Vektorbetegségek

Vektorok által közvetített betegségek előfordulása a laboratóriumi mintákban Dr.Szilágyi Attila Sangui-Vet 

Babesia canis,Babesia gibsoni Lyme- borreliosis Dirofilaria repens, D.immitis Ehrlichia canis

Babesiosis • Előfordulására a labaratóriumi mintákban egész évben számítani lehet • Klinikai lefolyás különböző lehet • Jellegzetes laboratóriumi eltérések útbaigazítanak

B.canis

Akut lefolyású babesiosis • Hírtelen jelentkező láz (40-41.5°C) • Nagyfokú elesettség • Splenomegalia • Makroszkópos Hburia nincs (-még)

Jellegzetes laboratóriumi eltérések • Leukopenia (WBC < 5,0 G/l) • Thrombocytopenia (PLT < 70 G/l) IHA veszély • Monocytosis ( 5 % < ) • Anémiába hajló állapot

„Klasszikus” lefolyású babesiosis • • • •

Lázas állapot 2-3 napig Splenomegalia Anémia Hemolitikus icterus (citromsárga kötőhártya) • Hb-uria • Uraemiás tünetek

Laboratóriumi eltérések • Anémia ( RBC < 3 T/l) • Erőteljes leukocytosis ( WBC< 30 G/l) ennek egy része erythroblast !

• Thrombocytosis • Emelkedett karbamid,kreatinin (icterus alterálja az értékét),foszfor • Bilirubinémia (direkt típusú)

Krónikus lefolyású babesiosis • Perzisztáló subfebrilis állapot hetekig • Bizonytalan általános panaszok • Tüneti terápiára átmenetileg javulhat • Enyhe splenomegalia • Enyhe klinikai anaemia (regeneratív) • Emelkedett α-HBDH aktivitás ( >40 IU/l)

Laboratóriumi eltérések • • • •

Enyhe anaemia (≈ 4-5 T/l) Erythroblastok (NRBC) jelenléte Retikulocytosis Perifériás kenetben elvétve található kórokozó (kapillárisvér,lépaspirátum) • Emelkedett α-HBDH aktivitás (< 40 IU/l) • Uraemia nincs esetleg kissé emelkedett urea

A Lyme borreliosis klinikuma és laboratóriumi diagnosztikája állatorvosi szempontból Dr.Szilágyi Attila Sangui-Vet 

Kiváltó ok Európában • Borrelia burgdorferi sensu stricto • Borrelia afzelii • Borrelia gariníí • B.bisetti (USA)

Miért okoz gyakran gondot ez a kór?

• Az állat szőrzete elfedi a bőrtünet (ECM) megjelenését • A rutinszerűen adagolt antibiotikumok adása abortív fertőzést okoz • A laboratóriumi leletek értékelése gyakran nem megfelelő (túlértékelés veszélye) • A laboratóriumi diagnosztikai módszereket nehezen lehet meghatározni (fertőződés ideje ?)

Diagnosztika •

A humán medicinában a bőrtünet fontos jel. Korai szakban állatorvosi vonalon csak a fertőzés gyanúja merül fel és a klinikai tünetek.

- kondíciócsökkenés,láz, myalgia (48 %) - akut / krónikus recidiváló mono vagy poliarthritis (20 %) - neurológaiai eltérések: ataxia, tetraplegia, izomtremor,torticollis (24 %) - bőrtünetek, pyoderma,erythema (8 %) - ritkább tünetek: myocarditis, iritis, panophtalmitis. GN.

•

Korai szakaszban a szerológiai vizsgálatok negatívak lehetnek !

Klinikai lefolyás • I. stádium  korai lokalizált fertőzés (3-30 nap) (erythema migrans) ezt követő rapid • II.stádium  disseminált terjedést követően változatos tünetek hetek-hónapok alatt • III.stádium késői perzisztáló fertőzés főleg váz,-izomrendszeri és neurológiai eltérések képében

Laboratóriumi diagnosztika • Az inokuláció helyéről vett minta tenyésztése,ha elegendő baktérium van a területen • PCR alkalmazása synoviális folyadék,vizelet, liquor (target: OspA, OspC,VlsE) Jelenleg a standardizálás hiánya miatt csak kiegészítő vizsgálatként alkalmazzák.

A laboratóriumba küldött vérszérum, vagy liquor ellenanyagszint vizsgálata. A CSF minták esetében párhuzamosan vért is kell vizsgálni !

A./ Szűrés a megfelelő érzékenységű teszttel, mely általában ELISA (IF,indirekt HAG) Az IgM és IgG ellenanyagokat külön vizsgálva lehetőség van a betegség stádiumára következtetni

IgM ellenanyagok perzisztálási ideje a perifériás vérben 300 250 200 150

IgM

100 50 0 1

2

3

4

5

6 hónap

• Az IgM emelkedés évekig perzisztálhat a vérben és IgG emelkedés nélkül férevezető lehet krónikus lefolyásnál (..több hónap 5-6) • Keresztreakciót adhatnak : egyéb spirochéták (L.interrogans) antigénjei, orális és intestinális Treponémák

• B./ Western blot canine Ezen nem kvantitatív jellegű vizsgálat specifikusságánál fogva alkalmas az igazoló jellegű vizsgálatokra!

Lényege: egy vizsgálat során több antigént vizsgál teljes,rekombináns,szintetikus antigének felhasználásával

Western blot canine által vizsgált antigének • OspA (31 kDa) surface protein • AspC (22 kDA) specifikus a B.garinii és a korai fertőződésnek • Specifikus Borrelia burgdorferi Ag. (p 100, p 39, p 18 )

Protein/Ag. Elnevezés

Funkció/eredet

Pont IgM

100 kDa 41

p 100 p 41

B.afzelii Flagellin B.Burgdorferi s.s

4 1

39 31 22

BmpA OspA OspC

B.afzelii Surface protein Surface protein

3 4 8!

(B.afzelii,B.garinii, B.Burgdorferi)

20

p41/intern Spec.flagellin rész

3

B.afzelii

18.5 18

P41 p18

Flagellin

1 4

Western blot értékelő táblázat IgM, Pontérték

Értékelés

-5

Negatív

5-6

Határérték

6-

Pozitív

Protein/Ag. Elnevezés

Funkció/eredet

Pont IgG

100 kDa 41

p 100 p 41

B.afzelii Flagellin B.Burgdorferi s.s

8 1

39 31 22

BmpA OspA OspC

B.afzelii Surface protein Surface protein

8 4 6!

(B.afzelii,B.garinii, B.Burgdorferi)

20

p41/intern Spec.flagellin rész

1

B.afzelii

18.5 18

P41 p18

Flagellin Felületi protein

1 8

Wb értékelő táblázat IgG Pontérték

Értékelés

-5

Negatív

5-6

Határérték

6-

Pozitív

Western blot (Lyme blot Canine) Mielőtt ezen meghatározást elvégeznénk az alábbiakat kell figyelembe venni: 1.Gyakori kullancsexpozíció esetén, klinikai tünetek nélkül is 7-8 csoportspecifikus antigénre is pozitív  Más szerológiai tesztek (ELISA) általában pozitívak. A kullancsferőzés nélkül is néhány csoport spec.antigént (60, 41 kDa) kimutatható immuno- blot eljárással

2. Pozitív esetben a kapott eredmény alapján egyértelműen megállapíthatók az egyes csoportok, melyek identikusak a teszt templátjával.

Western blot eljárás eredményeinek értékelése  Korai B.burgdorferi expozíció esetén P100 (93 kDa) + p 41 (flagellin) + p39  pozitív Endémiás területen jelentős számban tapasztaljuk gyakorlatilag az összes kutyaszérumokban, beleértve a tüneteket mutató egyedeket.

 Aktív fertőzőttséget jelent az alábbi hat,de legalább öt csoport jelenléte a szérumban p100 kDa+31 kDa(OspA)+22 kDa (OspC)+ 28 kDa (OspD) + p18 kDa

A dirofilariosis laboratรณriumi diagnosztikรกja Dr.Szilรกgyi Attila Sangui-Vet

• Hazai előfordulás: – Dirofilaria repens terjedő tendenciát mutat!

– Dirofilaria immitis (Heart-worm) eddig csak sporadikus behurcolt esetek-Olaszország !

Előfordulásukra számítani kell az éghajlati változások és a turizmus terjedése miatt.

Dirofilaria repens • Klinikai jelentősége az állatorvosi és humán közegészségügyi vonatkozásaiban rejlik.

• Vektorok: szúnyogok (Aedes,Culex) • Reservoir fajok a canidae-k • A fertőzött állatokról a szúnyogok emberi fertőzést alakíthatnak ki.

Dirofilaria repens • Hazai előfordulása egyre gyakoribb • Éghajlati változások-szúnyogok aktivitásának összefüggése Mikor gondoljunk rá ?

- Noduláris, granulómás (exulceratív) elváltozások testszerte - Szájban, konjunktíván észlelhető granulómás elváltozások

Kép 2: Idült jellegű bőrleváltozás D.repens esetén

Kép 2. Idült uexulceratív elváltozás D.repens esetén ( ha kell ezt is be lehet tenni)

Dirofilaria repens szájüregbeli elváltozásai

Laboratóriumi diagnosztika • -

Hematológiai változások Krónikus esetben regeneratív anémia Leukocytosis Perzisztens eosinophilia ( ! 1.4 G/l) Qualitatív vérképben mikrofiláriák jelenléte (…szerencsés esetben) - Knott-teszt pozitivitás

Knott-teszt 1 ml vér + 9 ml 2%-os formaldehid 5 percig 1500 / min centrigugálás

Felülúszó elöntése után 0.1 %-os metilénkékkel elegyítjük Üledéket cseppenként közepes nagyítással vizsgáljuk

Kép 3. Mikrofilária a perifériás vérben. Rajzásuk a késő esti órákban jellemző

Adultusok morfológiai jegyei alapján tájékoztató jelek: 1. Hosszú caudális filament Dirofilariára utal 2. A rövid cephalikus rész alapján elkülöníthető a D.immitistől

Részletes vizsgálat: Polimeráz láncreakcióval (PCR) egyértelműen elkülőníthető a két kórokozó Szerológiai vizsgálatok során keresztreakció nincs a D.immitis-szel

Adulticid terápiát követő laboratóriumi vizsgálatok Adulticid terápia után várható következmények: - Anaphylaxiás reakció (total protein, albumin,karbamid,kreatinin, foszfor) - Koagulopathia (protrombin-idő, akt.parc. tromboplastin idő - Mikrofiláriák számának ellenőrzése

Dirofilaria immitis laboratóriumi diagnosztikája • Mikrofilária észlelése a perifériás vérben Észlelésének hiánya nem zárja ki a fertőződést (Knott-teszt, szűrési eljárársok)

• Immundiagnosztikai eljárások Rutin screening tesztek állnak rendelkezésre Elvük az uterinális monoklonális ellenanyagok kimutatásán alapul

Diagnosztikai tesztek értékelése • Okkult fertőzés esetén (15-20 %) fals negativitás lehet • Prepatens,uniszekszuális infekció és/vagy 7 hónapnál fiatalabb nőstény esetében (nincs még mikrofilaria)

Krónikus fertőzés • • • •

Proteinuria (amyloidosis) Azotaemia Hypoalbuminaemia Májfunkció zavar

Klinikum Sebészeti beavatkozások során adultusok Időnkénti tachypnoe Fogyás Elülső vállövnél oedema Bőrben noduláris elváltozások pruritus és hyperpigmentáció kíséretében Perzisztens eosinophilia absolutha ( > 25 %)

Therapia: Melarsomin HCl (Immiticide®) 2,5mg/kg Doramectin 0.4 mg/kg sc.

Ivermectin 50 µg/kg sc (fajtaérzékenység!!)

Megelőzés: Spot-on (Stronghold) készítmények

Zoonosis Akut szak: febris undulans (filariás láz), lymphadenitis,lymphangitis retrográd terjedéssel !

Epididymidis, orchitis Krónikus szak: Nyirokkeringési zavarból adódó obstuktív jelenégek (elephantiasis,chyluria)