Раздел
11. ФИТОХИМИЯ ЭХИНАЦЕИ ...
ФЕНОАЬНЫЙ СОСТАВ И АНТИОКСИДАНТНАЯ АКТИВНОСТЬЭКСТРАКТОВ ИЗ СОЦВЕТИЙ ЭХИНАЦЕИ ПУРПУРНОЙ Иванова Р .А., Даскалюк А.П. Институт генетики и физиологии растений,
Академия наук Республики Молдова , у л. Пэдурий,
20,
Кишинэу, МД-2068, Республика МоАдова, ralivanova@yahoo.com Резюме. В работе представлены результа ты исследова ний полифенольного состава и антиоксидантной активности экстрактов из соцветий эхинацеи пурпурной, произрастаю щей в Молдове. Экстрагирование проводили в три этапа с ис пользованием в различной последовательнос ти растворите
лей разной полярности. Установлено, что экстракт, получен ный при использовании на первых двух этапах водно-спирто
вых растворов концентрацией
70% и 35%, соответственно на 1-м - воды, был наиболее
и 2-м этапе и на завершающем этапе
богатым по содержанию полифен олов и гидроксикоричных кислот, а также обладал наибольшей способностью улавли вать свободные радикалы.
Summary. The paper
preseпts
the results of researches of activity of extracts from f/owers of Echiпacea purpurea growiпg iп Moldova. Extractioп was carried out оп th re e steps usiпg the so/veпts with various polarities iп differeпt order. There was estaЫished that the extract oЬtai пed Ьу usiпg оп iпitial two steps the hydro-a/coholic solutioпs with coпceпtratioп 70 апd 35%, respectively оп first апd secoпd step, апd оп final step - the water, was the richest Ьу content of polypheпolics and hydroxyciппamic acids, as we/1 as possessed the highest capacity of free radical scaveпgiпg. polypheпolic compositioп апd aпtioxidaпt
В ряде развитых стран препараты из эхинацеи, благо да ря их вы раженным :иммуномодулирующим эффектам,
явАяются на
сегод
няшни й день одними из самых продаваемых ра стителы-Iых препара
тов
[1, 6].
Современ н ый интерес к экстрактам из эхr1нацеи пурпур
ной вызывает также и возможность их испш\ьзован ия в качестве ис
точника природных антиокс идантов
[ 4, 8] .
Утверждается, что стан
дартизацию экс тра ктов из эхинацеи и идентификаци ю их в составе комп,1ексных фитопрепаратов рационально основывать на выявле-
143
ИННОВАЦИ ОННЫ Е ПОДХО ДЫ К ИЗУЧЕНИЮ ЭХИНАЦЕИ
ни и и количестве нн ом о пр ед еА ен ии фен оАьных соединений и, в час
тно ст и про из водных rидроксикоричных кислот
[ 4).
Конечное содер
жание биологическ и активных компонентов в экстрактах во многом зависит от спосо ба их экст рагиров а ни я и от местности прои з раста ния эхи на цеи. В этой связи ц елью н а ше й р або ты явилос ь изучение фе нольнога состава и антиоксидантной актив н ости экстраrпов из цв е т ов эхинацеи пу р пу рной, про из раст ающей в М олдове, при ис
пользовании растворителей разл ич ной пол ярности.
Ма т ериал ы и м етоды . Соцв е тия эхинацеи пурnурной бы ли соб р аны в сезон
года н а экспериментальном участке Института
2010
генетики и физиологии ра с тений, высушены при 25-ЗО " С в з атем ненных вентиАи р уемых усАо в иях . Пере д экс тр агирование м высу шенные соцветия и змеАhчали на лаб ора торной мельнице
GRINDOMIX GM200 (Rets ch, Германия) при 10 000 об/ мин. Экстрагирова ние провод иАи в три этапа с испол.ьзованием в различной последо
ва те льности р аство ри телей ра з ной п о лярно ст и (вода, водн о - спир
товые растворы концентра ци ей р ования длился
я х при 20 С С. (табл.
35
и
70 %) .
Каждый этап экстраги
часа и проводиАся в термостатируемых услови
24
1).
Экст ракты, nоАученные н а каждом и з э тапов,
были объединены и отфиАьт рованы. В р езультате бы,1и п олучены
5 (3 и 5)- с содержани 2) - с содержанием эти
экстрактов, один из кото рых водный
два
ем этиА ово rо спирта
и
лового спирта
70%
и
(4), остальные (1
35%.
Оп ределение об ще го соде р жания rюлифено.1 ов в экстрактах про водиАи по методу ФоАин а -Чо кальтеу
[10),
со держание гидр окс ико
ричн ых кисл от определяАи спе кт рофото ме т рически и методом вы
сокоэффективной жидко стной х роматагр афин (ВЭ)КХ) сид а т ную активнос т ь выявля,\.и
in vit ro
[2].
Антиок
потенциоме три ческим мето
дом с использованием в ка ч естве генератора реакционноспо с обных перо ксиА- радикалов 2,2-азоб и с (2-амидинонропан) дигидрохлори да
[9).
ц ентах
[7).
Эффект связывания св ободных р адикалов выражали в про по
сравнению с
контролем,
не
содержащим антиоксиданты
Кроме того, для сравнительной оценки ан тио ксидант н ой акт ив
ност и расс читыв али т ак и е пока зател и, как ко нце нтрация экстракта,
пр и к отор ой наблюдаетс я уАавливание
(IC50)
и эквивалент гаАло вой ки слоты
144
50'% св ободных (GAE) [5).
радикалов
Раздел
1.
11. ФИТОХИМИЯ ЭХИНАЦЕИ .. .
Схема получения экстрактов из соцветий эхинацеи пурпурной Используемые растворители (их температура, " С
Э тап
I
II
III 1
)
при получении экстрактов
Экст ра кт
Экстракт
Экстракт
Экстракт
1
2
3
4
Экстракт
5
7 0 /о-Й эти -
Вода ди с тил-
70 /о -Й этила-
Вод а дис-
70/о-й этила-
ло вый с п ирт
лир аванная
вый спирт
тиАлирован-
вый с пирт
(ШС)
(60 ° С)
(60"С)
ная (бО С С)
(60°С)
35/о-Й эт и-
35/о-Й этила-
70/о-Й ЭТИАО-
Вода дис-
70/о -й этила-
;1ОВЫЙ спирт
вый спирт
вый спирт
тиллиров а н-
(2ОЧ
(ШС)
(20 ° С)
ная (60-С)
Вода дис-
70~/о-Й ЭТИ;10-
70 /о -Й этило-
Во да дис-
70/о -Й ~тило-
тилли ров а н-
вый спи рт
вый спирт
тиллиро ван -
вый спирт
ная (20 " С)
(ШС)
(20 " С)
ная (60 ° С)
(ШС)
вый с пирт
'
(ШС)
Результаты. По;чч е нные экстракты содержали от
трактивных веществ в одном литре, из которых от
10 до 15 г экс 7,05 до 20,15/о были
веще с тва лолифенольной природы. Наибольшее количество полифено
лов обнаружено в экстракте 1 (2,62± 0,06 г/ л), в 1,3-1,4 раза меньше- в экстрактах Таблица
3и 5и
2.
в 2,1- 2,9 раз меньше- в экстракта х 2 и
4 (табл. 2).
Содержание полифенолов и антиоксидантная активность экстрактов из соцветий эхинацеИ пурпурн ой Общее Сух ой
Экстракт
количество
остаток, г/л
ПО АИфеНОАОВ,
1 2 3 4 5
13,00±0,61 12,91±0,27 9,96±0, 27 14,83±0,24 10,65±0,64
2,62±0,06 0,91±0,04 1,85±0,09 1,25±0,03 2,01±0,07
г/А
Антиокси дантнаяа ктив нос ть в различных п оказа ти\.ЯХ
IC50, мг/л 148,88±6,66 801,28±69,15 186,05±1,62 1018,93±65,21 205,34±6,98
JlMoл GAE/ r
237,59±10,62 44,14±3,81 190,11±1,65 34,71±2,22 172,25±5,86
Известно, что а нти окси дантную активность растительных экстра к
тов в основном предопределяют соединения полифено льной природы. В
наших исследованиях было выявлено, что антиоксидантная активность экстра кт ов из соц вети й эхинацеи пурпурной находится в прямой п ро
порциональной зависимости от содержания в них птш фено;1 ОВ (коэ ф-
145
И НН ОВАЦИОННЫЕ П ОДХО ДЫ К ИЗУЧЕ Н ИЮ ЭХИНАЦЕИ
фици енты апп р оксимации были р ав ными
0,9 137-0,99 13).
С У'Iетом раз
личны х по казателей на илучшей антиоксидантной активност ыо обл а дал
экстракт том
1, а наихудшей- экстракт 4 (табл. 2). По сравн ени ю с экст рак 1 экстракты 4 и 2 обладаАи в 5-7 раз меньшей способностью ула вли
вать свободные радикалы. Пр ичиной является с п особ получени я экс тр ак тов, а и м енн о и с поль зо вание на п ервом эта п е э кстрагир ования в ка
че стве р аств оритслн воды . Известн о , что вода способствует х орошему экстр аг и ро в а нию ги дроксикоричны х кис лот из сырья эхинацеи пу р пу р
но й , значитеА ь но лучшему , чем водно-спиртовые растворы
[3].
Но при
этом в водных экстрактах при повышенных темпе рату р ах (око ло 6 0 ° С) сохраняе тся активность о кислительных ферм е нто в , что и приводит к
снижению общего количества полифенолов и отде,\ьных фено льных компонентов, а та кже антио ксид антной спосо бности этих экстрактов . Прям ое с пе ктра фотометриче ско е опреде ление суммы г идро к си коричны х кислот в пересчете на
цикориев ую
что на сnектрах погАощения экстрактов
ный пи к в области
323-330
5 и 3.
ха р акте р
нм. Наи б оАьшее количест во гидроксико
ричных кисАо тб ыл о обна ружено в экс тра кте экстракты
пр одем о н с три р овало ,
2 и 4 отсутст вов а л 1,
за которым следуют
Аналогичная по сл едователь ность снижения соде р
жани я гидрок с и к о ричных кислот (в пересче те на хло р агенов у ю кис л оту) была п о дтв е рждена ВЭЖХ - исследованиями"', Опред елено , что
в экстр акте 1 содержалось 1.5 6±0,16 г/ л гидроксико р ичных к и слот , а в 5 и 3 соответственно 1,27±0, 13 и 1,22±0,12 г/ л. Как и при спект ра фотомет рич ески х , таки при ВЭ)КХ исслед о ва ни ях не б ы ло о б на ру жено наличия ги др ок сикоричн ых к ислот в э к ст р актах
2
и
4.
Вы воды . И з п я ти иссл.едуемых по сл е довател ь н остей экстр агиров ания
биоАогически активных веществ, н аиАучшей быАа при поАучении экс тра кта
1,
а именно экстра г ирование на перв ых двух э тапах водно-спир
товыми растворами кон центрацией
70 и 35 % соотв етстве н н о на 1-ом
и 2-ом. эта п е , и на заве ршающем. этап е - водой. Антиоксидантн ая ilкти в но сть эк ст р актов из соцветий эхи н ацеи нурп урной находится в п р ямо й пропорци ональной з ависимости от содержания в них полиф е н о лов. ''Выражаем благодарность ведущему научному сотруднику канд. фарм . наук И . Г. Касьяну из Научного центра лекарственных
сред с тв, Государственного университета медицины и фарма ции им .
Н.
Тес темицену за п омощь при определении содержания
гидроксикоричных кислот методом ВЭЖХ
146
Раздел 11. ФИТОХИМИЯ ЭХИНАЦЕИ ...
Библиография
l. Авдеева Е.В. Лекарственные растения,
содержащие фенилпропано
иды, как источник получения гепатопротекторных и иммуномодулирую
щих препар атон : автореф. дисс. до кт. фарм . наук.- Пятигорск,
2.
2007, 50 с.
Иванова Р . А . , Касьян И.Г . Содержание оксикоричны х и окси
бензойных кисАот в спирто вых экстракта х п .,одов и я г од и их анти
радикальная активность/ /Из вестия АНМшlдовы . Нау ки о жизн и . К ишинев.-
2006, 2 (299).-
3. Иг натьева
С.
42-46 .
К.А. , Савенко Е.А., Тарасо в В.Е . и др. Ис с ле дование
качественного и количественного состава шрот ов п о сл е экстракции
растите ;iьного сырья эхинацеи пурпурной с использованием раство
рит елей разной полярности // Фи з ика-химическ ий ана;iИЗ свойств мн ого к омпонентных систем: ht tp:/ /www.kubstu.ru/ fl1/faшs/.
4.
Косман В.М. , Пожарицкая О .Н . , lllиков А.Н. и др. И зуч ение
состава биологически активных веществ сухих экстрактов эхинацеи
узко;1 истной и шалфея лекарственного // Хи мия растит. сырья. -
2012. -- l .5.
с.
15 3-160.
Прида А.И., Иванов а Р.А. Природны е антиоксиданты полифе
нольн о й природы. Антирадикальные свойства и перспектины ис
п ользов ания // Пищ е вые ингредиенты: сырье и добавки. - М . : Пи щепром,
2004.- 2.- С. 76-79. 6. Barnes J ., Anderson L.A., Gibbons S., PhiJlipson J.D. Echinacea species (Echinacea angustifolia (DC.) Hell., Echinacea pallida (Nutt.) Nutt., Echinacea purpurea (L.) Moench): а review of their chemistry, pharmacology and clinical properties. //J Pharm Pharmacol. - 2005/- 57(8).- Р. 929- 954. 7. lvanova R. The potentiometric assay for measurement of peroxyl raclical scavenging capacity of plant extracts // Herba polonica- 2007, 53 (2). - Р. 136-137. 8. Masteikova R., Muselik J., Bernatoniene J. et al Anti oxidative activity of Ginkgo, Echinacea, and Ginseng tinctures / /Medicina (Kaunas) -
2007, 43 (4).-
Р.
306--309.
9. Sano М ., Yoshida R., Degawa М. et al. Determination of peroxyl radical scavenging activity of flavonoids and plant extracts using an automatic potentiometric titrator //J. Agric. Food Chem.- 2003,51 (10) /- Р. 2912-2916. 10. Singleton, V.I~. , Orthofer, R., Lamuela-Raventos, R.M. Analysis of total phenolics and o ther oxidation substrates and antioxidan ts Ьу means of Folin-Ciocalteu reagent // In book: Methods in Enzymology, Part А.
- 1999. -
Р.
152-178. 147
633.88+615.32 :58 42.14+53.52 и 66
УДК
БЕК
Инновационные подходы к изучению зхипацеи: Материал ы Между
И66
народной научной конференции. Полтава: Дивосвiт ,
2013. - 228
-
П олтава,
25-27
июня
2013
г.
-
с.
ISBN 978-617-633-073-8. О с вещены результаты интродукции ра:шичных видов рода Эхинацся (Ec hiпa
cea Moenclt),
особенности их биологии, культивиров ания , фитохимни и фRр:\с\ако
логи и, использования в гуманитарной медицине, зоотехнии. Изл ожены резу.~ь таты ра з работки технологий изготовления препаратов и функци о нальных про дуктов с эхинацеей.
Представленi результати iнтроду"цii рi з них видiв род у Ехiнаuея (l<; c l1 iпacea
Moench) , особливостi
iхньоi бiологil, "ультивування , фiтoxiмii
i
фар :\с\акологii , ви
користання в гуманiтарнiй медипинi, зоотехнi1. Ви"л аденнi результати роз р обки
технологiй виготовлення препаратiв та функцiональних продуктiв з ехiнапеею .
The results of different species of Echinacea genus introduction (Echinacea Moench), peculiarities of th.eir Ьiology, cultivation, photochemistry апd phaпnacology, usag·e in humaпitariaп and veterinary medicine, zootechnics are given. The results of working out the technology of preparations апd functional products with Echinacea are stated. Ergebnisse der Introduktion von verschiedenen Arten der Echinacea Gattung (Echinacea МоеnсЬ), Besordenheiten ihrer Biologie, Kul tivieren , Phitochemien und Pharmakologie, Beпнtztшg in Ншnав - 1.111d \' eteriп armediziп , ZootecJшie (Tierzucl1tlehre) sind erlaнtert. Da bei sind die Erg ebnisse der A usarbeitung der Heгste llнng stechnologoe der funktionellen Produkte aus Echiпacea dargestellt. Ре дакционная коллегия: С.В. По спелов ( ответственный редактор), В .Н . Самородов (научный редактор),
Л.А . Г.:~ущенко, И.В. Корнев, Н . Н . Опара, П . В. Пи саренко, В.Ф. Почерняева .
На первой странице обложки- новый сорт эхинацеи nурпурной
Moencl1)
(Echinacea purpшea (1.)
"Герхард Мадаус" . (Авторы В.Н. СаtVюрод ов, С. В. Поспе.Jiов). Фото С. В. Поспелова.
М а териалы поготовлены к печати Полтавским отделениеNI Укра инекого ботаничеr: кого общества, напечатаны на языке оригинала.
УДК ББК
633.88+ 615.32:58 42.14+53.52
© Полтавская государственная аграрная академия,
ISBN 978-617-633-073-8.
© Дивосвiт, 2013 .
2013.