to any kind of laboratory •• Extensive infectious serology diagnostic panel

•• •• •• •• •• •• •• •• ••

Medicină de laborator

tomizable. Program any EIA or CLIA protocol. Intelligent Racks – Automatic sample location management. Reduces errors. High Precision Micro-Syringe – Aspirate 1μl with less than 3% CV. Forced Convection Incubator – Evenly heats using forced air to eliminate „Edge Effect”. Orbital MTP Shaker – Better adherence to assay protocols, no splash. Built-in Reader – ultra-compact and fully automated reader On-board Camera – Probe-mounted camera allows remote troubleshooting. Built-in Barcode Reader – Streamline loading and decrease sample tracking errors. Small Footprint – Fits on a 60 cm deep standard laboratory bench. The device meets the European directive on in vitro diagnosis and the FDA.

www.revistamedicalmarket.ro

ContrAA 800 D

Innu Pure® C16 TOUCH Innu Pure® C96

ScanDrop® 2

Human diagnostics

Nowadays it is increasingly important to be able to identify human pathogens quickly and clearly. For this purpose, we have developed CE-IVD certified ready-to-use kits specially designed for the highly sensitive detection of various microorganisms. The Kits of the product group rapidSTRIPE and RoboGene® convince through accurate and reliable results even at lowest detection limits. Isolation kits for detection with RoboGene® Assays

Real Time PCR qTOWER3

• INSTANT Virus RNA Kit • INSTANT Virus RNA/DNA Kit Quantitative real-time assays

PCR Biometra TAdvanced

• RoboGene® HBV DNA Quantification Kit 2.0 • RoboGene® HCV RNA Quantification Kit • RoboGene® HDV RNA Quantification Kit 2.0 • RoboGene® HIV-1 RNA Quantification Kit • RoboGene® HCMV DNA Quantification Kit • RoboGene® EBV DNA Quantification Kit • RoboGene® PVB19 DNA Quantification Kit • Kits for „Minimal Residual Disease“

DISTRIBUIT DE

Articole de specialitate

Diagnosticul serologic în infecţiile microbiene Deşi cultivarea microorganismelor şi identificarea lor prin metodele tradiţionale rămân „golden standard” în diagnosticarea bolilor infecţioase, totuşi, în multe cazuri, diagnosticul serologic permite o orientare rapidă a medicului în vederea instituirii unui tratament precoce. Dr. Mihaela VASILE, Medic primar medicină de laborator

iagnosticul serologic are în vedere atât detectarea antigenelor direct din produsul biologic, cât şi detectarea calitativă sau cantitativă a anticorpilor prezenţi ca răspuns al unei infecţii microbiene. Produsele biologice supuse testelor serologice sunt sângele, lcr, secreţie endocervicală etc. Cu siguranţă, există situaţii în care diagnosticarea etiologică a unei infecţii rămâne în exclusivitate apanajul serologiei: urmărirea în dinamică a titrului de anticorpi în cazul unei infecţii acute, precum şi diferenţierea între o infecţie acută recentă (IgM) sau infecţie în antecedente (IgG). Detectarea anticorpilor tip IgM este utilă pentru afecţiunile care au o simptomatologie nespecifică, aşa cum este toxoplasmoza sau pentru cele care necesită o decizie terapeutică rapidă. Iată deci o scurtă şi concisă trecere în revistă a investigaţiilor serologice legate de sarcină şi afecţiunile ginecologice în general. Să luăm exemplul testelor prenatale STORCH (sifilis, toxoplasmoză, rubeolă, citomegalovirus, herpes). Diagnosticul toxoplasmozei are o deosebită importanţă mai ales pentru o femeie gravidă. Din acest motiv, screeningul acestei infecţii presupune depistarea anticorpilor specifici

tip IgG pentru a stabili statusul imun şi a celor de tip IgM pentru o infecţie recentă. Dar, există o problemă de interpretare în cazul unui rezultat pozitiv pentru IgM, pentru că nu se poate stabili cu exactitate momentul infecţiei, ştiind că acest tip de anticorpi specifici rezistă până la 18 luni de la dobândirea infecţiei. Din acest motiv, se recurge la un test care poate diferenţia o infecţie recentă de una mai veche, şi anume, testul de aviditate IgG. Prezenţa anticorpilor IgM antirubeolă la o femeie gravidă impune o decizie terapeutică radicală. Ţinând cont de faptul că anticorpi de tip IgM, spre deosebire de cei de tip IgG, nu trec bariera transplacentară, prezenta lor la un nou-născut, indică o infecţie acută. În cazul sifilisului, combinând testele netreponemice şi cele treponemice (de confirmare a testelor netreponemice pozitive), se poate diagnostica o infecţie recentă sau în antecedente. Existând totuşi un număr relativ mare de rezultate fals pozitive la testele netreponemice pentru femeia gravidă, ele vor fi corelate şi interpretate atât cu testele treponemice, cu titrul de anticorpi, cu prevalenţa acestei infecţii, dar şi cu afecţiunile asociate sarcinii. Tot din perspectiva prevenirii transmiterii unei infecţii de la mamă la făt, screeningul serologic pentru citomegalovirus, în perioada prenatală, are rolul de a depista la timp infecţia

Medicină de laborator

cu acest virus, ţinând cont de faptul că gravidele prezintă o reactivitate crescută faţă de această infecţie. Testarea serologică privind titrul de anticorpi anti-Listeria monocitogenes la gravide în trimestrul 3 de sarcină poate preveni o infecţie gravă a nou-născutului. În ceea ce priveşte testarea serologică având ca scop detectarea de antigen din produsele biologice, m-aş opri doar la două dintre multe altele: Chlamydia şi Papilloma virus-HPV. Chlamydia este un agent microbian obligatoriu intracelular, din acest motiv diagnosticul fiind aproape eminamente serologic: detectare de anticorpi cu valoare limitată în cazul infecţiilor genitale şi detectare de antigen. Detectarea de antigen se face din secreţie endocervicală, folosind tehnici de imunofluorescenţă directă, imunoenzimatice sau polymerase chaine reaction –PCR. Papilloma virus sau, mai simplu, HPV este un virus cu tropism pentru mucoasa colului uterin. Adoptat ca metodă de elecţie în Statele Unite ale Americii pentru diagnosticarea cancerului de col uterin, la noi este folosit ca metodă suplimentară de investigare a unei paciente care a prezentat un examen citologic Babeş-Papanicolau suspect. Detecţia HPV se face numai prin tehnici de biologie moleculară şi permite screeningul sau detectarea serotipurilor cu risc oncogenic crescut 16, 18, 31,45. Detecţia HPV este un pas înainte pentru lupta împotriva cancerului de col uterin şi, chiar dacă testele de identificare nu sunt 100% teste serologice, este potrivit aducerii în discuţie ca dovadă a progresului înregistrat de medicina de laborator în veşnica concurenţă cu lumea microbiană şi cu speranţa de apariţie a noi soluţii.