UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD BIOQUIMICA Y FARMACIA PRACTICA DE LABORATORIO DE ANALISIS DE MEDICAMENTOS #1 NÚMERO DE PRÁCTICA: BF.9.01-3 NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Evaluación de calidad de formas farmacéuticas líquidas 1. DATOS INFORMATIVOS: Alumno: Luis Cuenca. Carrera: Bioquímica y Farmacia Ciclo/nivel: Noveno Semestre “A” Docente responsable: Bioq. Carlos García MSc. Fecha: 19/06/2019 2. FUNDAMENTACIÓN: El Gluconato de calcio en solución al 10% es la presentación del calcio más utilizado en el tratamiento de la hipocalcemia. Esta forma de calcio es superior al del lactato de calcio, aunque sólo contiene 0,93% (930 mg/100ml) de iones de calcio. El calcio es esencial para la integridad funcional de los sistemas nerviosos, musculares y esqueléticos. Interviene en la función cardíaca normal, función renal, respiración, coagulación sanguínea y en la permeabilidad capilar y de la membrana celular. Además el calcio ayuda a regular la liberación y almacenamiento de neurotransmisores y hormonas, la captación y unión de aminoácidos, la absorción de vitamina B12 y la secreción de gastrina. La fracción principal (99 %) del calcio está en la estructura esquelética, principalmente como hidroxiapatita, Ca10(PO4)6(OH)2; también están presentes pequeñas cantidades de carbonato cálcico y fosfatos cálcicos amorfos. El calcio del hueso está en constante intercambio con el calcio del plasma. Ya que las funciones metabólicas del calcio son esenciales para la vida, cuando existe un trastorno en el equilibrio del calcio debido a deficiencia en la dieta u otras causas, las reservas de calcio en el hueso pueden deplecionarse para cubrir las reservas de calcio más agudas
del organismo. Por lo tanto, sobre un régimen crónico, la mineralización normal del hueso depende de las cantidades adecuadas de calcio corporal total (1) 3. OBJETIVOS: 3.1 Evaluar la calidad de una forma farmacéutica que tenga como principio activo el Gluconato de Calcio. 4. MATERIALES,EQUIPOS,REACTIVO Y SUSTANCIAS: a) Valoración MATERIALES EQUIPOS ✓ Vaso de ✓ Balanza precipitació n ✓ Soporte ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓
universal Pipetas Bureta Guantes Mascarilla Gorro Mandil Balón volumétrico
de 100 ml ✓ Agitador ✓ Pipeta de 10 ml
b) pH
analítica
SUSTANCIAS ✓ Hidróxido
MEDICAMENTO de ✓ Ampolla de
sodio 0.1 N ✓ Edetato disódico ✓ Murexida
Gluconato de calcio
MATERIALES ✓ Vaso ✓ ✓ ✓ ✓
EQUIPOS de ✓ pH-metro
SUSTANCIAS ✓ Agua
precipitación Guantes Mascarilla Gorro Mandil
MEDICAMENTO ✓ Ampolla de
destilada
Gluconato de calcio
c) Solubilidad MATERIALES ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓
SUSTANCIAS
Vaso de precipitación Pipetas 4 tubos de ensayo Gradilla Guantes Mascarilla Gorro Mandil
✓ ✓ ✓ ✓
MEDICAMENTO ✓ Ampolla
Agua destilada Formol Metanol Éter etílico
de
Gluconato de calcio
d) Refractometría MATERIALES ✓ Vaso
EQUIPOS de ✓ Refractómetro
precipitación ✓ Agitador ✓ Pipeta ✓ ✓ ✓ ✓
SUSTANCIAS ✓ Agua
MEDICAMENTO ✓ Ampolla de
destilada
de calcio
Pasteur Guantes Mascarilla Gorro Mandil
e) Determinación del contenido extraíble del envase MATERIALES
Gluconato
SUSTANCIAS
MEDICAMENTO
✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓
✓ ✓ ✓ ✓
Probeta Franela Pipeta volumétrica Guantes Mascarilla Gorro Mandil
✓ Ampolla
Agua destilada Formol Metanol Éter etílico
de
Gluconato de calcio
f) Aspecto disolución MATERIALES EQUIPOS ✓ Vaso de ✓ Refrigerador ✓ Cocineta precipitació ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ g)
SUSTANCIAS ✓ Agua destilada
n Agitador Probeta Guantes Mascarilla Gorro Mandil Características organolépticas
MATERIALES ✓ Guantes ✓ Mascarilla ✓ Gorro ✓ Mandil
MEDICAMENTO ✓ Ampolla de Gluconato de calcio
MEDICAMENTO ✓ Ampolla de Gluconato de calcio
h) Densidad MATERIALES ✓ Picnómetro ✓ Guantes ✓ Mascarilla ✓ Gorro ✓ Mandil
EQUIPOS ✓ Balanza
SUSTANCIAS ✓ Agua destilada
analítica
MEDICAMENTO ✓ Ampolla de Gluconato de calcio
i) Límite de Cloruros MATERIALES
EQUIPOS
SUSTANCIAS
MEDICAMENTO
✓ Vaso ✓ ✓ ✓ ✓ ✓
de
precipitación Pipetas Guantes Mascarilla Gorro Mandil
✓ Balanza analítica ✓ Campana
✓ Ácido nítrico ✓ Nitrato de plata ✓ HCl 1N
✓ Ampolla de Gluconato de calcio
de extracción
j) Microscopia MATERIALES EQUIPOS SUSTANCIAS ✓ Portaobjetos ✓ Microscopio ✓ Agua ✓ Cubreobjetos ✓ Laptop destilada ✓ Guantes ✓ Mascarilla ✓ Gorro ✓ Mandil
MEDICAMENTO ✓ Ampolla de Gluconato de calcio
k) Análisis Microbiológico MATERIALES ✓ Asa ✓ Caja Petri ✓ Guantes ✓ Mascarilla ✓ Gorro ✓ Mandil
EQUIPOS ✓ Incubadora
SUSTANCIAS ✓ Agar
MEDICAMENTO ✓ Ampolla de
MacConkey
Gluconato de calcio
5. PROCEDIMIENTO: a) Valoración
Sacar la cantidad de principio activo que se va utilizar, en este caso 2.5 ml y poner en un vaso de precipitación
Añadir 10 ml de agua destilada y 12 ml de hidróxido de sodio 0.1 N ADICIONAR 0.0020 g de murexida. Titular con EDTA al 0.1 N Anotar el viraje cuando la solución cambie a color morado
b) pH ✓ Agregamos una cierta cantidad de muestra (Ampolla de Gluconato de Calcio), en un vaso de precipitación y luego medimos el pH, con el respectivo pH-metro. ✓ Verificar si cumple con los parámetros establecidos c) Solubilidad ✓ Limpiar el área de trabajo, haciendo el uso de alcohol y franela. ✓ Rotular los 4 tubos de ensayos respectivamente: M(Metanol), F(Formol), H(Agua destilada) y éter etílico. ✓ Colocar 1 ml cada uno de los reactivos respectivamente en los tubos rotulados. ✓ Adicionar 1 ml de Gluconato de calcio en cada uno de los tubos ✓ Agitar vigorosamente los tubos durante 3 minutos. ✓ Observar los resultados y tomar apuntes de cada uno para el informe d) Refractometría ✓ Calibrar el refractómetro con agua destilada ✓ Colocar 10 ml de muestra en un vaso de precipitación ✓ Colocar en la unidad óptica del refractómetro con la pipeta Pasteur unas gotas de muestra necesaria para tomar la lectura ✓ Leer el Brix indicado en el refractómetro ✓ Anotar el resultado ✓ Realizar los cálculos pertinentes e) Determinación del contenido extraíble del envase ✓ Seleccionar uno o más envases si el volumen es mayor o igual a 10 ml, tres o más envases si es mayor a 3 ml y menor a 10 ml, y cinco o más envases si es menor o igual a 3 ml. ✓ Extraer individualmente el contenido de cada uno de los envases seleccionados con una jeringa hipodérmica seca cuya capacidad no exceda tres veces el volumen a ser medido, provista de una aguja de 0,8 mm de diámetro interno y de no menos de 2,5 cm de largo. ✓ Eliminar las burbujas de aire de la jeringa y de la aguja. ✓ Verter el contenido de la jeringa sin vaciar la aguja en una probeta graduada y de capacidad tal que el volumen a medir ocupe por lo menos el 40% de su volumen.
f) Aspecto disolución ✓ Preparar la solución con 9ml de Agua destilada y 10 ml de gluconato de calcio ✓ Hacer hervir por agitación durante 10 segundos hasta disolución completa ✓ Llevar a una temperatura de 20°C por 5 minutos ✓ Comparar con la solución inyectable de referencia g) Características organolépticas ✓ Se debe obtener 4 soluciones de Gluconato de Calcio al 10% de distintas industrias farmacéuticas. ✓ Se debe proceder a la observación de 4 soluciones de Gluconato de calcio al 10% ✓ A continuación, anotamos lo observado en la siguiente tabla h) Densidad ✓ Calibramos la balanza ✓ Pesamos el picnómetro vacío en la balanza analítica ✓ Luego llenamos el picnómetro con agua destilada hasta enrazar y pesar ✓ Luego llenamos el picnómetro con la muestra (Gluconato de calcio) hasta enrazar y pesar ✓ Calcular la densidad mediante la fórmula por el método de picnometria i) Límite de cloruros ✓ Disolver 2ml de gluconato de calcio en agua más o menos 30 a 40ml ✓ Agregar 1ml de ácido nítrico ✓ Agregar 1 ml de nitrato de plata ✓ Agregar agua hasta obtener un volumen de 50ml y dejar reposar por 5 minutos protegiendo de la luz solar directa ✓ Comparar la turbidez con la producida en una solución que contiene ácido clorhídrico 0.0020N. j) Microscopía ✓ Quitar la funda protectora del microscopio ✓ Enchufar el microscopio, y conectar el USB con la laptop y programar
✓ Colocar en primera instancia el objetivo de menor aumento para lograr un enfoque correcto. Este paso en muy importante y se debe realizar siempre, ya que permitirá la observación del medicamento y la ubicación de áreas de interés para su análisis posterior. ✓ Subir el condensador utilizando el tornillo correspondiente. ✓ Colocar la muestra sobre la platina, con el cubre-objetos hacia arriba y sujetándola con las pinzas. ✓ Colocar la lámpara en la posición correcta y encenderla. ✓ Enfoque la lámina mirando a través de la laptop y lentamente mueva el tornillo macrométrico. ✓ Recorra toda la muestra y haga sus observaciones. Situé la lámina en el sitio donde debe seguir observando a mayor aumento.
k) Análisis Microbiológico
Aislamiento de E. coli. ✓ Con un asa, hacer un aislamiento a partir de caldo lactosado, a agar MacConkey. Incubar a 35ºC por 24 horas. ✓ Las colonias de coliformes en agar MacConkey son de color rojo ladrillo, eventualmente rodeadas de zonas de bilis precipitada. ✓ Si no hay colonias típicas, la muestra cumple los requisitos en cuanto a ausencia de coliformes. ✓ Si hay colonias típicas, trasplante una de estas colonias a agar eosina-azul de metileno-lactosa, según Levine. Incubar a 35ºC por 24-48 horas. Las colonias de E. coli en este medio, se caracterizan por dar color negro azulado al trasluz y brillo metálico dorado verdoso a la luz incidente. ✓ Transferir las colonias típicas del agar eosina-azul de metileno-lactosa (agar Levine), a agar nutritivo inclinado y a agar TSI. Incubar a 35ºC por 24 horas. ✓ Los cultivos típicos de E. coli en agar TSI presentan el bisel amarillo, sin oscurecimiento y con formación de gas. ✓ Hacer una coloración de Gram: E. coli es un bacilo Gram negativo no esporulado.
✓ Confirmar la presencia de E. coli por medio de pruebas bioquímicas adicionales como por ejemplo el Test del IMViC, o utilizando sistemas miniaturizados tales como API MicroID. 6.-CUADRO DE RESULTADOS: a) VALORACIÓN. Peso promedio: Concentración: Referencia: Equivalencia: Viraje: K: Cantidad a trabajar:
1000 mg 100 mg P.A 90%- 110% 1ml de EDTA O.1 N: 40.08 mg PA 6.7 ml de NaOH 2N 1.0107 250mg PA
Consumo teórico: % Teórico: Consumo real: % Real:
6.23 ml de EDTA 0.1N 99.87% 6.29 ml de EDTA 0.1N 100.94 %
CALCULOS. 10ml de inyectable …....... 989.8 ml de P.A X 250 ml de P.A X = 2.5 de inyectable Consumo teórico 1ml de EDTA 0.1 N ….......... 40.08 mg de P.A X 250 mg de P.A X = 6.23 ml de EDTA 0.1N Porcentaje teórico 1ml de EDTA 0.1N .................. 40.08mg de P.A 6.23 ml de EDTA 0.1N X X = 249.69 mg PA 250 mg de P.A 249.69 mg de P.A
…............... X = 99.87%
Consumo real CR= Volumen práctico x K CR= 6.5 ml de EDTA X 1,0107 CR= 6.56 ml de EDTA 0.1N
100% X
Porcentaje Real 1ml de EDTA 0.1N ............. 40.08 mg de P.A 6.56 ml EDTA .1N X X= 262.37 mg de P.A 250mg P.A ….... 100% 262.92 mg P.A X X= 105.16 % Según la farmacopea Argentina indica que las solucione inyectables de gluconato de calcio debe contener no menos del 95 % y no más del 105 % de la cantidad total de calcio declarado, sin embargo se le hizo modificaciones a la técnica sustituyendo indicar azul de hidroxinafol por la murexide ya que es un indicador para soluciones tituladas con EDTA preparadas a la misma concentración del hidróxido de sodio, por lo tanto podemos decir que la forma farmacéutica si cumple con los requisitos y la variación del 0.16 % se relacionan con el adaptamiento de la técnica.
b) pH. pH Gluconato de Calcio solución inyectable.
6.01
Según la farmacopea Argentina séptima edición, indica que debe tener un rango de pH de entre 6 – 8,2, con los resultados obtenidos que fueron de 6.01, comprobamos que si cumple con los parámetros establecidos de la farmacopea en el Gluconato de calcio. c) SOLUBILIDAD METANOL
FORMOL
AGUA
CLOROFORMO
Reacción
Disuelve normal
DESTILADA Se disuelve normal
Se separa en 2 fases
blanquecina Después de 3
Después de 3
Después de 3
Después de 3
minutos La sustancia se
minutos Sigue disuelto
minutos Se disuelve normal
minutos Sigue separado en 2
hizo más oscura
normal
fases.
Según la FEUM, el gluconato de calcio, es fácilmente soluble en agua a ebullición. Ligeramente soluble en agua, casi insoluble en alcohol y éter dietílico, así que según esto; Sí cumple con la farmacopea, puesto que con alcohol y cloroformo no se solubilizo y si lo hizo en agua y formol. d) REFRACTOMETRÍA CALCULOS GRADOS BRIX Muestra 1 Brix = Lectura Brix + (Temperatura - 20) x 0.03 Brix = 10 56+ (20 - 20) x 0.03 Brix= 0,316 % de sólidos disueltos /100 g de solución ÍNDICE DE REFRACCIÓN N= índice de refracción del medio en cuestión C0= velocidad de la luz en el vacío (3x108 m/s) V= velocidad de la luz del medio en cuestión
N= C0/V N=
3x10 8 m/sq
1,3486
N= 2,45 x10 8 N=
C0 V 8
N=
3 x 10 m/s 1,3475
Muestra
Ampolla de Gluconato de
Grados
Índice de
Salinidad
BRIX
refracción
NaCl
10, 56 %
1,3486 nD
9,04%
Calcio Lab. Sanderson S.A
e) DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO EXTRAÍBLE DEL ENVASE
MUESTRAS
CONTENIDO MEDIDO
CONTENIDO MEDIDO
EN JERINGA
EN PROBETA
Muestra 1
10.5 ml
10.5 ml
Muestra 2
10.6 ml
10.6 ml
Muestra 3
10.4 ml
10.4 ml
Promedio del contenido del envase (media)
10.5 ml
Contenido que se presenta en el envase
10 ml
Contenido de exceso del envase
0.5 ml
Mediante la práctica se pudo obtener el contenido extraíble del envase que por medio del ensayo se obtuvo que tanto la muestra 1, 2 y 3 tenían exceso de
contenido, que al ser comparados con lo que nos indica la Farmacopea Argentina, que nos dice que los envases de soluciones y suspensiones inyectables deben llenarse con un ligero exceso de volumen, en este caso se utilizó una solución inyectable de 10 ml lo cual en la tabla nos dice que está permitido un exceso de 0.5 ml, por lo tanto si cumple con las especificaciones requeridas. f) ASPECTO DISOLUCIÓN Según la farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos se comprobó que el medicamento pasa el control de calidad ya que la solución inyectable debe ser opalescente a la disolución de referencia.
g) CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS Nombre
Forma
Conc
Laboratorio
Color
Olor
Vence
Lote
Textura
10ml
Sanderson
Transparen
Caracteristica
9/2022
75MI1490
Liquida
farmaceutica Gluconato
Ampolla
de calcio
Nombre GLUCONATO CALCIO
Peso picnómetro vacío DE 11.53 g
Peso picnómetro con agua 20.97 g
Peso picnómetro con muestra 21.44 gr
h) DENSIDAD
CALCULOS: Peso pic Muestra− peso pic vácio =¿ Peso pic agua− peso pic vácio
GLUCONATO DE CALCIO 21.44 g−11.53 g =¿ 20.97 g−11.53 g 1.049 g /cc
9.91 g 9.44 g
resulta do 1.049 g
Cumplimiento SI CUMPLE
Mediante la práctica se obtuvo el valor de densidad que es de 1.049 el cual al ser comparados con el valor referencial que se tomó de la Farmacopea USP 36 que nos indica que SI CUMPLE.
i) LÍMITE DE CLORUROS CALCULOS HCl → 100ml → 1N 1N → 36,45 gr HCl 0,0020N → x X=0,0729 g HCl Transformamos los gramos a mililitros, usando la densidad del HCl D HCl =1,02g/ml d = mv v = md v = 1,02gr/ml 0,0729 v = 0,071ml HCl Se agrega hasta completar un volumen de 1000ml Preparación a 0,0040 N 1N → 36,45 gr HCl 0,0040N → x X=0,1458gr HCl conc. x = 0,1458gr HCl 1,02gr /ml X=0,142 ml HCl concentrado
De acuerdo a la farmacopea argentina 8 Edición volumen I nos indica que el gluconato de calcio debe tener una cantidad de cloruros que la dilución con el ácido como podemos observar en nuestra imagen nuestra muestra con gluconato tiene un aspecto blanco lecho por el contacto con el nitrato de plata se forma el cloruro de plata que se hace presente mediante la coloración blanco lechoso es decir que se aprueba este parámetro de calidad.
j) ENSAYO DE MICROSCOPÍA
Muestra 1: Gluconato de Calcio 10%/10ml.
Muestra Ampolla de Gluconato de Calcio Ensayo 1 Ensayo 2 RESULTADO
Lentes Ópticos 4x
10x
40x
++ ++ ++ +++ +++ +++ Se observó un acumulo de cristales de oxalato de calcio en cada uno de los campos observados, se evidenciaban pequeñas
estructuras. El uso de la microscopia en la evaluación de formas farmacéuticas es ideal la para un control de calidad rápido que se puede aplicar a las formas farmacéuticas terminadas, este tipo de evaluación puede implementarse al control de calidad antes de que salgan los mediamentos a la venta, porque por medio de este tipo de ensayos podemos determinar algun tipo de contaminacion externa durante el proceso de elaboración, este proceso se hace en cuestión de minutos y en la actualidad existen equipos para acoplar a un miscroscopio que van a mejorar la imagen obtenida. La presencia de cristales de oxalato de calcio no representan un peligro en el organismo en caso de administrar una forma farmaceutica en donde presenten este tipo de
estructuras, debido a que su contenido es de 10ml y la cantidad de cristales de oxalato de calcio no afectarían debido a que diluiran en el organismo y no generarán complicaciones en la salud.
7.- CONCLUSIONES: Se procedió a la evaluación de calidad del Gluconato de Calcio, en una forma farmacéutica liquida solución inyectable, que según la farmacopea Argentina indica que las soluciones inyectables de gluconato de calcio debe contener no menos del 95 % y no más del 105 % de la cantidad total de calcio, sin embargo se le hizo modificaciones a la técnica sustituyendo indicar azul de hidroxinafol por la murexide ya que es un indicador para soluciones tituladas con EDTA preparadas a la misma concentración del hidróxido de sodio, por lo tanto podemos decir que la forma farmacéutica si cumple con los requisitos y la variación del 0.16 % se relacionan con el adaptamiento de la técnica. Según la farmacopea Argentina séptima edición, indica que debe tener un rango de pH de entre 6 – 8,2, con los resultados obtenidos que fueron de 6.01, comprobamos que si cumple con los parámetros establecidos de la farmacopea en el Gluconato de calcio. La muestra 1, 2 y 3 tenían exceso de contenido, que al ser comparados con lo que nos indica la Farmacopea Argentina, que nos dice que los envases de soluciones y suspensiones inyectables deben llenarse con un ligero exceso de volumen, en este caso se utilizó una solución inyectable de 10 ml lo cual en la tabla nos dice que está permitido un exceso de 0.5 ml, por lo tanto si cumple con las especificaciones requeridas. Según la FEUM, el gluconato de calcio, es fácilmente soluble en agua a ebullición. Ligeramente soluble en agua, casi insoluble en alcohol y éter dietílico, así que según esto; Sí cumple con la farmacopea, puesto que con alcohol y cloroformo no se solubilizo y si lo hizo en agua y formol. Mediante la práctica se obtuvo el valor de densidad que es de 1.049 el cual al ser comparados con el valor referencial que se tomó de la Farmacopea USP 36 que nos indica que SI CUMPLE.
8.- RECOMENDACIONES: Usar siempre el equipo de protección adecuado para minimizar algún tipo de accidente que ponga en riesgo nuestra salud. Utilizar los equipos de laboratorio con mucho cuidado para evitar que se dañen. Leer la guía práctica antes de realizar la práctica. Al utilizar un material verificar si está limpio. Tener cuidado con las sustancias que sean muy toxicas, trabajar siempre en campana.
Bibliografía
Delgado Salgado, M. S., & Suñiga Arteaga, C. T. (2015). Piperacina. Revista nacional del Insituto De trabajo y desarrollo de la Investigación, 207-212. Farmacopea Argentina. (2006). Valoración de Gluconato de Calcio (Vol. 7ma Ed.). Buenos Aires.
García Gonzales, C. A. (2015). Control de calidad de Medicamentos. Machala, El Oro, Ecuador: Universidad Técnica de Machala.
Vila Jato, J. L. (1997). Tecnología Farmacéutica II: Formas Farmacéuticas. Madrid: Ed. Sítntesis.
Luis Cuenca. CI: 0706683380
9.- ANEXOS: