Las abejas enfermas - Parte 16: El Método “Squash rápida” para determinar la prevalencia de Nosema en una colonia scientificbeekeeping.com/ enfermos-abejas-parte-16-el-rápido-calabaza-método / 8 de febrero de, 2012
Prevalencia de Infecciones
El muestreo secuencial Un pequeño y agradable de acceso directo
Validación Resumen (completamente sujeta a revisión) Más detalles Próximo mes Expresiones de gratitud
referencias
2019 Método de Evaluación Rápida Nosema Prevalencia Publicado por primera vez en ABJ de febrero de 2012 Actualizado 13 de de marzo de, 2019
Randy Oliver
Desde el Descubrimiento de Nosema ceranae , yo Y Muchos Otros Apicultores e Investigadores HEMOS estado Frustrados por el tedio y la aparente inutilidad de Contar las esporas de Nosema, ya Que Muchos de Nosotros sin HEMOS visto Ninguna Relación Significativa Entre el recuento de esporas y la Salud o Producción de la colonia. Sospecho firmemente Que El problema no Es Que N. ceranae no causa Problemas, Sino Que Nuestra Metodología para evaluar v El Grado de Infección ha Sido defectuosa.
La Forma Más Rápida Que él Encontrado para determinar S. El Grado de Infección del Nosema En Una colmena es Hacer ONU muestreo de 2 Pasos. Paso 1: abrir la colmena y tomar una muestra de alrededor de 50 trabajadores de un marco exterior, o de debajo de la cubierta de la colmena. Estas abejas se pueden recuperar de un lavado con alcohol para varroa. Establecer al menos 15 abejas a un lado, por el momento, y utilizar el resto para el siguiente paso.
1/23
Ahora suelen utilizar sólo 10 abejas. Esto se basa en la investigación a fondo sobre Nosema apis de GF Blanca en el año 1900. Lo que encontró fue que el muestreo individual 10 abejas con el fin de determinar la predominio de la infección por Nosema en las abejas de la casa dio la mejor indicación de su relevancia biológica, un hallazgo más tarde sugerido por Cameron Jack en Colonia nivel de prevalencia e intensidad de Nosema ceranae en las abejas melíferas ( Apis mellifera L.).
Asegúrese de leer http://scientificbeekeeping.com/the-seasonality-of-nosema-ceranae/
Paso 2: lugar por lo menos 25 de las abejas en una bolsa ziplock sandwich, y rodar un frasco redondo sobre ellos para aplastar sus entrañas a fondo. A continuación, añadir unos 3 ml de agua por cada 10 abejas en la muestra, y el masaje de la bolsa en los dedos hasta que haya homogeneizada todos los contenidos intestinales en el agua, creando una suspensión semi-opaco (no demasiado clara, no demasiado gruesa) . Para más detalles sobre este paso, consulte http://scientificbeekeeping.com/sick-bees-part-13-simple-microscopy-of-nosema/
Paso 3: colocar inmediatamente una gota de la suspensión en un portaobjetos, deje caer sobre una hoja de la cubierta, y ver en el ámbito. Escanear unos campos de visión de las esporas de Nosema. Si no ve ningún (o sólo uno o dos), que indica que la prevalencia de la infección de esa muestra de abejas era cero final de la evaluación.
Por otro lado, si usted ve esporas en la muestra, a continuación, realizar 10 calabazas de la abeja de la tripa individuales de las abejas que quedan en la muestra original con el fin de determinar la relevancia biológica de la prevalencia de la infección en las colonias de detalles a continuación.
Prevalencia de Infecciones El método actual “estándar” para el seguimiento de “nivel” Nosema en las colmenas es determinar el recuento de esporas por abeja media en una muestra global (típicamente de 10-100 abejas). El método es relativamente rápido y da la clase de números cuantificables que los científicos aman. Por desgracia, como señaló Meana (2010), “el recuento de esporas no está directamente relacionada con el estado de la carga parasitaria y la salud de las colonias enteras infectados naturalmente por N. ceranae en condiciones de campo “.
conteos de esporas sin duda tienen sus usos, tales como cuantificar el progreso de la infección por Nosema en las abejas individuales en los ensayos de la jaula por los investigadores. También son apropiados como un método para “muestreo descubrimiento”. Por ejemplo, se puede “descubrir” si nosema está presente en ninguna medida en un colmenar tomando una muestra global de decir diez abejas a partir de la entrada de cada colmena y determinando la media recuento de esporas. Si el recuento es inferior a 1 M (1 millón de esporas por abeja), entonces es probable Nosema no es un problema en las colmenas muestreadas.
El punto que estoy tratando de hacer sobre el muestreo de Nosema es que somos mucho más allá de la fase de “descubrimiento”. Rennich (2011) encontrado N. ceranae en al menos la mitad de todas las muestras tomadas al azar de abejas en los EE.UU. durante el invierno y primavera.
2/23
Así que en lugar de muestreo “descubrimiento”, lo que tenemos que hacer es cambiar la forma más significativa de medir el impacto potencial de Nosema en colonia con la salud, la proporción de abejas infectadas. De los diversos términos utilizados para describir esta medición “proporción de abejas infectadas en una muestra,” “infectados por ciento,” o “tasa de infección” - Yo prefiero el término utilizado por los epidemiólogos: “prevalencia”.
Aplicación práctica: I a partir de ahora va a utilizar el término “prevalencia” como la medida de la proporción de abejas infectadas por Nosema. Por ejemplo, si se infectaron 2 abejas de cada 10, que sería una prevalencia de 20%.
Hay un fuerte caso que se hizo para cambiar nuestra evaluación de la infección por Nosema de “intensidad” (como se mide por la cantidad de esporas) de “prevalencia” (el porcentaje de abejas en realidad infectado). El único problema con la determinación de la prevalencia es que la mayoría de nosotros asfixiar ante la idea de tener que inspeccionar jillions de abejas de una en una. Afortunadamente, hay atajos prácticos:
El muestreo secuencial En mi último artículo, he propuesto que incluso una pequeña muestra de las abejas podría ser adecuada para la toma de decisiones de gestión. Estoy inmensamente agradecido al Dr. José Villa de la abeja Lab Baton Rouge por traer a mi atención que me reinventar la rueda, este tipo de proceso de toma de decisiones, en base a los pequeños tamaños de muestra, ya cuenta con un nombre de fantasía: se llama “ muestreo secuencial “, y se develped como método de ahorro de tiempo para las inspecciones de control de calidad durante la Segunda Guerra Mundial. Por otra parte, el Dr. Villa excavado en la biblioteca y me envió “tablas de decisión” para el muestreo de ácaros traqueales producido por Tomasko (1993) existente.
El Dr. Maryann Frazier (2000), el seguimiento de la obra de Tomasko, discutió la situación con respecto a la prevalencia de assement ácaros traqueales en lugar de “carga parasitaria” (análogo al recuento de esporas). Es notable, ya que casi un reflejo exacto de la situación actual con Nosema! Y en su papel que validó la exactitud de muestreo secuencial.
El muestreo secuencial tiene que ver con el equilibrio entre el tedio (el número de abejas que necesita para aplastar y la vista) y la confianza (la tasa de error que usted está dispuesto a aceptar). Y parece que para nuestros propósitos, que estima el número mínimo de abejas a la muestra a la derecha en la nariz!
Así que vamos a configurar algunos parámetros arbitrarios para nuestra toma de decisiones:
1. Una prevalencia de la infección de 10% es “tolerable”.
2. Una prevalencia de 30-40% es “intolerable.” 3. Vamos a aceptar una tasa de error del 20% para sobreestimar la prevalencia.
4. Pero no vamos a aceptar una tasa de error superior al 10% por subestimar la prevalencia. Vamos a utilizar los parámetros anteriores para establecer nuestros umbrales por debajo de tratamiento de prevalencia del 10%, no se trate; por encima de 30%, de tratar. La matemática se pone compleja, pero aquí está el quid de los resultados:
Aplicación práctica: parece que con el fin de tomar una decisión de si tratar o no, 3/23
que un par de muestras 5-abeja debe ser adecuada, interpretado como sigue: 0 abejas positivos de 5, o no más de 1 positivo de 10 indica <10% de infección 3 abejas positivos de 5, o al menos 4 positivos fuera de 10 indica infección> 30% Cualquier número de abejas positivos que se encuentran entre estos puntos de corte (por ejemplo, 2 abejas de 5, o 3 de cada 10) no es suficiente para tomar una decisión firme, pero sugiere un nivel de infección que se encuentra en la zona gris. Pero dudo que va más allá de una muestra de 10 abeja es la pena el esfuerzo-Me acaba de pasar a la siguiente muestra.
Con cierto muestreo secuencial, que le mantiene de muestreo hasta llegar a un número crítico de abejas positivos o negativos con el fin de tomar una decisión sobre el tratamiento. Sin embargo, mi experiencia limitada sugiere que llegamos a un punto de rendimientos decrecientes después de ver 10 abejas.
Actualización 5 de julio de, 2012 apicultor Ruary Rudd (ruaryrudd@iol.ie) ha desarrollado una gran hoja de cálculo Excel para el muestreo secuencial. Se le puede escribir para una copia, gracias Ruary! Así que nos haces hacia abajo para el muestreo de un máximo de 10 abejas. Pero aún así, debo informarle que la infección por Nosema parece existir en “bolsas” de las abejas en la colmena, por lo que cualquier pequeña muestra sola no es suficiente para tomar una decisión de nivel apiario (Botias 2011). Por lo tanto, es necesario procesar un número de muestras. Lo que nos ha estado sosteniendo detrás de la determinación de la prevalencia Nosema real es la falta de un método rápido para procesar una serie de muestras de 10 abejas!
4/23
Nosema apis se convierte en un problema serio si alrededor de un tercio de las abejas en una colmena se infectan. Parece que Nosema ceranae puede ser un problema en incluso una menor prevalencia.
Un pequeño y agradable de acceso directo Ya que realmente quería encontrar una manera más rápida de preparar y ver los 200 abejas para la tabla de validación en el artículo anterior, me devanaba los sesos tratando de averiguar una técnica para acelerar las cosas, y finalmente di con un procedimiento relativamente simple (Figuras 1,2, y 3). ahora tengo más de 400 calabazas intestinales individuales bajo mi cinturón, y estoy muy entusiasmado con el método! Esta solución permite a mí procesar las abejas a una tasa de respuesta total de menos de cinco minutos por muestra de 10 abejas!
Figura 1. Esta foto muestra el equipo necesario para un rápido Squash-5 abejas, un portaobjetos de microscopio llano, 5 cubreobjetos de plástico delgada a medida, un cuchillo de mesa, y una toalla de papel. El tamaño de las hojas de la cubierta es crítica, sino que deben ser lo suficientemente estrecha como para no tocar en los bordes, con el fin de mantener las suspensiones intestinales individuales de la mezcla. La solución más fácil es cortar cubreobjetos de microscopio de plástico off-the-shelf por la mitad con unas tijeras. A continuación, puede simplemente desecharlos después de su uso (coste de la muestra cerca de 20 ¢ / 10-bee), o lavar y volver a usar (use su ácaro del frasco agitador). 5/23
Actualización de Feb de 2019: Yo prefiero a reciclar en lugar de descartar. Pero cuando miré a los costes, obtener una porción grande de # 1 cubreobjetos de vidrio de espesor resuelve a sólo alrededor de un centavo por deslizamiento. En Amazon: Karter Científico 211Z2 estándar Microscopio hoja de cubierta, # 1 Grueso, 22x22mm, 200pk (Caso 2000).
Asegúrese de pedir # 1 cubreobjetos espesor, ya que cubre objetos más gruesos no se permitirá centrarse en las esporas. La otra cosa es que no es necesario para hacer la cubierta de encargo se desliza en absoluto. Tres cubreobjetos de vidrio estándar se ajustan a través de una diapositiva, y pueden ser desechados después de su uso si no desea que lavarlos (aunque se lavan fácilmente en agua caliente con un poco de detergente para lavavajillas). Pero si usted no tiene cubierta de plástico se desliza a la mano, no se desespere! Puede hacer que la cubierta se desliza fuera de clara desechos de plástico alrededor de la casa, pero sólo algunos plásticos trabajarán; He experimentado con varios. hojas de transparencias de plástico transparente por desgracia refractan la luz de tal manera que hacen que las esporas de Nosema ven como pequeños rectángulos, por lo que no se ajustan al proyecto de ley.
Los blisters pesados de la ferretería son demasiado gruesas para enfocar a través de una hoja de cubierta-para la visión 400x tiene que ser delgada. Pero entonces me encontré justo lo que la tapa-claro a partir de una tina de Kentucky del Coronel puré de patatas (obtener la salsa también, para que pueda obtener una tapa adicional). Cortarlo en 11 mm x 22 mm rectángulos-funcionan perfectamente! Se pueden lavar en agua jabonosa, enjuagar, secar y volver a utilizar hasta que se rascaban.
Consejo práctico: Cortar un montón de hojas de la cubierta y mantenerlos en un plato de natillas de
fácil recoger-este acelera en gran medida el tiempo de preparación de diapositivas. Busque delgada de plástico transparente con el símbolo de reciclaje # 1 de tereftalato de polietileno: El gran avance del apicultor de la Salud: Sacudido como estaba por las imágenes de los apicultores atiborrándose de puré de patatas con el fin de ser capaz de controlar los niveles de Nosema, me incursionado a la tienda para ver si podía recomendar una sugerencia más saludable. Para mi gran alivio, me encontré con que los contenedores rectangulares para la nutritiva “Baby Mixta Verdes” también se hacen de PETE, y son excelentes cubreobjetos!
6/23
Figura 2. Mantenga una abeja por la cabeza / tórax, a continuación, utilizar el cuchillo de mesa a “leche” el contenido intestinal (o el intestino en sí) de su abdomen directamente sobre el portaobjetos. Utilice la punta de la cuchilla para triturar el material en una gota de agua con el fin de distribuir las esporas en el macerado. A continuación, retire cualquier tejido abeja exceso, dejando una suspensión fina (nota el aguijón y el recto en la diapositiva, y en la toalla a la derecha). Por último, colocar un cubreobjetos sobre la gota de la suspensión. En esta foto, he completado dos preparaciones en la parte superior (no contenían mucho polen). Estoy trabajando en el tercero, lo que hará que una lechada más opaca.
La técnica de “ordeño” abdomen de la abeja por oscilación una hoja plana de delante a atrás causará rápidamente la descarga de los contenidos intestinales, o con aumento de la presión, el intestino en sí. Es crítico para aplastar a fondo y puré de estos en un poco de agua-me moje la punta de la hoja del cuchillo en una corriente de agua si es necesario, hasta que se cree un nublado, pero no opaca, macerar. Consejo: es fundamental para poder presionar el cuchillo la punta hacia abajo plana contra el carro, así que el trabajo con la corredera cerca del borde de una tabla de cortar levantado, para que sus nudillos pueden caer por debajo del nivel de la superficie de trabajo. Tenga cuidado de mantener el macerado en la parte de la diapositiva que estará bajo cada hoja de la cubierta. A continuación, asegúrese de flip-off cualquier gruesos trozos de tejido en exceso, especialmente la picadura o cualquier oscuro
7/23
piezas de exoesqueleto, o van a separar la tapa arriba demasiado alto. Limpiar la punta de la cuchilla con agua corriente y limpie sobre la toalla seca entre cada abeja. Con la práctica, todo este proceso tarda sólo unos segundos!
Repita el proceso por el tobogán, teniendo precaución de limpiar la hoja completamente entre las abejas, y no permitir que ningún líquido a ejecutar desde una muestra a otra. Los cubreobjetos separadas mantienen las muestras de la mezcla. Después de haber aplastado y cubierto 5 muestras de intestino, luego doblar la toalla sobre la diapositiva y presione con firmeza y de manera uniforme para establecer toda la cubierta plana se desliza hacia abajo, y para absorber cualquier líquido que de otro modo podrían llegar a la lente del microscopio.
Figura 3. Presto-Ahora tiene una muestra de tripa 5-abeja listo para ver bajo un microscopio. Es entonces una cuestión sencilla echar un vistazo a cada una de las muestras, a su vez para comprobar si hay esporas de Nosema. Esta técnica funciona bien para las abejas recién muertos o conservados.
En este punto es muy útil tener un ámbito con una etapa regulable (con mandos giratorios para mover la corredera alrededor). A continuación, puede pasar fácilmente de una hoja de la cubierta a la siguiente, y rápidamente escanear arriba y abajo de cada hoja si es necesario. También es muy fácil ver si usted ha conseguido abejas nodrizas o de forraje, ya que cada una de squash intestino muestra claramente el polen contenida (Las Fig. 4 y 5).
8/23
Figura 4. Cerca de las diferencias entre las calabazas contienen polen (centro) y los de sin. Esta muestra fue tomada de la entrada en una mañana fría de noviembre con el vuelo mínima. Ver las siguientes fotos de cómo los dos calabazas de la mano izquierda se veía en el ámbito. Dos de cada 5 de estas abejas estaban infectados.
9/23
Figura 5. Esta es una vista de la calabaza centro de color naranja se muestra arriba. Esta abeja es sĂłlo moderadamente infectada con Nosema
ceranae, y el intestino tambiĂŠn contiene algo de moho esporas del hongo -que naranja centrado no son saludables para las abejas para consumir.
10/23
Figura 6. Un primer plano de un intestino lleno de “huevos fritos.” Me tomó un tiempo, pero finalmente identificó estas esporas como siendo de Uromyces hongo de la roya.
11/23
Me tomó bastante tiempo, pero finalmente identificó los “huevos fritos” en las tripas de las abejas como esporas de un hongo de la roya de mora. En la foto de arriba, se puede ver que las esporas fluorescente naranja envasados como beebread- esto no es el polen! Los trucos de hongos de las abejas en la recolección de sus esporas. Tenga en cuenta que las larvas mueren al lado de esta jalea real, aunque abundante esta colonia parece tener abundante jalea real, de hecho, las esporas de hongos no son saludables para la colmena. En mi zona, colmenas llenas de dichas esporas van cuesta abajo, a no ser que les damos de comer todos los sub polen que se va a comer. Ver “Huevos fritos” Identificado!
Volver a la toma de muestras Nosema, una de las mayores bellezas del método de Squash rápida es lo rápido que es, ya que no es necesario contar las esporas en absoluto (Fig. 7)! Aplicación práctica: Después de un poco de práctica, mi tiempo de respuesta para todo el proceso de preparación, visualización y registro de los resultados de 10 abejas (dos toboganes 5-abeja) es poco más de cuatro minutos si yo no fumble algo en el camino. Consejo: tienen un montón de cubierta precortada se desliza en la mano en un recipiente pequeño.
12/23
Figura 7. Esta es una vista de la calabaza de la izquierda lejos de ser una abeja más antigua, cuya tripa no contiene polen. A pesar de que la preparación parecía casi transparente a simple vista, es fácil ver el grado de infección por Nosema.
Visualización de las abejas individuales que da una mejor idea de lo enormemente el contenido intestinal de las abejas varían de abeja para las abejas dentro de la colmena misma! A veces cada uno de los contenidos intestinales 5 apariencia completamente diferente. Todo lo que puedo decir es que las abejas tienen un montón de diferentes cosas que suceden en sus entrañas, y numerosas infecciones, la mayoría de los cuales no puedo identificar (Fig. 8).
13/23
Figura 8. Este pobre abeja está sufriendo de ambos Nosema ceranae y lo que parece ser una mellificae Malpighamoeba infección (los quistes ovales más grandes). infección de la ameba no es algo que la mayoría de los apicultores consideran incluso, pero me resulta comúnmente en las colmenas que fallan.
14/23
mellificae Malpighamoeba en los túbulos Malphigian de abejas © Institut für Saat - und Pflanzgut, Pflanzenschutzdienst und Bienen Abteilung und Bienenkunde Bienenschutz -
15/23
No soy un microbiólogo, y tienen problemas para diferenciar las células de levadura en el intestino de los quistes de amebas. Aquí está una foto de jalea real a la que añadí una solución de sacarosa débil, y se deja fermentar. Supongo que las células entre los granos de polen son las levaduras. Si alguien me puede ayudar, por favor hágamelo saber!
Este método requiere menos tiempo que un conteo de hemocitómetro estándar, sin embargo, que proporciona información mucho más útil.
Análisis económico: Un campo de aplicación (que durará el resto de su vida) cuesta menos que la tasa de alquiler de dos colmenas en las almendras. Se puede ejecutar fácilmente una docena de estas muestras en una hora, lo que le daría una buena idea de la tasa de infección de las colmenas más débiles un apiario de 50 colmenas. Este método se puede dejar que la rapidez con que saber si usted tiene un problema grave Nosema. Por otra parte, botella de fumagilina para tratar innecesariamente esos 50 colmenas se pondrán a $ 140, más el jarabe y la mano de obra.
Actualizar: Una y otra vez he tenido apicultores me dicen que han estado tratando de controlar la disentería por la alimentación de fumagilina. Cuando les pido que me envíe muestras de abejas, a menudo encuentro que no hay Nosema presente, lo que sugiere que han estado acusando al sospechoso equivocado! Por lo que yo puedo decir,
16/23
Nosema no causa la disentería -Este es un error común. La disentería puede extenderse Nosema en la colmena, pero no parece ser un indicador de Nosema. No hay nada nuevo acerca a sabiendas de que la medición de la tasa de infección es una mejor evaluación de la infección por Nosema que la de tomar el recuento de esporas-Dr. Blanco dejado claro en 1919, y se ha confirmado una y otra vez. El problema siempre ha sido que es simplemente demasiado tedioso individual de squash cientos de abejas (Dr. White aplastado de forma individual y microscópicamente visto más de 3000 abejas). Lo que siempre ha faltado es una manera eficiente en el tiempo para determinar la tasa de infección, y eso es lo que he intentado desarrollar con este método “Squash rápida”. Tímido de un dispositivo automatizado, este método puede ser la mejor evaluación práctica de la tasa de infección de la colonia, y parece tener un grado razonable de precisión.
Validación OK, así que esta semana pasada tomé muestras de las colmenas más fuertes y desde Poca bebida en algunos de mis yardas, y han procesado hasta el momento un total de 40 muestras (todavía tengo una cartera de pedidos al cierre de esta edición, y favorecido las muestras de las colmenas débiles) . He graficar los resultados de abajo (Fig. 9):
Figura 9. Distribución de la prevalencia de Nosema en las colmenas más débiles y más fuertes en mis apiarios a principios de diciembre, en base a muestras de 10-abeja tomada desde debajo de la tapa o peines exteriores. En ninguna de las colmenas fuertes fueron más de 1 de cada 10 abeja infectada; mientras que la mayoría de la
17/23
colmenas débiles anotaron al menos 1 o más abejas infectadas de 10, y el 40% obtuvieron 2 o más positivos.
Los datos preliminares sugieren que los anteriores fuertemente Nosema ceranae la infección se asocia con debilidad colonia en mi propia operación, lo cual no es sorprendente, en base a la gran cantidad de investigaciones anteriores sobre los efectos negativos de Nosema! En este punto en el tiempo, estoy bastante desilusionado con las conclusiones de la investigación de campo en base a la cantidad de esporas, y espero que otros investigadores siguen el ejemplo del Dr. Mariano Higes e incluyen el porcentaje de abejas infectadas.
Aplicación práctica: El punto de la gráfica anterior es que hasta 'hasta este punto, nunca he sido capaz de correlacionar N.
ceranae intensidad de la infección, en base a la cantidad de esporas, ya sea con la salud o la producción de colonias. Pero cuando me cambié a una evaluación de la prevalencia Nosema método de cuantificación diferente en función del número de abejas infectadas en una muestra de 10 la relación salta a la derecha!
Resumen (completamente sujeta a revisión): principios de la primavera y el otoño son probablemente los momentos más adecuados para la muestra, o durante el invierno si van a almendras. No hay necesidad de buscar Nosema en julio o agosto, ya que normalmente “desaparece” durante ese tiempo.
1. Tomar muestras en cualquier época del año a partir de cualquier colonia o patios que parecen no estar
realizar bien rezagado, poco aumento de peso, la falta de recolectores o las abejas más de la cría. No estoy seguro de si vale la pena molestarse rutinariamente con la toma de muestras de Nosema, con tal de que sus colonias no están bajo estrés, y con tal de que se golpea el extremo.
2. Cepillo de una docena de abejas de debajo de la tapa o un peine exterior en una bolsa ziplock, y
añadir un glug de alcohol (para botellas de uso a largo plazo de almacenamiento y alcohol adicional, o congelación). Si desea etiquetar la muestra, asegúrese de que el marcador es resistente al alcohol, o escribir con un lápiz y se puso la etiqueta dentro de la bolsa. 3. ( evaluación alternativa) Proceso de aproximadamente 50 abejas por el método ziplock (ver abejas enfermas
Parte 12). Si ve menos de aproximadamente 5 esporas en un campo de visión (aproximadamente 1 M equivalente), entonces no tienes nada de qué preocuparse. Si hay más, vaya al siguiente paso.
4. De cada muestra, preparar dos diapositivas de 5 abejas cada uno por el método de “Squash Quick”
en este articulo.
5. Interpretar toda la muestra 10-bee como sigue: 0-1 / 10 positivo para la infección grave 4/10-probable esporas-probablemente segura 3/10-probable infección moderada
> 4 / 10- muy probable seria Estar preocupado cada vez que se golpea 2 o más abejas positivas sobre 5. Las probabilidades de golpear 3 o más abejas de cada 10 sube rápidamente con la infección de la velocidad a una 18/23
definitiva del 95% de probabilidad de una vez la mitad de las abejas en la colmena están infectadas!
1. 6. Siento que es probable que no vale la pena el esfuerzo para probar más de 10 abejas de cualquier individuales colmena de abejas-10 debe dar una estimación bastante cerca de la prevalencia de la infección en esa colmena. Mejor para pasar el tiempo de muestreo más colmenas!
2. 7. Importante: no basar las decisiones de gestión en una única muestra! Mantenga el muestreo hasta que esté cómodo con la consistencia de los resultados. Me di cuenta de que acaba de lanzar una gran cantidad de números en usted, pero en la práctica el método es muy intuitiva. Es muy parecido a jugar al póquer-cerebro fácilmente agarra las probabilidades de obtener ya sea un as o cuatro en una mano. Lo más probable es que obtendrá resultados más positivos de colonias con una infección grave Nosema, y pocos o ningún éxitos de colonias sanas.
El procesamiento de muestras de abejas por este método “Squash rápida” ofrece una manera fácil para los apicultores para controlar si Nosema es en realidad un problema en sus operaciones. Me toma menos tiempo para procesar una muestra de 10-abeja que lo hace para hacer un recuento hemacitómetro, pero los resultados de este método son mucho más significativo desde un punto de vista práctico. Los investigadores “vieja escuela” encontraron que este método es una evaluación fiable de la gravedad de la infección por Nosema para N.
apis; Sospecho (sujeto a verificación) que también puede llegar a ser el mejor para N. ceranae.
A veces parece que los apicultores tienen que reinventar la rueda. De todos modos, yo sólo vine con este método rápido y me gusta mucho! Mis hijos dominan la técnica en un par de intentos. Mi parte favorita es que ya no necesito contar esporas, una mirada rápida le da un sí / no para la infección. Me gustaría ser un hombre feliz si nunca he tenido que contar otra ácaro Varroa o esporas de Nosema Me mucho más estar contando todo el dinero Voy a estar haciendo de mis colmenas sanas!
Siento que es el momento para un cambio de paradigma en la forma en que se evalúa el impacto de la infección por Nosema en colonias de movimiento a partir de esporas contando hacia atrás para determinar la proporción de abejas infectadas! A tal efecto, este método es práctico y sorprendentemente rápido, y le da una idea mucho mejor de lo que está sucediendo realmente en la colmena. Te lo agradecería recibir sus resultados o propuestas de mejora si lo intentas (randy@randyoliver.com).
Más detalles en la web Versión No estoy buscando agotar el tema de la fiabilidad, o falta de ella, de los recuentos de esporas, pero siento que este es un tema lo suficientemente importante para la industria de la apicultura, a la luz del potencial de reducción de la producción de miel, aumento de la mortalidad de colonias, y el costo del tratamiento, que los apicultores interesados tienen un conocimiento profundo de los puntos fuertes y débiles de los diversos métodos de muestreo.
La pregunta clave es si los investigadores, laboratorios de pruebas, y los apicultores todos pueden ponerse de acuerdo sobre un método “estándar” de la prueba, de manera que todos podemos comparar los resultados y recomendaciones. El problema actual es que los recuentos de esporas, incluso de la misma colonia, son frustrante variables, dependiendo de la hora del día a la que se toman las muestras de abejas (Fig. 1), el clima 19/23
condiciones, el lugar en la colmena de la que se toman, el número de abejas en la muestra, cómo se procesan (mortero y mano de mortero, filtración, aplastamiento, etc.), cómo son vistos (microscopía simple o hemacitómetro), y incluso entonces los recuentos se basan en gran medida de la posibilidad pura de si uno tiene una o más abejas infectadas muy viejos en la muestra!
Figura 1. Spore cargos de cuatro muestras de 25-abeja tomadas cada día de la misma colmena de la entrada o en el interior, y en cualquiera de 9:30 am o 24:30. Nota que cuenta el mismo día varía desde casi cero a 10 millones de esporas-testimonio de la variabilidad inherente de los recuentos de esporas! También es poco probable que el nivel de infección varió como mucho de una semana a otra ya que los datos sugieren. Este hallazgo realmente me hace cuestionar la comparabilidad de los recuentos de esporas a menos que se tomen exactamente a la misma hora del día, en condiciones climáticas similares, y desde el mismo lugar en la colmena cada vez! Datos de vuelta a trabajar de Meana (2010).
La colonia muestreada en la Figura 1 fue presumiblemente moderadamente infectada por, pero en buena salud aparente. Los investigadores concluyeron: “Esta fuerte variación en el recuento de esporas no se asoció con signos de enfermedad y, de hecho, la colonia fue aparentemente tan sanos (asintomáticos) como cualquier otro. Parece, pues, que el recuento de esporas no es útil para medir el estado de salud de una colonia [ el énfasis es mío].”Me hago eco de esta conclusión (al igual que varios otros estudios), ya que durante el seguimiento de los recuentos de Nosema en mi propio funcionamiento durante los últimos cuatro años, he sido incapaz de detectar ninguna correlación entre el recuento de esporas y salud de las colonias, la productividad , ni la supervivencia.
Los autores concluyen que por encima “ la proporción media de las abejas infectadas puede ser un método más fiable para establecer la salud colonia. ”Esta sugerencia se remonta a los descubrimientos del Dr. en blanco al principio del siglo pasado, y ha resistido la prueba del tiempo. lo aseguro 20/23
que mirar el contenido del intestino individuales de una muestra de 10 abejas da una sensación mucho mejor en cuanto a la severidad de la infección por Nosema en esa colmena!
De dónde debemos tomar muestras?
Figura 2. Spore cuenta vs. infección por ciento para la casa y de campo abejas, n = 30 para cada muestra; todas las muestras tomadas a las 12:30 horas. Datos de vuelta a trabajar de Higes (2008). Tenga en cuenta que la cantidad de esporas indican aproximadamente la tasa de infección por ciento para ninguno de los grupos, pero que los recuentos de esporas de abejas de la casa pueden no ser particularmente un buen indicador de la tasa de infección de abejas de campo, que es probable que la mejor evaluación del impacto de Nosema sobre salud de las colonias . Por otro lado, en este conjunto de datos, las tasas de infección de la casa y el campo abejas seguimiento más o menos entre sí. Este conjunto de datos sugiere que la cantidad de esporas de abejas de campo es la medida más sensible del grado de infección por Nosema en una colmena.
Opiniones de expertos Inteligente y Sheppard (2011) llegó a la conclusión de que: “En base a estos hallazgos, se especula que las abejas recogidos de la cubierta de la colmena interior representan una mezcla de clases de edad de abejas y, dependiendo de los objetivos de la toma de muestras, puede proporcionar una mejor estimación de la colonia entera nivel medio del muestreo de la infección que sólo las recolectoras.
Así que le pregunté al Dr. Brian Johnson, que tenía una experiencia considerable con el seguimiento de las abejas en las colmenas de observación. Me dijo:
“Las abejas justo debajo de la tapa tienden a ser de mayor edad abejas de mediana edad, mientras que las abejas en los panales de abejas son en su mayoría fuera de la Edad Media con un menor número de enfermeras y recolectores. En general, los recolectores están cerca de la entrada, las enfermeras están en la zona de cría y las abejas de mediana edad están en todas partes, pero con un ligero sesgo para la zona de la miel “.
También le pregunté al conductista abeja por excelencia, el Dr. Tom Seeley. Su respuesta:
21/23
"Interesante pregunta. La única información que tengo con respecto a la distribución por edades de las abejas que están gastando el tiempo justo debajo de la tapa o en uno de los peines exteriores (es decir, los que no tienen cría) proviene de un estudio que hice en 1982. En ella, Me asignan los lugares (en una gran colmena de observación) de las diversas actividades y, al mismo tiempo que tomó datos sobre la distribución por edades de las abejas que realizan estas tareas. Estos resultados ponen de manifiesto que las abejas de mediana edad están trabajando principalmente en las regiones periféricas (fuera del nido de cría) del nido. Así que si las abejas se recogen de estas áreas durante el día, entonces serán principalmente de mediana edad y recolector de edad abejas. Por la noche, el porcentaje de abejas en edad recolector será mayor. Usted probablemente ha visto en las colmenas de observación de cómo los recolectores, literalmente, pasar el rato en las zonas de borde de una colmena en la noche “.
Por último, hay una pieza más de evidencia de apoyo para la toma de muestras de debajo de la tapa: Moeller (1956) encontró que “las abejas Nosema-infectada se congregan en y por encima de las zonas de cría cálidos.”
conclusiones Hey, voy a dejar las conclusiones depende de usted. Hoy en día, hice algunos recuentos de esporas de muestras 20-abeja de pilas abejas muertas desde el frente de tres colmenas en un patio. Tenían pequeños Nosema-unos 5 esporas por campo de visión, por lo aprox. 1M / abeja. Así que no hay suficientes esporas para indicar que una calabaza de 10-abeja sería útil. Dado que las abejas estaban muertos, tendría que implicaba una rehidratación con el fin de hacer calabazas intestinales.
También hice algunas calabazas rápidos de abejas de debajo de la tapa para otras colmenas. Cada método tiene sus ventajas y limitaciones. El apicultor inteligente los entiende!
Próximo mes Nosema: La epidemia que arde
Expresiones de gratitud Deseo agradecer a mi esposa Stephanie por su paciencia y útiles comentarios sobre mis manuscritos (que ahoga en las matemáticas y gráficas, y es inmensamente útil para mí para hacer mis cartas más fácil de usar). Como siempre Peter Borst ayudó en la investigación para este artículo. Un agradecimiento especial para el Dr. José Villa, como se mencionó anteriormente. Gracias al Dr. Jerry Bromenshenk por sus útiles sugerencias. Y un gran agradecimiento a los Dres. Mariano Higes, Aránzazu Meana, y Raquel MartínHernández para su trabajo diligente de Nosema! Para el apoyo financiero a esta investigación, no tengo muy agradecidos por Joe Traynor, abejas de la miel de abeja Heitkam, bufón de la empresa, el estado de Virginia apicultores Assoc, y los apicultores individuales Paul Limbach, Chris Moore, y Keith Jarret.
referencias Botias, C, et al (2011) Aspectos críticos de la Nosema spp. toma de muestras de diagnóstico in abeja de la miel ( Apis mellifera L.) colonias. Parasitology
Research ( en prensa). 22/23
Fingler BG, WT Nash, y TI Szabo (1982) Una comparación de dos técnicas para la medición de la nosemosis en colonias de abejas de miel invierno en Alberta, Canadá. ABJ 122 (5): 369-371. Forsgren, E, I y Fries (2010) virulencia comparativo de Nosema ceranae y Nosema apis en las abejas melíferas europeas individuales. Parasitología veterinaria 170: 212-217. Frazier, MT, et al (2000) un esquema de muestreo secuencial para la detección de los niveles de infestación de ácaros traqueales (Heterostigmata: Tarsonemidae) en miel de abeja (Hymenoptera: Apidae) colonias. Journal of Economic Entomology 93 (3): 551-558.
Higes, M, et al (2008) ¿Cómo la infección natural Nosema ceranae causa del colapso de colonias de abejas. Environ
Microbiol 10: 2659-2669. Mattila de recursos humanos, y GW Otis (2007) La disminución de los recursos de polen desencadenan la transición a las poblaciones sin larvas de las abejas de larga vida cada otoño. Ecol Entomol 32: 496-505.
Meana, A, et al (2010) la fiabilidad de los recuentos de esporas para diagnosticar Nosema ceranae infecciones en las abejas de miel. Revista
de Investigación Apícola y Bee World 49 (2): 212-214. Moeller, FE, 1956. El comportamiento de las abejas infectadas por Nosema que afectan a su posición en el cuadro de invierno. J. Econ. Entomol. 49 (6), 743-745.
Oliver, R (2008) El Nosema gemelos Parte 3: Muestreo. ABJ 148 (2): 149-154. http://scientificbeekeeping.com/the-nosema-twins-part-3-sampling/ Porrini, MP, et al (2011) Nosema ceranae en el desarrollo Apis mellifera: influencia de la dieta y el inóculo infectivo. Revista de
Investigación Apícola 50 (1): 35-41 Inteligente, MD y WS Sheppard (2011, en prensa) Nosema ceranae en cohortes de edad de la abeja de la miel occidental ( Apis
mellifera). J. Invertebr. Pathol. doi: 10.1016 / j.jip.2011.09.009
Tomasko, M. Finley, J. Harkness, W. Rajotte, E. 1993. Un esquema de muestreo secuencial para detectar la presencia de ácaro traqueal ( Acarapisosis) infestaciones de abeja de la miel ( Apis mellifera L.)
colonias. Penn. State College of Agricultural Sciences, Estación Experimental Agrícola Boletín 871. Traver, B., y RD Fell (2011a) Prevalencia e infección intensidad de Nosema en la abeja de la miel ( Apis mellifera L.) colonias en Virginia. J Invertebr Pathol 107 (1): 43-49. Traver, BE MR Williams, y RD Fell (2011b; en prensa) Comparación de dentro de muestreo colmena y la actividad estacional de Nosema
ceranae en las colonias de abejas de miel. Journal of Pathology de invertebrados. Blanco, GF (1919) Nosema-Enfermedades. Boletín USDA No. 780.
23/23