Coliformes

LABORATORIO COLIFORMES YAMIR LEONARDO MELO CESAR ROJAS GUILLAN PEDRO A. LOPEZ 583802 ALEXANDRA CUCAITA INSTRUCTORA

30 DE AGOSTO DE 2014 SENA HOTELERIA TURISMO Y ALIMENTOS TECNOLOGO CONTROL DE CALIDAD DE ALIMENTOS

1. MARCO TEORICO Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar la lactosa a 44º C en vez de 37 ºC como lo hacen los totales.

Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces están formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. En alimentos, la identificación de una concentración elevada de Coliformes Fecales en un alimento es indicador de su contaminación y por tanto su mala manipulación, de ser esto así, se debe declarar al alimento en cuestión como No Apto para el Consumo Humano, en esta practica de laboratorio de realizo el estudio de coliformes totales, fecales, y E. coli en queso mediante el método NMP para observar y reconocer bacterias, encontrando como resultado positivo para E. coli y tubos positivos 3-3-3 para colifomes totales y fecales, 1100 NPM Coliformes totales y fecales/gr queso.

I. INTRODUCCION

Debido a que un gran número de enfermedades son transmitidas por vía fecal-oral utilizando como vehículo los alimentos y el agua, es necesario contar con microorganismos que funcione como indicador de contaminación fecal. Estos deben de ser constantes, abundantes exclusivos de la materia fecal, deben tener una sobrevivencia similar a la de los patógenos intestinales y debe de ser capaces de desarrollarse extraintestinalmente.

El grupo coliforme es constante, abundante y casi exclusivo de la materia fecal, sin embargo, las características de sobrevivencia y la capacidad para multiplicarse fuera del intestino también se observan en aguas potables, por lo que el grupo coliforme se utiliza como indicador de contaminación fecal en agua; conforme mayor sea el número de coliformes en agua, mayor será la probabilidad de estar frente a una contaminación reciente.

Cuando los coliformes llegan a los alimentos, no sólo sobreviven, sino que se multiplican, por lo que en los alimentos el grupo coliforme adquiere un significado distinto al que recibe en el agua. En productos alimenticios que han recibido un tratamiento térmico (pasteurización, horneado, cocción, etc.), se utilizan como indicadores de malas prácticas sanitarias.

“La denominación genérica coliformes designa a un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas características bioquímicas en común (aerobias o anaerobias facultativas, gram negativas, no esporógenas, fermentan lactosa a 35°c en 48 horas) y tienen importancia relevante como indicadores de contaminación del agua y los alimentos”. [1]

El grupo coliforme está formado por los siguientes géneros: 1.

2.

3.

4.

Escherichia.

Klebsiella.

Enterobacter.

Citrobacter.

“Chromocult Agar para Coliformes: Es un agar selectivo para la identificación simultánea de coliformes totales y E. coli en muestras de agua y alimentos. Gracias a la acción conjunta de peptonas selectas, piruvato y tampón defosfatos se garantiza un rápido crecimiento también de coliformes con daños subletales. El contenido en lauril sulfato inhibe ampliamente el crecimiento de bacterias grampositivas, sin tener influencias negativas sobre el crecimiento de Coliformes.

La identificación simultánea de coliformes totales y E. coli se hace posible por la nueva combinación de dos sustratos cromógenos. El sustrato Salmon-GAL es escindido por la enzima beta-D-galactosidasa característico de coliformes y provoca una coloración roja de las colonias de coliformes. La identificación de la beta-Dglucoronidasa característica para E. coli tiene lugar mediante el sustrato Xglucorónico, cuyo producto de escisión produce una coloración azul de las colonias positivas Materiales              

Caldo bilis verde brillante Agua peptonada Tubos de ensayo tapa rosca Campanas Durham Micropipeta Pipetas de 1ml Probetas Incubadora Gradilla Frascos tapa rosca Mecheros Vidrio de reloj Agua desionizada Espátulas

Técnica de NMP para 9 tubos (Muestras diluidas líquidas o sólidas)

10 ml

10 Gramo s

1ml

1ml

90 ml Agua pepto NADA

9 ml A.Pep 10-2

10-1

9 ml APep 10-3

Incubar 35ºC +/-2 durante

24-48 horas

+

+

+

Incubar 44.5ºC +/-2 durante

24-48 horas

LECTURA DE RESULTADOS 

Coliformes totales Pasado en tiempo de incubación, obsérvese los tubos que muestren fermentación (turbidez) y producción de gas, que se observa por el desplazamiento del medio en la campana de Durham; repórtelos como positivos.



Coliformes fecales (E.coli) Pasado en tiempo de incubación, obsérvese los tubos que muestren fermentación (turbidez) y producción de gas, que se observa por el desplazamiento del medio en la campana de Durham; repórtelos como positivos, teniendo en cuenta la prueba confirmatoria de E.coli en agar EMB.



Confirmación de E.coli Obsérvese las colonias típicas de E.coli siguiendo las características establecidas por el medio cultivo EMB y reporte los tubos confirmados como positivos.

EXPRESION DE LOS RESULTADOS 

De acuerdo a la serie obtenida en cada una de las pruebas, obsérvese la tabla anexa de NMP para tres tubos.



Los resultados se expresan como NMP/ g ó mL de alimento; hay veces dependiendo del alimentos se expresa como NMP / 100mL. Los resultados de un análisis de NMP, están directamente relacionados con la frecuencia con que se presentan una serie de resultados positivos, que son los más probables que ocurran cuando un número dado de organismos están presentes en una muestra de alimentos.

Nota: En caso de realizar más diluciones que las que posea la tabla empleada, se puede usar la siguiente fórmula para hallar el NMP por g ó mL: (NMP de la tabla x Factor de dilución intermedio de la lectura)/ 100 = NMP/g ó mL

microorga analizis nis metodo mo Determinac Escherichi Siembra ion de a. en coliformes profundi Klebsiella. dad Enterobact er.

Citrobacter .

caracteristicas microbiologas

dilusion Caldo billam

# de coloni as 1

imagen

Medio spc Agua peptona da

10-1

0

10-2

0

10-3

De acuerdo con lo expuesto en clases y teniendo como referencia la explicaci贸n de la instructora vemos que la presencia de co2 en las campanas y la turbidez del caldo las tres muestras son (+) positivas teniendo un resultado de 333

BIBILOGRAFIA   



INVIMA. 1998. Manual de técnicas de análisis para control de calidad microbiológico de alimentos para consumo humano.

BAM. 2002. Enumeración de coliformes y E. coli NMP. Cap 4 Metódo II Calidad microbiológica, Coliformes totales, http://www.calidadmicrobiologica.com/index.php?option=com_content&task =view&id=6&Itemid=19 (20 de mayo del 2012) Universidad de san carlós de Guatemala facultad de medicina veterinaria y zootecnia escuela de medicina veterinaria, determinación de la carga bacteriana más frecuente en pollo fresco, distribuido en el mercado “Ciudad real” situado en la zona 12 de la ciudad de Guatemala, Ana lucia Mazariesgos Girón, Noviembre del 2004 http://es.scribd.com/doc/59702732/20/Chromocult-Agar-para-Coliformes (20 de mayo del 2012)

ANEXO TABLA NO. 1 TABLA DE NMP CUANDO SE USAN 9 TUBOS PARA MUESTRAS DILUIDAS NÚMERO DE TUBOS POSITIVOS NMP/g ó mL LIMITES DE CONFIANZA 10-1 10-2 10-3 99% 95% 000 <3 <1 23 <1 17 010 3 <1 28 1 21 100 4 1 35 2 27 101 7 1 36 2 28 110 7 2 44 4 35 120 11 1 50 2 38 200 9 3 62 5 48 201 14 3 65 5 50 210 15 5 77 8 61 211 20 5 80 8 63 220 21 4 177 7 129 300 23 10 230 10 180 301 40 10 290 20 210 310 40 20 370 20 280 311 70 20 520 30 390 320 90 30 660 50 510 321 150 50 820 80 640 322 210 100 1900 100 1400 330 200 100 3200 200 2400 331 500 200 6400 300 4800 332 1100 333 >2400